JPH09501490A

JPH09501490A - 位相学的に分離された、コードされた固相ライブラリー

Info

Publication number: JPH09501490A
Application number: JP7501022A
Authority: JP
Inventors: レブル，マイケル; エス．ラム，キット; イー．サルモン，シドニー; クルシュナック，ヴィクター; セペトフ，ニコライ; コシス，ピーター
Original assignee: セレクタイドコーポレーション
Priority date: 1993-05-27
Filing date: 1994-05-27
Publication date: 1997-02-10
Anticipated expiration: 2018-04-07
Also published as: PT705279E; DK0705279T3; DE69434998T2; EP0705279A1; US6090912A; ES2289194T3; DE69432147D1; AU686186B2; NZ267843A; EP0705279B1; ATE232882T1; JP3394777B2; ES2204921T3; WO1994028028A1; ATE366741T1; DK1310510T3; DE69434998D1; CA2163637C; AU7048694A; CA2163637A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、個々の固相合成支持体に結合された合成試験化合物のライブラリーに関する。特に、本発明は、合成試験化合物の構造をコード化するコーディング分子をも含む、個々の固相合成支持体に結合された合成試験化合物のライブラリーに関する。当該分子はポリマーまたは多数の非ポリマー分子であり得る。固相合成支持体ビーズのそれぞれは１つのタイプの合成試験化合物を含む。合成試験化合物はアミド、尿素、カルバメート（すなわち、ウレタン）、エステル、アミノ、スルフィド、ジスルフィド、炭素−炭素（例えば、アルカンおよびアルケン）、またはこれらの任意の組合せのようなリンケージを有する主鎖構造をもつことができる。さまざまなリンケージ化学に適したサブユニットの例が提供される。また、合成試験化合物は分子足場、例えば単環式または二環式炭水化物の誘導体、ステロイド、糖、複素環式構造、ポリ芳香族構造または足場として作用し得る他の構造であり得る。適当な分子足場の例が提供される。本発明はまた、このようなライブラリーの作製方法ならびに合成試験化合物のライブラリーの中から対象の分子を同定しかつ特性づけるための当該ライブラリーの使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】位相学的に分離された、コードされた固相ライブラリー本出願は、本明細書に全体が参考として内含されている１９９３年５月２７日に出願された同時係属出願第０８／０６８，３２７号の一部継続出願である。１．発明の分野本発明は、個別相合成支持体に付着された合成試験化合物のライブラリーに関する。特に、本発明は、合成試験化合物の構造をコードするコーディングポリマー配列をも含む個別相合成支持体にとりつけられた合成試験化合物のライブラリーに関する。固相合成支持体ビーズの各々には、単一のタイプの合成試験化合物及び該合成試験化合物の構造をコードする単一かつ唯一でしかも容易に決定できるコーディングポリマー配列が含まれている。合成試験化合物は、アミド、尿素、カルバメート（すなわちウレタン）、エステル、アミノ、スルフィド、ジスルフィドといったリンケージ又はアルカン及びアルケンといった炭素−炭素のリンケージ又はそれらのあらゆる組合せを伴うバックボーン構造をもつことができる。合成試験化合物は同様に、単環又は二環式炭水化物の誘導体、ステロイド、糖、複素環式構造、多価芳香族構造又は足場として作用することのできるその他の構造といった分子足場でもありうる。本発明は同様に、かかるライブラリーを合成する方法、及び合成試験化合物ライブラリーの中から問題の分子を同定し特徴づけするための、かかるライブラリーの使用にも関する。２．発明の背景リガンドの認識及び結合が、免疫認識、細胞シグナリング及び交信、転写及び翻訳、細胞内シグナリング及び酵素触媒作用を含むほぼ全ての生物学的プロセスを調節している。その結果、ホルモン、成長因子又は神経伝達物質といったリガンドのアンタゴニスト又はアゴニストとして役立つため；Ｂ細胞（抗体媒介）又はＴ細胞（細胞性）免疫を誘発するため；化学反応の触媒作用を誘発するため；そして転写又は翻訳のレベルで遺伝子発現を調節するためといったような目的で使用できる分子を同定することに対する長年にわたる関心が当該技術分野には存在している。この関心の主たる理由は、薬物としてこれらの生物学的に活性な分子を直接使用し、又必要な場合にはこれらの分子を薬物として機能しうる誘導体へと変換したいという願望にある。多くの生物学的リガンドはタンパク質又はペプチドである。このリストには、大部分のホルモン、成長因子、神経活性分子及び免疫エピトープが含まれている。このような理由から、レセプター又は酵素を媒介とする生物学的活性のアゴニスト又はアンタゴニストを開発する初期の研究努力には、ペプチド設計及び合成が関与していた。しかしながら、望ましい生物学的活性を有することがわかったペプチドは、往々にして薬物としては適していない。薬物となるためには、ペプチドは往々にして、誘導体又は構造的類似体すなわち大部分のペプチドとは異なり満足のいく薬物動態及び安定性特性を有するペプチド擬似体へと変換される必要がある。医薬品として有用であるか又は見込みのあるペプチド擬似体の開発について記述する数多くの刊行物が出現している；いくつかの最近の例としては、 Rudy Baum，Chemical & Engineering News内、１月１８日、１９９３年、３３ページ；Hirschmann，R．et al．J．Am．Chem．Soc.，1 992年，114，9699-9701; Hirschmann，R．et al．J．Am．Chem．Soc.，1992，11 4，9217-9218がある。生物学的に活性な化合物の発見は、困難で時間がかかり、しかも極度に費用のかかるプロセスでありうる。この分野における主要な問題は、望ましい特性を有する単一の化学構造を多数の可能性ある関連構造の中から同定することにある。この発見プロセスが、構造設計、合成及び生物学的試験という連続した戦略を利用する場合、望まれる化学構造の同定は、きわめて面倒なものとなる。このきわめて要求度の高い仕事を避けるために、さまざまな構造をもつ数多くの分子のライブラリーを調製することができる。理想的には、このようなライブラリーは迅速にスクリーニング及び評価できるものである。ライブラリー合成及びスクリーニングのこの分野における作業の多くは、例えばGeysen(Geysen et al，分子免疫学，1986，23，709-715; Geysen et al．J．I mmunologic Methods，1987，102，259-274)，Foder(Foder et al，Science，199 1，251，767-773)及びHoughten(Houghten et al.，Nature，1991，354，84-86) のアプローチのように、ペプチドを用いて行なわれてきた。しかしながら、かかるライブラリーは、一定の与えられた実験において調製、試験及び同定されうる可能性ある構造的変異体の数の点で制限されている。サブユニットの組合せから生じた単一のポリマー種が単一の固体支持体に付着されているポリマー合成試験化合物の真に無作為のライブラリーの発明は、ペプチド又は非常に重要なことにペプチド擬似体である生物学的に活性な化合物の発見における１つの突破口となった。（「ランダムバイオオリゴマーライブラリー、その合成方法及びその使用方法」という題で１９９１年６月１９日付けで提出された米国特許出願第０７／７１７．４５４号及び「ランダムペプチドライブラリー、その合成方法及びその使用方法」という題の１９９０年７月２日付けで出願された米国特許出願第０７／４５６，８４５号を参照のこと）。ペプチド擬似体といったような非ペプチド有機化合物は往々にして、或る種のレセプター又は酵素に対する親和力という面でペプチドリガンドにまさっている。これまでの記録を上回る最も緊密なビオチンとアビジンの結合にはタンパク質（アビジン）と非ペプチド有機構造（ビオチン）の結びつきが関与している。親和力の高い生物学的リガンドそして究極的には新しくかつ重要な薬物を迅速に同定するための有効な戦略には、水素結合、塩橋、π−錯化、疎水効果などといった生物学的受容体（アクセプター）（例えばレセプター又は酵素）との単数又は複数のタイプの相互作用を樹立することのできるさまざまな構造単位を含む非ペプチド構造のさまざまなライブラリーの迅速な構築及びスクリーニングが必要とされる。しかしながら、非ペプチド分子を含む合成試験化合物ライブラリーの生成及びスクリーニングに関する研究は、現在その揺籃期にある。この分野からの一例を挙げると、それは固体支持体上でのベンゾジアゼピンの組合せ合成についてのEllman及びBuninの研究である（J．Am．Chem．Soc．114，10997，(1992); C hemical and Engineering News，１９９３年１月１８日、３３ページを参照のこと）。非ペプチドライブラリーの生成及び使用の分野における未解決の１つの主要な問題は、将来性ある生物学的活性を示すライブラリーから選択された分子構造の解明である。ペプチドライブラリーと連繋して合成される唯一のヌクレオチド配列コードを用いて１つのライブラリーから選択されたペプチドの構造を発見しようとする試みが、最近Brenner及びLernerによって記述されてきた(Brenner，S．及びLerner ，R.A．Proc．Nat'l．Acad．Sci．USA，1992，89，5381-5383)。各ペプチドに付着されたコードのヌクレオチド配列は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を介して増幅可能でなくてはならない。しかしながら、ヌクレオチド合成技術は、多くのタイプの分子ライブラリーの合成に必要とされる合成技術の全てと相容れないものである。その上、生物検定中の標的レセプター又は酵素とリガンドとの結合に干渉するこれらの分子間の相互作用を結果としてもたらしうるライブラリー内のヌクレオチド及び合成試験化合物の近接性も又、このアプローチを制限している。ライブラリーのヌクレオチド構成要素も又、さまざまな形で生物検定中に干渉してくる可能性がある。 Kerr et al(J．Am．Chem．Soc.，1993，115，2520-2531)は、ペプチドコーディング鎖と平行して非天然アミノ酸残基を含むペプチドの溶液相ライブラリーを合成することを報告した。このライブラリー中のペプチドリガンドとそのコーディング鎖は、一緒に共有結合されており、このため、合成試験化合物と対応するコードの対の分離及び配列決定が可能となっている。しかしながら、前出のBren ner及びLernerにより記述されている核酸コード化されたライブラリーの場合がそうであるように、コーディングペプチドは、スクリーニング検定を干渉する可能性がある。その上、コーディングペプチドの配列を得るために親和力選択方法でライブラリーからの充分な量の材料を精製することに対する必要条件が、数千種以上のライブラリーの合成をはばんでいる。かくして、さまざまな化学的クラスに属する化合物のライブラリーを生成しスクリーニングするための新しく一般的でかつ用途の広い方法に対するニーズが、当該技術分野において存在している。さらに、例えばEdmanの分解又は質量分析法単独といった従来の技術によっては決定できない構造をもつ、スクリーニングの結果としてライブラリーから選択された化合物の構造を解明するための有効な方法に対するさらなるニーズも存在している。当該技術分野でのさらにもう１つのニーズは、近接性効果を通して合成試験化合物の結合に影響を与えるか又はスクリーニング検定内で相互作用することのない分子コーディングシステムである。本明細書中の参考文献の引用又は識別は、かかる参考文献が本発明に対する先行技術として利用可能であるという容認としてみなされるべきものではない。３．発明の概要本発明は、各々の支持体に対して単一の化合物種が付着されている、個別相支持体に付着された合成試験化合物のライブラリーに向けられている。この化合物は、アミド、尿素、エステル、エーテル、カルバメート、アミン、スルフィド、ジスルフィド、炭素−炭素、例えばアルカン、アルケン及びアルキンなどのリンケージを有するが、これらに制限されるわけではない。特に、化合物はポリアミド、ポリ尿素、ポリウレタン、ポリエステル、ポリエーテル、ポリカーボネート、ポリアミン、ポリアルカン、ポリスルフィド、ポリジスルフィド又はかかる結合のいずれかの組合せを含むポリマーであると考えられる。この化合物は同様に、さまざまな置換基を明確な位置に有する分子足場であってもよく、この場合、足場は単環式又は二環式炭化水素、ステロイド、糖、複素環式構造又は多環式芳香族分子でありうる。本発明はさらに、個別相支持体上のコーディング分子の配列が、支持体に付着された合成試験化合物に正確に対応する、すなわちこの化合物をコードしている、合成試験化合物のコードされたライブラリーに関する。好ましい一実施形態においては、コーディング分子はペプチドである。１つの変形実施形態はいくつかのサブユニットが従来の配列決定技術によって区別できないものであるような配列決定可能な試験化合物のライブラリーのコーディングを包含している。コーディングは、カップリング混合物に第３の識別可能なコーディングサブユニットの小さい分画を付加することによって達成される。この分画コーディングと呼ばれるコーディング技術においては、独立したコーディング分子は全く存在しない。本発明は同様に、各々の個別相支持体上でコーディング分子から合成試験化合物が位相学的に分離されている、コードされたライブラリーをも提供する。個別相支持体が樹脂ビーズである好ましい一実施形態においては、合成試験化合物は樹脂ビーズの表面上に位置設定され、一方コーディング分子はビーズの内部に大量に位置設定されている。もう１つの実施形態においては、合成試験化合物は、開裂可能なリンカーにより個別相支持体に付着され、コーディング分子は開裂不可能なリンカー又は別途開裂可能なリンカーと共に支持体に付着されている。この実施形態においては、スクリーニング検定中、合成試験化合物は、コーディング分子が支持体に付着された状態にとどまっている一方で、例えば溶液中へといったように個別相支持体から放出されうる。本発明は同様に、合成試験化合物のライブラリー及び合成試験化合物のコードされたライブラリーの合成方法にも向けられている。合成試験化合物の合成には、個別相支持体の各部分の分離、及び、付加したサブユニットが合成試験化合物上の官能基と反応できるような条件下での各部分と合成試験化合物の単一のサブユニットとの反応が関与している。コードされたライブラリーを調製しなくてはならない場合には、化合物のサブユニットに対応するコーディング分子のサブユニットは、コーディングサブユニットが個別相支持体のコーディング成分とのみ反応することになる別々の組の反応条件を用いて、組換えされる前に分離した各部分に対して付加される。コーディングサブユニットが後に続く合成試験化合物サブユニットの結合として記述される反応の順序は、重要ではない。この順序は、コーディングサブユニット反応とそれに続く合成試験化合物サブユニットであるのがよいかもしれない。重要なのは、両方の反応が固相支持体の同じ部分上で実施されることである。個別のカップリング段階の後、各部分は、徹底的に混合されて無作為化される。希望する数の化合物サブユニットが付加されるまで、個別のカップリング及び徹底的な混合のプロセスが反復される。その後、個別相支持体からコーディング分子又は化合物のいずれかを開裂することなく、化合物（そして該当する場合にはコーディング配列）上に残るあらゆる官能基保護基が除去される。本発明は同様に、ライブラリーをスクリーニングするための方法にも向けられている。ライブラリーを個別相支持体上の受容体分子の結合活性又は放出された化合物の結合活性についてスクリーニングすることができる。本発明はさらに、放出された化合物の生物学的スクリーニング検定をも提供している。酵素活性、電子輸送活性及び光活性などがあるがこれらに制限されるわけではない、化合物についてのその他のスクリーニング検定も同様に、本発明の考慮対象となっている。スクリーニング検定において問題の活性を示す化合物を含む固体支持体が選択される。化合物の構造は、例えば、質量分析法、核磁気共鳴分光法又はその他の分光方法によって決定される。好ましくは、ライブラリーはコードされたライブラリーであり、この場合、化合物の構造は、容易に決定することのできるコーディング分子の配列によってコードされる。本発明の化合物は、治療薬又は診断薬のための糸口を提供するものである。より好ましくは、化合物自体が治療薬又は診断薬として有用でありうる。個別相支持体上の化合物は同様に、例えばトランジスタ又は半導体として、電子輸送のためにも有用でありうる。４．図面の簡単な説明図１．合成試験化合物のコードされたライブラリーを付着させるための戦略。合成試験化合物のサブユニットは［ＮＯＮＳＥＱ］として表わされている。コーディング分子はＡ−Ｂ−Ｃで表わされている。（Ａ）試験化合物及びコーディング分子は、質量作用及び固有の反応性に基づいて変更されうる統計的分布の形で、直接的に又はリンカーを介して支持体に個別に付着され得る。（Ｂ）合成試験化合物及びコーディング分子は、明確なモル比で、個別相支持体上で同じリンカーに付着されうる。（Ｃ）合成試験化合物は表面上に付着され、コーディング分子は、樹脂ビーズといった個別相支持体の内部に付着させられる。代替的には、（Ｃ）において、コーディング分子は表面上にあり、試験化合物は内部にあってもよい。図２．「試験」化合物（Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ）及びコーディング分子（Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ）が両方共ペプチドであるコードされたライブラリーモデルの３つの形態。（Ａ）「試験」化合物は、Ｆｍｏｃ保護基を用いて合成され、コーディング分子はＢｏｃ保護基を用いて合成された。Ｆｍｏｃ及びＢｏｃは直交する保護基である。（Ｂ）コーディングペプチドのみがEdman分解により配列決定されることになるように、Ｆｍｏｃ保護解除された「試験」化合物は、アセチル化された。（Ｃ）コーディングペプチドは、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）でブロックされ、「試験」化合物のEdman配列決定とそれに続くＴＦＡの除去及びコーディングペプチドの配列決定を可能にした。ペプチドは、リシン分枝をもつ安全捕獲アミドリンカー（SCAL; Patek及びLebl，1991，Tetrahedron Lett ，32; 3891-3894)を介してテンタゲル（TentaGel ＴＧ）樹脂に付着された。図３．１つのアミドを形成するためのカルボン酸とアミンの反応、１つのアミドを形成するためのアミンとカルボン酸の反応；１つのスルフィドを形成するためのアルキルハロゲニドとチオールの反応を含む、さまざまな可能性ある結合化学を示す分枝足場ライブラリーモデル。図４．受容体分子と足場合成試験化合物の相互作用のモデル。（Ａ）足場に付着された官能基は自由に適切な結合コンホーメーションをとることができる。（Ｂ）足場上の官能基は適切な結合コンホーメーション内に束縛されている。図５．合成試験化合物のライブラリーを形成するようランダム構造で化学的に結合され得るサブユニットのいくつかの構造。図６．Ｂｏｃ及びＦｍｏｃでブロックされたサブユニットとの反復的な縮合反応から形成された環式ライブラリーのモデル。図７．足場がシクロペンタンであるテンタゲル樹脂上の足場ライブラリーの調製のためのスキーマ。図８．本発明の足場ライブラリーを調製するのに使用されるサブユニットの構造。サブユニットの各々に対する２文字のアミノ酸ジペプチドコードは、各々のものの下に示されている。このライブラリーの調製及び使用については、以下の第９節で記述されている。５．発明の詳細な説明本発明は、各々の個別相支持体が合成試験化合物の単一の種を含んでいる、個別相支持体に付着された合成試験化合物のライブラリー及び、かかるライブラリーの合成及び使用方法に関する。「個別相支持体」という語は、合成試験化合物を付着させることができ、かつ液体中で不溶であるか又は液体と２相系を形成するマトリックスのことを指す。好ましくは、個別の相は、固相であるが、ヒドロゲル及びエアロゲルといった個別の相を考慮することもできる。本明細書中で使用されている「合成試験化合物ライブラリー」という語は、各々の個別相支持体の粒子が合成試験化合物の単一の構造的種を含んでいる、個別相支持体の粒子上の合成試験化合物のコレクションのことを意味する。各々の支持体は、単一の構造的種の数多くのコピーを含んでいる。例えば、固相ペプチド合成のための標準的な樹脂支持体は、約５０〜２５０pmolのペプチドを含んでいる。合成試験化合物の構造は、「サブユニット」の実質的に無作為の化学的組合せから誘導される。本明細書で使用されているように、「合成試験化合物」という語は、足場をもつか又はもたない２〜１００、より好ましくは２〜２０のサブユニットから成る小さな分子のことを言う。１つの実施形態においては、合成試験化合物は、アミド、尿素、エステル、エーテル、カルバメート、アミン、スルフィド、ジスルフィド、炭素−炭素、例えばアルカン、アルケン及びアルキンなどといったようなリンケージを介して結合されたサブユニットで形成されているポリマーである。特に、化合物には、以下で詳述する通り、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリアミド、ポリエステル、ポリエーテルなど、又はそれらのあらゆる組合せが含まれ得る。もう１つの実施形態においては、合成試験化合物は、以下に詳述する通り、ステロイド、複素環式構造、多価芳香族環又は炭水化物構造などといった無作為に機能化された分子足場であってよい。本明細書で使用されている「サブユニット」という語は、規定の化学によって化学的サブ成分のリンケージにより合成試験化合物を形成することになる、化学的サブ成分のことを言う。例えば、「ペプチドライブラリー」は、ペプチド（合成試験化合物）のコレクション、すなわち、その他のいずれかのアミノ酸残基に先行するか又は後続するいずれかのアミノ酸残基を含む配列をもつ２−１００個のα−アミノ酸残基（サブユニット）から成る鎖のコレクションである。「ステロイド誘導体ライブラリー」の一例は、ステロイド核の特定の位置における一組の官能基つまりサブユニットのいずれか１つを含むステロイド誘導体のコレクションである。より好ましくは、本発明は、合成試験化合物のコードされたライブラリーに関する。ここで「コードされたライブラリー」というのは、各々の全く異なる化合物種が各々の個別相支持体の上で、容易に決定できる構造をもつコーディング分子と対を成し、そのライブラリー内のその対パートナーに対する唯一の構造をコードしている、１つのライブラリーのことである。コードされた分子ライブラリーの好ましい一実施形態においては、コーディングポリマー分子は１つのペプチドである。もう１つの実施形態においては、コーディングポリマー分子は１つのオリゴヌクレオチドである。ライブラリーの実施形態の例としては、以下のものが含まれるが、これらに制限されるわけではない；合成試験化合物がポリアミドである、すなわち合成試験化合物がアミド結合を介して結合された２−１００個のアミノ酸の鎖であるライブラリー；合成試験化合物がポリエステルすなわちエステル結合により結合された２−１００個のヒドロキシ酸の鎖であるライブラリー；合成試験化合物がポリエステルすなわちエーテル結合により結合された２−１００のヒドロキシアルコールの鎖であるライブラリー；合成試験化合物がポリ尿素であるライブラリー；合成試験化合物がポリウレタンであるライブラリー；合成試験化合物がポリカーボネートであるライブラリー；合成試験化合物がポリアミンであるライブラリー；合成試験化合物が、ハロ誘導体を含むポリアルカン、ポリアルケン又は多価アルコールであるライブラリー；合成試験化合物がポリスルフィドであるライブラリー；合成試験化合物がポリジスルフィドであるライブラリー；合成試験化合物が、上述の実施形態に記述されているポリマー構造のうちの２つ以上のものからの無作為に配置されたセグメントを含む構造をもつポリマーである、ライブラリー；合成試験化合物がステロイド構造の誘導体であるライブラリー；合成試験化合物が、β−Ｄ−グルコースといった糖の誘導体であるライブラリー；合成試験化合物が、ベンゾジアゼピンといった複素環式構造の誘導体である、ライブラリー；合成試験化合物が、カルボン酸、アミン及びハロゲン誘導体（これらに限らない）といった多数の構造を規定の方法で付着させることのできる足場として役立つことのできる１つの構造の誘導体であるライブラリー；分子が、アミド、エステル、エーテル、カーボネート、スルフィド、ジスルフィド、アルケン及びアミン及び足場として作用できる１以上の構造、例えばステロイド、糖、芳香族又は多価芳香族構造のうちの１以上から選択された化学的により結合された可変的長さの１以上の配列を含むキメラ構造である、ライブラリー。異なるクラスの合成試験化合物のための数多くの異なるサブユニットが、Sigm a，Aldrich，ICI Chemicalsなどといった供給業者から市販されている。代替的には、標準的な化学合成技術を用いて、サブユニットを合成的に調製することができる。好ましい一実施形態においては、上で列挙したライブラリーは、各々の個別相支持体が１つの合成試験化合物及び合成試験化合物の構造をコードするポリマー配列を含んでいる、コードされたライブラリーである。好ましくは、コーディングポリマー配列はペプチドである。５．１．コーディング戦略上述のとおり、１つの好ましい態様においては、本発明のライブラリーは、各支持体上のコーディング分子の配列が各支持体上の合成試験化合物の構造に対応している、コードされたライブラリーである。従って、各々の唯一の合成試験化合物構造は、唯一のコーディング分子配列によってコードされる。上述の通り、好ましくは、コーディング分子はペプチドであるが、本発明は、コーディング配列としての核酸又はあらゆる配列決定可能なポリマーの使用をも包含している。コーディング配列の典型は、１つの遺伝子の中のトリプレットヌクレオチド配列がその遺伝子によりコードされた１つのタンパク質内の特定の一アミノ酸に対応している遺伝子コードである。１つの遺伝子内のコドンの配置は、１つのタンパク質内のアミノ酸の配列に対応する。かくして遺伝子はタンパク質をコードする。この類推に従うと、従来の方法（例えばEdmanの分解）によっては配列を立証することのできないポリアミドといった合成試験化合物ライブラリーの配列のコーディング分子によるコード化は、類似のコードを利用して容易に達成できる。このコードの選択は、コーディング分子のサブユニットの１重、２重又は３重（又はそれ以上）のいずれの組合せが、合成試験化合物の各サブユニットに対応するかを含めて、純粋に任意である。例えば、コーディング分子はペプチドであってよい。この場合、Edmanの分解によって容易に検出可能でありかつ側鎖保護を必要とすることなく固相ペプチド合成において効果的にカップリングするものとして知られている１以上のアミノ酸残基から成るコードが、特に有用であるとみなされる。例えば、アミノ酸、ロイシン（Ｌｅｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）及びフェニルアラニン（Ｐｈｅ）（これらは全て、側鎖保護を必要とせずペプチド合成中効果的にカップリングし、さらにEdman分解によって容易に検出可能である）に基づくトリプレットコードが用いられる場合、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ又はＰｈｅのトリプレット（各トリプレットはポリアミド中の唯１つのサブユニットに対応する）を含む唯一のペプチドと各々対を成した最高６４個の構造的に異なるサブユニットを含む合成試験化合物のライブラリーを、適当な化学反応を用いて合成することができる。その他の好ましいアミノ酸すなわち、側鎖保護を必要としないアミノ酸としては、イソロイシン、バリン、シクロヘキシル−Ｌ−アラニン、ノルロイシン、ノルバリン、プロリンなどが含まれるがこれらに限らない。これらほど好ましいものではないが、アスパラギン及びグルタミンもある。もう１つの実施形態においては、２０の天然アミノ酸の各々は、特定のサブユニットについてコードすることができる。単一のコーディング配列サブユニット又はコドンは、合成試験化合物の２つ以上のサブユニットについてコードすることができ、結果として１つの縮重したコードをもたらすが、これは必要なことではない。本発明は、スクリーニング検定が、以下の第５．３節で論述されている、一定の与えられた支持体上のコーディング分子の代りに活性な合成試験化合物を認識する確率を増大するためのさまざまな戦略を提供している。５．２．合成試験化合物のライブラリーを生成するための方法上述の通り、本発明は個別相支持体上で、合成試験化合物のライブラリーを生成する方法に関する。好ましくは、このライブラリーは、例えば、同じ支持体に付着された合成試験化合物の構造をコードしかつEdman分解といった従来の分析技術を用いて容易に決定することのできる配列をもつ１つのペプチドといったような唯一のコーディング分子と各々の合成試験化合物が対になっているようなライブラリーである。合成試験化合物が、機能化された分子足場である場合、足場又はその前駆物質は、合成開始に先立って固相支持体に付着されることになる。合成試験化合物のライブラリーの合成には、以下の段階の反復が含まれる：（i ）選択された支持体を、結合すべき異なるサブユニットの数に少なくとも等しいものである数の部分へと分割する段階；（ii）段階（i ）からの固体支持体の部分のうちのただ１つのものと合成試験化合物のサブユニットのうちのただ１つのものを化学的に結合させ、好ましくは、化学的結合形成反応が可能なかぎり最大限まで完成するべく推進されていることを確認する段階；（iii ）成長しつつある合成試験化合物を含む固体支持体部分を徹底的に混合する段階；（iv）望まれるライブラリーの合成試験化合物の各々におけるサブユニットの数に等しい回数だけ、段階（i ）から（iii ）までを反復し、かくして合成試験化合物を成長させる段階；（v ）固体支持体上での合成試験化合物の組立て中に用いられたあらゆる保護基を除去する段階。好ましくは、コーディング分子が、合成試験化合物と平行して合成される。この例においては、段階（ii）において支持体に対して合成試験化合物のサブユニットを結合させる前又は後で、合成試験化合物の付加されたサブユニットに対応するコーディング分子の１以上のサブユニットが、成長しつつある合成試験化合物の構造に対応する唯一の構造的コード（前出の第５．１節参照）が各支持体上で作り出されるような形で、成長しつつあるコーディング分子に結合される。コードされたライブラリーが調製される場合、１以上のサブユニットの合成が混合段階（iii ）に先行しなくてはならないということは、容易に認識できる。段階（i ）〜（iii ）の反復（段階（iv）を参照）は当然のことながら結果として合成試験化合物を成長させることになり、このプロセスがコーディング分子の合成を包含するべく修正される場合にはこの試験化合物と平行してコーディング分子を成長させることになる。ここでは、支持体上で合成された合成試験化合物そしてもし存在するならば支持体上で合成されたコーディング分子をそれぞれ意味するのに、試験アームとコーディングアームが用いられている。本発明は、上述の手順の段階のいずれかの修正をも包含している。例えば、固体支持体の部分の全てに対する同じポリマーサブユニットの結合が関与するように段階（ii）を変更した場合、異なる、そして場合によっては望ましいライブラリーが結果として得られることになる。この場合、コーディングポリマーの伸長も、類似の要領で修正される必要がある。もう１つの実施形態においては、コーディングアーム上と同じポリマーが試験アーム上で伸長されている場合、コーディングアームは、合成の履歴例えばサブユニットの数がわかっているかぎり、合成試験化合物の配列決定不可能なサブユニットをコードするのに必要とされる点を超えて、伸長させられる必要はない。本発明のもう１つの実施形態においては、短いポリマーである合成試験化合物の合成を実施するのに使用される固体支持体は、ライブラリーの合成に使用する前にポリマーの１以上のサブユニットで誘導体化される。１つの実施形態においては、合成試験化合物の考えられる全ての構造がライブラリー内に存在する確率が非常に高くなるように、充分な支持体粒子が用いられる。かかるライブラリーは「完全」ライブラリーと呼ばれる。すべての構造を代表する高い確率を確保するためには、化合物の考えられる種の数のポワソン統計といった統計に従って例えば５倍、２０倍などの余剰の数の支持体を使用することが必要である。もう１つの実施形態、特に考えられる構造の数が支持体数を上回っている実施形態においては、考えられる構造の全てがライブラリー内に代表されているわけではない。このような「不完全」ライブラリーも同様に非常に有用である。さらにもう１つの実施形態においては、１つのライブラリーが、ライブラリーの生成に先立って又はライブラリーの生成の終了時点で付加されるもう１つのライブラリーをスクリーニングした結果として見い出される望ましいポリマー配列を含んだ構造をもつ合成試験化合物を有する可能性がある。このようなライブラリーは、望ましいポリマー配列を含む固体支持体を合成し、新しいライブラリーの合成のための固体支持体としてこの誘導体化された支持体を用いることによって調製される。代替的には、ライブラリーの合成試験化合物の一部分を合成し、それに続いて、個別相支持体の全ての上での試験化合物の延張部分として望ましいポリマー配列を合成することが可能である。代替的には、望ましい配列は不連続で、ランダムライブラリーの中に含まれていてもよい。５．３．コードされた分子ライブラリー合成における個別相合成支持体及びリンカーの開発と使用５．３．１．コードされた分子ライブラリー合成において有用な支持体及びリンカー本発明で使用するのに適した個別相支持体は、以下の特性によって特徴づけられる；すなわち（１）合成又はスクリーニングのために使用される液相内での不溶性；（２）その他全ての支持体と独立して三次元で移動できる；（３）合成試験化合物そして存在する場合には支持体に付着したコーディング配列の各々の数多くのコピーを含んでいる；（４）スクリーニング検定条件と両立する；（５）試験化合物の合成及びコーディング分子の合成のための反応条件に対して不活性である。好ましい支持体は、同様に、合成試験化合物及びコーディング分子の各々に対して前駆物質であるサブユニットを付着させるため、又はモノマーもしくはその他のサブユニット前駆物質の付着のための単数又は複数の反応基を含むリンカーを付着させるため、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、チオールなどといった反応性官能基を有している。ここで用いられている個別相支持体は、特定のタイプの支持体に限られているわけではない。むしろ、数多くの支持体が利用可能であり、当業者にとっては既知のものである。好ましい態様においては、個別相支持体は、固相支持体であるが、本発明はエアロゲル及びヒドロゲルといったような半固体の使用をも包含する。固相支持体としては、シリカゲル、樹脂、誘導体化されたプラスチックフィルム、ガラスビーズ、コットン、プラスチックビーズ、アルミナゲル、セファロースといった多糖類などが含まれる。適当な固相支持体を、望ましい最終用途及びさまざまな合成プロトコルに対する適合性に基づいて選択することができる。例えば、ポリアミド合成においては、有用な固相支持体は、ポリスチレン（例えばBachem Inc.，Peninsula Laboratoriesから得られるＰＡＭ樹脂など）、POL YHIPE（登録商標）樹脂（Aminotech,カナダから得られる）、ポリアミド樹脂（P eninsula Laboratoriesから得られる）、ポリエチレングリコールとグラフト重合させたポリスチレン樹脂（TentaGel（登録商標），Rapp Polymere，Tubingen, ドイツ）又はポリジメチル−アクリルアミド樹脂（Milligen/Biosearch，カリフォルニアから得られる）といった樹脂であってよい。ペプチド及びポリアミド合成にとっての好ましい一実施形態においては、好ましい固相支持体はポリジメチル−アクリルアミド樹脂である。特定の合成のための好ましい固相合成支持体について以下で記述する。例えば、以下の特定の実施形態モデルにおいては、Merr ifieldペプチド合成において使用されるような支持体を、その後の合成サイクルから伸長してポリアミド「合成試験化合物」をもたらすＦｍｏｃ保護されたアミノ酸、及びコーディングペプチドを伸長してもたらすＤｄｚ−又はＢｏｃ−保護されたアミノ酸によって、逐次的に誘導体化させることができる。その他の逐次誘導体化について、以下で記述する。かくして、各々の樹脂ビーズは、合成試験化合物及び対応するコーディング構造の両方を含むように機能化され、それらの相対的な量は最初のＦｍｏｃ−及びＤｄｚ−（又はＢｏｃ−）保護されたアミノ酸を付着させるための反応条件によって左右される。このアプローチの１つの変形形態においては、合成試験化合物及びコーディング分子は、以下で記述するもののようなリンカーを通して、固体支持体に付着する。本発明の支持体は、同様にリンカー又はリンカーの配置を含んでいてもよい。ここで使用するリンカーというのは、支持体上で合成されるべき分子と支持体を結合させるのに役立つ例えば炭素、窒素、酸素などの原子鎖を含むあらゆる分子のことである。リンカーは、通常、支持体上の合成が始まる前に、共有結合を通して支持体に付着され、支持体上で合成するべき分子の前駆物質の付着のための単数又は複数の部位を提供する。固相支持体に対して合成すべき分子の前駆物質を付着させるためには、さまざまなリンカーを用いることができる。リンカーの例としては、アミノブチル酸、アミノカプロン酸、７−アミノヘプタン酸、８− アミノカプリル酸、リシン、イミノジ酢酸、ポリオキシエチレン、グルタミン酸などがある。さらにもう１つの実施形態においては、リンカーにはさらに、スペーサーとしての単数又は複数のβ−アラニン又はその他のアミノ酸が含まれていてよい。もう１つの実施形態では、「安全捕獲アミドリンカー」（ＳＣＡＬ）（Patek ，M及びLebl，M．1991，Tetrahedron Letters 32: 3891-3894参照：国際特許公報ＷＯ９２／１８１４４、１９９２年１０月２９日公開）が支持体に対して導入される。上述のリンカーに加えて、好ましくは合成試験化合物分子の付着のために、選択的に開裂可能なリンカーを利用することができる。その１例は、Barany及びAl bericioによって記述されている紫外線感光リンカーＯＮｂである（1985，J．Am ．Chem．Soc．107; 4936-4942）、光開裂可能なリンカーのその他の例は、Wang( 1976，J．Org．Chem．41;32-58)，Hammer et al．(1990，Int．J．Pept．Prot ein Res．36; 31-45),及びKreib-Cordonier et al(1990，"Peptides-Chemistry ，Structure and Biology"中、Rivier及びMarshall，eds，p895-897)。Landen（ 1977，Methods Enzym，47; 145-149）は、Ａｓｐ−Ｐｒｏ結合を開裂するために水性蟻酸を用いた；このアプローチは、Geysenピン合成方法(Van der Zee et al .，1989，Eur．J．Immunol，191; 43-47)と合わせて、Ｔ細胞決定因子を特徴づけするために使用された。塩基性条件下で開裂可能な潜在的なその他のリンカーとしては、ｐ−（ヒドロキシメチル）安息香酸（Aterton et al.，1981，J．Che m．Soc．Perkin I; 538-546)及びヒドロキシ酢酸（Baleaux et al.，1986，Int ．J．Pept．Protein Res．28; 22-28）に基づくものがある。Geysen et al，（1 990，J．Immunol Methods 134; 23-33; 国際公報ＷＯ９０／０９３９５号、１９９０年８月２３日公開）は、ジケトピペラジンメカニズムによるペプチド開裂を報告した。好ましいジケトピペラジンリンケージは、本明細書にその全体が参考として内含されている１９９２年７月２４日に提出された米国特許出願第０７／９１９．４５４号の中で開示されている。酵素開裂可能なリンカーも又有用である。酵素によって認識される配列を含むリンカーを、１つの酵素が特異的に開裂することができる。かくして、適切なペプチド配列を含むリンカーを１つのプロテアーゼによって開裂させることができ、適切なヌクレオチド配列を含むリンカーを１つのエンドヌクレアーゼによって開裂させることができる。或る種の例では、いくつかの反応条件を用いて開裂可能なリンカーで、利用可能な樹脂官能基の一部分（例えば１０〜９０％）を誘導体化することができ、さらなる研究のために開裂後の樹脂上に充分な材料が確実に残るようにするべく開裂条件に対して安定しているリンカーを用いて、樹脂官能基の残りの部分を誘導体化することができる。コーディング分子が全くない場合に、この措置が特に好まれる。異なる反応条件下で開裂可能なリンカーの組合せも同様に、単一の固体支持体ビーズから分子の選択的開裂を可能にするために使用することができる。好ましくは、合成試験化合物を放出するために開裂可能なリンカーを使用することができ、又その一部分をスクリーニング検定内での試験のために使用することもできる。この例では、コーディング配列が存在する場合、これは、開裂不能なリンカーを介して固相支持体に付着される。コードされたライブラリーの合成のための１つのアプローチには、固体支持体に対し両方の前駆物質を結合するのにも役立つ有枝リンカーを介してライブラリーのコーディング分子と合成試験化合物の前駆物質を結合させることも関与している。リンカーの構造に応じて、いずれかの分子又はその両方を、さらなる研究のために固体支持体から離脱させることができる。合成試験化合物とコーディング分子を固着するこのアプローチの一例は、Ｌｙｓ（ＳＣＡＬ）で誘導体化されたTentaGelを用いることである。本発明の中で使用するための固相支持体リンカーにはさらに、分子ライブラリーを提供するためにさらに誘導体化させることのできる所望の分子が含まれていてよい。予め付着された分子は本明細書で記述する方法に従って選択されてもよいし、又は望ましい特性を具現するものとして知られている１つの構造を含んでいる可能性もある。本発明は、数多くの配置のうちの１つで固体支持体に付着されたリンカーアレイの使用を包含する。例えば、リシンカルボキシル基を、固相支持体に結合されるＳＣＡＬリンカーに結合させ、かくしてリシン−ＳＣＡＬリンカーで機能化された支持体を産生することができる。もう１つの実施形態では、ポリエチレングリコールリンカーを介して固相支持体にリシンを結合させることができる。固体支持体上のＳＣＡＬリンカーは又、他のアミノ基が直接さらなるカップリングのために使用され得るのに対し、ジアミンリンカーの１つのアミノ基に対して結合させることもできる。さらにもう１つの実施形態においては、他のアミノ基はさらなる修正なしに使用されるのに対して、開裂可能なリンカーを、支持体に結合されたリシンのアミノ基のうちの１つに付着させることができる。リシンリンカーの各々のアミノ基に対する特異的カップリングは、直交保護基を用いることによって達成できる。以下の特定の実施形態においては、TentaGelに結合されたＳＣＡＬは、Ｆｍｏｃ及びＢｏｃによってアミノ基が保護されているリシンでアシル化され得る：結果として得られた支持体は、例えば２つの異なるアミノ酸の組によるアシル化において２つのポリアミドのためのアンカーとなりうる２つの特定のアミノ基を提供するべく逐次的に脱保護され得るリンカーＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＳＣＡＬをもつTentaGelである。Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）を用いたリンカーのリシン部分のアミノ基の１つのアシル化は、合計３つの潜在的アミノアンカー（逐次的脱保護において）をもつ新しいリンカーを提供し、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）によるリンカーリシンの両方のアミノ基のアシル化は、合計４つの潜在的アミノアンカーをもつ新しいリンカーを提供する。５．３．２．固体支持体の表面上の合成試験化合物及びコーディング分子の固着の位相学ライブラリーを生成するために固体支持体上の合成試験化合物とコーディング分子を位相学的に分離するためのさまざまなアプローチが考慮されている。合成試験化合物とコーディング分子を位相学的に分離するというのは、１つの支持体に対する空間的分離のことである。例えば、支持体が樹脂ビーズである場合、有意数のコーディング分子からの有意数のリガンド候補分子の分離が、樹脂ビーズの内部と表面の間で行なわれうる。好ましくは、支持体の表面は主として合成試験化合物分子を含み、コーディング分子をきわめてわずかしか含まない。より好ましくは、支持体の表面は９０％以上の合成試験化合物を含んでいる。さらに一層好ましくは、支持体の表面は９９％以上の合成試験化合物分子を含んでいる；最も好ましくは、この表面は９９．９％以上の合成試験化合物を含んでいる。このような措置がもつ利点は、結合スクリーニング検定におけるコーディング分子の干渉が制限されるという点にある（以下第５．６節を参照のこと）。コーディング配列を含む位相学的部域すなわち樹脂ビーズの内部が合成試験化合物を含んでいないということが必要なわけではない。前出の例では、コーディング分子は、支持体粒子の内部で分離されている。同様に、コーディング分子を支持体粒子の表面へ又は支持体粒子の片側へと分離させることもできると考えられている。コーディング分子からの合成試験化合物の位相学的分離のための一般的なアプローチには、試薬及び溶剤に対するカップリング部位のアクセス可能性の差に基づいた支持体上の反応性部位の選択的な誘導体化が関与している。例えば、樹脂ビーズ内の低いアクセス可能性をもつ領域は、ビーズの内部、例えばさまざまな溝路及びその他のキャビティである。ビーズが懸濁している溶液の分子と接触状態にある樹脂ビーズの表面は、比較的高いアクセス可能性をもつ領域である。適切な固相支持体に対するコーディング及び合成試験化合物の前駆物質の選択的なリンケージを行なうための方法には、以下のものが含まれるが、これらに制限されるわけではない：（i ）制御された光分解を介しての固体支持体表面の選択的誘導体化；２つのアプローチを用いることができる。１つのアプローチでは、機能化された固体支持体は、光開裂可能な保護基、例えばニトロベラトリルオキシカルボニル（Ｎｖｏｃ）で保護されている(Patchornik et al.，1970，J．Am．Chem．Soc．92; 63 33)。Ｎｖｏｃで誘導化された支持体粒子は、適当な表面上で単層形成の中で配置される。この単層は、光によって脱保護される可能性の最も高いビーズの部域が光と最も直接的に接触しているビーズの部域すなわちビーズの外表面となるように、制御された強度の光を用いて光分解される。結果として得られた部分的に脱保護されたビーズは撤底的に洗浄され、光安定保護基を含む合成試験化合物の前駆物質と反応させられる。例えば、ポリアミドのコードされたライブラリーの合成の場合、この前駆物質は、さらなる合成サイクルを通してポリアミド合成試験化合物へと変換されるＢｏｃ保護されたアミノ酸であるかもしれない。合成試験化合物前駆物質との反応に続いて、ビーズは、残りの感光性保護基を除去するべく定量性光分析に付され、かくして、例えば樹脂ビーズの内部といった光アクセス可能性が比較的低い環境の中に官能基がさらされることになる。この定量性光分析の後、支持体粒子はさらに、例えばＦｍｏｃで保護されたアミノ酸といったコーディング分子の直交保護された前駆物質で誘導体化される。結果として得られた固体支持体ビーズは究極的に、主として外部表面上に分離された合成試験化合物と、固体支持体ビーズの内部に位置設定されたコーディング分子を含む。支持体上のコーディング分子と合成試験化合物分子を分離するための択一的光分解技術には、光開裂可能な分枝を１つ有する有枝リンカーで支持体を誘導体化することそしてコーディング分子の前駆物質をリンカーの感光性分枝に付着させることが関与している。合成の完了後、支持体ビーズは、上述のとおり単層形成内で配置され光分解する。この光分解は、コーディング分子からの最小限の干渉しか受けずに選択的にスクリーニングするための合成試験化合物分子のパッチを含むビーズを提供する。（ii）化学的又は生化学的アプローチを用いた固体支持体の選択的誘導体化。これらの化学的及び生化学的誘導体化の効力は、露呈されていない内部のその他の基よりも速く反応するという、露呈された外表面の官能基の能力によって左右される。例えば、抗体は、樹脂固相支持体内部のペプチドリガンドに対して結合できない、ということが観察されてきた。従って、支持体の構造により課せられる立体障害の差を使用して又は反応溶剤の選択を通してのビーズの膨潤を変調することにより、巨大分子又は或る種の試薬にアクセスできるビーズの外部上の反応性基を、ビーズの内部の反応性基との関係において選択的に反応させることができる。従って、ビーズの外部にある反応性基は、合成試験化合物の合成のために修正することができ、一方内部反応性基はコーディング分子又はコーディング分子と合成試験化合物の両方の拡張のために修正され得る。樹脂ビーズ内部の反応性基の数は、外部表面上の基の数よりもはるかに多いことから、コーディング分子の実際の数は非常に大きいものとなり、精確な配列分析ひいては合成試験化合物の構造の解読（デューディング）のために充分なコーディング分子を提供している。以下のものを含め、さまざまな化学的及び生化学的アプローチが考慮されている。（ａ）保護された官能基を支持する固体支持体ビーズの外部の部分を選択的に保護解除するためのポリマー脱保護作用物質の使用。合成試験化合物のためのアンカーとして、脱保護された官能基が使用される。保護された状態にとどまっている官能基はその後、非ポリマー脱保護作用物質を用いて脱保護され、コーディング分子の付着のためのアンカーとして使用される。特定の一実施態様においては、この方法には、適切な酵素基質で誘導体化されたビーズの外部にある基を選択的に活性化するための酵素の使用が関与している。酵素は、そのサイズのため、ビーズの内部からは排除される。以下の例では、酵素は、ビーズすなわちビーズ内部に付着された基質の合計量に大きな影響を及ぼすことなく、樹脂ビーズの表面から基質を完全に除去する。基質の除去は、ビーズ上の反応性部位を露呈し、かくして活性化させる。合成試験化合物を固着させるために固体支持体の酵素修正された基が用いられ、コーディング分子の大部分を固着させるためには、修正を逃れた基が使用される。（ｂ）支持体ビーズの外部上の露呈された非保護官能基を選択的に遮断するための、ポリマー保護基の使用。コーディング分子を固着させるために、支持体内部の非保護官能基が使用される。その後、残りの保護された官能基は脱保護され、ライブラリーの合成試験化合物のためのアンカーとして使用される。以下の特定の例においては、３０kdMWのポリマーポリグルタミン酸は、ビーズに対し付着されたペプチドの合計量に影響を与えることなく、表面のアクセス可能な官能基を完全にブロックする。ブロックのために使用されるポリマーがそのα−カルボキシル基を介して付着されている場合、ポリマーのＸアミノ基の脱保護の後に行なわれる単一段階のEdman分解が、表面アミノ基を再生できる。（ｃ）例えばビーズの内側の水を凍結させ次に水を凍結した状態に保つため低温で有機溶剤中でビーズを反応させることによって、ビーズの内部に、異なる状態を作り出す。かくしてビーズの内側ではなく、表面を特異的に反応させることができる。５．４．コードされたライブラリーの生成中のコーディング分子及び合成試験化合物分子の交互の合成を実施するための戦略コードされたライブラリーの合成中の重要な合成操作には、直交する保護基の使用が関与している。同じ固体支持体粒子上のライブラリーの合成試験化合物の合成と並行してのコーディング分子の効果的な合成のためには、各々の合成のために使用される保護基は直交していなくてはならない。すなわち１つの分子についての全ての合成操作中、もう１つの分子上の保護基はそのままの状態にとどまらなくてはならない。分子ライブラリーの合成試験化合物とコーディング分子の組立てのための保護基のいくつかの直交した組合せを使用することが可能である。Gerger及びKonig ，1981 "The Peptides"（Gross及びMeinhofer，eds.）p3.p101，Academic Press : NewYork）の中で、有用な保護基について記述されている。非常に有用な組合せとしては、塩基及び酸で開裂できる保護基がある。例えば、ポリアミドのコードされたライブラリーの合成のためには、合成試験化合物分子を組立てるために、塩基感応性Ｎ^α−［（９ −フルオレニルメチル）オキシ］カルボニル（Ｆｍｏｃ−）保護基を使用することができ、コーディングペプチド分子を組立てるためには酸に不安定なＮ^α−［［２−３，５−ジメトキシフェニル）プロピ−２−イル］オキシ］カルボニル（Ｄｄｚ）保護基を用いることができる。Ｆｍｏｃ保護基及びペプチド合成内でのその使用は、Carpino及びHan（1972，J．Org．Chem．37:3403-3409）によって記述されており、Ｄｄｚ保護基については、Voss及びBirr（Hoppe-Seyler's Z．Ph ysiol．Chem．1981，362，717-725）により記述されている。両タイプの保護基共、従来、ペプチド合成中にα−アミノ酸のα−アミノ基をブロックするのに使用されてきた。しかしながら、その他の適当なアミノ酸も、ポリアミドの合成中これらの基によって保護され得る。所定のポリアミドが反応性官能基を伴う側鎖を含む場合、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）及びｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）誘導体といった又は好ましくはより酸に安定な誘導体としてのベンジル及びベンジルオキシカルボニルといった反応性基の保護も有用でありうる。ｔ−ブチルタイプの基を用いて反応性側鎖基が保護される場合、コーディングペプチドは、Nps （Zervas et al.，1963，J．Am．Chem．Soc．85; 3660）又はTrt（Zervas et al .，1956，J．Am．Chem．Soc．78: 1359）といった、Ｄｄｚよりもさらに酸に不安定な保護基を用いて合成されうる。ポリアミドのコードされたライブラリーの合成における直交保護基の交互の組合せには、コーディングペプチドを組立てるためのＦｍｏｃ又はその他の塩基不安定基又はリガンド結合候補を組立てるためのＤｄｚ又はその他の酸不安定基の使用が関与している。コーディング分子と合成試験化合物の交互の及び並行した合成のための保護基の交互の直交組合せには、例えばポリエステルのコードされたライブラリー内のポリエステルの合成のための、酢酸中の亜鉛といった還元剤を使用して除去することのできるアミン保護基としてのトリクロロエトキシカルボニル及びヒドロキシル保護基としてのトリクロロエチル、及びコーディングペプチドの合成のためのＢｏｃ及びｔ−Ｂｕ又はその他の酸で開裂可能な基、が関与している。前述のとおり、直交する保護基の２つのセットには互換性があってよい。すなわち、コーディングペプチドを調製するためのＮ^α−トリクロロエトキシカルボニルで保護されたアミノ酸が使用され、合成試験化合物ポリアミドを調製するためにＮ^α −Ｂｏｃ−保護されたモノマーが使用される。直交する保護基のもう１つの有用な組合せには、フッ化物イオンにより除去されうるトリメチルシリルエトキシカルボニル基、及びＤｄｚ又はＢｐｏｃ（２− ビフェニル−２−プロポキシカルボニル）といった酸感応性の高い保護基が関与する。コードされたポリアミドライブラリー合成におけるポリアミド又はコーディングペプチドのいずれかの組立ての間のＮ保護のためには、いずれのタイプの保護基でも使用できる。好ましいコードされたライブラリー内のペプチドコーディング分子の合成のためには、適切な保護基戦略を含む固相ペプチド合成の周知の技術が使用されることになる。ペプチド合成の関連する公開済みの技術はきわめて費用の高くつくものであり、なかでも、Stewart及びYoung，1984，"Solid Phas e Synthesis"、第２版は，Pierce Chemical Co.，Rockford Il.；Bodanszky，Y ．Klausner及びM．Ordetti，"Peptides Synthesis"、第２版，Wiley，New York ，1976; E．Gross及びJ．Meienhofer(編集)、"The Peptides"、第１巻、シリーズ続行中，Academic Press，New York，1979，がある。５．５．試験化合物の特異的ライブラリー及びその合成方法第５節に列挙されているライブラリーのための特定のタイプのリンケージ、ならびにこれらのライブラリーを生成するのに使用できる合成反応、すなわちライブラリーを生成するための一般的手順の段階（ii）を実施するために使用される反応（第５．２節参照）について、以下に記述する。以上の論述及び以下の例示的材料から当業者ならば容易に認識できるように、適当な保護基を用いて段階的に進行できる合成化学における既知の数多くの縮合反応のいずれでも、本発明のライブラリーを調製するために使用することができる。このようなライブラリーを調製するために使用できるサブユニットのリストは、広範なものである。適切な数多くの試薬が市販されており、又、周知のプロトコルを用いてこれを合成することも可能である。適当なサブユニットの構造の部分的リストが図５に示されている。合成反応の例は、以下の小節及び図式において記述されている。本明細書中の図式の中で、Ｚは、制限的な意味なくＨ、−ＮＨ₂、−ＯＨ、ＣＯ₂Ｈ、−ＣＯ₂Ｒ、−ＣＯＮＨＲなどを含む単数又は複数の基を内含する、あらゆるアルキル、アリル、ヘテロアルキル又はヘテロアリル基である。アルキルというのは、Ｃ₁〜Ｃ₂₀の飽和又は不飽和炭化水素である。アリルというのは、Ｃ₅ 〜Ｃ₂₀の芳香族炭化水素である。丸のついたＰは、例えば樹脂ビーズといった個別相支持体のことを言う。（丸のつかない）Ｐは保護基である。残りの記号は、その標準的意味を有する。これらの戦略は、上述のとおり適切な直交保護基を使用することによって、コードされたライブラリーを調製するのに利用できる。５．５．１．α−アミノ酸以外のサブユニットをもつアミド結合を含むライブラリー α−アミノ酸以外のアミノ酸を含む構造をもつポリアミドライブラリーを含め、単数又は複数のアミド結合を内含するさまざまなライブラリーが考慮されている。図式Ｉは、ポリアミドのための合成戦略を示す。第５．２節に記述されている支持体の１つのような適切な固体支持体を適切な溶剤中で無水カルボン酸とカップリングさせ、カルボン酸アミド支持体を得る。支持された酸−アミドは、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の存在下でジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）といった化合物を用いてカルボキシル基を活性化しその後保護されたアミノ基を含むジアミンと縮合させることによってさらに伸長される；縮合生成物の脱保護により、固体支持体上にジアミドアミンが得られる。この合成サイクルの反復、すなわち無水物との逐次的反応、単一の保護されたジアミンとの縮合及び脱保護は、固体支持体上に、成長しつつあるポリアミドを生成する。完成したポリアミド配列が保護基を内含している場合、これは固体支持体からの離脱なく脱保護される。ポリアミドに対する交互の合成アプローチには、部分的に保護されたジカルボン酸、例えば適当なジカルボン酸半エスエルで無水物を置換することによる上述の合成の修正が関与する。結果として得られるエステルアミド樹脂は脱保護され、ジアミンとの縮合に先立って例えばＤＣＣ／ＨＯＢｔで活性化される。ペプチド及びペプチド擬似体といったα−アミノ酸を含む構造をもつ合成試験化合物ポリアミドの合成のためには、前述のペプチド合成技術を使用することができる。１つの実施形態においては、ライブラリーの合成試験ポリアミドのＮ末端残基としてピログルタミン酸を内含させることができる。さらにもう１つの実施形態においては、合成試験ポリアミド配列の中への取込みのため、有用な化学的及び構造的特性を付与するサブユニットが選択されることになる。特に、本発明は、未変性ペプチドに比べてはるかに明確な構造的特性をもつポリアミドのライブラリーを調製することを構想している。もう１つの実施形態では、還元されたペプチド結合すなわちＲ₁−ＣＨ₂−ＮＨ−Ｒ₂（Ｒ₁及びＲ₂はアミノ酸残基又は配列）を取り込むポリアミドライブラリーを生成することができる。還元されたペプチド結合を、ジペプチドサブユニットとして導入することが可能である。このような分子は、ペプチド結合加水分解例えばプロテアーゼ活性に対する耐性をもつことになる。このようなライブラリーは、代謝破壊又はプロテアーゼ活性に対する耐性のため、インビボでの半減期の延長をいったような、対応する未変性ペプチドのものと比べて独特の機能及び活性をもつリガンドを提供することができる。全ての合成試験化合物の配列の中で少なくとも２つの位置において、架橋を形成するべく処理後のポリアミドを束縛し還化し又は剛性化するため架橋することのできる化学的官能基を提供するサブユニット例えばアミノ酸が挿入されることを条件として、前述の方法に従って、束縛された環化又は剛性ポリアミドを調製することができる。ペプチドを架橋することのできるアミノ酸の例としては、ジスルフィドを形成するシステイン、ラクトン又はラクタムを形成するアスパラギン酸及び遷移金属をキレート化し架橋を形成するγ−カルボキシル−グルタミン酸（Ｇｌａ）（例えばBachemから市販されているもの）といったキレート化剤、がある。保護されたγ−カルボキシルグルタミン酸は、Zee-Cheng及びOlson(198 0，Biophys，Biochem，Res．Commun，94: 1128-1132)により記述されている合成を修正することによって、調製することができる。架橋することのできる少なくとも２つのサブユニットがポリアミド配列に含まれているライブラリーは、例えばジスルフィドを形成するシステイン残基の酸化又はキレートを形成する金属イオンの付加によって処理され、かくしてペプチドを架橋し、束縛された環状又は剛性のペプチドを形成することができる。環式モチーフについては、１９９１年６月１９日に提出された米国出願第０７／７１７，４５４号の中で詳細に開示されている。ライブラリー内に取込むためのサブユニットとして使用できるいくつかの単一のアミノ酸としては、以下のようなものがある。ポリアミド合成の間に、非古典的アミノ酸を使用することが可能である。特定のコンホーメーションモチーフを導入するために、ポリアミドライブラリー内に以下の非古典的アミノ酸を取り込むことが可能である：１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシレート(Kazmierski et al.，1991，J．Am ．Chem．Soc．113; 2275-2283); （２Ｓ，３Ｓ）−メチル−フェニルアラニン、（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−フェニルアラニン、（２Ｒ，３Ｓ）−メチル−フェニルアラニン及び（２Ｒ，３Ｒ）−メチル−フェニルアラニン(Kazmierski及びHru by，1991，Tetrahedron Lett.);２−アミノテトラヒドロナフタレン−２−カルボン酸（Landis，1989，アリゾナ大学博士論文）；ヒドロキシ−１，２，３，４ −テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシレート(Miyake et al.，1984，J．Takeda Res ．Labs．43; 53-76)；β−カルボリン（Ｄ及びＬ）（Kazmierski，1988，アリゾナ大学博士論文）；ＨＩＣ（ヒスチジンイソキノリンカルボキシル酸）（Zechel et al.，1991，Int．J．Pep．Protein Res．38: 131-138）。以下のアミノ酸類似体及びペプチド擬似体を、特異的二次構造を誘発するか又は有利な作用を及ぼすべく、合成試験化合物のライブラリー内に取込むことが可能である；LL-Acp（ＬＬ−３−アミノ−２−プロペニドン−６−カルボキシル酸）、β−旋回誘発ジペプチド類似体(Kemp et al.，1985，J．Org．Chem．50; 58 34- 5838); β−シート誘発類似体(Kemp et al.，1988，Tetrahedron Lett．29: 5081-5082);β−旋回誘発類似体(Kemps et al.，1988，Tetrahedoron Lett．29 : 5057-5060);α−らせん誘発類似体(Kemp et al.，1988，Tetrahedron Lett．2 9; 4935-4938);γ−旋回誘発類似体(Kemp et al.，1989，J．Org．Chem．54: 10 9: 115); 及び以下の参考文献により提供されている類似体；Nagai及びSato，19 85，Tetrahedron Lett．26，647-650; DiMaio et al.，1989，J．Chem．Soc．Pe rkin Trans，p1687;同じく、Ｇｌｙ−Ａｌａ旋回類似体(Kahn et al.，1989，Te trahedron Lett．30: 2317)；アミノ結合等量式(Jones et al.，1988，Tetrahed ron Lett.29; 3853-3856)；トレトラゾール(Zabrocki et al.，1988，J．Am．Ch em．Soc．110; 5875-5880)；DTC(Samanen et al.，1990，Int．J．Protein Pep ．Res．35; 501-509);及びOlson et al.，1990，J．Am．Chem．Soc.112; 323-33 3及びGarvey et al.，1990，J．Org．Chem．56: 436の中で教示されている類似体。本発明はさらに、１９９１年６月１９日に提出された米国特許出願第０７／７１７．４５４に記述されているようなライブラリーの中の合成試験化合物ポリアミドの修飾又は誘導体化をも提供している。ペプチドの修飾は、当業者にとって周知のものであり、リン酸化、硫酸化、カルボキシメチル化及びアシル化を含んでいる。修飾は、化学的又は酵素的手段によって実施できる。このような修飾は、配列決定不可能なペプチドを結果としてもたらし得ることから、このようなライブラリー内でのコーディング分子の使用が好まれる。もう１つの態様においては、グリコシル化又は脂肪アシル化されたペプチド誘導体を調製することができる。グリコシル化又は脂肪アシル化されたペプチドの調製は、当該技術分野において周知のことである（例えば、米国出願第０７／７１７，４５４号を参照のこと）。脂肪酸ポリアミド誘導体も同じく調製することができる。例えば、制限的な意味なく、遊離アミノ基をアシル化、例えばミリストイル化することが可能である。本発明で使用するのに適したこの及びその他のペプチド脂肪酸結合体は、英国特許ＧＢ−８８０９１６２．４号、国際特許出願ＰＣＴ／ＡＵ８９／１００１６６号の中で開示されている。５．５．２．カルバメート結合を含むライブラリー本発明は、ポリカルバメートを含む単数又は複数のカルバメート（すなわちポリウレタン）結合を含む合成試験化合物を包含する。カルバメートを形成するための２つの戦略が図式IIに示されている。２つの異なるタイプのカルバメートの合成のためには、イソシアナートとジオール又はアミノアルコールのカップリングを使用することができる。例えば、上述のポリアミド合成のために使用される機能化された樹脂といった適当な樹脂が、ホスゲンとの反応によってイソシアナートに変換され、その後イソシアナートはアミノ保護されたアミノアルコールとカップリングされて、保護されたカルバメートを生成する。樹脂ウレタンの脱保護は、ポリウレタンを生成する同じ合成サイクルを反復するのに用いられるアミノウレタン樹脂をもたらす。すなわち、ホスゲンとの反応とそれに続くＮ保護されたアミノアルコールとのカップリング及び脱保護は、アミノジウレタン樹脂などを生成する。第２のタイプの支持されたカルバメートは、以下の通り上述の合成手順を修正することによって生成される。出発アミノ樹脂はイソシアナートに変換され、イソシアナートは、部分的に保護されたジオールとの反応により保護されたカルバメートに変換され、保護されたカルバメート樹脂は脱保護されたヒドロキシカルバメートを提供し、ヒドロキシカルバメートは、アミノ保護されたアミノアルキルイソシアナートとの反応とそれに続く脱保護により、アミノジカルバメートに変換される。５．５．３．尿素結合を含むライブラリーさまざまな尿素結合含有構造の合成のための戦略が、図式IIIに示されている。上述のカルバメートの合成の中で使用される樹脂のような、イソシアナート基で機能化された適当な樹脂が、部分的に保護されたジアミンとの反応とそれに続く脱保護によりアミノ尿素に変換され、アミノ尿素樹脂は、ホスゲンを用いてイソシアナートに変換される。イソシアナート尿素樹脂は、上述の３段階合成サイクルに所望の回数だけ付されてポリ尿素を生成する。５．５．４．エステル結合を含むライブラリーエステル結合を含むライブラリーの合成のための戦略が図式IV内に示されている。塩化メチレンといった膨潤溶剤中の、Merrifield固相ペプチド合成において使用されたヒドロキシルアルキル樹脂といったような適当な樹脂を、好ましくはＤＣＣといった縮合剤の存在下で、適切に保護されたヒドロキシカルボン酸を用いて縮合させて、脱保護の後に、支持されたヒドロキシエステルを得、このヒドロキシエステルを、同じくアシル化−脱保護サイクルを用いてさらに伸長させる。５．５．５．アミン結合を含むライブラリーアミン合成のための戦略が、図式Ｖに示されている。上述のアミド合成の中で使用された樹脂といったような適切な樹脂を、ニトロアルデヒドを用いた還元性アミノ化を介してニトロアルキルアミン樹脂に変換させ、一次アミンへとニトロアルカミンを還元するものとして知られている数多くの反応の１つ（例えば水素化アルミニウムリチウムによる還元）を用いて、さらに一次アミンへと還元させる。樹脂上の一次アミンを、還元−アルキル化−還元シークエンスを反復することによって伸長させ、望ましいポリアミンを生成する。上述の手順中のニトロアルキルアミン樹脂の還元は、Ｎ保護されたアミノアルデヒドでの還元性アミノ化のニトロアルデヒドを置換し、個別の合成段階において、結果として得た生成物の保護基を除去することによって避けることができる。５．５．６．スルフィド及びジスルフィド結合を含むライブラリーさまざまなポリスルフィド及びポリジスルフィド構造の合成のための戦略が図式VIに示されている。例えばMerrifield固相ペプチド合成において使用されたもののような適切な樹脂を、遊離チオール基を有するように機能化させる。チオール樹脂を、保護されたハロゲン化チオールアルキルでアルキル化し、生成物を脱保護してチオアルキル樹脂スルフィドを得る。アルキル化−脱保護サイクルを反復することによって、支持されたチオアルキルスルフィド鎖をさらに伸長させて、支持されたポリスルフィドを得る。上述の合成は、保護されたハロゲン化チオアルキルを保護されたチオアルキルクロロスルフェネート又はチオアルキルメトキシカルボニルスルフェネートによって置換させた場合に、支持されたジスルフィドを生成することができる。５．５．７．炭素−炭素結合を含むライブラリーさまざまなポリアルカン、ポリカルケン、ポリハロアルケン及び多価アルコールが考慮されている。このようなライブラリーの合成のための戦略が、図式VII に示されている。適切な樹脂を、カルボニル基で（例えば支持体ヒドロキシアルキル基の制御された酸化により）機能化させ、トリフェニルホスフィン及びハロアルキルジアルキルアセタルから調製されたWittig試薬で縮合させ、脱保護して、不飽和アルデヒド鎖を含む樹脂を得る。この鎖は、同じWittig縮合−脱保護シークエンスを用いてポリエンアルデヒドまで伸長させることができる。塩素又は臭素といった分子ハロゲンで支持されたポリエンの処理は、樹脂上のハロアルカンを生成する。これらのハロアルカンを、弱酸の存在下で亜鉛といった電気的に陽性な金属又は水素化すずトリブチルと反応させることによってその完全に脱ハロゲン化された還元誘導体に変換することも、同様に考慮されている。例えば過マンガン酸塩又は過ヨウ素酸塩といった酸化剤で、支持されたポリエンを入念に処理すると、多価アルコールが生成される。ヒドロ硼酸化−酸化シークエンス、エポキシ化（ｍ −クロロ過安息香酸などの過酸による）−加水分解シークエンス、又は、酢酸第２水銀−アルカリ性硼水素酸シークエンスにポリエンを付すことによって、その他のポリオールを生成することが可能である。５．５．８．多環式化合物及び機能化された多環式化合物のライブラリーさまざまな多環式化合物及び機能化された多環式化合物が考慮されている。多環式構造と関連する構造の合成のための戦略が図式VIIIに示されており、ここでＲ₁、Ｒ₂及びＲ₃は、上述のとおりのさまざまな置換されたアルキル又はアリル基を表わしている。図式VIIIは、飽和した炭化水素の調製を示している。代替的には、不飽和構造も同様に調製可能である。上述のカルボニル樹脂といったような適切な樹脂を、 Wittig縮合などによってアルケン樹脂に変換させ、この樹脂を、適切に活性化された例えば求電子性のジエンジメチルアセタールとのディールス・アルダー反応タイプの環周(pericyclic)囲反応の中で使用して、アセタール基の加水分解の後に、支持された機能化されたシクロヘキセニルアルデヒドを生成する。この支持された構造を、Wittig縮合・付加環化−脱保護シークエンスの反復によってさらに伸長させ、支持されたポリ−シクロヘキセンアルデヒドを生成することができ、このポリシクロヘキセンアルデヒドは以下の要領でさらに機能化することができる：（i ）ハロゲン化例えば臭素化又は塩素化により、ポリ−ハロシクロヘクサニルアルデヒドを得ること、（ii）ポリシクロヘキサンアルデヒド又はアルコールを生成するべく、水素化すずトリブチル又は電気的に陽性の金属（例えばＺｎ）及び弱酸を用いてポリハロシクロヘキサニルアルデヒドを還元させることそして（iii ）過マンガン酸塩を用いたポリシクロヘキサンアルデヒドの制御された酸化、ヒドロ硼酸化−酸化シークエンス、エポキシ化−加水分解シークエンス又はエポキシ化−還元シークエンス（例えば、ｍ−クロロ過安息香酸によるエポキシ化とそれに続く水素化アルミニウムリチウムによる還元）を行なって機能化された多価アルコールを生成すること。環状ライブラリーのもう１つの例は、図６に示されている。このライブラリーは、ブロム−プロピオン酸を支持体に付着させ、臭素を硫黄側鎖で置換して支持体にＢｏｃ保護されたシステインメチルエステルを付着させ、かくしてスルフィドリンケージを形成することによって調製される。ジアミノブチル酸又はリシンといったＢｏｃ／Ｆｍｏｃ保護されたジアミノ酸を付加することが可能である。１つの保護基の脱保護は、あらゆるカルボン酸との置換を可能にする。その他のアミノ基の脱保護は、もう１つのジアミノ酸の付加を可能にする。この一連の段階を、所望の回数だけ反復する。最終的に、メチルエステル基は、システインから加水分解され、構造を環化するべく脱保護されたアミノ基との反応を可能にする。５．５．９．足場として役立つことのできる多置換された環構造のライブラリー足場として役立つことのできるさまざまな多置換された構造が考慮されている。かかる構造の合成のための一般的戦略が、図式IXに示されている。特定のタイプの足場ライブラリーの調製についての一般的戦略が、図式Ｘに示されている。適切な足場としては、シクロペンタン、Kempの三酸(Kemp及びPetrakis，1981 ，J．Org．Chem．46; 5140-5143)、ジアミノカルボン酸の連続的カップリングによって調製された有枝構造体、Mutter et al．（1992，J．Am．Chem．Soc．114- 1463-1470）によって記述されているような環状鋳型、ステロイド、ベンゾジアゼピンなどがあるが、これらに制限されるわけではない。 Merrifieldタイプの樹脂に対するシス−１，３，５−シクロヘキサントリカルボン酸の誘導体の付着とそれに続く、三酸の３つのカルボキシル基の各々の誘導体化のためのアプローチが、足場として役立つことのできる支持された多置換環構造の合成の一例として、以下の第９節に記述されている（以下の図式ＸＩＶ参照）。足場として役立つことのできる多置換環構造の合成の第２の例として、Ellman 及びBunin（Chemical & Engineering News，Jan．18，1993，p33）の公開された研究に基づく１，４−ベンゾジアゼピンの組立て及び誘導体化が、以下に示されている。特定の一実施形態においては、４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸リンカーで機能化されたMerrifieldタイプの樹脂といった適切な樹脂が、さらに、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基で保護されたアミノ基をもつ２ −アミノ−４´−ヒドロキシベンゾフェノンで機能化される。Ｆｍｏｃの除去、結果として得られたアニリンとＦｍｏｃ保護されたアミノ酸とのアニリド生成を目的としたカップリング、アニリドからのＦｍｏｃの除去、及び環化の後、さらなる研究のためのさまざまなベンゾジアゼピン誘導体を生成するべくさまざまな求電子体を用いて、アニリド窒素上でさらにアルキル化されうる支持された１，４−ベンゾジアゼピンが生成される。足場として使用するための考えられる最も小さい環構造は、シクロペンタン環である（図７）。上述の多置換環構造ライブラリーのコードされた形態が、好ましい実施形態である。コーディング分子がペプチドであるコードされたライブラリーが最も好ましい。ペプチドでコードされたライブラリーの合成のためには、第５．１節の一般的手順及び第５．２節及び第５．３節中に概略的に示されている合成戦略が使用される。５．５．１０．アミノ酸から構築された足場に基づくライブラリー枝分かれした単純な付着物でありより大きなコンホメーション空間をマッピングする足場が、ジアミノカルボン酸（図３参照）の連続的カップリングにより構築される（図３参照）。広範な空間をマッピングするさまざまなタイプの足場が、融通性のある環状又は有枝足場である。これらのライブラリーの原理は、図３に示されている。足場ライブラリー構造の一例として、我々はここに有枝ライブラリーの合成を示す（以下の図式ＸＶ、第９節）。５．６．試験化合物のライブラリー内のリガンドの検出及び識別の方法合成試験化合物としてのさまざまな化学構造のライブラリー及びその合成方法を提供することに加えて、本発明はさらに、結合、刺激、阻害、毒性、味などといった問題の生物学的活性を示すライブラリー内でリガンドを同定するための１つのライブラリーの試験化合物のスクリーニング方法をも含んで成る。その他のライブラリーは、問題となっている酵素活性、酵素阻害活性並びに化学及び物理特性について以下に記す方法に従ってスクリーニングすることができる。当該技術分野において数多くのスクリーニング検定が周知である。数多くのスクリーニング検定が、１９９１年６月１９日に提出された米国特許出願第０７／７１７，４５４号の中でも記述されている。初期スクリーニング中に発見されたリガンドは、最適なリガンドでない可能性がある。実際には、第１のスクリーニングの間に選択されたリガンドの構造に基づいて第２のライブラリーを合成することが往々にして好ましい。このようにして、より高い活性をもつリガンドを同定することができる。５．６．１．結合検定本発明は、アクセプター分子に結合する合成試験化合物の同定を可能にする。ここで使用する「アクセプター分子」という語は、リガンドに結合するあらゆる分子のことである。受容体分子は、抗体、レセプター、酵素、核酸といった生体巨大分子又は或る種の炭水化物、脂質、薬物として役立つ有機化合物、金属などのさらに小さい分子であってもよい。本発明のライブラリー内の合成試験化合物は潜在的に数多くの異なる受容体分子と相互反応することができる。特異的受容体分子が結合する特定のリガンド種を同定することによって、問題のリガンド種を物理的に分離することが可能となる。各々のスクリーニング／検出／分離段階中、少数の固体支持体ビーズのみが除去されるため、ビーズの大部分はビーズプール内に残ることになる。従って、ライブラリーを何回も再使用することができる。異なる色又は同定スキームが異なる受容体分子について使用される場合（例えば、フルオレセイン（緑）、テキサスレッド（赤）、ＤＡＰＩ（青）及びＢＯＤＩＰＩといった螢光リポータ基が受容体上に標識付けされている状態で）、そして螢光顕微鏡又は螢光検出器内の適切な励起フィルタを用いると、異なる受容体（レセプター）をライブラリーに付加し、特異的標的についての迅速なスクリーニングを容易にするため同時に評価することができる。これらの戦略は、コストを削減するだけでなく、スクリーニングされうる受容体分子の数をも増大させる。本発明の方法においては、問題の受容体分子は、ライブラリーの中に導入されてそこでそのライブラリー内の１以上のリガンド種を認識しこれに結合することになる。受容体分子が結合する各々のリガンド種は、支持体ひいてはリガンドが直ちに同定され分離されうるように、単一の固相支持体上に見い出されることになる。所望のリガンドが当業者にとっては既知のあらゆる従来の手段によって分離され得、本発明は、分離方法によって制限されるものではない。例えば、制限的な意味なく、特異的受容体分子と最も強い物理化学的相互作用を示す固体−支持体 −ビーズリガンドの組合せを物理的に分離することが可能である。１つの実施形態においては、１０⁵〜１０⁷の固相支持体ビーズを含むライブラリーに対して特異的受容体分子の溶液が添加される。受容体分子は、結合が起こるのを可能にするのに充分な時間、ビーズとインキュベートされる。その後、支持体に結合したリガンドと受容体分子の複合体は、分離される。ペプチドであるリガンドを結合するため可溶性受容体分子としてのモノクローナル抗体の使用について記述しているさらに特定的な実施形態が、以下の方法の中で記されている。これらの方法が、どんな受容体分子の結合を検出するためにでも容易に適合できるものである、というのは明確であろう。可溶性受容体分子を使用することに加えて、もう１つの実施形態においては、無傷の細胞を用いて細胞表面レセプターに結合するリガンドを検出することが可能である。無傷の細胞の使用は、多重サブユニットもしくは不安定なものであるレセプター又は細胞膜の脂質ドメインが機能的であることを必要とするレセプターと共に使用するために好ましいことである。この技術において使用される細胞は、生きた細胞あるいは固定された細胞のいずれかであってよい。細胞はライブラリーと共にインキュベートされ、標的細胞及び関連するビーズ−ペプチドの間で「ロゼット」を形成するべくライブラリー内の或る種のペプチドに結合することになる。その後、ロゼットを分画遠心分離によって分離し、解剖顕微鏡の下で物理的に除去することができる。代替的には、（ｉ）問題のレセプターがその細胞表面上に存在しない「親」細胞系統及び（ii）レセプター陽性細胞系統、例えば問題のレセプターをコードする遺伝子で親細胞系統をトランスフェクションすることによって誘導される細胞系統、といったような細胞系統でのパンニング法を用いて、ライブラリーをスクリーニングすることができる。そのとき、以下の戦略によってライブラリーをスクリーニングすることが可能である：すなわち、（i ）まず第１に、レセプター特異的な非結合ビーズ又は無関連の非結合ビーズを残すための標準的な「パンニング技術」により親細胞系統の単層を導入することによって、レセプターが欠如している細胞に結合することになるその非特異的ビーズのライブラリーを枯渇させる；（ii）レセプター特異的ビーズ又は無関連ビーズの両方を含むことになる非結合ビーズを除去し、レセプター特異的ビーズがレセプター陽性細胞系統に結合することになるレセプター陽性細胞系統の単層上にそれらを投入する；（iii）穏やかに洗浄しデカントすることによって残っている無関連の非結合ビーズを除去する；そして（iv）微量ピペットといったマイクロマニピュレータを用いてレセプター特異的ビーズを除去する。細胞膜の脂質ドメインが機能的になることを必要とするレセプター又は膜結合したレセプターのための全細胞検定の代わりとして、レセプター分子を、リポーター基又は酵素が付着されうるリポソームへと再構築することができる。上述の例は、合成試験化合物に関するものであり、本発明の実践においては、前出の各項に記述されている化合物のいずれでも使用することができる。従って、１つの受容体分子は、足場として作用することのできるさまざまなポリアミド、ポリウレタン、ポリエステル、多官能化された構造のうちの１つに結合することができる。１つの実施形態においては、受容体分子は直接標識付けされ得る。もう１つの実施形態においては、問題のリガンドを含む固相支持体粒子に対する受容体分子の結合を検出するのに、標識づけされた二次試薬を使用することができる。結合は、酵素標識による発色団のin situ形成によって検出できる。適切な酵素としては、アルカリ性ホスファターゼ及びホースラディッシュペルオキシダーゼが含まれるが、これらに制限されるわけではない。さらなる実施形態においては、問題の異なる受容体分子上の２つの酵素標識をもつ２つの色素産生基質を用いた２色検定を使用することができる。２色検定を用いて、交差反応性及び単独反応性のリガンドを同定することができる。本発明で使用するためのその他の標識としては、カラーラテックスビーズ、磁気ビーズ、螢光標識（例えばいくつかの螢光団を挙げるだけでも、フルオレセインイオチオシアナート（ＦＩＴＣ）、フェコエリスリン（ＰＥ）、テキサスレッド（ＴＲ）、ローダミン、遊離又はキレート化されたランタニド系列の塩、特にＥｕ³⁺）、化学発光分子、放射性同位元素又は磁気共鳴画像標識がある。２色検定は、異なる波長で発光する螢光団又は２つ以上のカラーラテックスビーズを用いて行なうことができる。標識づけされたビーズは手で又は機械的手段によって分離されうる。機械的手段としては、螢光活性化選別、すなわちＦＡＣＳと類似のもの、そしてマイクロマニピュレーター除去手段がある。下記の特定の例では、酵素−色原体標識及び螢光（ＦＩＴＣ）標識が使用される。反応性ビーズは、いくつかの基準を挙げるだけでも、標識強度例えばカラー強度、螢光強度、磁気強度又は放射能に基づいて分離することができる。該当する場合には例えばEdman配列決定又は質量スペクトル分析によって直接的に又は問題のリガンドに対応するコーディングペプチドを配列決定することによって間接的に、最も高い強度で標識づけされたビーズを選択し、ビーズに付着したリガンドを構造的に特徴づけすることができる。もう１つの態様においては、任意のカットオフよりも上の標識強度をもつビーズの無作為選択物を選択してこれを構造分析に付すことができる。潜在的には、カラー強度を定量しひいてはビーズリガンドの構造分析に先立って受容体分子に対するリガンドの相対的親和力を正確に規定するため、最新の画像解析顕微鏡検査法を用いることもできる。同様にして、受容体が螢光標識で標識づけされている場合、定量免疫螢光顕微鏡検査法を応用することができる。さらにもう１つの実施形態においては、一定の標識強度を示すビーズが、組成分析例えばペプチドリガンドの場合のアミノ酸組成分析のために選択される。アミノ酸分析から重要なものとして同定されたアミノ酸サブユニットの制限されたセットを含む精製ライブラリーを、このとき調製しスクリーニングすることができる。もう１つの実施形態においては、最大の結合親和力をもつリガンドは、ライブラリーのわずかな固相支持体ビーズのみに対する結合が検出されるまで、問題の受容体分子を漸進的に希釈することによって、同定されうる。代替的には、受容体分子との結合の緊縮性を増大させることができる。当業者であれば、結合の緊縮性が、（i ）溶液のイオン強度を増大させること、（ii）尿素といったような変性作用のある化合物の濃度を増加させること；（iii）検定溶液のpHを増減させること；（iii ）一価の受容体分子を使用すること；（iv）規定の濃度の既知の競合物質を反応混合物の中に内含させること及び（v ）受容体濃度を低下させることによって増大されうるものであることが理解できることだろう。結合相互作用を変更するため溶液成分を変更するその他の手段は、当該技術分野において周知のものである。もう１つの実施形態では、低い親和力結合を示すリガンドが問題にされ得る。これらは、まずすべての高親和力リガンドを除去し、次に低緊縮性又は比較的希釈度の低い条件下で結合を検出することにより、選択することができる。好ましい一実施形態においては、２重標識検定を使用することができる。可溶性リガンドの存在下でビーズに対する問題の受容体分子の非特異的結合を検出するために、第１の標識を使用することができる。その後、標識されたビーズをライブラリーから除去し、可溶性リガンドを除去する。それから、残りのビーズに対する特異的に結合する受容体分子が検出される。かかるビーズ上のリガンドは、問題のリガンドと同じ結合部位で受容体分子を結合し、かくして問題のリガンドを擬似するものと予想することができる。２重標識検定は、その第１段階が非特異的陽性反応ビーズの除去を可能にすることから、問題の受容体分子を精製する必要がないという利点を提供する。好ましい一実施形態においては、例えばＦＡＣＳを用いて、合成試験ライブラリーをスクリーニングするためのプローブとして、螢光標識した受容体分子を使用することができる。５．６．２．生物活性検定本発明はさらに、例えば中和並びに溶剤、無菌水及び培地による大規模洗浄により合成から残った有毒分子を全て除去するように処理されたライブラリーからのリガンド候補の生物活性についての検定をも提供している。検定されうる生物活性には、毒性及び死滅、刺激及び成長促進、シグナル形質導入、生化学及び生物物理学的変化並びに生理学的変化がある。好ましい実施形態においては、ここで「ビーズ」とも呼ばれている固相支持体から、ライブラリーの合成試験化合物を選択的に開裂することができる。好ましくは、合成試験化合物は、１以上の放出及びスクリーニング検定を可能にするため多数の開裂可能なリンカーを介して個々の相支持体に付着される。１つの実施形態においては、合成試験化合物の１つの分画のみが選択的に開裂可能であるように、ビーズが調製される。選択的に開裂可能なリガンド候補、リンカー及びビーズについては、前出の第５．３．２項で論述されている。合成試験化合物の分画の開裂が起こるように、ライブラリーが開裂試薬で処理される。開裂試薬の例としては、紫外線、酸、塩基、酵素又は触媒があるが、これらに制限されるわけではない。１つの実施形態においては、１０〜９０％の合成試験化合物が放出されるようにライブラリーが処理される。さらに好ましい１実施形態においては、合成試験化合物の２５〜５０％が放出される。全ての合成試験化合物が開裂可能である場合、開裂試薬を制限することにより、非定量的開裂を行なうことができる。１つの態様では、紫外線の照射時間及び強度が制限される。もう１つの実施形態においては、試薬の濃度が制限される。開裂を行なうための処理の後、ライブラリーを例えば中和によってさらに処理してそれを所望の検定と生物学的に適合させることができる。実際には、当業者であれば、開裂可能なリンカー又は結合によってライブラリーの全ての合成試験化合物が固相に付着されている場合、部分的開裂のための適当な開裂条件を容易に決定することができるだろう。さらに当業者は、放出された合成試験化合物の相対的濃度が、開裂条件を変動させることによって影響を受けうるということを理解することだろう。ライブラリーのビーズは固定化されることから、特定のリガンド候補の濃度勾配が形成される。合成試験化合物の高い濃度は、それを放出したビーズの近くで見られることになる。従って、ビーズの近くでの問題の生物学的活性の証拠により、ビーズを同定し分離し、さらに合成試験化合物に対応するコーディング分子の配列決定又はその他の技術により構造的に特徴づけすることが可能となる。合成試験化合物の同定は、部分的開裂後、ビーズ上に配列決定又はその他の特徴づけのために充分なものが残されるので可能となっている。もう１つの実施形態においては、ビーズはマイクロタイターウエルの中で区分化され得（例えば１０ビーズ／ウエル）、リガンド候補の一分画が放出され、生物活性についてテストされ、かくして潜在的な拡散の問題はなくなる。配列検定のため、異なる開裂可能なリンカーを介して固相支持体又はビーズに合成試験化合物の異なる部分を付着させることが可能である。これらの例の中で「ビーズ」という語は、個々の相支持体粒子のことを意味している。未切断合成試験化合物での生物検定も同様に構想されている。このとき全合成試験化合物で被覆されたビーズの生物活性をスクリーニングすることができる。１つの態様においては、１匹の動物の体内に１つのライブラリーを導入することができる。問題のビーズを特異的組織から分離することができる。経口、経鼻又は経皮的投与の後特異的に吸収されたビーズを分離することができる。好ましい一実施形態においては、かかるビーズは磁気ビーズであるか又は、その他の何らかの同定特性をもち、従って組織から容易に分離される。もう１つの実施形態においては、固定化されたリガンド自体が、適切な表面レセプターを用いて生化学的変化を惹起することができる。さらに当業者であれば、短期間又は長期間のいずれかについて組織培養の中で維持することのできるあらゆる細胞を生物検定の中で使用できるということを、さらに理解できるだろう。ここで使用する「細胞」という語には、原核（例えば細菌）及び真核細胞、酵母、糸状菌及び真菌を含むものとする。培地内に維持された一次細胞又は系統を使用することができる。さらに、出願人は、ウイルスについての生物検定を、ウイルスで細胞を感染又は形質転換させることによって行なうことができる、ということを構想している。例えば、制限的な意味なく、ラムダバクテリオファージの溶原性活性を阻害するリガンドの能力は、感染を受けたとき明確なプラークを形成しないトランスフェクションされたE．coliコロニーを同定することによって検定することができる。ライブラリーの合成試験化合物分子の活性を検定するための本発明の方法は前述の例に制限されるものではない。出願人は、ここで開示される発明を取り込むためどんな系でも修正することができる、ということを構想している。出願人は、このようなことが本発明の範囲内に入るものと考えている。５．６．３．酵素擬似体／酵素阻害剤本発明はさらに、反応の触媒として作用することのできるライブラリーすなわち酵素ライブラリー；補酵素として役立つ分子ライブラリー；及び酵素反応を阻害することのできる分子ライブラリーを含んでいる。従って、本発明は同様に、酵素もしくは補酵素活性又は酵素活性の阻害について検定するのに使用すべき方法をも提供している。酵素活性は、検出可能な反応生成物の形成によって観察できる。特定の一実施形態において、酵素ライブラリーからの酵素は、アルカリ性ホスファターゼを触媒とする反応、例えばリン酸５−ブロモ−４−クロロ−３−インドイル（ＢＣＩＰ）の加水分解などで触媒として作用し、固相支持体上に青色の不溶性反応生成物を形成する（以下の例１３参照）。もう１つの実施形態においては、例えば色又は螢光といった観察可能な生成物のゾーンを半固体マトリックスの中に形成させることができる。例えばアガロースゲルといった半固体マトリックスの中に１つのライブラリーが層状化され、色素産生性又はその他の指標基質が付加される。酵素ライブラリーからの酵素−ビーズ複合体が所望の酵素活性を示す場合、生成物ゾーンが形成される。例えば、制限的な意味なく、ホースラディッシュペルオキシダーゼの類似体であるライブラリーからの分子は、pH７．０の０．１Ｍのリン酸緩衝液の中のアミノアンチピレン(０．２５mg／ml：Kodak)、フェノール（８mg／ml）及びＨ₂Ｏ₂(０．００５％)の溶液を加えることによって同定できる。酵素活性をもつビーズは色が紫色であるゾーンを形成することになる。もう１つの実施形態においては、プロテアーゼ活性をもつビーズを、周知の比色プロテアーゼ基質の付加によって同定することが可能である。補酵素活性は、天然の又は一般の補酵素が存在しない場合、補酵素によって媒介された酵素活性について検定することにより、観察することができる。酵素阻害活性は、部分的に放出された合成試験化合物を用いて検出できる。一例においては、制限的な意味なく、１つのライブラリーが、１つの酵素を含む半固体マトリックスの中で層状化されている。ライブラリーは、リガンド候補分子を部分的に放出するように処理される。分子が酵素活性を阻害する場合、生成物が欠如したゾーンが同定できる。一実施形態においては、酵素基質は色素産生性基質であり、着色生成物が形成される。かくして、酵素阻害剤の存在は、無色のゾーンを生み出すことになる。もう１つの実施形態においては、ヘモグロビン又はアルカリ性ホスファターゼといった指標酵素のタンパク質分解の阻害は、半固体マトリックス内の不透明ゾーンの存在によって検出できる。これは、タンパク質分解阻害剤の存在によってヘモグロビン又は指標酵素の分解が妨げられることになるからである。当業者にとっては、酵素活性、補酵素活性を示すか又は酵素活性を阻害する合成試験化合物分子が、ペプチド、ペプチド擬似体、第５項に記述されている化合物のいずれか又はさまざまなポリマーのうちの１つ、のいずれであってもよい、ということは周知のことである。特に有利なのは、唯一の触媒結合ポケット又は表面を作り出すことのできる、或る種の足場をもつ束縛された構造、一環式、二環式又は三環式構造を含む束縛されたポリマーであるが、これらに制限されるわけではない。５．６．４．位相学的分離本発明はさらに、問題の高分子受容体分子にアクセス可能な、固体支持体の外部の試験化合物と内部のコーディング分子を分離する方法を包含している。この方法は、好ましい実施形態においてはペプチドであるリンカーを合成する段階を含む。リンカーは、キモトリプシン又はその他のエンドペプチダーゼといった便利に入手できる酵素によって加水分解されうる１つの配列を含んでいる。一つの実施形態においては、酵素はキモトリプシンであり、リンカーはフェニルアラニンを含む。リンカーが合成された後、Ｎ^αアミノ官能基は保護された状態に残され、支持体はエンドペプチダーゼに露呈される。エンドペプチダーゼは、受容体といったその他の巨大分子にアクセス可能なものとなるリンカーに対してのみ作用する。ペプチドリンカーの酵素的加水分解の後、試験化合物及びコーディング化合物は、あらゆる直交保護基を用いて合成されうる。５．７．１つのライブラリーから合成試験化合物を特徴づけする方法問題のリガンドを含む支持体がひとたび前出の第５．６項の方法のうちのいずれかに従って選択されたならば、本発明は、リガンドの構造を決定する手段を提供する。試験化合物の構造を決定する一般的アプローチとしては２つある：すなわち重合体の構造は、従来の技術例えばEdmanの分解又は質量分析法などによって直接分析することができる：代替的には、第２の分子種の構造が、同じ支持体に付着された試験化合物の構造を明確に指示（コード）するように、ライブラリーの構築中に、第２の分子又は分子群を合成することができる。この２番目の技術により、それ自体配列決定に導かれ得ないポリマーの構造を容易に決定することができる。本発明のさらにもう１つの実施形態は、試験化合物とは全く異なるコーディング分子が１つもないという点において前述の実施形態とは異なっている「分画コーディング」と呼ばれる第３のコーディング技法を包含する。例えば１つのアミノ酸のＤ及びＬ立体異性体といったように、試験化合物の特異的サブユニットが従来の分析中で分解不可能である場合には、機能的コーディングが使用される。分画コーディングは、ライブラリーが合成される時点でライブラリーの構築においてその他の形で利用されない異なるサブユニット１を少量混合することによって複数のサブユニットを区別することのできる方法を提供している。かくして、分画コーディングは、２つの区別できないサブユニットのうちの１つが用いられるとき、支持体の試験化合物のわずかな検出可能な不均質度を生み出す。本発明では、標準的に約５％というこのような不均質度は、各支持体上にはわずか１つの試験化合物種しかないという本出願の教示と相容れるものである。５．７．１．単一の及び多数の配列コードを用いた特徴づけコードされた分子ライブラリーの好ましい実施形態において、問題の合成試験化合物を含む個々の相支持体は同様に、リガンドの構造をコードする配列をもつ、例えばコーディングペプチドの配列の決定がリガンドの同一性を明らかにする、１つの分子好ましくはペプチドをも含んでいる。ペプチド配列を決定する好ましい方法は、Edmanの分解である。特に好ましい方法では、Applied Biosystems 社の４７７Ａタンパク質シーケンサーが利用される。ペプチドのアミノ酸配列は、高速原子ボンバードメント質量分析法（ＦＡＢ−ＭＳ）又はその他の分析技術のいずれかを用いても決定できる。コーディングペプチドは固体支持体に付着されるか又は固体支持体から開裂した状態で配列決定され得る。ペプチドを開裂させるためには、分離されたビーズは、固相支持体からペプチドを分離するべく当業者にとっては既知のものである従来の開裂試薬で処理される。選定される開裂試薬の選択は、利用される固相支持体に依存する。代替的には、本発明の範囲内のもう１つの実施形態においては、ビーズといった単一の固相支持体粒子を、そのコーディングペプチド配列が付着された状態で分離し、予めコーディングペプチドをビーズから開裂させることなくペプチドの配列決定のためビーズをシーケンサーに導入することが可能である。官能化可能な部位を０．５mEq／グラム伴う直径１００μｍの単一の樹脂ビーズは、部位の２分の１がコーディングペプチドを結合するのに用いられる場合、約１００pmol eのペプチドを含むものと見積もられる。コーディングペプチドでの同様の置換度については、官能化可能部位を樹脂１グラムにつき０．５mEq伴う単一の直径２５０μｍのＰＡＭ樹脂ビーズは、約１，５００pmoleのコーディングペプチドを含む。最新のペプチドシーケンサを用いると、適切な配列決定のためには、わずか５〜１０pmoleしか必要とされない。従って、標準的なＰＡＭ樹脂については、配列決定のための適切な量以上の量のコーディングペプチドを含むように、直径１００μｍ||の単一ビーズを投入することができる。 Edmanの配列決定に加えて、高速イオンボンバードメント質量分析法も非常に強力な分析手段であり、ペプチド及びさまざまなその他の分子の構造を分析するために往々にして有効に利用できる。構造分析においては、電子スプレー式高性能質量分析法も非常に有用である。好ましくは、１９９２年９月３日に提出された米国特許出願第０７／９３９，８１１号の中に記述されている通りに、コーディング分子の構造を決定するための質量分析法が行なわれる。当業者であれば、試験化合物の任意の位置におけるサブユニット種の数は、時としてコーディングポリマーを構築するのに使用されるモノマーの数よりも大きい、ということがわかるだろう。例えば、コーディングペプチドは、Edman分解の後容易に区別されるアミノ酸の制限されたセットを用いて構築することができる。これらの状況下で、コーディング分子は、所与の位置でアミノ酸混合物を導入することによって構築されうる。例えば、一重項／二重項コード、すなわち試験化合物の１つの位置につき１つ又は２つのコーディング成分をもち、コーディングポリペプチドがわずか８個のアミノ酸しか含まないコードは、最高３６個のサブユニットをコードできる。同じ数の成分をもつ三重項／二重項／一重項コードは、１つの位置につき８４個のサブユニットをコードする。このようなコーディングペプチドのEdman分解生成物の分析は、コーディング配列の各位置において１つか２つ又は１つ、２つ又は３つのいずれかのアミノ酸を明らかにすることになる。５．７．２．非配列コードを用いた特徴づけ非配列コーディングと呼ばれる代替的な１つの好ましい実施形態は、そのサブユニットの配列の決定無しにコーディング分子の「読取り」を可能にする。配列コードは、本来解読に苦労する。分子の配列決定には、反復する分解段階が必要とされる。これとは対照的に、ポリマー分子の組成分析は、一回の分解及び、結果として得られたサブユニット又はその誘導体の一回の分析によって行なうことができる。その上、ペプチドコーディング分子を配列決定するのに必要とされる最も時間のかかる段階は、開裂したフェニルチオヒダントインの各々のクロマトグラフィ分析である。全ての情報が、単一の溶出されたピークの唯一の保持時間にあるにせよ、個別のクロマトグラフィ段階は、各々の段階的分解の生成物について行なわれなければならない。かくして勾配分析時間の大部分は、その位置における残基に対応する単一のピークの出現を待って「無駄にされる」。このプロセスが可能な限り効率の良いものでないことは明らかである。配列のEdman分解とそれに続くＨＰＬＣ分析の代りに、全てのコーディングサブユニットを同時に開裂させ、単一のＨＰＬＣラン内でそれらを区別し、次に結果を解読して試験化合物の同一性を見極めることが可能であるとすれば、プロセスは大幅に加速できることだろう。非配列コードの読取りには、所与のシグナルが存在するか否かを見極めることしか必要とされない。保持時間が約０．３分だけ異なる２つのピークのベースライン分解能は、勾配溶出を伴う標準的な逆相ＨＰＬＣ分析を用いて達成できる。従って、４５分の勾配は、１５０個の化合物の中から弁別することができる。１５０の異なるコーディング成分のグループの中から選択されたサブユニットから成るコーディング分子は、１５０ケタの２進数と同等である。従って２¹⁵⁰又は約１０⁴⁵の異なる試験化合物種をこのようにしてコードすることができる。かくして、非配列コードは、最大の実践的ライブラリーでさえ、その試験化合物のサブユニットの配列及び同一性の両方をコードするのに容易に適合している。非配列コードは以下の通りに構築することができる。ここでＳ００−Ｓ３１と呼ぶ最高３２の異なるサブユニットから選択された最高２０の残基をもつ試験化合物の構造をコードするために使用されるべき１００個のコーディング成分のセットの要素をＣ０００〜Ｃ０９９とする。このスキームにおいて、第１の位置にある残基の同一性はコーディング要素Ｃ０００〜Ｃ００４の存在又は不在によって決定される；何も存在しない場合、試験化合物の最初の位置にはＳ００が存在し、全てが存在する場合には、位置１にはＳ３１が存在する。成分Ｃ００５−Ｃ００９、Ｃ０１０−Ｃ０１４、…Ｃ０９５−Ｃ０９９により連続した位置がコードされる。当業者であれば、１００ケタコードの最大コーディング能力よりもはるかに小さいライブラリーが必要とされている頻繁に発生するケースにおいて、コードの忠実性は、コーディング分子のセットのサイズを減少させるすなわち、クロマトグラフィ分析において成分間の間隔を増大させることによってか、又は冗長なコーディングの使用によって増大され得ること、例えば、コードされた各位置についてのコード内に「パリティ（奇遇性）」成分を導入することができる、ということがわかるだろう。最も頻繁には、１６のサブユニットと１２８のサブユニットの間に対応する４〜８のコーディング成分とそれに加えて１つのパリティ成分が、試験化合物内の各位置をコードするのに必要とされるだろう。コーディング成分は、それらを同時に開裂及び分析できるようにするため、コーディング構造の中で配置される必要がある。明らかな１つの可能性は、全体的加水分解とそれに続く混合物の選択的修飾及び分析である。この場合、コーディング化合物の構造は重要ではない。コーディング成分を互いに連結することも又分枝構造の個別の分枝に付着させることもでき、又各成分に対する結合が加水分解可能であるかぎりいかなる組合せでも可能である。しかしながら、このアプローチは、試験化合物からの加水分解生成物の存在によって危うくなる。従って、Edman，1950，ACTA CHEM，SCAND，4; 283-293; Edman，et al.，19 67，EURO J．BIOCHEM，1; 80-91により設計された非常に選択的な分解方法の使用が最適な選択であると思われた。 Edman分解は、ペプチド鎖からＮ末端アミノ酸を選択的に開裂する。上で規定したクロマトグラフィー必要条件を満たす適正な数のアミノ酸及びアミノ酸誘導体を同定することができ、それらの同時開裂を可能にする配置の中の１つのコーディング構造としそれらが合成された場合、ただ１つのEdman分解及びＨＰＬＣ分析のサイクルの中で、非ペプチド構造の組成を分析することが可能であろう。逆相上でのアミノ酸フェニルチオハイダントインの保持時間は、アミノ酸の側鎖の脂質親和性に追従する。かくして適切な保持時間で一組のアミノ酸誘導体を設計するためには、親油性が適当に異なっている状態で各々の側鎖を設計することだけ必要である。この適当な差異を達成するための１つの単純な方法は、適切な置換基により三機能アミノ酸の側鎖の官能基を置換することである。その結果、我々は、ジアミノカルボン酸−ジアミノプロピオン酸、ジアミノブチル酸、オルニチン及びリシンの側鎖アミノ基をアシル化する効果を探究した。誘導体ジカルボキシアミノ酸及びＳＨ含有アミノ酸といったコーディング成分の代替的セットが、当業者にとって容易に明らかとなることだろう。上述の成分は、それが固相ペプチド合成に対する容易なアクセスを有するものによって便利に合成されうるという点でのみ、好まれるものである。コーディング成分の同時開裂を達成するための１つの態様は、全てのコーディング成分が、そのアミノ基が遊離した状態でＮ−末端アミノ酸として付着された１つのα−アミノ酸であることを提供している。このようなコーディング構造のバックボーンは、ジアミノカルボン酸（Ｄａａ）ジカルボキシアミノ酸又はその他の３機能サブユニットから構築できる。これらのアミノ酸のアミノ基は、コーディングのために使用されるＮ−保護されたアミノ酸によってアシル化される。アシル化は、一定の与えられたサブユニット及び試験化合物内のその位置についてのコードとして定義される成分の混合物を用いて行なわれる。以下の図式XIＣで示すとおり、ジアミノカルボン酸の反応の位置的化学を特定する必要はない。ポリマー及びコーディング成分は、コーディング分子ポリマーを形成するジアミノ酸のアミノ基のいずれかにカップリングされ得る。以下の実施例１３で記述され例示されている置換ジアミノカルボン酸の場合、カップリング反応性は、側鎖置換とは無関係であった。しかしながら、その他のコーディングサブユニットが使用される場合には、例えばアラニンとイソロイシンといったように、たとえ著しく異なる反応性を有するかもしれなくとも、コーディング成分の等モル取込みを達成することのできる方法が２つ存在する。第１の方法は、より緩慢に反応するアミノ酸のより高い濃度を用いることにより反応性の差異を補償することに基づいている（例えばEichler J．& Houghten，R.，1 993，Biochemistry（生化学）32; 11035; Rutter米国特許第５，０１０，１７５号）。代替的には成分がより速く反応したとしても、遅く反応するアミノ酸がカップリングできるのに充分なカップリング部位が残るような形で、充分なカップリング反復の後に全ての反応性部位が消費されてしまうまで、等モル以下の量の混合物を反復的に使用することができる。Andrews et al.，1994，タンパク質化学の技法，5; 485-492。上述のとおりのコーディング分子の構築のための基本的戦略は、いくつか存在する。そのうちの２つは、図式XIＡに例示されている。第１のものは、コーディング構造を構築するためのＡｌｌｏｃ保護基の使用(Loffet A．& Zhang H.，199 3，Int．Pep．& Prot．Res．42; 346)；(Stevens & Watanabe，1950 J．Am．Che m．Soc．72; 725)；(Guibe，F．& Saint M'Leux Y.，1981，Tet．Lett.21; 3591 )及び試験化合物上の官能基の保護のためのＦｍｏｃ又はＦｍｏｃ様の基（Carpi no & Han，1972 J．Org．Chem．37; 3404）の使用に基づくものである。この場合、試験化合物合成及びコーディング合成の両方のための永久的保護基として、Ｂｏｃ基を使用することができる。図式XIＡに描かれている「ブロックＡ」の一般的形状をもつ予め形成されたコーディングサブユニットを使用することが有利である。代替的には、予備形成されたコーディングサブユニットが使用されない場合、もう１つのレベルの直交性が合成中に必要とされる。これは、ジクロロメタン中の２％のトイフルオロ酢酸によってＤｄｚ基を選択的に開裂することができることから、コーディングバックボーンを構築するためにＡｌｌｏｃ／Ｄｄｚで保護されたジアミノカルボン酸を使用することによって達成可能である（Birr C.，et al.，1972，Lie big's Ann．Chem.763; 162-73）。しかしながら、このアプローチは、１つの混合物として付着されたコーディングアミノ酸の異なるカップリング反応性を補償する必要性のために複雑なものとなっている。第２の戦略は、試験化合物中の官能基の一時的直交保護のためのＦｍｏｃ及びＢｏｃ基の組合せの使用及び永久的保護のためのベンゾキシカルボニル（Ｚ）又はＺ様基の使用に基づいている。コーディングサブユニットは、Ｄｄｅ基がジメチルホルムアミド中のヒドラジンの溶液によって開裂され、Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ基の除去のために使用された条件下で安定していることから、Ｆｍｏｃ／Ｄｄｅ（又はＦｍｏｃ／Ａｌｌｏｃ又はＦｍｏｃ／Ｄｄｚ）で保護されたジアミノカルボン酸を用いて、合成中に構築することができる。（Hone，N.D．et al.，Poster p63,於2nd Eur．Pept．Symp.，In terlaken，スイス、１９８２年９月）。コーディングのための１つの代替的アプローチは、図式XIＢに示されている。この場合、コーディングのために利用できるアミノ基の１分画がコーディング混合物によってアシル化され、残りのアミオ基は、次のランダム化段階が行なわれる前に、直交開裂可能な基（例えばＡｌｌｏｃ）によって再度保護される。このスキーマにおいては、Ａｌｌｏｃの脱保護を組換えされた段階にて行なうことができることから、試験化合物サブユニットに先立ってコーディング混合物をカップリングするのが有利である。第３の代替態様が、図式XIＣによって提供されている。このスキームでは、コーディング要素は、図式XIＡにあるようにバックボーンジアミノカルボン酸で予備形成される必要はなく、又図式XIＢにあるように反復的遮断及び脱遮断もなくてよい。このスキームはコーディング及び試験化合物反応性基の両方が合成中に常時Ｂｏｃで保護されている状態で、Ｆｍｏｃ保護された試験化合物及びＡｌｌｏｃ保護されたコーディング分子を提供する。コーディング分子は、リシンのＮ^α及びＮ^ε官能基の両方のＡｌｌｏｃ保護を除去する連続的段階、すなわち、各々０．５当量の量でのＢｏｃ−Ｃａａ₁₁及びＢｏｃ− Ｃａａ₁₂というコーディング要素の混合物の付加及びカップリング、Ａｌｌｏｃ −Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）の１．０当量の付加及びカップリングによって合成される。この態様においては、コーディング要素すなわちＢｏｃ−Ｃａａが、コーディング分子バックボーン内のあらゆる特定のリシンのＮ^α及び／又はＮ^εのいずれかにカップリングできるということに留意されたい。それでも、本発明においてリシンのＮ^α及びＮ^ε官能性が同等であることから、カップリングの立体化学も化学量論もこの態様の実施可能性を成し遂げてくれていない。本発明のさらにもう１つの代替態様は質量分析法による非配列コードの読取りを包含している。コーディング分子は、リンカーの特異的開裂によって固相支持体から放出される。分子は、さらに、電子スプレー又はイオン衝撃（ボンバードメント）によって断片化され、個々のコーディング成分はその分子量により同定される。当業者であれば、非配列コードを読取るための質量分析法の使用は、ペプチド結合といったような特異的分解を受ける可能性のあるもの以外のさまざまな化学的結合によってコーディング成分がコーディング分子に結合され得るということを暗に意味しているということがわかるだろう。以下に図式XIＡ、XIＢ及びXCＣを示す：５．７．３．コードされていないライブラリーコーディング分子を含んでいないライブラリーから選択されたリガンドの構造の分析のためには、該当する場合、コーディングペプチドの構造を分析するために使用される技術（上述）を使用することができる。代替的には、本発明に従って選択された合成試験化合物の構造を決定するために、１９９２年９月３日に提出された米国出願第０７／９３９，８１１号に記されている技術又はその他の分析技術（薄層クロマトグラフィ、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ、ＩＲ、元素分析など）を特に用いる質量分析法を使用することができる。５．８．合成試験化合物からの治療及び診断用作用物質選択されたリガンドの構造がひとたび決定されると、構造実験及びスクリーニング実験及びその他の研究の結果を確認するため、大量の化合物を化学的又は生物学的に合成することができる。活性リガンドの構造分析及びライブラリースクリーニングを通してひとたび問題の分子構造が同定されたならば、本発明は、疾病の治療又は診断に使用するための分子構造を含む分子を提供する。スクリーニングのみを通して同定された分子は、診断又は治療用作用物質を提供するか、又はより大きい分子の中に取り込まれうる。生物学的活性又は結合活性を伴う構造を含む分子は、「エフェクター分子」と呼ぶことができる。本発明はさらに、さまざまな利用分野で使用するためのライブラリーも提供する。前記エフェクター分子の「エフェクター」機能は、本明細書で記述した又は当該技術分野において既知の機能のいずれであってもよい。本明細書で記述している方法は、潜在的に診断又は治療上の価値をもつ特異的リガンドを追求する新たな手段を提供するばかりでなく、なおも同じ受容体分子と相互作用することのできる潜在的に大きく異なる構造をもつ一連のリガンドについての重要な情報も提供する。分子モデリング及び近代的な計算技術とこのような情報を統合することにより、リガンド−レセプター相互作用の新たな根本的理解が得られる可能性が高い。本発明の治療用作用物質は、サイトカイン、成長因子又はホルモン剤の生物学的に活性な部位に結合し、その結果、それらの活性を高めたり、無効化したりし、あるいは、転写及び／又は翻訳を遮断もしくは促進するエフェクター分子を含んでいる。本発明の治療用作用物質は、例えば、成長因子レセプター、神経伝達物質レセプター又はホルモンレセプターといった薬学的に有利なレセプターに結合するエフェクタ分子を内含している。これらのエフェクタ分子は、天然レセプターリガンドの作用のアゴニスト又はアンタゴニストのいずれかとして使用できる。レセプターに結合するエフェクタ分子のもう１つの利用分野は、正常な細胞レセプターに付着し内在化されることによって細胞へのアクセスを獲得するウイルス又は微生物の付着を遮断するために結合を使用することにある。この現象の例としては、ＣＤ４レセプターに対するヒト免疫不全ウイルスの結合及び線維芽細胞成長因子レセプターに対する単純ヘルペスウイルスの結合がある。レセプターを占有するエフェクタ分子は、標的細胞のウイルス感染を遮断するための薬理学的作用物質として使用できる。細胞の寄生体侵入も同様に、本発明に従って適切なエフェクタ分子が同定された後、阻害できる。もう１つの実施形態においては、薬物又は毒素をターゲティングするために、問題の受容体分子に結合する構造を含むエフェクタ分子を使用することができる。好ましい一実施形態においては、問題の受容体分子は、腫瘍細胞、動物寄生虫もしくは微生物例えば細菌、ウイルス、単細胞寄生虫、単細胞病原体、真菌又は糸状菌の表面上に見られるレセプター又は抗原である。もう１つの実施形態では、ターゲティングされた実態は、細胞内レセプターである。さらに、プール内の合成試験化合物分子数百万個が、生物学的活性をもつ構造を提供しうるということも可能である。抗腫瘍、抗動物寄生虫もしくは抗微生物、例えば抗雑草、抗植物寄生虫、抗真菌、抗細菌、抗単細胞寄生虫、抗単細胞病原体、又は抗ウイルス活性を有する分子を分離することが可能である。その上、これらのリガンドのいくつかは、ほんの少しだけ挙げるだけでもエリスロポイエチン、表皮成長因子、線維芽細胞成長因子、腫瘍成長因子などの成長因子、ならびにホルモン、神経伝達物質、レセプタに対するアンタゴニスト、免疫調節物質又はその他の調節分子に対するアゴニスト又はアンタゴニストとして作用することができる。本発明の治療用作用物質は同様に、薬物例えば、ジゴキシン、ベンゾジアゼパム、ヘロイン、コカイン又はテオフィリンに対する高い親和性をもつ構造を含むエフェクタ分子をも内含している。かかる分子は、このような薬物の過量に対する解毒剤として使用できる。同様に、治療用作用物質には、重金属を含む金属イオン又は小さい分子に結合するエフェクタ分子が含まれている。高ビリルビン血症を伴う新生児の治療には、ビリルビンに対する高い親和力をもつ分子が有用である。一般に、本発明は、医師デスクリファレンスの製品カテゴリー索引(PDR，1993,第４７版，Medical Economics Data; Oradell，NJ，p201-202)にリストアップされているような疾病又は疾患の治療のための分子を同定する方法を提供することを構想している。例えば、抗ガン剤、抗寄生虫薬、抗凝血剤、抗凝血剤アンタゴニスト、糖尿病薬、抗けいれん薬、抗うつ薬、止瀉薬、解毒剤、抗性腺刺激ホルモン剤、抗ヒスタミン剤、抗高血圧症薬、抗炎症薬、制吐薬、抗片頭痛薬、抗パーキンソン薬、抗血小板物質、かゆみ止め、抗精神病薬、解熱薬、アンチトキシン（例えば抗蛇毒素）、気管支拡張薬、血管拡張薬、キレート化剤、避妊薬、筋肉弛緩剤、抗緑内障剤又は鎮静剤の活性をもつエフェクタ分子を同定することができる。本発明の治療用作用物質は同様に、適切な薬学的に受容可能な担体、希釈剤及びアジュバントを含んでいてもよい。このような薬学的担体は、石油、動物、植物由来の又は合成のもの、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む油及び水といった無菌液体であってよい。薬学組成物が静脈投与される場合の好ましい担体は水である。特に注入可能な溶液のためには、液体担体として食塩水及び水性デキストロース及びグリセロール溶液も使用することができる。適切な薬学的賦形剤としては、でんぷん、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦、チョーク、シリカゲル、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、ドライスキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、持続放出製剤などの形をとりうる。適切な薬学的担体については、E.W．Martinによる「Remi ngtonの薬学」の中で記述されている。このような組成物は、患者に対する適切な投与のための形状を提供するべく適切な量の担体と合わせて治療上有効な量の活性化合物を含むことになる。静脈注射が非常に効果的な投与形態であるものの、注射、経口、経鼻又は非経口投与といったその他の様式も利用できる。本発明に従って決定された構造を含む分子は、診断用作用物質を形成するためにも使用できる。この診断用作用物質は、例えば複数のポリアミド配列又はポリアルカン配列といった、ライブラリースクリーニングの結果として同定された単数又は複数の構造を含む分子であってもよい。さらに、診断用作用物質は、治療用作用物質として上述した担体のうちのいずれを含んでいてもよい。ここで「診断用作用物質」というのは、Ｔ又はＢ細胞リンパ腫といったガン及び上述のような感染性疾患などの条件の検出のために使用できる作用物質であるが、これらの条件に制限されているわけではない。検出という語は、条件の存在の表示、条件に関与する体の部分の場所設定、又は条件の重症度の表示を包含するよう、その最も広い意味で使用される。例えば、組織、血清又は体液の中の特異的レセプター又は抗体分子を検出し測定するためには、ペプチド−ホースラディッシュペルオキシダーゼ複合体又は関連する免疫組織化学的作用物質を用いることができる。診断用作用物質は、インビトロでの使用又はインビボでの使用に適しているものであってよい。特に本発明は、免疫検出法、サザン又はノーザンハイブリダイゼーション及びインシトゥ検定での使用のために有用な診断用試薬を提供することになる。さらに、診断用作用物質には、放射性同位元素、螢光標識、常磁性物質又はその他の画像増強作用物質といった単数又は複数の標識を含んでいてよい。当業者であれば、一連の標識及びそれらを作用物質中に取込んで診断用作用物質を形成する方法については熟知していることだろう。本発明の治療用作用物質及び診断用作用物質は、動物、さらに好ましくはヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、モルモット、マウス及びラットを含む哺乳動物の治療及び／又は診断のために使用可能である。又、治療用及び診断用作用物質は、植物の病気を治療及び／又は診断するためにも使用可能である。本発明に従って発見された分子での治療又は診断に導くことのできる疾病及び条件は、ライブラリー内の構造の入れ換えと同程度に多様でかつ広範なものである。もう１つの実施形態においては、低親和力結合ビーズを選択し、ビーズ上のリガンドの構造に基づいて、制限あるライブラリーを調製することができる。もう１つの実施形態では、本発明によって提供された何百万もの合成試験化合物から同定された１つの又はいくつかのリガンドを含む別調製の低親和力又は高親和力支持体を、クロマトグラフィによる分離において使用することができる。本発明は、純粋にその一例であることを意図されている以下の例によって、さらに明らかになることだろう。６．例：コードされたライブラリーのモデルこの例は、２つの分子すなわち「合成試験化合物」と「コーディング分子」を単一の樹脂ビーズ上で同時に調製できることを立証している。その上、内含される各々の樹脂ビーズが「合成試験化合物」を単一種と「コーディング分子」を単一種含んでいるようなこのような化合物のライブラリーを調製することが可能である。この例においては、これらはそれぞれ２：１のモル比で存在している。「コーディング分子」の配列は、「合成試験化合物」の配列に対応する。このモデル系については、「合成試験化合物」及び「コーディング分子」の両方共がペプチドであった。直交遮断基Ｂｏｃ及びＦｍｏｃを使用して、試験ペプチドとコーディングペプチドの並行した合成も進められた。６．１．材料と方法 Krchnak及びVagner(1990，Peptide Res．3; 102-193)によって記述されている通り、ポリプロピレン製注射器の中で、固相合成を行なった。合成は、ＳＣＡＬハンドル（Patek及びLebl，1991，Tetrahedron Lett．32; 3891-3894）（安全捕獲アミドリンカー）又は、適切なリンカーで修正されたTentagel（ＴＧ）（Rapp Polymere,チュービンゲン、ドイツ、１３０又は８０μｍ、０．２３mmol／ｇ）上で行なわれた。１×１０分間５０％のピペリジン／ＤＭＦを用いて、Ｆｍｏｃ保護基の分割を行なった。Ｂｏｃ保護基は、２０分間３％のアニソールを含む３０％のＴＦＡ／ＤＣＭを用いて分割させた。Ｂｏｃ分割後の中和のためには、ＤＩＥＡ／ＤＣＭ（１０％）溶液を用いた。Ｎα−Ｆｍｏｃ及びＢｏｃアミノ酸の活性化のためには、ＤＭＡ中のＢＯＰ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ混合物（１：１：２当量）を用いた。各々の縮合反応（１．５〜４０時間）の完全性は、二次アミノ基に対するカップリングの場合ニンヒドリン試験又はクロラニル試験によってチェックした。カップリングプロトコルには、カップリングと保護解除の間そして保護解除とカップリングの間に、ＤＭＦでの洗浄（６〜８回）（Ｂｏｃで保護されたアミノ酸の場合にはそれに続くＤＣＭでの洗浄）が含まれていた。２時間ＤＭＰＵ中の２０％の（ＥｔＯ）₂Ｐ（Ｓ）ＳＨによりＳＣＡＬリンカーの還元を行なった。最終的分割は、９５％のＴＦＡ−５％の水の混合物によって行なわれた。商業グレードの溶剤を、さらなる精製無しで使用した。保護されたアミノ酸は、Bachem(Tarrance，CA)，Advanced Chem Tech(Louisville，KY)，またはPropep tide（Vert-le-Petit,フランス）から入手した。６．２．結果６．２．１．モデルライブラリーの合成と両方の保護基の保護解除第１のアミノ酸としてＳＣＡＬ−ＴＧに対してＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）− ＯＨをカップリングさせ、Ｎε−Ｆｍｏｃ基を保護解除し、第１のリシンの側鎖に対してＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨをカップリングさせた。リシンのＮα−及びＮε−Ｆｍｏｃ基を分割させ、樹脂を３つの部分に分けた。それぞれＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨを樹脂の各部分にカップリングさせた。次の段階で、対応するＢｏｃアミノ酸（無保護ヒドロキシル基と共にＧｌｙ、Ｔｙｒ及びＬｅｕ−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−ＯＨを用いた）を、Ｂｏｃ保護解除の後、リシンのα−アミノ基にカップリングさせ、一方「Ｆｍｏｃ分枝」は保護されたままにしておいた。Ｂｏｃアミノ酸縮合が完了した後、樹脂の３つの部分をすべて組合わせ、「Ｆｍｏｃ分枝」を保護解除した。樹脂を３つの等しい部分に分けた後、最初のものと全く同じ要領で以下のランダム化を行なった。３つの位置のランダム化の後（各々の位置での３つの異なるアミノ酸のカップリング）、その後の分析のため、樹脂を個別部分に分けた。無作為に選択した２つの完全に保護解除されたビーズを、個別に配列分析のため提出した。予想通りの２：１という比率で、３つのサイクルすべてにおいて正しい「相補性」アミノ酸が発見された。結果（pmoles単位の値）：第１のビーズ：第１サイクル：Ｖ２５１、Ｌ１４６、第２サイクル：Ｖ２４４、Ｌ１４７、第３サイクル：Ｖ２４５、Ｌ１１９；第２ビーズ：第１サイクル：Ａ１０２、Ｇ３９、第２サイクル：Ｖ１２１、Ｌ５９、第３サイクル：Ｆ１２５、Ｙ５０。ＳＣＡＬハンドルを還元させるためＤＭＰＵ中の２０％のジエチルジチオフォスフェートで樹脂の１部分（約１００ｍｇ）を処理した（１時間の振とう×２）。ペプチドの混合物を、１時間ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ（９５：５）で還元されたＳＣＡＬから分割させた。分割混合物を真空中で縮合させ、Ｅｔ₂Ｏで沈降させた。遠心分離により沈降物を収集し、乾燥させた。ペプチド混合物を、０．１％のＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ中に溶解させて、ＨＰＬＣにより分析した。２００分にわたる０〜５０％のアセトニトリルと０．１％のＴＦＡの緩勾配が、予想した２７のピークを溶出した。さらに複数の小さいピークが同定されたが、その形成は、合成中に側鎖無保護チロシンを使用したためであるとされた。エーテル沈降によりいくつかの配列が除去される（又は少なくとも含有量が減少する）危険性が存在していたため、混合物の第２の分割ではこの段階が回避された。ＴＦＡと水の分割混合物を、付加的な水で希釈させ、排出した遠心分離機(evacuated centrifuge)上で濃縮し、凍結乾燥した。混合物のＨＰＬＣ評価は、全ての予想されたピークのほぼ等モルの表示を立証した。６．２．２．Ｎ末端ＦＭＯＣ基の保護解除と「ＦＭＯＣ分枝」のアセチル化Ｆｍｏｃ基の保護解除の後に、遊離したＮ末端アミノ基のアセチル化を行なった。アセチル化は、２０分間ＤＭＦ中のＮ−アセチルイミダゾールの０．３Ｍ溶液を用いて行なった（ニンヒドリン試験陰性）。その他の分枝上のＮ末端Ｂｏｃ基を、アセチル化の後で保護解除した。３つの無作為に選んだビーズを配列決定し、以下の読取り値を得た（pmoles単位）：第１サイクル：Ｙ２１３（ビーズ１）、Ｇ１６１（ビーズ２）、Ｙ２０１（ビーズ３）、第２サイクル：Ｌ１６５（１）、Ｙ１６６（２）、Ｙ２０５（３）、第３サイクル：Ｙ１８８（１）、Ｌ１２８（２）、Ｇ１６２（３）。読取り値は、アセチル化されたアーム内に存在するアミノ酸によって汚染されていなかった。アセチル化されたビーズの一部分（約１００ｍｇ）を上述の通りに処理し（エチルエーテルによる混合物の沈降及び／又は分割混合物の蒸発及び凍結乾燥）、ハンドルを還元し、アセチル化されたペプチドを分割した。同じ条件下でのＨＰＬＣ分析は、エーテル沈降中に、ライブラリーのかなりの割合がそのエーテル可溶性によって失われた、ということを示した。蒸発及び凍結乾燥を受けた試料は、保護解除されたライブラリーの場合とほぼ同じパターンの同数のピークを提供したが、保持時間は、Ｆｍｏｃ［分枝」のアセチル化のためさらに高い値へと移行していた。６．２．３．ＴＦＡ基でのＢＯＣ保護基の置換段階的配列決定実験を可能にするため、Ｎ末端において、トリフルオロアセチル基がＢｏｃ基に置換した。まず最初に、「Ｆｍｏｃ分枝」を保護された状態に残したまま、樹脂試料（５０mg）からＮ末端Ｂｏｃ基を分割させた。ＤＩＥＡ（０．１６mmol、２８μｌ）の存在下でジクロロメタン（０．５ml）中の無水トリフルオロ酢酸１０当量（０．１４mmol、２１μｌ）で処理することにより遊離アミノ基をトリフルオロアセチルで保護した。反応は１時間後に完了した（ニンヒドリン試験陰性）。トリフルオロアセチル化の後、その他の分枝上のＦｍｏｃ基を除去し、３つのビーズを配列決定のために提出した。Ｆｍｏｃ分枝の配列を決定した。Ｆｍｏｃ分枝の配列決定の後、配列決定されたビーズをシーケンサから取出し、ビーズを０．２ＭのＮａＯＨ溶液で処理し（３時間、２０℃）、乾燥させ、さらに３サイクルの配列決定のため提出した。Ｆｍｏｃ分枝の配列から予測されたＢｏｃ分枝の適切な配列が得られた。第１のビーズ（pmoles単位の値：１．Ｆ（７３５）、２．Ｖ（６４３）、３．Ａ（８３７）；ＴＦＡの除去後：１．Ｙ（２０７）、２．Ｌ（１８７）、３．Ｇ（７６）、配列ＦＶＡ／ＹＬＧ；第２のビーズ：１．Ａ（２１５）、２．Ａ（２３０）、３．Ｆ（１９３）；ＴＦＡ除去後：１．Ｇ（８８）、２．Ｇ（８６）、３．Ｙ（８０）、配列ＡＡＦ／ＧＧＹ；第３のビーズ：１．Ｆ（６３）、２．Ｆ（６７）、３．Ｖ（４１）；ＴＦＡの除去後：１．Ｙ（１５）、２．Ｙ（１２）、３．Ｌ（４）、配列ＦＦＶ／ＹＹＬ。６．２．４．１つのビーズからのペプチドの分割還元されたＳＣＡＬハンドル上の完全に保護解除された配列を含むいくつかの樹脂ビーズを小さなガラスバイアルの中に個別に入れ、一晩ストレートのＴＦＡ３０μｌで処理した。アリコート（３μｌ）を抜き出し、合計２０μｌの体積となるまでＨ₂Ｏで希釈し、microbore ＨＰＬＣ（Michromの器具）上でのＨＰＬＣによって分析した（２０分にわたり０．１％のＴＦＡ水溶液中の５〜６０％のアセトニトリル勾配）。２１５のランでのペプチドの平均吸光率に基づく計算によって、約１００〜２００pmolesのペプチドが１つのポリマービーズから放出されたことがわかった。６．３．考察コードされたライブラリーのモデルは、図２に示されている。分枝用リンカーが合成試験化合物ペプチドとコーディングペプチドを固相支持体に付着させている。一般に、合成試験化合物は、Edmanの分解を受けない化合物であってよく、従って、コーディング配列からの配列情報は、試験化合物の構造決定を提供する。合成試験化合物のサブユニットの各々は、コーディングアーム内の１つのアミノ酸と位置特異的に明確に結びつけられ、かくして構造分析を可能にする。コーディング配列を構築するためのアプローチは、いくつか存在する。１つの手順（図１Ａ）はポリマービーズ上での両方の構造の統計的分布を使用する。この場合、可能ないかなる比率でも達成でき、両方の配列の共同効果を生み出す可能性は最小限におさえることができる。第２の手順（図１Ｂ）においては、スクリーニング構造及びコーディング構造は両方共、例えばジアミノカルボン酸（リシン）によって実施される固体支持体への有枝付着の上に構築される。両方の「配列」は共に規定のモル比でかつスクリーニングされつつある受容体分子にアクセス可能な規定の特殊な配置で存在する。スクリーニングされたペプチドの溶液中への放出が用いられる利用分野においては、ビーズ上のスクリーニング及びコーディング化合物の位置設定は重要ではない。これは、異なるリンカーの使用のため、コーディング配列が溶液中に放出されることは決してないからである。合成試験化合物及びコーディング配列の化学的合成を決定的に立証するための単純な計画が追求されてきた。Ａ、Ｆ及びＶから１つの「合成試験化合物」が構築された。これらのアミノ酸は、「コーディング」配列中でそれぞれＧ、Ｙ及びＬでコードされた。合成試験化合物は、「試験」分枝すなわちＦｍｏｃ化学を用いてもう１つのリシン側鎖上に付着されたリシンの両方のアミノ基の上に構築された（図２参照）。樹脂は３つの部分に分けられ、Ｎα−Ｆｍｏｃで保護されたアミノ酸は、試験分枝上でカップリングされ、保護された状態におかれた。対応するＮα−Ｂｏｃ（コーディング）アミノ酸は、コードする分枝上でカップリングされた。全ての樹脂支持体は混合され、さらに３つの部分に分けられた。その他の分枝上のＢｏｃ保護の存在下で、Ｎα−Ｆｍｏｃ基の保護解除及びその後に続くＮα−Ｆｍｏｃアミノ酸のカップリングが行なわれた。これらの条件下で、Ｂｏｃ保護基は安定している。次の段階で、Ｎα−Ｂｏｃ基は分割され、試験分枝にカップリングされたＦｍｏｃアミノ酸に対応するＮα−Ｂｏｃアミノ酸は、各々の反応の中でコーディング分枝上でカップリングされた。さらにもう１度、Ｆｍｏｃ及びＢｏｃアミノ酸の混合、分裂及び個別カップリングの手順がくり返された。Ｂｏｃ及びＦｍｏｃの両方の戦略の条件下で安定しているＳＣＡＬハンドル上で合成が行なわれた。しかしながらこのハンドルは、そのスルフォキシド半分の還元の後比較的穏やかな酸分解条件下で分割され得る。（Patek及びLebl，1991，Tetra hedron，Lett．32; 3891-3894）。この要領で調製されたビーズの配列決定はスクリーニング配列対コーディング配列の２：１のモル比と、特定のアミノ酸の適当な対応（図２Ａ）を立証した。ビーズの１アリコートを用いて、「スクリーニング」配列はアセチル化され、「コーディング」配列から清浄(clean)な配列の読取り値が得られた（図２Ｂ）。異なるビーズアリコートを用いて、「コーディング」配列はトリフルオロアセチル基により遮断され、「スクリーニング」分枝の配列決定が行なわれ、配列決定されたビーズからトリフルオロアセチル基が分割され、「コーディング」ペプチドの配列が決定されて、「シーケンス」ペプチドの配列決定からの結果を確認した（図２Ｃ）。合成戦略が、規定数の構造の予測された等モル比を生み出すことを確認するため、アリコート中に代表された「ミニライブラリー」を支持体から分割させた。逆相ＨＰＬＣは、２７個の異なるペプチドの存在を確認した。トレース内で同定されたピークを収集し配列分析のために提出したところ、各ペプチドの純度及びその組成が確認できた。単一のビーズからのペプチドの分割も行なわれ、わずか１つのビーズから放出されたペプチドの分析の実現可能性が確認された。７．実施例：ペプチド構造によりコードされる非ペプチドライブラリー本実施例では、それぞれを単一のビーズ（ｂｅａｄ）に平行して同じ方法により合成した場合、ペプチドをコーディングする分子は非ペプチド試験化合物（ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｙｌｔｅｓｔｃｏｍｐｏｕｎｄ）を明確にコードすることができることを示す。本実施例では各々の試験化合物が特有の分子量を有するようにサブユニットを選択した。観察された試験化合物の分子量を、コーディングペプチドの配列と比較すると、コーディングペプチドは１つの試験化合物をコードすることが明らかになる。７．１．材料及び方法アミノ酸のカップリングを室温での標準的なプロトコルを用いた手法に従って実施した。ＤＭＦ中の保護されたアミノ酸（３当量）をＤＩＣ（３当量）と混合し、又はＤＩＣ及びＨＯＢＴ（各３当量）を樹脂と混合し、カップリング後に分析試験を行った。特に指定されている場合は、対称な無水物を用いた。非ペプチドライブラリーを調製するために用いたサブユニットを、図式ＸＩＩに示す。Ｆｍｏｃ−ＳＣＡＬリンカーおよびＢｏｃ−Ｌｙｃ（Ｆｍｏｃ）を、ＤＩＣ及びＨＯＢＴを用いて先ず樹脂（ＴｅｎｔａＧｅｌＳＮＨ₂，１ｇ）とカップリングした。Ｆｍｏｃ基を切断した後にＦｍｏｃ−Ｔｒｐをカップリングし、新しいＦｍｏｃ基を脱保護した。ペプチド−樹脂を等量になるように３つに分け、３種類の異なるブロモ酸類（ｂｒｏｍｏａｃｉｄｓ）（各反応器につき１種類、各３当量）をＤＭＦ中のＤＩＣ（３当量）を用いてカップリングした。３種類の酸としてはα−ブロモ酢酸、α−ブロモバレリン酸及びブロモトルイル酸を用いた。最後の酸とのカップリングは、反応性が低いために酸及びＤＩＣをいずれも６倍過剰にして再度行った。Ｌｙｓのα−アミノ基のＢｏｃ保護をＴＦＡにより除去し、第１コーデイング配列であるＢｏｃ−保護アミノ酸（Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｌｅｕ）をＤＩＣによりカップリングした。コーディングアミノ酸は、非ペプチド構成単位の分子量に基づいて選択した。即ち、最も軽い単位（この場合はブロモ酢酸）はＧｌｙにコードされ、最も重い単位（ブロモトルイル酸）はＬｅｕによりコードされ、中間の重さの単位（α−ブロモバレリン酸）はＡｌａによりコードされた。次のコーディングアミノ酸のカップリングのための準備として、３つに分けた樹脂を一緒にプールしてＤＣＭで徹底的に洗浄し、ＴＦＡ／ＤＣＭで脱保護した。脱保護後に樹脂を再び３つに分けた。Ｂｏｃ保護アミノ酸（この場合もＧｌｙ，Ａｌａ及びＬｅｕ）のカップリングをＤＩＣを用いて常法により実施した。コーディングペプチドアミノ酸のカップリング後に、非ペプチドサブユニットを加えた。分けた樹脂のうち２つをＤＭＦ中の２Ｍアミン溶液（ベンジルアミン及び１−アミノ−４−メチルピペラジン）で一晩処理した。第３の樹脂をフルオレニルメチロキシカルボニルアミノエチルチオールの２Ｍ溶液で処理し、反応終了後にＦｍｏｃ基を除去した。この場合もアミンのコーディングは、分子量を基準にした。樹脂を再び一緒にプールして混合し、最後のカップリングのために３つに分けた。カルボン酸（シクロヘキシル酢酸、フェニルオキシ酢酸及び４−ピリジルチオ酢酸）をＤＩＣにより得られたアミン（第一級及び第二級アミン）にカップリングし、３−５倍過剰の予め生成した対称な無水物によりカップリング反応を２回繰り返した。クロラニルテスト（ｃｈｌｏｒａｎｉｌｔｅｓｔ）がネガティブになった後に、３バッチの樹脂をＴＦＡで別々に処理し、中和し、最終コーディングＢｏｃ− 保護アミノ酸をＤＩＣ及びＨＯＢＴを用いてカップリングした。最後のカルボン酸のコーディングは前と同じ図式によった。最終的に全ての樹脂を一緒にプールした。高速原子衝撃（ｆａｓｔａｔｏｍｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ：ＦＡＢ）質量分析による測定をＺＡＢＥＱ分析計（ＶＧＡｎａｌｙｔｉｃａｌＬｔｄ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫ）により実施した。¹ＨＮＭＲスペクトルをＧｅｎｅｒａｌＥｌｅｃｔｒｉｃＱＥ３００装置により測定した。Ｅｄｍａｎ分解による配列決定をＡＢＩ４７７８タンパクシークエンサー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）およびＰｏｒｔｏｎＰＩ３０１０装置（ＰｏｒｔｏｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｔａｒｚａｎａ，ＣＡ）により実施した。分析及び分離ＨＰＬＣともＷａｔｅｒｓ４９０ＥＰｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅＭｕｌｔｉｗａｖｅｌｅｎｇｔｈＤｅｔｅｃｔｏｒを備えたＷａｔｅｒｓ６２５ＬＣシステムで行い、それぞれＶｙｄａｃＰｅｐｔｉｄｅａｎｄＰｒｏｔｅｉｎＣ１８分析カラム（０．４６ｘ２５０ｍｍ，５μｍ，１ｍｌ／分）及び分離カラム（１０ｘ２５０ｍｍ，１０μ ｍ，３ｍｌ／分）を用いた。１つのビーズから放出される混合物の分析を、ＲｅｌｉａｓｉｌＣ１８カラム（５μｍ，３００Ａ，１ｘ１５０ｍｍ）を用いてＵｌｔｒａｆａｓｔＭｉｃｒｏｐｒｏｔｅｉｎＡｎａｌｙｚｅｒ（ＭｉｃｈｒｏｍＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）により行った。ＣＤＣｌ₃又はＣＤ₃ＳＯＣＤ₃のいずれかを溶剤として用いて、全てのスペクトルをテトラメチルシラン（δ）と比較してｐｐｍで表した。１ｃｍ石英キュベットを用いてＨｅｗｌｅｔｔＰａｃｋａｒｄＨＰ８４５２ＡＤｉｏｄｅ−Ａｒｒａｙ分光光度計により、紫外線／可視光線（ＵＶ／ＶＩＳ）吸収スペクトルを記録した。アミノ酸分析をＤ−５００ｓｙｓｔｅｍ（ＤｕｒｒｕｍＣｏｒｐ．，ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）系により行った。７．２．結果７．２．１．コード化されたライブラリーの二形態の合成係る一般的な方法により、ライブラリーの二形態（ｔｗｏｆｏｒｍａｔｓ）を完成した。これら二形態の唯一の相違は図式ＸＩＩＩに示すように、ＳＣＡＬリンカーの位置である。第１のライブラリー（Ａ）ではＳＣＡＬリンカーは樹脂に直接結合しているＬｙｓのＮ−εに含まれ、従ってＴｒｐ−アミドはこのライブラリーの全化合物の中の最後のアミノ酸であった。このライブラリーでは、コーディングペプチドは切断後に樹脂のビーズに残っていた。第２のライブラリー（Ｂ）ではＳＣＡＬリンカーは樹脂に結合しており、全化合物の中の最後のアミノ酸はＬｙｓであった。このライブラリーから放出された各化合物は、合成化合物及びコーデイング配列ペプチドを含んでいた。合成試験化合物を構築するのに用いた非アミノ酸構成単位を、上記の図式ＸＩＩに示す。これらの構成単位は、特有の分子量をもつ試験化合物を生成するように選択した。試験化合物、分子量及びコーディング配列を表１に示す。第１のライブラリーのビーズ（上の図式ＸＩＩＩ上段を参照）を還元剤で処理して、個々のビーズをとって分離切断及び配列分析を行った。５つのビーズを調べた。非ペプチド部分の切断後にビーズを連続的に配列決定して（表２参照）、非ペプチド化合物の構造を推定した。切断した化合物を含む溶液をミクロＨＰＬＣシステムにより分析した。第２ライブラリー（図式ＸＩＩＩ、下段）のサンプル（８００ｍｇ）を、ＳＣＡＬリンカー還元後に９５％ＴＦＡにより処理し、凍結乾燥し、水に溶かし、水中の０．１％ＴＦＡの０−６０％アセトニトリルのグラジエントにより２００分にわたって、半分離ＨＰＬＣカラムで４４ピークに分離した。分画を凍結乾燥し、アミノ酸コーディング配列及び構築物の分子量から予想した構造が一致することを明らかにするために、いくつかのピークをＦＡＢＭＳ及び配列決定により分析した。さらに分析するために無作為に選択したピーク例は以下の通りである：ピーク４：操作時間２５．３１分、配列決定：１．Ｌｅｕ（３６４ｐｍｏｌ）、２．Ｇｌｙ（１３９）、３．Ｇｌｙ（４２２）；ＦＡＢＭＳ−８２７．０（構成単位組合せ（ｂｕｉｌｄｉｎｇｂｌｏｃｋｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）１６９）；ピーク８：操作時間２８．６９分、配列決定：１．Ｇｌｙ（２６１）、２．Ｌｅｕ（１７６）、３．Ａｌａ（２２５）；ＦＡＢＭＳ−７７０．２（構成単位組合せ２５７ｗ／ｏブロック７）；ピーク１３：操作時間３１．４７分、配列決定：１．Ｌｅｕ（７９２），２．Ｌｅｕ（５５１），３．Ｇｌｙ（１２８）；ＦＡＢＭＳ−９２１．０（構成単位組合せ１５９）；ピーク１４：操作時間３２．２７分、配列決定：１．Ｌｅｕ（７９３０）、２．Ｇｌｙ（１８１０）、３．Ａｌａ（１７６３）；ＦＡＢＭＳ−８８３．０（構成単位組合せ２６９）；ピーク１５：操作時間３２．７７分、配列決定：１．Ｌｅｕ（７８４）、２．Ａｌａ（４４７）、３．Ａｌａ（３６０）；ＦＡＢＭＳ−７７６．２（構成単位組合せ２４９ｗ／ｏブロック９）；ピーク１６：操作時間３３．１６分、配列決定：１．Ｌｅｕ（１２８６）、２．Ａｌａ（９１８）、３．Ａｌａ（６８８）；ＦＡＢＭＳ−７７６．２（構成単位組合せ２４９ｗ／ｏブロック９）；ピーク１７：操作時間３３．５１分、配列決定：１．Ｌｅｕ（２９８）、２．Ｌｅｕ（２８０）、３．Ａｌａ（２０２）；ＦＡＢＭＳ−８２６．２（構成単位組合せ２５９ｗ／ｏブロック９）；ピーク１９：操作時間３４．８０分、配列決定：１．Ｌｅｕ（６４１）、２．Ｇｌｙ（４１２）、３．Ａｌａ（４６０）；ＦＡＢＭＳ−８８３．１（構成単位組合せ２６９）；ピーク２０：操作時間３６．６６分、配列決定：１．Ｌｅｕ（１５０）、２．Ｌｅｕ（１１９）、３．Ｌｅｕ（８０）；ＦＡＢＭＳ−９０２．２（構成単位組合せ３５９ｗ／ｏブロック９）；ピーク２６：操作時間４１．７７分、配列決定：１．Ｇｌｙ（３９）、２．Ｇｌｙ（３８）、３．Ｇｌｙ（２３）；ＦＡＢＭＳ−７４４．１（構成単位組合せ１６７）；ピーク３１：操作時間４８．８６分、配列決定：１．Ａｌａ（１８０）、２．Ｇｌｙ（９８）、３．Ａｌａ（１０６）；ＦＡＢＭＳ−８２４．０（構成単位組合せ２６８）；ピーク３２：操作時間４９．４６分、配列決定：１．Ｌｅｕ（２３４）、２．Ｌｅｕ（３２０）、３．Ａｌａ（２７７）；ＦＡＢＭＳ−８２６．１（構成単位組合せ２５９ｗ／ｏブロック９）；ピーク３３：操作時間５０．７０分、配列決定：１．Ｇｌｙ（１５２）、２．Ｇｌｙ（１２０）、３．Ａｌａ（９４）；ＦＡＢＭＳ−８００．１（構成単位組合せ２６７）。７．２．２．非ペプチドライブラリーの典型的化合物の合成第１ライブラリー（Ａ）の一成分である下記化合物Ｉ：を０．２３ｇのＫｎｏｒｒ樹脂（０．５ｍ当量／ｇ）上で合成した。Ｆｍｏｃ −Ｔｒｐを最初に一般的プロトコルに従って、ＤＩＣ及びＨＯＢＴを用いてカップリングした。アミノ基を脱保護した後に、α−ブロモ酢酸（５０ｍｇ）をＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のＤＩＣ（５０μｌ）によりカップリングした。ベンジルアミン（１００μｌ）を０．５ｍｌのＤＭＳＯに溶かし、ブロモ樹脂をこの溶液で一晩処理した。最終カルボン酸である４−ピリジルチオ酢酸（８０ｍｇ）を０．８５ｍｌのＤＭＰＴに溶かし、ＤＩＣ（８０μｌ）及びＨＯＢＴ（８０ｍｇ）により予め活性化してアミノ樹脂に１０時間カップリングした。活性化のためにＰｙＢｒｏｐ及びＤＩＥＡによりカップリングを再度行った。化合物Ｉの切断は９５％ＴＦＡで行った。切断後にＴＦＡを真空下で蒸発させ、残渣を３０％アセトニトリル水溶液に溶かし、凍結乾燥した。乾燥後に得られた生成物を純粋なアセトニトリルに再び溶かし、エーテルで析出した。この操作を２回繰り返し、ほぼ白色の沈殿物を得た。生成物は逆相（ＲＰ）ＨＰＬＣで２つのピークを示した。第２のピークは化合物Ｉに予測される質量スペクトルを示した。半分離ＲＰＨＰＬＣによる精製後の成分Ｉの産生量は１８ｍｇであった。化学式：Ｃ₂₇Ｈ₂₇Ｎ₅ Ｏ₃Ｓ、ＭＳ理論値５０１．６、ＭＳ実測値−５０２．２（Ｍ＋Ｈ）⁺。¹ＨＮＭＲデータ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１０．８０４ｄ（１Ｈ，Ｎ^ωＨ）；Ｂ．４９ｄ（２Ｈ、ピリジルＣ₂Ｈ及びＣ₆Ｈ）；８．３５ｄ（１Ｈ、ＮＨ）；７．６２ｄ（２Ｈ、ピリジルＣ₃Ｈ及びＣ₅Ｈ）；６．９−７．７ｍｍ（Ｂｚｌ及びＴｒｐ芳香族プロトン）；４．５９ｍ（１Ｈ、ＴｒｐＣ^αＨ）；３．７５−４．６５ｍ（脂肪族プロトン）；３．１９ｄｄ及び２．９１ｄｄ（２Ｈ、ＴｒｐＣ^βＨ）。第１ライブラリー（図式ＸＩＩ、Ａ）の第２の成分である下記の化合物ＩＩ. ：を化合物Ｉと同じ図式により、α−ブロモバレリン酸（４０μｌ）、４−メチル −アミノピペラジン（１００μｌ）及びシクロヘキシル酢酸（８０ｍｇ）をサブユニットとして用いて合成した。化学式：Ｃ₂₉Ｈ₄₄Ｎ₆Ｏ₃、ＭＳ理論値５２４．７、ＭＳ実測値−５２５．３（Ｍ＋Ｈ）⁺、５５８．２（Ｍ＋Ｎａ）⁺及び５７３．２（Ｍ＋Ｋ）⁺。第１ライブラリー（Ａ）の第３の成分である下記の化合物ＩＩＩ：を化合物Ｉと類似の図式により、α−ブロモトルイル酸（１２０ｍｇ）、フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノエチルメルカプタン（２８０ｍｇ）（ピペリジン／ＤＭＦによるカップリング後に脱保護）及びフェノキシ酢酸（８０ｍｇ）を構成単位として用いて合成した。化学式：Ｃ₂₉Ｈ₃₀Ｎ₄Ｏ₄Ｓ、ＭＳ理論値５３０．６、ＭＳ実測値−５５３．０（Ｍ＋Ｎａ）⁺。７．３考察本実施例は、コーディング配列と平行する非ペプチド構造を構築することができることを示すものである。ライブラリー間の相違はＳＣＡＬリンカーの位置であり、これにより生成物の選択的な切断が可能である。第１のケース（図式ＸＩＩＩ上段）ではリンカーの切断により、リシン部分を介してコーディングペプチド構造に結合している非ペプチド化合物Ｘ₃−Ｘ₂−Ｘ₁−Ｔｒｐ（Ｔｒｐは分光法によるモニターのために結合した）が放出される。第２のケース（図式ＸＩＩＩ下段）ではリンカーの切断により、コーディングペプチド構造が結合していない非ペプチド化合物Ｘ₃−Ｘ₂−Ｘ₁ −Ｔｒｐが放出される。非ペプチド化合物の構築には（ｉ）α−ブロモ置換カルボン酸又はブロモメチル安息香酸の固体支持体にある利用可能なアミノ基への結合、（ｉｉ）アミン又はＮ−保護アミノメルカプタンのアミノ基（Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｅｔａｌ．，１９９２，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：１０６４６−１０６４７）又はチオール基のアルキル化、及び（ｉｉｉ）カルボン酸誘導体による生成アミノ基のアシル化が含まれる。構築したスクリーニング分子構造の割り当て（ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ）が構築物の分子量のみに基づくように、この実験のための構成単位を選択した（表１参照）。スクリーニング構造への未変性構成単位の導入後（又は前）には、必ず分子のもう一方のアームへのコーディングアミノ酸のカップリングを行った。コーディングにはグリシン、アラニン及びロイシンのみを用いた（従ってこれらのアミノ酸はランダム化の全工程で異なる構造成分をコーディングした）。係るアミノ酸の特定の構造成分の割り当てを図式ＩＸに示す。ポリマーマトリックスに結合した２−ブロモペンタン酸による本実験に用いたアミン又はチオールのアルキル化により、キラル中心をもつ化合物が生成し、従って構造組合せ数は２７ではなく３６である。しかしながら２７の異なるビーズ型が（異なる分子量の配列でスクリーニングして）生成するのみであり、そのうちの９ビーズはジアステレオマー化合物の混合物を含んでいる。混合物の分析を容易にし、ポリマー支持体でこの型の合成を行うことができることを証明するために、モデルライブラリーの合成と同じ化学的方法及びポリマー支持体により、可能な構造の３つを個々の化合物として再合成した。ＳＣＡＬリンカー還元後に生成した混合物を支持体から切断し、逆相ＨＰＬＣによって分析した。得られたピーク数は予測した数３６にほぼ一致していた。第１型のライブラリーのそれぞれのピークを回収した。回収した各分画の一部にＥｄｍａｎ分解を行い、また別のものには質量分析を行った。得られた結果により、ペプチド配列によるコーディングの原理を実行することは可能であることが確認され、配列決定及び質量分析による分子量測定値に相関が認められることが確認される（表２）。第２ライブラリーより無作為に選択したビーズで別の分析を行った。ＳＣＡＬリンカーを不安定にするために還元剤によりそれぞれのビーズを処理し、非ペプチド構造をＴＦＡ／水の混合液で切断した。この処理の後にビーズを連続的に配列決定し（表ＩＩ参照）、非ペプチド化合物の構造を推定した。切断した化合物をミクロＨＰＬＣ系で分析した。８．実施例：ライブラリー：ＸＸＸＸ−Ｌｙｓ（ＸＸＸＸ）−Ｌｙｓ（ＺＺ）−βＡｌａ−Ｇｌｙ−βＡｌａ−Ｇｌｙ−ＴＧ本実施例では、試験化合物ペプチドの配列決定可能な部分と同時にペプチドの配列決定不可能な部分のコーディングために、コーディングペプチドを用いることができることを示す。８．１．材料及び方法８．１．１．ライブラリーの合成以下のプロトコルに従い、ライブラリーを合成した。１．ＦｍｏｃＬｙｓ（Ｂｏｃ）のＨ−βＡｌａ−Ｇｌｙ−βＡｌａ−Ｇｌｙ−ＴＧへのカップリング；２．Ｆｍｏｃ切断；３．Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）カップリング；４．Ｂｏｃ切断；５．樹脂を９つに分けた後に以下のＤｄｚ保護アミノ酸を別々の反応でカップリングした：Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｖ；６．Ｆｍｏｃ切断；７．９つのＦｍｏｃ保護アミノ酸を別々の反応でカップリングした：Ｙ，Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｈ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｅ（Ｙは既にＡなどを結合している樹脂の部分にカップリングした。）；８．樹脂を一緒にしてＤｄｚを切断した；９．５−７の工程を繰り返す；１０．Ｆｍｏｃ切断；１１．９つのＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリング：Ｙ，Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｈ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｅ；１２．１０−１１の工程を繰り返す；１３．Ｆｍｏｃ切断；１４．側鎖保護基及びＤｄｚを混合物Ｋ（Ｋｉｎｇｅｔａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．ＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓ．３６：２５５−２６６）で取り除いた。１つのビーズに４サイクルのＥｄｍａｎ分解を行った：第１サイクル：Ａｒｇ（６４），Ｉｌｅ（６７）；第２サイクル：Ｇｌｙ（４５），Ｔｈｒ（１４）；第３サイクル：Ｐｈｅ（４２）；第４サイクル：Ａｒｇ（３５）。ＩｌｅはカップリングのためにＤｄｚで保護されており、第１サイクルで検知された。ＩｌｅはＰｈｅをコーディングし、Ｐｈｅは第３サイクルで検知された。第２サイクルで、ＴｈｒはＤｄｚで保護されるようカップリングされたアミノ酸として検知された。従ってＴｈｒにコーディングされたＡｒｇは、配列決定の第４サイクルで検知された。８．１．２．ライブラリーのスクリーニングプロトコル発表されている方法（ＬａｍａｎｄＬｅｂｌ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ１：１１−１５）に従い、ペプチドライブラリーをスクリーニングした。ＤＭＦを取り除くために、ペプチドビーズをまず２回蒸留した水と混合した。ＰＢＳ（１３７ｍＭＮａＣｌ，２．７ｍＭＫＣｌ，４．３ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄，１．４ｍＭＮＨ₂ＰＯ₄，ｐＨ７．２）で徹底的に洗浄した後に、非特異的結合をブロックするために０．０５％ゼラチン（ｗ／ｖ）でビーズをコーティングした。次に、２ｘＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ／ゼラチン（２ｘＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ｖ／ｖ）及び０．０５％ゼラチン（ｗ／ｖ））中の２ｍｇ／ｍｌのストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）−アルカリホスファターゼ（Ｐｉｅｒｃｅ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の１：１００，０００希釈液で、ビーズをインキュベーションした。次にビーズをＴＢＳ（１３７ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫｃｌ、２５ｍＭＴｒｉｓ塩基、ｐＨ７．４）で徹底的に洗浄し、標準基質５−ブロモ−４−クロロ−３−インドイルリン酸を加えた。次にビードを基質と共に、呈色反応のためにシャーレに移した。３０分から１時間後に呈色ビードをミクロピペットを用いて回収し、６ＭグアニジンハイドロクロライドｐＨ１．０で洗浄して前記の方法により配列決定を行った。次に、無色ビーズの残りのライブラリーを８Ｍグアニジンハイドロクロライド、ｐＨ２．０でリサイクルし、ＰＢＳで徹底的に洗浄し、２ｘＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ／ゼラチン中の６０ｐＭビオチニル化抗−β−エンドルフィン（クローン３− Ｅ７，ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）で一晩培養した。徹底的に洗浄した後に、ストレプトアビジン−アルカリ性ホスファターゼを加えた。１時間後にビーズを洗浄し、基質を加え、上記方法に従い呈色反応を行った。次に呈色ビーズを物理的に分離し、配列決定を行った。これら２つの実験では、最も呈色の強いビーズのみに配列決定を行った。８．２結果及び考察上記のセクション６及び７は、「試験化合物」を「コーディング」ペプチド配列によりコードできることを示すものである。この原理はまた、ペプチド鎖内に配列決定できない成分を含むペプチドの構造を決定するのにも用いることができる。この場合は、配列決定できない部分の後にあり、分子のカルボキシル末端に位置するアミノ酸残基をコーディングすることのみが必要である。本発明者らは、「試験化合物」は配列決定不可能な成分を実際には含んでいないが、この状態を擬態するライブラリーを構成した。ライブラリーの構造を図式ＸＩＶに示す。「試験化合物」アームのアミノ酸残基Ｘ₄及びＸ₃は、「コーデイング」アームのアミノ酸残基のいずれによってもコードされない。アミノ酸Ｚ₁及びＺ₂は残基Ｘ₁及びＸ₂をコードし、「試験」配列中の２分の１の濃度のアミノ酸中に存在する。２サイクルのＥｄｍａｎ分解により、対象ペプチドの構造が明らかになる。より多く検知されるアミノ酸は、「試験」配列の１位又は２位の残基である。より少なく検知されるアミノ酸は配列の４位又は３位をコーディングする残基である。コーディングアミノ酸はコーディングしようとするアミノ酸と同じでも異なっていてもよい。本実施例に用いたコーディング及びスクリーニングアミノ酸セットを、図式ＸＩＶに示す。ライブラリーの合成を、３つのアミノ保護基の組合せを用いて実施した。「スクリーニング」配列中のα−アミノ基の一時的な保護を、ジメチルホルムアミド中のピペリジンにより切断できるＦｍｏｃ基により行った。「コーディング」配列の一時的な保護を、希釈したトリフルオロ酢酸（２％）で切断可能なＤｄｚ基（Ｂｉｒｒｅｔａｌ．，１９７２，Ｌｉｅｂｉｇ’ｓＡｎｎ．Ｃｈｅｍ．７６３：１６２−１７３）を用いて行った。より高濃度のトリフルオロ酢酸（５０％）で切断可能なｔｅｒｔ−ブチル型保護基により、側鎖官能基を保護した。標識配列によるランダム化の１サイクルは、（ｉ）この工程でランダム化するアミノ酸数と対応する反応器に樹脂を分け、（ｉｉ）Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（Ｙ，Ｇ，Ｆ，Ｌ，Ｈ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｅ）をカップリングし、（ｉｉｉ）洗浄、Ｄｄｚ基切断および中和を行い、（ｉｖ）対応するＤｄｚ保護アミノ酸（Ａ，Ｄ，Ｉ，Ｋ，Ｍ，Ｎ，Ｓ，Ｔ，Ｖ）をカップリングし、（ｖ）固体支持体を混合し、Ｆｍｏｃ基脱保護する、ことから成る。このライブラリーを用いて、２つのモデル標的である抗−β−エンドルフィンモノクローナル抗体及びストレプトアビジンについてスクリーニングした。ポジティブビーズ（ｐｏｓｉｔｉｖｅｂｅａｄ）を標準染色法（ＬａｍａｎｄＬｅｂｌ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ．１：１１−１５；Ｌａｍｅｔａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ３５４：８２−８５）により同定し、このスクリーニングで同定したビーズ（各標的につき５つ）に２サイクルのＥｄｍａｎ分解を行った。２サイクルのＥｄｍａｎ分解の結果を表３に示す。ここで明らかなように、ストレプトアビジンポジティブビーズにより、全例において第１サイクルではＨ（Ｘ₁）及びＳ（Ｚ₁）（Ｑ、Ｘ₃をコーディング）、第２サイクルではＰ（Ｘ₂）及びＩ（Ｚ₂）（Ｆ、Ｘ₄をコーディング）が与えられた。従って、スクリーニングアームＨＰＱＦの配列は容易に解読できた。抗−β−エンドルフィンスクリーニングで同定したビーズでは、より多様な結果が得られた。Ｙ（Ｘ₁）及びＤ（Ｚ₁）（Ｇ、Ｘ₃をコーディング）以外に、Ｎ（Ｚ₁）（Ｇ、Ｘ₃ をコーディング）も第１サイクルで検知され、Ｇ（Ｘ₂）及びＩ（Ｚ₂）（Ｆ、Ｘ₄をコーディング）及びＫ（Ｚ₂）（Ｌ、Ｘ₄をコーディング）が第２サイクルで検知された。従って、これらのデータから配列ＹＧＧＬ（３ｘ）、ＹＧＧＦ及びＹＧＰＦが構成できた。これらの配列は過去に得られたデータ（ＬａｍａｎｄＬｅｂｌ，上記；Ｌａｍｅｔａｌ．，１９９１，上記；Ｌａｍｅｔａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．３：４１９−４２９）と一致している。これらの実験から、部分的又は完全に配列決定が不可能であるその他の構造をコーディングするために、ペプチドを用いることができることを明らかに証明される。リガンド受容体分子相互作用試験及び薬剤開発に広範に応用することができるために、この技術は重要な意義をもつ。コードされたライブラリーにより、これに類する広範な試みを、薬剤合成及び非ペプチドライブラリースクリーニングに応用することへの道が開かれる。９．実施例：固相ペプチド合成化学に基づく非ペプチド構造ライブラリー本実施例はペプチド構造合成の簡潔さと、標準アミノ酸以外の代わりのサブユニットを用いることによる多様性を組み合わせるものである。ライブラリー構造の最も単純なサブユニットはセクション５．５．９．で説明した。本ライブラリーの合成では、構造を多様なものにするために、３官能性アミノ酸の使用及び側鎖の変性を行う。ジアミノ酪酸、アスパラギン酸、シスチン及び／又はイミノジ酢酸等のアミノ酸は、側鎖にカルボン酸、アミン、イソシアネート又はハロゲン化物（脂肪族、芳香族、複素環式化物）を結合させる最小のサブユニットである。これらのアミノ酸はそれ自体、さらなる誘導のための足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）として作用することができる。受容体(acceptor)たとえばレセプター、抗体、酵素、核酸等）への適切な結合を達成するためには、相互作用する構造の適切な立体配置が必要である。ペプチドライブラリーのアミノ酸側鎖を線で表したものは、最良の結合構造を選択するための最適なフォーマットではない可能性がある。相互作用構造を表すための最適方法は、適切なコンホメーションスペースをマッピングする分子足場上に表すことであろう。異なる側鎖のみならず異なる足場を用いて、足場配置に於ける同じ個々のビルディングブロック間の内部関係を変化させることができる。９．１材料及び方法９．１．１機器高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分析による測定を、ＺＡＢＥＱ分光計（ＶＧＡｎａｌｙｔｉｃａｌＬｔｄ，Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫ）により行った。¹ＨＮＭＲスペクトルを、ＧｅｎｅｒａｌＥｌｅｃｔｒｉｃ（Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）ＱＥ３００装置によって測定した。Ｅｄｍａｎ分解による配列決定を、ＡＢＩ４７７８タンパクシークエンサー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）によって行った。分析及び分取的ＨＰＬＣをいずれも、それぞれＶｙｄａｃＰｅｐｔｉｄｅ及びＰｒｏｔｅｉｎＣ１８分析（４．６ｘ２５０ｍｍ、５μｍ、１ｍｌ／分）及び分取的（１０ｘ２５０ｍｍ、１０μｍ、３ｍｌ／分）カラムを用いて、Ｗａｔｅｒｓ４９０ＥＰｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅＭｕｌｔｉｗａｖｅｌｅｎｇｔｈＤｅｔｅｃｔｏｒを装備したＷａｔｅｒｓ６２５ＬＣ系により行った。１つのビードから遊離した混合物の分析を、ＲｅｌｉａｓｉｌＣ１８カラム（５μｍ、３００Ａ、１ｘ１５０ｍｍ）を用いて、ＵｌｔｒａｆａｓｔＭｉｃｒｏｐｒｏｔｅｉｎＡｎａｌｙｚｅｒ（ＭｉｃｈｒｏｍＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）により行った。ＣＤＣｌ₃又はＣＤ₃ＳＯＣＤ₃のいずれかを溶剤として用いてテトラメチルシラン（δ）と比較して、全スペクトルをｐｐｍで表わす。紫外線／可視光線吸収スペクトルを、１ｃｍの石英キュベットを用いて、ＨｅｗｌｅｔｔＰａｃｋａｒｄＨＰ８４５２ＡＤｉｏｄｅ−Ａｒｒａｙ分光光度計により記録した。アミノ酸分析をＤ−５００ｓｙｓｔｅｍ（ＤｕｒｒｕｍＣｏｒｐ．，ＰａｌｏＡｌｔｏ，ＣＡ）系により実施した。９．１．２手順固相合成をＫｒｃｈｎａｋ及びＶａｇｎｅｒ記述の方法（１９９０，ＰｅｐｔｉｄｅＲｅｓ．３：１８２−１９３）に従い、ポリプロピレン注射器により手操作で行った。ＳＣＡＬハンドルで変性した（Ｐａｔｅｋ及びＬｅｂｌ，１９９１，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．３２：３８９１−３８９４）（safety-catchアミドリンカー）ＴｅｎｔａＧｅｌＳＮＨ₂（ＴＧ）樹脂（ＲａｐｐＰｏｌｙｍｅｒｅ，Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ，１３０又は８０μｍ，０．２３ｍｍｏｌ／ｇ）、又は適切なリンカーによって分析を実施した。Ｆｍｏｃ保護基を５０％ピペリジン／ＤＭＦで１ｘ１０分間切断し、Ｔｆａ基を１０％ピペリジン／水により処理を繰り返して（３ｘ１分＋９０分）切断した。Ｎｐｙｓ基をジオキサン中０．３ＭＨＣｌ溶液で５＋３０分間除去し、Ａｌｏｃ基をＤＭＦ／ＡｃＯＨ／Ｎ−Ｍｅ−モルホリン（１０：２：１）中の（Ｐｈ₃Ｐ）₄Ｐｄにより除去し、Ｂｏｃ基を３％アニソールを含む３０％ＴＦＡ／ＤＣＭで２０分間切断した。Ｂｏｃ切断後に、ＤＩＥＡ／ＤＣＭ（１０％）溶液を中和のために用いた。ＤＭＦ中のＢＯＰ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ（１：１：２当量）混合液を、Ｎα−Ｆｍｏｃ及びＢｏｃアミノ酸の両者の活性化のために用いた。各縮合反応（１．５−４０時間）の完了をニンヒドリン試験によって、又は第２級アミノ基へのカップリングの場合はクロラニル試験によって確認した。カップリングプロトコルは、カップリング及び脱保護の間、及び脱保護及びカップリングの間にＤＭＦによる洗浄（６−８回）（Ｂｏｃ保護アミノ酸の場合は次にＤＣＭによる洗浄を行った）が含まれるものであった。ＳＣＡＬリンカーをＤＭＰＵ中の２０％（ＥｔＯ）₂Ｐ（Ｓ）ＳＨによって２時間還元した。最終切断を９５％ＴＦＡ−５％水の混合液によって行った。９．１．３試薬市販の溶剤をさらに精製することなく使用した。保護アミノ酸は、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）、ＡｄｖａｎｃｅｄＣｈｅｍＴｅｃｈ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）又はＰｒｏｐｅｐｔｉｄｅ（Ｖｅｒｔ−ｌｅ−Ｐｅｔｉｔ，Ｆｒａｎｃｅ）より入手した。アミン及びカルボン酸をＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）より入手した。９．１．４非ペプチド足場上の非ペプチドライブラリー合成モノｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニルエチレンジアミン本化合物を過去に記述された方法（Ｋｒａｐｃｈｏｅｔａｌ．，１９９０，ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＣｏｍｍｕｎ．２０：２５５９−２５６４）に従って調製した。簡単に述べると、ジオキサン（５０ｍｌ）中のｔｅｒｔ．ブチルジカーボネート（５．０ｇ，０．０２３ｍｏｌ）溶液を、ジオキサン（６０ｍｌ）中のエチレンジアミン（１１．０ｍｌ、０．１６５ｍｏｌ）にゆっくり加えた。２４時間撹拌した後に溶剤を蒸発して残渣を水（８０ｍｌ）に溶かし、不溶性の副生成物をろ過除去してろ液をジクロロメタンで抽出した（３ｘ１００ｍｌ）。溶剤を蒸発させた後に、ジエチルエーテル−石油エーテル又は酢酸エチル−石油エーテルの溶剤混合液で生成物を結晶化した。収量（収率）２．６ｇ（７１％）。ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，２５℃）、ｄ：１．３９（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），２．８３（ｍ，２Ｈ，Ｃ^aＨ₂），３．１６（ｑ，２Ｈ，Ｃ^bＨ₂），６．９３（ｔ，１Ｈ，ＮＨ），７．７７（ｂｒ，２Ｈ，ＮＨ₂）。融点７５℃。Ｎ−ｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニル−Ｎ’−フルオレニルメチルオキシカルボニルエチレンジアミンアセトニトリル（３００．０ｍｌ）中のフルオレニルメチルサクシニミジルカーボネート（３１．０ｇ，０．０９２ｍｏｌ）溶液を、１０％Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液（２５０ｍｌ）に溶解したモノｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニルエチレンジアミン（１０．０ｇ，０．０６３ｍｏｌ）にゆっくりと加えた。アセトニトリルを蒸発して生成物を酢酸エチルで抽出し、有機相をＮａ₂ＣＯ₃上で乾燥し、濃縮し、石油エーテルを加えて生成物を結晶化した。生成物をフィルタに回収し、石油エーテルで洗浄した。収量（収率）２０．０ｇ（８４％）。ＴＬＣ石油エーテル−ジエチルエーテル８８：１２Ｒｆ０．６４。ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，２５℃）、ｄ：１．３７（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），２．９９（ｍ，４Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂），４．２０−４．２９（ｍ，３Ｈ，ＦｍｏｃＯＣＨ₂ＣＨ−），６．７６（ｔ，１Ｈ，ＮＨ），７．２５（ｔ，１Ｈ，ＮＨ），７．３３ −７．８９（ｍ，８Ｈ，Ｆｍｏｃ）。融点１４６−１４８℃。モノＮ−フルオレニルメチルオキシカルボニルエチレンジアミントリフルオロアセテートＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ’−フルオレニルメチルオキシカルボニルエチレン−ジアミン（２０．０ｇ，０．０５２ｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸、アニソール及びジクロロメタン（１０：１０：１）により室温で１時間処理した。蒸発乾固後に、酢酸エチル−ｎ−ヘキサンの混合溶剤から粗生成物を結晶化した。収量（収率）１５．０ｇ（７３％）。ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，２５℃）、ｄ：２．８５（ｍ，２Ｈ，Ｃ^aＨ₂），３．２２（ｍ，２Ｈ，Ｃ^bＨ₂），４．２３−４．３６（ｍ，３Ｈ，ＦｍｏｃＯＣＨ₂ＣＨ−）、７．３７（ｍ，１Ｈ，ＮＨ），７．３４−７．８９（ｍ，８Ｈ，Ｆｍｏｃ），７．７７（ｂｒ，２Ｈ，ＮＨ₂）。融点１２８−１２９℃。ｃｉｓ，ｃｉｓ−１，３，５−トリメチルシクロヘキサン−５−カルボサイクリックアシッド−１，３−ジカルボキシリックアンハイドライド（１）［（ｃｉｓ，ｃｉｓ−１，３，５−）Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ−５−ｃａｒｂｏｃｙｌｉｃａｃｉｄ−１，３−ｄｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｎｈｙｄｒｉｄｅ）］化合物（１）を過去に記述された方法（Ａｓｋｅｗｅｔａｌ．，１９８９，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：１０８２−１０９０）に従って調製した。簡単に述べると、Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅバルブ及びＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを用いて、ｃｉｓ，ｃｉｓ−１，３，５−トリメチルシクロヘキサン−１，３，５−トリカルボン酸（１．０ｇ，０．００４ｍｏｌ）をキシレン（５０ｍｌ）中で１９時間窒素雰囲気中で還流した。得られた溶液を真空下で濃縮し、生成物を結晶化した。ろ紙に回収した後に生成物を真空下で、７０℃で１時間乾燥した。収量（収率）０．７８ｇ（８２％）。ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ− ｄ₆，２５℃）、ｄ：１．１０（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃），１．１６（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ₃），１．３３，２．３９（ｄ，ｄ，４Ｈ，２ＣＨ₂），１．３３，２．１５（ｄ，ｄ，２Ｈ，ＣＨ₂），１２．６０（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ）、融点２５２−２５３℃、ｌｉｔ．（３２）、融点２５２−２５４℃。５−（Ｎ−ｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニルアミノエチルカルボキサミド）−ｃｉｓ，ｃｉｓ−１，３，５−トリメチルシクロヘキサン−１，３−ジカルボン酸（２）酸無水物（１）（０．５ｇ、０．００２ｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍｌ）に溶解し、ＤＭＦ（４ｍｌ）に溶解したモノｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニルエチレンジアミン（０．３３ｇ、０．００２ｍｏｌ）を窒素雰囲気中で加えた。反応混合物を約５時間撹拌した後（ＴＬＣでモニターしながら）、ＤＭＦを蒸発させた。酢酸エチル−石油エーテル混合溶剤で生成物を結晶化した。収量（収率）０．３８ｇ（４７％）。ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，２５℃）、ｄ：１．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃），１．１３（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ₃），１．３４（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），１．０７，２．５１（ｄ，ｄ，４Ｈ，２ＣＨ₂），２．４３（ｄ，２Ｈ，ＣＨ₂），２．９６（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ₂），６．７０（ｔ，１ｈ，ＮＨ），７．７１（ｔ，１Ｈ，ＮＨ），１２．１０（ｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ）。融点１６１−１６４℃。５−（Ｎ−ｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニルアミノエチルカルボキサミド） −ｃｉｓ，ｃｉｓ−１，３，５−トリメチルシクロヘキサン−１，３−ジカルボキシリックアンハイドライド（３）ＤＣＭ（７０ｍｌ）中のジカルボン酸（２）（１．０ｇ，０．００２５ｍｏｌ）溶液に、ジクロロヘキシルカルボジイミド（０．５５ｇ、０．００２ｍｏｌ）を窒素雰囲気中で加えた。４時間撹拌した後に反応混合液を濃縮し、ジシクロヘキシル尿素をろ過して取り除いた。ろ液を蒸発乾燥して残渣を酢酸エチル−石油エーテルの混合溶剤で結晶化し、真空下でデシケーター（ＫＯＨ、Ｐ₂Ｏ₅）内で乾燥した。収量（収率）０．９ｇ（９５％）。５−（Ｎ−ｔｅｒｔ．ブチルオキシカルボニルアミノエチルカルボキサミド） −３−（Ｎ−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノエチルカルボキサミド）−ｃｉｓ，ｃｉｓ−１，３，５−トリメチルシクロヘキサン−１−カルボン酸（４）アンハイドライド（３）（０．８５ｇ，０．００２ｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（ｐＨ８．５に調節）存在下でＤＭＦ（１５ｍｌ）中モノＮ−フルオレニルメチルオキシカルボニルエチレン−ジアミントリフルオロアセテート（０．８８ｇ、０．００２ｍｏｌ）溶液を窒素雰囲気中で加えた。反応混合物を４時間撹拌し（ＴＬＣでモニターしながら）、蒸発乾固した。粗生成物を、溶媒系ＤＣＭ−ＭｅＯＨ２５：１中でフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉｌｉｃａＧｅｌＭｅｒｃｋ６０２３０−４００メッシュ）にかけた。純粋な生成物を含む分画を一緒にして蒸発乾固し、生成物を酢酸エチル−石油エーテルの混合溶剤で結晶化した。収量（収率）０．３２ｇ（２４％）。ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，２５℃）、ｄ：１．０８（ｓ，６Ｈ，２ＣＨ₃），１．１４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃），１．３５（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），４．２５（ｍ，３Ｈ，ＦｍｏｃＯＣＨ₂ ＣＨ−），６．８６（ｔ，１Ｈ，ＮＨ），７．３２−７．８９（ｍ，８Ｈ，Ｆｍｏｃ）。融点１１８−１２１℃。非ペプチド足場上の非ペプチドライブラリー化合物（４）を非ペプチドライブラリーの足場用に使用した。ＴｅｎｔａＧｅｌＳＮＨ₂（０．４ｇ，置換０．２１ｍ当量ＮＨ₂／ｇ）を、以下のプロトコルに従って固相合成した。９．１．５ＴＥＮＴＡＧＥＬ上のブランチドライブラリーＴｅｎｔａＧｅｌＳＮＨ₂（５ｇ，０．２３ｍｍｏｌ／ｇ，ビーズの大きさ１３０μｍ）をＤＭＦ中で予め膨潤させ、以下のプロトコルに従ってブランチドライブラリー（ｂｒａｎｃｈｅｄｌｉｂｒａｒｙ）を形成した。（１）ＳＣＡＬリンカーのカップリング；（２）Ｆｍｏｃの脱保護；（３）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）のカップリング；（４）Ｆｍｏｃの脱保護；（５）Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａのカップリング；（６）Ｆｍｏｃの脱保護；（７）Ｆｍｏｃ− Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）のカップリング；（８）Ｆｍｏｃの脱保護；（９）Ｆｍｏｃ− β−Ａｌａのカップリング；（１０）Ｂｏｃの脱保護；（１１）第１次ランダム化；（１２）Ｆｍｏｃの脱保護；（１３）第２次ランダム化；（１４）Ｔｆａの脱保護；（１５）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）のカップリング；（１６）Ｆｍｏｃの脱保護；（１７）Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａのカップリング；（１８）Ｆｍｏｃの脱保護；（１９）第３次ランダム化；（２０）Ｔｆａの脱保護；（２１）第４次ランダム化；（２２）側鎖の脱保護。それぞれのランダム化に於いて以下の酸をカップリングした：酢酸、ｎ−酪酸、ピバリン酸、ｎ−カプロン酸、安息香酸、フェニル酢酸、４−フェニル酪酸、ジフェニル酢酸、１−アダマンタン酢酸、コハク酸、グルタル酸、グリシン、β−アラニン、エプシロン−アミノ−ｎ−カプロン酸、グアニド酢酸、ガンマ−グアニジノ酪酸、サクシンアミド酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、２−フランカルボン酸及びイソニコチン酸。これらのサブユニット、及び各サブユニットに対応するアミノ酸コードを表４に示す。市販品を入手できる場合（１０当量の無水物、１．２当量のＤＩＥＡ）はアミノ酸を無水物としてカップリングし、又はこれらを２０分間予め活性化した（酸１２当量、ＤＩＣ１０当量、ＨＯＢｔ１０当量）。グアニジノ酸はＤＭＦに非常に難溶であるため、ＨＯＢｔ及びＬｉＣｌを含むＤＭＦ中にグアニジノ酸（１２当量）を溶かし、ＤＩＣで活性化した。しかしながら、対照実験ではこれらの条件で約７０乃至８０％のカップリングが観察されるに留まった。合成終了後にライブラリーをＴＦＡ（３ｘ）、ＤＣＭ（５ｘ）、ＤＭＦ（５ｘ）、ＤＭＦ／０．１％ＨＣｌ（１：１）（３ｘ）、及び０．０２％ＨＣｌで洗浄した。９．１．６ＴＥＮＴＡＧＥＬ上のブランチドコード化ライブラリーＴｅｎｔａＧｅｌＳＮＨ₂（５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ／ｇ、ビードの大きさ１３０μｍ）をＤＭＦ中で予め膨潤させ、以下のプロトコルに従ってコーデイング配列をもつブランチドライブラリーを形成した。（１）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｚ−Ｇｌｙ）のカップリング；（２）Ｆｍｏｃの脱保護；（３）Ｆｍｏｃ− Ｌｙｓ（Ｔｆａ）のカップリング；（４）Ｆｍｏｃの脱保護；（５）Ｆｍｏｃ− β−Ａｌａのカップリング；（６）Ｆｍｏｃの脱保護；（７）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎｐｙｓ）のカップリング；（８）Ｆｍｏｃの脱保護；（９）Ｆｍｏｃ−β− Ａｌａのカップリング；（１０）Ｆｍｏｃの脱保護；（１１）第１次ランダム化；（１２）各反応器で個別に行うＤｄｚの脱保護；（１３）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（１４）Ｎｐｙｓの脱保護；（１５）第２次ランダム化；（１６）各反応器で個別に行うＦｍｏｃの脱保護；（１７）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（１８）コーディングアームからのＦｍｏｃの脱保護；（１９）Ｄｄｚ−Ｐｈｅのカップリング；（２０）Ｔｆａの脱保護；（２１）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎｐｙｓ）のカップリング；（２２）Ｆｍｏｃの脱保護；（２３）Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａのカップリング；（２４）Ｆｍｏｃの脱保護；（２５）第３次ランダム化；（２６）各反応器で個別に行うＤｄｚの脱保護；（２７）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（２８）Ｎｐｙｓの脱保護；（２９）第４次ランダム化；（３０）各反応器で個別に行うＦｍｏｃの脱保護；（３１）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（３２）Ｆｍｏｃの脱保護；（３３）側鎖の脱保護。ライブラリーをＴＦＡ（３ｘ）、ＤＣＭ（５ｘ）、ＤＭＦ（５ｘ）、ＤＭＦ／０．１％ＨＣｌ（１：１）（３ｘ）、及び０．０２％ＨＣｌで洗浄した。９．１．７ファーストフローセファロース（ＦＦＳ）上のコーデイングを有するブランチドライブラリーＦＦＳ（ＦａｓｔＦｌｏｗＳｅｐｈａｒｏｓｅ：ファーストフローセファロース）を、粒子大きさ分布幅を小さくする（ビードの大きさ８５−１２５ｕｍ）ためにふるいにかけ、ペプチド合成の反応器に入れてＤＭＦで１０回洗浄した。ＤＭＦ中のＦｍｏｃ−Ｇｌｙ（２．９７ｇ）をＤＩＣ（１．５７ｍｌ）及びＨＯＢｔ（１．３５ｇ）で活性化し、１０ｍｌのＦＦＳに加えた。０．２５ｇのジメチルアミノピリジンを触媒として反応させ、懸濁液を一晩振とうした。Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＦＦＳをＤＭＦで１０回洗浄し、Ｆｍｏｃを切断して樹脂をＤＭＦで洗浄し、３０２ｎｍでの脱保護溶液の吸光度によって置換率を計算した。典型的な置換率は０．１ｍｍｏｌ／ｍｌであった。次に、Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａ及びＢｏｃ−β−Ａｌａの混合物（モル比３：１）をＤＩＣ及びＨＯＢｔにより活性化し、３モル過剰量でＧｌｙ−ＦＦＳにカップリングした。ＦＦＳをＤＭＦで１０回洗浄してＦｍｏｃ基を除去し、遊離アミノ基をＡｃ₂Ｏ／Ｐｙ（１：１）で１０分間アセチル化した。ＤＭＦ及びＤＣＭで１０回洗浄した後に、ＴＦＡ／ＤＣＭ／アニソール（４５：４５：１０）で５＋３０分間Ｂｏｃを除去し、ＦＦＳをＤＣＭで洗浄し（１０回）、２％ＤＩＥＡ／ＤＣＭで中和し（各１分、３回）、ＤＭＦで１０回洗浄した。コーデイング配列を有するブランチドライブラリーを以下のプロトコルに従って調製した。（１）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｚ−Ｇｌｙ）のカップリング；（２）Ｆｍｏｃの脱保護；（３）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）のカップリング；（４）Ｆｍｏｃの脱保護；（５）Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａのカップリング；（６）Ｆｍｏｃの脱保護；（７）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎｐｙｓ）のカップリング；（８）Ｆｍｏｃの脱保護；（９）Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａのカップリング；（１０）Ｆｍｏｃの脱保護；（１１）第１次ランダム化；（１２）各反応器で個別に行うＤｄｚの脱保護；（１３）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（１４）Ｎｐｙｓの脱保護；（１５）第２次ランダム化；（１６）各反応器で個別に行うＦｍｏｃの脱保護；（１７）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（１８）コーディングアームからのＦｍｏｃの脱保護；（１９）Ｄｄｚ−Ｐｈｅのカップリング；（２０）Ａｌｌｏｃの脱保護；（２１）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｎｐｙｓ）のカップリング；（２２）Ｆｍｏｃの脱保護；（２３）Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａのカップリング；（２４）Ｆｍｏｃの脱保護；（２５）第３次ランダム化；（２６）各反応器で個別に行うＤｄｚの脱保護；（２７）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（２８）Ｎｐｙｓの脱保護；（２９）第４次ランダム化；（３０）各反応器で個別に行うＦｍｏｃの脱保護；（３１）Ｆｍｏｃ−保護コーディングアミノ酸のカップリング；（３２）Ｆｍｏｃの脱保護；（３３）側鎖の脱保護。ライブラリーをＴＦＡ（３ｘ）、ＤＣＭ（５ｘ）、ＤＭＦ（５ｘ）、ＤＭＦ／０．１％ＨＣｌ（１：１）（３ｘ）、及び０．０２％ＨＣｌで洗浄した。９．１．８混合ペプチド及び非ペプチドサブユニットのライブラリーＴｅｎｔａＧｅｌＳＮＨ₂、９０μｍ、（ＲａｐｐＰｏｌｙｍｅｒｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）（２ｇ、置換率０．２５ｍｍｏｌ／ｇ、０．５ｍｍｏｌ）上でライブラリーを合成した。まず全配列において同一の配列Ｇｌｙ−βＡｌａ−Ｇｌｙ−βＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−ＴＧを、５当量過剰の活性化Ｆｍｏｃ−アミノ酸（ＤＩＣ／ＨＯＢｔ活性化）により合成した。Ｎ−末端Ｆｍｏｃ −脱保護後に、１７：８：５：１：１：１：１：１：１の比率（３６部、１部当たり０．０１４ｍｍｏｌ）で樹脂を９ポーション（ｐｏｒｔｉｏｎ）に分けた。本ライブラリーで用いるサブユニット構造を、各サブユニットのアミノ酸ジペプチドコードとともに図８に示す。各ポーションに加えたサブユニットを括弧内に記載する。これらのポーションをさらに以下のように処理した。１７−部ポーション（Ｘ₂＝１−１７）：Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨをカップリングして（５当量過剰）、Ｂｏｃ−側鎖保護基をＴＦＡ／ＤＣＭ／アニソール（５０：５０：２、１５分）で除去し、洗浄工程後にこのポーションを１７部に分けた。標準ＤＩＣ／ＨＯＢｔ活性化により、対応する酸をフリー側鎖アミノ基にカップリングした。８−部ポーション（Ｘ₂＝１８−２５）：Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ^t）−ＯＨをカップリングして（５当量過剰）、Ｂｕ^t−側鎖保護基をＴＦＡ／ＤＣＭ／アニソール（５０：５０：２、１５分）で除去し、洗浄工程後にこのポーションを８部に分けた。下記の方法により、対応するアミンを側鎖にカップリングした。５−部ポーション（Ｘ₂＝３０−３４）：Ｆｍｏｃ−ＩＤＡ−アンハイドライド溶液（１０当量、２ｍｌのＤＭＦ中０．７ｍｍｏｌ）を樹脂に加えて３０分間振り混ぜた。この操作を再度行って、樹脂をＤＭＦで洗浄して５部に分けた。アミンを以下の方法に従ってカップリングした。構造１８−２５及び構造３０−３４を結合させるために用いる側鎖アミンの一般的なカップリング手段は以下の通りである。樹脂結合カルボキシ基（１部当たり０．０１４ｍｍｏｌ）を、０．４ｍｌのＤＭＦ中ＤＩＣ／ＨＯＢｔ（１０当量）混合液により３０分間活性化した。この混合液を洗浄せずに除去し、０．２ｍｌのＤＭＦ中の適切なアミン３０当量を加えた。ｐ−トルイジンの場合は、塩酸化物を中和するために等モル量のＤＩＥＡを加えた。樹脂を１時間振り混ぜてＤＭＦで洗浄した。１−部（単一の）ポーション（Ｘ₂＝２６−２９、３５、３６）：イミノジ酢酸のＮ−Ｆｍｏｃ−保護モノアミド（構造２６−２９に対して）（１０当量、１部当たり０．０１４ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｂｚｌ）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｄ−Ｐｅｎ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（５当量、０．０７ｍｍｏｌ）を、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ活性化によりそれぞれ単一のポーションにカップリングした。全３６ポーションにさらに実施する手順：Ｎ−末端Ｆｍｏｃ−基をピペリジン／ＤＭＦにより切断した。サブユニット１−２５、３５、３６にＢｏｃ−Ｇｌｙ −ＯＨをＤＩＣ／ＨＯＢｔ活性化（５当量、１部当たり０．０７ｍｍｏｌ）によりカップリングした。サブユニット２６−３４をＤＭＦ中Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨの対称な無水物（１０当量、１部当たり０．１２ｍｍｏｌ）と一晩反応させた。コーデイングの手順：Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−保護基（全３６部に於いて同一）の切断：樹脂を水で洗浄して２０％ピペリジン／Ｈ₂Ｏ（２回、１０＋３０分）で処理した。次に、樹脂を水及びＤＭＦで洗浄した。次に、標識のＮ−末端Ｆｍｏｃ−保護基を切断せずに、Ｆｍｏｃ−法（ＤＩＣ／ＨＯＢｔ活性化、１０当量、１部当たり０．１４ｍｍｏｌ）により全配列の標識を合成した。標識のコーデイング配列を図８に示す。次に全３６ポーションを回収し、混合して２ポーションに分けた。主半分のみ鎖のＢｏｃ−保護基脱保護後に、Ｂｏｃ−Ｇｌｙをカップリングした。両ポーションを混合し、Ｂｏｃ−保護基を除去して樹脂を１３ポーションに分けた。Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕ^t）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕ^t）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ −ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ^t）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕ^t）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ− Ａｓｐ（ＯＢｕ^t）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ（１０当量、０．３８ｍｍｏｌ）を、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ活性化によりこれら１３ポーションにカップリングした。側鎖脱保護：Ｂｏｃ−及びＢｕ^t−側鎖保護基をＴＦＡ／ＤＣＭ／アニソール（５０：５０：２）（１５分間処理）により切断し、１滴のⁱＰｒ₃ＳｉＨを加えた同じ混合液により、Ｔｒｔ−基を１５分間切断した。Ｐｍｃ−基を混合物Ｋで１時間切断した。洗浄及び中和工程（ＤＣＭ、７％ＤＩＥＡ／ＤＣＭ、ＤＭＦ）の後に、全１３ポーションを回収してＮ−末端Ｆｍｏｃ−基を切断した。次にライブラリーをＤＭＦで洗浄し、０．１％ＨＣｌ水溶液に移した。９．１．９ライブラリーのスクリーニングプロトコル発表されている方法（Ｌａｍ及びＬｅｂｌ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ１：１１−１５）に従って、ペプチドライブラリーをスクリーニングした。まずＤＭＦを除去するために、ペプチドビーズを２回蒸留した水と混合した。ＰＢＳ（１３７ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、４．３ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄、１．４ｍＭＫＨ₂ＰＯ₄、ｐＨ７．２）で徹底的に洗浄した後に、非特異的結合を完全にブロックするためにビーズを０．０５％ゼラチン（ｗ／ｖ）でコーティングした。次に、２ｘＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ／ゼラチン中の６０ｐＭビオチニル化抗−β−エンドルフィン抗体（クローン３−Ｅ７、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）で、ビーズを一晩インキュベートした。徹底的に洗浄した後に、ストレプタビジン−アルカリホスファターゼを加えた。１時間後にビーズを洗浄して基質を加え、上記の方法に従って呈色反応を行った。次に呈色ビーズを物理的に分離し、配列決定を行った。９．２結果及び考察Ｋｅｍｐトリアシッド（Ｋｅｍｐ’ｓｔｒｉａｃｉｄ）（Ｋｅｍｐ及びＰｅｔｒａｋｉｓ，１９８１，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４６：５１４０−５１４３）を用いて（図式ＸＶ）代りの非ペプチドスカホールディングを行う。この構造では、三つのカルボキシル基は３軸コンホメーションにより拘束される。Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを窒素雰囲気中で用いて、脱水により（Ａｓｋｅｗｅｔａｌ．，１９８９，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：１０８２−１０９０）によりアンハイドライド酸１を調製した。モノｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルエチレンジアミンによる求核反応により、この酸無水物をアミドジアシッド（ａｍｉｄｅｄｉａｃｉｄ）２にした。これらの条件でＢｏｃ保護基が不安定であるために、同じ脱水方法をこのアミドジアシッドに応用することはできなかった。ペプチド化学固有のアミドアンハイドライド３調製の穏やかな代替方法として、塩化メチレン中で共通のジシクロヘキシルカルボジイミド方法を用いた。そこでフルオレニルメチルオキシカルボニル−エチレンジアミンにより、アミドアンハイドライド３をこれに対応するジアミド酸４にした。ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを用いてエチレンジアミンのボシレーション（ｂｏｃｙｌａｔｉｏｎ）により調製したＢｏｃ−エチレンジアミンを出発原料として、モノ保護エチレンジアミンが調製されている（Ｋｒａｐｃｈｏｅｔａｌ．，１９９０，ＳｙｎｔｈｅｓｉｓＣｏｍｍｕｎ．２０：２５５９−２５６４）。モノＢｏｃ−エチレンジアミンをそのまま用いて、さらにＮ−Ｂｏｃ−Ｎ ’−Ｆｍｏｃ−エチレンジアミンを介したモノフルオレニルメチルオキシカルボニル−エチレンジアミントリフルオロアセテート調製の出発原料として用いた。ジアミド酸４は、オーソゴナル（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）基（Ｄｄｚ、Ａｌｌｏｃ）及びカルボキシル官能基を含む第３鎖を有する足場の合成、又は第３次ランダム化が別々になされる場合は足場そのものとして用いることができる。完全に非ペプチドのライブラリーを合成するために、１を用いることを選択した。任意の３官能基アミノ酸をこの目的に用いることができるが、リシン側鎖で第１次ランダム化を行い、第２及び第３次ランダム化を足場で行った。コンホメーションが拘束的であるこの足場を用いて、２０の異なるカルボン酸でランダム化された非ペプチドライブラリーを構成した。より大きいコンホメーション空間をマッピングする足場は、ジアミノカルボン酸の連続的なカップリングにより構成される単純な分枝結合である。大きな空間を配置する種々の足場は、フレキシブルな環状又は分枝足場である。このようなライブラリーの原理の概要を図４に示す。係るライブラリーの具体的な例を図式ＸＶＩに示す。この足場の合成には、４個の独立（オーソゴナル）な保護基を用いることを必要とした。本発明者らは１９５０年代にペプチド化学に導入されたトリフルオロアセチル基（Ｓｃｈａｌｌｅｎｂｅｒｔ及びＣａｌｖｉｎ，１９９５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７７：２７２９）の使用を試みたが、α−アミノ基保護として用いたときのラセミ化に対する保護に於いてこの基が役にたたないのみならず、同基の脱保護に要求される厳しい条件のために使用には至らなかった。このような基はジメチルホルムアミド中のピペリジンを用いたＦｍｏｃ脱保護中は切断されないが、同様にＦｍｏｃ基を切断するピペリジン水溶液（２０％）による１−２時間の処理によって、完全に切断されることが明らかになった。このライブラリー構成に用いた方法は、図式ＸＶにより明かである。非アミノ酸サブユニットを標準アミノ酸と結合することができる。本発明者らは９３６のミニライブラリーを構成してこのアプローチにより妥当な結合を有する構造が得られることを示した。このミニライブラリーでは、１位にランダム化したアミノ酸から選択したアミノ酸、２位及び３位に一つ又は二つのグリシンを有し、更に、アスパラギン酸のβ−カルボキシル基又は側鎖を変性したイミノジカルボン酸とカップリングした芳香族アミンのセット、又は４位のジアミノ酪酸側鎖にカップリングした芳香族酸、又はアミノ酸（システイン及びペニシラミン）を含め硫黄側鎖にカップリングしたベンジルハライドを有する。ライブラリーの構造を図式ＸＶＩＩに示す。非アミノ酸サブユニットを含む４位は、配列決定中に問題を生じる可能性があることから、同位をコーディングした。２０を上回るビルディングブロックをランダム化に用いたために、ダブレットアミノ酸コーディング法を採用した（図８）。構造決定に於ける面倒を避けるために、コーデイングに用いたアミノ酸を１位のランダム化に用いたアミノ酸及び２位のアミノ酸のセットと重複させなかった。６つのアミノ酸のダブレットコドンにより、３６までの異なるビルディングブロックをコーディングし得る。このミニライブラリーをモデル系である抗−β−エンドルフィンモノクローナル抗体に対してスクリーニングした。正の反応を示したビーズに３サイクルのＥｄｍａｎ分解を行い、得られたデータより推測した相互反応構造を図式ＸＶＩＩに示す。また、抗−β−エンドルフィンモノクローナル抗体の未変性リガンド構造を図式ＸＶＩＩＩに示す。抗−β−エンドルフィンモノクローナル抗体との結合に基づき選択した化合物を、ビーズ結合型及び遊離型（ｆｒｅｅｆｏｒｍ）で合成し、その結合親和性を測定した。ビーズ結合配列は特異的結合（ロイシンエンケファリンに匹敵する）を示した。図式ＸＶＩＩＩに示すように、抗体への結合は適切な距離をおいて配置される芳香族基が必要である。しかしながら、係る２つの芳香族基を結合する構造は、結合親和性に於いて非常に重要である。１０．実施例：樹脂ビーズ上の表面官能基の選択的活性化本実施例においては、担体粒子の「内側」から、物理的に分離された「表面」を有する、固相支持体粒子の調製方法、並びに表面上のスクリーニング構造及びビーズ内のコーディング分子を合成する方法について述べる。この意味における表面とは、ビーズ上の、高分子受容体分子に接近可能な部分として理解すべきものである。ビーズ上の利用可能表面は、非常に高分子量の受容体分子については、ビーズの寸法に基づいて計算した表面積にほぼ対応している。また表面積は、低分子量受容体分子については、（ポリマービーズ中の全細孔の内表面を含む）材料の中への浸透を利用する種々の方法で測定できる。ポリマーの網目構造の中へ自由に浸透する受容体分子は、ポリマー粒子の表面と内側を区別することはできないものと考えられる。粒子の利用可能表面には、動的成分も含まれている。１０．１．材料及び方法１０．１．１．固相ビーズからの表面成分ペプチドの除去モデルペプチド（ＹＧＧＦＬ，ＬＨＰＱＦ，ＬＨＰＱＦＹＧ）は、リンカー（ β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−β−Ａｌａ−Ｇｌｙ）を結合したＴｅｎｔａＧｅｌＡＭ（ＲａｐｐＰｏｌｙｍｅｒｅ，Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ，０．２１ｍｍｏｌ／ｇ）上で合成した。合成は、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸及びジイソプロピルカルボジイミドを用いて、カップリング試薬としてのＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で、標準固相法により行った。ペプチドの脱保護は、スカベンジャー（エタンジチオール、水、及びチオアニソール）を加えたトリフルオロ酢酸及びピペリジンのジメチルホルムアミド溶液（２０％）により、２段階で行った。ビーズを丁寧に洗浄し、０．１Ｍ炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．７）に移した。キモトリプシン（１ｍｇ）を加え、懸濁液を３７℃で２０時間振とうし、さらに同じ処理（４時間）を２回繰り返した。各グループからランダムに選択採取したビーズの配列決定の結果、ビーズ上のペプチド内容物に有意な変化は認められなかった。１０．１．２．ポリマービーズ表面及び内側における異種ペプチドの合成ＴｅｎｔａＧｅｌＡＭ樹脂（０．２１ｍｍｏｌ／ｇ，１ｇ）を、Ｂｏｃ−Ｐｈｅと縮合して修飾した。樹脂を洗浄し、０．１Ｍ炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７．７）の中へ移した。上記と同様にしてキモトリプシン処理を行った。樹脂を同じ緩衝液と水で丁寧に洗った後、さらにジメチルホルムアミドで洗い、これを用いて、Ｆｍｏｃ保護基、ジイソプロピルカルボジイミド及びＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールをカップリング試薬として、標準固相合成法により、ＹＧＧＦＬ配列を合成した。最終カップリング段階でＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）をカップリングした後、Ｆｍｏｃ基を除去せずに、樹脂を５０％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液で処理した。次の合成段階では、Ｂｏｃ保護アミノ酸を使用した。カップリングは、上記と同じ試薬を用いて行い、各段階の後で、５０％トリフルオロ酢酸によりＢｏｃ基を除き、ジイソプロピルエチルアミンのジメチルホルムアミド溶液（５％）で処理してカップリングを行うためのプロトン化アミノ基を調製した。スカベンジャー（エタンジチオール、水、及びチオアニソール）入りトリフルオロ酢酸及びピペリジンのジメチルホルムアミド溶液（２０％）を用いて、２段階でペプチドを脱保護した。ビーズを丁寧に洗い、前記のようにして抗−β−エンドルフィンで染色する準備を整えた。この方法で染色したビーズは、ＹＧＧＦＬ配列のみを含むビーズと識別できなかった。１０．２．結果及び考察ビーズの表面からペプチドを選択的に切断するのには、酵素が使用されてきた。ＹＧＧＦＬ及びＬＨＰＱＦＹＧの試験配列を調製し、キモトリプシンと共にインキュベートし、ビーズの反応性を試験した。処理ビーズを、抗−β−エンドルフィン及びストレプトアビジンに結合させる試験を行った。結果を表５に示す。ＹＧＧＦＬ配列のビーズは、抗−β−エンドルフィン抗体への結合活性を完全に失っていた（表５）。ＬＨＰＱＦ−ＹＧを含むビーズも、ストレプトアビジンに対する活性を完全に失っていた。しかし、ＬＨＰＱＦ−ＹＧ或いはＹＧＧＦＬの全量の減少は極めて僅かであった。このことから、ビーズ内側へは、影響が及ばないことが判った。この場合、ＬＨＦＱＦはキモトリプシンの基質としての性能が低いので、ＹＧリンカーを使用した。Ｅｄｍａｎ分解を行ったところ、ビーズ上のペプチド内容物に有意な変化は認められなかった。これらの予備的な結果に基づいて、キモトリプシンを選択的脱保護試薬として使用した。キモトリプシン用の単純基質であるＢｏｃ−Ｐｈｅを、固相担体の、全ての利用可能なアミノ基上で合成した。この修飾樹脂を種々の条件下でインキュベートしたところ、ほぼ同量、即ち１．１％のＢｏｃ−Ｐｈｅが放出された。脱保護アミノ基を、Ｆｍｏｃ法により、ＹＧＧＦＬの合成に使用した。合成後、放出Ｆｍｏｃ量を定量し、有効アミノ基の約１％が合成に使われたことが確認された。各ビーズ上の残存アミノ基からのＢｏｃ保護基は、ＴＦＡによって切断され、配列ＬＨＰＱＦをＢｏｃ合成によってつくった。全ての保護基を除去し、試験によって抗−β−エンドルフィンとも、またストレプトアビジンとも、確実に反応することが明らかになった。ランダムに選択したビーズについてＥｄｍａｎ分解を行い、下記の結果が得られた（数値はｐｍｏｌで表示）：第１サイクル：Ｌ１１４，Ｙ＜１；第２サイクル：Ｈ８６，Ｇ＜１；第３サイクル：Ｐ９４，Ｇ＜１；第４サイクル：Ｑ７８，Ｆ４（予備観察）；第５サイクル：Ｆ７３，Ｌ＜１。Ｅｄｍａｎ分解による分析では、１サイクル当たり１００−１２０ｐｍｏｌの水準でＬＨＰＱＦ配列の存在が示され、又、ＹＧＧＦＬ配列に対して期待されるアミノ酸含有量は、無視できる程度であった。このことから、仮にＹＧＧＦＬがビーズ本体の中に存在しなくても、ビーズの表面に存在し、適切な受容体と相互に作用し得ることを示している。ＬＨＰＱＦも、依然としてストレプトアビジンと作用し合える状態にある。これはおそらく、ストレプトアビジンの分子量が小さいために、ポリマービーズの内部へ浸透し易いためであると考えられる。１０．３考察本実施例は、酵素は樹脂ビーズの表面を選択的に脱保護することができるが、その効果は、内側には及ばないことを示している。この場合には、配列ＬＨＰＱＦＹＧのキモトリプシンの切断は効率良く進行したことになる。ＬＨＰＱＦ配列に特異的なストレプトアビジンの結合は、完全に阻害されている。その後行った、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ基質を結合させたビーズを用いた実験では、１つのビーズ上で２つの異なるペプチドを合成することができ、しかも１つのペプチドは主に表面に、他のペプチドは主に内側に、それぞれ独立に分離して合成できることが判った。１１．実施例：ＴｅｎｔａＧｅｌビーズ表面の遊離アミノ基の選択的ブロッキング本実施例においては、ビーズ内側の官能基を、例えばコーディング分子のような化合物の反応及び合成を行わせるために遊離のまま残しておく一方で、樹脂ビーズ表面をブロッキングする可能性について示す。１１．１材料及び方法ＴｅｎｔａＧｅｌａｍｉｄｅＡＭ樹脂（置換量０．３ｍｅｑ／ｇ）をＨ₂ Ｏ中で数時間水和させ、０．１Ｍの２−［Ｎ−モルフォリノ］エタンスルフォン酸（ＭＥＳ）緩衝液（ｐＨ５．７）で洗浄した。各０．２ｍｌの沈降ビーズに、ポリグルタミン酸（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ、Ｍｒ３０，０００）を種々の量（０−１０ｍｇ）加えた。次に、各試験管に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（ＥＤＣ）６０ｍｇを加えた。一晩、反応混合物を静かに揺すった。次にビーズを２回蒸留（ｄｄ）したＨ₂ Ｏの中で洗い、エタノールアミン０．２４ｍｍｏｌとＥＤＣ６０ｍｇを加えたＭＥＳ緩衝溶液を各サンプルに加えた。静かに４時間振とうした後、樹脂を、ｄｄＨ₂Ｏで充分に洗浄した。次に樹脂を凍結乾燥した。このように処理した樹脂をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で膨潤させた。Ｆｍｏｃ化学により、ペプチドＹＧＧＦＬＧＧＧを各処理樹脂サンプル上で、標準法を用いて合成した。既報［Ｌａｍ等：Ｎａｔｕｒｅ３５４，８２−８４（１９９１）］のように、Ｎ−末端のＦｍｏｃ基及び側鎖の保護基をピペリジン及びトリフルオロ酢酸で除去した。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）で中和した後、樹脂ビーズを充分に洗浄し、第１０節に述べた抗−β−エンドルフィンによる染色用ビーズを調製した。１１．２結果及び考察樹脂ビーズの表面の官能基を、ポリグルタミン酸でブロックする能力は、使用するポリグルタミン酸量に直接比例した（表６）。明らかに、ポリグルタミン酸でブロックした樹脂はほんの少し染色されただけであり、このことから、大部分の表面アミノ基は、ＹＧＧＦＬＧＧＧペプチドの合成前にブロックされていたことがわかる。しかし、さらに重要なのは、ブロックした樹脂もブロックしない樹脂も、その中に含まれるペプチド量はほぼ同じ（表７）であり、このことから、ポリグルタミン酸のブロックは、ビーズ表面のみで起こり、ビーズ内側の遊離アミノ基はそのまま残されており、これが後のペプチド合成に使われることがわかった。追加の実験は可逆的にカップリングするポリマーを含んでいた。可逆的カップリングポリマー上に、そのα−カルボキシル基を介してＢｏｃ−Ｇｌｕを結合した。この修飾ポリマーをビーズ表面にカップリングさせ、「内側」アミノ基を適当に修飾した後で、グルタミン酸のＢｏｃ基を切断した。次にビーズに１サイクルのＥｄｍａｎ分解で処理し、これによりグルタミン酸ポリマー試薬により保護されていたアミノ基を再生させた。このようにして、ビーズの別々の部分、即ち表面と内側に、それぞれ異種のペプチドを合成した。本発明は、ここに述べた特定の実施例によって、その範囲が限定されるものではない。実際、ここに記載した実施例に加えて、当該技術に精通した人々にとっては、本発明の種々の変形があり得ることが、前述の記載及びそれに付随した図から明らかであろう。このような変形は、本出願の請求の範囲に含まれるものである。ここに各種の刊行物を引用したが、これらの引用に当たってはその全体をそのままを参照として援用する。１２．実施例：非ペプチドライブラリーの構築に適したサブユニット非ペプチドライブラリーの構築には、固相合成に適したサブユニットを選択する必要がある。本実施例は、３種類の異なる化学的方法に適したサブユニットの選択に関するものである。１２．１第一級アミノ基のアシル化実験プロトコル：酸１ｍｍｏｌをＤＭＦ２ｍｌに溶かし、ＤＩＣを０．５ｍｍｏｌ（ジカルボン酸の場合は１ｍｍｏｌ）添加し、Ｔｒｐ−ＲＡＭ−ＴＧ約１００ｍｇと一晩反応させた。反応の終点は、カイザー試験によって判定した。次に樹脂をＤＭＦ、ＤＣＭで洗い、乾燥した。生成物をＴＦＡ９５％、水５％の混合物１ｍｌと１時間反応させて切断した。反応混合物を水５ｍｌで希釈し、ＨＰＬＣ及びＭＳで分析した。受容のための要件は、生成物が期待した分子量を有し、粗混合物中の主要生成物含有量が、ＨＰＬＣクロマトグラムの曲線下総面積の８０％を越えていること、及び主要生成物が期待した分子量を有することであった。表８に、３３種類の酸に関する試験結果を示す。３３種類の中、７種類は本用途に不適であるとの理由で外した。さらに２種類の化合物、４−ヒドロキシ安息香酸及び４−ヒドロキシフェニル酢酸は、トリプトファンを用いた単一合成には不向きではあっても、リシン（Ｆｍｏｃ）のＮα−アミノ基を用いた別のモデル実験では使用可能であることが判明した。１２．２アミンによるハロゲンの求核置換実験プロトコル：ブロモ酢酸（５倍モル過剰）を対称無水物経由で１０分間反応させてＴＧ１３０にカップリングさせ、さらに１０分間、同じ方法で再度カップリングさせた。本試験アミンは、ＤＭＳＯの１Ｍ溶液を用いて、一晩カップリングさせた。洗浄後、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙを１時間カップリングさせ（ＨＯＢｔ，ＤＩＣ）、このＦｍｏｃ基を除去し、Ｆｍｏｃの放出量を計算し、これを理論放出量である４５μｍｏｌ／ｍｌと比較した。第２組の実験では、生成物の純度を求め、同定を行った。即ち、同じプロトコルによりモデル化合物Ｒ−ＮＨ−ＣＨ₂ −ＣＯ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−ＲＡＭ−ＴＧを合成し、９５％ＴＦＡ、５％水の混合物１ｍｌを用いて、１時間かけて樹脂から切断し、水約５ｍｌで希釈して、ＨＰＬＣ及びＭＳで分析した。全部で３３種類のアミンを試験したが、その中２１種類は、固相合成に組み入れてよいことがわかった。これらの試験結果を下記に示す。１２．３還元的アルキル化１２．３．１一般的方法実験プロトコル：試験アルデヒド２０モル過剰を、ＭｅＯＨ−ＤＣＭ−ＡｃＯＨ４０：１０：１の混合溶液約１ｍｌで膨潤させたＨ−Ｇｌｙ−ＲＡＭ−ＴＧ（実験Ａ）又はＨ−β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−ＲＡＭ−ＴＧ（実験Ｂ）約１００ｍｇに添加し、一夜反応させた。この樹脂をＡｃＯＨの１％ＤＭＦ溶液で洗浄し、次に試験アルデヒド２０モル過剰量とさらに一夜反応させた。その後、樹脂をＭｅＯＨ−ＤＣＭ−ＡｃＯＨ４０：１０：１で洗浄し、この混合物１ｍｌに対し、ＮａＢＨ₃ＣＮ２０モル過剰量を添加して一夜反応させた。この樹脂をＤＭＦ／１％ＡｃＯＨで洗浄し、２回目のＮａＢＨ₃ＣＮの２０モル過剰量を添加して一晩反応させた。洗浄後、全てのサンプルをＦｍｏｃ−Ｇｌｙでアシル化した。実験Ａにおいて、Ｆｍｏｃを除去した後、生成物をＦｍｏｃ−Ｔｒｐでアシル化した。この樹脂にＦｍｏｃ除去処理を施し、ＤＭＦ、ＤＣＭで洗浄し、乾燥し、次にＴＦＡ９５％、水５％の混合物１ｍｌと１時間反応させて生成物を開裂した。水約５ｍｌで希釈後、ＨＰＬＣ及びＭＳで分析した。全部で３１種類の試験アルデヒドを試験し、固相合成に使用することの適否を判定した。表１０に示した結果から、これらの中１９種類が使用できることが判った。１２．３．２個別的方法下記は、添加するサブユニットに特異的に適した手順である。配列β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐは、ＲＡＭ−ＴＧ（置換量０．２ｍｍｏｌ／ｇ）上で合成した。次に、１組の脂肪族、芳香族、及び複素環式アルデヒドによる還元アミノ化法を用いて末端アミノ基をアルキル化した。Ｎ−アルキル化ペプチドを、ＴＦＡ９５％−Ｈ₂Ｏ５％混合物を用いて樹脂から開裂し、ＨＰＬＣ及びマススペクトル分析で、生成した化合物の純度及び正確な分子量を確認した。手順１溶媒混合物１ジクロロメタン−メタノール−酢酸８０：２０：１溶媒混合物２ジメチルホルムアミド酢酸−１００：１シッフ塩基の生成：溶媒混合物１で３回洗浄したＨ−β−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−ＴｅｎｔａＧｅｌＳＲＡＭ５０ｍｇに、溶媒混合物１を２００μｌ及びアルデヒドを０．２ｍｍｏｌ加えた。樹脂を２時間振とうし、次に溶媒混合物２で３回洗浄した。さらにアルデヒド０．２ｍｍｏｌを、溶媒混合物２２００ μｌと共に加え、２時間振とうした後、樹脂を溶媒混合物２で３回、及び溶媒混合物１で３回洗浄した。シッフ塩基の還元：洗浄したペプチド樹脂に、溶媒混合物１を２００μｌ及びＮａＢＨ₃ＣＮの１Ｍジメチルホルムアミド溶液を２００μｌ加えた。樹脂を２時間振とうし、次に溶媒混合物２で洗った。この混合物中で、ＮａＢＨ₃ＣＮの１ＭＤＭＦ溶液２００ μｌで、さらに２時間かけて還元を繰り返した。この後樹脂をＤＭＦ−ＤＣＭで洗浄し、乾燥し、ＴＦＡ−５％Ｈ₂Ｏでペプチドを開裂した。プロトコル１溶媒混合物１で３回洗浄する。溶媒混合物１を２００μｌ添加する。アルデヒドを０．２ｍｍｏｌ添加する。２時間振とうする。溶媒混合物２で３回洗浄する。溶媒混合物２を２００μｌ添加する。アルデヒドを０．２ｍｍｏｌ添加する。２時間振とうする。溶媒混合物２で３回洗浄する。溶媒混合物１で３回洗浄する。溶媒混合物１を２００μｌ添加する。ＮａＢＨ₃ＣＮの１ＭＤＭＦ溶液を２００μｌ添加する。２時間振とうする。溶媒混合物２で３回洗浄する。溶媒混合物２を２００μｌ添加する。ＮａＢＨ₃ＣＮの１ＭＤＭＦ溶液を２００μｌ添加する。２時間振とうする。手順２シッフ塩基の生成は、手順Ａによる。シッフ塩基の還元は手順Ａによるが、両還元段階の間、還元試薬とともにアルデヒドを０．０１ｍｍｏｌ添加する点が異なる。プロトコル２溶媒混合物１で３回洗浄する。溶媒混合物１を２００μｌ添加する。アルデヒドを０．２ｍｍｏｌ添加する。２時間振とうする。溶媒混合物２で３回洗浄する。溶媒混合物２を２００μｌ添加する。アルデヒドを０．２ｍｍｏｌ添加する。２時間振とうする。溶媒混合物２で３回洗浄する。溶媒混合物１で３回洗浄する。溶媒混合物１を２００μｌ添加する。ＮａＢＨ₃ＣＮの１ＭＤＭＦ溶液を２００μｌ添加する。アルデヒドを０．０１ｍｍｏｌ添加する。２時間振とうする。溶媒混合物２で３回洗浄する。溶媒混合物２を２００μｌ添加する。ＮａＢＨ₃ＣＮの１ＭＤＭＦ溶液を２００μｌ添加する。アルデヒドを０．０１ｍｍｏｌ添加する。２時間振とうする。手順３（ワンポット反応）溶媒混合物２で洗浄したペプチド−樹脂５０ｍｇに、この混合物２００μｌ及びアルデヒド０．０５ｍｍｏｌを添加した。１時間振とうした後、ＮａＢＨ₃の１ＭＤＭＦ溶液５０μｌを添加し、樹脂を２時間振とうした。次に、還元試薬をさらに５０μｌ添加し、２時間振とうし、３回目のＮａＢＨ₃の１ＭＤＭＦ溶液（５０μｌ）を添加した。樹脂を一夜振とうし、さらに上記の後処理を行った。プロトコル３溶媒混合物２で３回洗浄する。溶媒混合物２を２００μｌ添加する。アルデヒドを０．０５ｍｍｏｌ添加する。１時間振とうする。ＮａＢＨ₃ＣＮの１ＭＤＭＦ溶液を５０μｌ添加する。２時間振とうする。ＮａＢＨ₃ＣＮの１ＭＤＭＦ溶液を５０μｌ添加する。２時間振とうする。ＮａＢＨ₃ＣＮの１Ｍ溶液を５０μｌ添加する。１夜振とうする。１３．実施例：ライブラリ−の非連続コ−デイングモデル被験化合物を用い非ペプチドライブラリ−を構成することにより、非連続コ−デイングの試験を実施した。１３．１装置、材料、および方法装置：モジュ−ルＨｉｔａｃｈｉシステムにより、分析ＨＰＬＣおよび分取ＨＰＬＣを実施した。カラムは各々Ｖｙｄａｃ（０．４６ｘ２５０ｍｍ、５μｍ、流速１ｍｌ／分）およびＶｙｄａｃ（１０ｘ２５０ｍｍ、１０μｍ、流速３ｍｌ／分）Ｃ−１８を使用した。材料：溶媒は特に指示がない限り市販のものをそのまま精製せずに使用した。ＴｅｎｔａＧｅｌ（ＴＧ）樹脂（０．２１ｍｍｏｌ／ｇ）はＲａｐｐ−Ｐｏｌｙｍｅｒｅ（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ）より、保護アミノ酸は、Ｂａｃｈｅｍ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ、カリフォルニア州）、ＡｄｖａｎｃｅｄＣｈｅｍＴｅｃｈ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ、ケンタッキ−州）、あるいはＰｒｏｐｅｐｔｉｄｅ（Ｖｅｒｔ −ｌｅ−Ｐｅｔｉｔ、フランス国）より購入した。１００以上のコ−デイングサブユニットを、固相支持体に合成した。基本的な構成単位としては、リシン、オルニチン、ジアミノブチル酸、ジアミノプロピオン酸を使用した。まず通常のＤＩＣ／ＨＯＢｔ法により、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）、Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ），Ｂｏｃ−Ｄａｐ（Ｆｍｏｃ）をアミノｔｅｎｔａＧｅｌ（０．２１ｍｍｏｌ／ｇ）に結合させた。側鎖保護を除去後、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ法により、対称無水物やアシル塩化物を用いて非保護側鎖に修飾カルボン酸を結合させた。合成された新しいコ−デイングアミノ酸はすべて脱保護を完全にし、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＡＢＩ４７７Ａタンパク質シ−ケンサにかけてＥｄｍａｎ分解を行った。新規ＰＴＨ−ＡＡの保持時間は、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＡＢＩ１２０Ａアナライザにより、ＰＴＨ −２２２Ｂｒｏｗｎｌｅｅカラム（ＰＴＨＣ−１８５ミクロン、２２０ｘ２．１ｍｍ）を使用して決定した。ＨＰＬＣバッファ：Ａ−０．０１ＭＮａＯＡｃ、Ｂ−アセトニトリル；グラジエント：０．０−０．４分−８％Ｂ、０．４− ３８．０分−８−６０％Ｂ、３８．０−４０．０分−６０−９０％Ｂ；流速２３０μｌ／分。ピ−クは２６９ｎｍで検出された。表１４は個々のコ−デイングサブユニットおよび参照番号を示したものである。１３．２モデル配列の合成被験化合物配列は、アミノ酸対のコ−デイングによるＴｙｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ −ＰｈｅおよびＰｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｈｅ（第ＸＩＣ図参照）と、Ｔｙｒ −Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＬｅｕおよびＰｈｅ（Ｃｌ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ（第ＸＩＢ図参照）であった。Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｈｅは抗βエンドルフィン抗体を受容体分子として検出できるものであり、またＰｈｅ −Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｈｅは陰性コントロ−ルであるため、選択した。また正確性およびコ−デイングは被験ペプチドを直接シ−ケンスすることにより確認した。１３．２．１材料および手順モデルペプチドの合成は、ライブラリ−合成法を実証するためではなく、コ− デイングの正確性を実証するために実施する。従って被験ＡＡサブユニットの後に一対のコ−デイングサブユニットを連続結合させるのではなく、以下に図示する都合の良い方法を用いて合成する。ポリマ−担体（ＴｅｎｔａＧｅｌ、１００ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ／ｇ、平均粒径９０μｍ）〔キャリア上には予め配列Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−ｂＡｌａ−Ｇｌｙ−ｂＡｌａ−Ｇｌｙを合成し、キモトリプシン処理（０．１ＭＴｒｉｓバッファ、ｐＨ７．６、３０ｍｌおよび０．１ＭＣａＣｌ₂中７ｍｇキモトリプシン，３７℃１４時間）を行ってＰｈｅ切断により表面と内部を区別する）を行った）をジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）にて膨潤させ（膨潤量０．５ｍｌ）、ポリプロピレン融解デイスク（Ｋｒｃｈｎａｋ＆Ｖａｇｎｅｒ、１９９０、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．３．１８２−１９３）の付いた２つのポリプロピレンシリンジに分注した。次にＦｍｏｃ−Ｐｈｅ（理論上合成されているすべてのアミノ基に対して３等量）をＤＭＦ中３等量のＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾ−ル（ＨＯＢＴ）存在下ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）により結合した。青色消失後（Ｋｒｃｈｎａｋら、１９８８Ｃｏｌｌ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．５３：２５４２）樹脂を洗浄し（５ｘＤＭＦ）、ＤＭＦ中５０％ピペリジン（１０分間）にてＦｍｏｃ基を除去した。ＤＭＦ（５ｘ）およびＤＭＦ（１ｘ）２％ＨＯＢＴにて洗浄後、次のアミノ酸を結合させた。このようにして第１シリンジの樹脂には、アラニン、グリシン、チロシンを結合させ、第２シリンジの樹脂にはアラニン、グリシン、フェニルアラニンを結合させた。上記のようにＦｍｏｃ基除去後ＤＭＦにて洗浄し、その後樹脂を２−クロロベンジルオキシカルボニルスクシンイミド（０．４Ｍ）のＤＭＦ溶液で一晩処理した（３時間後、ジイソプロピルエチルアミン１等量を添加した）。Ｂｏｃ基をＤＣＭ中５０％トリフロロ酢酸（ＴＦＡ）により切断した（２１分）。ＤＣＭ（３ｘ）およびＤＭＦ（４ｘ）にて洗浄後、樹脂をＤＭＦ中１０％ジイソプロピルエチルアミンにて中和し、ＤＭＦ（３ｘ）にて洗浄し、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）（３等量）をＤＩＣおよびＨＯＢＴ（各々３等量）のＤＭＦ溶液にて結合した（２時間）。樹脂をＤＭＦ（５ｘ）にて洗浄し、Ｆｍｏｃ基を５０％ピペリジン（２０分間）のＤＭＦ溶液にて切断し、樹脂をＤＭＦ（３ｘ）にて洗浄した。モル比１：１（すでに実験で決定されている比較的等価の結合反応性を反映する）において被験化合物の構成〔Ｂｏｃ−ＳａｒおよびＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）〕の４の位置のフェニルアラニンをコ−ドするアミノ酸混合物の結合は、ＤＩＣおよびＨＯＢＴ（各々３等量）を用いて行った。反応のモニタ−はブロモフェノ−ルブル−法で行った。樹脂をＤＭＦ（５ｘ）にて洗浄し、Ｄｄｅ基を２％ヒドラジン無水物のＤＭＦ溶液で１０分間処理することにより脱保護した。樹脂をＤＭＦ（５ｘ）、２％ＨＯＢＴのＤＭＦ溶液にて洗浄し、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）を結合させ、Ｆｍｏｃ基を除去した。Ｂｏｃアミノ酸とＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）の混合物の結合処理は２回繰り返し（ＩｌｅおよびＶａｌの２：１コ−デイングサブユニット混合物とＬｙｓ（ＣｌＺ）とＧｌｕ（ＯＢｚｌ）の１：５：１コ−デイングサブユニット混合物の結合）、Ｄｄｅ基の脱保護の後、両シリンジの樹脂にＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）を結合させた。Ｆｍｏｃ基を上記のように脱保護し、ＤＭＦ（５ｘ）にて洗浄後、第１のシリンジの遊離アミノ基のアシル化には無水ブチル酸および無水プロピオン酸（トリエチルアミン１等量存在下１：１）を用い、第２シリンジの樹脂にはＤＩＣおよびＨＯＢＴの作用により４−フェニルブチル酸および３−フェニルプロピオン酸の混合物を結合させた。次に樹脂をＴＦＡ（８２．５％）、ｐ−クレゾ−ル（５％）、チオアニソ−ル（５％）、水（５％）、エタンジチオ−ル（２．５％）の混合物Ｋ（Ｋｉｎｇ、Ｄ．ｅｔ．ａｌ．、１９９０、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏｔ．Ｒｅｓ．３６：２５５−２６６）で２時間処理で脱保護し、ＤＭＦ溶液（４ｘ）および０．１％ＨＣｌの水溶液（５ｘ）にて洗浄した。１３．２．２コ−デイングにより構成したモデル化合物ＹＧＡＦおよびＦＧＡＦポリオキシエチレンを落とした（”ｓｈａｖｅｄ”）ポリオキシエチレン／ポリスチレン固相支持体（ＴｅｎｔａＧｅｌ）表面に２種のモデルペプチドを合成した。ＴｅｎｔａＧｅｌ支持体内部にはコ−デイング部を合成したため、抗−β エンドルフィン抗体には結合しなかった。各被験化合物／ビ−ズ構成物のみあるいは両配列の混合物を用いれるか、あるいは少数の特定ビ−ズを化合物のライブラリ−に添加することにより、陽性コントロ−ル被験化合物の弁別的選択的結合が確認された。非連続的コ−ドはポリリシン骨格に構築された。コ−ドは以下のようである。工程サブユニットコ−ディング部４Ｐｈｅブチリル−リシン、プロピオニル−リシン４Ｔｙｒ φ−ブチリル−リシン、φ−プロピオニル−リシン３ＧｌｙＧｌｕ、Ｌｙｓ２ＡｌａＶａｌ、Ｉｌｅ１ＰｈｅＡｓｐ、Ｓａｒ抗−βエンドルフィン抗体に暴露後、陽性支持体を選択した。Ｅｄｍａｎ分解に１回かけ、φ−ブチリル−リシンおよびφ−プロピオニル−リシン誘導体の遊離により、陽性ビ−ズをＹＧＡＦと同定した。被験化合物配列はこのビ−ズの表面上のみに存在し、またビ−ズに結合した分子の全体量の約２％に達したため、第１周期（コ−デイングアミノ酸サブユニットはすべて切断された）で検出されたチロシンの信号は極端に小さかった。３０のプ−ルされたビ−ズについてシ−ケンスを実施して信号を増幅し、検出されたビ−ズが適切であることを確認した。この場合、４周期のシ−ケンスでＹＧＡＦ被験化合物配列が直接に示された。１３．３デジタルコ−デイングによるジアミノ安息香酸を基剤としたライブラリ−の合成ジアミノ安息香酸を基剤としたライブラリ−を合成し、非連続コ−ドによりコ −デイングした。以下にこのライブラリ−の合成を図示する。足場であるジアミノ安息香酸のアミノ基への第１のカップリング工程で用いたアミノ酸および第２、第３のカップリング工程で用いた酸を、各々表１２および１３で示す。各表では被験化合物の各種サブユニットに対応するコ−デイング部も示す。表１３のコ −デイング部は３／１のように２つの数字で表わされ、その化学的意味は表１４に定義されている。このライブラリ−の無作為に選択されたいくつかのビ−ズについてシ−ケンスを行い、Ｅｄｍａｎ分解によりある解読工程が可能であることが確認される。１３．３．１材料および方法合成はＴｅｎｔａＧｅｌ樹脂（９０μｍ、０．２ｍｍｏｌ／ｇ）で行った。Ｆｍｏｃ脱保護：１０分間５０％ピペリジンのＤＭＦ溶液、ＤＭＦにて６回洗浄、洗浄物をすべて回収、３０２ｎｍにて吸光度を測定、Ｆｍｏｃ遊離を計算。Ａｌｌｏｃ脱保護：３ｘＤＭＦ（各２分間）洗浄。ＤＭＦ／ＡｃＯＨ／ＮＭＭ（５ｍｌ、１ｍｌ，０．５ｍｌ）混合物を添加し、アルゴンを１５分間泡立たせる。テトラキス（トリフェニルフォスピン）パラジウム１５０ｍｇを添加し、アルゴンを３時間泡立たせる。ＤＭＦにて３回洗浄。ＤＣＭにて５回洗浄。Ｄｄｅ脱保護：洗浄ペプチド樹脂をＤＭＦ中３％ヒドラジン溶液で５分間および３０分間処理し、ＤＭＦにて洗浄。Ｄｄｚ脱保護：ペプチド樹脂をＤＭＦにて洗浄し、次にＤＣＭにて洗浄する。３％ＴＦＡのＤＣＭ溶液にて５分間２回前処理する。３％ＴＦＡ／ＤＣＭによる３回目の処理は３０分間行う。ＤＣＭにて洗浄後、５％ＤＩＥＡのＤＣＭ溶液にて中和し、ＤＣＭにて洗浄、さらにＤＭＦにて洗浄。Ｎｐｙｓ脱保護：洗浄ペプチド樹脂をジオキサン中０．３Ｍ−ＨＣｌにて５分間処理し、次に３０分間処理する。脱保護されたペプチド樹脂をジオキサンで洗浄し、次にＤＣＭで洗浄し、５％ＤＩＥＡのＤＣＭ溶液にて中和し、ＤＣＭおよびＤＭＦにて洗浄。アミノ酸のカップリング：３モル過剰な保護アミノ酸をＢＯＰ（モル比１：１）のＤＭＦ溶液により活性化する。ニンヒドリンテストにより、あるいは二級アミノ基へのカップリングではクロラニルテストにより、各縮合工程（１．５−４０時間）が完全に行われたかどうかをチェックする。側鎖脱保護：ＤＣＭにて３回洗浄し、混合物Ｋ（８２．５％ＴＦＡ、５％ｐ− クレゾ−ル、５％チオアニソ−ル、５％水、２．５％エタンジチオ−ル）にて５＋１２０分間脱保護する。最終洗浄：非希釈ＴＦＡ（３ｘ）、ＤＣＭ（５ｘ）、ＤＭＦ（１０ｘ）、ＤＭＦ／０．１％ＨＣｌ（５ｘ）、０．１％ＨＣｌ（３ｘ）、０．０１％ＨＣｌ（４ｘ）．１３．３．２ライブラリーの合成合成：ＴｅｎｔａＧｅｌＳＮＨ２（１０ｇ）をＤＭＦ内で予め膨潤させ、ＤＭＦにて５回洗浄した後、以下の表に示したプロトコールに従って固相合成した。保護ライブラリーはＤＭＡ／０．３％ＨＯＢｔにて保存し、非保護ライブラリーは０．０１％水性ＨＣｌにて保存した。バ−コ−ド化ライブラリ−のスクリ−ニング公開されている方法（Ｌａｍ＆Ｌｅｂｌ、１９９２、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ１：１１−１５）により、ライブラリ−をスクリ−ニングした。まずライブラリ−ビ−ズを二重蒸留水にて暫時増大させながら混合した。０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０にてＰＢＳ（１３７ｍＭＮｃＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、４．３Ｎａ₂ＨＰＯ₄、１．４ｍＭＫＨ₂ＰＯ⁴、ｐＨ７．２）により充分に洗浄後、ビ −ズを０．０５％ゼラチン（ｗ／ｖ）にてインキュベ−ションし、非特異的結合をブロックした。次にビ−ズを２ｘＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ／ゼラチンで６０ｐＭビオチン化抗−βエンドルフィン（クロ−ン３−Ｅ７、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ）により一晩インキュベ−ションした。洗浄後、ストレプトアビジン−アルカリフォスファタ−ゼを添加した。１時間後、ビ−ズを洗浄し、アルカリフォスファタ−ゼに標準的な基質として５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフェ−トを添加した。次にビ−ズおよび基質をペトリ皿に移して発色させた。３０分ないし１時間後、マイクロピペットにて陽性着色ビ−ズを集め、６Ｍグアニジンハイドロクロリド（ｐＨ１．０）にて洗浄し、バ−コ−ドのシ−ケンスにかけた。１４．実施例：分子スカホールド第ＸＩＸ図は被験化合物の構成に用いられる１９の化合物の化学的構造を示す。この図では被験化合物のサブユニットの結合部位をＲ_nで示す。以下の表１５はサブユニットの種類と分子スカホールドに結合するカップリングの種類に関するガイダンスを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＵＡ，ＵＺ (72)発明者サルモン，シドニーイー. アメリカ合衆国 85718 アリゾナ州チューソン，カミノエルガナド 2121番地 (72)発明者クルシュナック，ヴィクターアメリカ合衆国 85737 アリゾナ州オロバレー，ノースラリザーブドライブ 10700番地，アパートメント 16, 206 (72)発明者セペトフ，ニコライアメリカ合衆国 85737 アリゾナ州オロバレー，ノースラリザーブドライブ 10700番地，アパートメント 16, 206 (72)発明者コシス，ピーターアメリカ合衆国 85737 アリゾナ州オロバレー，ノースラリザーブドライブ 10700番地，アパートメント 11106

Claims

【特許請求の範囲】１．対象となる受容体のリガンドを同定しかつ分析するためのライブラリーであって、多数の独立した固相支持体を含んでなり、該固相支持体のそれぞれに、ａ）サブユニットの配列から成る試験化合物の種、およびｂ）該試験化合物から位相学的に分離され、かつ多数の連続した別個の化学反応によって結合されているコーディング分子の種、が結合されており、ここで、特定の固相支持体に結合された試験化合物のサブユニットの配列がその特定固相支持体に結合されたコーディング分子の種によってコード化されている、上記のライブラリー。２．試験化合物が配列決定不可能である、請求項１に記載のライブラリー。３．試験化合物がポリマーである、請求項２に記載のライブラリー。４．試験化合物がポリアミド、ポリエステル、ポリ尿素、ポリウレタン、ポリカーボネート、ポリアミン、ポリアルカン、ポリアルケン、ポリアルコール、ポリスルフィドおよびポリジスルフィドより成る群から選ばれるポリマーである、請求項３に記載のライブラリー。５．試験化合物のサブユニットがアミド、エステル、尿素、ウレタン、カーボネート、アミン、アルカン、アルケン、スルフィドおよびジスルフィド結合より成る群から選ばれる化学結合によって結合されている、請求項２に記載のライブラリー。６．試験化合物が分子足場をさらに含む、請求項２に記載のライブラリー。７．分子足場がステロイド構造、糖、複素環式構造およびポリ芳香族化合物より成る群から選ばれる、請求項６に記載のライブラリー。８．分子足場がアミノ酸アルデヒド／有機金属、ジケトピペラジン、置換チオプロリン、置換トリアジン、置換チオプロリンジオキシド、アシル化ポリエチレンジアミン、ベンゼントリカルボン酸、２−Ｓ−アルキル（アリール）イソインドール、シクロペンタン、ジアシルジアルキルジアミノ酸、延長ケンプス(Kemps) トリ酸、ケンプストリ酸、アルキルアシルアミノ酸、ジアミノ安息香酸、ステロイド、ビス−イミノジ酢酸、Ｎ−アルキル化、イミノジ酢酸、α，β，γペプチド擬似物、またはＮ−置換グリシンペプチド擬似物である、請求項６に記載のライブラリー。９．試験化合物がポリマーである、請求項１に記載のライブラリー。 10．コーディング分子がα−アミノ酸から成る、請求項１に記載のライブラリー。 11．コーディング分子が直鎖状のポリペプチドである、請求項１０に記載のライブラリー。 12．コーディング分子が分枝鎖状のポリペプチドである、請求項１０に記載のライブラリー。 13．特定支持体の試験化合物のサブユニットの配列が該支持体に結合されたコーディング分子の単一の種によってコード化されている、請求項２に記載のライブラリー。 14．特定支持体の試験化合物のサブユニットの配列が該支持体に結合されたコーディング分子の複数の種によってコード化されている、請求項２に記載のライブラリー。 15．特定支持体の試験化合物のサブユニットの配列は、コーディング分子のそれぞれの種を結合した連続反応の順序からなるコードによってコード化されている、請求項２に記載のライブラリー。 16．試験化合物のサブユニットの配列がコーディング分子の単一の種によってコード化されている、請求項１５に記載のライブラリー。 17．試験化合物のサブユニットの配列がコーディング分子の複数の種によってコード化されている、請求項１５に記載のライブラリー。 18．試験化合物のサブユニットの配列は、コーディング分子のそれぞれの種を結合した連続反応の順序が無関係であるコードによってコード化されている、請求項１に記載のライブラリー。 19．試験化合物のサブユニットの配列がコーディング分子の単一の種によってコード化されている、請求項１８に記載のライブラリー。 20．試験化合物のサブユニットの配列がコーディング分子の複数の種によってコード化されている、請求項１８に記載のライブラリー。 21．コーディング分子がアミノ酸のポリマーからなり、該ポリマーアミノ酸が、ａ）第１のアミノ成分（これにより該ポリマーアミノ酸を互いに結合させるペプチド結合が形成される）、およびｂ）第２のアミノ成分（これによりα−アミノ酸の多数の種のうちの１つがペプチド結合によって該ポリマーアミノ成分のそれぞれに結合される）、を有するものである、請求項１８に記載のライブラリー。 22．第１のアミノ成分がＮαアミノ成分であり、第２のアミノ成分がＮβ、Ｎγ 、ＮδおよびＮεより成る群から選ばれる、請求項２１に記載のライブラリー。 23．前記の第２アミノ成分に結合されるα−アミノ酸がα，β−ジアミノプロピオン酸、α，γ−ジアミノ酪酸、オルニチンおよびリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システインおよびペニシラミンの誘導体を含む、請求項２１に記載のライブラリー。 24．前記の誘導体がアセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプロイル、ピバロイル、ｃ−ヘキシル、トリクロロアセチル、フェニルアセチル、２，２ −ジフェニルアセチル、フェニルブチリル、１−ナフチルアセチル、２−ナフチルアセチル、１−アダマンチルカルボニル、１−アダマンチルアセチル、トシルグリシル、ダンシルグリシル、ベンゾイル、スクシンアミル、スクシニル、グルタリル、イソブチリル、４−クロロベンゾイル、２，２−ジフェニルプロピオニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシル、ヘプタノイル、オクタノイル、３，３−ジ−ｐｈ−プロピオニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチリル、３−ｐｈ−プロピオニル、４−ビ−ｐｈ−カルボニル、４−ビ−ｐｈ−アセチルおよびクロトニルより成る群から選ばれる誘導体を形成するためのカルボン酸とＮβ、Ｎγ、ＮδまたはＮεアミノとの反応により形成される、請求項２３に記載のライブラリー。 25．試験化合物種のサブユニットが求核置換によって結合され、エチルアミン、ｉ−プロピルアミン、ブチルアミン、ｉ−ブチルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン、３−アミノプロパノール、１−アミノ−２−プロパノール、２−メトキシエチルアミン、β−Ａｌａ −ＯｔＢｕ、エチレンジアミン（Ｂｏｃ）、２−（２−アミノエチル）１−メチルピロリジン、ベンジルアミン、ナフタレン−メチルアミン、４−（トリフルオロメチル）−ベンジルアミン、２−アミノ−１−フェニル−エタノール、チラミン、４−メトキシ−ベンジルアミン、３，５−ジメトキシ−ベンジルアミンおよび４−（ジメチルアミノ）−ベンジルアミンより成る群から選ばれる、請求項２に記載のライブラリー。 26．試験化合物種のサブユニットが第一級アミンのアシル化により結合され、γ −グアニジノ酪酸、スクシンアミド酸、１−ナフチル酢酸、ジフェニル酢酸、ビフェニル酢酸、ペンタフルオロフェニル酢酸、４−トリフルオロメチル安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシフェニル酢酸、４−アミノフェニル酢酸、３−ニトロフェニル酢酸、２−ニトロ−４，５−ジメトキシ安息香酸、３ −（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロピオン酸、４−グアニジノ安息香酸、４−ジメチルアミノ安息香酸、４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−イル）安息香酸、１，４−ジメチル−２，３−ピロールジカルボン酸、２−メチル−４−ニトロ−１−イミダゾールプロピオン酸、２−アミノ−１− イミダゾール酢酸、３−アミノ−１，２，４−トリアゾール−５−カルボン酸、４−イミダゾール酢酸、２，３−ピリジンジカルボン酸、２−ピラジンカルボン酸、２，３−ピラジンジカルボン酸、１−メチルインドール−２−カルボン酸、２−メチル−３−インドール酢酸およびインドール−４−カルボン酸より成る群から選ばれる、請求項２に記載のライブラリー。 27．試験化合物種のサブユニットが還元的アルキル化によって結合され、２−メチルブチルアルデヒド、２−エチルブチルアルデヒド、トリメチルアセトアルデヒド、２−メチルバレルアルデヒドシクロヘキサンカルボキサルデヒド、ベンズアルデヒド、４−ニトロベンズアルデヒド、４−ヒドロキシベンズアルデヒド、バニリン、２−チオフェンカルボキサルデヒド、ピリジン−４−カルボキサルデヒド、α，α，α−トリフルオロ−ｏ−トルアルデヒド、４−メトキシベンズアルデヒド、１−アセチルインドール−３−カルボキサルデヒド、４−カルボキシベンズアルデヒド、β−ナフトアルデヒド、４−フェニルベンズアルデヒド、３ −フェノキシベンズアルデヒドおよび２−ヒドロキシベンズアルデヒドより成る群から選ばれる、請求項２に記載のライブラリー。 28．対象となる受容体のリガンドを同定しかつ特性づけるための、多数の独立した固相支持体（これにリンカーが結合されている）のコード化されたライブラリーを作製する方法であって、次の工程：（ａ）固相支持体の複数のアリコートの複数の別々の反応において、各反応でただ１つのサブユニット種が結合されるように、サブユニットの複数の種を該リンカーに、または該リンカーに結合されたサブユニットに結合させること、（ｂ）上記の固相支持体の複数のアリコートにコーディング分子の複数の種を結合させること（ここで各アリコートに結合されたコーディング分子種は該アリコートに結合されたサブユニットをコード化するものである）、（ｃ）別々の反応の結合支持体のアリコートを混合すること、および（ｄ）工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を２回以上、所望の回数行うこと、を含んでなる、上記の方法。 29．対象となる受容体のリガンドを同定しかつ分析するための、多数の独立した固相支持体（これに分子足場が結合されている）のコード化されたライブラリーを作製する方法であって、次の工程：（ａ）固相支持体の複数のアリコートの複数の別々の反応において、各反応でただ１つのサブユニット種が結合されるように、サブユニットの複数の種を該足場に、または該足場に結合されたサブユニットに結合させること、（ｂ）上記の固相支持体の複数のアリコートにコーディング分子の複数の種を結合させること（ここで、各アリコートに結合されたコーディング分子種は該アリコートに結合されたサブユニットをコード化するものである）、（ｃ）別々の反応の結合支持体のアリコートを混合すること、および（ｄ）工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を２回以上、所望の回数行うこと、を含んでなる、上記の方法。 30．試験化合物のライブラリーをスクリーニングして、対象の受容体分子に結合する試験化合物種のサブユニットの配列を決定する方法であって、次の工程：（ａ）多数の独立した固相支持体を含むライブラリーに受容体分子を導入すること、ここで各固相支持体には、ｉ）サブユニットの配列から成る試験化合物の種と、 ii）該試験化合物から位相学的に分離され、かつ多数の連続する別々の化学反応によって結合されているコーディング分子の種、が結合されており、特定の固相支持体に結合された試験化合物のサブユニットの配列がその特定固相支持体に結合されたコーディング分子の種によってコード化されていること、（ｂ）受容体分子と結合する固相支持体を同定すること、（ｃ）該ライブラリーの他の全ての支持体を含んでいない、同定した固相支持体を単離すること、（ｄ）単離した固相支持体に結合されたコーディング分子の種を特性づけること、および（ｅ）単離した固相支持体に結合された試験化合物種のサブユニットの配列を解読すること、を含んでなる、上記の方法。 31．前記のコーディング分子種が該コーディング分子の配列決定を行うことにより特性づけられる、請求項３０に記載の方法。 32．コーディング分子がα−アミノ酸からむ成る、請求項３０に記載の方法。 33．コーディング分子が直鎖状のポリペプチドである、請求項３２に記載の方法。 34．コーディング分子が分枝鎖状のポリペプチドである、請求項３２に記載の方法。 35．コーディング分子がアミノ酸のポリマーからなり、該ポリマーアミノ酸が、ａ）第１のアミノ成分（これにより該ポリマーアミノ酸を互いに結合させるペプチド結合が形成される）、およびｂ）第２のアミノ成分（これによりα−アミノ酸の多数の種のうちの１つがペプチド結合によって該ポリマーアミノ成分のそれぞれに結合される）、を有するものである、請求項３４に記載の方法。 36．第１のアミノ成分がＮαアミノ成分であり、第２のアミノ成分がＮβ、Ｎγ 、ＮδおよびＮεより成る群から選ばれる、請求項３５に記載の方法。 37．前記の第２アミノ成分に結合されるα−アミノ酸がα，β−ジアミノプロピオン酸、α，γ−ジアミノ酪酸、オルニチンおよびリシンの誘導体を含む、請求項３６に記載の方法。 38．前記の誘導体がアセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプロイル、ピバロイル、ｃ−ヘキシル、トリクロロアセチル、フェニルアセチル、２，２ −ジフェニルアセチル、フェニルブチリル、１−ナフチルアセチル、２−ナフチルアセチル、１−アダマンチルカルボニル、１−アダマンチルアセチル、トシルグリシル、ダンシルグリシル、ベンゾイル、スクシンアミル、スクシニル、グルタリル、イソブチリル、４−クロロベンゾイル、２，２ −ジフェニルプロピオニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシル、ヘプタノイル、オクタノイル、３，３−ジ−ｐｈ−プロピオニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチリル、３−ｐｈ−プロピオニル、４−ビ−ｐｈ−カルボニル、４−ビ−ｐｈ−アセチルおよびクロトニルより成る群から選ばれる誘導体を形成するためのカルボン酸とＮβ、Ｎγ、ＮδまたはＮεアミノとの反応により形成される、請求項３７に記載の方法。 39．試験化合物の種のライブラリーをスクリーニングして、対象の受容体分子に結合するリガンド種のサブユニットの配列を決定する方法であって、次の工程：（ａ）対象の受容体分子の存在下で、試験化合物の多数の種を用意すること、該試験化合物種は多数の独立した固相支持体を含むライブラリーから放出されたものであり、ここで各固相支持体には、ｉ）サブユニットの配列から成る試験化合物の種と、 ii）多数の連続する別々の化学反応によって結合されている非放出性コーディング分子の種、が結合されており、特定の固相支持体に結合された試験化合物のサブユニットの配列がその特定固相支持体に結合されたコーディング分子種によってコード化されていること、（ｂ）該受容体分子と結合する試験化合物の種を放出した固相支持体を同定すること、（ｃ）該ライブラリーの他の全ての支持体を含んでいない、同定した固相支持体を単離すること、（ｄ）単離した固相支持体に結合されたコーディング分子の種を特性づけること、および（ｅ）試験化合物種のサブユニットの配列を解読すること、を含んでなる、上記の方法。 40．前記のコーディング分子種が該コーディング分子の配列決定を行うことにより特性づけられる、請求項３９に記載の方法。 41．コーディング分子がα−アミノ酸から成る、請求項４０に記載の方法。 42．コーディング分子が直鎖状のポリペプチドである、請求項４１に記載の方法。 43．コーディング分子が分枝鎖状のポリペプチドである、請求項４１に記載の方法。 44．コーディング分子が第２のアミノ成分を有するα−アミノ酸のポリペプチドからなり、α−アミノ酸の多数の種のうちの１つがペプチド結合によって該第２アミノ成分のそれぞれに結合される、請求項４３に記載の方法。 45．前記の第２アミノ成分に結合されるα−アミノ酸がα，β−ジアミノプロピオン酸、α，γ−ジアミノ酪酸、オルニチンおよびリシンの誘導体を含む、請求項４４に記載の方法。 46．前記の誘導体がアセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプロイル、ピバロイル、ｃ−ヘキシル、トリクロロアセチル、フェニルアセチル、２，２ −ジフェニルアセチル、フェニルブチリル、１−ナフチルアセチル、２−ナフチルアセチル、１−アダマンチルカルボニル、１−アダマンチルアセチル、トシルグリシル、ダンシルグリシル、ベンゾイル、スクシンアミル、スクシニル、グルタリル、イソブチリル、４−クロロベンゾイル、２，２−ジフェニルプロピオニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシル、ヘプタノイル、オクタノイル、３，３ −ジ−ｐｈ−プロピオニル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチリル、３−ｐｈ−プロピオニル、４−ビ−ｐｈ−カルボニル、４−ビ−ｐｈ−アセチルおよびクロトニルより成る群から選ばれる誘導体を形成するためのカルボン酸とＮβ、Ｎγ、Ｎ δまたはＮεアミノとの反応により形成される、請求項３７に記載の方法。 47．対象となる受容体のリガンドを同定しかつ分析するための多数の固相支持体を含むライブラリーであって、各固相支持体に、サブユニットの配列から成る配列決定不可能な試験化合物が結合されている、上記のライブラリー。 48．試験化合物種のサブユニットが求核置換によって結合され、エチルアミン、ｉ−プロピルアミン、ブチルアミン、ｉ−ブチルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン、３−アミノプロパノール、１−アミノ−２−プロパノール、２−メトキシエチルアミン、β−Ａｌａ−ＯｔＢｕ、エチレンジアミン（Ｂｏｃ）、２−（２−アミノエチル）１−メチルピロリジン、ベンジルアミン、ナフタレン−メチルアミン、４−（トリフルオロメチル）− ベンジルアミン、２−アミノ−１−フェニル−エタノール、チラミン、４−メトキシ−ベンジルアミン、３，５−ジメトキシ−ベンジルアミンおよび４−（ジメチルアミノ）−ベンジルアミンより成る群から選ばれる、請求項４７に記載のライブラリー。 49．試験化合物種のサブユニットが第一級アミンのアシル化により結合され、γ−グアニジノ酪酸、スクシンアミド酸、１−ナフチル酢酸、ジフェニル酢酸、ビフェニル酢酸、ペンタフルオロフェニル酢酸、４−トリフルオロメチル安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシフェニル酢酸、４−アミノフェニル酢酸、３−ニトロフェニル酢酸、２−ニトロ−４，５−ジメトキシ安息香酸、３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロピオン酸、４−グアニジノ安息香酸、４−ジメチルアミノ安息香酸、４−（３−メチル−５−オキソ −２−ピラゾリン−１−イル）安息香酸、１，４−ジメチル−２，３−ピロールジカルボン酸、２−メチル−４−ニトロ−１−イミダゾールプロピオン酸、２− アミノ−１−イミダゾール酢酸、３−アミノ−１，２，４−トリアゾール−５− カルボン酸、４−イミダゾール酢酸、２，３−ピリジンジカルボン酸、２−ピラジンカルボン酸、２，３−ピラジンジカルボン酸、１−メチルインドール−２− カルボン酸、２−メチル−３−インドール酢酸、およびインドール−４−カルボン酸より成る群から選ばれる、請求項４７に記載のライブラリー。 50．試験化合物種のサブユニットが還元的アルキル化によって結合され、２−メチルブチルアルデヒド、２−エチルブチルアルデヒド、トリメチルアセトアルデヒド、２−メチルバレルアルデヒド、シクロヘキサンカルボキサルデヒド、ベンズアルデヒド、４−ニトロベンズアルデヒド、４−ヒドロキシベンズアルデヒド、バニリン、２−チオフェンカルボキサルデヒド、ピリジン−４−カルボキサルデヒド、α，α，α−トリフルオロ−ｏ−トルアルデヒド、４−メトキシベンズアルデヒド、１−アセチルインドール−３−カルボキサルデヒド、４−カルボキシベンズアルデヒド、β −ナフトアルデヒド、４−フェニルベンズアルデヒド、３−フェノキシベンズアルデヒドおよび２−ヒドロキシベンズアルデヒドより成る群から選ばれる、請求項４７に記載のライブラリー。 51．試験化合物が分子足場をさらに含む、請求項４７に記載のライブラリー。 52．分子足場がアミノ酸アルデヒド／有機金属、ジケトピペラジン、置換チオプロリン、置換トリアジン、置換チオプロリンジオキシド、アシル化ポリエチレンジアミン、ベンゼントリカルボン酸、２−Ｓ−アルキル（アリール）イソインドール、シクロペンタン、ジアシルジアルキルジアミノ酸、延長ケンプス(Kemps) トリ酸、ケンプストリ酸、アルキルアシルアミノ酸、ジアミノ安息香酸、ステロイド、ビス−イミノジ酢酸、Ｎ−アルキル化、イミノジ酢酸、α，β，γペプチド擬似物、またはＮ−置換グリシンペプチド擬似物である、請求項５１に記載のライブラリー。 53．固相支持体に結合される、第１の分子種と第２の分子種を位相学的に分離する方法であって、該固相支持体にはリンカーが結合されており、該リンカーは酵素作用を受けやすい結合および第１の保護基を有するものであり、次の工程：ａ）該支持体を酵素に接触させて全部より少ない第１の保護基を除去すること、ｂ）酵素に接触させた該支持体を、第２の保護基を有するサブユニットと結合させること（該第２の保護基は該第１の保護基に直交する）、その後、該支持体上で第１および第２の分子種を合成すること、を含んでなる、上記の方法。 54．リンカーがペプチドであり、酵素がエンドペプチダーゼである、請求項５３に記載の方法。