JPH09511216A

JPH09511216A - ユニラメラリポソーム性のアラキドン酸代謝物剤を用いる治療の方法

Info

Publication number: JPH09511216A
Application number: JP7513378A
Authority: JP
Inventors: オストロ，マルク、ジェイ; ジャノフ，アンドリュー，エス; ミンシェイ，シャルマ，アール
Original assignee: ザリポソームカンパニー、インコーポレーテッド
Priority date: 1993-11-04
Filing date: 1994-11-03
Publication date: 1997-11-11
Also published as: JPH09504793A; AU8132694A; EP0726764B1; KR100355247B1; NO961778L; ES2144118T3; DE69420859T2; DE69423773D1; EP0726763A1; NO312809B1; GR3032006T3; KR960705543A; CA2175896A1; CA2175057A1; AU8130894A; EP0726763B1; WO1995012388A1; NO961778D0; NO961779L; KR960705544A

Abstract

(57)【要約】この発明はプロスタグランジンＥ１のようなアラキドン酸代謝物を動物に投与する方法を提供するものである。この代謝物は動物、特にヒトに、脂質および放出抑制緩衝液を含有するユニラメラリポソームに結合した形で与えられる。この方法は細胞の活性化および付着化、炎症又は毒血症の特徴のある障害を持つ動物の治療のために用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】ユニラメラリポソーム性のアラキドン酸代謝物剤を用いる治療の方法本出願は１９９３年１１月１６日に出願された米国特許出願第０８／１５２，８５２号の一部継続出願であり、この第０８／１５２，８５２号は１９９２年１１月１６日に出願された米国特許出願第０７／８２１，６４８号で現在は米国特許第５，２６２，１６８号となっているものの一部継続出願である。第０７／８２１，６４８号は１９８８年５月１８日に出願された米国特許出願第０７／１９５，２２８号で現在は米国特許第５，０８２，６６４号となっているものの継続出願であり、この後者は１９８７年５月２日に出願され現在は出願放棄されている米国特許出願第０５３，３０５号の一部継続出願である。本出願はまた１９９４年１月１１日に出願された米国特許出願第０８／１８０，０８９号の一部継続出願であり、後者は１９９３年１１月４日に出願され現在は出願放棄されている米国特許出願第１４７，８９８号の一部継続出願である。本出願はユニラメラリポソーム性のアラキドン酸代謝物剤の治療のための使用に関する。種々のプロスタグランジンはいくつかのカテゴリーにグループ分けされ（Ａ− １）、これらはプロスタグランジン合成の間に炭素数２０の脂肪酸前駆体中に導入される炭素数５の炭素環上の種々の置換によって区別される。これらのグループはプロスタグランジンの炭素鎖中の二重結合の数および位置によって更に再分類される。プロスタグランジンは細胞の表面受容体を経由してその対象細胞に作用すると考えられる。これらの受容体は、プロスタグランジンの作用が仲介される第２のメッセンジャーシステムと関連（ｃｏｕｐｌｅ）していると考えられている。プロスタグランジンは広い生物活性スペクトルを有することができるものである。体の中の酵素はプロスタグランジンを速かに脱活性化する可能性がある。そのため、血清中に治療的に有効なレベルを保つためにはプロスタグランジンを高投与量で頻繁に投与する必要があり、その結果、プロスタグランジンによる治療には出費が嵩み、望ましくない副作用が生ずる恐れも出てくるのである。更に、プロスタグランジン脱活性が、血液が肺を通過する頃にまず起きるので、プロスタグランジンは通常動脈内に投与される。リポソーム製剤はアラキドン酸代謝物、例えばプロスタグランジンの循環半減期を延長させることができ、その結果、肺におけるその脱活性を回避できる。したがってこのようなリポソーム製剤は治療上の有効な享受をもたらすことができるのである。Ｍｉｚｉｓｈｕｍａ等〔ジャーナル・オブ・リューマトロジー（Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．）１４：９７（１９８７）〕およびＨｏｓｈｉ等〔ドラッグズ・エクスペリメンタル・クリニカル・ルサーチ（Ｄｒｕｇｅ．Ｅｘｐｔｌ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．１２（８）：６８１（１９８６）〕はプロスタグランジンＥ₁（ＰＧＥ₁）を含有する脂質微小球体を記載している。しかしながら、Ｍｉｚｉｓｈｕｍａ等（米国特許第４，４９３，８４７号）およびＩｍａｇａｗａ等（米国特許第４，４９３，８４７号）に記載されているようにこれらの“微小球体”は実際の所はプロスタグランジン含有エマルジョンであって、リポソームではなく、本発明のリポソーム性アラキドン酸代謝物剤で得られているような特性も効果も有していないのである。ＳｈｅｌｌおよびＳｅｅ（米国特許第４，８２０，７３２号および第４，９５５，８７８号）は、プロスタグランジン含有組成物を患者に投与することを含む血管形成手術の間の機能障害を軽減する処置を開示している。これらの組成物は担体をも含有している。しかしながら、記載されている脂質担体、例えば脱水アルコールおよび生理的食塩水は通常アラキドン酸代謝物を徐放させることはできないのである。この脂質をのせた微小球体担体は少なくとも赤血球の大きさ、即ち、直径７ミクロンで、それよりも大きくてもよいと記載されている。このような大きさの粒子を動物に投与した場合には、この微小球体が止まって動かなくなり、毛細血管例えば肺の毛細血管をつまらせることがあり、問題が起きる恐れがある。本発明で用いられているリポソームはこれとは対照的にその大きさは約５ミクロン以下、好ましくは約５０ｎｍから約１ミクロンの大きさであり、このようなリポソームは治療目的のために動物に安定に投与することができるのである。薬のリポソーム製剤は、該薬の毒性を低減させたり、あるいはその効能を高め、またはその両者によって治療指数を高めることができる。発明の実施に当って使用されるリポソーム性アラキドン酸代謝物は病気、機能障害、毒血症(toxemia )のような機能障害、炎症性機能障害、細胞活性化および癒着機能障害を直したり回避することができるものである。発明の要旨本発明はアラキドン酸代謝物を動物に投与する方法を提供するものであり、この方法は薬理学的に許容し得る担体、代謝物を含有するユニラメラリポソーム、脂質および放出−抑制水性緩衝液を含有する組成物を動物に投与するものである。この動物としては人間であることが好ましく、また投与法としては静脈内投与が好ましい。上記ユニラメラリポソームは大きなユニラメラリポソーム（ＬＵＶ）であることが好ましく、約１００ｎｍの直径を有するＬＵＶがより好ましい。動物に投与されるアラキドン酸代謝物はプロスタグランジンであることが好ましく、ＥまたはＩシリーズのプロスタグランジンがより好ましく、最も好ましいのはプロスタグランジンＥ₁である。脂質としては、飽和アシル鎖脂質であることが好ましく、より好ましくは、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である。好ましい緩衝液はクエン酸バッファーであり、ＰＨが約４．５のクエン酸バッファーがより好ましい。本発明の方法は、特に、細胞活性化および癒着炎症または毒血症の特徴ある機能障害に苦しんでいる動物の治療に用いることができる。このような機能障害としては、再潅流障害、心筋梗塞、血管閉塞症、成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、脈管炎、外傷性ショック、火傷、例えば痛風、リウマチ性関節炎、またはフィラリア性関節炎のような関節障害、および例えば全身性エリテマトーデス、若年型糖尿病、多発性硬化症または橋本甲状腺等の自己免疫障害が挙げられるが、これらに限定されることはない。最も適しているのはＡＲＤＳおよびＡＩＲＳである。本発明方法は、抗機能障害に有効な量のアラキドン酸代謝物を含有するリポソームを動物に与えるものである。一般的には、この代謝物の抗機能障害に有効な量は、該動物の体重１ｋｇにつき代謝物が少なくとも１０^-12ｇというものであり、通常体重１ｋｇにつき約１０^-12ｇから１０^-3ｇである。この有効量は体重１ｋｇにつき約１０^-8ｇから１０⁴ｇが好ましい。更に好ましいのは体重１ｋｇにつきアラキドン酸代謝物が約１０^-6ｇというものである。本発明方法に用いられるリポソームは乾燥保護剤を含有でき、脱水貯蔵し次いで使用前に再構築することができる。この脱水保護剤としては、マルトース、ラクトース、シュークロース、デキストロース、ラフィノースまたはトレハロースのようなサッカライドが好ましい。サッカライド乾燥保護剤としてはマルトースが好ましい。本発明の方法は更に抗炎症剤や抗菌剤等の生物活性剤を動物に投与することを含むことができる。図面の簡単な説明第１図血小板凝集に対するＬＵＶ−ＰＧＥ₁の効果を示す。ＬＵＶ−ＰＧＥ₁（ “Ｃ−５３”）は後述の実施例１記載の手順にしたがって調製。Ｘ軸：対照、０．１マイクログラム、０．６マイクログラム、１．１マイクログラムおよび１．１マイクログラム後投与ＬＵＶ−ＰＧＥ（各々体重１ｋｇにつき）（濃色影：コラーゲン、淡色影：Ｕ４６６１３）Ｙ軸：対照のパーセントである。第２図処置／対照の犬における心拍率：実験に対する耐性を示す。黒ぬりの四角：ＬＵＶ−ＰＧＥ₁；黒ぬりの三角：対照；＊：空のリポソーム；黒ぬりのひし形：遊離ＰＧＥ₁を示す。第３図左心房圧対実験耐久性を示す。黒ぬりの四角：ＬＵＶ−ＰＧＥ₁；黒ぬりの三角：対照；＊：空のリポソーム：黒ぬりのひし形：遊離ＰＧＥ₁を示す。第４図リスクのある領域のパーセントとして梗塞のサイズを示す。Ｘ軸：ＬＵＶ−ＰＧＥ₁、遊離ＰＧＥ₁、空のリポソーム、対照。Ｙ軸：梗塞のサイズ／危険なゾーン（％）第５図心筋組織からのミエロパーオキシターゼ放出。Ｘ軸：梗塞ゾーン、境目ゾーン、危険区域、対照ゾーン（濃色影：対照；斜線：空のリポソーム；縦線：遊離ＰＧＥ₁；格子：ＬＵＶ−ＰＧＥ₁）第６図皮膚の火傷後の肺機能障害をＬＵＶ−ＰＧＥ₁処置で回避する。Ｘ軸：対照、火傷、火傷＋ＬＵＶ−ＰＧＥ₁ Ｙ軸：アルブミン漏れ％（ｃｐｍ右肺／ｃｐｍ血）第７図ＩＬ−１を気管内に投与したラットにおける肺の漏れに対する空のリポソームまたは遊離ＰＧＥ₁の効果。Ｘ軸：食塩水対照、ＩＬ−１、ＩＬ−１＋ＬＵＶ−ＰＧＥ₁、ＩＬ−１＋空のリポソーム、ＩＬ−１＋遊離ＰＧＥ₁ Ｙ軸：肺の漏れ（ｃｐｍ右肺／ｃｐｍ血）第８図ラット内毒血症モデル。Ｘ軸：時間（日）ＬＰＳ投与後Ｙ軸：治療群における生存パーセント。黒ぬり四角：食塩水対照（０μｇ／ｋｇＬＰＳ）；白ぬき四角：１０μｇ／ｋｇのＬＰＳを投与されたラット；黒ぬりのひし形：１５μｇ／ｋｇＬＰＳ；白ぬきのひし形：２５μｇ／ｋｇＬＰＳ；黒ぬりの三角：５０ｐｇ／ｋｇＬＰＳ；白ぬきの三角：７５ μｇ／ｋｇＬＰＳ；黒ぬり丸：１００ｐｇ／ｋｇＬＰＳ第９図リポソームサッカライド（ＬＰＳ）に応答して、ヒト単核細胞ＴＮＦα およびＩＬ−１βの分泌の抑制Ｘ軸：遊離ＰＧＥ₁、ＬＵＶ−ＰＧＥ₁（ＰＧＥ₁を含有するユニラメラリポソームであり、この実施例に記載された方法にしたがって調製された）、偽薬ＬＵＶ（ＰＧＥ₁を含有しない大きなユニラメラリボソーム）、偽薬ＬＵＶ＋遊離ＰＧＥ₁ Ｙ軸：ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの分泌の抑制パーセント陰影のついていないもの：ＴＮＦα；陰影のついたもの：ＩＬ−１β 第１０図ＬＰＳが誘導した致死性の減弱Ｘ軸：ＬＰＳ投与後の時間（日数）Ｙ軸：治療群の生存率黒ぬり四角：生理的食塩水（ＬＰＳ非投与）；黒ぬりひし形：ＬＵＶ−ＰＧＥ₁；白ぬきのひし形：偽薬ＬＵＶ＋遊離ＰＧＥ₁；黒ぬり三角：偽薬ＬＵＶ；白ぬき三角：ＬＰＳ対照（リポソームもしくはＰＧＥ₁）；白ぬき四角：遊離ＰＧＥ₁ 第１１図遊離ＰＧＥ₁に誘導された致死性の排除Ｘ軸：生理的食塩水（ＬＰＳ、ＰＧＥ₁またはリポソームなし）、ＬＰＳ対照（ＬＰＳは投与しているがリポソームもしくはＰＧＥ₁はなし）、ＬＵＶ−ＰＧＥ₁、偽薬ＬＵＶ＋遊離ＰＧＥ₁、ＬＡＴＥＸ微小球体＋遊離ＰＧＥ₁、偽薬ＬＵＶ、ＬＡＴＥＸ微小球体Ｙ軸：処置群における生存率発明の詳細な説明本発明はアラキドン酸代謝物を動物に投与する方法を提供する。この方法は、薬理学的に許容し得る担体およびアラキドン酸代謝物をユニラメラリポソームと結合含有する組成物を動物に投与するものである。この動物としては人間が好ましく、投与方法としては静脈内投与がある。ここで用いられる“薬理学的に許容し得る担体”とは標準的な担体、希釈剤、賦形剤および動物、特に人間に生物活性剤を投与する際に一般的に使用されるものを意味する。このような担体は当該分野でよく知られているものであり、通常は、使用される個々の薬に応じ、また投与経路等の多くの因子を考慮して選択される。これらのことは当業者は熟知する所であり、過大な実験を行わずとも決定できるものである。好適な担体としては生理的食塩水（１０％ｗ／ｖ食塩水）、デキストロース水溶液、例えばＤ５Ｗ（５％ｗ／ｖデキストロース水溶液）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。この薬剤組成物は更に防腐剤、抗酸化剤等の補助剤を、当業者にとって周知の量で、また周知の目的のために使うことができる。リポソームは両親媒性脂質分子のバイレイヤーの１もしくはそれ以上を含有する自己構成性の構造を有し、該バイレイヤーの各々は水性画分を囲んでいる。したがってリポソームはユニラメラであること、即ち単一の脂質バイレイヤーを有することができ、またリポソームはマルチラメラであること、即ち２もしくはそれ以上の脂質バイレイヤーを有することもできる。本発明のリポソームはユニラメラリポソームである。該リポソームとは大きなユニラメラリポソームであることが好ましく、より好ましくは約１００ｎｍの直径のＬＵＶである。リポソームは当業者が熟知している種々の技術によって製造できる。例えばＬｉｐｏｓｏｍｅｓ（Ｍ．Ｏｓｔｒｏ編集）、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ（ニューヨーク）、２７〜５１頁（１９８３）中のＤｅａｍｅｒおよびＵｓｔｅｒの“リポソームの調製：方法および機構”、及びＬｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＦｒｏｍＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓｔｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｍ．Ｊ．Ｏｓｔｒｏ編）、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ、３９〜７２頁（１９８７）中のＣｕｌｌｉｓ等を参照されたい。Ｂａｎｇｈａｍの手法〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）１３：２３８（１９６５）〕はいわゆる普通のマルチラメラ小胞体（ＭＬＶ）、即ち２もしくはそれ以上の脂質バイレイヤーを有するリボソームを製造しており、その方法は１もしくはそれ以上の両親媒性脂質を溶解することを包合している。この脂質は続いて乾燥され、この乾燥した脂質は水溶液で再水和されＭＬＶを形成する。レンク等（米国特許第４，５２２，８０３号、第５，０３０，４５３号および第５，１６９，６３７号）、ファウンテン等（米国特許第４，５８８，５７８号）およびクリス等（米国特許第４，９７５，２８２号）は水性区画に捕捉された溶質を有するマルチラメラリポソームを製造する方法を開示しており、各区画における溶質の濃度は実質的に均一である。ユニラメラリポソームはエーテルもしくはエタノール注射または注入法によって形成することができる。ユニラメラリポソームはマルチラメラリポソームを圧力をかけ、クリス等（米国特許第４，９７５，２８２号）およびラフリー等（米国特許第５，０５９，４２１号）に従って規定されたフィルターを通して押し出すことによって製造することができる。ホモゲナイゼーション、粉砕音波処理およびフレンチプレス同様、押出し法はリポソームサイズを減小させることができ、準電光散乱法同様、リポソームフリーフラクチュア電子顕微鏡試験のような方法によって、どの手段を採るかを決めることができる。 “アラキドン酸代謝物”はプロスタグランジン類、あるいは例えば人工的もしくは動物体内でプロスタグランジン類に変換できるようなものである。プロスタグランジンは炭素数５の５員環で７および８個の炭素数の脂肪鎖を有するもので、アラキドン酸と少なくとも３個の二重結合を有する炭素数２０個の他の脂肪酸（例えば“必須”の脂肪酸である８，１１，１４−エイコサペンタン酸；例えばグッドマンアンドジルマンズザファーマコロジカルベーシスオブセラポイティックス、前出（ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ’ｓＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｓｕｐｒａ）を参照されたい）とから製造されるものである。アラキドン酸はこれらの炭素数２０個のプロスタグランジン前駆体の内、人間において最も量の多いものである。炭素数２０個の必須脂肪酸プロスタグランジン前駆体、プロスタグランジン合成の間に形成される中間体、例えばプロスタノン酸、およびこれらの化合物を変換し得るプロスタグランジンとの構造類似体、がここでいう“アラキドン酸代謝物”である。“プロスタグランジン関連化合物”、例えばロイコトリエン、スロンボキサン、リポキシンおよびプロスタサイクリンは、プロスタグランジンに機能的に関連した化合物を包合するものであり、これらはまた炭素数２０個の必須脂肪酸プロスタグランジン前駆体に由来し得るものである。プロスタグランジン、プロスタグランジン関連化合物およびエイコサノイド類も又、これらの化合物に変換され得る構造類似物と同様“アラキドン酸代謝物”である。本発明の実施に当って動物に投与されるアラキドン酸代謝物は好ましくはプロスタグランジンであり、より好ましくはＩシリーズのプロスタグランジンであり、最も好ましくはプロスタグランジンＥ₁である。アラキドン酸代謝物とリポソームの“結合”とは一般的にこの代謝物がリポソームの水性区画に取り込まれること、またはリポソームのバイレイヤーの内側もしくは外側モノレイヤーと結合すること、例えばこの代謝物とモノレイヤーの成分である両親媒性脂質の先頭部との間の静電相互作用によって結合することを意味する。本発明のユニラメラリポソーム製剤を形成する好ましい方法は該代謝物と脂肪酸とをエタノール中で、バリー等（米国特許第５，０７７，０５６号）に開示されている膜貫通濃度勾配を用い、バツリ等のバイオヒミカエバイオフィジカアクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ．ｅｔＢｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，２９８：１０１５（１９７３））の技術と同様にして結合するものである。この技術において、脂質とプロスタグランジンは、エタノールのような水と混合し得る有機溶媒中に共溶解し、次いで第１の水溶液中にゆっくりと添加する。場合によりブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）のような防腐薬をこの溶液中で該脂質と混合する。得られたリポソーム分散液は、例えばフィルター、好ましくは１００ｎｍの孔径の直交経路もしくは蛇行経路のフィルターより押出すことによって、より均一な集団へとサイズを減少させることができる。この処理に適したフイルターはＡｎｏｔｅｃＳｅｐａｒａｔｉｏｎｓで作製されたＡｎｏｐｏｒｅ（商標）のようなアルミニウムオキサイド多孔性フィルムである。このようなリポソーム集団は米国特許第５，００８，０５０号の押出し操作によって形成することができる。リポソームが加圧下フィルターを通過するこのような押出し操作は、リポソームのサイズを均一にさせるものである。リポソームを２個以上このフィルターを通す場合、この通過回数は所望のリポソームサイズを得るために必要なだけ行う。本発明で使用されるフィルターのサイズは最終的なリポソーム生成物の所望とするサイズに依って選択される。本発明では、約２００ｎｍより小さい平均直径を有するリポソームが好ましい。本発明で使用される個々のリポソームはその直径が約５００ｎｍより小さいことが好ましい。約１００ｎｍの直径のリポソームがより好ましく、それはこのサイズのリポソームが肺の毛管床を通過することが一般的に知られており、したがって他の器官や組織をも通過することができるからである。したがって約１００ｎｍの孔径のフィルターがこの押出し工程に好ましく使用される。このサイズの減小されたリポソームは２２０ｎｍのＭｉｌｌｉｐａｋフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｄｈｏｒｄ，ＭＡ）を通過させる等の消毒濾過を行うこともできる。本発明の方法に使用されるユニラメラリポソームは上記代謝物、脂質および放出抑制水性緩衝液を含有する。この脂質は好ましくは代謝物−脂質相互作用力を高めるものであり、それによってリポソームからの代謝物の放出を抑制するのである。このような脂質は“放出−抑制脂質”である。プロスタグランジン−脂質相互作用力を増加させしめる因子に基く脂質は、脂質バイレイヤーを水および他の小さな分子を通過させないような因子、例えばＶａｎｄｅｒＷａａｌｓ力、二極−二極およびアシル鎖の間の他の相互作用を増加させ、その結果、アシル鎖を該バイレイヤー中でより緊密に詰め込ませるような因子を包合するが、これらに限定されることはない。例えばバイレイヤーのアシル鎖中の二重結合の数はバイレイヤー中での鎖の互いの配置関係に影響を及ぼすものである。二重結合の数が少ないほどアシル鎖はより緊密にくっ付くこととなり、このバイレイヤーをプロスタグランジンが通過する際の障壁をつくり易い。したがって好ましい脂質は飽和アシル鎖を有する。飽和アシル鎖を有する好ましい脂質はジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）である。しかしながら、他の飽和鎖脂質も同様に用いることができる。リポソーム中の水性緩衝液も又、リポソームと会合しているアラキドン酸代謝物の放出を抑制もしくは止めることができる。このような水性緩衝液は“放出抑制水性緩衝液”である。好ましい放出抑制緩衝液の特徴としては、該代謝物との静電的反発を確立する能力や代謝物−脂質相互作用を強めることが挙げられるが、それらに限定されることはない。更に、より高い緩衝容量をもつ緩衝液、そしてそれ故所望のＰＨを維持する能力が高いものが好ましい放出−抑制緩衝液である。好ましい放出−抑制緩衝液はクエン酸緩衝液であり、特に好ましいのはＰＨが約４．５のクエン酸緩衝液である。本発明の方法は、特に、細胞活性化および癒着炎症または中毒症の特徴ある機能障害に苦しんでいる動物の治療に用いることができる。この方法は抗機能障害に有効な量の代謝物を有するリポソームの量を動物に投与するものである。このような機能障害としては、再潅流障害、心筋梗塞、血管閉塞症、成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、脈管炎、外傷性ショック、火傷、例えば痛風、リウマチ性関節炎、またはフィラリア性関節炎のような関節障害、および例えば全身性エリテマトーデス、若年型糖尿病、多発性硬化症または橋本甲状腺等の自己免疫障害、が挙げられるが、これらに限定されることはない。ある種の機能障害は細胞の、例えば血液中の血小板および好中球の異常な活性化という特徴を有し、続いてこれらの細胞を互いに接着させるか、または周囲の血管内皮中において活性化細胞となる。このような細胞活性化および癒着機能障害は医療病理学の広い分野での深刻な問題である。内皮細胞、例えば血管、複数、心膜もしくは腹部の内被細胞はサイトカイン、例えばインターロイキン−１（ＩＬ−１）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−アルファ）もしくは細菌エンドトキシンによって活性化する可能性がある。同様に、血球特に好中球および血小板はＧＭ−ＣＳＦ、細菌エンドトキシン、細菌化学誘引剤（ｂａｃｔｅｒｉａｌｃｈｅｍｓａｔｔｒａｃｔａｎｔｓ）、ＴＮＦ−アルファおよび補体Ｃ５ａ成分のような薬剤によって活性化することがある。活性化された細胞は互いに付着する付着部位をその表面に有している。活性化され付着し合った細胞は塊を形成する可能性があり、それによって肺や心臓にあるような小血管をつまらせることになり、周囲の組織への血流を減少させることになるのである。この活性化細胞は活性化された血管内皮細胞に付着することにもなる；このような付着によって血管内皮の脱顆粒へ、または細胞破壊の媒介物質、例えばスーパーオキサイドアニオン（Ｏ₂ ^-）および蛋白分解酵素の放出へと続くことになる。本発明が対象としている細胞活性化および癒着化による機能障害としては再潅流機能障害、例えば閉塞した血管の再潅流、すなわち血流が一時的に止まっている手術に付随するようなものである〔例えばロイコサイトアドヘジョンモレキュール（ＬｅｕｋｏｃｙｔｅＡｄｈｅｓｉｏｎＭｏｌｅｃｕｌｅｓ），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９０）、１３８−１４８頁中のＳｅｅｗａｌｄｔ−Ｂｅｃｋｅｒ等、“再潅流障害に対する抗−付着抗体の効果”（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ等、編）；およびＬｅｕｋｏｃｙｔｅＡｄｈｅｓｉｏｎＭｏｌｅｃｕｌｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９９０）、８５−１５６頁中の“病気における付着および治療”（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ等、編）を参照されたい〕。血管壁に破れが生ずると、下流の虚血性組織と同様、周囲の内皮細胞が損傷されることになる。閉塞が排除されたとき近くの内皮細胞に更に損傷が生じているのである。このような損傷細胞は、影響を受けた領域への血流の回復後、好中球または血小板中に活性化を誘導することになるのである。活性化され次いで細胞間での接着が生じた細胞はまたアラキドン酸代謝物の表面受容体をもつこともできる。何らかの理論があるわけではないが、これらの受容体に結合することによってアラキドン酸代謝物で治療することにより、細胞間の接着性の高さを起こしている細胞表面受容体を脱活性化することにより細胞活性化および癒着機能障害と関連している損傷を軽減することができるのである。ＰＧＥ₁およびＰＧＩ₂は、冠状動脈の周囲に閉塞わな（ｓｎａｒｅ）を置くことによって心筋梗塞を起こさせた後、再潅流した犬における梗塞サイズを減少させる効果はほんの僅かなものに過ぎないことが見出されている〔Ｊｕｇｄｕｔｔ等、ＣｏｎｓｃｉｏｕｓにおけるＣｏｒｏｎａｒｕｓｉｏｎ後の心筋梗塞に対するプロスタサイクン、プロスタグランジンＥの相違、サーキュレーションＣＨ，４９（３）：６８５−７００９８１〕。報告されている試験では、このプロスタグランジンは６時間にわたって継続的な動脈注入によって投与され、比較的大量の薬が投与される。この継続的な注入の必要性は、遊離、即ち非リポソーム性のＰＧＥ₁のようなプロスタグランジンがｉｎｖｉｖｏで非常に短い半減期を有していることによるものであり、有効な血中濃度を保つには継続してそれを補給しなければならないのである。更に、このプロスタグランジンは、血液が肺を通過するときに急速に不活性化され、このことが簡単な静脈投与よりは動脈注入が必要となるのである。それに加えて、ｉｎｖｉｖｏでの高レベルのＰＧＥ₁ の分布は低血圧、心悸亢進および下痢というような全身的な副作用を生じることが知られている。ＡＲＤＳ，例えば外傷性傷害、火傷、敗血症、過呼吸症になるような傷害を患者が受けたとき、肺以外の多くの体内の器官が影響を受ける。この条件の理由および臨床のコースは大きく変わるものである。例えば、重い感染症の患者の場合、細菌細胞壁からエンドトキシンが放出され、炎症性の連続反応が始まり、敗血性ショックへと進むのである。再び、敗血性／外傷性症候群は感染にのみその因果関係を求めることができるわけではないのでエンドトキシンが関与していない可能性もあるが、それにもかかわらず、ＴＮＦ、ＩＬ−１補体およびロイコトリエンのような因子の放出が誘導されるのである。血管形成術（Ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ）は、閉塞血管を開くために閉塞動脈中に風船を挿入し膨らませる技術である。この技術はこの方法に続く６ヶ月の間冠動脈の病気を管理する際の極めて通常のものとなっているが、この治療を受けた患者の内３３％を超える人が再狭窄を経験し、即ち先に開いておいた血管の再閉塞を経験しているのである。この状態は、上記風船方法によってしばしば起こる血管内皮の傷害に伴って始まると考えられている。露出した細胞外基質は直ちに活性化血小板の数層と結合するのである。一旦、血小板が結合すると種々の成長因子を放出し、その結果血管の下にある平滑筋細胞を増殖させ血管が再閉塞することになるのである。血小板が細胞外基質に結合することを防ぐことによって、再狭窄へと続く一連の工程を破壊することができる。即ち、血管形成術法の際に血小板付着を防ぐ、薬剤の投与を行なうことによって再狭窄を防ぐことができる。近年、ＤｅＳｅｒｖｉ等はユーロピアンハートジャーナル（ＥｕｒｏｐｅａｎＨｅａｒｔＪｏｕｒｎａｌ，“ＰＴＣＡを受けている不安定な扁桃炎（ａｎｇｉｎａ）患者におけるプロスタグランジンＥ投与；初期結果”を、血管形成術の前および後にＰＧＥ₁を冠動脈注入された不安定な扁桃炎の患者における臨床試験の結果を発表している。この薬剤は２４時間以上にわたって注入された。この研究の結果はＰＧＥ₁−処置群における血管形成術後６ヶ月における再狭窄の割合が、ＰＧＥ₁による処置が２４時間しか続けられなかったにもかかわらず、非処置の対照群に対してほとんど５０％減少したことを示している。急性心筋梗塞（心臓発作といわれることが多いが）は心臓の筋肉への血液の供給が、通常は血のかたまりによって閉塞されるものである。血液が心臓に到達することをあまりにも長時間妨げられてしまうと患者は死に到る。冠動脈の閉塞が起きた場合、ティシュープラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）もしくはストレプトキナーゼフィブリン溶解剤を投与して血塊を溶解するか、閉塞が自ら溶解するのを待つかである。どちらの場合も、血液は心臓の虚血性（酸素欠乏）域に再び流れ始めるのである。心臓中への血液の再流を再潅流と呼ぶ。再灌流は患者の命を救うために必要なことであるが、再灌流傷害と呼ばれる心筋に更に傷をつくることにもなるのである。再灌流傷害は炎症連鎖の最終工程であることが知られている。血塊の除去の後に起こる再灌流傷害の問題に加えて、心筋梗塞に苦しむ患者は他の２次的な問題に苦しむことになるのである。例えば、正常な血流が心臓に回復した後、好中球および血小板の両者が活性化される。活性化された血小板はしばしば互いに付着し、冠動脈を再閉塞し始め、心臓への血流の割合をくり返し（ｏｖｅｒｔｉｍｅ）減少させるのである。ある場合には完全な再閉塞が生じるのである。ＰＧＥ₁は好中球が内皮細胞に結合することを妨げるのに加えて血小板の凝集を妨げ、非再灌流現象を全く除去しないまでも減少させるのである。Ｓｈａｒｍａ等、ジアメリカンジャーナルオブカルディオロジー（ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ），“ 急性心筋梗塞における冠動脈内のプロスタグランジンＥ₁プラスストレプトキナーゼ”，１１６１頁、１９８６年１２月、５８巻は、臨床的急性心筋梗塞において、冠動脈中へのストレプトキナーゼと共に遊離ＰＧＥ₁をゆっくりと冠動脈内に注入投与することによって、冠動脈内へのストレプトキナーゼ単独投与の対照群と比べて良好な臨床結果を与えることを示した。この結果は再灌流への時間が短縮され、必要とされるストレプトキナーゼの投与量が減少され１０日後の血管容量のパーセンテージの増加およびより高い排出画分へとつながるものである。この研究の欠点は、薬剤をゆっくりと冠動脈内注入によって投与しなければならず、これが面倒でありまた特別の施設や高度に訓練された人手が必要ということにつながるのである。更にまた、ＰＧＥ₁は血圧が非常に低下することがあるので、この方法ではＰＧＥ₁を注意深く点滴しなければならないのである。炎症は、傷に応答して影響を受けた血管およびその周囲の組織に生じる細胞的および組織的反応の過程である〔例えばステッドマンズメディカルディクショナリ（Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓＭｅｄｉｃａｌＤｉｃｔｉｏｎａｒｙ）（図解つき）（２４版、Ｊ．Ｖ．Ｂａｓｍａｊｉａｎ等、編，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ（１９８２），７０７− ７０８頁を参照されたい〕。このような刺激に応答する炎症は局部的な反応、その結果生じる形態的な変化、傷害物の破壊もしくは除去および修復機構の活性化を含むものである。即ち、炎症は動物が自分自身で回復する過程の一部となり得るものである。しかしながら、炎症は異常な生理的刺激に応答しても起こるものであり、生体内の問題の原因となるものなのである。例えば関節は痛風、フィラリー関節炎、リウマチ関節炎およびＬｙｍｅ疾のような関節炎状態で炎症を起こすのである〔例えばＳｔｅｄｍａｎ’ｓＭｅｄｉｃａｌＤｉｃｔｉｏｎａｒｙ（図解つき）、前出、１２３−１２４頁を参照されたい〕。これらの状態は、細胞の内出血、即ち、循環系からの炎症部位への細胞が出てくるようなことに特徴づけられる。プロスタグランジンのような薬剤はこのような内出血を抑制したり、異常な生理的刺激に対する炎症応答を抑制するものであるが、炎症を好転させるものである。毒血症は感染剤、例えば毒素および宿主動物に対して毒性のある他の物質を含有する微生物によって感染する過程で見られる臨床的徴候である。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのようなある種のグラム陰性バクテリアによる感染の間にリポポリサッカライド（ＬＰＳ）が細胞壁からそれが破壊されるにつれて放出される。そしてこのＬＰＳが宿主動物中の細胞の死をもたらすものである。毒血症的な状態はＬＰＳのような毒素が利用し得るようになった動物において生ずるものであり、即ち敗血性の状態で、あるいは循環系中の微生物の増殖によって引き起こされる全身的な病気の状態で生じるものである〔例えばＳｔｅｄｍａｎ’ｓＭｅｄｉｃａｌＤｉｃｔｉｏｎａｒｙ（図解つき）、前出、１２７４−１２７５および１４６４頁〕。毒血症は外傷性刺激、例えば物理的もしくは化学的外傷に動物を会わせることからも生ずるのである。全身性エリテマトーデス、若齢糖尿病、多発硬化症および橋本甲状腺症のような“自己免疫傷害”は動物の免疫系が自分自身の組織を攻撃するということが特徴である。アラキドン酸代謝物の“抗−傷害有効量”とは、細胞の活性化および付着化、炎症、毒血症、あるいは本発明の方法によって治療される傷害と関連している他の徴候を治療、抑制または防止する有効な量を指す。通常、該代謝物の有効量は動物の体重１ｋｇ当り少なくとも約１０^-12ｇの代謝物といった所であり、好ましくは約１０^-12ｇ／ｋｇから約１０^-3ｇ／ｋｇである。より好ましくは該代謝物の有効量は約１０^-8ｇ／ｋｇから約１０^-4ｇ／ｋｇであり、最も好ましい有効量は動物の体重１ｋｇ当り約１０^-6ｇのアラキドン酸代謝物を含有するものである。一般的に、該リポソーム性代謝物が遊離の代謝物の投与量に比べて非常に少ない投与量で済むことは好ましい効果につながるものである。先に述べたように、ｉｎｖｉｖｏでの遊離のプロスタグランジンの急速な代謝の故に、治療を受ける患者における有効血中濃度を保つためには比較的大量のこれら薬剤を長期にわたって継続して注入することが必要とされてきた。しかしながら、高血中濃度のプロスタグランジンによって血圧降下、頻脈および下痢が引き起こされるため投与できる遊離のプロスタグランジンの量は制限されている。更に、プロスタグランジンは高価であるためこのように大量に投与すると法外に高い治療となってしまう。本発明の方法はコストを下げまた少ない副作用で有効にアラキドン酸代謝物を投与することを可能にしている。アラキドン酸代謝物、例えばプロスタグランジンによる治療によって、細胞の活性化および付着、毒血症、炎症および他の徴候によって特徴づけられる傷害に悩まされている動物にあらわれる損傷を軽減することができる。細胞活性化剤のための受容体を有する細胞は該代謝物に対する表面受容体をも持つことができるのである。代謝物がその受容体に結合したとき細胞間の付着を高レベルで行なわせる元となる該表面受容体を脱活性化することができる。この脱活性化機構は、代謝物／受容体相互作用により高められた細胞内ｃＡＭＰ濃度のプロテインキナーゼＡにより仲介される上昇によるものと考えられている。細胞−細胞結合がない場合はＯ₂ ^-や種々の分解酵素のような補因子（ｃｏｆａｃｔｏｒ）が放出されず、それによって組織の損傷を防ぐことができるのである。ＰＧＥ₁は好中球および血小板が活性化血管内皮細胞に結合することを抑制する他、それらの凝集を抑制し得るものとして提案されている。ＰＧＥ₁のようなアラキドン酸代謝物はまた、炎症を防ぐと共に炎症が起きている場合にはそれを消滅させる力があると考えられている。炎症の仲介物たる好中球による細胞外放出は環状アデノシンモノリン酸塩（ｃＡＭＰ）の細胞内貯蔵の増減によって調節されることが見出されている。炎症の仲介物たる好中球による細胞外放出は環状アデノシンモノリン酸塩（ｃＡＭＰ）および環状グアノシンモノリン酸塩（ｃＧＭＰ）の細胞内貯蔵の増減によって調節されることが見出されている。ｃＡＭＰの増加は炎症の仲介物の放出を減少させ、一方ｃＧＭＰの増加はこれらの仲介物の排泄を増強させる。ｃＡＭＰはまず初めには炎症を開始するのもかかわらず、細胞内のｃＡＭＰ濃度が増加すると炎症を消滅させることができるので、ｃＡＭＰは“自在オフスイッチ”と呼ばれることがある。重要なことは、ＰＧＥ₁のようなある種のプロスタグランジンがｃＡＭＰを増加させ、それ故ＰＧＥ₁を抗炎症剤を用いることに合理性があるのである。ＰＧＥ₁は“自在オフスイッチ”を活性化することができる薬剤と考えるこができる。ｉｎｖｉｖｏで、ＰＧＥ₁は、細胞−細胞付着を仲介するに必要な受容体の活性化を防ぐことによって、内皮細胞ばかりでなく、好中球および血小板が互いに付着することを抑制することが観察されている。この抑制は細胞内ｃＡＭＰの増加と一致している。細胞−細胞結合がない場合には、Ｏ₂ ^- や種々の分解酵素のような補因子は放出されることができず、そして細胞損傷は除かれるのである。したがってＰＧＥ₁は抗炎症剤として効力のあるものとして実際に作用するのである。ＰＧＥ₁は炎症の仲介因子がＩＬ−１、ＴＮＦ、補体ロイコトリエンその他のいずれかであるかにかかわらず、炎症の防止および除去を行なうことができるのである。リポソームは、プロスタグランジンをその作用が望まれる部位へ運ぶために特に有利な搬送体となることができる。特にそのための理論や機構にしばられることはないが、リポソームは活性化細胞に引き寄せられ、活性化表面にくっつくと考えられている。プロスタグランジンは傷の部位において着定に利用されその抗細胞付着作用を行なうのである。リポソームが活性化細胞に付着し易いという一つの理論としては、リポソームが血液中のフィブロネクチンやヒドロネクチンによって食菌作用を受けるというものである。食菌作用は、細菌が食細胞によって容易に且つ効率的に飲み込まれるように変換される手段である。即ち、食菌作用を受けたリポソームは、フィブロネクチンおよびヒドロネクチンに対する受容体を発現する活性化好中菌に容易に引き付けられ、それによって会合プロスタグランジンを影響を受けている部位へと運んで行くのである。アラキドン酸代謝物がリポソームの脂質バイレイヤーを貫通したｐＨ勾配によってリポソームと会合しているリポソーム性アラキドン酸代謝物剤は治療的に有効であり得る。内部に酸性クエン酸緩衝液のような緩衝水溶液、特にｐＨ４．５のクエン酸緩衝液を有するリポソーム製剤はバイレイヤー透過性のｐＨ勾配を確立するのに好適である。このような勾配によるリポソームと会合しているアラキドン酸代謝物はこのｐＨ勾配が維持されている限り、リポソームと会合し続けようとする傾向にある。しかしながら、リポソームが投与された動物の体内でこの勾配が崩壊し、その後内部ｐＨが上昇した時には、アラキドン酸代謝物は一般にリポソームと会合しなくなるのである。リポソームと会合している場合よりもこの非会合の代謝物は好中球のような細胞上の対応表面受容体と互いに反応し易くなり、活性化されて続いて細胞内付着し易くなるのである。本発明の実施に当って使用されるユニラメラリポソームは、乾燥保護剤、例えばサッカライエド、尿素、デキストリン、アルビミンまたはポリビニルアルコールのような親水性化合物であることが多いが、この乾燥保護剤を含有することができ、リポソーム中の脂質の再配置を抑制することができ、及びそれによって該リポソームが脱水後に再構築されたときこのリポソーム中に始めから入っていた実質的な部分はそこに残っていることになる。乾燥保護剤は一般的に強い水素結合受容体で、このバイレイヤー成分の分子内スペーシングを保つために好適な構造化学的特性を有している。マンノース、ガラクトース、トレハロース、ラフィノース、マルトース、シュークロース、ラクトースまたはデキストロースのようなサッカライドが好ましい乾燥保護剤であり、中でもマルトースが特に好ましいものである。乾燥保護剤としてのサッカライドは、リポソームを調製するために使用される水性相の約５〜約２０重量％、好ましくは約１０重量％で用いられる。マンニトールはいずれのサッカライドとも協同して用いることができるが、単独で用いた場合にはリポソームの大きさを保つことができないことが判明した。マンニトールは約０〜２％、好ましくは１％の濃度でサッカライドを一緒に用いることができる。サッカライドの総濃度は約５％から約２０％、好ましくは１０％から１２％、最も好ましくは約１０％である。製剤中にＢＨＴまたはＥＤＴＡのような他の防腐剤を更に用いることができ、例えばエタノール１ｍｌに対して５ｍｇのＢＨＴ、１０％のデキストロース中の０．０１％ＥＤＴＡなどがその例として挙げられる。リポソームを脱水することによって、長期間リポソームを貯蔵することができ、投与の際に必要な態様となるように再構築することができる。脱水はシュナイダー等（米国特許第４，２２９，３６０号）およびジャノフ等（米国特許第４，８８０，６３５号）の方法に従い、リポソームと乾燥保護剤を一緒に用いて行うのが好ましい。上記特許は参考のために記載している。脱水が前凍結なしに行われ、リポソーム製剤がその脱水−水和工程の間、リポソームバイレイヤーの実質的部分は保っている程度に十分な水が残っている場合には、この乾燥保護剤を使用しないことができる。凍結乾燥されたプロスタグランジン−リポソーム製剤は、６℃、もしくは２５ ℃で貯蔵されたとき少なくとも１年間は安定である。アラキドン酸代謝物をリポソーム膜中に導入し、続いて凍結乾燥することによって該代謝物を水から遮蔽することができ、それによって加水分解を抑制することができるのである。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて該製剤の安定性を見た所、６℃で１年間貯蔵したものではＰＧＥ₁の分解産物は存在していなかった。凍結乾燥されたリポソームが使用されるとき、再水和は蒸留水、注射用水（ＷＦＩ）または前述の緩衝液もしくは適当なｐＨの水溶液のような、水溶液をリポソームに添加することによって行われる。このリポソームは次いで静かに混合することにより該水溶液中に懸濁される。この再水和はやく２５℃で行われる。本発明の方法は、該リポソームが会合しているアラキドン酸代謝物に加えて生物活性剤を動物に投与することができる。“生物活性剤”は動物に投与できるものであればどのような化合物でも組成物でもかまわない。これらの薬剤としては動物の体内で生物的活性のあるものの外、造影または診断の効果のあるものも含む。生物活性剤としては、抗ウィルス、抗細菌、抗かび、抗寄生虫、抗代謝、抗緑内障、抗炎症もしくは抗腫瘍性化合物、ステロール、炭水化物、アミノ酸、ペプチド、蛋白質、イムノグロブリン、免疫調節剤、染料、毒素、酵素、ホルモン、神経伝導物、糖蛋白質、放射性標識物、放射性不透性化合物、螢光物、細胞受容体蛋白質、細胞受容体リガンド、散瞳性化合物、気管支拡張剤、局部麻酔剤、成長促進剤、再生剤等が挙げられるがこれらに限定されることはない。特別の指示のあるもの、例えばその動物が非常に苦しんでいる他の徴候がある場合にそれを治療するために必要を当業者が考えている他の生物活性剤を選択することができる。この追加的な生物活性剤として、アラキドン酸代謝物を更に追加することもできる。本発明を以下の実施例に更に詳しく説明する。しかしながら、当業者が理解しているように、これらの実施例は単に本発明をより詳しく説明するためのものである。実施例実施例１リポソーム製剤リポソーム性ＰＧＥ₁の１，５００ｍｌバッチを次の成分によって調製した。調製１，３５０ｍｌの注射用水をビーカーに加え、少なくとも３０分間、窒素を導入した。１５０ｇのマルトース（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、フィリップス、ＮＪ）をこの水に加え窒素の導入を続けながら溶解するまで混合した。これによってｐＨ４．８１の混合物１，４４０ｍｌが得られた。他のビーカーで７．０６ｇの卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）（日本油脂、兵庫、日本）を６ｍｌのエタノール（無水物）に加え、溶解するまで混合し、４５ｍｇのＢＨＴを添加し次いで溶解するまで混合した。この混合液に１５ｍｇのＰＧＥ₁を添加し次いで溶解するまで混合し、残りの２．３７ｍｌのエタノールにより測定コンテナ中に残っているＰＧＥ₁を洗い流して混合物中に加える。エタノール溶液を１０ｍｌ容のガラスシリンジ中に入れ、窒素を導入しつつ急速に混合しながら、１１分間かけてゆっくりと１４ゲージのカニューラを通してマルトース溶液中に混入した。エタノール／脂質混合物を添加すると溶液は濁ってリポソームの生成を示した。この懸濁液を残りの注射用水で最終的に１，５００ｍｌとなるまで希釈した。続いてこのリポソームを、０．２μｍの孔サイズのＮｕｃｌｅｏｐｏｓｅ（登録商標）ポリカーボネート直行形フィルター（ヌクレオポア、プレサントンＣＡ）に３回押出し、続いて同様の０．１μｍフィルターに５回通した。得られたリポソームの粒子サイズは、準電子光散乱法（ＱＥＬＳ）（ニコンプパーティクルサイザー）を用いて測定した所、０．１６９μｍであった。この大きさを揃えたリポソーム分散液を０．２２μｍミリパック消毒フィルターを通過させた。１０．５ｍｌの分散液標本をバイアル瓶に詰め、実施例２に記載の方法で凍結乾燥し、凍結乾燥生成物を作成した。このものは直ちに使用可能であり将来の使用に備えて貯蔵し得る。この凍結乾燥生成物を１０ｍｌの０．０１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．３）で再水和した所、得られた懸濁液は約ｐＨ４．３のｐＨを有した。リポソーム中へのＰＧＥ₁の取り込みをＨＰＬＣで測定した結果、使用し得るＰＧＥ₁の少なくとも９８％が再水和分散液１ｍｌにつき約９．０マイクログラムのＰＧＥ₁の濃度で、リポソーム中に取り込まれていることが判った。凍結乾燥操作５０ｍｌ容の先が分かれていてブチルゴムで栓をしたフリント凍結乾燥瓶に、ＰＧＥ₁含有の１０．５ｍｌリポソーム水性懸濁液を詰めた。このバイアル瓶を凍結乾燥器（ＰＶ−２４ＳｔｏｋｅｒＬｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒ）中の棚に置いた。これらバイアル瓶を１．５時間、０℃に保持した。次いで棚温度を０．８℃／分の割合で−４５℃にまで低下させ１時間、その温度に保ち、その後、１００μ ｍＨｇの真空とした。続いてこの棚温度を、１００マイクログラムＨｇの真空に保ちながら−２８℃にまで０．５℃／分の割合で上げた。このバイアル瓶を１００ｐｍＨｇ真空下−２８℃に５０時間保った。この棚温度を、０．５℃／分の割合で＋２５℃に上げ、２２時間保った。このバイアル瓶を部分真空下、栓をした。急性心筋梗塞／リポソーム性ＰＧＥ₁のｉｎｖｉｖｏ試験実施例１の再水和リポソームを、閉塞血管により生ずる心筋梗塞の治療に付随して生ずる再潅流傷害を軽減する手段としてｉｎｖｉｖｏで試験した。全体で５３匹の状態のよい２５〜３５ｋｇの犬について、該リポソームの投与範囲および梗塞を研究した。次のような犬は分析から除外した：梗塞域への側副枝の広がり（４）、解剖時に心臓寄生虫が見出されたもの（１）および梗塞の間に心臓が停止したもの（１）、４０匹の犬が生き残り、その内の２７匹が分析に適していた。：７匹は対照、リポソーム性ＰＧＥ₁（ＬＵＶ−ＰＧＥ₁）およびリポソーム −対照（空、即ちリポソームのみ）の各グループに、そして６匹がＰＧＥ₁−対照（遊離ＰＧＥ₁）グループに割当てられた。まず、心筋梗塞のために使用する適当な投与量を決めるために投与量試験が行われた。リポソーム性ＰＧＥ₁を投与量を増加させながら与え、心搏数、平均動脈圧、心出力および肺毛細ウェッジ（ｗｅｄｇｅ）圧を測定した。一定時間毎に採血をして血小板凝集試験を行った（第１図）。丸剤（ｂｏｌｕｓ）として１０〜２０分以上かけて２．０μｇ／ｋｇより多量の剤を投与することによって著しい心悸亢進および心出力の非常に大きな増加（二倍）を伴った一過性の低血圧が生じた。血小板凝集は０．１μｇ／ｋｇで部分的に抑制され、０．６μｇ／ｋｇで全体的に抑制された。１０分間以上にわたる０．５μｇ／ｋｇの投与では心搏数および心出力をわずかに増加させるようであった。潜在的な結果を最適なものとするために、リポソーム性ＰＧＥ₁を各々０．５μｇ／ｋｇを有する２種の剤が選択された。１つの注射剤は梗塞に関係した動脈の閉塞直後に投与し、他のものは再潅流の直前に投与した。このやり方は虚血状態の間および再潅流の初期の効果を保証するためのものである。このリポソーム性ＰＧＥ₁の効果は投与後しばらくの間続いているようであった。この観察は、血小板凝集および血管内皮細胞および細胞外基質への付着に直接関与している血管形成術に続いて起こる再潅流および再潅流の後の再閉塞に対して重要なものである。リポソーム性ＰＧＥ₁、遊離ＰＧＥ₁、空のリポソームおよび対照グループの心搏数に対する効果が試験された。テストされた犬はペントバルビタールナトリウムで麻酔し、ペントバルビタールおよびＩｎｏｖａｒ（登録商標）（ｄｒｏｐｅｒｉｄｏｌ／ｆｅｎｔａｎｙｌ）の静注を続けた。左下降大動脈を結索することにより動脈閉塞の状態をつくった。閉塞後１０分間してから、第１のグループには０．５μｇ／ｋｇのリポソーム結合ＰＧＥ₁ を１０分以上にわたって静注投与し、第２の対照グループは処置をせずそのままにした。リポソームの注入は心搏数を増加させる傾向にあり、これはＩｎｏｖａｒを追加して少量投与することによってある程度中和されるものであった。試験の結果、対照群と処置群の間で該実験の間、心搏数には大きな違いはなかった。閉塞後１００分間して、１０分間にわたって０．５μｇ／ｋｇの第２回投与を行なった。２時間してから結索を取り除き、血管の急速な再潅流を生ぜしめた。２時間後、その一匹の犬を安楽死させ、心筋梗塞による損傷を見るために心臓を検査した。その結果を第２図にまとめている。遊離ＰＧＥ₁を投与されたグループは第１回の投与後に心搏数の大きな増加を示し、それが再潅流まで続いた。この増加は他の３グループのいずれにも見られないものであった。この増加は血管拡張による代償の心悸主進であるとされている。対照群には全部で７匹の犬がおり、また７匹の犬にリポソーム性ＰＧＥ₁を投与した。試験期間中、平均動脈圧は比較的一定に保たれ、該対照群と処置群とで大きな違いはなかった。閉塞後各群で平均左動脈圧が上昇したが、グループ間で大きな違いはなかった。結果を第３図にまとめている。予想されるように、１５μｍの放射性微粒子で測定した心筋の血流は閉塞後全ての群で有意の低下を示した。試験動物中リポソーム性ＰＧＥ₁導入後のｃｏｌｌａｔｅｒａｌ血流において有意の改善は見られず、この事はリポソーム性ＰＧＥ₁の微小管血管拡張効果は最小のものであった事を示している。投与を受けた犬は対照のものに比べ再潅流によってその血流が有意に増加した。その心臓を調べた所、危険な区域（即ち、虚血状態の間の低い流れの区域）のパーセントで表わされる心筋梗塞サイズが、非投与の対照の犬に比べてリポソーム性ＰＧＥ₁を投与した犬では約５０％減少していることが見られた。更にリポソーム性ＰＧＥ₁の投与では血中の血小板凝集がほとんど抑制されていた。第４図は、リポソーム性ＰＧＥ₁、遊離ＰＧＥ₁、空のリポソームまたは食塩水の対照の投与を受けた４群についての結果をまとめている。リポソーム性ＰＧＥ₁ は１０分間にわたって２回の０．５μｇ／ｋｇの注入によって各々全投与量１．０μｇ／ｋｇで投与された。遊離ＰＧＥ₁は０．１μｇ／ｋｇ／分の割合で、即ち総投与量９μｇ／ｋｇで９０分間にわたって連続的に注入された。心臓の虚血状態組織中への白血球の侵入を測定する試験が行われた。この犬から心臓を摘出した後直ちに１）梗塞領域、２）危険区域以外の対照域（この危険区域は閉塞血管で供給された心臓の部分である）から試料が取り出された。この組織は液化窒素を用いて瞬間に凍結し、分析を行うまで−７０℃に保持した。ミエロパーオキシダーゼ（好中球でのみ見出される酵素）活性が各犬の心臓における各々の４つの領域について分析された。まず最初に６匹の対照犬が上記のようにしてテストされた。この中の１匹（表中のＣＯＮＴ４）はこのテスト中異常であると考えられたがテストを遂行するために投与を続けた。リポソーム性ＰＧＥ₁を投与された内、４匹のみ（ＬＩＰＯ１−４）がこのテストを受けた。比較のため任意の酵素単位で発現されたミエロパーオキシダーゼの水準と共に結果を第１表に表形式で示す。実施例３ＡＲＤＳの予防のためのｉｎｖｉｖｏ試験成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）は、外傷、火傷による吸引および酸素過剰症を含むがこれに限定されることのない種々の傷害に続いて起こる状態である。この状態は隙間の細胞が死んで毛細管の損傷となる特徴を有している。一且肺が液体で満たされると呼吸は困難となりそして患者の５〜６０％が死ぬのである。この破滅的な結果となるかどうかは初期の外傷の性質によって変わってくるのである。Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、ＩＬ−１およびＴＮＦのような因子は好中球を活性化する。ＰＧＥ₁の作用形態は細胞活性化とは異なる機構である。ＰＧＥ₁の存在下では好中球は活性化されず、もしすでに活性化されている場合にはそれらは排除されそれによって病気を阻止するものである。温度による傷害またはＩＬ−１の気管内注入によって肺傷害がつくり出されたＡＲＤＳの齧歯動物モデルについて研究を行なった。以下の実施例に記載しているように、リポソーム性ＰＧＥ₁を投与することによって液体が肺にもれることを防ぐことができ、好中球の肺への流入を有意に減少させることができる。実施例１の再水和リポソーム性ＰＧＥ₁を成人呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）の攻撃に対する予防薬としてｉｎｖｉｖｏでテストした。テストするラットは、各グループ７〜８匹として３つのグループに分け、８μｇ／ｋｇのリポソーム性ＰＧＥ₁を与えるか、温度による傷と同時に食塩水を与えその後又与える（４５秒間７０℃の水中に浸す）かした。第１のグループはリポソーム性ＰＧＥ₁を与え、第２のグループはリポソーム性ＰＧＥ₁を与えないが同様の外傷を与え、第３のグループは投与も外傷を与えなかった。ラットを殺す１時間前に¹²⁵Ｉ−アルブミンを肺中への液漏れのマーカーとして静注した。温度による傷害後４時間してからラットを殺した。この研究の結果を第６図にまとめて示す。このような外傷を受けるとＡＲＤＳが生じることが知られており、このことはこのような外傷を受けたラットの肺におけるアルブミンの量が増大したことからも証明される。外傷を受けて何の治療も受けていないラットは全て肺中のアルブミンの量が増大していた。更にこのテストを受けた７匹のラットの内６匹が死亡した。リポソーム性ＰＧＥ₁を投与したラットにおけるアルブミンの量は外傷を与えていない対照群と同程度の低さまたはそれよりも低い位であった。またＰＧＥ₁を与えた７匹のラットは傷のせいで死ぬものは１匹もいなかった。これらの結果はリポソーム性ＰＧＥ₁がＡＲＤＳの攻撃に対する予防薬として有効であることを示している。ＩＬ−１の気管内注入により誘導されたＡＲＤＳの治療のためのｉｎｖｉｖｏ試験組み換えＩＬ−１の気管支内点滴によりラットに好中球の侵入および肺損傷を誘導する（第７図）。リポソーム性ＰＧＥ₁の投与によってＩＬ−１誘導肺損傷および好中球浸出が減少する。５０ｎｇの市販のインターロイキン１（ＩＬ−１）または食塩水（対照グループにおいて）をラットの気管に点滴し肺中への好中球浸出や肺胞中への液体漏れを生ぜしめた。６μｇ／ｋｇの実施例１の再水和リポソーム性ＰＧＥ₁、遊離ＰＧＥ₁または空のリポソームを、ＩＬ−１点滴によりＩＬ−１をラットに静注投与した。分析したラットの内、４０匹は食塩水だけを、５４匹はＩＬ−１を与えられたが治療を受けておらず、６匹はＩＬ−１を与えられ、かつリポソーム性ＰＧＥ₁投与を受け、６匹はＩＬ −１を与えられると共に空のリポソーム投与を受け、そして６匹はＩＬ−１を与えられ遊離ＰＧＥ₁投与を受けた。ＩＬ−１投与後、４時間半経過して多くの好中球が既に組織中に浸出し始めた後、このラットにマーカーとしての¹²⁵Ｉ−アルブミンを血流中に注入した。アルブミン注入後３０分でラットを殺し、肺を摘出して肺中への液漏れを組織中の放射性同位元素を測定することによって定量した。肺中の標識¹²⁵Ｉ−アルブミンの１分当りのカウント数を血流中の標識¹²⁵Ｉ−アルブミンの量で割ったものに基き、肺漏れのｉｎｄｅｘを計算した。この肺漏れは第７図のＹ−軸上に表わされている。第７図に記載されているように、ＩＬ−１を点滴後何の処置もしない場合は、上記擬似対照群即ち食塩水を与えたものより肺漏れが２．５倍大であった。しかしながらＩＬ−１を点滴後リポソーム性ＰＧＥ₁を与えたものではこの肺漏れｉｎｄｅｘは擬似対照と同等であった。重要なのは、遊離ＰＧＥ₁や空のリポソームでの処理のものは肺漏れに何の効果ももたらさなかったということである。上記のことは臨床例でも同様のことが起きると考えられる。傷が導入され、適当な診断後しばらくして治療が始められたのである。実施例４ラット内毒血症(endotoxemia)の研究ＥＰＣ含有ＰＧＥ₁ＭＬＶｓの調製卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）貯蔵溶液（２０ｍｇ／ｍｌエタノール）を次のようにして調製した：テフロン縁の蓋の付いた５０ｍｌの薬色の瓶中に１ｇの乾燥ＥＰＣを入れ、これをゆっくりと回転させながら５０ｍｌの無水エタノール中に溶解した。得られた溶液をマイナス２０℃で貯蔵した。ＰＧＥ₁貯蔵溶液（１ｍｇ／ｍｌエタノール）を次のようにして調製した：２０ｍｇの乾燥ＰＧＥ₁を２０ｍｌのバイアル瓶に移し、そこへ２０ｍｌの無水エタノールを添加した。ゆっくりと回転させながらこのＰＧＥ₁をエタノールに溶解させた。得られた溶液をマイナス２０℃で貯蔵した。上記のＥＰＣ貯蔵溶液（９．７５ｍｌ）と一定量のＰＧＥ₁貯蔵溶液（０．５ｍｌ）を５００ｍｌのフラスコ中で一緒にした：約３０℃で少なくとも２時間の回転蒸発によってエタノールを除去した。乾燥ＥＰＣ／ＰＧＥ₁をＰＨ４．５の緩衝液（例えば５０ｍＭ酢酸塩、１５０ｍＭＮａＣｌを有し、１０ＮＮａＯＨでＰＨを４．５としたもの、および乾乾ＥＰＣ／ＰＧＥ₁の再懸濁を助けるガラスビーズを有する）中に再懸濁してリポソーム懸濁液をつくった。この分散液を４℃で貯蔵した。ＤＰＰＣ含有ＰＧＥ₁ＭＬＶｓの調製１．０３５ｇのジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）をメチレンクロライドに溶解したものを用い、ＤＰＰＣ貯蔵液を、上記のようにして調製した。乾燥ＥＰＣ／ＰＧＥ₁混合物の再水和に当っては、水浴中約５２℃で約３〜５分間、回転させながら加熱することが必要であった。ラット内毒血症モデル発熱、低血圧、白血球数の変化および下痢がグラム陰性菌が感染した際の徴候である。この感染症は血管内凝集を広げ非可逆的なショックへと導くものである。多くの文献が、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦαに由来する白血球が内毒性ショックの進展を仲介するとしている。本発明者等のｉｎｖｉｔｒｏのデータは培養されたモノサイトからこれらのサイトカインが出てくるのを抑制することを示しているので、ラット内毒血症のｉｎｖｉｖｏモデルを発展させ、死亡を最終点とし、ＰＧＥ₁の有効性を評価しＬＰＳで誘導された死を減少させる製剤をつくるためのモデルをつくった。Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおけるＥ．ｃｏｌｉＬＰＳ（リポポリサッカライド；セロタイプ０５５；Ｂ５）に対するＬＤ₅₀を確立すべく実験を計画した。これらの実験によるデータは第８図に示されており、ＬＤ₅₀は５０μｇ／ｋｇであることが示されている。次の実験においては、特にことわらない限り、このＬＰＳ投与量が使用された。各々１２６〜１５０ｇの雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを動物動物施設中で２日間餌と水を任意に与えて順化させた。時間０において、ラット群（ｎ＝６）にＥ．ｃｏｌｉリポポリサッカライドを単剤として静注するか、食塩水（ＬＰＳ無し）対照を静注した。ＬＰＳ投与後種々の時間（日）において死亡率を評価した。リポポリサッカライド（ＬＰＳ）およびＰＧＥ₁に応答して腫瘍破壊因子アルファ（ＴＮＦα）およびインターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）合成の阻害粘着性ヒトモノサイトをＬＰＳで刺激し（１μｇ／ｍｌ／１０⁶細胞）、それを時間０とした。遊離ＰＧＥ₁（リポソーム中に取り込まれていない）、ＬＵＶ −ＰＧＥ₁（この実施例に記載された方法にしたがって調製したラージユニラメラリポソーム（ＬＵＶｓ））、ＬＵＶ−ＰＧＥ₁“偽薬”リポソーム（ＰＧＥ₁を含有してないＬＵＶｓ）ＬＵＶ偽薬リポソーム＋遊離ＰＧＥ₁、偽薬リポソームまたは食塩水対照（ＰＧＥ₁なし）を同時に注入した（１０μＭＰＧＥ₁）。３時間毎に分泌したＴＮＦαおよびＩＬ−１βを測定した。これらの実験の結果を第９図に示す。ＬＰＳに誘導された致死性の減少雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに５０μｇＬＰＳ／体重ｋｇで静注を行ない、それを時間０とした。遊離ＰＧＥ₁、ＬＵＶ−ＰＧＥ₁（４０μｇ／ｋｇＰＧＥ₁）、偽薬ＬＵＶ（ＰＧＥ₁を含有してないＬＵＶ；４０μｇ／ｋｇＰＧＥ₁--ＬＵＶ−ＰＧＥ₁製剤と同じリポソーム数）または偽薬ＬＵＶ（４０μ ｇ／ｋｇ脂質と等価）＋遊離ＰＧＥ₁（４０μｇ／ｋｇ）を各々投与する。各処置グループには１２匹のラットが割当てられた。ＬＰＳ投与後６日、１２日、１８日および２４日において、各グループの生存数が評価された。結果を第１０図に示す。遊離ＰＧＥ₁に誘導された致死性の除去雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに５０μｇ／ｋｇＬＰＳを静注し、それを時間０とした。遊離ＰＧＥ₁（４０μｇ／ｋｇ）、ＬＵＶ−ＰＧＥ₁（４０ｐｇ／ｋｇＰＧＥ₁）、偽薬ＬＵＶ（４０μｇ／ｋｇ脂質等価、即ち体重１ｋｇ当り４０マイクログラムのプロスタグランジンＥ₁製剤におけるＬＵＶの数と同等の偽薬ＬＵＶの数）、ラテックス微粒子（偽薬ＬＵＶの数と同じ）またはラテックス微粒子＋遊離ＰＧＥ₁を同時に各々静注した。処置グループ（１６匹ラット）における生存数を２４時間で評価した。結果を第１１図に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 9/127 ＡＤＡ 7329−4ＣＡ６１Ｋ 9/127 ＡＤＡＡＤＭ 7329−4ＣＡＤＭＡＤＰ 7329−4ＣＡＤＰ 31/557 ＡＢＥ 9454−4Ｃ 31/557 ＡＢＥＡＢＳ 9454−4ＣＡＢＳＡＤＴ 9454−4ＣＡＤＴ 47/42 7433−4Ｃ 47/42 Ｚ (31)優先権主張番号０８／１８０，０８９ (32)優先日 1994年１月11日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＦＩ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＯ (72)発明者ジャノフ，アンドリュー，エスアメリカ合衆国ペンシルヴァニア州 19067，ヤードレイ，サウスクレッセントブールヴァード 1807 (72)発明者ミンシェイ，シャルマ，アールアメリカ合衆国ニュージャージー州 08852，モンマウスジャンクション，ベイベリーコート 4031

Claims

【特許請求の範囲】１．動物に対して、アラキドン酸代謝物、脂質および放出抑制水性緩衝液を含有するユニラメラリポソームと薬理学的に許容し得る担体とを含有する組成物を投与することからなる、動物へのアラキドン酸代謝物の投与方法。２．動物がヒトである特許請求の範囲第１項記載の方法。３．投与が静注である特許請求の範囲第１項記載の方法。４．ユニラメラリポソームが約１００ｎｍの直径を有するラージユニラメラリポソームである特許請求の範囲第１項記載の方法。５．アラキドン酸代謝物がプロスタグランジンである特許請求の範囲第１項記載の方法。６．プロスタグランジンがプロスタグランジンＥ₁である特許請求の範囲第５項記載の方法。７．脂質が飽和アシル鎖脂質である特許請求の範囲第１項記載の方法。８．飽和アシル鎖脂質がジパルミトイルホスファチジルコリンである特許請求の範囲第７項記載の方法。９．緩衝液がクエン酸緩衝液である特許請求の範囲第１項記載の方法。１０．クエン酸緩衝液が約４．５のｐＨを有す特許請求の範囲第９項記載の方法。１１．動物が細胞活性化および付着化、炎症または毒血症の障害に苦しんでおり、アラキドン酸代謝物の抗障害有効量が動物に投与される特許請求の範囲第１項記載の方法。１２．障害が再潅流障害、全身性炎症反応症候群、心筋梗塞、成人呼吸困難症候群、脈管炎、火傷、外傷後のショック、血管閉塞障害、関節障害、または自己免疫障害を包含する特許請求の範囲第１項記載の方法。１３．関節障害がリウマチ性関節炎、痛風またはフィラリア性関節炎である特許請求の範囲第１２項記載の方法。１４．自己免疫障害が全身性エリテマトース、若年型糖尿病、多発性硬化症または橋本甲状腺炎である特許請求の範囲第１２項記載の方法。１５．障害が全身性炎症反応症候群である特許請求の範囲第１２項記載の方法。１６．障害が成人呼吸困難症候群である特許請求の範囲第１２項記載の方法。１７．代謝物の有効量が動物の体重１ｋｇ当り約１０^-12ｇより大である特許請求の範囲第１１項記載の方法。１８．代謝物の有効量が動物の体重１ｋｇ当り約１０^-12ｇから約１０^-3ｇである特許請求の範囲第１７項記載の方法。１９．代謝物の有効量が動物の体重１ｋｇ当り約１０^-8ｇから約１０^-4ｇである特許請求の範囲第１８項記載の方法。２０．代謝物の有効量が動物の体重１ｋｇ当り約１０^-6ｇである特許請求の範囲第１９項記載の方法。２１．リポソームが乾燥保護剤を有するものである特許請求の範囲第１項記載の方法。２２．乾燥保護剤がサッカライドである特許請求の範囲第２１項記載の方法。２３．サッカライドがマルトース、ラクトース、デキストロース、トレハロース、ラフィノースまたはシュークロースである特許請求の範囲第２２項記載の方法。２４．サッカライドがマルトースである特許請求の範囲第２３項記載の方法。２５．動物に対して追加的に生物活性剤を投与する特許請求の範囲第２３項記載の方法。