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JPH10503285A - Quality control method for hematological instruments - Google Patents

Quality control method for hematological instruments

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JPH10503285A
JPH10503285A JP8532782A JP53278296A JPH10503285A JP H10503285 A JPH10503285 A JP H10503285A JP 8532782 A JP8532782 A JP 8532782A JP 53278296 A JP53278296 A JP 53278296A JP H10503285 A JPH10503285 A JP H10503285A
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Japan
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instrument
blood cells
cholesterol
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Withdrawn
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JP8532782A
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Japanese (ja)
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ヤング，キャロル
Original Assignee
コールター インターナショナル コーポレイション
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】 器具の機能障害の原因を診断する品質コントロール法。この方法は、器具の機能障害の原因を診断するために、試料の物理的性質の測定を使用する。コントロール製品の試料の空間的位置を分析する。また、患者の血液試料の統計学的に有意な数の空間的位置を使用することができる。この方法により、赤血球の溶解の不十分により引き起こされるデブリ；器具の試薬のポンプ体積の設定；器具のレーザーアラインメント；器具のゲインの設定；および部分的栓、残留栓または他の流れの問題により引き起こされる流れの雑音に関連する問題について器具を監視することができる。この方法は、先行技術の方法により提供される非特異的フラッギングよりいっそう特異的に、器具の機能障害の型および原因を指示する。   (57) [Summary] A quality control method for diagnosing the cause of equipment malfunction. This method uses the measurement of the physical properties of the sample to diagnose the cause of instrument malfunction. Analyze the spatial location of the control product sample. Also, a statistically significant number of spatial locations of a patient's blood sample can be used. By this method, debris caused by insufficient lysis of red blood cells; setting the pump volume of the instrument reagent; laser alignment of the instrument; setting the instrument gain; and caused by partial plugs, residual plugs or other flow problems. The instrument can be monitored for problems related to the flow noise generated. This method is more specific than the non-specific flagging provided by prior art methods, and indicates the type and cause of instrument malfunction.

Description

【発明の詳細な説明】 血液学的器具の品質コントロール法 関係する出願に対する相互参照 本発明は１９９５年２月８日提出の米国特許出願第０８／３８６，７１１号の 一部継続出願であり、後者は現在放棄した１９９３年６月２３日提出の米国特許 出願第０８／０８１，５２９号の一部継続出願であり、後者は１９９３年６月２ ３日提出の米国特許出願第０８／０８１，５２９号の一部継続出願であり、後者 は現在放棄した１９９２年２月２４日提出の米国特許出願第０７／８４０，４３ ８号の一部継続出願であった。 発明の分野 本発明は、血液学的器具の系の品質コントロール能力を増加する新規な方法に 関する。この方法は、血液の細胞集団を区別するために（１）Ｄ．Ｃ．電流によ り測定される体積、（２）高い周波数（ＲＦ）の大きさ、（３）不透明度、およ び（４）光散乱を測定する器具についての特定の実用性を有する。この方法は、 （１）Ｄ．Ｃ．電流により測定される体積および（２）高い周波数（ＲＦ）の大 きさを測定する器具についての追加の実用性を見出した。この方法は、また、Ｄ ．Ｃ．電流のみにより細胞体積を測定する器具についての実用性を見出した。 発明の背景 品質コントロールは長い間臨床的血液学における必要かつ日常的手法であった 。白血球の下位集団を区別することを包含する、赤血 球および白血球の計数における正確度は、一部分、適切なコントロール製品およ びコントロール製品を使用する方法に依存する。現在入手可能な粒子計数のため の多数の型の装置では、器具の機能障害の可能性が常に存在するので、コントロ ール製品を使用する品質コントロールが必要である。自動的粒子計数装置につい て品質コントロールプログラムを維持する伝統的方法は、全血標準として新鮮な ヒト血液を準備することから成っていた。しかしながら、この新鮮な血液は１日 間だけ使用可能であり、したがって、耐久性ある血液製品が開発された。 対照血球類似体を含有し、血球計数装置の正確度および精度を監視する血液学 コントロール製品は重要である。このような血球計数装置を使用するとき、白血 球の区別および他のパラメーターの正確度を維持するために血球類似体を使用す る新規な方法が要求されていることが認識される。 コントロール製品は、新鮮な全血のそれにできるだけ密接に近似すべきである 。ブタクサの花粉、ポリスチレン、ラテックス、種々の有機物質および固定され たヒト赤血球を使用して、適当な大きさの粒子の安定な懸濁液を調製することが 試みられてきた。これらの懸濁液のいずれも、白血球の少なくとも４つの下位集 団の白血球の分化についてのコントロール製品として使用するために適当である ことが証明されなかった。 品質コントロールを維持するために使用される物質（以後、血液学的コントロ ール製品またはコントロール製品と呼ぶ）は、また、特定の条件下に、血液学的 器具を較正するために使用できる。本発明の目的に対して、器具が適切に機能し ているかどうかを決定するために使用されるコントロール製品は、液状媒質の中 に懸濁した１種または２種以上の類似体を含有し、前記類似体は、分析するとき 、器具が分析できる血液の少なくとも１つの物理的性質または生物学的性質をシ ミュレートする。本明細書において使用するとき、類似体は標的集団の少なくと も１つの物理的性質または生物学的性質をシミュレートする粒子として定義され る。それ自体として、ある自動的機械は、コントロール製品が他の機械による分 析に対して感受性の追加のパラメーター成分を有するにかかわらず、コントロー ル製品のある成分のみを分析することができる。従来、器具の動作の品質コント ロールを提供するためにコントロール製品を使用する方法は、まだ開発されてき ていない。コントロール製品は、典型的には、白血球の少なくとも４つのサブグ ループ、すなわち、リンパ球、単球、好中球および好酸球、についての検査を提 供する。コントロール製品の先行技術の使用は、器具が類似体の適切な計数およ び百分率を提供するかどうかを検査することに集中されてきている。しかしなが ら、本発明の方法は器具の動作を評価および診断する追加の情報を提供する。 コントロール製品は、比較基準に基づいて、問題の決定に関して新鮮な血液の 被検試料がなにを構成したかを正確にを示さなくてはならないことが明らかであ る。さらに、赤血球のような血液成分は、血液ドナーから取り出した後、ゆっく り溶血しかつ数時間以内に大きさおよび形状を変化することがあるので、コント ロール製品は新鮮な血液をシミュレートすることが、いかに重要であるかが明ら かである。同様に、安定化されていない白血球は変質的変化に悩まされる。 一般に、類似体を製造する先行技術の方法は、固定前にもとの体積を維持する か、または減少した赤血球を使用することに集中された。固定前に浸透圧的環境 を操作することによって、細胞を収縮または膨張させることは制限を有した。従 来、約３０％〜５０％より 大きく非ヒト赤血球を収縮または膨潤することは、過度の細胞の会合または溶解 を引き起こした。 米国特許第３，８７３，４６７号（Ｈｕｎｔ）は、ヒト血液中の血漿と置換す る非タンパク質の水性懸濁液中の、洗浄し、安定化されたヒト赤血球の懸濁液を 含んでなる血液学的対照コントロールを教示している。対照コントロールにおけ る安定性は、細胞の平均細胞体積を実質的に変化させないで、細胞に球形を取ら せる水性懸濁流体または物質の中に細胞を含め、ならびに経時的分解の通常の傾 向に対する耐性を細胞付与することによって、細胞をコンディショニングするこ とによって達成される。さらに、水性懸濁流体は生物学的活性を阻害する環境を 細胞のための生成する。好ましい態様において、実質的に増加した平均細胞体積 を有するように処理され、固定されたヒト赤血球の少量を対照コントロールの中 に含める。固定された細胞は細胞体積の変化に対して耐性であり、かつ安定化さ れた細胞を溶解する溶解試薬の作用下の溶解に対して耐性である。対照コントロ ール中の固定された赤血球は、ヒト血液中の白血球集団を代用する。 米国特許第４，７０４，３６４号（Ｃａｒｖｅｒ、ｅｔ ａｌ．）において、 コールター・カウンター（ＣＯＵＬＴＥＲ ＣＯＵＮＴＥＲTM）Ｓ−プラス（Ｐ ｌｕｓ）型分析器により代表される電子粒子カウンターについての限界および追 加の操作的性能についてのコントロールが開示されている。しかしながら、コー ルター（ＣＯＵＬＴＥＲTM）ＶＣＳアナライザー電子光学的粒子のカウンターの ための全血球のコントロール製品を使用する新規な方法が要求されている。ＶＣ Ｓ分析器は白血球の少なくとも４つの集団の区別を可能とする。 大きさの範囲、体積の分布、光散乱の範囲、電気的不透明度およ び導電性の感度に基づく血液中の白血球の少なくとも４つの集団を他の細胞から 区別する、ヒト白血球の自動化弁別的計数のシステムは、コントロール製品が正 常のヒト血液中のそれぞれの細胞の前記範囲、分布および感度を正確にシミュレ ートすること必要とする。 ヒトのリンパ球、単球、好中球、好塩基球および好酸球は、特定の大きさの分 布範囲および光学的特性を有する。白血球の各下位集団についての大きさの上限 および下限の双方は、対照コントロール製品において表されるべきである。さら に、コントロール製品における各白血球下位集団の平均細胞体積は、ヒト血液の それに近似すべきである。そのうえ、コントロール製品において使用される液状 懸濁媒質は細胞の有意な収縮または膨潤を引き起こさないことが必要である。な おさらに、コントロール製品の老化は体積分布のヒストグラムの特性または他の パラメーターを劣化させてはならない。多パラメーターの器具のためのコントロ ール製品における白血球類似体についてそれ以上の要件は、計数しかつ区別する ために、全血コントロール製品における類似体細胞が溶解試薬により完全に溶解 してはならないことである。 種々の媒質が血球類似体と組み合わせて使用されてきている。米国特許第４， ２９９，７２６号において、多目的の希釈剤および媒質が開示されている。希釈 剤は赤血球をプレコンディショニングするために使用され、そしてラクトース、 アジ化ナトリウムおよび非イオン界面活性剤から本質的に成り、ｐＨが調節され そして浸透圧濃度が調節されている。媒質は全血コントロール製品の担体のため に使用され、そしてラクトース、殺真菌剤および抗生物質を含む。媒質は、また 、赤血球の膜を変更する追加の成分を含み、胆汁塩およびコール酸誘導体、抗ヒ スタミン性質を有するフェノチアジン化合物およびそれらの塩、および局所麻酔 性質を有する４−アミノ− 安息香酸エステル誘導体およびそれらの塩を包含する。 先行技術の媒質の１つの欠点は、赤血球および固定ヒト白血球または白血球類 似体と組み合わせて使用するとき、コントロール製品が白血球の少なくとも４つ の集団を区別する器具において白血球をシミュレートしないことである。測定し ようとする赤血球および白血球の特定のパラメーターは、白血球の対照コントロ ール製品に適当な媒質の必要な特性のいくつかを指令する。赤血球の値を知るこ とが望ましい。いったんこの測定が確認されかつ赤血球が計数されると、パッケ ージされた細胞体積またはヘマトクリットを計算することができる。したがって 、コントロール製品の懸濁媒質は、平均細胞体積（ＭＣＶ）を測定することがで きるように、試料中の赤血球の体積を平衡化しかつ安定化することができるべき である。 また、コントロール製品は、ヒト血小板の大きさおよび分布の大きさに対応す る大きさの下限における妨害を多分を示す粒状物質を含有しないようにすべきで ある。付随して、懸濁媒質は、コントロール製品のパッケージ後における微生物 の増殖を防止するために、静菌剤を必要に応じて含む。赤血球および白血球は通 常異なる大きさを有するが、それらの大きさはオーバーラップする傾向があるか 、または少なくともある健康状態においてオーバーラップすることがある。その うえ、これらの２つの型の血球の不透明度は、また、オーバーラップすることが ある。赤血球およびリンパ様白血球は、不都合なことには、細胞大きさがかなり オーバーラップし、そして大きさの区別単独により一方を他方の存在下に計数す ることは実際的ではない。伝統的実施において、強い溶解試薬が使用され、この ような溶解試薬は赤血球を間質溶解し、赤血球を非常に小さい粒子にするか、ま たは膜を可溶化して、赤血球が計数されないようにし、そして細胞質の、全部で ないにしても、大部分を白血球から除 去し、計数のためにそれらの溶解耐性核のみを残す。もとの白血球の細胞体積は 著しく影響を受け、最小に減少するので、この古い形の血球大きさ分析により、 単一のみの白血球集団が識別可能である。 米国特許第３，７４１，８７５号（Ａｎｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．）は、弁別的 白血球計数法を記載している。モノアルデヒド、例えば、ホルムアルデヒドであ る細胞学的固定剤を血液試料に添加する。固定ステップ後に溶血剤を添加して、 赤血球がヘモグロビン含量を溶液の中に放出するようにする。特定の細胞化学的 基質、発色性沈澱カップリング試薬、およびｐＨ緩衝剤の添加は、固定化酵素を 含有する特定の型の細胞において不溶性色素を沈澱させる。次いで、染色された 血球を含有する溶液を測光カウンターに通過させる。特定の種類の細胞の中に含 有される異なる酵素について異なる特定の基質を使用すると、異なる種類の細胞 の絶対的および相対的計数値が得られる。細胞学的固定溶液はモノアルデヒドの みを使用した。ジアルデヒドは架橋しそして細胞外沈澱を生成するので、不適当 であると述べられている。 米国特許第４，４８５，１７５号（Ｌｅｄｉｓ、ｅｔ ａｌ．）は、溶解剤と して第四アンモニウム塩を使用しかつコールター・カウンターＳ−プラス型自動 化血液カウンター（この器具は直流電界励起のみを使用する）を使用して、白血 球のリンパ球、単核、および顆粒球の集団の３体積弁別的決定の方法および試薬 系に関する。 米国特許第４，７５１，１７９号（Ｌｅｄｉｓ、ｅｔ ａｌ．）は、溶解試薬 および固定剤として急速活性架橋剤、例えば、グルタルアルデヒドの中にサポニ ンを含む試薬系を記載しており、前記系は再現的に全血影響を与えて赤血球を支 質溶解させかつ白血球を変性して、流れ分析器具による検出および分類のための ４つの明確な クラスターを明らかにするデータを発生する。クラスターは血液の中に見出され る４つの主要な白血球の型、すなわち、リンパ球、単球、好中球および好酸球を 表し、こうして白血球の弁別的分析法を提供する。Ｌｅｄｉｓ、ｅｔ ａｌ．に よれば、Ｄ．Ｃ．体積、または種々の角度における光散乱を使用する白血球の流 れ分析の従来の方法は、リンパ球、顆粒球および単球に対応する、白血球の２つ のみのクラスターを示した。白血球の分類のためにＬｅｄｉｓ、ｅｔ ａｌ．が 使用したパラメーターは、Ｄ．Ｃ．（コールター［Ｃｏｕｌｔｅｒ］）体積、高 い周波数（ＲＦ）の大きさ、コールター（Ｃｏｕｌｔｅｒ）不透明度（ＲＦ大き さ／ＤＣ体積）、種々の角度範囲における光散乱、および種々の照明波長におけ る蛍光の２またはそれ以上の組み合わせを包含する。 コールター原理を使用する電子カウンターは、最初に米国特許第２，６５６， ５０８号に記載され、粒子計数の真の反映を表す。コールター原理によれば、顕 微鏡的大きさの粒子が電解質の液体の中に懸濁され、粒子の寸法に近づく程度の 小さい寸法の電界に通過させるとき、電界の電気インピーダンスの瞬間的変化が 存在するであろう。電界が直流（ＤＣ）または低い周波数の電流により励起され る場合、電気的変化は粒子の値に密接に比例する。商業的装置において、変化は いくつかの適当な意味により検出され、そしてカウンターおよび分析器を操作す るために使用される。このような装置に関連する分析器は、粒子の体積に基づい て集団に粒子を分類しかつ選別する。 コールター原理の発明は米国特許第３，５０２，９７４号（Ｃｏｕｌｔｅｒ、 ｅｔ ａｌ．）において実質的に拡張され、ここにおいてＤＣ電界の励起に加え てラジオ周波数（ＲＦ）の電流を使用して、研究する粒子に関するＤＣ体積の情 報ばかりでなく、かつまた 粒子を構築する物質の組成および特質による情報を得ている。この特許は、同一 の大きさであるが、物質が異なる粒子を区別することができる装置を開示してい る。低い周波数または直流（ＤＣ）およびラジオ周波数（ＲＦ）の電流の励起の 双方により粒子感知電界を発生させることによって、電界を通過する単一の粒子 の通過から２またはそれ以上の出力信号を誘導することができる。これは下記の 事実のためである。すなわち、粒子、例えば、細胞は低い周波数または直流の電 界に関してほとんど常に絶縁されているが、粒子は取り囲む電解質と異なるよう にラジオ周波数の電流を運搬または妨害することができる。これは、均質な粒子 の場合の誘電率の差のためであるか、または極めて薄い膜の中に囲んで、電解質 と異なる導電性を有する内容物を有する血球の場合において、嚢様構造のためで ある。したがって、すべてのＤＣ電流は血球の回りに行くが、ＲＦ電流のあるも のはそれを通過する。ＲＦ電流が粒子を通過する容易さは、光の透過と同様に、 「電気的透明度」または単に「透明度」と呼ばれる測度であるが、これに対して ＲＦ電流を妨害する粒子の能力は「不透明度」と呼ばれる。後の刊行物において 、「不透明度」はＤＣインピーダンスで割ったＲＦインピーダンスとして定義さ れる。 粒子の相対的電気的不透明度は、粒子含量、それゆえ分類の目的のための粒子 の型、の識別の特徴となる。粒子の異なる型の各々が異なる不透明度を有する程 度に、粒子の間の差が検出可能である。しかしながら、有意に異なる粒子は実質 的に同一の透明度を有することができ、そしてこの方法において、このような粒 子は効果的に分類することができない。米国特許第３，８３６，８４９号（Ｃｏ ｕｌｔｅｒ、ｅｔ ａｌ．）において、検出可能な結果が得られるように、粒子 を処理することによって、粒子の型の透明度を選択的 に変化させることができることが教示されている。 コールター・カウンターＳ−プラス型自動化血球カウンターは、全血の試料を 等張希釈剤中で希釈し、溶解剤を添加し、その後短時間に計数を開始するように 設計される。したがって、希釈剤−溶解剤系は、溶解期間の間に赤血球の完全な 間質溶解を実施するために十分に急速な、赤血球溶解反応速度を提供しなくては ならない。さらに、白血球体積の変化はデータ収集ステップの間に最小でなくて はならず、そして理想的には数分間安定であるべきである。 コールターＶＣＳ型は半自動化分析器具であり、ＤＣ（コールター）体積、コ ールター透明度および種々の角度範囲における光散乱を使用することによって、 血液を分析する。コールターＶＣＳ型は、合計の白血球計数において５つの部分 の区別を得るために試薬系を使用し、リンパ球、単球、好中球、好酸球および好 塩基球の集団の定量的分析を提供する。試薬系はクエンチを含み、これは弱い「 酸性」の溶解後に添加され、それは白血球への溶解作用を大きく減少するために 操作される。クエンチの短時間後、器具は残留する白血球の体積、透明度および 光散乱の特性を測定し始める。ＶＣＳ型は、溶解期間の間に赤血球の完全な間質 溶解を行うために十分に急速な赤血球の溶解反応速度を提供するが、白血球の体 積、コールター透明度および光散乱の性質に影響を与えてはならない。本発明に おいて使用できるコールター・カウンター器具は、ＶＣＳ、ＳＴＫＳおよびＭＡ ＸＭである。しかしながら、Ｓ型およびＳ−プラス型は、全血コントロール製品 の中に存在する白血球の下位集団のすべてを区別することができないが、むしろ 白血球類似体の合計の計数を提供することができる。さらに、Ｓ−プラス型のあ るものは２つの白血球の集団を区別することができる。 新規な電気光学的粒子計数装置は、器具が製造業者の規格内で適 切に機能しかつ器具の機能障害の原因を診断しているかどうかを決定する新規な 方法の開発を必要とする。この規格はコールター型の粒子カウンターとともに有 用である血液学的コントロール製品を使用する方法に主として向けられるが、本 明細書に開示する懸濁媒質、類似体およびコントロール製品、および本明細書に 記載するそれらの使用法は、一般に、粒子カウンターとともに広い用途を見出す ことを理解すべきである。したがって、用語「電気光学的粒子カウンター」は、 コールター・カウンター器具に加えて、粒子の大きさ、質量、体積、透明度また は光散乱を示す信号に電子的に応答する電子識別回路（「限界」）により種々の 大きさの粒子を識別する任意の他の型の粒子カウンターを包含することを理解す べきである。コールターおよびコールター・カウンターは、コールター・コーポ レーション（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の登録商標である。 発明の要約 本発明は、血液学的コントロール製品を使用する方法に関連し、前記方法は、 器具の中に血液学的コントロール製品を入れることを含んでなり、前記コントロ ール製品は少なくとも１種の白血球類似体を含有し、前記白血球類似体は血液学 的試験手法において使用される溶解試薬による分解に対して耐性であるように処 理された血球から誘導されており、そして前記類似体は器具の動作において使用 される試薬に対して応答性に止まる。新規なコントロールパラメーターを使用し て、コントロール製品の空間的位置を分析し、前記分析はＤ．Ｃ．体積、ＲＦ大 きさ、不透明度、および光散乱からなる群の少なくとも１つのメンバーから選択 される。より好ましくは、少なくとも２つの異なる物理的性質を測定する。次い で、器具の機 能障害の原因を診断するために、このような測定の結果を報告する。 さらに、本発明は、器具が製造業者の分析規格内で機能しているかどうかをす るために、少なくとも１つの白血球類似体の集団を含有するコントロール製品を 使用する方法に関する。この方法は、器具の中に血液学的コントロール製品を入 れることを含んでなり、前記コントロール製品は少なくとも１種の白血球類似体 を含有し、前記白血球類似体は血液学的試験手法において使用される溶解試薬に よる分解に対して耐性であるように処理された血球から誘導されており、そして 類似体は器具の動作に対して応答性に止まる。コントロール製品はヒト白血球の 少なくとも１つの物理的性質をシミュレートし、前記性質はＤ．Ｃ．電流により 測定された体積、高い周波数（ＲＦ）の大きさ、不透明度、および光散乱からな る群から選択される。より好ましくは、コントロール製品はヒト白血球の少なく とも２つの物理的性質をシミュレートする。次いで、コントロール製品の物理的 性質から少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つの物理的性質を測定する。 器具の機能障害の原因を診断するために、このような測定の結果を報告する。 なおさらに、本発明は、ある量の患者の血液試料の中の白血球の下位集団の空 間的位置を分析して、測定したパラメーターの統計学的に有意な値を獲得し、前 記分析は、Ｄ．Ｃ．体積、ＲＦ大きさ、不透明度、および光散乱からなる群の少 なくとも１つのメンバーから選択され、そして器具の機能障害の原因を診断する ために器具における前記測定の結果を報告する、ことを含んでなる方法に関する 。 そのうえ、血液学的試料を血漿物質の水溶液を含んでなる細胞懸濁液と組み合 わせ、そして生ずる混合物を器具において分析して機 能障害の原因を診断することに関し、前記分析はＤ．Ｃ．体積、ＲＦ大きさ、透 明度、および光散乱からなる群の少なくとも１つ、より好ましくは少なくとも２ つのメンバーから選択される。 図面の簡単な説明 第１図は、試験すべきコア中の希釈血液試料の導電率と比較した白血球の計数 比の比較である。 第２図は、溶解試薬およびクエンチ試薬で希釈した後、分析する血液試料の浸 透圧濃度と比較した好中球のＤＣ平均の比較である。 発明の詳細な説明 本発明を理解しかつ説明する目的で、下記の用語を定義する。 ビーズ： ビーズはフローサイトメトリー分析のための安定かつ不活性の標準 として使用することができる粒子（通常、ポリスチレンのラテックスまたはある 形態から作られた）である。ビーズはＦＳＣ（フローサイトメトリーのデータの 貯蔵のための標準的フォーマット）設定を標準化するために、異なる狭い規定さ れた大きさで得ることができる。ビーズは、また、蛍光検出の設定を標準化する ために、種々の蛍光色素に接合させて得ることができる。 チャンネル： チャンネルは、フローサイトメーターが粒子が放射する信号の 強度を特性決定するとき使用する用語である。大部分のサイトメーターは光信号 を１０２４チャンネルについて２５６に分割する。高いチャンネル番号を有する 信号は、低いチャンネル番号より輝いている。しかしながら、１つのチャンネル 番号により定められる信号と他のチャンネル番号により定められる信号との間の 定量的関係は、所定のプロトコールの増幅器および光検出器の電圧特性に依存す るであろう。 同軸流れ： より幅広い流れ内の液体の狭いコアの流れ。この型の流れはフロ ーサイトメトリーにおいて重要である。なぜなら、それは比較的広いノズルを通 して流れる粒子を空間的に緊密に拘束し、粒子が順次に光ビームを通過するとき 、正確かつ安定な照明を可能とするからである。 補償： 補償は、異なる蛍光色素の蛍光スペクトルの間のオーバーラップにつ いて補正するフローサイトメーターの能力である。補償なしでは、所定の蛍光色 素からの蛍光は、異なる蛍光色素の検出するために割り当てる光検出器上に、あ る程度記録することがある。 コールター体積： 粒子が狭いノズルを通して流れるとき、粒子が電解質を置 換するとき起こる電気抵抗の増加は、粒子のコールター体積である。電気抵抗の この増加は粒子の体積に粗く関係づけられるだけである。 コア： コアはシース流れの中央の中に注入され、層流の流体力学的考察によ りそこに維持される流内流である。コアはフローサイトメーターにおいて分析す べき試料処置を含有する。 漏話： 漏話は「誤った」光検出器からの信号であり、これは１つの蛍光色素 が放射した蛍光が異なる蛍光色素からの蛍光に対して通常特異的である光検出器 上のフィルターを通して得られる、波長の多少の光を含有するために生ずる。「 補償」を参照のこと。 ＣＶ： 変動係数は、１連の値の標準偏差をそれらの値の平均で割った値とし て定義される。それはヒストグラムのピークを記載するためにフローサイトメト リーにおいて使用される。あるプロトコールにおいて、それは集団内の粒子の特 性における変動を評価するために使用することができる。ＤＮＡ分析（ここです べての正常粒子は同一の特性を有すると仮定される）において、それはフローサ イトメトリーのアラインメント（およびオペレーターの技量）を評価するために しばしば使用することができる。 固定： 細胞のタンパク質を変性する方法。フローサイトメトリーにおける定 着は、危険な生物学的物質不活性化しかつ、また、フローサイトメーターへの即 時のアクセスが存在しない染色された細胞を保存するために使用される。パラホ ルムアルデヒドは細胞の前方および側面の散乱特性を保存する（しかし、自己蛍 光を多少の増加させる）ので、フローサイトメトリーにおいて選択される固定剤 である。 フローセル： フローセルは、シース流の中央に試料流を送出すフローサイト メーターにおける装置である。あるサイトメトリーの立体配置において、流れが フローセルを去った後、照明を「空気中で」で行う。 蛍光色素： 蛍光色素は光を吸収し、次いで異なる色の光（常により長い波長 の）を放射する色素である。 前方の散乱： 前方散乱は、光が粒子を通過して光ビームのもとの方向から発 散するように曲がった、照明光ビームからの光である。照明光ビームから小さい 角度に曲がった光の強度は、粒子の屈折率ならびに断面積に関係づけられる。前 方散乱の信号は細胞体積と相関しない。 ゲイン： ゲインは増幅器への電子コントロールであり、所定の信号を光電子 増倍管が受け取ったとき生ずる電流密度を決定する。光電子増倍管の増幅器のゲ インの変動は、出力信号がフローサイトメトリーのデータに変換されるとき、そ れらの信号の出現を変化させることがある。 ゲート： 引き続いて分析されるフローサイトメトリーのデータについてなさ れる制限である。ライブゲートは記憶のためにコンピ ューターが受け取るデータを制限する。分析ゲートは特定の分析手法からのある 種の記憶されたデータを単に排除する。ゲートは、混合集団の分析をその混合集 団内のある種の細胞に制限するために使用される。 粒状性： 粒状性は、フローサイトメーターにおいて照明光ビームから直角に 偏向された光を記載するするために、側面の散乱と同義に使用される用語である 。この光の強度は、不正確な方法において、光ビームを通して流れる粒子の内部 または表面の不規則性に関係づけられる。 光散乱： メジアン角光散乱（ＭＡＬＳ）は、１０°〜７０°の間の角度にお いて得られた光散乱の情報として定義される。低い角光散乱（ＬＡＬＳ）は、０ °を排除する、光ビーム軸に関して１０°以下の角度において得られた光散乱の 情報である。高い角光散乱（ＨＡＬＳ）は、レーザー軸に対して９０°に中心を なす光散乱の情報である。 線形増幅器： 線形増幅器は、光電子増倍管からの信号を増加して測定可能と する１つの手段である。線形増幅器は、増幅器からの出力電流が光検出器から誘 導される入力電流に正比例するような方法において、信号を増加する。 対数増幅器： 対数増幅器は、光電子増倍管からの信号を変更して測定可能と する１つの手段である。対数増幅器は、増幅器からの出力電流が光検出器から誘 導される入力電流の対数に比例するような方法において信号を変更する。 光検出器： 光検出器は、光を感知し、その光からのエネルギーを電気信号に 変換する装置である。検出器の作動範囲内で、電気信号は光の強度に比例する。 光電子増倍管および光ダイオードは光検出器の２つの型である。 光ダイオード： 比較的強い光信号を検出するために使用される光検出器の１ つの型。それはその陽極（出力）端における電流を増加するために印加された高 い電圧をもたない。 光電子増倍管： 光電子増倍管は、比較的弱い信号を検出するために使用され る光検出器の１つの型である。その出力電流は印加された高い電圧により増加さ れる。 回転光散乱： 回転光散乱（ＲＬＳ）は、ＭＡＬＳ／ＤＣパルスピークの情報 の比から誘導されたデータの変換である。ＲＬＳの機能は細胞の大きさ成分を除 去し、細胞の内部構造にいっそう関係する測定値を生ずる作用を有する。 シース： フローサイトメーターのフローセルからまたはその内部の同軸流れ の間に、中央の試料コアがそのの中に含有される流体である。 側面の散乱： 側面の散乱は、照明光ビーム中で粒子から跳ね返り、側面に偏 向する照明光ビームと同一の色の光である。「側面」は、通常、光ビームの線に 対して直角（直交する向き）のレンズにより定められる。また、それは直角の光 または９０°のＬＳと互換的に呼ばれる。側面に散乱したこの強度は、一般的方 法において、粒子の表面または内部の粗さまたは不規則性に関係づけられる。 空間的位置： 空間的位置は、分析のドメインにおける分析された集団の位置 である。ＶＣＳ器具の例において、分析のドメインはＤ．Ｃ．電流、高い周波数 （ＲＦ）の大きさおよび光散乱により測定された体積である。他の例は、分析さ れた集団がＤ．Ｃ．電流により測定された体積のみによる場合であり、空間的位 置はＤ．Ｃ．ドメイン内の分析された集団の平均位置であろう。 限界： 限界は、ある強度より低い信号を無視するようにＡＤＣを作ることが できる電子装置である。前方散乱の限界は、非常に小 さい粒子、デブリおよび電子的または光学的雑音を獲得から排除するためにフロ ーサイトメトリーにおいて最も普通に使用される。 ＶＣＳ技術： ＤＣ（コールター）体積、コールター容量またはＲＦ大きさ、 および種々の角度範囲における光散乱を使用することによって血液を分析する器 具。 波長： 波長は、エネルギー含量およびまた（我々の眼が感受性である光を使 用して）その色に正確に関係づけられる光の特性である。短い波長の光は、より 長い波長の光より多いエネルギーを有する。 現在の多白血球集団の分析は、品質コントロールとして使用するための特定の 大きさおよび体積の増分および特定の光散乱特性の類似体を必要とする。本発明 の方法において、電気光学的粒子のカウンターの限界の設定を検査するために、 リンパ球、単球、好中球、および好酸球である主要な白血球成分の少なくとも１ 種の類似体を調製することが必要である。好ましくは、本発明の方法のために、 少なくとも好中球類似体を調製することが必要である。より好ましくは、好中球 およびリンパ球の類似体を調製することが必要である。これより以前において、 体積の増加は光散乱の増加に関係づけられ、光散乱の増加はヒト白血球以外の白 血球類似体の少なくとも４つの異なる集団を作ることを妨害した。類似体および 類似体の分析に使用する器具はいっそう複雑となり、類似体の懸濁媒質はそれら の複雑さを補足しなくてはならない。さらに詳しくは、懸濁媒質はこれらの類似 体および器具と適合性であり、かつ類似体の物理的および生理学的性質を補足し なくてはならない。 懸濁媒質は主として血液から調製された白血球類似体とともに使用される。白 血球類似体を調製する１つの方法は、多数の型の血液計数器具のための複数の限 界の設定と合致するように、異なる源か らの処理された血球を提供する。血球の選択において、主要な制限はもとの細胞 の平均細胞体積である。なぜなら、それは所望の類似体の平均細胞体積に関係す るからである。本発明の範囲を限定しないで、特定の動物からの血球を特に述べ ることができ、ここで他の動物からの赤血球および白血球を本発明の方法におい て使用できることを理解すべきである。 本発明の方法において有用な白血球類似体の１つの調製方法は、赤血球を低浸 透圧溶液と混合して細胞の体積を拡張し、細胞のヘモグロビン含量を変化させて ヒト白血球の光散乱および透明度をシミュレートし、そして、前記白血球を固定 して、血液学的試験手法において使用される溶解試薬による分解に対して耐性で ありかつ固定された白血球がヒト白血球の性質に類似する、Ｄ．Ｃ．電流ように 測定された体積、高い周波数（ＲＦ）の大きさ、透明度および光散乱から成る群 より選択される少なくとも２つの性質を有するようにすることを含んでなる。好 酸球の血球類似体を製造する方法は類似するが、ヘモグロビン含量の変化は血球 からそれを漏出させるよりむしろ細胞中でそれを変性することによって達成され る。追加の態様は、ヒト白血球の体積および光散乱特性を有する類似体を生ずる 。 この方法は、また、もとの体積よりも５０％より大きく赤血球を膨潤させるこ とができ、これは所望の類似体の調製のための動物細胞の選択において、いっそ う広い寛容度を提供する。好ましい方法において、赤血球はもとの体積の７５％ より大きく膨潤される。 本発明の方法とともに使用するために適当な類似体を調製する目的で、家禽の 赤血球、例えば、シチメンチョウ、ニワトリ、アヒル、および好ましくはガンの 赤血球はアルデヒドで安定化して、より小さい白血球類似体を生成できることが 発見された。また、「魚類 」、器具の動作サメ族および爬虫類、好ましくはアリゲーターを包含する他の非 ヒト脊椎動物は、適切に処理したとき、より大きい大きさのヒトの単球、好中球 および好酸球に類似する類似体を生ずる、所望の大きさの範囲の赤血球を有する ことが発見された。これらの赤血球は、一般に、きわめてすぐれた懸濁能力およ び高度に再現性ある体積分布の特性を示す。しかしながら、考慮、例えば、合理 的費用における入手可能性を考慮しなくてはならない。 そのうえ、全血対照製品において白血球のパラメーターを決定するとき、赤血 球が血液学的試験手法において使用される溶解試薬による分解に対して耐性であ るように、赤血球を固定する。 鳥類、アリゲーターおよびテンジクザメの細胞は核化されるが、赤血球の調節 された溶血を可能とする本明細書に記載する方法が与えられると、ヒト白血球の 代替物として前記細胞の使用に対して、核の存在は必須ではなく、また決定的で はない。好ましくは、細胞中のヘモグロビンの２０〜８０重量％、より好ましく は３０〜７０重量％が解放される。細胞膜の崩壊およびヘモグロビンのそれ以上 の損失を防止する固定剤、例えば、有機アルデヒドで細胞を安定化する。 本発明の方法において有用な白血球類似体を調製する他の方法は、白血球の５ つの下位集団の少なくとも１つをシミュレートするようにヒト白血球を安定化す ることを包含する。 さらに、この分野において知られている他の白血球類似体を使用するとき、本 発明の方法は有用である。これらの安定化された白血球類似体細胞はコントロー ル製品においてヒト白血球のための満足すべき代替物を提供する。 本発明の方法において使用するために適当なコントロール製品を製造する好ま しい方法は、ヒトリンパ球をシミュレートするために 固定したガン赤血球、ヒト単球、好中球、および好酸球をシミュレートするため に固定したアリゲーター赤血球の懸濁液を混合し、すべてを懸濁媒質中でかつヒ ト白血球をシミュレートするように単一の組成物を形成するような比率で集合さ せることによって調製された組成物を具体化する。次いで、コントロール製品を 溶解可能なヒト赤血球、および安定化された血小板または血小板類似体と混合し て、単一の多分析コントロール製品を形成する。 下記の記載は、本発明の方法において使用するために赤血球を使用してコント ロール製品を調製する好ましい方法を説明する。 収集ステップにおいて、赤血球を抗凝固剤、例えば、生理的塩類溶液（塩化ナ トリウム）の中に溶解したエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のアルカリ金属 塩の中に懸濁させる。他の抗凝固剤および塩は、それらが不都合な溶血または細 胞会合を引き起こさないかぎり、有効であると考えられる。 新鮮な赤血球を洗浄してドナー特異的血漿通過を除去しなくてはならない。こ れにより、多数の血球ドナーからの赤血球を混合するとき、赤血球の凝集の可能 性が減少する。赤血球を一緒にプールして均質な複合体を得る。 赤血球のプールをプロセシング助剤として血清物質で前処理することができる 。血清物質を使用する前処理は、赤血球を破裂させないで赤血球の膨潤を可能と する。低浸透圧の環境への赤血球の暴露は、平均血球体積を増加し、かつ光散乱 ヒストグラムの幅を減少するという主要な効果を有する。赤血球の溶質濃度から 減少した溶質濃度を有する低浸透圧の環境の結果として、赤血球の大きさは増加 する。赤血球の内側の溶質濃度が赤血球の外側の濃度より大きいとき、水が赤血 球の中に動いて濃度を平衡化する傾向が存在する。それ自体、赤血球の内側の水 の動きは膨潤を引き起こす。低浸透圧の 環境は、ナトリウム化合物、カリウム化合物またはそれらの双方、または所望の 溶質濃度を与えることが当業者に知られている他の組成物の溶液を含むことがで きる。 本明細書において定義するとき、血清はコレステロール、コレステロールエス テル、および血清血漿の中に見出される１種または２種以上の他の化合物と結合 したコレステロール、およびそれらの混合物を含んでなる。好ましくは、このよ うな他の化合物はリポタンパク質およびリン脂質およびそれらの混合物をさらに 含んでなる。当業者は理解するように、典型的にはコレステロールはほぼ３０％ のエステルを含有するであろう。さらに当業者は理解するように、リポタンパク 質は水溶液の中にコレステロールを維持するであろう。好ましくは、前処理にお ける血清物質は、コレステロール、コレステロールエステル、リポタンパク質コ レステロール、リポタンパク質コレステロールエステル、リン脂質と結合したコ レステロールおよびそれらの混合物から成る群より選択される。最も好ましくは 、血清物質はリン脂質と組み合わせたコレステロールコレステロールを含んでな る。このような好ましい態様の適当な商業的に入手可能な例は、ＰｅｎｔｅｘTM Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｓｕｐｅｒ−Ｔｒａｔｅ（Ｍｉｌｅｓ，Ｉｎｃ．）で あり、これは高い密度のリポタンパク質コレステロールおよびリン脂質と組み合 わせたリポタンパク質コレステロールエステルである。したがって、より小さい 血球がもとの体積の３０％〜５０％より大きく膨張するとき、前処理は必要であ る。さらに、使用する血清物質の濃度は、低浸透圧溶液により引き起こされる血 球の膨張の量の関数、ならびに、血球のヘモグロビンを血球から漏れさせる固定 反応のプロセス条件の双方であると考えられる。主として室温におけるアルデヒ ド濃度のために血球をほぼ２時間以内に固定し、そして低浸透圧の圧力がほぼ１ ５０ミリ浸透圧モルであるプロセスにおいて、前処理は不必要であるように思わ れる。前処理を使用するとき、好ましくはコレステロールの濃度は１×１０6血 球／μｌの血球計数に対して０．１〜５．０ｍｇである。高過ぎるコレステロー ル濃度を使用する場合、血球は溶解する傾向がある。低過ぎるコレステロール濃 度を使用する場合、血球は膨潤するとき破裂するであろう。 血球を破裂させないで血球を膨潤する先行技術の試みは、細胞膜を強化する機 能をするプロセシング助剤、例えば、酒石酸カリウムナトリウムの使用に集中し た。しかしながら、このアプローチは期待される３０〜５０％より大きい膨張を 許さず、調節された溶血性を有する血球を提供しない。 本発明の方法を１工程のプロセスにおいて血球を同時に膨潤および固定するこ とによって開示するが、２以上の工程を使用して血球を血清物質で前処理し、血 球を膨潤させてヘモグロビンのコントロールされた放出を可能とし、その後血球 を固定することができることは、この方法の範囲内である。しかしながら、この ような手法は各工程のための条件、さらに詳しくは、血球の固定のタイミングを コントロールするという問題を有することが期待される。 本発明の方法において使用するためのコントロール製品を製造する好ましい方 法において、リン酸ナトリウムの水溶液を固定試薬と所望の浸透圧に組み合わせ ることによって、低浸透圧溶液を形成する。自然血液の正常張度に関して浸透圧 が低くなるほど、一部分血球の外側から血球の内側へ動く水のために、血球の膨 潤はより多くなるであろう。浸透圧は、初期血球大きさ、血球計数、および所望 の最終血球大きさに依存して、好ましくは０〜１５０ミリ浸透圧モルであり、さ らにより好ましくは好酸球類似体について６５〜９５ミリ浸透圧モル、単球類似 体について０〜２０ミリ浸透圧モル、白 血球類似体について５〜３５ミリ浸透圧モル、そして好中球類似体について４５ 〜６５ミリ浸透圧モルの範囲である。上記の好ましい範囲は等張生理食塩水で洗 浄した血球に基づき、そしてさらにほぼ２０，０００〜５０，０００血球／μｌ の固定反応における血球計数に基づく。 付随的に、温度血球の膨潤速度に独立に影響を与えるように思われず、固定反 応速度に事実影響を与える。血球が膨張するにつれて、固定反応がヘモグロビン のそれ以上の解放を防止するまで、ヘモグロビンはコントロールされた速度で血 球の中から外に漏れる。ヘモグロビンの大部分は低浸透圧処理の最初の５分以内 に解放されるであろう。したがって、血球の同時の膨潤および固定において、溶 液中の固定温度を低下させると、血球が膨潤する間における、固定プロセスおよ びヘモグロビンの解放速度をコントロールすることができる。固定反応が完結し たとき、血球は血液学的試験手法において使用される通常の溶解試薬の影響下の 溶解または分解に対して耐性である。 本発明の方法において使用するコントロール製品を製造する他の方法において 、グルタルアルデヒドを含有する冷却した低張溶液に血球を添加する。冷却した 固定溶液は０〜１５℃、より好ましくは１〜１０℃の温度であり、最も好ましく は固定処理はリンパ球および単球の類似体について２〜８℃において、好中球お よび好酸球の類似体について室温において実施される。低下した温度は、選別装 置、例えば、コールター・カウンターＶＣＳ分析器により測定して、定量的に異 なる血球を提供することが示された。定量的差は、室温における固定に比較して 、より高い平均細胞体積を包含する。 膨潤する血球の固定は、細胞膜を強化しかつ膜の分解を防止するために重要で ある。これは、血球を有機アルデヒド、例えば、モノ アルデヒド、例えば、ホルムアルデヒド、またはジアルデヒド、例えば、グルタ ルアルデヒドの溶液と接触させることによって達成される。グルタルアルデヒド は、ホルムアルデヒドより急速に反応するので、好ましいアルデヒドである。ほ ぼ２０，０００〜５０，０００血球／μｌの血球計数に基づいて、最終濃度が約 ０．０５％〜０．８％、より好ましくは０．１％〜０．６％の範囲内であるかぎ り、グルタルアルデヒドは最終濃度より高い濃度において添加することができる 。適当なアルデヒドおよびその濃度の選択についての実際の制限は、血球数、不 都合な血球会合の排除の機能的制限、および固定反応のコントロールにおけるパ ラメーターとしてである。固定反応の条件は使用する特定の動物細胞および調製 する白血球類似体について変化するであろう。 グルタルアルデヒドを使用する大部分の室温の固定は２時間以内に起こるが、 コールター・カウンター血液学的器具において使用する通常の赤血球溶解剤に対 して赤血球を完全に耐性にするためには、より長い時間が要求される。赤血球を 注意して選択すると、グルタルアルデヒドを使用する固定時間の長さは、温度、 グルタルアルデヒドの濃度、血球数および解放されるヘモグロビンの所望の量に 依存して、２〜７２時間、好ましくは３〜３０時間の範囲であろう。最も好まし い態様において、ほぼ２０，０００〜５０，０００血球／μｌの血球計数につい ての固定時間は、単球およびリンパ球の類似体について１０〜２４時間であり、 そして好酸球および好中球の類似体について３〜１８時間である。標的としたヒ ト白血球の集団についてより低い平均細胞体積を有する部分的に固定された赤血 球において、不完全な固定が生ずることがある。一般に、固定の上限は調製の便 利さに基づく。固定後、血球は液相から遠心および重力手段により分離され、次 いでリン酸緩衝生理食塩水で洗浄される 。 固定溶液のｐＨは７．０〜９．０である。固定溶液のｐＨが低過ぎる場合、凝 集が起こり、高過ぎる場合、血球は破裂することがある。さらに、ｐＨはヘモグ ロビンの解放に影響を与える。固定反応が急速に起こり過ぎる場合、細胞はヘモ グロビンを解放することができない。したがって、ｐＨ範囲はほぼ７．０〜９． ０、好ましくは７．５〜８．５である。最も好ましい態様において、固定溶液の ｐＨは好中球および好酸球の類似体について８．０±０．２であり、そして単球 およびリンパ球の類似体について７．８±０．１である。 好酸球類似体は同様な方法において調製されるが、ただし低張グルタルアルデ ヒド溶液は好ましくは室温において調製され、そして低張グルタルアルデヒド溶 液は、細胞を完全に固定するよりむしろ、血球中のヘモグロビンを軽度に架橋す るために主として使用される。それ自体、ほぼ２０，０００〜５０，０００血球 ／μｌの血球計数についてのグルタルアルデヒドの濃度はほぼ０．１〜０．４％ 、より好ましくは０．２〜０．３％である。ヘモグロビンを軽度に架橋し、リン 酸緩衝生理食塩水で洗浄した後、血球をタンパク質変性試薬、例えば、第四アン モニウム化合物、または血球内のヘモグロビンを沈澱させることが当業者に知ら れている他の変性剤でさらに処理する。変性溶液のｐＨは９．０〜１２．０、好 ましくは１０．０〜１１．０であるべきである。処理は血球体積を減少させない 。タンパク質変性試薬を使用する処理は、膨潤した血球の光散乱特性を増加させ て、ヒト好酸球に類似する、要求される光散乱特性を有する膨潤した血球を提供 する。ヘモグロビンの変性およびヘモグロビンのコントロールされた解放の双方 は、血球におけるヘモグロビン組成を変化するという効果を有する。しかしなが ら、光散乱の 性質は、単球およびリンパ球の類似体におけるヘモグロビンのコントロールされ た解放と好酸球類似体におけるヘモグロビンの変性との間において顕著に異なる 。一般に、血球からのヘモグロビンの解放は血球の光散乱および透明度を減少さ せるであろう。血球におけるヘモグロビンの変性は血球の光散乱を増加するであ ろう。 好酸球類似体を調製する好ましい方法は、赤血球のプールを水性血清物質で前 処理し、赤血球を膨潤させ、赤血球中のヘモグロビンを変性させ、そして赤血球 を固定することを含んでなる。当業者は理解するように、血清物質を使用する前 処理を必要とする量の膨潤を必要としない、適当な大きさの赤血球を選択するこ とができるコントロール製品を製造することは、この方法の範囲内に入る。この ような場合において、この方法は赤血球中のヘモグロビンを変性してヒト白血球 の光散乱の性質シミュレートし、そして血液学的試験手法において使用される溶 解試薬による分解に対して耐性であるように赤血球を固定することを含んでなる 。それ自体、処理された赤血球はヒト白血球に類似する光散乱および体積の性質 を有するであろう。しかしながら、赤血球がある程度に膨潤しない場合、赤血球 は生来球形でないので、光散乱の標準偏差は最大の細胞集団の境界内に入らない であろう。球形化剤の添加はこの問題を排除することができる。 赤血球を膨潤し、赤血球からヘモグロビンを解放させ、解放中のヘモグロビン を変性し、ならびに当業者に知られている方法により赤血球を収縮させる、上記 において開示したプロセシング工程の組み合わせを使用することによって、器具 の機能障害の原因を診断する新規な方法において使用することができる、Ｄ．Ｃ ．体積、ＲＦ大きさ、透明度および光散乱の複数の異なる物理的パラメーターを 有する類似体を設計する方法が得られる。さらに詳しくは、赤血球 の収縮および膨潤は上記のパラメーターのすべてに影響を与えるが、赤血球中の ヘモグロビンの変化は透明度および光散乱の特性に影響を与えることがある。 本明細書において開示する懸濁媒質は、また、他のこの分野において知られて いる方法により調製される白血球類似体とともに使用される。１つのこのような 他の方法は、実施例５に記載するように白血球の５つの下位集団をシミュレート するために、ヒト白血球を固定することを含む。 対照血球コントロール製品は、任意のこの分野において知られている方法また は前述の方法のいずれかにより調製された、１種または２種以上の白血球類似体 を含むことができる。白血球類似体は任意の適当な媒質、例えば、リン酸緩衝生 理食塩水および米国特許第４，２１３，８７６号、米国特許第４，２９９，７２ ６号、米国特許第４，３５８，３９４号および米国特許第３，８７３，４６７号 に詳細に記載されている媒質の中に貯蔵することができる。 下記の特定の例は、米国特許第４，２９９，７２６号に開示されている。 赤血球に長期間の安定性を付与する安定化媒質−好ましい処方物 概算量 リットル処方物 １．蒸留水 ５００ｍｌ ２．プロピルパラベン ０．３〜１．０ｇ ３．メチルパラベン ０．５〜１．０ｇ ４．プロカイン塩酸塩 ０．１〜０．５ｇ ５．デオキシコール酸 ０．１〜０．９ｇ ６．ラクトース １０．０〜５０．０ｇ ７．アクチジオン ０．１〜０．６ｇ ８．クエン酸三ナトリウム２Ｈ2Ｏ ３．０〜８．０ｇ ９．クエン酸１Ｈ2Ｏ ０．３〜０．９ｇ １０．リン酸二水素ナトリウム１Ｈ2Ｏ ０．８〜２．５ｇ １１．フェネルガン塩酸塩 ０．１〜１．０ｇ １２．コリスチメテイト、ナトリウム ０．２〜０．９ｇ １３．ペニシリンＧ、ナトリウム ０．５×１０6〜３× １０6単位 １４．硫酸カナマイシン ０．２〜０．８ｇ １５．硫酸ネオマイシン ０．２〜１．０ｇ １６．５’−ＡＭＰ ０．４〜１．０ｇ １７．アデニン ０．２〜０．８ｇ １８．イノシン ０．４〜１．０ｇ １９．硫酸ジヒドロストレプトマイシン ０．２〜１．０ｇ ２０．テトラサイクリン塩酸塩 ０．２〜１．０ｇ ２１．３０％ウシアルブミン １００〜３５０ｍｌ ２２．蒸留水 １リットルとする量 上記において列挙した化学物質の多数はいくつかの名称で商業的既知であるの で、与えた名称はＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ、第７版（１９８９）、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．ニュージャージイ州ラウェイに列挙されている普通名 である。 コントロール製品を製造するとき、上清流体を白血球類似体から除去し、次い で白血球類似体を懸濁媒質の中に再懸濁させる。好ましい懸濁媒質は血漿物質の 水溶液を含んでなる。本明細書において定義するとき、血漿物質の水溶液は、血 清物質（上記において定義した通である）、血清物質と血漿タンパク質との組み 合わせ、およびそれらの混合物の水溶液を含んでなる。さらに本明細書において 定義するとき、血漿タンパク質は血漿の中に含有される１種または ２種以上のタンパク質を含んでなる。好ましくは、このような血漿タンパク質は アルブミン、リポタンパク質、グロブリン、フィブリノゲン、およびそれらの混 合物を含んでなる。より好ましくは、血漿物質はコレステロール、コレステロー ルエステル、リポタンパク質コレステロール、リポタンパク質コレステロールエ ステル、リン脂質と結合したコレステロール、アルブミンと結合したコレステロ ール、アルブミンと結合したコレステロールエステル、リン脂質と結合したリポ タンパク質コレステロール、アルブミンと結合したリポタンパク質コレステロー ル、およびそれらの混合物からなる群より選択される。 サポニンに基づく溶解系における赤血球の溶解のための血漿物質の実用性を確 証するために、水性血漿物質を洗浄した赤血球に添加する。水溶液はリン酸緩衝 生理食塩水中の３％血漿物質を含んでなっていた。結果は下記の通りである： 試料 血漿物質 溶解 １． ヒトアルブミン あり ２． 脂肪酸を除去したアルブミン なし ３． リポタンパク質コレステロールを有する試料２ あり ４． ウシ血清アルブミン なし ５． リポタンパク質コレステロールを有する試料４ あり ６． アルブミン結合コレステロール あり ７． モノマーのアルブミン あり ８． ウシ血清アルブミン、カパレート安定化 なし ９． リポタンパク質コレステロールを有する試料８ あり １０． ポリマー増強ウシ血清アルブミン あり １１． ヒトアルブミン あり １２． ブタアルブミン あり １３． 米国特許第４，２９９，７２６号の媒質 なし １４． リポタンパク質コレステロールを有する試料１３ あり １５． 界面活性剤と結合したコレステロール なし １６． リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ） なし １８． レシチン なし １９． リポタンパク質コレステロールを有するＰＢＳ あり 前述の試験結果から、洗浄した赤血球への血漿物質の添加はサポニン溶解系中 の溶解を可能とすることが決定された。アルブミンは赤血球およびサポニンと相 互作用して溶解作用を実行すると考えられる。しかしながら、洗浄した赤血球お よびウシ血清アルブミンを他の成分、例えば、米国特許第４，２９９，７２６号 に開示されているものと組み合わせると、アルブミンは溶解を引き起こさない。 しかしながら、リポタンパク質コレステロールを添加すると、溶解が行われる。 そのうえ、リポタンパク質コレステロールをＰＢＳに添加すると、溶解が行われ る。 前述したように赤血球から調製された白血球類似体を使用するとき、血漿物質 の水溶液は、器具において使用する少なくとも１２時間前に、血液学的組成物に 添加することが好ましい。１種または２種以上の白血球類似体を溶解可能なヒト 赤血球と組み合わせて、溶解試薬を使用する器具のための単一の多分析参照血球 コントロール製品調製するとき、血漿物質の水溶液は結合したコレステロールを 含んでなることが最も好ましい。最も好ましい血漿物質の適当な例は米国特許第 ４，２９０，７７４号（Ｍｉｌｅｓ，Ｉｎｃ．）に記載されているようなＭｏｄ ｕｃｙｔｅTMであり、これはアルブミンと結合した高い密度のリポタンパク質コ レステロールである。懸濁 媒質中のコレステロールの最終濃度は、最終製品における血球計数に依存して、 ４００〜１，２００、好ましくは６００〜１，０００ｍｇ／ｌの範囲である。 本明細書において開示する好ましい方法により調製される白血球類似体を使用 するコントロール製品について、不十分な濃度のコレステロールを好ましい媒質 の中に使用する場合、参照血球コントロール製品における赤血球は効率よく溶解 ぜず細胞膜を溶解しないので、サポニン溶解試薬系を使用するとき、雑音および デブリは存在せず、そして白血球類似体は溶解反応のために要求される大きさよ り低い平均細胞体積を有するであろう。媒質が高過ぎる濃度のコレステロールを 含有する場合、参照血球コントロール製品における赤血球は効率よく溶解せず細 胞膜を溶解しないので、雑音およびデブリは存在しない。 さらに詳しくは、コントロール製品を器具、例えば、コールターＶＣＳ型技術 を使用する器具（これは米国特許第４，７５１，１７９号に記載されているよう な試薬系を使用する）においてを使用して、白血球の少なくとも２つの集団、（ １）リンパ球系（リンパ球）および（２）骨髄性細胞（好中球、単球、好酸球お よび好塩基球）を区別するとき、好ましい懸濁媒質はより弱い溶解試薬と非固定 赤血球との間の反応を起こさせるので、赤血球は溶解するが、白血球類似体は実 質的に影響を受けない状態にあり、白血球類似体の各型の計数を可能とする。米 国特許第４，７５１，１７９号により教示されるように、溶解試薬は２つの形態 を有する：（１）サポニンを含有する溶解希釈剤、これは同時にん全血試料を希 釈しかつその赤血球を間質溶解する機能をする；または（２）非溶解血液希釈剤 および引き続くサポニンを含有する溶解試薬から構成された２つの部分の系。 先行技術の媒質、例えば、米国特許第４，２１３，８７６号、米国特許第４， ２９９，７２６号、または米国特許第４，３５８，３９５号に記載されているも のを使用するとき、本明細書において開示する好ましい方法により調製される白 血球類似体は標的とする白血球集団について所望の体積より小さい。さらに詳し くは、好ましい懸濁媒質を白血球類似体（赤血球または白血球から調製された） とともに使用するとき、類似体のＤ．Ｃ．体積は標的とする白血球集団について 所望の範囲内にある。 より好ましい態様において、懸濁媒質はさらに非イオン界面活性剤の添加を含 んでなる。界面活性剤は高い親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有する。ＨＬ Ｂは典型的には１５より大きい、より好ましくは１７より大きい値を有する。典 型的には、界面活性剤は、白血球類似体に悪影響を及ぼさないで、赤血球にいっ そう特異的に溶解作用をなすために有効な量で存在する。さらに、界面活性剤は コントロール製品中の遊離コレステロールを安定化するので、コレステロールは 溶液の中に分離しない。当業者は理解するように、界面活性剤の有効量は実験的 に決定することができるが、典型的にはコントロール製品の０．５重量％より少 ない。 適当な非イオン界面活性剤は下記一般式のアルキルポリエーテルアルコールを 包含する：Ｒ−Ｘ−（Ｙ）n−Ｈ、式中Ｒは親油性鎖Ｃ8−Ｃ18 して ＹはＣＨ2ＣＨ2Ｏ−またはＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2Ｏであり、ｎは１５〜５０の整数で ある。これらの界面活性剤の適当な商業的例は、ＤｉａｚｏｐａｎTMＳＳ−８３ ７（ＧＡＦ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ ｏｒｐ．）、ＴｒｉｔｏｎTMＸ４０５（Ｒｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａａｓ）、およ びＰｌｕｒｉｏｎｉｃ ＦTM−１２７ ＰＲＩＬＬ（ＢＡＳＦ Ｗｙａｎｄｏｔ ｔｅ Ｃｏｒｐ．）を包含する。 いかなる理論にも拘束されたくないが、好ましい懸濁媒質中の赤血球、弱い溶 解剤（例えば、サポニン）、および血漿物質の間の相互作用が存在すると、現在 、考えられる。さらに詳しくは、血漿物質は細胞膜コレステロールに影響を与え 、コレステロールはさらに溶解試薬に対して白血球類似体の応答に影響を与える と、現在、考えられる。そのうえ、界面活性剤は溶解反応を赤血球に対していっ そう特異的とし、しかも測定したコントロールパラメーターに関して白血球類似 体に悪影響を及ぼさないとさらに考えられる。さらに、界面活性剤、また、細胞 膜または血漿物質の中に見出されるコレステロールに影響を与えることがあると さらに考えられる。 ６カ月までの安定性を有する血液学的参照コントロール製品のための好ましい 懸濁媒質は、血漿物質および任意の適合性殺真菌剤および殺細菌剤、および任意 の補助剤、例えば、プリンヌクレオシド、胆汁溶質、およびコール酸誘導体、フ ェノチアジン化合物および抗ヒスタミン性質を有するそれらの塩、および４−ア ミノ安息香酸エステルおよび誘導体および美的性質を有するそれらの塩、ならび に赤血球のための球形化剤、またはそれらの組み合わせの水溶液を包含する。１ 種または２種以上の白血球類似体は組み合わせて、赤血球のための既知の溶解剤 とともに使用するための単一の参照血球コントロール製品とすることができるの で、好ましい懸濁媒質の処方物は白血球類似体のすべてについて同一である。 当業者は理解するように、懸濁媒質は細胞の溶解を回避するために十分な張度 を有すべきである。懸濁媒質のための好ましい処方は下記の通りである： 懸濁媒質 概算量 リットル処方物 １．蒸留水 ５００ｍｌ ＊２．プロピルパラベン ０．３〜１．０ｇ ＊３．メチルパラベン ０．５〜１．０ｇ ＊４．プロカイン塩酸塩 ０．１〜０．５ｇ ＊５．デオキシコール酸 ０．１〜０．９ｇ ＊６．ラクトース １０．０〜５０．０ｇ ＊７．アクチジオン ０．１〜０．６ｇ ＊８．クエン酸三ナトリウム２Ｈ2Ｏ ３．０〜８．０ｇ ＊９．クエン酸１Ｈ2Ｏ ０．３〜０．９ｇ ＊１０．リン酸二水素ナトリウム１Ｈ2Ｏ ０．８〜２．５ｇ ＊１１．フェネルガン塩酸塩 ０．１〜１．０ｇ ＊１２．コリスチメテイト、ナトリウム ０．２〜０．９ｇ ＊１３．ペニシリンＧ、ナトリウム ０．５×１０6〜３× １０6単位 ＊１４．硫酸カナマイシン ０．２〜０．８ｇ ＊１５．硫酸ネオマイシン ０．２〜１．０ｇ ＊１６．５’−ＡＭＰ ０．４〜１．０ｇ ＊１７．アデニン ０．２〜０．８ｇ ＊１８．イノシン ０．４〜１．０ｇ ＊１９．硫酸ジヒドロストレプトマイシン ０．２〜１．０ｇ ＊２０．テトラサイクリン塩酸塩 ０．２〜１．０ｇ ＊２１．３０％ウシアルブミン １００〜３５０ｍｌ ２２．リポタンパク質コレステロール ４００〜１，２００ｍｇ ２３．蒸留水 １リットルとする量 ＊赤血球および類似体に長期間の安定性を付与するするために好ましい任意の成 分。 製造されたコントロール製品は、器具の機能障害の原因を監視および診断する ために使用することができる。本発明において、下記に関連する問題について器 具を監視および診断することができる血液学的コントロール製品を使用する方法 が開発された： １．溶解のデブリおよび雑音 ２．器具の試薬のポンプ体積の設定 ３．器具のレーザーアラインメント ４．器具のゲインの設定 ５．フローセルにおける流速の不一致 この方法は、先行技術の方法により提供される器具のオペレーターによる試験 結果の診断的非特異性または検査である非特異的フラギングより、いっそう特異 的な器具の機能障害の型および原因の指示を提供する。下記において、従来記載 されたコントロール製品を使用する新規な方法を説明する。当業者は理解するよ うに、コントロール製品は細胞のデブリおよび無効の赤血球により引き起こされ る雑音を監視するために溶解可能な赤血球を含有しなくてはならない。この方法 は、器具の機能障害の原因を決定するために、コントロール製品の物理的性質の 新規なコントロールパラメーターを使用する。これらの物理的性質は、下記のも のからなる群より選択される： （１）Ｄ．Ｃ．電流により測定された体積、 （２）高い周波数（ＲＦ）の大きさ、 （３）不透明度、および （４）光散乱。 白血球集団を系の動作のインジケーターとして使用する。好ましくは、好中球 およびリンパ球の下位集団をコントロールパラメーターとして使用し、そして器 具の動作を決定するために測定する。より好ましくは、好中球の集団をコントロ ールパラメーターとして使用し、そして系の動作の指示として測定する。 細胞のデブリのための雑音の問題が存在するかどうかを決定するために、２つ のコントロールパラメーターの使用を用いる。コントロールパラメーターは計数 比（ＣＯＵＮＴ ＲＡＴＩＯ）および経過時間（ＥＬＡＰＳＥＤ ＴＩＭＥ）で ある。計数比は、特定の経過時間の間の分析において記録される事象の合計の計 数と比較した、分析における白血球の数の測度である。経過時間は、通常秒で、 測定される時間である。計数される白血球／計数された合計の事象の比が１００ ％に近づくにつれて、細胞のデブリまたは器具の機能障害に関連する雑音の問題 は排除される。 ＶＣＳ技術を用いる器具において計数比を使用して１例は、白血球類似体の数 と、特定の経過時間についてが得られた８１９２粒子の合計の計数との比較であ る。この比が約９５％より小さい場合、雑音または妨害が問題であるという指示 が存在する。９５％において、雑音または妨害が問題であるという指示が存在す る。特定の問題はこの開示においてさらに説明する追加の試験によりさらに確証 される。 器具を問題について監視および診断するための他のアプローチは、患者の正常 な血液の統計的に有意な数のパラメーターの同一の組の連続する平均の新鮮な血 液の監視を使用することである。この平均がコントロールパラメーターの期待す る範囲外であるとき、器具の機能障害の初期の指示が存在する。器具の機能障害 は本明細書に記載するコントロール製品を使用してさらに評価することができる 。 器具が適切に機能しているかどうかの１つの指示は、器具が測定した細胞のデ ブリまたは雑音を決定することである。過剰の細胞のデブリは、不完全な溶解、 温度条件または溶解反応の妨害のための反応速度の変化により引き起こされるこ とがある。種々の器具システムは血球計数およびデータの蓄積時間の制限を有す るので、過剰の細胞のデブリまたはいずれかの源からの雑音は白血球集団の適切 な獲得および分析を妨害する。細胞のデブリまたは雑音の問題の原因は、下記の ものを含むいくつかの問題に寄与することがある： Ａ．シース流体および血液試料の流れの不均衡のための導電率の雑音。 Ｂ．不適切な赤血球溶解により引き起こされる溶解の雑音。 Ｃ．部分的詰まり、残留物の詰まりまたは他の問題により引き起こされる流れ の雑音。 機能障害が試料流のポンプ体積の間の不一致により引き起こされる導電率の雑 音のためであるかどうかを決定するために。目盛り定めした容器を使用して、血 液試料に添加した試薬の各々を測定する。移された試薬ので体積は前もって決定 した値の範囲内にあるべきである。試薬の体積が規定した限界内にない場合、試 薬のポンプを調節して小出しされる試薬の体積を増減する。 ＶＣＳ技術を用いる器具の例において、溶解試薬およびクエンチ試薬の流れの ポンプ体積を測定する。目盛り定めした容器を使用して、これらの体積の各々を 測定する。試薬の体積は前もって決定した値の範囲内にあるべきである。試薬の 体積が規定した限界内にない場合、試薬のポンプを調節して提供される体積を増 減する。 浸透圧的に感受性の固定血球類似体集団を含有する調製したコントロール製品 をさらに使用して、試薬のポンプ体積を監視する。溶 解試薬の体積の変化は、希釈した血液試料の最終の浸透圧濃度に影響を与え、そ して類似体集団の測定した体積に影響を与えるであろう。より低い浸透圧濃度は コントロール血球類似体の測定した体積を増加し、そしてより高い浸透圧濃度は コントロール血球類似体の測定した体積を減少させる。シース流体を電気的にバ ランスさせるために要求される導電率の限界を越える試薬のポンプ体積の変動は 、コントロール血球の体積の変化に加えて、雑音を生成するであろう。 したがって、導電率の雑音が前述の方法により最小となった後、不適切な赤血 球の溶解から生ずる溶解の雑音は、既知の数の安定化された赤血球および少なく とも１つの白血球類似体の細胞集団を含有するコントロール製品を使用して検査 される。溶解が問題である場合、コントロール血球は最大計数比の約９５％より 低い計数比を示すであろう。さらに、試薬の体積は前述の方法により調節するこ とができるが、溶解反応の温度に関する溶解の反応速度は影響を受けるであろう 。さらに詳しくは、実験室の器具の室温が５０°Ｆである場合、溶解の雑音を最 小するために、温度が９０°Ｆである場合と異なる溶解試薬およびクエンチ試薬 を溶解反応は必要とするであろうことが発見された。 ＶＣＳ型技術を用いる器具の例において、溶解試薬およびクエンチ試薬を血液 試料と反応させて、測定に適当な白血球の溶解しかつ希釈した懸濁液を形成する 。ＶＣＳ型器具において、血球を溶解試薬と反応させて、低張血球を膨潤させ、 赤血球および血小板を溶解させ、そして赤血球および血小板の膜を溶解させる。 クエンチ試薬との反応は膨潤および溶解を停止させ、そして白血球の自然大きさ への白血球の再平衡化のプロセスを開始する。反応の特質のために、溶解試薬お よびクエンチ試薬は浸透圧濃度および導電率の双方に おいて非常に異なる。試料流の最終の浸透圧濃度および導電率は溶解試薬、クエ ンチ試薬および血液試料の体積、浸透圧濃度および導電率に比例する。 ２つのコントロールパラメーターを使用して、試薬のポンプ体積が規定内にあ るかどうかを決定するか、または機能障害の原因を決定する。計数比および好中 球のＤＣ平均（ＮＥＵＴＲＯＰＨＩＬ ＤＣ ＭＥＡＮ）の監視は、導電率の許 容度内および導電率の許容度を越えたポンプ体積の変化の区別を促進する。好中 球のＤＣ平均は、ＤＣチャンネルにおける好中球の平均値である。 器具を問題について監視および診断する上にアプローチは、患者の正常な血液 の統計的に有意な数のパラメーターの同一の組の連続する平均の新鮮な血液の監 視を使用することである。この平均がコントロールパラメーターの期待する範囲 外であるとき、器具の機能障害の初期の指示が存在する。器具の機能障害は本明 細書に記載するコントロール製品を使用してさらに評価することができる。 白血球の計数比は、希釈の導電率または浸透圧濃度として表した、既知の試薬 の濃度および測定したポンプ体積から計算した試薬のポンプ体積に関係づけられ ることが発見された。第１図は、試験すべき希釈した血液試料の流れの中の希釈 した血液試料の導電率に比較した、白血球の計数比の比較を表す。第１図に示す ように、クエンチ試薬の体積が増加するにつれて、計数比はプラトーに増加する 。クエンチ体積が最適な範囲を越えて増加するとき、計数比は実質的に減少する 。 コントロール製品を使用して匹敵する第１図を得るために、適切な溶解を提供 することが期待される第１体積において、溶解試薬の体積を準備する。クエンチ 体積は、不十分なクエンチ試薬を準備することから過剰量のクエンチ試薬を準備 することに調節する。クエ ンチ試薬の体積が不十分であるとき、計数比は有意に減少する。クエンチ体積が 増加するとき、計数比は上昇し、そして最適な動作範囲の上のプラトーはクエン チ体積を最適な範囲の上に増加して、計数比を実質的に減少させる。この情報が 得られると、クエンチ試薬のポンプを調節して、プラトーの中央にあるクエンチ 試薬の体積を得ることができる。 クエンチ体積が調節された後、溶解試薬のポンプを再調節することができる。 コントロール製品の好中球のＤＣ平均は溶解試薬のポンプ体積に関係づけられる ことが発見された。単球の集団は好中球の集団に類似する感度を示す。溶解試薬 のポンプを調節して、コントロール製品の前に測定した好中球のＤＣ平均に対応 する浸透圧濃度を得る。前に測定した好中球のＤＣ平均は、参照器具からのアッ セイ値として得られる。 第２図は、血液試料を溶解試薬およびクエンチ試薬で希釈した後、分析する血 液試料の浸透圧濃度に比較した、好中球のＤＣ平均の比較を示す。第２図に示す ように、浸透圧濃度が増加するにつれて、コントロール製品の好中球のＤＣ平均 は減少する。 残った詰まりまたは部分的詰まりのための問題が存在するかどうかを決定する ために、白色時間（ＷＨＩＴＥ ＴＩＭＥ）および日時（ＤＡＴＥ ＴＩＭＥ） の２つのコントロールパラメーターを使用する。これらの２つのコントロールパ ラメーターはこれらの型の問題の決定を促進する。白色時間は白血球類似体の数 と分析に要する時間との積である。日時はコントロール試料を分析した日である 。既知の数の白血球類似体を含有するコントロール製品とともに、これらの２つ のコントロールパラメーターを使用すると、器具の動作の問題に関する情報が得 られることが見出された。 本発明の方法において、コントロール製品を少なくとも毎日使用 する。白色時間および日時を記録して、流れの問題の存在について意味ある情報 を得る。さらに詳しくは、白色時間を日時に対してグラフにすると、器具の流れ 動作の傾向を決定するために、器具の動作の２次元のグラフを得ることができる 。 ＶＣＳ型器具において、試料の流速を検査するために別の方法が得られる。Ｖ ＣＳ器具は、それで分析された各患者の血液試料について、白色時間および日時 を記録する。統計学的に有意な数の患者の血液試料についてこれらのコントロー ルパラメーターを比較することによって、器具の流れ動作の歴史を監視するため に拡張したデータベースを得ることができる。さらに詳しくは、各患者の血液試 料について白色時間および日時を記録することによって、残留する詰まりまたは 部分的詰まりが発生したかどうかを決定することができる。残留する詰まりは引 き続く試料の流れを制限するが、血球数／秒の検出可能な特性を生成しないこと がある。部分的詰まりは、フローセルを通る血球の流れを減少するので、白血球 の計数を得るために要する時間を増加することがある。 さらに、これらのパラメーターを患者の試料について監視するとき、流速が悪 影響を受けたかどうか、および白血球の計数を得るために期待される時間を雑音 およびデブリのレベルが妨害するかどうかを発見するための２次元の分析を得る ことができる。過剰のデブリは、特定した数の白血球を得るために必要な時間の 量を減少するであろう。この２次元分析は、先行技術の複雑な多次元の分析を超 えた改良を提供した。 フローセルの精度による問題を決定する先行技術方法は、前もって決定した時 間の間に検出される白血球の数を測定することであった。さらに詳しくは、器具 のオペレーターは既知の数の白血球を有する特別に選択した新鮮な血液を使用し 、そして器具が白血球を検 出するために要した時間を測定する。器具が特定した時間内に白血球を検出した 場合、フローセルの問題が存在しないことが推定された。しかしながら、この測 定は特定の分析のための器具についての情報を提供しただけであった。この測定 は、延長した期間にわたって器具の動作に関する意味ある情報を提供しなかった 。さらに詳しくは、白血球の計数／単位時間のグラフはその１日についての器具 の動作の瞬間的観測を提供するだけである。数日にわたる器具の動作の観測を得 るために、結果の３次元の変化が必要であった。そのうえ、本発明の方法は既知 の数の血球を有するコントロール製品を使用し、これにより特別に選択した新鮮 な血液を得ること、およびそれが含有する白血球の数の決定の必要性を排除する 。 さらに、コントロール製品を使用して、器具のレーザー、レーザーオプチック スまたはレーザーアラインメントを使用する問題が存在するかどうかを決定する 器具を監視することができる。レーザーアラインメントは、Ｘ、ＹおよびＺに対 応する３次元を有する。 現在、レーザーアラインメントおよびゲインの調節を設定し、次いで監視する ために使用される材料はラテックスの微小粒子である。ラテックス粒子を使用す る方法は、集団の平均およびラテックス集団の変動係数を監視することである。 しかしながら、レーザーのレンズがレーザービームの信号を不明瞭にするほこり または他のデブリを蓄積する場合、先行技術の実施は、レーザービームに対する 妨害を克服するためにレーザーのゲインを増加することによって、不明瞭を許し た。さらに、ラテックス粒子は器具において使用される試薬に対して応答性では ない。そのうえ、ラテックス粒子は、器具において目盛り定めモードで働くこと が要求される、別のコントロール製品である。ラテックス粒子は、器具の動作を 監視するために実行される追加の仕事を必要とする。したがって、器具において 使用する試薬に対して応答し、かつ器具におけるレーザーの動作の指示を提供す る、単一の血液学的コントロール製品を得ることは有利である。 Ｘ軸のアラインメントは最も感受性の軸であり、そしてコントロール製品の光 散乱の位置および分布に対する最大の影響を生成することが決定される。Ｘ軸が 適切に整列し、そして分布幅が最小であるとき、コントロール製品の回転した光 散乱位置は最大に存在する。アラインメントはわずかのミスアラインメントに、 次いで大きいミスアラインメントに低下するにつれて、ヒストグラムにおけるコ ントロール製品の位置は左にシフトし、平均値は減少し、そして回転した光散乱 のチャンネル分布は広くなる。 新鮮な血液を分析しそしてＸ軸のミスアラインメントが存在するとき、白血球 の集団は左にシフトし（低い光散乱）計数した白血球の損失および雑音の増加が 発生する。ミスアラインメントがいっそう極端となるとき、新鮮な血液の分析へ の作用は、白血球の下位集団が没入し、そして区別が喪失することである。 Ｙ軸およびＺ軸のミスアラインメントは、Ｘ軸のミスアラインメントにより引 き起こされるとき白血球が示すの同一種類の白血球の集団の位置の変化を示さな い。レンズが最も鮮鋭な影像を提供する適切な焦点にレンズがあるかどうかを決 定することに、Ｚ軸のアラインメントは関係することが決定された。Ｚ軸が正し いアラインメントにない場合、生ずる散乱プロットは白血球のはっきりした明確 なクラスターを示さないであろう。さらに詳しくは、光散乱／ＤＣ体積のヒスト グラムにおいて、好中球の集団からのリンパ球および単球の集団の分離は明確で ないであろう。体積集団の光散乱ピークの分離の低下が存在するであろう。さら に詳しくは、個々の集団における振幅の減少および集団間の谷の振幅の増加が存 在するであろ う。 コントロール製品のリンパ球の集団は低い光散乱を決定する情報を提供するが 、好中球の集団は高い光散乱を決定する情報を提供することが見出された。これ らの２つの集団の位置の間の関係は、集団の位置、例えば、レーザーアラインメ ント（バイアス）およびＤＣ、ＲＦおよびＬＳゲイン（比例する）の調節へのバ イアスおよび比例する効果の双方を生成する系の変動を監視する。 ２つのコントロールパラメーターの使用を使用して、レーザーの操作による問 題を決定することができる。好中球ＲＬＳ平均（ＮＥＵＴＲＯＰＨＩＬ ＲＬＳ ＭＥＡＮ）および山対谷の比（ＰＥＡＫ ＴＯ ＶＡＬＬＥＹ ＲＡＴＩＯ） の監視は、レーザーの動作およびＸ軸およびＺ軸のアラインメントの指示を提供 するであろう。リンパ球ＲＬＳ平均（ＬＹＭＰＨＯＣＹＴＥ ＲＬＳ ＭＥＡＮ ）は、好中球ＲＬＳ平均に類似する感度を示す。好中球ＲＬＳ平均は、光散乱チ ャンネルにおける好中球の平均値である。リンパ球ＲＬＳ平均は、光散乱チャン ネルにおけるリンパ球の平均値である。山対谷の比（ＰＶＲ）は、好中球の集団 の回転した光散乱信号／リンパ球および単球の集団、および好中球の集団の間で 形成した谷の回転した光散乱信号の振幅の比である。 ＰＶＲは、レーザーによる問題が存在するかどうかを決定する方法において使 用する、信頼すべき品質コントロールのパラメーターを提供する。コントロール 製品を使用するとき、山対谷の比は前もって決定した限界数を満足すべきである 。ＰＶＲがこの数を満足するか、またはそれを超える場合、レーザーは最適に作 動している。さらに詳しくは、前もって決定した数を満足するＰＶＲは、好中球 の集団および白血球および単球の集団の明瞭な分離が存在することを示す。ＰＶ Ｒが前もって決定した数より小さい場合、レーザーに よる問題が存在するという指示が存在する。 前述したように、先行技術の実施は汚れたレンズを補償するためにレーザーの ゲインの増加を許した。しかしながら、ラテックス粒子は、光学的妨害が存在す るとき、光散乱の信号のゲインの誤った調節に関する、特定の情報を提供しない 。ゲインの調節が不適切に増加されたとき、好中球ＲＬＳ平均を包含する回転し た光散乱ヒストグラムにおける全体の好中球の集団の位置が右にシフトすること が決定された。 本発明の方法によれば、ＰＶＲが前もって決定した値より小さく、そして好中 球ＲＬＳ平均が前もって決定した値より大きいことが決定されると、器具は光学 的妨害またはＸ軸またはＺ軸のアラインメントによる問題を有することが示され る。したがって、技術者はレンズをきれいにし、そしてレーザーアラインメント を目盛り定めすることを知るであろう。さらに、また、決定されたＰＶＲが前も って決定した値より小さく、そして好中球ＲＬＳ平均が前もって決定した値より 小さいことが決定される場合、器具はゲインの増加により補償されなかった光学 的妨害またはＸ軸またはＺ軸のアラインメントによる問題を有することが示され る。そのうえ、ＰＶＲが前もって決定した値の範囲内にあり、そして好中球ＲＬ Ｓ平均が前もって決定した値より大きいか、または小さい場合、レーザーのゲイ ンが不適切に設定されていることが示される。なおさらに、ＰＶＲが前もって決 定した値より小さく、そして好中球ＲＬＳ平均が前もって決定した値の範囲内で ある場合、レーザーは力を喪失しているので、レーザーの交換を要求とする。 器具が製造業者の規格書に従い動作しているかどうかを決定するためのコント ロールパラメーターのいくつかの使用、および機能障害の原因を診断するための コントロールパラメーターの使用を以上 の明細書は説明しているが、表１は詳細な分析を提供し、そのコントロールパラ メーターは、器具のシステムによる問題の検出および診断するために、コントロ ール製品または患者の血液試料の統計学的に有意な値について使用することがで きる。この表において、下記の略号を使用する： ｓ＝適用可能な器具の機能についての感度 ＳＤ＝標準偏差 ＯＰ＝透明度 ｘ＝コントロール製品または試料の測定 さらに、ポリスチレンまたは他のプラスチックのビーズをコントロール製品に 添加して、器具の動作をさらに示すことができる単一の参照コントロール製品を 調製することができる。さらに詳しくは、コントロールパラメーターと一緒にこ の型のコントロール製品を使用すると、器具の動作についての情報を得ることが できる。例えば、ラテックス粒子のＤＣゲインが規定内にあるが、コントロール 製品が規定範囲外のＤＣ平均を有する場合、試薬のポンプ体積による問題が存在 するという指示が存在する。 この型のコントロール製品をＶＣＳ技術を用いる器具において使用するとき、 前述の例は溶解試薬またはクエンチ試薬の体積による問題が存在することを示す 。さらに詳しくは、ＶＣＳ型器具において、ラテックス粒子のＤＣゲインが規定 内にあるが、コントロール製品が製造業者の規定より上のＤＣ平均を有する場合 、溶解試薬の体積は最適なレベルより大きいか、またはクエンチ試薬の体積は最 適なレベルより小さいという指示が存在する。なおさらにＶＣＳの例において、 ラテックス粒子のＤＣゲインが規定内にあるが、コントロール製品が製造業者の 規定より下のＤＣ平均を有する場合、溶解試薬の体積は最適なレベルより小さい か、またはクエンチ試薬の体積は最適なレベルより大きいという指示が存在する 。 本発明の方法において使用するための白血球類似体を調製する方法を、下記の 実施例に記載する。実施例１はガンの細胞を処理するために好ましい試薬および 技術の特定の実施例であり、処方物は本発明の方法において使用できるものの単 なる例示であることを理解すべきである。実施例２、３および４はアリゲーター の細胞を処理するために好ましい試薬および技術の特定の実施例であり、処方物 は本発明の方法において使用できるものの単なる例示であることを理解すべきで ある。実施例５は、ヒト白血球を使用して白血球類似 体の５つの下位集団を生成する酵素を示し、処方物は本発明の方法において使用 できるものの単なる例示であることを理解すべきである。実施例６は、４つの白 血球集団のアセンブリーを示す。これらの実施例は単なる例示である白血球類似 体のための処方物を提供することを理解すべきである。 記載する試薬および／または技術は、また、ガンおよびアリゲーター以外の動 物からの血球に適用可能である。この開示に従い、他の成分および比率を使用す ることができる。 実施例１ ガンの赤血球からのリンパ球類似体 下記は、動物の選別したリンパ球類似体を得るために、ガンの赤血球を処理す るための好ましい試薬および推奨される特定の手法の工程の特定の実施例である 。処方物および手法は単なる例示であり、そして本発明においてこの開示に従い 、他の成分、比率および手法を使用することができることを理解すべきである。 リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ） リットル処方物 １． １塩基性リン酸ナトリウム：０．２ｇ ２． ２塩基性リン酸ナトリウム・７Ｈ2Ｏ：２．０ｇ ３． アジ化ナトリウム：０．１ｇ ４． 塩化ナトリウム：９．４ｇ ５． 蒸留水で１リットルにする：ｐＨほぼ７．４；浸透圧濃度３１５〜３４ ５ｍＯｓｍ／ｋｇ。 白血球低張溶液 １． １塩基性リン酸ナトリウム：０．２ｇ ２． ２塩基性リン酸ナトリウム・７Ｈ2Ｏ：２．０ｇ ３． 蒸留水で１リットルにする：ｐＨほぼ７．８；浸透圧濃度１５〜２５ｍ Ｏｓｍ／ｋｇ。 手法 １． 約１４０〜１７０ｆＬの平均細胞体積範囲を有する鳥類の赤血球を選択 する。充填した鳥類の赤血球をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。 ２． １．０〜５．０ｍｇのコレステロールを２×１０6／μｌの血球計数に 添加し、室温において２〜６時間インキュベートする。 ３． 商用２５％グルタルアルデヒド製品を冷却した白血球低張溶液に添加す ることによって、約０．１〜０．８％のグルタルアルデヒド含量を有するグルタ ルアルデヒド固定試薬を調製する。好ましくは、温度は２〜８℃である。グルタ ルアルデヒドの好ましい濃度はほぼ０．３５％である。 ４． 洗浄した赤血球を測定した量の工程３の固定剤に１：３５の希釈におい て添加する。密閉した容器に移し、この容器を２〜８℃において１８〜２４時間 ゆっくり回転する。ヘモグロビン含量の減少はほぼ６０重量％であると計算され る。 ５． 上清流体を取り出し、血球をＰＢＳで数回洗浄し、適当な貯蔵用溶液の 中に再懸濁させる。 ６． リンパ球類似体を単独で放置するために、洗浄固定した血球を本発明の 懸濁媒質の中に再懸濁させ、濃度を調節して正常のヒト血液中のヒトリンパ球の 濃度にシミュレートする。 ７． コントロール製品のための多血液学的パラメーターのために、他の血液 学的組成物および多パラメーターの血液学的コントロール製品に所望の類似体を 有する本発明の懸濁媒質の中に洗浄固定した血球を添加し、血球計数はリンパ球 の比率を測定するために適 当である。 ８． 適当な安定剤を使用して、固定した血球を６カ月を超える期間の間貯蔵 することができる。 上記実施例に従うが、他の種類の哺乳動物の赤血球を使用すると、匹敵する結 果が得られる。 実施例２ アリゲーターの赤血球からの単球類似体 下記は、単球類似体を得るために、アリゲーターの赤血球を処理するための好 ましい試薬および推奨される特定の手法の工程の特定の実施例である。処方物お よび手法は単なる例示であり、そして本発明においてこの開示に従い、他の成分 、比率および手法を使用することができることを理解すべきである。 単球低張溶液 １． １塩基性リン酸ナトリウム：０．１ｇ ２． ２塩基性リン酸ナトリウム：１．０ｇ ３． 蒸留水で１リットルにする：ｐＨほぼ７．８；浸透圧濃度５〜１５ｍＯ ｓｍ／ｋｇ。血球のための洗浄溶液（ＰＢＳ）、実施例１に記載されている通り である。 手法 １． 約３５０〜４５０ｆＬの平均細胞体積範囲を有するアリゲーターの赤血 球を選択する。充填したアリゲーターの赤血球をＰＢＳで洗浄する。 ２． １．０〜５．０ｍｇのコレステロールを１×１０6／μｌの血球計数に 添加し、室温において３〜５時間インキュベートする。 ３． 商用２５％グルタルアルデヒド製品を冷却した単球低張溶 液に添加することによって、約０．１〜０．８％のグルタルアルデヒド含量を有 するグルタルアルデヒド固定試薬を調製する。好ましくは、温度は２〜８℃であ る。グルタルアルデヒドの好ましい濃度はほぼ０．１５％である。 ４． 洗浄した赤血球を測定した量の工程３の固定剤に１：５０の希釈におい て添加する。密閉した容器に移し、この容器を室温において１８〜２４時間ゆっ くり回転する。ヘモグロビン含量の減少はほぼ４０重量％であると計算される。 ５． 上清流体を取り出し、血球をＰＢＳで数回洗浄し、適当な貯蔵用溶液の 中に再懸濁させる。 ６． 単球類似体を単独で放置するために、洗浄固定した血球を本発明の懸濁 媒質の中に再懸濁させ、濃度を調節して正常のヒト血液中のヒト単球の濃度にシ ミュレートする。 ７． コントロール製品のための多血液学的パラメーターのために、他の血液 学的組成物および多パラメーターの血液学的コントロール製品に所望の類似体を 有する本発明の懸濁媒質の中に洗浄固定した血球を、単球の測定に適当な濃度に おいて、添加する。 ８． 適当な安定剤を使用して、固定した血球を６カ月を超える期間の間貯蔵 することができる。 実施例３ アリゲーターの赤血球からの好酸球類似体 下記は、好酸球類似体を得るために、アリゲーターの赤血球を処理するための 好ましい試薬および推奨される特定の手法の工程の特定の実施例である。処方物 および手法は単なる例示であり、そして本発明においてこの開示に従い、他の成 分、比率および手法を使用することができることを理解すべきである。 単球低張溶液 １． １塩基性リン酸ナトリウム：０．３２ｇ ２． ２塩基性リン酸ナトリウム：８．０８ｇ ３． 蒸留水で１リットルにする：ｐＨほぼ８．０；浸透圧濃度７５〜８５ｍ Ｏｓｍ／ｋｇ。 好酸球ヘモグロビン変性処理溶液 １． 塩化ジメチルジココアンモニウム：２．５ｇ ２． トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン：６．０６ｇ（有機系緩衝剤 ） ３． 蒸留水で１リットルにする：ｐＨほぼ１０．５。 好酸球後処理洗浄溶液 １． ポリオキシエチル化アルキルフェノール：５ｇ（ＤａｚｏｐａｎTMＳＳ −８３７、ＧＡＦケミカル・コーポレーション） ２． 蒸留水で１リットルにする。 血球のための洗浄溶液（ＰＢＳ）、実施例１に記載されている通りである。 手法 １． 約４００〜５００ｆＬの平均細胞体積範囲を有するアリゲーターの赤血 球を選択する。充填したアリゲーターの赤血球をＰＢＳで洗浄する。 ２． ０．２５〜１．２５ｍｇのコレステロールを１×１０6／μｌの血球計 数に添加し、室温において２〜５時間インキュベートする。 ３． 商用２５％グルタルアルデヒド製品を好酸球低張溶液に添加することに よって、約０．１〜０．８％のグルタルアルデヒド含量を有するグルタルアルデ ヒド固定試薬を調製する。グルタルアルデヒドの好ましい濃度はほぼ０．２％で ある。 ４． 洗浄した赤血球を測定した量の工程３の固定剤に１：５０の希釈におい て添加する。密閉した容器に移し、この容器を室温において１８〜２４時間ゆっ くり回転する。 ５． 上清流体を取り出し、血球をＰＢＳで数回洗浄する。 ６． 洗浄した赤血球を好酸球ヘモグロビン変性処理溶液に１：１０希釈にお いて添加する。密閉した容器に移し、この容器を室温において２〜４時間ゆっく り回転する。 ７． 上清流体を取り出し、血球を好酸球後処理洗浄溶液で数回洗浄して、好 酸球ヘモグロビン変性処理溶液を除去する。次いで、適当な貯蔵用溶液の中に懸 濁させる。 ８． 好酸球類似体を単独で放置するために、洗浄固定した血球を本発明の懸 濁媒質の中に再懸濁させ、濃度を調節して正常のヒト血液中のヒト好酸球の濃度 にシミュレートする。 ９． 多血液学的コントロール製品のために、他の血液学的組成物および多パ ラメーターの血液学的コントロール製品に所望の類似体を有する本発明の懸濁媒 質の中に洗浄固定した血球を、好酸球の測定に適当な濃度において、添加する。 １０． 適当な安定剤を使用して、固定した血球を６カ月を超える期間の間貯 蔵することができる。 実施例４ アリゲーターの赤血球からの好中球類似体 下記は、好中球類似体を得るために、アリゲーターの赤血球を処理するための 好ましい試薬および推奨される特定の手法の工程の特定の実施例である。処方物 および手法は単なる例示であり、そして本発明においてこの開示に従い、他の成 分、比率および手法を使用することができることを理解すべきである。 好中球低張溶液 １． １塩基性リン酸ナトリウム：０．２３ｇ ２． ２塩基性リン酸ナトリウム：５．３２ｇ ３． 蒸留水で１リットルにする：ｐＨほぼ８．０；浸透圧濃度４５〜６５ｍ Ｏｓｍ／ｋｇ。 血球のための洗浄溶液（ＰＢＳ）、実施例１に記載されている通りである。 手法 １． 約４００〜５００ｆＬの平均細胞体積範囲を有するアリゲーターの赤血 球を選択する。充填したアリゲーターの赤血球をＰＢＳで洗浄する。 ２． 商用２５％グルタルアルデヒド製品を好中球低張溶液に添加することに よって、約０．１〜０．８％のグルタルアルデヒド含量を有するグルタルアルデ ヒド固定試薬を調製する。グルタルアルデヒドの好ましい濃度はほぼ０．４％で ある。 ３． 洗浄した赤血球を測定した量の工程３の固定剤に１：５０の希釈におい て添加する。密閉した容器に移し、この容器を室温において１８〜２４時間ゆっ くり回転する。 ４． 上清流体を取り出し、血球をＰＢＳで数回洗浄し、適当な貯蔵用溶液の 中に再懸濁させる。 ５． 充填した血球を非イオン界面活性剤溶液に添加する。前記溶液はドナー 血球の体積を標準化する傾向がある。この溶液は、１リットルの蒸留水中の０． ５ｇのほぼ１３．５のＨＬＢを有するオクチルフェノキシポリエトキシエタノー ル（ＴｒｉｔｏｎTMＸ−１００、Ｒｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ Ｃｏ．）を含ん でなる。 ６． 上清流体取り出し、血球をＰＢＳで数回洗浄し、適当な貯蔵用溶液の中 に再懸濁させる。 ７． 好中球類似体を単独で放置するために、洗浄固定した血球を本発明の懸 濁媒質の中に再懸濁させ、濃度を調節して正常のヒト血液中のヒト好中球の濃度 にシミュレートする。 ７． 多血液学的コントロール製品のために、他の血液学的組成物および多パ ラメーターの血液学的コントロール製品に所望の類似体を有する本発明の懸濁媒 質の中に洗浄固定した血球を、好中球の測定に適当な濃度において、添加する。 ８． 適当な安定剤を使用して、固定した血球を６カ月を超える期間の間貯蔵 することができる。 実施例５ ヒト白血球からの白血球類似体の５つの下位集団 １． 全血をデキストラン（分子量１００，０００〜５００，０００）溶液に １：２０の希釈において添加し、重力手段により１〜３時間沈降させる。 ２． 白血球、血小板および多少の残留赤血球を含む上清を取り出す。 ３． 工程２の製品を３００ＲＣＦ以下において約１０分間遠心する。血小板 を吸引して、白血球のボタン、残留赤血球、および血球を再懸濁させる少量の血 漿を残す。 ４． 適当な溶解剤、例えば、水を添加して、白血球から赤血球を溶解する。 ５． 工程４の製品を遠心し、上清を除去し、充填された白血球を残す。充填 された白血球をほぼ等しい体積の生理食塩水の中に再懸濁させる。 ６． 白血球を適当な等浸透圧固定溶液、例えば、５％ホルムアルデヒドおよ び９５％ＰＢＳ（容量％）に１：１０の希釈において 添加し、密閉した容器に移し、この容器を室温において１８〜３０時間ゆっくり 回転する。 ７． ほぼ０．１％濃度のグルタルアルデヒドを有するグルタルアルデヒド固 定溶液を１：１希釈においてプールに添加し、さらに８〜１２時間固定を続ける 。 ８． 上清流体を取り出し、血球をＰＢＳで数回洗浄し、適当な貯蔵用溶液の 中に再懸濁させる。 ９． ５つの下位集団の白血球類似体のアセンブリーを単独で放置するために 、洗浄固定した血球を本発明の懸濁媒質の中に再懸濁させ、濃度を調節して正常 のヒト血液中のヒト白血球の濃度にシミュレートする。 １０． 多血液学的コントロール製品のために、他の血液学的組成物および多 パラメーターの血液学的コントロール製品に所望の類似体を有する本発明の懸濁 媒質の中に洗浄固定した血球を添加し、血球計数は白血球比率を測定するために 適当である。 １１． 適当な安定剤を使用して、固定した血球を６カ月を超える期間の間貯 蔵することができる。 実施例６ 正常ヒト血液試料中の白血球の標的とする組成をシミュレートするためのサブ アセンブリーにおいて、下記量の個々の成分を使用する： 原溶液 ０．１５０Ｌ 実施例１ リンパ球 ５００×１０3／μｌ ０．０４０Ｌ 実施例２ 単球 ５００×１０3／μｌ ０．０３０Ｌ 実施例３ 好酸球 ５００×１０3／μｌ ０．２８０Ｌ 実施例４ 好中球 ５００×１０3／μｌ ０．５００Ｌ 希釈剤 リン酸緩衝生理食塩水 ４つの白血球集団の最終のアセンブリーにおいて、上清流体を取り出し、次い で１．０リットルの８００ｍｇのコレステロールの最終濃度を有するＭｏｄｕｃ ｙｔｅTMの水溶液の中に血球を再懸濁させる。 既知の適当な安定剤を添加して、このアセンブリーを約６カ月までの間貯蔵す ることができる。 白血球集団についての比および合計の血球計数を調節して、ヒト血液における 病理学的状態、ならびに正常な状態を表すことができる。これらの組成物は、特 にコールター原理を用いる自動化粒子分析器具のための、コントロール製品およ び目盛り定め製品において同様に有効である。さらに、ラテックス粒子をコント ロール製品に添加して、器具の動作をさらに指示することができる、単一のコン トロール製品を形成することができる。 その後、最終の赤血球、白血球および血小板の計数、ならびにヘモグロビン含 量およびヘマトクリットが所望の範囲の中に入るような比率において、未処理の ヒト赤血球、シミュレートした白血球、および安定化またはシミュレートした血 小板の懸濁液を添加することができる。 安定化された血小板はこの分野において知られている方法により調製する。有 効な方法は下記のものを包含する： １． 前もって選択した範囲のｐＨおよび浸透圧濃度に維持された水溶液中の 、ヨードアセトアミドおよびイミノジ酢酸またはそれらの溶質、ならびに適合性 の静菌剤の組み合わせ、米国特許第４，４０５，７１９号に記載されている。 ２． ０．１〜５％の濃度のグルタルアルデヒドおよびある種の異性体の線状 アルコールのエトキシレートの混合物である非イオン 界面活性剤を含有する固定剤−安定化組成物、米国特許第４，３８９，４９０号 にいっそう詳しく記載されている。 ３． ヒト血小板のそれに近い大きさ範囲および体積安定なを有するように必 要に応じて安定化され、結合されそして配合されたた赤血球を含んでなるヒト血 小板類似体、米国特許第４，２６４，４７０号に記載されている。 血液学的パラメーターの各々について値を変化させて、異常に低い状態および 異常に高い状態を表すことができる。正常血液中の白血球計数は５，０００〜１ １，０００／マイクロリットル（μｌ）であり、リンパ球の値は２０〜４０％で あり、単核細胞の値は１０％より少なく、顆粒球の値は６０〜８０％であり、好 酸球の値はほぼ５％であり、そして好塩基球はほぼ２％より少ない。赤血球につ いてのヒト血液における正常な範囲は、４，０００，０００〜５，０００，００ ０血球／μｌである。正常ヘモグロビンの値は１２〜１６ｇ／１００ｍｌである 。用語「ヘマトクリット」は、充填された赤血球の体積／白血球の体積の比とし て定義される。ヒトにおける正常の比は約４５％である。平均血球値は、充填赤 血球の体積（ｍｌ／リットルの血液）／赤血球（１０6／μｌ）の比である。平 均血球ヘモグロビン濃度は、充填赤血球の１００ｍｌ当たりのヘモグロビンの平 均重量を示す指数（％）である。平均血球ヘモグロビンは、ヘモグロビン含量（ ｇ／ｌ）／赤血球（１０6／μｌ）の比である。 以上の明細書において、本発明を例示の目的で詳細に説明したが、本発明の精 神および範囲から逸脱しないで本明細書における詳細において種々の変化および 変更が可能である。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Quality control method for hematological instruments Cross reference to related application   The present invention relates to U.S. patent application Ser. No. 08 / 386,711, filed Feb. 8, 1995. A continuation-in-part application, the latter of a U.S. patent filed June 23, 1993, now abandoned. A continuation-in-part of application Ser. No. 08 / 081,529, the latter being filed on June 2, 1993. Is a continuation-in-part of US Patent Application Serial No. 08 / 081,529, filed on March 3, No. 07 / 840,43, filed Feb. 24, 1992, now abandoned. It was a continuation-in-part of No. 8. Field of the invention   The present invention provides a novel method for increasing the quality control ability of a hematological device system. Related. This method can be used to distinguish between cell populations of blood (1) C. By current (2) high frequency (RF) magnitude, (3) opacity, and And (4) having particular utility for instruments that measure light scattering. This method (1) D. C. Volume measured by current and (2) high frequency (RF) magnitude Additional utility has been found for instruments that measure size. The method also includes D . C. The utility of an instrument for measuring cell volume only by electric current was found. Background of the Invention   Quality control has long been a necessary and routine technique in clinical hematology . Red blood, which involves distinguishing a subpopulation of white blood cells Accuracy in counting spheres and leukocytes may be partially dependent on appropriate control products and And how the control product is used. Currently available for particle counting With many types of equipment, there is always the possibility of instrument malfunction, There is a need for quality control using the product. About automatic particle counter The traditional method of maintaining a quality control program is to use a fresh It consisted of preparing human blood. However, this fresh blood A blood product that can only be used for a while, and is therefore durable, has been developed.   Hematology containing control blood cell analogs to monitor the accuracy and precision of a hemocytometer Control products are important. When using such a hemocytometer, white blood Use blood cell analogs to maintain sphere differentiation and accuracy of other parameters It is recognized that a new method is required.   Control products should be as close as possible to that of fresh whole blood . Ragweed pollen, polystyrene, latex, various organic substances and fixed Human red blood cells to prepare a stable suspension of appropriately sized particles. Have been tried. Each of these suspensions has at least four subsets of leukocytes. Suitable for use as a control product for population leukocyte differentiation Was not proved.   Substances used to maintain quality control (hereinafter referred to as hematological Products, also called control products or control products) Can be used to calibrate the instrument. For the purposes of the present invention, the instrument functions properly. The control product used to determine whether Contains one or more analogs suspended in the The device to analyze at least one physical or biological property of the blood that can be analyzed. To emulate. As used herein, an analog is at least a target population. Is also defined as a particle that simulates one physical or biological property You. As such, one automatic machine is one in which the control product is distributed by another machine. Control with or without additional parameter components sensitive to analysis Only certain components of the product can be analyzed. Conventionally, quality control of instrument operation The use of control products to provide roles has yet to be developed. Not. Control products typically contain at least four subgroups of leukocytes. Provide tests for loops, i.e., lymphocytes, monocytes, neutrophils and eosinophils. Offer. Prior art use of control products requires that the instrument be properly counted and analyzed for analogs. Has been focused on testing whether or not to provide percentages. However Thus, the method of the present invention provides additional information for assessing and diagnosing the operation of the instrument.   The control product will provide fresh blood It must be clear that the test sample must show exactly what constitutes it. You. In addition, blood components such as red blood cells are slowly removed after removal from a blood donor. May cause hemolysis and change size and shape within hours. It's clear how important it is for roll products to simulate fresh blood Is. Similarly, unstabilized leukocytes suffer from degenerative changes.   In general, prior art methods of making analogs maintain their original volume prior to fixation Focused on using reduced or reduced red blood cells. Osmotic environment before fixation By manipulating, contracting or expanding the cells had limitations. Obedience From about 30% to 50% Large shrinking or swelling of non-human erythrocytes can result in excessive cell association or lysis. Caused.   U.S. Pat. No. 3,873,467 (Hunt) replaces plasma in human blood. A washed, stabilized suspension of human erythrocytes in a non-protein aqueous suspension A hematology control control comprising is taught. In control controls Stability results in the cells becoming spherical without substantially changing the average cell volume of the cells. Include cells in the aqueous suspension fluid or substance to be removed, as well as Conditioning cells by conferring resistance to And is achieved by: In addition, aqueous suspension fluids create an environment that inhibits biological activity. Generate for cells. In a preferred embodiment, a substantially increased average cell volume A small amount of fixed human erythrocytes treated and Include in. Fixed cells are resistant and stable to changes in cell volume. Resistant to lysis under the action of a lysis reagent that lyses the isolated cells. Control control The fixed red blood cells in the tool substitute for the white blood cell population in human blood.   U.S. Pat. No. 4,704,364 (Carver, et al. ) COULTER COUNTERTM S-Plus (P and additional information about the electron particle counter represented by the Controls for additional operational performance are disclosed. However, Luther (COULTER ™) VCS Analyzer Electro-Optical Particle Counter There is a need for new methods of using whole blood cell control products for such purposes. VC The S-analyzer allows to distinguish at least four populations of leukocytes.   Size range, volume distribution, light scattering range, electrical opacity and At least four populations of leukocytes in the blood based on the sensitivity of A system for automated differential differentiation of human leukocytes that differentiates Accurately simulate the range, distribution and sensitivity of each cell in normal human blood Need to be installed.   Human lymphocytes, monocytes, neutrophils, basophils and eosinophils have a certain size. Has fabric range and optical properties. Upper size limit for each subpopulation of leukocytes Both and the lower limit should be expressed in the control control product. Further In addition, the mean cell volume of each leukocyte subpopulation in the control product is You should approximate it. In addition, the liquids used in control products The suspending medium should not cause significant contraction or swelling of the cells. What In addition, the aging of the control product is dependent on the characteristics of the volume distribution histogram or other characteristics. Do not degrade the parameters. Controls for multi-parameter instruments Further requirements for leukocyte analogs in the product Analog cells in whole blood control products are completely lysed by the lysis reagent That is not to be done.   Various media have been used in combination with blood cell analogs. U.S. Patent No. 4, No. 299,726 discloses a versatile diluent and medium. Dilution The agent is used to precondition red blood cells, and lactose, Consists essentially of sodium azide and a nonionic surfactant, pH adjusted And the osmotic pressure concentration is adjusted. The medium is a carrier for whole blood control products And contains lactose, fungicides and antibiotics. The medium is also Contains additional ingredients that alter the erythrocyte membrane, bile salts and cholic acid derivatives, Phenothiazine compounds having stamin properties and their salts, and local anesthesia 4-amino- having properties Includes benzoate derivatives and salts thereof.   One disadvantage of the prior art media is that red blood cells and fixed human leukocytes or leukocytes When used in combination with an analog, the control product is at least four white blood cells Do not simulate leukocytes in an instrument that distinguishes the population of Measure The specific parameters of the red and white blood cells to be Dictate some of the required properties of a suitable medium for the product. Know the value of red blood cells Is desirable. Once this measurement has been confirmed and red blood cells have been counted, the The stored cell volume or hematocrit can be calculated. Therefore The control medium suspension medium can measure the mean cell volume (MCV). Be able to equilibrate and stabilize the volume of red blood cells in the sample It is.   Control products are also compatible with the size and distribution of human platelets. Should be free of particulate matter, possibly indicating interference at the lower limit of size is there. Concomitantly, the suspending medium is a microbial organism after packaging the control product. A bacteriostatic agent is included as necessary to prevent the growth of the bacteria. Red and white blood cells are Always have different sizes, but do those sizes tend to overlap? , Or at least in some health conditions. That Moreover, the opacity of these two types of blood cells can also overlap is there. Erythrocytes and lymphoid leukocytes disadvantageously have a considerable cell size. Count one in the presence of the other by overlap and size discrimination alone It is not practical. In traditional practice, strong lysis reagents are used Such lysing reagents may lyse the red blood cells interstitially, turning them into very small particles, or Or solubilize the membrane so that red blood cells are not counted and If not, remove most from leukocytes And leave only those lysis-resistant nuclei for counting. The cell volume of the original leukocyte is This old form of cell size analysis shows that Only a single leukocyte population is identifiable.   U.S. Pat. No. 3,741,875 (Ansley et al. ) Is discriminatory A leukocyte counting method is described. Monoaldehyde, for example, formaldehyde A cytological fixative is added to the blood sample. After the fixation step, add the hemolytic agent, Allow the red blood cells to release the hemoglobin content into the solution. Specific cytochemical Addition of substrate, chromogenic precipitation coupling reagent, and pH buffer will reduce immobilized enzyme. Precipitating insoluble dye in certain types of cells containing. Then stained The solution containing blood cells is passed through a photometric counter. Contained in certain types of cells The use of different specific substrates for different enzymes possessed allows for different types of cells The absolute and relative counts of are obtained. Cytological fixative solution is monoaldehyde Only used. Unsuitable as dialdehydes crosslink and form extracellular precipitates It is stated that   U.S. Pat. No. 4,485,175 (Ledis, et al. ) With the solubilizer Counter using S-plus type quaternary ammonium salt Blood counter (this instrument uses only DC electric field excitation) Methods and reagents for three-volume discriminative determination of lymphocyte, monocyte, and granulocyte populations of spheres About the system.   U.S. Pat. No. 4,751,179 (Ledis, et al. ) Is the lysis reagent And fast-acting crosslinkers as fixatives, e.g. Describes a reagent system containing red blood cells that reproducibly affects whole blood to support red blood cells. Lysate and denature leukocytes for detection and classification by flow analysis instruments. Four distinct Generate data that reveals the cluster. Clusters are found in the blood The four major leukocyte types, namely lymphocytes, monocytes, neutrophils and eosinophils. And thus provide a differential analysis of leukocytes. Ledis, et al. To According to D. C. Leukocyte flow using volume or light scattering at various angles The traditional method of analysis is that of two leukocytes, corresponding to lymphocytes, granulocytes and monocytes. Only showed clusters. For classification of leukocytes, see Ledis, et al. But The parameters used are described in C. (Coulter) volume, high Frequency (RF) size, Coulter opacity (RF size / DC volume), light scattering in various angular ranges, and at various illumination wavelengths And combinations of two or more of the following fluorescences.   Electronic counters using the Coulter principle were first described in US Pat. No. 508, which represents a true reflection of particle counts. According to the Coulter principle, Microscopically sized particles are suspended in the electrolyte liquid and approach the size of the particles. When passing through an electric field of small dimensions, the instantaneous change in the electric impedance of the electric field Will exist. An electric field is excited by direct current (DC) or low frequency current The electrical change is closely proportional to the value of the particle. In commercial equipment, the change is Detected by some appropriate means and operated counters and analyzers Used to The analyzer associated with such a device is based on the volume of the particles. To sort and sort the particles into groups.   The invention of the Coulter principle is disclosed in U.S. Pat. No. 3,502,974 (Coulter, et al. ), Where in addition to the excitation of the DC electric field, Using radio frequency (RF) current to provide information about the DC volume for the particles being studied. Not only information, but also Information on the composition and properties of the materials that make up the particles has been obtained. This patent is the same Discloses a device capable of distinguishing particles of different sizes but different substances. You. Low frequency or direct current (DC) and radio frequency (RF) current excitation By generating a particle-sensing electric field by both, a single particle passing through the electric field , Two or more output signals can be derived. This is Because of the fact. That is, particles, e.g., cells, Almost always insulated with respect to the field, but the particles may differ from the surrounding electrolyte Can carry or interfere with radio frequency currents. This is a homogeneous particle The electrolyte may be due to the difference in the dielectric constant or in a very thin membrane In the case of blood cells with contents that have a different conductivity from is there. Thus, all DC current goes around the blood cell, but some with RF current Go through it. The ease with which RF current can pass through a particle, as well as the transmission of light, A measure called "electrical clarity" or simply "transparency" The ability of a particle to interrupt RF current is called "opacity". In later publications , “Opacity” is defined as the RF impedance divided by the DC impedance It is.   The relative electrical opacity of the particles is determined by the particle content and therefore the particles for classification purposes. This is a characteristic of the type. The more different types of particles each have different opacity Each time, the difference between the particles is detectable. However, significantly different particles are substantially Have the same degree of transparency, and in this way such particles Children cannot be classified effectively. U.S. Pat. No. 3,836,849 (Co ulter, et al. ), So that the detectable result is obtained By selectively processing the transparency of the particle type by processing It is taught that it can be varied to   The Coulter Counter S-Plus automated blood cell counter uses a sample of whole blood. Dilute in isotonic diluent, add lysing agent, then start counting in a short time Designed. Thus, the diluent-lysing system provides a complete red blood cell Must provide a erythrocyte lysis rate that is rapid enough to perform interstitial lysis No. Furthermore, changes in leukocyte volume are not minimal during the data collection step. Should not be, and ideally should be stable for a few minutes.   The Coulter VCS model is a semi-automated analytical instrument that has a DC (coulter) volume, By using Luther clarity and light scattering in various angular ranges, Analyze blood. Coulter VCS type has five parts in total leukocyte count The reagent system is used to differentiate between lymphocytes, monocytes, neutrophils, eosinophils and neutrophils. Provides quantitative analysis of a population of base spheres. The reagent system contains a quench, which is a weak " Added after the "acid" lysis, it greatly reduces the lytic effect on leukocytes Operated. After a short period of quenching, the device will show the volume, clarity, and Start measuring light scattering properties. VCS type is the complete interstitium of red blood cells during the lysis period. Provides a lysis rate of red blood cells that is rapid enough to effect lysis, but It must not affect the product, the Coulter clarity and the nature of the light scattering. In the present invention Coulter counter equipment that can be used in XM. However, S-type and S-plus type are whole blood control products Cannot distinguish all of the subpopulations of leukocytes present in A total count of leukocyte analogs can be provided. In addition, S-plus type Can distinguish two populations of white blood cells.   The new electro-optic particle counter is an instrument that meets the manufacturer's specifications. New function to determine whether the instrument is working Requires method development. This standard is available with Coulter-type particle counters. Mainly directed to the use of hematological control products Suspension media, analogs and control products disclosed herein, and herein Their uses described generally find wide application with particle counters You should understand that. Thus, the term "electro-optical particle counter" In addition to the Coulter counter equipment, the particle size, mass, volume, clarity and Is a variety of electronic identification circuits ("limits") that respond electronically to signals indicative of light scattering. Understand to encompass any other type of particle counter that identifies particles of a size Should. Coulter and Coulter Counter are owned by Coulter Corporation Is a registered trademark of Coulter Corporation. Summary of the Invention   The present invention relates to a method of using a hematological control product, said method comprising: Placing a hematological control product in a device. Product contains at least one leukocyte analog, wherein the leukocyte analog is Treated to be resistant to degradation by lysis reagents used in Derived from treated blood cells, and said analogs are used in instrument operation Responsiveness to the reagent used. Use new control parameters To analyze the spatial location of the control product; C. Volume, large RF Select from at least one member of the group consisting of size, opacity, and light scattering Is done. More preferably, at least two different physical properties are measured. Next And the equipment machine Report the results of such measurements to diagnose the cause of dysfunction.   In addition, the present invention determines whether the instrument is functioning within the manufacturer's analytical standards. A control product containing at least one population of leukocyte analogs. Regarding how to use. This method involves placing a hematology control product in the device. Wherein the control product comprises at least one leukocyte analog. Wherein the leukocyte analog is a lysing reagent used in a hematological test procedure. Derived from blood cells that have been treated to be resistant to degradation by The analog remains responsive to instrument movement. The control product is human leukocyte Simulating at least one physical property, said property C. By current Measured volume, high frequency (RF) magnitude, opacity, and light scattering. Group. More preferably, the control product is low in human leukocytes Both simulate two physical properties. Then, the physical At least one, and preferably at least two, physical properties are measured from the properties. The results of such measurements are reported to diagnose the cause of instrument dysfunction.   Still further, the present invention provides for the emptying of a subpopulation of leukocytes in an amount of a patient's blood sample. Analyzing the interim position to obtain a statistically significant value of the measured parameter, The analysis was carried out by C. A small group consisting of volume, RF magnitude, opacity, and light scattering. Is selected from at least one member and diagnoses the cause of instrument dysfunction Reporting the result of said measurement in an instrument for .   In addition, the hematological sample is combined with a cell suspension comprising an aqueous solution of a plasma substance. And the resulting mixture is analyzed in an instrument and As for diagnosing the cause of dysfunction, the analysis may include: C. Volume, RF size, transparency At least one of the group consisting of lightness and light scattering, more preferably at least 2 Selected from two members. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES   FIG. 1 shows the counting of leukocytes compared to the conductivity of the diluted blood sample in the core to be tested. It is a comparison of ratios.   FIG. 2 shows the immersion of a blood sample to be analyzed after dilution with a lysis reagent and a quenching reagent. 9 is a comparison of DC mean of neutrophils compared to osmotic concentration. Detailed description of the invention   For purposes of understanding and describing the present invention, the following terms are defined.   Beads: beads are stable and inert standards for flow cytometric analysis Can be used as particles (usually polystyrene latex or Made from form). The beads were FSC (flow cytometry data) Standard format for storage) different narrow specifications to standardize settings It can be obtained in a small size. Beads also standardize fluorescence detection settings Therefore, it can be obtained by bonding to various fluorescent dyes.   Channels: Channels are used by flow cytometers to measure the signal emitted by particles. A term used to characterize strength. Most cytometers are optical signals Is divided into 256 for 1024 channels. Have a high channel number The signal is brighter than the lower channel numbers. However, one channel Between the signal defined by the number and the signal defined by the other channel number The quantitative relationship depends on the voltage characteristics of the amplifier and photodetector for a given protocol. Will be.   Coaxial flow: A narrow core flow of liquid in a wider flow. This type of flow -Important in cytometry. Because it passes through a relatively wide nozzle When the particles pass through the light beam sequentially tightly constraining the flowing particles This is because it enables accurate and stable illumination.   Compensation: Compensation determines the overlap between the fluorescence spectra of different fluorochromes. And the ability of the flow cytometer to compensate. Without compensation, given fluorescent color Fluorescence from the element is collected on a photodetector that is assigned to detect different fluorescent dyes. To some extent.   Coulter volume: as particles flow through a narrow nozzle, they deposit electrolyte. The increase in electrical resistance that occurs when transmuting is the Coulter volume of the particles. Electric resistance This increase is only loosely related to the volume of the particles.   Core: The core is injected into the center of the sheath flow and is based on laminar hydrodynamic considerations. It is an inflow that is maintained there. The core is analyzed on a flow cytometer. Contains the sample treatment to be performed.   Crosstalk: Crosstalk is a signal from a "false" photodetector, which is a single fluorochrome Photodetectors whose emitted fluorescence is usually specific for fluorescence from different fluorochromes It occurs because it contains some light of the wavelength obtained through the above filter. " See Compensation.   CV: Coefficient of variation is the standard deviation of a series of values divided by the average of those values. Is defined as It uses flow cytometry to describe the histogram peaks. Used in Lee. In some protocols, it is the characteristics of particles in a population. Can be used to assess variability in gender. DNA analysis (here It is assumed that all normal particles have the same properties). To assess alignment (and operator skills) Can often be used.   Fixation: A method of denaturing cellular proteins. Constant in flow cytometry Can deactivate hazardous biological materials and also provide immediate access to the flow cytometer. Used to preserve stained cells when access is not present. Paraho Lumaldehyde preserves the forward and side scatter properties of the cells (but not autofluorescence). Fixative chosen in flow cytometry because it slightly increases the light) It is.   Flow cell: The flow cell is a flow site that sends the sample flow to the center of the sheath flow. It is a device in the meter. In a certain cytometry configuration, the flow After leaving the flow cell, the illumination is performed "in the air".   Fluorescent dyes: Fluorescent dyes absorb light and then light of a different color (always a longer wavelength ) Is a dye that emits.   Forward scatter: Forward scatter is when light passes through a particle and originates from the original direction of the light beam. Light from an illuminating light beam that is bent to scatter. Small from the illumination light beam The intensity of the angled light is related to the refractive index of the particles as well as the cross-sectional area. Before The backscatter signal does not correlate with cell volume.   Gain: Gain is an electronic control over the amplifier that converts a given signal Determine the current density that results when the intensifier receives it. Photomultiplier tube amplifier Fluctuations occur when the output signal is converted to flow cytometry data. The appearance of these signals may change.   Gates: What about subsequently analyzed flow cytometry data? Restrictions. Live Gate is a compilation for memory Limit the data that the user receives. The analysis gate is from a particular analysis method Simply eliminate the stored data of the species. The gate performs the analysis of the mixed population Used to limit to certain types of cells within a group.   Granularity: Granularity is measured perpendicular to the illumination light beam in a flow cytometer. Is a term used synonymously with side scatter to describe deflected light . This light intensity is inaccurately measured inside the particles flowing through the light beam. Or related to surface irregularities.   Light Scattering: Median angle light scattering (MALS) is available at angles between 10 ° and 70 °. Is defined as the information of light scattering obtained. Low Angle Light Scattering (LALS) is 0 Of light scattering obtained at an angle of 10 ° or less with respect to the light beam axis, Information. High Angle Light Scattering (HALS) is centered at 90 ° to the laser axis This is information on light scattering to be made.   Linear amplifier: A linear amplifier can measure and increase the signal from a photomultiplier tube. This is one way to do it. In a linear amplifier, the output current from the amplifier is derived from the photodetector. The signal is increased in such a way that it is directly proportional to the input current conducted.   Logarithmic amplifier: The logarithmic amplifier can measure by changing the signal from the photomultiplier tube. This is one way to do it. In a logarithmic amplifier, the output current from the amplifier is induced from the photodetector. Modify the signal in such a way that it is proportional to the logarithm of the input current conducted.   Photodetectors: Photodetectors sense light and convert the energy from that light into electrical signals. It is a device to convert. Within the working range of the detector, the electrical signal is proportional to the light intensity. Photomultipliers and photodiodes are two types of photodetectors.   Photodiode: One of the photodetectors used to detect relatively strong optical signals Type. It is a high voltage applied to increase the current at its anode (output) end. No voltage.   Photomultiplier tubes: Photomultiplier tubes are used to detect relatively weak signals Is a type of photodetector. Its output current is increased by the applied high voltage It is.   Rotational light scattering: Rotational light scattering (RLS) is information on MALS / DC pulse peaks. Is the transformation of the data derived from the ratio of The function of RLS is to remove cell size components. And has the effect of producing a measurement that is more relevant to the internal structure of the cell.   Sheath: Coaxial flow from or within the flow cell of the flow cytometer During, the central sample core is the fluid contained therein.   Side scatter: Side scatter bounces off particles in the illuminating light beam and is deflected to the side. It is light of the same color as the illuminating light beam facing it. "Side" is usually a line of light beam It is determined by a lens at a right angle to (perpendicular to). It is also a right angle light Or interchangeably referred to as 90 ° LS. This intensity scattered to the side In the method, it is related to the roughness or irregularity of the surface or inside of the particles.   Spatial location: Spatial location is the location of the analyzed population in the domain of analysis. It is. In the example of a VCS instrument, the domain of analysis is C. Current, high frequency (RF) magnitude and volume measured by light scattering. Other examples are analyzed Group is D. C. Only the volume measured by the current The location is D. C. It will be the average position of the analyzed population within the domain.   Limits: Limits are to make the ADC to ignore signals below a certain intensity An electronic device that can. Very low forward scattering limit Flow to eliminate particles, debris and electronic or optical noise from the acquisition. -Most commonly used in cytometry.   VCS technology: DC (coulter) volume, coulter capacity or RF magnitude, For analyzing blood by using light scattering in various angular ranges Utensils.   Wavelength: The wavelength depends on the energy content and also on the light to which our eyes are sensitive. Characteristic) of light that is precisely related to its color. Shorter wavelength light is more It has more energy than long wavelength light.   The analysis of the current multi-leukocyte population is specific for use as a quality control. Requires size and volume increments and analogs of specific light scattering properties. The present invention In order to examine the setting of the limit of the counter of electro-optical particles, At least one of the major leukocyte components being lymphocytes, monocytes, neutrophils, and eosinophils It is necessary to prepare species analogs. Preferably, for the method of the invention, It is necessary to prepare at least a neutrophil analog. More preferably, neutrophils And it is necessary to prepare analogs of lymphocytes. Prior to this, The increase in volume is related to the increase in light scatter, and the increase in light scatter is At least four different populations of blood cell analogs were prevented from being created. Analogues and The instruments used to analyze analogs are becoming more complex, and the suspending medium for Must complement the complexity of More specifically, the suspending medium is similar to these Compatible with the body and equipment, and complements the physical and physiological properties of the analog Must-have.   The suspending medium is used primarily with leukocyte analogs prepared from blood. White One method of preparing blood cell analogs involves multiple limitations for many types of blood counting instruments. A different source to match the world setting Providing the processed blood cells. The main limitation in the selection of blood cells is the original cells Mean cell volume. Because it is related to the average cell volume of the desired analog This is because that. Without limiting the scope of the invention, particular reference is made to blood cells from a particular animal. Where red and white blood cells from other animals can be used in the method of the invention. It should be understood that   One method of preparing leukocyte analogs useful in the methods of the invention is to reduce red blood cell infiltration. Mix with osmotic solution to expand the cell volume and change the hemoglobin content of the cells Simulate the light scattering and transparency of human leukocytes and fix the leukocytes Be resistant to degradation by lysis reagents used in hematology The presence and fixed leukocytes resemble the properties of human leukocytes; C. As current Group consisting of measured volume, high frequency (RF) magnitude, transparency and light scattering Having at least two properties more selected. Good The process for making blood cell analogs of acidocytes is similar, but changes in hemoglobin content Achieved by denaturing it in the cell rather than leaking it from You. Additional embodiments yield analogs having the volume and light scattering properties of human leukocytes .   This method can also swell red blood cells by more than 50% of the original volume. This can be further influenced by the selection of animal cells for the preparation of the desired analog. Provide wide latitude. In a preferred method, erythrocytes are 75% of the original volume Swells more.   Poultry poultry for the purpose of preparing suitable analogs for use with the method of the present invention. Red blood cells, such as turkeys, chickens, ducks, and preferably cancer Red blood cells can be stabilized with aldehydes to produce smaller leukocyte analogs It's been found. Also, "Fish The operation of the instrument. Other non-human species including sharks and reptiles, preferably alligators Human vertebrates, when properly processed, are larger human monocytes, neutrophils Have red blood cells in the desired size range, producing analogs similar to eosinophils It was discovered. These red blood cells generally have very good suspending capacity and And exhibit highly reproducible volume distribution characteristics. However, considerations, for example, rational Availability must be considered at a reasonable cost.   In addition, when determining white blood cell parameters in whole blood control products, The sphere is resistant to degradation by lysis reagents used in hematology So that the red blood cells are fixed.   Avian, alligator and porcupine cells are nucleated but regulate erythrocytes Given the method described herein that allows for enhanced hemolysis, human leukocyte For the use of said cells as an alternative, the presence of the nucleus is not essential and is critical. There is no. Preferably, 20-80% by weight of hemoglobin in the cells, more preferably Is released from 30 to 70% by weight. Cell membrane disruption and further hemoglobin Stabilize the cells with a fixative to prevent loss of, for example, organic aldehydes.   Another method of preparing leukocyte analogs useful in the methods of the present invention is Human leukocytes to simulate at least one of the two subpopulations It includes.   Further, when using other leukocyte analogs known in the art, The method of the invention is useful. These stabilized leukocyte analog cells are Provide a satisfactory replacement for human leukocytes in pharmaceutical products.   It is preferable to produce a control product suitable for use in the method of the present invention. A new way to simulate human lymphocytes To simulate fixed cancer red blood cells, human monocytes, neutrophils, and eosinophils Mix the suspension of alligator red blood cells immobilized in the Collected in proportions to form a single composition to simulate leukocytes Embody the prepared composition. Then, the control product Mixed with lysable human erythrocytes and stabilized platelets or platelet analogs To form a single multi-analytical control product.   The following description uses red blood cells for control in the method of the invention. A preferred method of preparing a roll product is described.   In the collection step, the red blood cells are treated with an anticoagulant, such as a physiological saline solution (NaCl). Alkali metal of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) dissolved in thorium) Suspend in salt. Other anticoagulants and salts may cause hemolysis or It is considered effective unless it causes cell association.   Fresh red blood cells must be washed to eliminate donor-specific plasma passage. This This allows for red blood cell agglutination when mixing red blood cells from multiple blood cell donors. Sex is reduced. The red blood cells are pooled together to obtain a homogeneous complex.   Red blood cell pool can be pretreated with serum substances as processing aids . Pretreatment with serum substances allows red blood cells to swell without rupture I do. Exposure of red blood cells to a hypotonic environment increases mean blood cell volume and light scattering It has the main effect of reducing the width of the histogram. From the solute concentration of red blood cells Red blood cell size increases as a result of a hypotonic environment with reduced solute concentration I do. When the solute concentration inside the red blood cells is greater than the concentration outside the red blood cells, water There is a tendency to move into the sphere to equilibrate the concentration. Itself, the water inside the red blood cells Movement causes swelling. Low osmotic pressure The environment may be a sodium compound, a potassium compound or both, or a desired Can include solutions of other compositions known to those skilled in the art to provide solute concentrations. Wear.   Serum is defined as cholesterol, cholesterol ester as defined herein. Binds to tel, and one or more other compounds found in serum plasma Cholesterol, and mixtures thereof. Preferably, Other compounds such as lipoproteins and phospholipids and mixtures thereof Comprising. As those skilled in the art will appreciate, cholesterol is typically around 30% Will contain an ester of Further, as those skilled in the art will appreciate, lipoproteins The quality will maintain cholesterol in the aqueous solution. Preferably, the pretreatment Cholesterol, cholesterol ester, lipoprotein Conjugated with resterol, lipoprotein cholesterol ester and phospholipid It is selected from the group consisting of restrols and mixtures thereof. Most preferably Serum substances do not contain cholesterol combined with phospholipids. You. A suitable commercially available example of such a preferred embodiment is PentexTM Cholesterol Super-Trate (Miles, Inc. )so Yes, combined with high density lipoprotein cholesterol and phospholipids Lipoprotein cholesterol ester. Therefore smaller Pretreatment is necessary when blood cells expand more than 30% to 50% of their original volume. You. In addition, the concentration of the serum substance used may vary depending on the blood pressure caused by the hypotonic solution. A function of the amount of swelling of the sphere, as well as the fixation that causes the hemoglobin of the blood cell to leak from the blood cell It is believed that both the process conditions of the reaction. Aldehy mainly at room temperature Blood cells are fixed within approximately 2 hours for cell concentration and hypotonic pressure is approximately 1 hour. In processes that are 50 milli-osmolar, pretreatment appears to be unnecessary It is. When using a pretreatment, preferably the concentration of cholesterol is 1 × 106blood 0.1-5.0 mg per sphere / μl blood cell count. Cholesterol too high When cell concentrations are used, blood cells tend to lyse. Cholesterol too low If a degree is used, the blood cells will burst when swollen.   Prior art attempts to swell blood cells without rupture of the blood cells have been attributed to the ability to strengthen cell membranes. Focus on the use of processing aids, such as potassium sodium tartrate Was. However, this approach has an expected swelling greater than 30-50%. Do not allow and do not provide blood cells with regulated hemolysis.   The method of the present invention comprises simultaneously swelling and fixing blood cells in a one-step process. Pretreating blood cells with a serum substance using two or more steps, Swelling the spheres to allow controlled release of hemoglobin, followed by blood cells Is within the scope of this method. However, this Such a method is based on the conditions for each step, more specifically, the timing of fixation of blood cells. It is expected to have the problem of control.   Preferred way of producing a control product for use in the method of the invention Method, combining an aqueous solution of sodium phosphate with the fixation reagent and desired osmotic pressure Thereby forming a hypotonic solution. Osmotic pressure for normal tonicity of natural blood The lower the blood pressure, the higher the swelling of the blood cells due to water moving in part from outside the blood cells to the inside of the blood cells. The moisture will be more. Osmotic pressure depends on initial cell size, blood cell count, and desired Preferably between 0 and 150 millimolar, depending on the final blood cell size of More preferably 65-95 mm osmolality for eosinophil analogs, monocyte analogs 0-20mm osmolality for body, white 5-35 osmolality for blood cell analogs and 45 for neutrophil analogs It is in the range of ~ 65 mm osmolality. The above preferred range is washed with isotonic saline Based on purified blood cells, and also approximately 20,000-50,000 blood cells / μl Based on blood cell counts in the fixation reaction.   Concomitantly, it does not appear to independently affect the swelling rate of temperature blood cells, It has an effect on the response speed. As the blood cells expand, the fixation reaction becomes hemoglobin Hemoglobin will flow at a controlled rate until it prevents further release of blood. Leaks out of the ball. Most hemoglobin within the first 5 minutes of hypotonic treatment Will be released to Therefore, simultaneous swelling and fixation of blood cells Decreasing the fixation temperature in the solution will allow the fixation process and And the release rate of hemoglobin can be controlled. The fixation reaction is complete Blood cells are affected by the usual lysis reagents used in hematology Resistant to dissolution or degradation.   In another method of manufacturing a control product for use in the method of the invention Add blood cells to a chilled hypotonic solution containing glutaraldehyde. Cooled The fixation solution is at a temperature of 0 to 15 ° C, more preferably 1 to 10 ° C, most preferably Fixation was performed at 2-8 ° C for neutrophils and lymphocytes and monocyte analogs. And at room temperature for analogs of eosinophils. The reduced temperature is Measurements, for example, with a Coulter counter VCS analyzer, To provide blood cells. The quantitative difference is , Including higher average cell volumes.   Fixation of swelling blood cells is important to strengthen cell membranes and prevent membrane degradation. is there. This causes blood cells to become organic aldehydes, Aldehydes, such as formaldehyde, or dialdehydes, such as gluta Achieved by contact with a solution of lualdehyde. Glutaraldehyde Is a preferred aldehyde because it reacts more rapidly than formaldehyde. Ho Based on a blood cell count of about 20,000-50,000 blood cells / μl, the final concentration is about As long as it is within the range of 0.05% to 0.8%, more preferably 0.1% to 0.6%. Glutaraldehyde can be added at concentrations higher than the final concentration . The practical limitations on choosing the appropriate aldehyde and its concentration are: Functional limitation of elimination of favorable blood cell association and As a parameter. The conditions of the fixation reaction depend on the specific animal cells used and the preparation Will vary for different leukocyte analogs.   Most room temperature fixations using glutaraldehyde occur within 2 hours, Compatible with common erythrocyte lysing agents used in Coulter Counter hematology instruments A longer time is required to make the red blood cells completely resistant. Red blood cells If carefully selected, the length of fixation time using glutaraldehyde depends on temperature, Glutaraldehyde concentration, blood cell count and desired amount of released hemoglobin Depending on it will range from 2 to 72 hours, preferably 3 to 30 hours. Most preferred In an embodiment, a blood cell count of approximately 20,000 to 50,000 blood cells / μl Fixed time is 10 to 24 hours for monocyte and lymphocyte analogs, And 3-18 hours for eosinophil and neutrophil analogs. Targeted chicks Partially fixed red blood with lower mean cell volume for leukocyte populations Incomplete fixation may occur in the sphere. In general, the upper limit of fixation is Based on profit. After fixation, blood cells are separated from the liquid phase by centrifugation and gravitational means. Wash with phosphate buffered saline .   The pH of the fixation solution is between 7.0 and 9.0. If the pH of the fixation solution is too low, If collection occurs and is too high, blood cells may burst. In addition, the pH is hemog Affects Robin's release. If the fixation reaction occurs too quickly, the cells Globin cannot be released. Thus, the pH range is approximately 7.0-9. 0, preferably 7.5 to 8.5. In a most preferred embodiment, the fixation solution pH is 8.0 ± 0.2 for neutrophil and eosinophil analogs and monocytes And 7.8 ± 0.1 for analogs of lymphocytes.   Eosinophil analogs are prepared in a similar manner, except that hypotonic glutaraldehyde Hydration solutions are preferably prepared at room temperature, and hypotonic glutaraldehyde solutions The fluid slightly bridges hemoglobin in blood cells, rather than completely fixing the cells. Mainly used for As such, almost 20,000 to 50,000 blood cells The concentration of glutaraldehyde for a haemocytometer / μl is approximately 0.1-0.4% , More preferably 0.2 to 0.3%. Lightly crosslinks hemoglobin, After washing with acid-buffered saline, the blood cells are transformed with a protein denaturing reagent, e.g. It is known to those skilled in the art to precipitate monium compounds or hemoglobin in blood cells. Further treatment with other denaturing agents. The pH of the denaturing solution is 9.0 to 12.0, preferably Preferably it should be between 10.0 and 11.0. Treatment does not reduce blood cell volume . Treatment with protein denaturing reagents increases the light scattering properties of swollen blood cells To provide swollen blood cells with the required light scattering properties similar to human eosinophils I do. Both denaturation of hemoglobin and controlled release of hemoglobin Has the effect of altering hemoglobin composition in blood cells. However Of light scattering Characterized by the controlled nature of hemoglobin in monocyte and lymphocyte analogs Marked Distinction Between Disrupted Release and Hemoglobin Degeneration in Eosinophil Analogs . In general, release of hemoglobin from blood cells reduces light scattering and clarity of blood cells. I will let you. Hemoglobin denaturation in blood cells may increase blood cell light scattering. Would.   A preferred method of preparing eosinophil analogs is to prime the pool of red blood cells with an aqueous serum substance. Process, swell red blood cells, denature hemoglobin in red blood cells, and red blood cells Fixing. As the skilled person will understand, before using serum substances Select an appropriately sized red blood cell that does not require the required amount of swelling. Producing a control product that is capable falls within the scope of this method. this In such cases, this method denatures hemoglobin in red blood cells and To simulate the light scattering properties of Fixing the red blood cells to be resistant to degradation by the decomposing reagent . As such, processed erythrocytes have light scattering and volume properties similar to human leukocytes Will have. However, if the red blood cells do not swell to some degree, Is not spherical in nature, so the standard deviation of light scattering does not fall within the boundaries of the largest cell population Will. Addition of a sphering agent can eliminate this problem.   Swelling red blood cells, releasing hemoglobin from red blood cells, releasing hemoglobin Denatures and contracts red blood cells by methods known to those skilled in the art, By using a combination of the processing steps disclosed in D. can be used in a novel method of diagnosing the cause of dysfunction of C . Multiple different physical parameters of volume, RF magnitude, transparency and light scattering A method is provided for designing analogs having. More specifically, red blood cells Shrinkage and swelling affect all of the above parameters, Changes in hemoglobin can affect clarity and light scattering properties.   The suspending media disclosed herein are also known in other arts. Used with leukocyte analogs prepared by certain methods. One such Another method simulates five subpopulations of leukocytes as described in Example 5. To fix human leukocytes.   The control cell control product may be prepared by any method known in the art or Is one or more leukocyte analogs prepared by any of the foregoing methods Can be included. The leukocyte analog can be in any suitable medium, for example, phosphate buffered saline. Saline and US Pat. No. 4,213,876, US Pat. No. 4,299,72. 6, U.S. Pat. No. 4,358,394 and U.S. Pat. No. 3,873,467. Can be stored in the medium described in detail above.   The following specific example is disclosed in U.S. Pat. No. 4,299,726.   Stabilizing medium that provides long-term stability to red blood cells-preferred formulation     Estimated volume Liter formula 1. 500 ml of distilled water 2. Propyl paraben 0.3-1.0 g 3. Methyl paraben 0.5-1.0 g 4. Procaine hydrochloride 0.1-0.5g 5. Deoxycholic acid 0.1-0.9g 6. Lactose 10.0-50.0g 7. Actidione 0.1-0.6g 8. Trisodium citrate 2HTwoO 3.0-8.0 g 9. Citric acid 1HTwoO 0.3-0.9g 10. Sodium dihydrogen phosphate 1HTwoO 0.8-2.5g 11. Fenergan hydrochloride 0.1-1.0 g 12. Colistimate, sodium 0.2-0.9g 13. Penicillin G, sodium 0.5 × 106~ 3x                                                 106unit 14． Kanamycin sulfate 0.2-0.8g 15. Neomycin sulfate 0.2-1.0 g 16.5'-AMP 0.4-1.0 g 17． Adenine 0.2-0.8g 18. Inosine 0.4-1.0g 19. Dihydrostreptomycin sulfate 0.2-1.0 g 20. Tetracycline hydrochloride 0.2-1.0 g 21. 30% bovine albumin 100-350 ml 22. Distilled water 1 liter   Many of the chemicals listed above are commercially known by several names. And the given name is Merck Index, 7th edition (1989), Merck Index and Co. , Inc. Common names listed in Raway, NJ It is.   When producing the control product, the supernatant fluid is removed from the leukocyte analog and then Resuspend the leukocyte analog in the suspension medium. A preferred suspending medium is a plasma substance. An aqueous solution. As defined herein, an aqueous solution of a plasma substance is Combination of serum substances (as defined above), serum substances and plasma proteins And aqueous solutions of the mixtures thereof. Further in this specification As defined, plasma protein is one or more contained in plasma It comprises two or more proteins. Preferably, such a plasma protein is Albumin, lipoproteins, globulin, fibrinogen, and mixtures thereof The compound. More preferably, the plasma substance is cholesterol, cholesterol Luster, lipoprotein cholesterol, lipoprotein cholesterol Stele, cholesterol combined with phospholipids, cholesterol combined with albumin , Cholesterol ester combined with albumin, liposome combined with phospholipid Lipoprotein cholesterol combined with protein cholesterol and albumin And mixtures thereof.   Confirmation of the practicality of plasma substances for lysis of red blood cells in saponin-based lysis systems To demonstrate, an aqueous plasma substance is added to the washed red blood cells. Aqueous solution is phosphate buffered It comprised 3% plasma material in saline. The results are as follows: Sample Plasma substance Lysis 1. With human albumin 2. Albumin without fatty acids 3. Sample 2 with lipoprotein cholesterol Yes 4. Bovine serum albumin None 5. Sample 4 with lipoprotein cholesterol Yes 6. With albumin-bound cholesterol 7. With monomeric albumin 8. Bovine serum albumin, stable stabilized No 9. Sample 8 with lipoprotein cholesterol Yes 10. With polymer-enhanced bovine serum albumin 11. With human albumin 12. With pork albumin 13. US Patent No. 4,299,726 Medium None 14． Sample 13 with lipoprotein cholesterol Yes 15. No cholesterol bound to surfactant 16. No phosphate buffered saline (PBS) 18. Without lecithin 19. With PBS with lipoprotein cholesterol Yes   From the above test results, the addition of plasma substance to washed red blood cells Was determined to allow for dissolution of Albumin is in phase with red blood cells and saponins It is believed that they interact to carry out the dissolving action. However, washed red blood cells and And bovine serum albumin with other components, such as U.S. Pat. No. 4,299,726. Albumin does not cause dissolution when combined with those disclosed in US Pat. However, when lipoprotein cholesterol is added, dissolution occurs. Moreover, when lipoprotein cholesterol is added to PBS, dissolution takes place. You.   When using leukocyte analogs prepared from red blood cells as described above, plasma substances Is added to the hematological composition at least 12 hours before use in the device. It is preferred to add. A human capable of lysing one or more leukocyte analogs Single multi-analysis reference blood cells for instruments that use lysis reagents in combination with red blood cells When preparing the control product, the aqueous solution of the plasma Most preferably, it comprises. A suitable example of the most preferred plasma substance is U.S. Pat. No. 4,290,774 (Miles, Inc.). ucyteTM, which is a high density lipoprotein It is resterol. Suspension The final concentration of cholesterol in the medium depends on the blood cell count in the final product, The range is from 400 to 1,200, preferably from 600 to 1,000 mg / l.   Uses leukocyte analogs prepared by the preferred methods disclosed herein Insufficient cholesterol levels in preferred media for control products Red blood cells in reference blood cell control products are efficiently lysed when used in When using the saponin lysis reagent system, noise and No debris is present and the leukocyte analog is the size required for the lysis reaction Will have a lower average cell volume. The medium has too high a concentration of cholesterol If present, the red blood cells in the reference blood cell control product There is no noise and debris because it does not lyse the alveolar membrane.   More specifically, control products can be used with instruments, such as Coulter VCS type technology. (Which is described in U.S. Pat. No. 4,751,179). Using at least two populations of leukocytes, 1) lymphoid cells (lymphocytes) and (2) myeloid cells (neutrophils, monocytes, eosinophils and And basophils), the preferred suspending medium is weaker lysis reagent and non-fixed Red blood cells are lysed because they cause a reaction with red blood cells, but leukocyte analogs do not. It is qualitatively unaffected and allows counting of each type of leukocyte analog. Rice As taught by U.S. Pat. No. 4,751,179, lysis reagents are available in two forms. Having: (1) a lysis diluent containing saponin, which simultaneously dilutes a whole blood sample; Or diluting the red blood cells interstitially; or (2) unlysed blood diluent And a subsequent two-part system composed of a lysis reagent containing saponin.   Prior art media, such as U.S. Pat. No. 4,213,876, U.S. Pat. No. 299,726 or U.S. Pat. No. 4,358,395. When used, whites prepared by the preferred method disclosed herein Blood cell analogs are smaller than the desired volume for the targeted leukocyte population. Further details Preferably, the preferred suspending medium is a leukocyte analog (prepared from red blood cells or white blood cells) When used with the analog D. C. Volume is about target leukocyte population Within the desired range.   In a more preferred embodiment, the suspension medium further comprises the addition of a non-ionic surfactant. I mean. Surfactants have a high hydrophilic-lipophilic balance (HLB). HL B typically has a value greater than 15, more preferably greater than 17. Scripture Formally, surfactants do not adversely affect leukocyte analogs, but rather affect red blood cells. It is present in an amount effective to effect a specific lytic action. In addition, surfactants It stabilizes free cholesterol in control products, so cholesterol Does not separate into solution. As those skilled in the art will appreciate, the effective amount of surfactant But typically less than 0.5% by weight of the control product. Absent.   Suitable nonionic surfactants are alkylpolyether alcohols of the general formula Including: R—X— (Y) n —H, where R is the lipophilic chain C8-C18 do it Y is CHTwoCHTwoO- or CHTwoCHTwoCHTwoO, and n is an integer of 15 to 50 is there. Suitable commercial examples of these surfactants are Diazoopan ™ SS-83 7 (GAF Chemical C orp. ), Triton ™ X405 (Rohm and Haas), and And Plurionic FTM-127 PRILL (BASF Wyandot) te Corp. ).   While not wishing to be bound by any theory, it is preferred that erythrocytes in the suspension medium, Given the interaction between peptizers (eg, saponins) and plasma substances, ,Conceivable. More specifically, plasma substances affect cell membrane cholesterol , Cholesterol further affects leukocyte analog response to lytic reagents It is thought now. In addition, detergents can cause a lytic reaction on red blood cells. So specific and leukocyte-like with respect to the measured control parameters It is further believed that it will not have a negative effect on the body. In addition, surfactants and cells May affect cholesterol found in membranes or plasma substances More likely.   Preferred for hematological reference control products with stability up to 6 months The suspending medium contains the plasma material and any compatible fungicides and bactericides, and any Adjuvants such as purine nucleosides, bile solutes, and cholic acid derivatives, Enothiazine compounds and their salts having antihistamine properties; Minobenzoates and derivatives and their salts with aesthetic properties, as well as And aqueous solutions of sphering agents for red blood cells, or combinations thereof. 1 The species or two or more leukocyte analogs are combined to form a known lysing agent for red blood cells. Can be a single reference blood cell control product for use with The preferred suspension medium formulation is the same for all of the leukocyte analogs.   As the skilled artisan will appreciate, the suspending medium should be of sufficient tonicity to avoid lysis of the cells. Should have. The preferred formulation for the suspending medium is as follows:                                 Suspension medium     Estimated volume Liter formula 1. 500 ml of distilled water * 2. Propyl paraben 0.3-1.0 g * 3. Methyl paraben 0.5-1.0 g * 4. Procaine hydrochloride 0.1-0.5g * 5. Deoxycholic acid 0.1-0.9g * 6. Lactose 10.0-50.0g * 7. Actidione 0.1-0.6g * 8. Trisodium citrate 2HTwoO 3.0-8.0 g * 9. Citric acid 1HTwoO 0.3-0.9g * 10. Sodium dihydrogen phosphate 1HTwoO 0.8-2.5g * 11. Fenergan hydrochloride 0.1-1.0 g * 12. Colistimate, sodium 0.2-0.9g * 13. Penicillin G, sodium 0.5 × 106~ 3x                                                 106unit * 14. Kanamycin sulfate 0.2-0.8g * 15. Neomycin sulfate 0.2-1.0 g * 16.5'-AMP 0.4 to 1.0 g * 17. Adenine 0.2-0.8g * 18. Inosine 0.4-1.0g * 19. Dihydrostreptomycin sulfate 0.2-1.0 g * 20. Tetracycline hydrochloride 0.2-1.0 g * 21. 30% bovine albumin 100-350ml 22. Lipoprotein cholesterol 400-1,200mg 23. Distilled water 1 liter * Any component that is preferred to impart long term stability to red blood cells and analogs Minutes.   Manufactured control products monitor and diagnose sources of instrument malfunction Can be used for In the present invention, the problems related to To use hematological control products that can monitor and diagnose devices Was developed:         1. Melting debris and noise         2. Setting the pump volume of the instrument reagent         3. Instrument Laser Alignment         4. Setting the instrument gain         5. Flow cell mismatch in flow cell   This method is intended for testing by the operator of the instruments provided by the prior art methods. More specific than diagnostic nonspecificity or nonspecific flagging of the results Provides an indication of the type and cause of functional device dysfunction. Below, the conventional description Describes a new way to use the provided control products. Those skilled in the art will understand As such, the control product is caused by cellular debris and invalid red blood cells. It must contain lysable red blood cells to monitor for noise. This way Control of the physical properties of the control product to determine the cause of instrument malfunction Use new control parameters. These physical properties are: Selected from the group consisting of:         (1) D. C. The volume measured by the current,         (2) High frequency (RF) magnitude,         (3) opacity, and         (4) Light scattering.   The leukocyte population is used as an indicator of system performance. Preferably, neutrophils And a subpopulation of lymphocytes as control parameters, and Measure to determine the operation of the tool. More preferably, the neutrophil population is Used as a control parameter and measured as an indication of the operation of the system.   To determine if there is a noise problem for cell debris, Using the control parameters of Control parameters are counted In ratio (COUNT RATIO) and elapsed time (ELAPSED TIME) is there. The counting ratio is the sum of the total events recorded in the analysis during the specified elapsed time. It is a measure of the number of leukocytes in the analysis compared to the number. The elapsed time is usually seconds, The time to be measured. The ratio of leukocytes counted / total events counted is 100 %, Noise problems associated with cell debris or instrument dysfunction Is excluded.   One example using counting ratios in instruments using VCS technology is the number of leukocyte analogs. And the total count of 8192 particles obtained for a particular elapsed time. You. If this ratio is less than about 95%, an indication that noise or interference is a problem Exists. In 95%, there is an indication that noise or interference is a problem You. Certain issues are further confirmed by additional tests further described in this disclosure. Is done.   Other approaches to monitoring and diagnosing instruments for problems are Consecutive average fresh blood of the same set of statistically significant numbers of parameters for fresh blood Is to use liquid monitoring. This average is the expected value of the control parameter. Out of range, there is an early indication of instrument malfunction. Instrument dysfunction Can be further evaluated using the control products described herein .   One indication of the proper functioning of the instrument is the data on the cells measured by the instrument. Is to determine blur or noise. Excessive cell debris can result in incomplete lysis, This can be caused by changes in the reaction rate due to temperature conditions or interference with the dissolution reaction. There is. Different instrument systems have limitations on blood cell count and data storage time Therefore, excess cell debris or noise from any source is Disrupt acquisition and analysis. The causes of cell debris or noise problems are: It can contribute to several problems, including:   A. Conductivity noise due to sheath fluid and blood sample flow imbalance.   B. Lysis noise caused by improper red blood cell lysis.   C. Flow caused by partial clogging, residue clogging or other problems Noise.   Impairment of conductivity caused by mismatch between pump volumes of sample flow To determine if it is for sound. Use a calibrated container to Each of the reagents added to the liquid sample is measured. Volume determined beforehand for transferred reagents Should be in the range of the values given. If the reagent volume is not within the specified limits, Adjust the drug pump to increase or decrease the volume of dispensed reagent.   In an example of an instrument using VCS technology, the flow of lysis reagent and quench reagent Measure pump volume. Using a calibrated container, transfer each of these volumes Measure. The volume of the reagent should be within a predetermined range of values. Reagent If the volume is not within specified limits, adjust the reagent pump to increase the volume provided. Reduce.   Prepared control products containing osmotically sensitive populations of fixed blood cell analogs Is further used to monitor the pump volume of the reagent. Dissolution Changes in the volume of the dissolving reagent affect the final osmolarity of the diluted blood sample, Will affect the measured volume of the analog population. Lower osmolality Increase the measured volume of the control blood cell analog, and the higher osmolality Decrease the measured volume of the control blood cell analog. The sheath fluid is electrically Fluctuations in the pump volume of the reagent that exceed the conductivity limit required for Will produce noise in addition to changes in control cell volume.   Therefore, after the conductivity noise is minimized by the method described above, inappropriate red blood Lysis noise resulting from lysis of spheres is a known number of stabilized erythrocytes and low Tested using a control product containing both one leukocyte analog cell population Is done. If lysis is a problem, control blood cells should be from about 95% of the maximum count ratio. It will show a low counting ratio. In addition, the volume of the reagent can be adjusted by the method described above. But the kinetics of dissolution with respect to the temperature of the dissolution reaction will be affected . More specifically, if the room temperature of the laboratory equipment is 50 ° F., the noise of lysis is minimized. Lysing and quenching reagents differ from those at 90 ° F. to reduce It was discovered that a lysis reaction would be required.   In an example of a device using VCS type technology, a lysis reagent and a quench Reacts with sample to form a lysed and diluted suspension of leukocytes suitable for measurement . In a VCS-type device, the blood cells are reacted with a lysis reagent to swell the hypotonic blood cells, The erythrocytes and platelets are lysed and the erythrocyte and platelet membranes are lysed. Reaction with the quenching reagent stops swelling and lysis, and the natural size of leukocytes Initiate the process of re-equilibration of leukocytes to Due to the nature of the reaction, lysis reagents and And quench reagents can be used for both osmolarity and conductivity. Very different. The final osmolarity and conductivity of the sample stream is determined by the lysis reagent, It is proportional to the volume, osmolality and conductivity of the reagent and blood sample.   Using two control parameters, the reagent pump volume is within regulation To determine whether or not the cause of the dysfunction. Count ratio and good Monitoring of the DC average of the sphere (NEUTROPHIL DC MEAN) is based on permitting conductivity. Facilitates discrimination of pump volume changes within tolerance and beyond conductivity tolerances. Good Sphere DC average is the average value of neutrophils in the DC channel.   An approach to monitoring and diagnosing instruments for problems is that the patient's normal blood A continuous mean fresh blood monitoring of the same set of statistically significant numbers of parameters Is to use sight. This average is the expected range of the control parameters When outside, there is an early indication of instrument malfunction. Instrument dysfunction is true Further evaluations can be made using the control products described in the textbook.   The leukocyte count ratio is a known reagent expressed as the conductivity or osmolality of the dilution. Is related to the pump volume of the reagent calculated from the concentration of the reagent and the measured pump volume. Was discovered. FIG. 1 shows the dilution in the stream of the diluted blood sample to be tested. FIG. 4 represents a comparison of the leukocyte count ratio as compared to the conductivity of isolated blood samples. Shown in Figure 1 As the quenching reagent volume increases, the counting ratio increases plateau . When the quench volume increases beyond the optimal range, the counting ratio decreases substantially .   Providing proper lysis to obtain comparable Fig. 1 using control products Prepare a volume of the lysing reagent in the first volume expected to perform. Quench Preparing an excess amount of quench reagent from preparing an insufficient quench reagent Adjust to do. Que When the volume of the reagent is insufficient, the counting ratio is significantly reduced. Quench volume is As it increases, the counting ratio increases and the plateau above the optimal operating range is quenched. The volume is increased above the optimal range to substantially reduce the counting ratio. This information Once obtained, adjust the quench reagent pump to set the quench reagent in the center of the plateau. The volume of the reagent can be obtained.   After the quench volume has been adjusted, the lysis reagent pump can be readjusted. Neutrophil DC mean of control product is related to lysis reagent pump volume It was discovered. The monocyte population shows similar sensitivity to the neutrophil population. Lysis reagent Adjust the pump to correspond to the DC average of neutrophils measured before the control product Osmotic concentration. The previously measured DC average of neutrophils is the Obtained as a Say value.   FIG. 2 shows a blood sample to be analyzed after diluting a blood sample with a lysis reagent and a quenching reagent. Figure 4 shows a comparison of DC mean of neutrophils compared to osmolarity of liquid samples. Shown in Figure 2 As the osmolarity increases, the DC mean of the neutrophils of the control product Decreases.   Determine if there is a problem due to residual or partial clogging For the white time (WHITE TIME) and the date and time (DATE TIME) Are used. These two control paths Parameters facilitate the determination of these types of issues. White time is the number of leukocyte analogs And the time required for analysis. Date and time is the date when the control sample was analyzed . These two together with a control product containing a known number of leukocyte analogs The control parameters provide information on instrument operation problems. It was found that   Use the control product at least daily in the method of the invention I do. Record white time and date and time to provide meaningful information about the existence of flow problems Get. More specifically, if you plot the white time against the date and time, To determine movement trends, a two-dimensional graph of instrument movement can be obtained. .   In VCS-type instruments, another method is available for checking the flow rate of a sample. V The CS instrument provides white time and date and time for each patient's blood sample analyzed with it. Record These controls are used on a statistically significant number of patient blood samples. To monitor the history of instrument flow behavior by comparing Database can be obtained. For more information, By recording the white time and date and time for the material, It can be determined whether a partial jam has occurred. The remaining jam is Limits subsequent sample flow but does not produce detectable blood cell counts / second There is. Partial clogging reduces the flow of blood cells through the flow cell, so leukocytes May increase the time required to obtain a count.   In addition, when monitoring these parameters on patient samples, Noise affected and whether or not expected time to obtain white blood cell count And get a two-dimensional analysis to find out if debris levels interfere be able to. Excess debris is the amount of time required to obtain the specified number of leukocytes. Will reduce the amount. This two-dimensional analysis exceeds the complex multi-dimensional analysis of the prior art. Provided improvements.   Prior art methods of determining the problem due to flow cell accuracy require a priori determination. Was to determine the number of white blood cells detected during the interval. For more information Operators use specially selected fresh blood with a known number of white blood cells. , And the instrument detects white blood cells Measure the time required to get out. Leukocytes detected within time specified by instrument In that case, it was estimated that there was no flow cell problem. However, this measurement Only provided information about the instrument for a particular analysis. This measurement Did not provide meaningful information about instrument operation for an extended period . More specifically, the graph of white blood cell count / unit time is a device for that day. It only provides an instantaneous observation of the operation of. Obtain observations of instrument operation over several days In order to do so, a three-dimensional change of the results was required. Moreover, the method of the invention is known Use a control product with a certain number of blood cells, and Eliminates the need to obtain healthy blood and to determine the number of white blood cells it contains .   In addition, using the control products, the instrument laser, laser optics To determine if there is a problem using the laser or laser alignment Equipment can be monitored. Laser alignment is available for X, Y and Z It has a corresponding three dimension.   Currently set laser alignment and gain adjustment, then monitor The material used for this is microparticles of latex. Use latex particles One method is to monitor the population mean and the coefficient of variation of the latex population. However, the laser lens dusts the laser beam signal Or accumulate other debris, prior art practices have Allow for ambiguity by increasing the gain of the laser to overcome interference Was. In addition, latex particles are not responsive to reagents used in the device. Absent. In addition, the latex particles must work in scale mode on the device. Is another control product required. Latex particles can affect the operation of the instrument Requires additional work to be performed to monitor. Therefore, in the instrument Responds to reagents used and provides instructions for laser operation in instrument It is advantageous to have a single hematological control product.   X-axis alignment is the most sensitive axis, and the control product light It is determined to produce the greatest effect on the location and distribution of the scatter. X axis When properly aligned and the distribution width is minimal, the rotated light of the control product The scattering position is at a maximum. The alignment is slightly misaligned, Then, as the magnitude of the misalignment falls, The position of the control product shifts to the left, the mean decreases, and the rotated light scatter Has a wider channel distribution.   When fresh blood is analyzed and X-axis misalignment is present, leukocytes The population shifted to the left (low light scatter) and lost counted white blood cells and increased noise. Occur. When misalignment becomes more extreme, analysis of fresh blood The effect is that a subpopulation of leukocytes is immersed and loses differentiation.   Misalignments in the Y and Z axes are drawn by misalignment in the X axis. Do not show a change in the position of a population of the same type of white blood cells No. Determine if the lens is at the proper focus where the lens provides the sharpest image To determine, the Z-axis alignment was determined to be relevant. Z axis is correct If not aligned, the resulting scatter plot will show a clear distinction of leukocytes. Would not show a good cluster. More specifically, light scattering / history of DC volume In Grams, the separation of lymphocyte and monocyte populations from neutrophil populations is clear. Will not. There will be reduced separation of the light scattering peaks of the volume population. Further Specifically, there is a decrease in amplitude in individual populations and an increase in valley amplitudes between populations. Be there U.   The control product lymphocyte population provides information to determine low light scatter It has been found that a population of neutrophils provides information that determines high light scatter. this The relationship between the locations of the two populations is based on the location of the population, for example, laser alignment. (Bias) and DC, RF and LS gain (proportional) adjustment Monitor system variability that produces both ias and proportional effects.   The question of operating the laser using the use of two control parameters You can decide the title. Neutrophil RLS average (NEUTROPHIL RLS)   MEAN) and peak-to-valley ratio (PEAK TO VALLEY RATIO) Monitoring provides indication of laser movement and X and Z alignment Will do. Lymphocyte RLS mean (LYMPHOCYTE RLS MEAN ) Indicates a sensitivity similar to the neutrophil RLS mean. Neutrophil RLS average is the light scattering Average of neutrophils in the channel. Lymphocyte RLS average is the light scattering channel. Average value of lymphocytes in flannel. Mountain-to-valley ratio (PVR) is a population of neutrophils Of the rotated light scatter signals / lymphocyte and monocyte populations and neutrophil populations It is the ratio of the amplitude of the rotated light scattering signal of the formed valley.   PVR is used in a method to determine if a laser problem exists. Provide reliable quality control parameters to use. Control When using the product, the peak-to-valley ratio should meet a predetermined limit number . If the PVR satisfies or exceeds this number, the laser works optimally. Moving. More specifically, PVRs that satisfy a predetermined number are neutrophils. Shows that there is a clear segregation of the population of and the population of leukocytes and monocytes. PV If R is less than a predetermined number, the laser There is an indication that there is a problem with this.   As mentioned earlier, prior art implementations have used lasers to compensate for dirty lenses. Allowed gain increase. However, latex particles are subject to optical interference. Do not provide specific information on misadjustment of the gain of the light scattering signal when . When the gain adjustment is improperly increased, the rotation that encompasses the neutrophil RLS mean Shift of the position of the whole neutrophil population in the scattered light histogram to the right Was decided.   According to the method of the present invention, the PVR is less than the predetermined value and If the sphere RLS mean is determined to be greater than the predetermined value, the instrument will Has been shown to have problems due to mechanical interference or X-axis or Z-axis alignment You. Therefore, the technician cleans the lens, and laser alignment You will know to calibrate. In addition, the determined PVR And the neutrophil RLS mean is less than the predetermined value. If determined to be small, the instrument is not compensated for by the gain increase Has been shown to have problems due to mechanical interference or X-axis or Z-axis alignment You. Moreover, the PVR is within a predetermined range of values and the neutrophil RL If the S-mean is greater than or less than a predetermined value, Is set incorrectly. Still further, PVR has been decided in advance. The neutrophil RLS mean is less than a predetermined value and within a predetermined value. In some cases, the laser has lost power and requires replacement of the laser.   Control to determine whether the instrument is operating in accordance with the manufacturer's specifications Use of some of the role parameters and to diagnose the cause of dysfunction Over using control parameters Table 1 provides a detailed analysis and its control parameters. Meters are used to control and detect problems with the instrument system. Can be used for statistically significant values in clinical products or patient blood samples. Wear. In this table, the following abbreviations are used:         s = sensitivity for applicable instrument function         SD = standard deviation         OP = transparency         x = control product or sample measurement   Additionally, use polystyrene or other plastic beads as control products Add a single reference control product that can further demonstrate the operation of the instrument Can be prepared. For more information, see With this type of control product you can get information about the operation of the instrument it can. For example, the DC gain of latex particles is within the specified If the product has a DC average outside the specified range, there is a problem due to reagent pump volume There are instructions to do so.   When using this type of control product in appliances using VCS technology, The preceding examples show that there is a problem with the volume of the lysing or quenching reagent . More specifically, for VCS-type instruments, the DC gain of latex particles is specified. But the control product has a DC average above the manufacturer's specification Lysis reagent volume is greater than optimal, or quench reagent volume is There is an indication that it is less than the appropriate level. Still further, in the VCS example, The DC gain of the latex particles is within regulation, but the control product is If the DC average is below specified, the volume of the lysing reagent is less than the optimal level Or there is an indication that the volume of the quench reagent is greater than the optimal level .   A method for preparing a leukocyte analog for use in the method of the invention is described below. This will be described in Examples. Example 1 describes preferred reagents for treating cancer cells and It is a specific example of a technique in which the formulation may be used in the method of the invention. It should be understood that this is an example. Examples 2, 3 and 4 are alligators Specific examples of preferred reagents and techniques for treating cells of the Is merely an example of what can be used in the method of the present invention. is there. Example 5 is similar to leukocyte using human leukocyte. 5 shows an enzyme that produces five subpopulations of the body, wherein the formulation is used in a method of the invention. It should be understood that this is merely an example of what can be done. Example 6 has four white 1 shows the assembly of a blood cell population. These examples are merely illustrative and leukocyte-like It should be understood that there is provided a formulation for the body.   The reagents and / or techniques described also apply to non-cancer and alligator activities. Applicable to blood cells from objects. In accordance with this disclosure, other components and ratios may be used. Can be                                 Example 1                 Lymphocyte analogs from cancer erythrocytes.   The following describes the processing of cancer red blood cells to obtain a sorted lymphocyte analog of an animal. Specific Examples of Preferred Reagents and Recommended Specific Procedure Steps . The formulations and procedures are merely exemplary and in accordance with this disclosure It should be understood that other components, ratios and techniques can be used.                   Phosphate buffered saline (PBS)                           Liter formula   1. Monobasic sodium phosphate: 0.2 g   2. Dibasic sodium phosphate 7HTwoO: 2.0 g   3. Sodium azide: 0.1 g   4. Sodium chloride: 9.4 g   5. Make up to 1 liter with distilled water: pH approximately 7.4; osmolarity 315-34 5 mOsm / kg.                           Leukocyte hypotonic solution   1. Monobasic sodium phosphate: 0.2 g   2. Dibasic sodium phosphate 7HTwoO: 2.0 g   3. Make up to 1 liter with distilled water: pH approximately 7.8; osmolarity 15-25m Osm / kg.                                 Method   1. Select avian erythrocytes with an average cell volume range of about 140-170 fL I do. The packed avian erythrocytes are washed with phosphate buffered saline (PBS).   2. 1.0-5.0mg cholesterol in 2 × 106/ Μl blood cell count Add and incubate at room temperature for 2-6 hours.   3. Add commercial 25% glutaraldehyde product to chilled leukocyte hypotonic solution A gluta aldehyde having a glutaraldehyde content of about 0.1 to 0.8% Prepare a rualdehyde fixing reagent. Preferably, the temperature is between 2 and 8C. Gluta The preferred concentration of rualdehyde is approximately 0.35%.   4. The washed red blood cells were added to the measured amount of fixative from step 3 at a 1:35 dilution. And add. Transfer to a closed container and store at 2-8 ° C for 18-24 hours Rotate slowly. The reduction in hemoglobin content was calculated to be approximately 60% by weight. You.   5. Remove the supernatant fluid, wash the blood cells several times with PBS, and add the appropriate storage solution. Resuspend in   6. In order to leave the lymphocyte analog alone, wash and fix blood cells Resuspend in a suspension medium and adjust the concentration to remove human lymphocytes in normal human blood. Simulate the concentration.   7. Other blood for multi-hematological parameters for control products Desired analogs in biological compositions and multi-parameter hematological control products Washed and fixed blood cells are added to the suspension medium of the present invention, and the blood cells are counted by lymphocytes. Suitable for measuring the ratio of That's right.   8. Store fixed blood cells for more than 6 months using appropriate stabilizers can do.   Following the above example, but using other types of mammalian red blood cells, comparable results are obtained. Fruit is obtained.                                 Example 2               Monocyte analogs from alligator red blood cells   The following is a preferred method for processing alligator red blood cells to obtain monocyte analogs. Specific examples of preferred reagents and recommended specific procedure steps. Formulation And procedures are merely exemplary, and other components may be used in accordance with this disclosure in the present invention. , Ratios and techniques can be used.                               Monocyte hypotonic solution   1. Monobasic sodium phosphate: 0.1 g   2. Dibasic sodium phosphate: 1.0 g   3. Make up to 1 liter with distilled water: pH approximately 7.8; osmolality 5-15 mO sm / kg. Wash solution for blood cells (PBS), as described in Example 1 It is.                                 Method   1. Alligator red blood with an average cell volume range of about 350-450 fL Select the sphere. The packed alligator red blood cells are washed with PBS.   2. 1.0-5.0 mg cholesterol in 1 × 106/ Μl blood cell count Add and incubate at room temperature for 3-5 hours.   3. Monocyte hypotonic solution cooled commercial 25% glutaraldehyde product By adding to the solution, a glutaraldehyde content of about 0.1-0.8% is obtained. A glutaraldehyde fixation reagent is prepared. Preferably, the temperature is between 2 and 8 ° C. You. The preferred concentration of glutaraldehyde is approximately 0.15%.   4. The washed red blood cells were added to the measured amount of fixative from step 3 at a dilution of 1:50. And add. Transfer to a sealed container and allow it to stand at room temperature for 18-24 hours. Rotate. The reduction in hemoglobin content is calculated to be approximately 40% by weight.   5. Remove the supernatant fluid, wash the blood cells several times with PBS, and add the appropriate storage solution. Resuspend in   6. In order to leave the monocyte analog alone, the washed and fixed blood cells are suspended according to the present invention. Resuspend in medium and adjust the concentration to achieve the concentration of human monocytes in normal human blood. To emulate.   7. Other blood for multi-hematological parameters for control products Desired analogs in biological compositions and multi-parameter hematological control products Blood cells washed and fixed in the suspension medium of the present invention to an appropriate concentration for monocyte measurement. Then, add.   8. Store fixed blood cells for more than 6 months using appropriate stabilizers can do.                                 Example 3             Eosinophil analogs from alligator red blood cells   The following is for processing alligator red blood cells to obtain eosinophil analogs. Specific examples of preferred reagents and recommended specific procedure steps. Formulation And techniques are merely exemplary and in accordance with this disclosure in the present invention, other components may be used. It should be understood that minutes, ratios and techniques can be used.                             Monocyte hypotonic solution   1. Monobasic sodium phosphate: 0.32 g   2. Dibasic sodium phosphate: 8.08 g   3. Make up to 1 liter with distilled water: pH approximately 8.0; osmolality 75-85 m Osm / kg.                 Eosinophil hemoglobin denaturation treatment solution   1. Dimethyl dicoco ammonium chloride: 2.5 g   2. Tris (hydroxymethyl) aminomethane: 6.06 g (organic buffer )   3. Make up to 1 liter with distilled water: pH approximately 10.5.                         Eosinophil post-treatment washing solution   1. Polyoxyethylated alkylphenol: 5 g (Dazopan ™ SS) -837, GAF Chemical Corporation)   2. Make up to 1 liter with distilled water.   Wash solution for blood cells (PBS), as described in Example 1.                                 Method   1. Alligator red blood with an average cell volume range of about 400-500 fL Select the sphere. The packed alligator red blood cells are washed with PBS.   2. 0.25-1.25 mg of cholesterol in 1 × 106/ Μl hemocytometer Add to the number and incubate at room temperature for 2-5 hours.   3. Adding commercial 25% glutaraldehyde product to eosinophil hypotonic solution Thus, glutaraldehyde having a glutaraldehyde content of about 0.1-0.8% Prepare the hide fixation reagent. The preferred concentration of glutaraldehyde is around 0.2% is there.   4. The washed red blood cells were added to the measured amount of fixative from step 3 at a dilution of 1:50. And add. Transfer to a sealed container and allow it to stand at room temperature for 18-24 hours. Rotate.   5. Remove the supernatant fluid and wash the blood cells several times with PBS.   6. The washed erythrocytes were diluted 1:10 in the eosinophil hemoglobin denaturation solution. And add. Transfer to a closed container and slowly simmer at room temperature for 2-4 hours Rotate.   7. Remove supernatant fluid and wash blood cells several times with eosinophil post-treatment wash solution The eosinophil hemoglobin denaturation treatment solution is removed. It is then suspended in a suitable storage solution. Cloudy.   8. In order to leave the eosinophil analogue alone, the washed and fixed blood cells were suspended according to the present invention. Human eosinophil concentration in normal human blood by resuspension in turbid medium and adjusting the concentration To simulate.   9. Other hematological compositions and multi-pack Suspension medium of the invention having the desired analogue in the hematology control product of the parameter Blood cells washed and fixed in the substance are added at a concentration suitable for measuring eosinophils.   10. Store the fixed blood cells for more than 6 months using appropriate stabilizers. Can be stored.                                 Example 4             Neutrophil analogs from alligator red blood cells   The following is for processing alligator red blood cells to obtain neutrophil analogs. Specific examples of preferred reagents and recommended specific procedure steps. Formulation And techniques are merely exemplary and in accordance with this disclosure in the present invention, other components may be used. It should be understood that minutes, ratios and techniques can be used.                           Neutrophil hypotonic solution   1. Monobasic sodium phosphate: 0.23 g   2. Dibasic sodium phosphate: 5.32 g   3. Make up to 1 liter with distilled water: pH approximately 8.0; osmolarity 45-65 m Osm / kg.   Wash solution for blood cells (PBS), as described in Example 1.                                 Method   1. Alligator red blood with an average cell volume range of about 400-500 fL Select the sphere. The packed alligator red blood cells are washed with PBS.   2. Adding commercial 25% glutaraldehyde product to neutrophil hypotonic solution Thus, glutaraldehyde having a glutaraldehyde content of about 0.1-0.8% Prepare the hide fixation reagent. The preferred concentration of glutaraldehyde is around 0.4% is there.   3. The washed red blood cells were added to the measured amount of fixative from step 3 at a dilution of 1:50. And add. Transfer to a sealed container and allow it to stand at room temperature for 18-24 hours. Rotate.   4. Remove the supernatant fluid, wash the blood cells several times with PBS, and add the appropriate storage solution. Resuspend in   5. The loaded blood cells are added to the non-ionic detergent solution. The solution is a donor Tends to normalize blood cell volume. This solution was prepared in 0.1 liter of distilled water. 5 g of octylphenoxypolyethoxyethanol having an HLB of approximately 13.5 (Triton ™ X-100, Rohm and Haas Co.) It becomes.   6. Remove the supernatant fluid, wash the blood cells several times with PBS and place in a suitable storage solution. Resuspend.   7. In order to leave the neutrophil analog alone, the washed and fixed blood cells are suspended according to the present invention. Human neutrophil concentration in normal human blood, resuspended in turbid medium and adjusted for concentration To simulate.   7. Other hematological compositions and multi-pack Suspension medium of the invention having the desired analogue in the hematology control product of the parameter Blood cells washed and fixed in the substance are added at a concentration suitable for measuring neutrophils.   8. Store fixed blood cells for more than 6 months using appropriate stabilizers can do.                                 Example 5           5 subpopulations of leukocyte analogs from human leukocytes   1. Whole blood in dextran (100,000-500,000 molecular weight) solution Add at a 1:20 dilution and settle by gravity for 1-3 hours.   2. Remove supernatant containing white blood cells, platelets and some residual red blood cells.   3. Centrifuge the product of step 2 at 300 RCF or less for about 10 minutes. platelet Aspirate and resuspend the white blood cell buttons, residual red blood cells, and blood cells Leave the serum.   4. A suitable lysing agent, such as water, is added to lyse the red blood cells from the white blood cells.   5. Centrifuge the product of step 4 and remove the supernatant, leaving packed leukocytes. filling The leukocytes obtained are resuspended in approximately equal volumes of saline.   6. Leukocytes are treated with a suitable isotonic fixation solution such as 5% formaldehyde and And 1:10 dilution in 95% PBS (% by volume) Add, transfer to a closed container, and slowly cool the container at room temperature for 18-30 hours. Rotate.   7. Glutaraldehyde solids with approximately 0.1% glutaraldehyde concentration Add constant solution to pool at 1: 1 dilution and continue fixation for another 8-12 hours .   8. Remove the supernatant fluid, wash the blood cells several times with PBS, and add the appropriate storage solution. Resuspend in   9. To leave the assembly of the five subpopulations of leukocyte analogs alone The washed and fixed blood cells are resuspended in the suspension medium of the present invention, and the concentration is adjusted to normal. Simulate the concentration of human leukocytes in human blood.   10. For other hematological compositions and products, Suspension of the Invention Having the Desired Analogue in the Parameter Hematology Control Product Washed and fixed blood cells are added to the medium, and the blood cell count is Appropriate.   11. Store the fixed blood cells for more than 6 months using appropriate stabilizers. Can be stored.                                   Example 6   Subsystem for simulating the targeted composition of leukocytes in normal human blood samples In the assembly, the following amounts of the individual components are used:                                                       Stock solution 0.150 L Example 1 Lymphocyte 500 × 10Three/ Μl 0.040L Example 2 Monocyte 500 × 10Three/ Μl 0.030 L Example 3 Eosinophil 500 × 10Three/ Μl 0.280L Example 4 Neutrophil 500 × 10Three/ Μl 0.500L Diluent Phosphate buffered saline   In the final assembly of the four leukocyte populations, the supernatant fluid was removed and then Moduc with a final concentration of 1.0 liter of 800mg cholesterol Resuspend the blood cells in an aqueous solution of yte ™.   The assembly is stored for up to about 6 months, with the addition of known suitable stabilizers. Can be   Adjust the ratio and total blood cell count for the leukocyte population to Pathological conditions as well as normal conditions can be described. These compositions are particularly Control products and tools for automated particle analyzers that use the Coulter principle And is also effective in calibrated products. In addition, control latex particles. A single component that can be added to the roll product to further direct the operation of the instrument Troll products can be formed.   The final red blood cell, white blood cell and platelet counts, and hemoglobin-containing The raw and untreated ratios are such that the amount and hematocrit fall within the desired range. Human red blood cells, simulated white blood cells, and stabilized or simulated blood A platelet suspension can be added.   Stabilized platelets are prepared by methods known in the art. Yes Effective methods include:   1. In aqueous solutions maintained at pre-selected ranges of pH and osmolarity , Iodoacetamide and iminodiacetic acid or their solutes, and compatibility Bacteriostatic combinations are described in U.S. Pat. No. 4,405,719.   2. Linearity of glutaraldehyde and certain isomers at a concentration of 0.1-5% Nonionic, a mixture of alcohol ethoxylates Fixative-stabilizing compositions containing surfactants, U.S. Pat. No. 4,389,490. In more detail.   3. It must have a size range and volume stability close to that of human platelets. Human blood comprising optionally stabilized, bound and combined red blood cells Platelet analogs are described in U.S. Pat. No. 4,264,470.   Varying the value for each of the hematological parameters, It can represent an abnormally high state. Leukocyte count in normal blood is 5,000-1 1,000 / microliter (μl) and the lymphocyte value is 20-40% Yes, the value of mononuclear cells is less than 10%, and the value of granulocytes is 60-80%. The value for eosinophils is approximately 5% and for basophils is less than approximately 2%. Red blood cells The normal range for human blood is between 4,000,000 and 5,000,000. 0 blood cells / μl. Normal hemoglobin values are 12-16 g / 100 ml . The term "hematocrit" is the ratio of the volume of packed red blood cells / the volume of white blood cells. Is defined as The normal ratio in humans is about 45%. Average blood cell value is filled red Volume of blood cells (ml / liter of blood) / red blood cells (106/ Μl). flat Hemoglobin hemoglobin concentration is the mean of hemoglobin per 100 ml of packed red blood cells. It is an index (%) indicating the average weight. The mean blood cell hemoglobin is determined by the hemoglobin content ( g / l) / red blood cells (106/ Μl).   In the above specification, the present invention has been described in detail for the purpose of illustration. Various changes may be made in the details herein without departing from God and scope. Changes are possible.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １． ａ． 器具の中に血液学的コントロール製品を入れる、ここで前記コン トロール製品は少なくとも１種の白血球類似体を含有し、前記白血球類似体は血 液学的試験手法において使用される溶解試薬による分解に対して耐性であるよう に処理された血球から誘導されており、そして前記類似体は器具の動作において 使用される試薬に対して応答性に止まる、そして ｂ． 器具における前記コントロール製品の空間的位置を分析する、ここで前 記分析は、 （１）Ｄ．Ｃ．体積、 （２）ＲＦ大きさ、 （３）不透明度、および （４）光散乱、 からなる群の少なくとも１つのメンバーから選択される、 ｃ． 前記器具が前記分析からの機能障害を有するかどうかを決定する、そし て ｄ． 器具の機能障害の原因を決定するために前記分析の結果を報告する、 ことを含んでなる血液学的コントロール製品を使用する方法。 ２． 前記コントロール製品が少なくとも１種の好中球類似体を含んでなる、 請求項１に記載の方法。 ３． 前記物理的性質の測定がＤＣ平均、ＤＣ標準偏差、ＲＬＳ平均、ＲＬＳ 標準偏差、不透明度の平均、不透明度の標準偏差、および計数比、山対谷の比、 白色時間および日時およびそれらの組み合わせから成る群より選択される、請求 項１に記載の方法。 ４． 前記コントロール製品が溶解可能な赤血球の添加をさらに 含んでなる、請求項３に記載の方法。 ５． 血液学的試料の中に存在する未固定の赤血球を溶解するために有効な量 で溶解試薬を添加することをさらに含んでなる、請求項４に記載の方法。 ６． 前記器具の機能障害が器具のゲイン、デブリおよび雑音、器具のポンプ 体積および器具のレーザーアラインメントおよびそれらの組み合わせから成る群 より選択される、請求項５記載の方法。 ７． 前記ポンプ体積が溶解試薬のポンプ体積を含んでなる、請求項６に記載 の方法。 ８． 前記ポンプ体積がクエンチ試薬の体積を含んでなる、請求項６に記載の 方法。 ９． 前記器具のレーザーアラインメントがＸ軸のアラインメントを含んでな る、請求項６に記載の方法。 １０． 前記コントロール製品が少なくとも３つの異なる白血球類似体を含ん でなる、請求項３に記載の方法。 １１． 前記コントロール製品が少なくとも４つの異なる白血球類似体を含ん でなる、請求項１０に記載の方法。 １２． 前記血液学的コントロール製品が血漿物質の水溶液をさらに含んでな る、請求項１１に記載の方法。 １３． 前記血漿物質がコレステロール、コレステロールエステル、リポタン パク質コレステロール、リポタンパク質コレステロールエステル、リン脂質と結 合したコレステロール、アルブミンと結合したコレステロール、アルブミンと結 合したコレステロールエステル、リン脂質と結合したリポタンパク質コレステロ ール、アルブミンと結合したリポタンパク質コレステロールおよびそれらの混合 物から成る群より選択される、請求項１２に記載の方法。 １４． 前記血液学的コントロール製品が少なくとも好中球類似 体およびリンパ球類似体を含んでなる、請求項２に記載の方法。 １５． 前記血液学的コントロール製品がラテックス粒子とさらに結合してい る、請求項２に記載の方法。 １６． ａ． 器具の中に血液学的コントロール製品を入れる、ここで前記コ ントロール製品は少なくとも１種の白血球類似体を含有し、前記白血球類似体は 血液学的試験手法において使用される溶解試薬による分解に対して耐性であるよ うに処理された血球から誘導されており、前記類似体は器具の動作に対して応答 性に止まり、そしてここで前記コントロール製品はヒト白血球の少なくとも１つ の物理的性質をシミュレートし、前記性質は、 （１）Ｄ．Ｃ．電流により測定された体積、 （２）高い周波数（ＲＦ）の大きさ、 （３）不透明度、および （４）光散乱、 からなる群から選択される、 ｂ． 前記コントロール製品の前記物理的性質を測定する、そして ｃ． 器具の機能障害の原因を診断するために器具における前記測定の結果を 報告する、ことを含んでなる、少なくとも１つの白血球類似体の集団を含有する 血液学的コントロール製品を使用する方法。 １７． 前記コントロール製品が少なくとも１種の好中球類似体を含んでなる 、請求項１６に記載の方法。 １８． 前記物理的性質の測定がＤＣ平均、ＤＣ標準偏差、ＲＬＳ平均、ＲＬ Ｓ標準偏差、不透明度の平均、不透明度の標準偏差、および計数比、山対谷の比 、白色時間および日時およびそれらの組み合わせから成る群より選択される、請 求項１６に記載の方法。 １９． 前記コントロール製品が溶解可能な赤血球の添加をさらに含んでなる 、請求項１８に記載の方法。 ２０． 血液学的試料の中に存在する未固定の赤血球を溶解するために有効な 量で溶解試薬を添加することをさらに含んでなる、請求項１９に記載の方法。 ２１． 前記器具の機能障害が器具のゲイン、デブリおよび雑音、器具のポン プ体積および器具のレーザーアラインメントおよびそれらの組み合わせから成る 群より選択される、請求項２０記載の方法。 ２２． 前記ポンプ体積が溶解試薬のポンプ体積を含んでなる、請求項２１に 記載の方法。 ２３． 前記ポンプ体積がクエンチ試薬の体積を含んでなる、請求項２１に記 載の方法。 ２４． 前記器具のレーザーアラインメントがＸ軸のアラインメントを含んで なる、請求項２１に記載の方法。 ２５． 前記コントロール製品が少なくとも３つの異なる白血球類似体を含ん でなる、請求項１８に記載の方法。 ２６． 前記コントロール製品が少なくとも４つの異なる白血球類似体を含ん でなる、請求項２５に記載の方法。 ２７． 前記血液学的コントロール製品が血漿物質の水溶液をさらに含んでな る、請求項２６に記載の方法。 ２８． 前記血漿物質がコレステロール、コレステロールエステル、リポタン パク質コレステロール、リポタンパク質コレステロールエステル、リン脂質と結 合したコレステロール、アルブミンと結合したコレステロール、アルブミンと結 合したコレステロールエステル、リン脂質と結合したリポタンパク質コレステロ ール、アルブミンと結合したリポタンパク質コレステロールおよびそれらの混合 物から成る群より選択される、請求項２７に記載の方法。 ２９． 前記血漿物質の水溶液が血球体積および光散乱の参照点に関して前記 白血球類似体の各々の区別を可能とするために有効量で存在する、請求項２８に 記載の方法。 ３０． 前記血液学的コントロール製品がラテックス粒子とさらに結合してい る、請求項１７に記載の方法。 ３１． 前記血液学的コントロール製品が少なくとも好中球類似体およびリン パ球類似体を含んでなる、請求項１７に記載の方法。 ３２． ａ． ある量の患者の血液試料の中の白血球の下位集団の空間的位置 を分析して、測定したパラメーターの統計学的に有意な値を獲得する、ここで前 記分析は、 （１）Ｄ．Ｃ．体積、 （２）ＲＦ大きさ、 （３）不透明度、および （４）光散乱、 からなる群の少なくとも１つのメンバーから選択される、 ｂ． 器具の機能障害の原因を診断するために器具における前記測定の結果を 報告する、ことを含んでなる品質をコントロールする方法。 ３３． 前記機能障害が溶解のデブリおよび雑音、器具の試薬のポンプ体積の 設定、器具のレーザーアラインメント、器具のゲインの設定、流速の不一致およ びそれらの組み合わせから成る群より選択される、請求項３２記載の方法。 ３４． 患者の血液試料が溶解試薬に暴露されている、請求項３２に記載の方 法。 ３５．測定されたパラメーターが山対谷の比、計数比、白色時間、日時、ＤＣ 平均、ＤＣ標準偏差、不透明度の平均、不透明度の標 準偏差、ＲＬＳ平均、ＲＬＳ標準偏差およびそれらの組み合わせから成る群より 選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項３２に記載の方法。 ３６．少なくとも２つの測定されたパラメーターを使用し、そして測定された パラメーターの１つが白血球集団のＤＣ平均である、請求項３５に記載の方法。 ３７．前記ポンプ体積が溶解試薬のポンプ体積を含んでなる、請求項３３に記 載の方法。 ３８． 前記ポンプ体積がクエンチ試薬の体積を含んでなる、請求項３３に記 載の方法。 ３９． 前記器具のレーザーアラインメントがＸ軸のアラインメントを含んで なる、請求項３３に記載の方法。 ４０． ａ． 少なくとも１種の白血球類似体、ここで前記白血球類似体は血 液学的試験手法において使用される溶解試薬による分解に対して耐性であるよう に処理された血球から誘導されており、そして前記類似体は器具の動作において 使用される試薬に対して応答性に止まる、および ｂ． ラテックス粒子、 を含んでなる血液学的コントロール製品。 ４１． 前記白血球類似体が少なくとも１種の好中球類似体を含んでなる、請 求項４０に記載の血液学的コントロール製品。 ４２． 前記コントロール製品が溶解可能な赤血球の添加をさらに含んでなる 、請求項４０に記載の血液学的コントロール製品。 ４３． 前記コントロール製品が少なくとも３つの異なる白血球類似体をさら に含んでなる、請求項４２に記載の血液学的コントロール製品。 ４４． 前記コントロール製が少なくとも４つの異なる白血球 類似体をさらに含んでなる、請求項４３に記載の血液学的コントロール製品。 ４５． 前記コントロール製品が血漿物質の水溶液をさらに含んでなる、請求 項４４に記載の血液学的コントロール製品。 ４６． 前記血漿物質がコレステロール、コレステロールエステル、リポタン パク質コレステロール、リポタンパク質コレステロールエステル、リン脂質と結 合したコレステロール、アルブミンと結合したコレステロール、アルブミンと結 合したコレステロールエステル、リン脂質と結合したリポタンパク質コレステロ ール、アルブミンと結合したリポタンパク質コレステロールおよびそれらの混合 物から成る群より選択される、請求項４５に記載の血液学的コントロール製品。[Claims]   1. a. Place the hematology control product in the device, where the The troll product contains at least one leukocyte analog, wherein the leukocyte analog is Appears to be resistant to degradation by lysis reagents used in liquid testing procedures Is derived from blood cells that have been processed to Remains responsive to the reagents used, and   b. Analyze the spatial location of the control product in the instrument, where The analysis is         (1) D. C. volume,         (2) RF magnitude,         (3) opacity, and         (4) light scattering, Selected from at least one member of the group consisting of:   c. Determining whether the device has a dysfunction from the analysis; and hand   d. Report the results of the analysis to determine the cause of the instrument dysfunction; Using a hematological control product comprising:   2. The control product comprises at least one neutrophil analog; The method of claim 1.   3. The measurement of the physical property is DC average, DC standard deviation, RLS average, RLS Standard deviation, opacity average, opacity standard deviation, and count ratio, peak-to-valley ratio, Claims selected from the group consisting of white time and date and time and combinations thereof Item 1. The method according to Item 1.   4. The control product further comprises the addition of lysable red blood cells. 4. The method of claim 3, comprising:   5. Effective amount to lyse unfixed red blood cells present in hematological samples 5. The method of claim 4, further comprising adding a lysis reagent at.   6. Impairment of the instrument is caused by instrument gain, debris and noise, instrument pump Group consisting of laser alignment of volumes and instruments and their combinations The method of claim 5, wherein the method is selected from:   7. 7. The pump volume of claim 6, wherein the pump volume comprises a lysis reagent pump volume. the method of.   8. 7. The method of claim 6, wherein the pump volume comprises a quench reagent volume. Method.   9. The laser alignment of the instrument does not include an X-axis alignment. The method of claim 6, wherein   10. The control product comprises at least three different leukocyte analogs 4. The method of claim 3, wherein   11. The control product comprises at least four different leukocyte analogs The method of claim 10, wherein   12. The hematology control product further comprises an aqueous solution of a plasma substance. The method of claim 11, wherein   13. The plasma substance is cholesterol, cholesterol ester, lipotan Binds with protein cholesterol, lipoprotein cholesterol ester, and phospholipid Combined cholesterol, cholesterol bound to albumin, bound to albumin Cholesterol esters combined, lipoprotein cholesterol combined with phospholipids , Lipoprotein cholesterol bound to albumin and their mixtures 13. The method of claim 12, wherein the method is selected from the group consisting of:   14． The hematological control product is at least neutrophil-like 3. The method of claim 2, comprising a body and a lymphocyte analog.   15. The hematological control product is further associated with latex particles. The method of claim 2, wherein   16. a. Place the hematology control product in the device, where The control product comprises at least one leukocyte analog, wherein the leukocyte analog is Resistant to degradation by lysis reagents used in hematological test procedures Derived from blood cells that have been processed as described above, and the analog responds to instrument movement. The control product is at least one of human leukocytes Simulating the physical properties of         (1) D. C. The volume measured by the current,         (2) High frequency (RF) magnitude,         (3) opacity, and         (4) light scattering, Selected from the group consisting of   b. Measuring the physical properties of the control product; and   c. The results of the above measurements on the instrument are used to diagnose the cause of the instrument dysfunction. Containing at least one population of leukocyte analogs, comprising How to use hematological control products.   17． The control product comprises at least one neutrophil analog 17. The method of claim 16, wherein:   18. The measurement of the physical property is DC average, DC standard deviation, RLS average, RL S standard deviation, opacity average, opacity standard deviation, and count ratio, peak-to-valley ratio Selected from the group consisting of: white time, date and time, and combinations thereof. The method according to claim 16.   19. The control product further comprises the addition of lysable red blood cells. The method of claim 18, wherein:   20. Effective for lysing unfixed red blood cells present in hematological samples 20. The method of claim 19, further comprising adding a lysis reagent in an amount.   21. Impairment of the instrument may indicate instrument gain, debris and noise, Consist of laser alignment of instrument volumes and instruments and their combinations 21. The method of claim 20, wherein the method is selected from a group.   22. 22. The method of claim 21, wherein the pump volume comprises a lysing reagent pump volume. The described method.   23. 22. The method of claim 21, wherein the pump volume comprises a quench reagent volume. The method described.   24. The laser alignment of the instrument includes an X-axis alignment 22. The method of claim 21, comprising:   25. The control product comprises at least three different leukocyte analogs 19. The method according to claim 18, wherein   26. The control product comprises at least four different leukocyte analogs 26. The method of claim 25, wherein   27. The hematology control product further comprises an aqueous solution of a plasma substance. 27. The method of claim 26, wherein   28. The plasma substance is cholesterol, cholesterol ester, lipotan Binds with protein cholesterol, lipoprotein cholesterol ester, and phospholipid Combined cholesterol, cholesterol bound to albumin, bound to albumin Cholesterol esters combined, lipoprotein cholesterol combined with phospholipids , Lipoprotein cholesterol bound to albumin and their mixtures 28. The method of claim 27, wherein the method is selected from the group consisting of:   29. The aqueous solution of the plasma substance is referred to as a blood cell volume and a light scattering reference point. 29. The method according to claim 28, wherein the leukocyte analog is present in an effective amount to allow differentiation of each of the leukocyte analogs. The described method.   30. The hematological control product is further associated with latex particles. The method of claim 17, wherein   31. The hematological control product comprises at least a neutrophil analog and phosphorus. 20. The method of claim 17, comprising a peptidomimetic.   32. a. Spatial location of leukocyte subpopulations in a volume of a patient's blood sample To obtain a statistically significant value of the measured parameter, where The analysis is         (1) D. C. volume,         (2) RF magnitude,         (3) opacity, and         (4) light scattering, Selected from at least one member of the group consisting of:   b. The results of the above measurements on the instrument are used to diagnose the cause of the instrument dysfunction. A method of controlling quality comprising reporting.   33. The dysfunction is the debris and noise of lysis, the pump volume of the reagents of the instrument. Settings, instrument laser alignment, instrument gain settings, flow rate mismatch and 33. The method of claim 32, wherein the method is selected from the group consisting of:   34. 33. The method of claim 32, wherein the patient's blood sample has been exposed to a lytic reagent. Law.   35. The measured parameters are peak-to-valley ratio, count ratio, white time, date and time, DC Average, DC standard deviation, average opacity, opacity indicator From the group consisting of quasi-deviation, RLS mean, RLS standard deviation and combinations thereof 33. The method of claim 32, wherein the at least one member is selected.   36. Using at least two measured parameters and measuring 36. The method of claim 35, wherein one of the parameters is a DC mean of the leukocyte population.   37. 34. The method of claim 33, wherein the pump volume comprises a lysing reagent pump volume. The method described.   38. 34. The method of claim 33, wherein the pump volume comprises a quench reagent volume. The method described.   39. The laser alignment of the instrument includes an X-axis alignment 34. The method of claim 33, wherein   40. a. At least one leukocyte analog, wherein said leukocyte analog is blood Appears to be resistant to degradation by lysis reagents used in liquid testing procedures Is derived from blood cells that have been processed to Remains responsive to the reagents used, and   b. Latex particles, A hematological control product.   41. The leukocyte analog comprises at least one neutrophil analog; 41. The hematological control product of claim 40.   42. The control product further comprises the addition of lysable red blood cells. 41. The hematological control product of claim 40.   43. The control product further exposes at least three different leukocyte analogs. 43. The hematological control product of claim 42, comprising:   44. Said control has at least four different white blood cells 44. The hematological control product of claim 43, further comprising an analog.   45. Wherein the control product further comprises an aqueous solution of a plasma substance. Item 44. The hematological control product according to Item 44.   46. The plasma substance is cholesterol, cholesterol ester, lipotan Binds with protein cholesterol, lipoprotein cholesterol ester, and phospholipid Combined cholesterol, cholesterol bound to albumin, bound to albumin Cholesterol esters combined, lipoprotein cholesterol combined with phospholipids , Lipoprotein cholesterol bound to albumin and their mixtures 46. The hematological control product of claim 45, wherein the product is selected from the group consisting of:
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