JPH10332703A - ウイルスのスクリーニングの方法 - Google Patents
ウイルスのスクリーニングの方法Info
- Publication number
- JPH10332703A JPH10332703A JP13724397A JP13724397A JPH10332703A JP H10332703 A JPH10332703 A JP H10332703A JP 13724397 A JP13724397 A JP 13724397A JP 13724397 A JP13724397 A JP 13724397A JP H10332703 A JPH10332703 A JP H10332703A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- blood cells
- virus
- blood
- screening
- lyophilized
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- Pending
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 長期保存が可能で、かつ必要な時に必要な量
だけ再生して使用することができる簡便な、凍結乾燥血
球試薬を使ったスクリーニングの方法の提供。 【解決手段】 生物体の血球をレセプターとして感染す
るウイルスの有無を、当該ウイルスを含有する生体物質
含有液と当該血球を含む液と反応させて、その結果生じ
る凝集像によって感染の有無を判定するウイルスのスク
リーニングの方法において、当該血球は、凍結乾燥され
た血球を含む血球から構成されることを特徴とするウイ
ルスのスクリーニングの方法。
だけ再生して使用することができる簡便な、凍結乾燥血
球試薬を使ったスクリーニングの方法の提供。 【解決手段】 生物体の血球をレセプターとして感染す
るウイルスの有無を、当該ウイルスを含有する生体物質
含有液と当該血球を含む液と反応させて、その結果生じ
る凝集像によって感染の有無を判定するウイルスのスク
リーニングの方法において、当該血球は、凍結乾燥され
た血球を含む血球から構成されることを特徴とするウイ
ルスのスクリーニングの方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生体物質中のウイ
ルスの感染の有無を調べる方法に関し、特にヒトパルボ
ウイルスがヒトの血球をレセプターとして捕獲・感染す
ることを利用するスクリーニングの方法に関する。
ルスの感染の有無を調べる方法に関し、特にヒトパルボ
ウイルスがヒトの血球をレセプターとして捕獲・感染す
ることを利用するスクリーニングの方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ウイルスの中にはヒトの血球を介して感
染するものがあるため、その種のウイルスを簡易に高感
度で検出する方法が求められている。中でもヒトパルボ
ウイルスは、小児における伝染性紅斑等、いくつかの疾
患の原因ウイルスと考えられており、輸血によって感染
することが知られているため、このウイルスの検査方法
が世界中の緊急の課題となっている。現在では、血液セ
ンターなどで、凝集法によるスクリーニングが行われて
いる。このスクリーニングでは、Ｐ抗原を有する赤血球
をあらかじめ検査のうえ、採取・保存して、これをもと
にスクリーニング用試薬を調合する。しかるに採取され
た血液は保存がきかないため、検査（スクリーニング）
の都度、新しい試薬を調合しなければならない。通常、
保存期間は試薬に調合した後、１週間程度とその保存期
間が短い。
染するものがあるため、その種のウイルスを簡易に高感
度で検出する方法が求められている。中でもヒトパルボ
ウイルスは、小児における伝染性紅斑等、いくつかの疾
患の原因ウイルスと考えられており、輸血によって感染
することが知られているため、このウイルスの検査方法
が世界中の緊急の課題となっている。現在では、血液セ
ンターなどで、凝集法によるスクリーニングが行われて
いる。このスクリーニングでは、Ｐ抗原を有する赤血球
をあらかじめ検査のうえ、採取・保存して、これをもと
にスクリーニング用試薬を調合する。しかるに採取され
た血液は保存がきかないため、検査（スクリーニング）
の都度、新しい試薬を調合しなければならない。通常、
保存期間は試薬に調合した後、１週間程度とその保存期
間が短い。
【０００３】現在、血液センター等で行われているヒト
パルボウイルスの検出方法はＲＨＡ法、およびＰＣＲ法
があるが、輸血に伴う感染防止を目的としているため、
献血されたあるいは他の方法によって採血された血液製
剤が対象となる。即ち、日本では献血された血液の全部
がその対象となり、赤血球、血小板、全血あわせて年間
約１５００万ユニットと膨大な量である。このため、多
くの検体（サンプル）を対象とする高感度で簡易なスク
リーニングの方法が望まれ、現在では前者の方法（ＲＨ
Ａ法）が暫定的に用いられている。
パルボウイルスの検出方法はＲＨＡ法、およびＰＣＲ法
があるが、輸血に伴う感染防止を目的としているため、
献血されたあるいは他の方法によって採血された血液製
剤が対象となる。即ち、日本では献血された血液の全部
がその対象となり、赤血球、血小板、全血あわせて年間
約１５００万ユニットと膨大な量である。このため、多
くの検体（サンプル）を対象とする高感度で簡易なスク
リーニングの方法が望まれ、現在では前者の方法（ＲＨ
Ａ法）が暫定的に用いられている。
【０００４】ＲＨＡ法は、佐藤らの報告（H.Sato, F.Ta
kakura, E.Kojima, K.Fukuda, K.Okochi, and Y.Maeda,
Screening of blood donors for human parvovirus B
19,The Lancet, vol.346,pp.1237-1238(1995)）に詳述
されている。その方法は、グルタールアルデヒドで固定
され、Ｐ抗原を有するＯ型血球を０．１Ｍりん酸バッフ
ァ（ＰＨ＝５．６）、０．１％ポリビニルピロリドン、
０．１％アラビアゴム（arabic gum）、１７．１ｍＭの
ＮａＣｌ、１％ショ糖（sucrose）、そして０．１％の
アジ化ナトリウム（sodium azide）に浮遊させる（最終
血球濃度１％）。次に被測定血清をＢ１９ウイルスに対
する抗体を持っていない、０．５％のヒトＡＢ型の血清
（を含む前記血球浮遊液で）に希釈する。これらの検査
血球浮遊液と検体を含む血清とを混合反応させて凝集を
観測する。
kakura, E.Kojima, K.Fukuda, K.Okochi, and Y.Maeda,
Screening of blood donors for human parvovirus B
19,The Lancet, vol.346,pp.1237-1238(1995)）に詳述
されている。その方法は、グルタールアルデヒドで固定
され、Ｐ抗原を有するＯ型血球を０．１Ｍりん酸バッフ
ァ（ＰＨ＝５．６）、０．１％ポリビニルピロリドン、
０．１％アラビアゴム（arabic gum）、１７．１ｍＭの
ＮａＣｌ、１％ショ糖（sucrose）、そして０．１％の
アジ化ナトリウム（sodium azide）に浮遊させる（最終
血球濃度１％）。次に被測定血清をＢ１９ウイルスに対
する抗体を持っていない、０．５％のヒトＡＢ型の血清
（を含む前記血球浮遊液で）に希釈する。これらの検査
血球浮遊液と検体を含む血清とを混合反応させて凝集を
観測する。
【０００５】また、別な処理方法として、被検査血漿
（例えば、ＥＤＴＡまたはＡＣＤ＋ＥＤＴＡ採血）１０
μｌを凝集反応用緩衝液（例えば、デンカ生研製）１ｍ
ｌで希釈する。一方、Ｐ抗原を持つ血球は（この場合は
赤血球）、前記の凝集反応用緩衝液で１．２％に希釈す
る。次にそれぞれ２５μｌづつを混合、室温で約９０分
反応させて目視で凝集を観察する。
（例えば、ＥＤＴＡまたはＡＣＤ＋ＥＤＴＡ採血）１０
μｌを凝集反応用緩衝液（例えば、デンカ生研製）１ｍ
ｌで希釈する。一方、Ｐ抗原を持つ血球は（この場合は
赤血球）、前記の凝集反応用緩衝液で１．２％に希釈す
る。次にそれぞれ２５μｌづつを混合、室温で約９０分
反応させて目視で凝集を観察する。
【０００６】いずれの方法においても、この凝集を利用
する方法はその最大感度は１ｍｌあたりのウイルス陽性
ＤＮＡコピー数が１０5から１０6である。
する方法はその最大感度は１ｍｌあたりのウイルス陽性
ＤＮＡコピー数が１０5から１０6である。
【０００７】これに対し、前記ＰＣＲ法（Polymerase c
hain reaction）は、検出感度は前者のＲＨＡ法より１
００−１０００倍高感度であるが、特殊な設備と装置を
必要とし、かつ分析に多大な時間を必要とする研究用設
備であってスクリーニングとしては不向きである。
hain reaction）は、検出感度は前者のＲＨＡ法より１
００−１０００倍高感度であるが、特殊な設備と装置を
必要とし、かつ分析に多大な時間を必要とする研究用設
備であってスクリーニングとしては不向きである。
【０００８】以上述べたように、多数の検体（被検査試
料）を対象とするスクリーニングの方法では、共通の課
題（ＰＣＲ法も含め）として、検査用血球を検査の都度
調合しなければならないという欠点がある。
料）を対象とするスクリーニングの方法では、共通の課
題（ＰＣＲ法も含め）として、検査用血球を検査の都度
調合しなければならないという欠点がある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記課題を
解決するためになされ、長期保存が可能で、かつ必要な
時に必要な量だけ再生して使用することができる簡便
な、凍結乾燥血球試薬を使ったスクリーニングの方法を
提供することを目的とする。このとき、必要とする感度
は、従来の凝集を利用した方法と同等であればよい。
解決するためになされ、長期保存が可能で、かつ必要な
時に必要な量だけ再生して使用することができる簡便
な、凍結乾燥血球試薬を使ったスクリーニングの方法を
提供することを目的とする。このとき、必要とする感度
は、従来の凝集を利用した方法と同等であればよい。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、凍結乾
燥された血球を含む血球を使うスクリーニングの方法、
さらには、凍結乾燥され、戻し液で再生された血球を含
む血球試薬を使ったスクリーニングの方法が提供され
る。本発明方法は、従来のＲＨＡ法と同様に高感度で、
しかも凍結乾燥された血球を含む血球を用いるので必要
な時に必要な量を戻して（再生して）使えるため、これ
によって簡便で従来の凝集を利用する方法と同等な高感
度なスクリーニングの方法を提供できる。用いる凍結乾
燥赤血球の製法は問わない。どんな方法で作製された凍
結乾燥血球であってもよく、また、どんな方法を使って
戻された血球を使ってもよい。
燥された血球を含む血球を使うスクリーニングの方法、
さらには、凍結乾燥され、戻し液で再生された血球を含
む血球試薬を使ったスクリーニングの方法が提供され
る。本発明方法は、従来のＲＨＡ法と同様に高感度で、
しかも凍結乾燥された血球を含む血球を用いるので必要
な時に必要な量を戻して（再生して）使えるため、これ
によって簡便で従来の凝集を利用する方法と同等な高感
度なスクリーニングの方法を提供できる。用いる凍結乾
燥赤血球の製法は問わない。どんな方法で作製された凍
結乾燥血球であってもよく、また、どんな方法を使って
戻された血球を使ってもよい。
【００１１】凍結乾燥の作製・戻し（再生）の方法は種
々あるが、本発明はこれらに限定されない。一般に、凍
結乾燥、および戻しに関する方法としては、例えば、 (1)T.Iijima, Y.Ishii, N.Funakoshi, K.Okada, and T.
Kawada, USP#8,390,957（特開平８−１０９１３６号公
報、特願平７−３２７１８号） (2)R.P.GoodrichらによるUSP#5,171,661およびUSP#4,87
4,690 (3)S.Liveseyらの US Patent #5,364,751 (4)Briggsらの US Patent #3,928,566 がある。
々あるが、本発明はこれらに限定されない。一般に、凍
結乾燥、および戻しに関する方法としては、例えば、 (1)T.Iijima, Y.Ishii, N.Funakoshi, K.Okada, and T.
Kawada, USP#8,390,957（特開平８−１０９１３６号公
報、特願平７−３２７１８号） (2)R.P.GoodrichらによるUSP#5,171,661およびUSP#4,87
4,690 (3)S.Liveseyらの US Patent #5,364,751 (4)Briggsらの US Patent #3,928,566 がある。
【００１２】
【発明の実施の形態】凍結乾燥赤血球は上記文献に示さ
れている方法（特開平８−１０９１３６号公報（＝特願
平７−３２７１８号））で作製した。用いた血球は、Ｏ
型で、あらかじめＰ抗原の保持を確認し、一部の血球は
凍結乾燥せず、コントロール血球とした。この凍結乾燥
赤血球を５℃の通常の冷蔵庫、および室温に保管した。
３ヶ月の保管の後、これを取り出し、戻し液にて戻した
後、まず、Ｐ抗原の保存を確認した。次に、ＲＨＡ法に
準じて被検査血清と血球浮遊液を用意する。前記と同
様、被検査血漿（例えば、ＥＤＴＡまたはＡＣＤ＋ＥＤ
ＴＡ採血したあと分離した血漿でパルボウイルス陽性の
もの）１０μｌを凝集反応用緩衝液（例えば、デンカ生
研製）１ｍｌで希釈する。一方、Ｐ抗原を持つ凍結乾燥
赤血球を前記の方法で戻し、凝集反応用緩衝液に浮遊さ
せた。このときの再生させた赤血球の濃度は２％から４
％の浮遊液とした。次に、それぞれ被検査血清と血球浮
遊液２５μｌづつを混合、室温で約９０分反応させて目
視で凝集を観察した結果、コントロール血球を使用した
場合と同等の凝集力価を示した。この実験において、凍
結乾燥させ、保存後戻した赤血球の割合を１０％から１
００％と変えて実験したが、凝集力価で同等、被検査血
漿を２ｎ倍希釈して求めた end titer でも１管以内
と、コントロール血球とほぼ同等な特性を示した。
れている方法（特開平８−１０９１３６号公報（＝特願
平７−３２７１８号））で作製した。用いた血球は、Ｏ
型で、あらかじめＰ抗原の保持を確認し、一部の血球は
凍結乾燥せず、コントロール血球とした。この凍結乾燥
赤血球を５℃の通常の冷蔵庫、および室温に保管した。
３ヶ月の保管の後、これを取り出し、戻し液にて戻した
後、まず、Ｐ抗原の保存を確認した。次に、ＲＨＡ法に
準じて被検査血清と血球浮遊液を用意する。前記と同
様、被検査血漿（例えば、ＥＤＴＡまたはＡＣＤ＋ＥＤ
ＴＡ採血したあと分離した血漿でパルボウイルス陽性の
もの）１０μｌを凝集反応用緩衝液（例えば、デンカ生
研製）１ｍｌで希釈する。一方、Ｐ抗原を持つ凍結乾燥
赤血球を前記の方法で戻し、凝集反応用緩衝液に浮遊さ
せた。このときの再生させた赤血球の濃度は２％から４
％の浮遊液とした。次に、それぞれ被検査血清と血球浮
遊液２５μｌづつを混合、室温で約９０分反応させて目
視で凝集を観察した結果、コントロール血球を使用した
場合と同等の凝集力価を示した。この実験において、凍
結乾燥させ、保存後戻した赤血球の割合を１０％から１
００％と変えて実験したが、凝集力価で同等、被検査血
漿を２ｎ倍希釈して求めた end titer でも１管以内
と、コントロール血球とほぼ同等な特性を示した。
【００１３】
【発明の効果】本発明によれば、長期保存が可能な凍結
乾燥血液を用いるため、簡易で安定供給できるウイルス
捕獲用（レセプター）血球を用意できる。しかも、検出
感度も生の血液（コントロール血球）を使った従来の凝
集法の場合と同等である。
乾燥血液を用いるため、簡易で安定供給できるウイルス
捕獲用（レセプター）血球を用意できる。しかも、検出
感度も生の血液（コントロール血球）を使った従来の凝
集法の場合と同等である。
Claims (3)
- 【請求項１】 生物体の血球をレセプターとして感染す
るウイルスの有無を、当該ウイルスを含有する生体物質
含有液と当該血球を含む液と反応させて、その結果生じ
る凝集像によって感染の有無を判定するウイルスのスク
リーニングの方法において、 当該血球は、凍結乾燥された血球を含む血球から構成さ
れることを特徴とするウイルスのスクリーニングの方
法。 - 【請求項２】 前記血球は、再生させた凍結乾燥血球を
含む血球から構成されることを特徴とする請求項１記載
のウイルスのスクリーニングの方法。 - 【請求項３】 前記血球は、少なくともＰ抗原を保有
し、凍結乾燥され、再生された血液を含む血球からなる
ことを特徴とする請求項１または２記載のウイルスのス
クリーニングの方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13724397A JPH10332703A (ja) | 1997-05-27 | 1997-05-27 | ウイルスのスクリーニングの方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13724397A JPH10332703A (ja) | 1997-05-27 | 1997-05-27 | ウイルスのスクリーニングの方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10332703A true JPH10332703A (ja) | 1998-12-18 |
Family
ID=15194125
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13724397A Pending JPH10332703A (ja) | 1997-05-27 | 1997-05-27 | ウイルスのスクリーニングの方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10332703A (ja) |
-
1997
- 1997-05-27 JP JP13724397A patent/JPH10332703A/ja active Pending
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