JPH0998778A - マレク病ワクチン - Google Patents
マレク病ワクチンInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 トリ無限増殖性細胞系上で増殖するように適
応されたマレク病ウイルスの提供。 【解決手段】 本発明は、特に、ウズラ細胞系ＱＴ−３
５上で増殖するように適応されたマレク病ウイルス、ト
リ無限増殖性細胞カルチャー上でのこのように適応され
たウイルスの培養、及びこのようなウイルスを含有する
ワクチンに関する。
応されたマレク病ウイルスの提供。 【解決手段】 本発明は、特に、ウズラ細胞系ＱＴ−３
５上で増殖するように適応されたマレク病ウイルス、ト
リ無限増殖性細胞カルチャー上でのこのように適応され
たウイルスの培養、及びこのようなウイルスを含有する
ワクチンに関する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規のマレク病ウ
イルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ
〔ＭＤＶ〕）ワクチン株、そのウイルスの培養方法及び
そのウイルスを含有するワクチンに関する。
イルス（Ｍａｒｅｋ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ
〔ＭＤＶ〕）ワクチン株、そのウイルスの培養方法及び
そのウイルスを含有するワクチンに関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】マレク
病ウイルスは、（食用）飼鳥類（ｐｏｕｌｔｒｙ）産業
において重大な経済的損失を引き起こすことができる。
最も厳しいものは、血清型１の野生型ウイルスにより引
き起こされる損失である。血清型２と３も上記分野にお
いて見い出されることができる。この血清型１ウイルス
は、発癌性の株であり、血清型２は、非発癌性であり、
そして血清型３は、七面鳥のヘルペス・ウイルス（ｈｅ
ｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｏｆ ｔｕｒｋｅｙｓ（ＨＶ
Ｔ））である。これらの異なるタイプは、それらの抗原
特性に関して高程度の類似性をもつ。しかしながら、そ
れらは、それらの臨床的重要性に関して異る。
病ウイルスは、（食用）飼鳥類（ｐｏｕｌｔｒｙ）産業
において重大な経済的損失を引き起こすことができる。
最も厳しいものは、血清型１の野生型ウイルスにより引
き起こされる損失である。血清型２と３も上記分野にお
いて見い出されることができる。この血清型１ウイルス
は、発癌性の株であり、血清型２は、非発癌性であり、
そして血清型３は、七面鳥のヘルペス・ウイルス（ｈｅ
ｒｐｅｓ ｖｉｒｕｓ ｏｆ ｔｕｒｋｅｙｓ（ＨＶ
Ｔ））である。これらの異なるタイプは、それらの抗原
特性に関して高程度の類似性をもつ。しかしながら、そ
れらは、それらの臨床的重要性に関して異る。
【０００３】マレク病（Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓ
ｅ〔ＭＤ〕）による経済的損失を減少させるために、ワ
クチンが開発されてきた。ＭＤに対するワクチンは、上
記の３つの血清型の全てから得られてきた。本発明は、
血清型１のワクチン・ウイルスに関する。血清型１のＭ
Ｄウイルスは、通常、インビトロにおいて強く細胞に会
合する。このウイルスの増殖のための基質（ｓｕｂｓｔ
ｒａｔｅ）として、ニワトリ胚線維芽細胞（ｃｈｉｃｋ
ｅｎ ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＣＥ
Ｆ））が一般に使用される。ＣＥＦの使用は、いくつか
の欠点をもつ。ＣＥＦは、胚を有する（ｅｍｂｒｙｏｎ
ａｔｅｄ）特別な病原体不含ニワトリ卵から収穫され
る。十分な細胞を得るために、多数のこれらの高価な卵
が必要であり、そしてこれらの卵の収穫は、時間がかか
り、かつ、骨の折れる仕事である。ＣＥＦの品質は、価
値が高く、そして収穫工程は、多数の無菌的取扱いを要
求し、汚染についての高いリスクをもたらす。
ｅ〔ＭＤ〕）による経済的損失を減少させるために、ワ
クチンが開発されてきた。ＭＤに対するワクチンは、上
記の３つの血清型の全てから得られてきた。本発明は、
血清型１のワクチン・ウイルスに関する。血清型１のＭ
Ｄウイルスは、通常、インビトロにおいて強く細胞に会
合する。このウイルスの増殖のための基質（ｓｕｂｓｔ
ｒａｔｅ）として、ニワトリ胚線維芽細胞（ｃｈｉｃｋ
ｅｎ ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＣＥ
Ｆ））が一般に使用される。ＣＥＦの使用は、いくつか
の欠点をもつ。ＣＥＦは、胚を有する（ｅｍｂｒｙｏｎ
ａｔｅｄ）特別な病原体不含ニワトリ卵から収穫され
る。十分な細胞を得るために、多数のこれらの高価な卵
が必要であり、そしてこれらの卵の収穫は、時間がかか
り、かつ、骨の折れる仕事である。ＣＥＦの品質は、価
値が高く、そして収穫工程は、多数の無菌的取扱いを要
求し、汚染についての高いリスクをもたらす。
【０００４】従来技術において、ＭＤＶを増殖させるた
めに使用されることができるいくつかの細胞タイプ、例
えば、七面鳥、ガチョウ（ｇｏｏｓｅ）、ハト、キジ、
コリンウズラ（ｂｏｂｗｈｉｔｅ）及びＪａｐａｎｅｓ
ｅ ｑｕａｉｌ（日本ウズラ）の杯が記載されている。
しかしながら、ワクチン・ウイルス生産のために利用さ
れることができる無限増殖性細胞系（ｃｏｎｔｉｎｕｏ
ｕｓ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）をもつことが最も便利であ
ろう。生産目的のための無限増殖性細胞系の使用の利点
は、細胞のサンプルが、先に樹立され、そして十分に管
理された、例えば液体窒素中に保管された細胞バンクか
ら、容易に得ることができるということである。この無
限増殖性細胞系の品質は、ＣＥＦの品質よりも一定であ
り、そして無限増殖性細胞系の使用はあまりやっかいで
なく、そして行われるべき無菌的取扱いもより少ないの
で、汚染のリスクもより低い。
めに使用されることができるいくつかの細胞タイプ、例
えば、七面鳥、ガチョウ（ｇｏｏｓｅ）、ハト、キジ、
コリンウズラ（ｂｏｂｗｈｉｔｅ）及びＪａｐａｎｅｓ
ｅ ｑｕａｉｌ（日本ウズラ）の杯が記載されている。
しかしながら、ワクチン・ウイルス生産のために利用さ
れることができる無限増殖性細胞系（ｃｏｎｔｉｎｕｏ
ｕｓ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）をもつことが最も便利であ
ろう。生産目的のための無限増殖性細胞系の使用の利点
は、細胞のサンプルが、先に樹立され、そして十分に管
理された、例えば液体窒素中に保管された細胞バンクか
ら、容易に得ることができるということである。この無
限増殖性細胞系の品質は、ＣＥＦの品質よりも一定であ
り、そして無限増殖性細胞系の使用はあまりやっかいで
なく、そして行われるべき無菌的取扱いもより少ないの
で、汚染のリスクもより低い。
【０００５】
【課題を解決するための手段】驚ろくべきことに、今
般、ＭＤＶ血清型１が無限増殖性トリ細胞系上で増殖す
るように適応されることができることが発見された。よ
り特に、ウズラ細胞系、例えば、ＱＴ３５（日本ウズラ
腫瘍）細胞系を使用することができる。この改良された
ウイルスは、ワクチンの経済的生産のために十分に高い
収率をもってトリ細胞系上で培養されることができる。
実験的な証拠は、例えば、ＱＴ３５細胞上で増殖された
適応ワクチン・ウイルスは、未だ、ニワトリ（ｃｈｉｃ
ｋｅｎｓ）におけるＭＤに対する保護的免疫を誘導する
ことができる。この適応したマレク病ウイルス株は、よ
く知られた減弱ＭＤＶ株、例えば、株Ｒｉｓｐｅｎｓ，
ＣＶＩ９８８から得られることができる。
般、ＭＤＶ血清型１が無限増殖性トリ細胞系上で増殖す
るように適応されることができることが発見された。よ
り特に、ウズラ細胞系、例えば、ＱＴ３５（日本ウズラ
腫瘍）細胞系を使用することができる。この改良された
ウイルスは、ワクチンの経済的生産のために十分に高い
収率をもってトリ細胞系上で培養されることができる。
実験的な証拠は、例えば、ＱＴ３５細胞上で増殖された
適応ワクチン・ウイルスは、未だ、ニワトリ（ｃｈｉｃ
ｋｅｎｓ）におけるＭＤに対する保護的免疫を誘導する
ことができる。この適応したマレク病ウイルス株は、よ
く知られた減弱ＭＤＶ株、例えば、株Ｒｉｓｐｅｎｓ，
ＣＶＩ９８８から得られることができる。
【０００６】この発見は、ＱＴ３５細胞系がウイルスの
ための基質として使用されるテストにより血清型１ウイ
ルスが血清型３ウイルスから区別されることができると
いうことが従来技術（Ｃｈｏ，１９８１，Ａｖｉａｎ
ｄｉｓｅａｓｅｓ ２５：８３９−８４６）から公知で
あるので、驚くべきことである。血清型３の接種は、明
確な細胞病理学的効果（ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ
ｅｆｆｅｃｔ（ｃ．ｐ．ｅ．））をもたらすであろう
し、一方、血清型１ウイルスの接種は、ｃ．ｐ．ｅ．は
全く検出されず、ＱＴ３５細胞上でのこれらのウイルス
の不十分な増殖を示唆している。
ための基質として使用されるテストにより血清型１ウイ
ルスが血清型３ウイルスから区別されることができると
いうことが従来技術（Ｃｈｏ，１９８１，Ａｖｉａｎ
ｄｉｓｅａｓｅｓ ２５：８３９−８４６）から公知で
あるので、驚くべきことである。血清型３の接種は、明
確な細胞病理学的効果（ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ
ｅｆｆｅｃｔ（ｃ．ｐ．ｅ．））をもたらすであろう
し、一方、血清型１ウイルスの接種は、ｃ．ｐ．ｅ．は
全く検出されず、ＱＴ３５細胞上でのこれらのウイルス
の不十分な増殖を示唆している。
【０００７】無限増殖性の又は樹立された細胞系のカル
チャーは、制限されずに培養されることができ、そして
非限定数の継代を経験することができる。これは、数継
代だけにわたり維持されることができる初代細胞培養と
対照をなす。初代細胞培養は、組織、例えば、肝臓、腎
臓、脾臓、卵から直接的に単離された細胞のインビトロ
・カルチャーである。それから初代細胞が得られるとこ
ろの組織が、微生物で汚染される場合、それらの細胞も
汚染されるであろう高い確率が存在する。それからそれ
らの細胞が得られるところの動物のひじょうに広範なコ
ントロール及びひじょうに厳格なハウジング条件さえ
も、それらの細胞が外因性の剤を含まないことを保証す
ることはできない。
チャーは、制限されずに培養されることができ、そして
非限定数の継代を経験することができる。これは、数継
代だけにわたり維持されることができる初代細胞培養と
対照をなす。初代細胞培養は、組織、例えば、肝臓、腎
臓、脾臓、卵から直接的に単離された細胞のインビトロ
・カルチャーである。それから初代細胞が得られるとこ
ろの組織が、微生物で汚染される場合、それらの細胞も
汚染されるであろう高い確率が存在する。それからそれ
らの細胞が得られるところの動物のひじょうに広範なコ
ントロール及びひじょうに厳格なハウジング条件さえ
も、それらの細胞が外因性の剤を含まないことを保証す
ることはできない。
【０００８】樹立細胞系の使用は、細胞バンクを調製す
る可能性を開拓した。これは、アリコートを充填され、
そして例えば、液体窒素中に保存される細胞の大バッチ
である。このバッチは、外因性剤の非存在について広く
テストされる。この細胞バンクの使用が製品の汚染源で
あろうというリスクは、極めて小さい。これ故、樹立細
胞系の使用は、初代細胞カルチャーの使用に比べて、そ
の最終製品の汚染についてのリスを明らかに低下させ
る。
る可能性を開拓した。これは、アリコートを充填され、
そして例えば、液体窒素中に保存される細胞の大バッチ
である。このバッチは、外因性剤の非存在について広く
テストされる。この細胞バンクの使用が製品の汚染源で
あろうというリスクは、極めて小さい。これ故、樹立細
胞系の使用は、初代細胞カルチャーの使用に比べて、そ
の最終製品の汚染についてのリスを明らかに低下させ
る。
【０００９】初代細胞カルチャーを超える、細胞バンク
からの樹立細胞系の他の利点は、一定の、かつ、信頼性
のある品質である。この細胞系の各アリコートは、同一
品質をもつ。反対に、初代細胞の品質は、それからその
組織が得られたところの動物又は卵の状態に依存する。
改良されたＭＤＶを調製するために、いくつかの継代培
養を、ＱＴ３５上で株ＣＩ９８８を用いて行った。第１
継代の間、ウイルスは、ひじょうに低い程度まで増殖す
ることが発見された。ローラー・ボトル内での高い感染
多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃ
ｔｉｏｎ）の適用の間、いくつかのｃ．ｐ．ｅ．が得ら
れることができるであろう。ローラー・ボトル内での多
数の連続した継代培養の後に、ウイルス収率が増加する
ことが発見された。この代わり、静止培養（Ｒｏｕｘフ
ラスコ、ボトル当り７５cm2 ）における継代の間、ウイ
ルスは消失した。図１中、（３×１０7 細胞当りのlob
TCID50として表す）ウイルス・タイターを、それぞれ、
ローラー・ボトル又はＲｏｕｘフラスコ内でのＭＤＶ株
ＣＶＩ９８８のＱＴ３５に対する適応の間、各継代培養
後に表す。ローラー・ボトル内での十分に高い数の継代
培養の後に、そのウイルス収率は、収益性のある生産シ
ステムが得られる程に高いものである。ウイルスのタイ
ターがローラー・ボトル内で第１２継代後に増加するこ
とが分かる。
からの樹立細胞系の他の利点は、一定の、かつ、信頼性
のある品質である。この細胞系の各アリコートは、同一
品質をもつ。反対に、初代細胞の品質は、それからその
組織が得られたところの動物又は卵の状態に依存する。
改良されたＭＤＶを調製するために、いくつかの継代培
養を、ＱＴ３５上で株ＣＩ９８８を用いて行った。第１
継代の間、ウイルスは、ひじょうに低い程度まで増殖す
ることが発見された。ローラー・ボトル内での高い感染
多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃ
ｔｉｏｎ）の適用の間、いくつかのｃ．ｐ．ｅ．が得ら
れることができるであろう。ローラー・ボトル内での多
数の連続した継代培養の後に、ウイルス収率が増加する
ことが発見された。この代わり、静止培養（Ｒｏｕｘフ
ラスコ、ボトル当り７５cm2 ）における継代の間、ウイ
ルスは消失した。図１中、（３×１０7 細胞当りのlob
TCID50として表す）ウイルス・タイターを、それぞれ、
ローラー・ボトル又はＲｏｕｘフラスコ内でのＭＤＶ株
ＣＶＩ９８８のＱＴ３５に対する適応の間、各継代培養
後に表す。ローラー・ボトル内での十分に高い数の継代
培養の後に、そのウイルス収率は、収益性のある生産シ
ステムが得られる程に高いものである。ウイルスのタイ
ターがローラー・ボトル内で第１２継代後に増加するこ
とが分かる。
【００１０】以下の適応実験を行った。本実験において
も、継代培養の間にタイターが増加した。この適応効果
を説明するために、第２継代において、３×１０7 細胞
当り１０6.03のTCID50タイターを作り出し、そして１の
ローラー・ボトルから収穫されたウイルスを、ＱＴ３５
細胞を含む５つのローラー・ボトルを接種するために使
用することができた。１９継代においては、３×１０7
細胞当り１０7.02のタイターが作り出され、これは、１
のローラー・ボトルの収穫により５０のローラー・ボト
ルを接種するのに十分に高いものであった。
も、継代培養の間にタイターが増加した。この適応効果
を説明するために、第２継代において、３×１０7 細胞
当り１０6.03のTCID50タイターを作り出し、そして１の
ローラー・ボトルから収穫されたウイルスを、ＱＴ３５
細胞を含む５つのローラー・ボトルを接種するために使
用することができた。１９継代においては、３×１０7
細胞当り１０7.02のタイターが作り出され、これは、１
のローラー・ボトルの収穫により５０のローラー・ボト
ルを接種するのに十分に高いものであった。
【００１１】適応実験の間、ウイルス・タイターを増加
させるためにいくつかの試みを行った。ある場合には、
収穫されたウイルスは、ＱＴ３５単層上に接種しなかっ
たが、ＱＴ３５細胞の新たに調製した懸濁液と混合し、
そしてその後にローラー・ボトル内に接種した。他の場
合には、収穫したウイルスを、新たな細胞と混合さえし
なかったが、その収穫を単に空のローラー・ボトル内に
単に植え継いだ。これらの操作は、継代を続けるのに十
分に高いウイルス・タイターをもつ収穫されたカルチャ
ーをもたらした。このために、高いウイルス・タイター
が必要である。収穫後、ウイルスを常に直接的にさらに
継代培養し、そして凍結段階は全く含まれなかった。ウ
イルス含有量について収穫されたウイルス懸濁液をスク
リーニングするために、免疫蛍光検定を行った。
させるためにいくつかの試みを行った。ある場合には、
収穫されたウイルスは、ＱＴ３５単層上に接種しなかっ
たが、ＱＴ３５細胞の新たに調製した懸濁液と混合し、
そしてその後にローラー・ボトル内に接種した。他の場
合には、収穫したウイルスを、新たな細胞と混合さえし
なかったが、その収穫を単に空のローラー・ボトル内に
単に植え継いだ。これらの操作は、継代を続けるのに十
分に高いウイルス・タイターをもつ収穫されたカルチャ
ーをもたらした。このために、高いウイルス・タイター
が必要である。収穫後、ウイルスを常に直接的にさらに
継代培養し、そして凍結段階は全く含まれなかった。ウ
イルス含有量について収穫されたウイルス懸濁液をスク
リーニングするために、免疫蛍光検定を行った。
【００１２】ＱＴ３５細胞系の開発は、Ｍｏｓｃｏｖｉ
ｃｉ ｅｔ ａｌ．（１９７７ Ｃｅｌｌ １１：９５
−１０３）により記載されている。ＱＴ３５細胞系は、
日本ウズラ（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｑｕａｉｌ）のメチル
コラントレン（ｍｅｔｈｙｌｃｈｏｌｏｎｔｈｒｅｎ
ｅ）−誘導線維肉腫から樹立された。この細胞系のサン
プルは、ＣＲＬ １０９６７の下ＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖ
ｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）に寄託されている。ＱＴ３５
細胞を、足場依存性（ａｎｃｈｏｒａｇｅ ｄｅｐｅｎ
ｄｅｎｔ）細胞に好適な各種培養方法により増殖させる
ことができる。例えば、これらの細胞を、例えば、ゼラ
チン、プラスチック又はガラスから成る、又は含有す
る、ローラー・ボトル、細胞チューブ内で及びマイクロ
キャリアー上で増殖させることができる。
ｃｉ ｅｔ ａｌ．（１９７７ Ｃｅｌｌ １１：９５
−１０３）により記載されている。ＱＴ３５細胞系は、
日本ウズラ（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｑｕａｉｌ）のメチル
コラントレン（ｍｅｔｈｙｌｃｈｏｌｏｎｔｈｒｅｎ
ｅ）−誘導線維肉腫から樹立された。この細胞系のサン
プルは、ＣＲＬ １０９６７の下ＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖ
ｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）に寄託されている。ＱＴ３５
細胞を、足場依存性（ａｎｃｈｏｒａｇｅ ｄｅｐｅｎ
ｄｅｎｔ）細胞に好適な各種培養方法により増殖させる
ことができる。例えば、これらの細胞を、例えば、ゼラ
チン、プラスチック又はガラスから成る、又は含有す
る、ローラー・ボトル、細胞チューブ内で及びマイクロ
キャリアー上で増殖させることができる。
【００１３】これらの細胞を、各種の細胞培養基又は細
胞培養基の組合せを使用して増殖させることができる。
このような培養基は、例えば、以下のものである： １．２．８％の重炭酸ナトリウム溶液２．８％、１００
国際単位（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｔｓ
（ＩＵ））のペニシリン、１０％のリン酸塩ブロス、８
％の胎児ウシ血清及び２％のニワトリ血清を補った。Ｈ
ａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｍｏｓｃｏｖｉｃｉ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｃｅｌｌ １１，ｐａｇｅ ９５−１０３，０５
−１９７７）
胞培養基の組合せを使用して増殖させることができる。
このような培養基は、例えば、以下のものである： １．２．８％の重炭酸ナトリウム溶液２．８％、１００
国際単位（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｔｓ
（ＩＵ））のペニシリン、１０％のリン酸塩ブロス、８
％の胎児ウシ血清及び２％のニワトリ血清を補った。Ｈ
ａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｍｏｓｃｏｖｉｃｉ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｃｅｌｌ １１，ｐａｇｅ ９５−１０３，０５
−１９７７）
【００１４】２．０．３％リン酸トリプトース・ブロ
ス、０．４７７％ ＨＥＰＥＳ及び１０％胎児ウシ血清
を補った。Ｈａｎｋｓ塩含有培地１９９（Ｍｅｄｉｕｍ
１９９）（Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｄ
ｅｖｅｌｏｐ．ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ ６０，ｐ
ａｇｅ ４２１−４３０，１９８５） ３．１０％の成体ウシ血清及び抗生物質（ペニシリン１
００IU／ml、ネオマイシン１００μｇ／ml及び１００μ
ｌ／ml）を含むＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（Ｒｅｄｄｙ
ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｉａｎ Ｖｅｔ．Ｊ．６８，ｐａｇ
ｅ ９０７−９１０，１９９１） ４．５％リン酸トリプトース・ブロス、１０％胎児ウシ
血清、１０μｇ／mlゲンタマイシン、１０mM ＨＥＰＥ
Ｓ及び０．０１５％重炭酸ナトリウムを補った。４４％
栄養混合物Ｆ−１０及び５６％培地１９９（Ｓｃｈｕｉ
ｔｚｌｅｉｎｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ １０，ｐａｇｅ ６５−７６，１９８８） ５．Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２培地。
ス、０．４７７％ ＨＥＰＥＳ及び１０％胎児ウシ血清
を補った。Ｈａｎｋｓ塩含有培地１９９（Ｍｅｄｉｕｍ
１９９）（Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｄ
ｅｖｅｌｏｐ．ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ ６０，ｐ
ａｇｅ ４２１−４３０，１９８５） ３．１０％の成体ウシ血清及び抗生物質（ペニシリン１
００IU／ml、ネオマイシン１００μｇ／ml及び１００μ
ｌ／ml）を含むＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ（Ｒｅｄｄｙ
ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｉａｎ Ｖｅｔ．Ｊ．６８，ｐａｇ
ｅ ９０７−９１０，１９９１） ４．５％リン酸トリプトース・ブロス、１０％胎児ウシ
血清、１０μｇ／mlゲンタマイシン、１０mM ＨＥＰＥ
Ｓ及び０．０１５％重炭酸ナトリウムを補った。４４％
栄養混合物Ｆ−１０及び５６％培地１９９（Ｓｃｈｕｉ
ｔｚｌｅｉｎｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ １０，ｐａｇｅ ６５−７６，１９８８） ５．Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２培地。
【００１５】場合によりこれらの細胞培地又は細胞培地
の組合せに、容易に利用することができるエネルギー源
（特に、糖、例えば、グルコース、フルクトース及び／
又はリボース）及び／又はアミノ酸源、例えば、タンパ
ク質（例えば、乳タンパク質及び／又は血清タンパク
質）を補うことができる。ＱＴ−３５細胞の植え継ぎの
間、タンパク質分解酵素、例えば、トリプシン及びコラ
ゲナーゼを使用することができる。
の組合せに、容易に利用することができるエネルギー源
（特に、糖、例えば、グルコース、フルクトース及び／
又はリボース）及び／又はアミノ酸源、例えば、タンパ
ク質（例えば、乳タンパク質及び／又は血清タンパク
質）を補うことができる。ＱＴ−３５細胞の植え継ぎの
間、タンパク質分解酵素、例えば、トリプシン及びコラ
ゲナーゼを使用することができる。
【００１６】細胞を凍結保護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃ
ｔｏｒｓ）、例えば、ジメチル・スルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）又はグリセロールの存在中で凍結させることができ
る。細胞及びその細胞に会合したウイルスの凍結は、好
ましくは、液体窒素の温度である所望の保存温度にまで
例えば毎分１℃の温度におけるゆっくりした減少を確立
することにより、行われることができる。ワクチンのた
めの希釈剤は、いずれかの生理学的溶液であることがで
きるが、好ましくは、ＮＺ−アミンを含有するリン酸塩
緩衝化ショ糖溶液であることができる。
ｔｏｒｓ）、例えば、ジメチル・スルホキシド（ＤＭＳ
Ｏ）又はグリセロールの存在中で凍結させることができ
る。細胞及びその細胞に会合したウイルスの凍結は、好
ましくは、液体窒素の温度である所望の保存温度にまで
例えば毎分１℃の温度におけるゆっくりした減少を確立
することにより、行われることができる。ワクチンのた
めの希釈剤は、いずれかの生理学的溶液であることがで
きるが、好ましくは、ＮＺ−アミンを含有するリン酸塩
緩衝化ショ糖溶液であることができる。
【００１７】
実施例１ ワクチンの製造 製造ランのための出発材料は、ＱＴ３５細胞上で１６回
継代した株ＣＶＩ９８８であった。第１６継代後のこの
ウイルス材料のサンプルを、第Ｉ−１５８５号の下、Ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｃａ
ｌｔｕｒｅｓｄｅ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ
（ＣＮＣＭ）ｏｆ ＩｎｓｔｉｔｕｔＰａｓｔｅｕｒ
（Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）に１９９５年６月７日に
寄託した。製造ランにおいては、常に、３９℃において
細胞とウイルスを増殖させた。ワクチン製造のために、
ＱＴ３５細胞を、８．８×１０4 細胞／cm2 の濃度にお
いてローラー・ボトル内に接種し、そしてインキュベー
トした。３日間のインキュベーションの後、このローラ
ー・ボトルを、０．０１の感染多重度（ｍ．ｏ．ｉ）に
おいて、第１６継代ウイルスにより接種した。４日間の
インキュベーションの後、感染培養物を、トリプシン処
理（ｔｒｙｐｓｉｎｉｚａｔｉｏｎ）により収穫した。
ローラー・ボトル当り４３．１×１０7 細胞を収穫した
（８．８×１０5 ／cm2 ）。
継代した株ＣＶＩ９８８であった。第１６継代後のこの
ウイルス材料のサンプルを、第Ｉ−１５８５号の下、Ｃ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｅ ｄｅ Ｃａ
ｌｔｕｒｅｓｄｅ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ
（ＣＮＣＭ）ｏｆ ＩｎｓｔｉｔｕｔＰａｓｔｅｕｒ
（Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）に１９９５年６月７日に
寄託した。製造ランにおいては、常に、３９℃において
細胞とウイルスを増殖させた。ワクチン製造のために、
ＱＴ３５細胞を、８．８×１０4 細胞／cm2 の濃度にお
いてローラー・ボトル内に接種し、そしてインキュベー
トした。３日間のインキュベーションの後、このローラ
ー・ボトルを、０．０１の感染多重度（ｍ．ｏ．ｉ）に
おいて、第１６継代ウイルスにより接種した。４日間の
インキュベーションの後、感染培養物を、トリプシン処
理（ｔｒｙｐｓｉｎｉｚａｔｉｏｎ）により収穫した。
ローラー・ボトル当り４３．１×１０7 細胞を収穫した
（８．８×１０5 ／cm2 ）。
【００１８】サンプルを滴定し、そして他のサンプル
を、ＱＴ３５細胞の単層をもつローラー・ボトルを接種
する（分割比（ｓｐｌｉｔ ｒａｔｉｏ）１対２０）た
めに使用した。これらの細胞を、８．８×１０4 細胞／
cm2 の濃度において３日前に接種した。接種３日後、そ
の感染した単層をトリプシン化により収穫した。ローラ
ー・ボトル当り５８．８×１０7 細胞を収穫した（１
２．０×１０5 細胞／cm2）。この細胞懸濁液を遠心分
離により濃縮し、そして凍結培地中で３×１０7 細胞／
mlの濃度に希釈した。この細胞懸濁液を、１mlバイアル
内に充填し、そして液体窒素中で凍結した。これらのア
ンプルを、マスター種ウイルス（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｅｅ
ｄ Ｖｉｒｕｓ（ＭＳＶ））と名付けた。全部で２４の
アンプルを液体窒素中で凍結した。２つのアンプルを滴
定し、そしてそのタイターは１０6.20TCID50／mlであっ
た。
を、ＱＴ３５細胞の単層をもつローラー・ボトルを接種
する（分割比（ｓｐｌｉｔ ｒａｔｉｏ）１対２０）た
めに使用した。これらの細胞を、８．８×１０4 細胞／
cm2 の濃度において３日前に接種した。接種３日後、そ
の感染した単層をトリプシン化により収穫した。ローラ
ー・ボトル当り５８．８×１０7 細胞を収穫した（１
２．０×１０5 細胞／cm2）。この細胞懸濁液を遠心分
離により濃縮し、そして凍結培地中で３×１０7 細胞／
mlの濃度に希釈した。この細胞懸濁液を、１mlバイアル
内に充填し、そして液体窒素中で凍結した。これらのア
ンプルを、マスター種ウイルス（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｅｅ
ｄ Ｖｉｒｕｓ（ＭＳＶ））と名付けた。全部で２４の
アンプルを液体窒素中で凍結した。２つのアンプルを滴
定し、そしてそのタイターは１０6.20TCID50／mlであっ
た。
【００１９】作業種ウイルス（ｗｏｒｋｉｎｇ ｓｅｅ
ｄ ｖｉｒｕｓ（ＷＳＶ））の製造のために、ローラー
・ボトルを８．７×１０4 細胞／cm2 の濃度で接種し、
そしてインキュベートした。これらのローラー・ボトル
を０．０１のｍｏｉにおいてマスター種ウイルスを用い
て接種した。４日間のインキュベーションの後、その感
染カルチャーをトリプシン処理により収穫した。ボトル
当り５５．４×１０7細胞を収穫した（１１．３×１０
5 細胞／cm2 ）。
ｄ ｖｉｒｕｓ（ＷＳＶ））の製造のために、ローラー
・ボトルを８．７×１０4 細胞／cm2 の濃度で接種し、
そしてインキュベートした。これらのローラー・ボトル
を０．０１のｍｏｉにおいてマスター種ウイルスを用い
て接種した。４日間のインキュベーションの後、その感
染カルチャーをトリプシン処理により収穫した。ボトル
当り５５．４×１０7細胞を収穫した（１１．３×１０
5 細胞／cm2 ）。
【００２０】サンプルを滴定し、そして他のサンプル
を、ＱＴ３５細胞の単層を接種する（分割比（ｓｐｌｉ
ｔ ｒａｔｉｏ）１対２０）ために使用した。これらの
細胞を、８．７×１０4 細胞／cm2 の濃度において３日
前に接種した。ウイルス増殖の３日後、その感染した単
層をトリプシン化により収穫した。ローラー・ボトル当
り３２．６×１０7 細胞を収穫した（６．６５×１０5
細胞／cm2 ）。この細胞懸濁液を遠心分離により濃縮
し、そして凍結培地中で３×１０7 細胞／mlの濃度に希
釈した。この細胞懸濁液を、１mlバイアル内に充填し、
そして液体窒素中で凍結した。１のサンプルを滴定し、
そしてそのタイターは１０6.20TCID50／mlであった。こ
れらのアンプルを作業種ウイルスと名付けた。
を、ＱＴ３５細胞の単層を接種する（分割比（ｓｐｌｉ
ｔ ｒａｔｉｏ）１対２０）ために使用した。これらの
細胞を、８．７×１０4 細胞／cm2 の濃度において３日
前に接種した。ウイルス増殖の３日後、その感染した単
層をトリプシン化により収穫した。ローラー・ボトル当
り３２．６×１０7 細胞を収穫した（６．６５×１０5
細胞／cm2 ）。この細胞懸濁液を遠心分離により濃縮
し、そして凍結培地中で３×１０7 細胞／mlの濃度に希
釈した。この細胞懸濁液を、１mlバイアル内に充填し、
そして液体窒素中で凍結した。１のサンプルを滴定し、
そしてそのタイターは１０6.20TCID50／mlであった。こ
れらのアンプルを作業種ウイルスと名付けた。
【００２１】ワクチン製造のために、ＱＴ３５細胞をロ
ーラー・ボトル内で８．７×１０5細胞／cm2 の濃度で
接種した。接種３日後、これらのローラー・ボトルを
０．０１のｍｏｉにおいて作業種ウイルスを用いて接種
した。４日間のインキュベーションの後、その感染カル
チャーをトリプシン処理により収穫した。ボトル当り５
９．６×１０7 細胞を収穫した（１２．２×１０5 細胞
／cm2 ）。
ーラー・ボトル内で８．７×１０5細胞／cm2 の濃度で
接種した。接種３日後、これらのローラー・ボトルを
０．０１のｍｏｉにおいて作業種ウイルスを用いて接種
した。４日間のインキュベーションの後、その感染カル
チャーをトリプシン処理により収穫した。ボトル当り５
９．６×１０7 細胞を収穫した（１２．２×１０5 細胞
／cm2 ）。
【００２２】サンプルを滴定し、そして他のサンプル
を、ＱＴ３５細胞の単層を（１：２０の比において）接
種するために使用した。これらの単層を、８．７×１０
5 細胞／cm2 の濃度において３日前に接種しておいた。
４日後、感染した単層をトリプシン処理により収穫し
た。サンプルを滴定し、そして他のサンプルを、ＱＴ３
５細胞の単層を（１：３０の比において）接種するため
に使用した。これらの単層を、８．７×１０5 細胞／cm
2 の濃度において３日前に接種しておいた。３日後、感
染した単層をトリプシン処理により収穫した。細胞懸濁
液を遠心分離により濃縮し、そして凍結培地中で３×１
０7 細胞／mlの濃度に希釈した。この細胞懸濁液を１ml
バイアル内に充填し、そして液体窒素中で凍結した。サ
ンプルを滴定し、そしてそのタイターは、１０6.72TCID
50／mlであった。これらのアンプルを、ワクチン・バッ
チ第２３継代、製造日１９９５年３月１３日と名付け
た。
を、ＱＴ３５細胞の単層を（１：２０の比において）接
種するために使用した。これらの単層を、８．７×１０
5 細胞／cm2 の濃度において３日前に接種しておいた。
４日後、感染した単層をトリプシン処理により収穫し
た。サンプルを滴定し、そして他のサンプルを、ＱＴ３
５細胞の単層を（１：３０の比において）接種するため
に使用した。これらの単層を、８．７×１０5 細胞／cm
2 の濃度において３日前に接種しておいた。３日後、感
染した単層をトリプシン処理により収穫した。細胞懸濁
液を遠心分離により濃縮し、そして凍結培地中で３×１
０7 細胞／mlの濃度に希釈した。この細胞懸濁液を１ml
バイアル内に充填し、そして液体窒素中で凍結した。サ
ンプルを滴定し、そしてそのタイターは、１０6.72TCID
50／mlであった。これらのアンプルを、ワクチン・バッ
チ第２３継代、製造日１９９５年３月１３日と名付け
た。
【００２３】種痘のために使用した継代は２３である。
それは、上記マスター種ウイルスから５継代目である。
１のバイアルのマスター種ウイルスから、±１２００ア
ンプルの作業種ウイルスを作出することができる。１ア
ンプルの作業種ウイルスを用いて、我々は、３７，５０
０，０００のニワトリを種痘するための、±３７，５０
０のアンプルのワクチンを製造することができる。
それは、上記マスター種ウイルスから５継代目である。
１のバイアルのマスター種ウイルスから、±１２００ア
ンプルの作業種ウイルスを作出することができる。１ア
ンプルの作業種ウイルスを用いて、我々は、３７，５０
０，０００のニワトリを種痘するための、±３７，５０
０のアンプルのワクチンを製造することができる。
【００２４】実施例２ ＱＴ３５細胞上で適応されたＲｉｓｐｅｎｓ株から製造
されたワクチンの効能上記ワクチンを、マレク病につい
ての欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｐｉａ）のモノグラフ５８９（１９９４）中に記載され
たように効能についてテストした。但し、ニワトリを、
そのモノグラフにより規定された９日間の間隔の代り
に、種痘５日後に接種した。９日後よりも５日後の接種
は、そのテストをより感受性にした。ＱＴ３５細胞上で
の継代のために、ＰｏｕｌｖａｃＭａｒｅｋ ＣＶＩバ
ッチ３６９を出発材料として使用した。実施例１に従っ
てＱＴ３５上で２１継代培養されたワクチンをテストし
た。
されたワクチンの効能上記ワクチンを、マレク病につい
ての欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｐｉａ）のモノグラフ５８９（１９９４）中に記載され
たように効能についてテストした。但し、ニワトリを、
そのモノグラフにより規定された９日間の間隔の代り
に、種痘５日後に接種した。９日後よりも５日後の接種
は、そのテストをより感受性にした。ＱＴ３５細胞上で
の継代のために、ＰｏｕｌｖａｃＭａｒｅｋ ＣＶＩバ
ッチ３６９を出発材料として使用した。実施例１に従っ
てＱＴ３５上で２１継代培養されたワクチンをテストし
た。
【００２５】１日齢ＳＰＦヒヨコを、それぞれ、通常の
ワクチン投与量（１０3.0 TCID50以上）を用いて１回種
痘した。種痘５日後、これらの鳥を、ビルレントなマレ
ク病ウイルス株を用いて接種した。接種後、これらの鳥
をマレク病の徴候について定期的に検査した。接種７０
日後、全ての鳥を殺し、マレク病の肉眼観察による病変
について検査した。上記研究の結果を表１に要約する。
ワクチン投与量（１０3.0 TCID50以上）を用いて１回種
痘した。種痘５日後、これらの鳥を、ビルレントなマレ
ク病ウイルス株を用いて接種した。接種後、これらの鳥
をマレク病の徴候について定期的に検査した。接種７０
日後、全ての鳥を殺し、マレク病の肉眼観察による病変
について検査した。上記研究の結果を表１に要約する。
【００２６】
【表１】
【００２７】これらの結果は、非種痘群中、鳥の８６％
が（欧州薬局方に該当する）マレク病をもつことを示し
ている。そして、ＱＴ３５上で製造されたワクチンは、
保護係数が少なくとも８０％でなければならないという
ことを言及している、欧州薬局方のガイドラインに適合
している。 結論：上記の実施において、ＱＴ３５細胞上で製造され
たマレク病ワクチンは、有効である。
が（欧州薬局方に該当する）マレク病をもつことを示し
ている。そして、ＱＴ３５上で製造されたワクチンは、
保護係数が少なくとも８０％でなければならないという
ことを言及している、欧州薬局方のガイドラインに適合
している。 結論：上記の実施において、ＱＴ３５細胞上で製造され
たマレク病ワクチンは、有効である。
【図１】図１中、（３×１０7 細胞当りlog TCID50とし
て表される）ウイルス・タイターを、それぞれ、ローラ
ー・ボトル又はＲｏｕｘフラスコ内でのＱＴ３５へのＭ
ＤＶ株ＣＶＩ９８８の適応にわたり各継代後に表す。
て表される）ウイルス・タイターを、それぞれ、ローラ
ー・ボトル又はＲｏｕｘフラスコ内でのＱＴ３５へのＭ
ＤＶ株ＣＶＩ９８８の適応にわたり各継代後に表す。
Claims (9)
- 【請求項１】 トリ無限増殖性細胞系上で増殖するよう
に適応したマレク病ウイルス〔ＭＤＶ血清型１〕。 - 【請求項２】 トリ細胞系がウズラ細胞系であることを
特徴とする、請求項１に記載のウイルス。 - 【請求項３】 ウズラ細胞系がＱＴ−３５細胞系である
ことを特徴とする、請求項２に記載のウイルス。 - 【請求項４】 ｔｈｅ ＣＮＣＭ ｏｆ Ｉｎｓｔｉｔ
ｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ（Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）に
寄託された株ｌ−１５８５のＭＤＶ。 - 【請求項５】 トリ無限増殖性細胞系上で増殖するよう
に適応したＭＤＶのウイルス材料を含有することを特徴
とする、マレク病に対する（食用）飼鳥類保護のための
ワクチン。 - 【請求項６】 トリ細胞系がウズラ細胞系であることを
特徴とする、請求項５に記載のワクチン。 - 【請求項７】 ウズラ細胞系がＱＴ−３５細胞系である
ことを特徴とする、請求項６に記載のワクチン。 - 【請求項８】 ｔｈｅ ＣＮＣＭ ｏｆ Ｉｎｓｔｉｔ
ｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ（Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）に
寄託された株ｌ−１５８５のＭＤＶから得られるウイル
ス材料を含有することを特徴とする、マレク病に対する
飼鳥類の保護のためのワクチン。 - 【請求項９】 ＭＤＶがその上で増殖するように適応さ
れているところの好適な無限増殖性細胞系上で、請求項
１〜５のいずれか１項に記載のウイルスを増殖させるこ
とを特徴とする、ＭＤＶの培養方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL95201540:2 | 1995-06-12 | ||
| EP95201540 | 1995-06-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0998778A true JPH0998778A (ja) | 1997-04-15 |
Family
ID=8220371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8145575A Pending JPH0998778A (ja) | 1995-06-12 | 1996-06-07 | マレク病ワクチン |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5789231A (ja) |
| EP (1) | EP0748867A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0998778A (ja) |
| CN (1) | CN1147015A (ja) |
| AR (1) | AR003003A1 (ja) |
| AU (1) | AU5240896A (ja) |
| BR (1) | BR9602719A (ja) |
| CA (1) | CA2178553A1 (ja) |
| HU (1) | HUP9601608A2 (ja) |
| IL (1) | IL118613A0 (ja) |
| MX (1) | MX9602256A (ja) |
| TR (1) | TR199600502A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA964878B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007022151A2 (en) | 2005-08-15 | 2007-02-22 | Vaxin, Inc. | Immunization of avians by administration of non-replicating vectored vaccines |
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|---|---|---|---|---|
| EP0884382A3 (en) * | 1997-06-10 | 2000-10-25 | Pfizer Products Inc. | Processes for preparation of marek's disease virus using continuous mammalian cell lines |
| EP1038952A3 (en) * | 1998-12-09 | 2001-06-27 | Pfizer Products Inc. | Processes for preparation of Marek's Disease Virus using continuous avian cell lines |
| US6410222B1 (en) | 1998-12-14 | 2002-06-25 | Juridical Foundation The Chemosero-Therapeutic Research Institute | In ovo vaccination of marek's disease type I virus |
| CN1688335A (zh) * | 2002-02-06 | 2005-10-26 | 洛曼动物健康两合公司 | 生产疫苗的连续细胞系 |
| FR2857671B1 (fr) * | 2003-07-18 | 2007-10-05 | Centre Nat Rech Scient | Nouveau procede de culture de keratinocytes et ses applications |
| EP1711619A4 (en) * | 2003-12-30 | 2007-04-11 | Virumar Pituach Tarkivin Ltd | INTEGRATED VIRUS COMPLEXES, METHOD FOR THE MANUFACTURE THEREOF, VACCINES CONTAINING THEM AND METHOD FOR THE USE THEREOF |
| ES2628074T3 (es) * | 2008-02-25 | 2017-08-01 | Nanotherapeutics, Inc. | Procedimiento de producción de líneas celulares continuas |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1292803A (en) * | 1968-11-18 | 1972-10-11 | Nat Res Dev | Improvements relating to the production of antigens |
| US4071618A (en) * | 1974-09-03 | 1978-01-31 | Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Process for preparing virus disease live vaccines |
| ATE4156T1 (de) * | 1979-02-06 | 1983-08-15 | Sigmund Stokland | Maehdrescher. |
| NL8401120A (nl) * | 1984-04-09 | 1985-11-01 | Centraal Diergeneeskundig Inst | Viruspreparaat, waarmee gevaccineerd kan worden tegen de ziekte van marek. |
-
1996
- 1996-05-13 EP EP96201311A patent/EP0748867A1/en not_active Withdrawn
- 1996-05-22 AU AU52408/96A patent/AU5240896A/en not_active Abandoned
- 1996-06-06 AR ARP960102975A patent/AR003003A1/es unknown
- 1996-06-07 MX MX9602256A patent/MX9602256A/es unknown
- 1996-06-07 CA CA002178553A patent/CA2178553A1/en not_active Abandoned
- 1996-06-07 JP JP8145575A patent/JPH0998778A/ja active Pending
- 1996-06-07 BR BR9602719A patent/BR9602719A/pt unknown
- 1996-06-07 ZA ZA964878A patent/ZA964878B/xx unknown
- 1996-06-10 IL IL11861396A patent/IL118613A0/xx unknown
- 1996-06-10 US US08/662,450 patent/US5789231A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-10 CN CN96111016A patent/CN1147015A/zh active Pending
- 1996-06-11 HU HU9601608A patent/HUP9601608A2/hu unknown
- 1996-06-12 TR TR96/00502A patent/TR199600502A1/xx unknown
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007022151A2 (en) | 2005-08-15 | 2007-02-22 | Vaxin, Inc. | Immunization of avians by administration of non-replicating vectored vaccines |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX9602256A (es) | 1997-01-31 |
| CA2178553A1 (en) | 1996-12-13 |
| IL118613A0 (en) | 1996-10-16 |
| AU5240896A (en) | 1997-01-02 |
| HU9601608D0 (en) | 1996-07-29 |
| CN1147015A (zh) | 1997-04-09 |
| HUP9601608A2 (en) | 1997-03-28 |
| ZA964878B (en) | 1997-01-07 |
| AR003003A1 (es) | 1998-05-27 |
| TR199600502A1 (tr) | 1996-12-21 |
| EP0748867A1 (en) | 1996-12-18 |
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