JPH09324001A

JPH09324001A - ヒアルロン酸ナトリウムの精製法

Info

Publication number: JPH09324001A
Application number: JP7485997A
Authority: JP
Inventors: Shigenori Suga; 繁紀菅; Kenichi Muroi; 健一室井; Itaru Kinoshita; 格木下; Joji Goto; 譲治後藤
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1996-04-02
Filing date: 1997-03-27
Publication date: 1997-12-16

Abstract

(57)【要約】【課題】発熱性物質含量の低い高純度のヒアルロン酸
ナトリウムを容易に取得するための精製法および該精製
法により取得されたヒアルロン酸ナトリウムを提供す
る。【解決手段】ヒアルロン酸ナトリウムを含むヒアルロ
ン酸ナトリウム溶解液、または該溶解液を正に帯電した
フィルターに通した溶液に塩および水溶性有機溶剤を添
加し、ヒアルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、上澄
み液を抜き取ることにより発熱性物質を除去することを
を特徴とするヒアルロン酸ナトリウムの精製法および該
精製法により取得されたヒアルロン酸ナトリウムを提供
する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はヒアルロン酸ナトリ
ウムの精製法および該精製法により取得されたヒアルロ
ン酸ナトリウムに関する。

【０００２】

【従来の技術】ストレプトリシンを含まず溶血性を示さ
ないヒアルロン酸ナトリウム（特公平３―７８１１
６）、ヒト多形核白血球の走化性が低く、家兎における
眼内投与において細胞の侵襲能が低いヒアルロン酸ナト
リウム（特公平６―８３２３）、発熱性物質を含まない
高純度のヒアルロン酸ナトリウム（特開昭６２―５０１
４７１）等が知られている。

【０００３】ヒアルロン酸ナトリウムの工業的製法とし
ては、鶏冠からの抽出物を精製する方法あるいはストレ
プトコッカス属の菌株から得られる発酵液から該物質を
精製する方法等が知られている。ヒアルロン酸ナトリウ
ム中の不純物として存在する発熱性物質等の高分子化合
物を除去する方法としては、トリクロル酢酸、クロロホ
ルム−イソアミルアルコール処理、酵素処理（特開昭６
０−２４１９４）、イオン交換樹脂処理（特開昭６３−
１２２９３）、吸着樹脂処理（特開平２−１０３２０
３）、あるいは、セチルピリジニウムクロライド（特開
昭６０−１３３８９４）、大量の水溶性有機溶剤等でヒ
アルロン酸ナトリウムを選択的に沈殿させる方法（特開
平２−２６８７６５）、２〜６万センチストークスの粘
度を有する溶液を、ｐＨ６〜１０の溶液中で正に帯電し
たフィルターに通すことにより発熱性物質を除去する方
法（特開平６−１９９６５６）等が知られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】溶血性を示さない、化
学走性のない、あるいは発熱性試験陰性である等の物性
を示すヒアルロン酸ナトリウムが提供されてきたが、発
熱性物質を除去するために煩雑な操作が必要とされてき
た。ヒアルロン酸ナトリウムから容易に発熱性物質を除
去するための精製法が望まれている。

【０００５】本発明は、発熱性物質含量の低い高純度の
ヒアルロン酸ナトリウムを容易に取得するための精製法
および該精製法により取得されたヒアルロン酸ナトリウ
ムを提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明により、ヒアルロ
ン酸ナトリウムを含むヒアルロン酸ナトリウム溶解液に
塩および水溶性有機溶剤を添加し、ヒアルロン酸ナトリ
ウムを析出・沈降させ、上澄み液を抜き取ることにより
発熱性物質を除去することを特徴とするヒアルロン酸ナ
トリウムの精製法および該精製法により取得されたヒア
ルロン酸ナトリウムを提供することができる。

【０００７】また、ヒアルロン酸ナトリウムを含むヒア
ルロン酸ナトリウム溶解液を正に帯電したフィルターに
通し、同上の方法で発熱性物質を除去することを特徴と
するヒアルロン酸ナトリウムの精製法および該精製法に
より取得されたヒアルロン酸ナトリウムを提供すること
ができる。更に、上記方法により取得されたヒアルロン
酸ナトリウムを５０％（ｖ／ｖ）以上の水溶性有機溶剤
で洗浄し、粉末状にした後、真空乾燥することにより、
更に発熱性物質を低減することを特徴とするヒアルロン
酸ナトリウムの精製法および該精製法により取得された
ヒアルロン酸ナトリウムを提供することができる。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明において用いることのでき
るヒアルロン酸ナトリウムは、微生物、動物等の由来お
よびヒアルロン酸ナトリウムの分子量に関係なく、いか
なるものも用いることができる。ヒアルロン酸ナトリウ
ムとしては、例えば、硝子体、へその緒、関節液、鶏冠
等より単離したもの、ストレプトコッカス・ピオゲネス
（Streptococcus pyogenes）、ストレプトコッカス・エ
キ（Streptococcus equi）、ストレプトコッカス・エ
キシミリス（Streptococcus equismilis）、ストレプト
コッカス・ディスガラクティエ（Streptococcus dysgal
actiae）、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス（St
reptococcus zooepidemicus）等の微生物により生産さ
れたもの等をあげることができる。

【０００９】ヒアルロン酸ナトリウム溶解液は０.００
１〜１％（ｗ／ｖ）の濃度のヒアルロン酸ナトリウムを
含む水溶液が好ましく、ヒアルロン酸ナトリウムを溶解
させるために用いる水は、発熱性物質が０.０１ＥＵ／
ｍｌ以下のものが好ましい。該ヒアルロン酸ナトリウム
溶解液を除菌または不溶物除去のために０.２〜５.０μ
ｍのフィルターを用いてろ過処理を行ってもよい。

【００１０】また、ヒアルロン酸ナトリウム溶解中の発
熱性物質を除去する目的で、特定のｐH領域で正に帯電
したフィルターを用いてろ過処理を行ってもよい。該フ
ィルターとしては、ｐＨ３〜１０の水溶液で正に帯電す
るフィルターであればいずれも用いることができる。好
ましくは、メンブレンフィルターをあげることができ
る。

【００１１】該フィルターとしては、ナイロン−６６等
のポリアミド樹脂を一成分とする共重合体よりなる膜孔
径０.２０〜５.０μmのフィルターであることが好まし
い。該フィルターの具体的な例として、例えば、日本ポ
ール（株）製のポジダインフィルター（商品名）、プロ
ファイルIIプラス（商品名）等をあげることができる。

【００１２】該フィルターを用いてろ過処理を行うとき
に、ろ過性を向上させるために、塩の添加、またはヒア
ルロン酸溶液の液温を上げる処理を行ってもよい。塩と
しては、塩基成分として、リチウム、ナトリウム、カリ
ウム等のアルカリ金属イオン、マグネシウム、カルシウ
ム等のアルカリ土類金属イオン等およびアルミニウムイ
オン等からなる陽性成分と、酸成分として、塩素、臭素
等のハロゲンイオン、硫酸、硝酸等の無機酸、および蟻
酸、酢酸等の有機酸の酸根等からなる陰性成分とからな
る塩をあげることができ、好ましくはナトリウム塩をあ
げることができる。これらの塩は単独もしくは組み合わ
せて用いることができる。

【００１３】具体的塩としては、塩化ナトリウム、硫酸
ナトリウム、酢酸ナトリウム等をあげることができる。
塩は、ヒアルロン酸溶解液に対して、０.１〜３０％
（ｗ／ｖ）添加することが好ましい。ヒアルロン酸溶液
の液温は８０℃まで上げることが可能である。

【００１４】上記フィルターろ過処理を行ったヒアルロ
ン酸ナトリウム溶解液あるいは、該処理を行っていない
ヒアルロン酸ナトリウム溶解液に塩および水溶性の有機
溶剤を添加する。塩としては、上記記載の塩を単独もし
くは組み合わせて用いることができる。塩は、ヒアルロ
ン酸溶解液に対して、１〜３０％（ｗ／ｖ）添加するこ
とが好ましい。

【００１５】水溶性有機溶剤の添加量は、最終濃度とし
て、ヒアルロン酸ナトリウムの析出可能な３０〜９０％
（ｖ／ｖ）になるように添加するのが好ましい。水溶性
有機溶剤としては、水に可溶な有機溶剤であればいずれ
も用いることができ、具体的にはメタノール、エタノー
ル、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等のアルコー
ル類、アセトン等のケトン類、ジメトキシエタン、テト
ラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類、アセトニ
トリル等をあげることができる。これらの水溶性有機溶
剤は単独もしくは混合して用いることができる。また、
用いる水溶性有機溶剤は発熱性物質含量の低いものが好
ましい。

【００１６】ヒアルロン酸ナトリウム溶解液への水溶性
有機溶剤の添加により析出・沈降させたヒアルロン酸ナ
トリウムから発熱性物質を効率よく除去するためには、
ヒアルロン酸ナトリウムを充分に沈降させることが好ま
しく、通常水溶性有機溶剤の添加後２時間以上放置し、
ヒアルロン酸ナトリウムを沈降させる。このとき、沈降
したヒアルロン酸ナトリウムはゲル状の比容の小さい半
透明な状態となっている。

【００１７】該ヒアルロン酸ナトリウムを沈降させた溶
液から上澄み液を抜き取ることにより発熱性物質を除去
できる。また、上澄み液を除去して残ったヒアルロン酸
ナトリウムより以下の方法により、更に発熱性物質の除
去されたヒアルロン酸ナトリウムを取得できる。上澄み
液を抜き取ったゲル状の上記ヒアルロン酸ナトリウム
に、５０〜１００％（ｖ／ｖ）の水溶性有機溶剤を添加
し、洗浄する。該操作により、該ヒアルロン酸ナトリウ
ムはゲル状から粉末状となる。該粉末状のヒアルロン酸
ナトリウムに必要に応じて、更に５０〜１００％（ｖ／
ｖ）の水溶性有機溶剤を添加し、洗浄後、真空乾燥する
ことにより、発熱性物質含量０.００１５〜０.００３Ｅ
Ｕ／ｍｇ以下のヒアルロン酸ナトリウムを取得できる。

【００１８】発熱性物質の測定は、ヒアルロン酸ナトリ
ウムを２ｇ／ｌとなるように発熱性物質含量が０.００
６ＥＵ／ｍｌ以下の水に溶解後、トキシカラーシステム
（生化学工業社製）を用い、添付のマニュアルに従っ
て、比色分析することにより行う。以下に本発明の実施
例を示す。

【００１９】

【実施例】

実施例１発熱性物質含量０.０２ＥＵ／ｍｇのヒアルロン酸ナト
リウム２５ｇを、発熱性物質含量０.０１ＥＵ／ｍｌ以
下の水１０Ｌに溶解した後、０.４５μｍのマイクロフ
ィルターを用いてろ過処理し、ろ液を得た。

【００２０】該ろ液に塩化ナトリウムを５８.５ｇ／ｌ
になるように添加後、５０または４４％（ｖ／ｖ）とな
るようにエタノールを添加した。該溶液を約５時間放置
することによりヒアルロン酸ナトリウムを析出・沈降さ
せ、該溶液の上澄み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリ
ウムの沈降物を得た。該沈降物を８０％エタノール水で
洗浄後、１００％エタノールで洗浄した。

【００２１】該洗浄物を真空乾燥することより、精製ヒ
アルロン酸ナトリウムを２０ｇ取得した。取得したヒア
ルロン酸ナトリウム中の発熱性物質含量を第１表に示し
た。

【００２２】

【表１】

【００２３】実施例２発熱性物質含量０.０２ＥＵ／ｍｇのヒアルロン酸ナト
リウム２５ｇを、発熱性物質含量０.０１ＥＵ／ｍｌ以
下の水１０Ｌに溶解した後、０.４５μｍのマイクロフ
ィルターを用いてろ過し、ろ液を得た。該ろ液に塩化ナ
トリウムを５８.５ｇ／ｌになるように添加後、５０、
４４または４１％（ｖ／ｖ）となるようにアセトンを添
加した。

【００２４】該溶液を約５時間放置することにより、ヒ
アルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、該溶液の上澄
み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウムの沈降物を得
た。該沈殿物を８０％アセトンで洗浄後、１００％アセ
トンで洗浄した。該洗浄物を真空乾燥することにより、
精製ヒアルロン酸ナトリウムを２０ｇ取得した。

【００２５】取得したヒアルロン酸ナトリウム中の発熱
性物質含量を第２表に示した。

【００２６】

【表２】

【００２７】実施例３ストレプトコッカス・ズーエピデミクス（Streptococcu
s zooepidemicus） NCTC7023［J. Gen. Microbiol., 1
5, 485-491 (1956)］をブレイン・ハート・インヒュー
ジョン寒天培地（日水製薬社製）で３７℃、１６時間培
養した菌体を、グルコース１％、ペプトン１.５％、酵
母エキス０.５％、コーンスチープリーカー１％、グル
タミン酸ナトリウム０.３％、りん酸二カリウム０.２
％、硫酸マグネシウム０.０５％、チオ硫酸ナトリウム
０.１％、炭酸カルシウム２％からなる種培地（ｐＨ７.
０）３００ｍｌに接種し、３７℃、１６時間振盪培養し
た。

【００２８】この種培養液１５０ｍｌをグルコース２.
５％、ペプトン１.５％、酵母エキス０.５％、コーンス
チープリーカー０.５％、りん酸二カリウム０.２％、硫
酸マグネシウム０.００５％、チオ硫酸ナトリウム０.１
％からなる発酵培地（ｐＨ７.２）を３Ｌ添加した５Ｌ
容ジャーファーメンターに接種し３７℃、通気量０.３
ｖｖｍ、ｐＨ７.０にて２６時間培養し、ヒアルロン酸
培養液を得た。

【００２９】該ヒアルロン酸培養液３Ｌをイオン交換水
で２０Ｌに希釈し、カーボン２００ｇを添加し、室温で
１時間攪拌した後、ヌッチェでろ過を行い、カーボン処
理液２０Ｌを得た。該カーボン処理液を、マクロレティ
キュラー型陰イオン交換樹脂ダイヤイオンＨＰＡ−７５
（三菱化学社製）２.５Ｌ、ゲル型強酸性陽イオン交換
樹脂ＳＫ１Ｂ（三菱化学社製）１.２５Ｌに５Ｌ／ｈの
流速で連続通塔し、クロマト処理液２０Ｌを得た。

【００３０】該処理液を水酸化ナトリウムでｐＨ７.０
に調整後、カーボン２００ｇを添加し、室温で１時間攪
拌した。攪拌後、ヌッチェを用いてろ過し、得られたろ
液を、０.４５μｍのマイクロフィルターを用いてろ過
し、２０Ｌのろ液を得た。該ろ液の発熱性物質含量は、
ヒアルロン酸ナトリウム当たり０.０４ＥＵ／ｍｇであ
った。

【００３１】該ろ液に１.２ｋｇの塩化ナトリウムを加
え、１４Ｌのアセトンを添加した。約５時間放置するこ
とにより、ヒアルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、
該溶液の上澄み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウム
の沈降物を得た。該沈殿物を８０％アセトンで洗浄後、
１００％アセトンで洗浄した。該洗浄物を真空乾燥する
ことにより、精製ヒアルロン酸ナトリウムを１１.５ｇ
取得した。

【００３２】取得したヒアルロン酸ナトリウム中の発熱
性物質含量を第３表に示した。

【００３３】

【表３】

【００３４】実施例４鶏冠由来で発熱性物質含量０.０２ＥＵ／ｍｇのヒアル
ロン酸ナトリウム２５ｇを、発熱性物質含量０.０１Ｅ
Ｕ／ｍｌ以下の水１０Ｌに溶解した後、０.４５μｍの
マイクロフィルターを用いてろ過し、ろ液を得た。該ろ
液に塩化ナトリウムを５８.５ｇ／ｌになるように添加
後、４１％（ｖ／ｖ）となるようにアセトンを添加し
た。

【００３５】該溶液を約５時間放置することにより、ヒ
アルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、該溶液の上澄
み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウムの沈降物を得
た。該沈殿物を８０％アセトンで洗浄後、１００％アセ
トンで洗浄した。該洗浄物を真空乾燥することにより、
精製ヒアルロン酸ナトリウムを２０ｇ取得した。

【００３６】取得したヒアルロン酸ナトリウム中の発熱
性物質含量を第４表に示した。

【００３７】

【表４】

【００３８】実施例５発熱性物質含量０.０２ＥＵ／ｍｇ・分子量２３０万の
ヒアルロン酸ナトリウム２５ｇを、発熱性物質含量０.
０１ＥＵ／ｍｌ以下の水１０Ｌに溶解した。該溶解液に
塩化ナトリウムを１０ｇ／ｌになるように添加した。ｐ
Ｈ３〜１０において正に帯電するマイクロフィルター
[絶対ろ過精度０.４５μｍ・日本ポール(株)製のポジダ
インフィルター（商品名）]を用い、ろ過温度２５℃
で、該ヒアルロン酸溶解液をろ過処理し、ろ液を得た。

【００３９】該ろ液に塩化ナトリウムを５８.５ｇ／ｌ
になるように添加後、４４％（ｖ／ｖ）となるようにエ
タノールを添加した。該溶液を約５時間放置することに
よりヒアルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、該溶液
の上澄み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウムの沈降
物を得た。該沈降物を８０％エタノール水で洗浄後、１
００％エタノールで洗浄した。該洗浄物を真空乾燥する
ことより、精製ヒアルロン酸ナトリウムを２０ｇ取得し
た。

【００４０】取得したヒアルロン酸ナトリウム中の発熱
性物質含量を第５表に示した。

【００４１】

【表５】

【００４２】実施例６発熱性物質含量０.０２ＥＵ／ｍｇ・分子量６０万のヒ
アルロン酸ナトリウム５０ｇを、発熱性物質含量０.０
１ＥＵ／ｍｌ以下の水１０Ｌに溶解した。該溶解液に塩
化ナトリウムを１０ｇ／ｌになるように添加した。ｐＨ
３〜１０において正に帯電するメンブレンフィルター
[絶対ろ過精度０.４５μｍ・日本ポール(株)製のポジダ
インフィルター（商品名）]を用い、ろ過温度２５℃
で、該ヒアルロン酸溶解液をろ過処理し、ろ液を得た。

【００４３】該ろ液に塩化ナトリウムを５８.５ｇ／ｌ
になるように添加後、４４％（ｖ／ｖ）となるようにエ
タノールを添加した。該溶液を約５時間放置することに
よりヒアルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、該溶液
の上澄み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウムの沈降
物を得た。該沈降物を８０％エタノール水で洗浄後、１
００％エタノールで洗浄した。

【００４４】該洗浄物を真空乾燥することより、精製ヒ
アルロン酸ナトリウムを４０ｇ取得した。取得したヒア
ルロン酸ナトリウム中の発熱性物質含量を第６表に示し
た。

【００４５】

【表６】

【００４６】実施例７ストレプトコッカス・ズーエピデミクス（Streptococcu
s zooepidemicus） NCTC7023［J. Gen. Microbiol., 1
5, 485-491 (1956)］をブレイン・ハート・インヒュー
ジョン寒天培地（日水製薬社製）で３７℃、１６時間培
養した菌体を、グルコース１％、ペプトン１.５％、酵
母エキス０.５％、コーンスチープリーカー１％、グル
タミン酸ナトリウム０.３％、りん酸二カリウム０.２
％、硫酸マグネシウム０.０５％、チオ硫酸ナトリウム
０.１％、炭酸カルシウム２％からなる種培地（ｐＨ７.
０）３００ｍｌに接種し、３７℃、１６時間振盪培養し
た。

【００４７】この種培養液１５０ｍｌをグルコース２.
５％、ペプトン１.５％、酵母エキス０.５％、コーンス
チープリーカー０.５％、りん酸二カリウム０.２％、
硫酸マグネシウム０.００５％、チオ硫酸ナトリウム０.
１％からなる発酵培地（ｐＨ７.２）を３Ｌ添加した５
Ｌ容ジャーファーメンターに接種し３７℃、通気量０.
３ｖｖｍ、ｐＨ７.０にて２６時間培養し、ヒアルロン
酸培養液を得た。

【００４８】該ヒアルロン酸培養液３Ｌをイオン交換水
で２０Ｌに希釈し、カーボン２００ｇを添加し、室温で
１時間攪拌した後、ヌッチェでろ過を行い、カーボン処
理液２０Ｌを得た。該カーボン処理液を、マクロレティ
キュラー型陰イオン交換樹脂ダイヤイオンＨＰＡ−７５
（三菱化学社製）２.５Ｌ、ゲル型強酸性陽イオン交換
樹脂ＳＫ１Ｂ（三菱化学社製）１.２５Ｌに５Ｌ／ｈの
流速で連続通塔し、クロマト処理液２０Ｌを得た。

【００４９】該処理液を水酸化ナトリウムでｐＨ７.０
に調整後、カーボン２００ｇを添加し、室温で１時間攪
拌し、ヌッチェを用いてろ過し、ろ液を取得した。該溶
解液に塩化ナトリウムを１０ｇ／ｌになるように添加し
た。ｐＨ３〜１０において正に帯電するメンブレンフィ
ルター[絶対ろ過精度０.４５μｍ・日本ポール(株)製の
ポジダインフィルター（商品名）]を用い、ろ過温度２
５℃で、該ヒアルロン酸溶解液をろ過処理し、１８Ｌの
ろ液を得た。

【００５０】該ろ液の発熱性物質含量は、ヒアルロン酸
ナトリウム当たり０.０１ＥＵ／ｍｇであった。該ろ液
に１.１ｋｇの塩化ナトリウムを加え、１４Ｌのエタノ
ールを添加した。約５時間放置することにより、ヒアル
ロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、該溶液の上澄み液
を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウムの沈降物を得た。

【００５１】該沈殿物を８０％エタノールで洗浄後、１
００％エタノールで洗浄した。該洗浄物を真空乾燥する
ことにより、精製ヒアルロン酸ナトリウムを１０.０ｇ
取得した。該ヒアルロン酸ナトリウムの分子量は極限粘
度法で分析したとき２２０万であった。取得したヒアル
ロン酸ナトリウム中の発熱性物質含量を第７表に示し
た。

【００５２】

【表７】

【００５３】実施例８鶏冠由来で発熱性物質含量０.０２ＥＵ／ｍｇ・分子量
１００万のヒアルロン酸ナトリウム５０ｇを、発熱性物
質含量０.０１ＥＵ／ｍｌ以下の水１０Ｌに溶解した。
該溶解液に塩化ナトリウムを１０ｇ／ｌになるように添
加した。

【００５４】ｐＨ３〜１０において正に帯電するメンブ
レンフィルター[絶対ろ過精度０.４５μｍ・日本ポール
(株)製のポジダインフィルター（商品名）]を用い、ろ
過温度２５℃で、該ヒアルロン酸溶解液をろ過処理し、
ろ液を得た。該ろ液に塩化ナトリウムを５８.５ｇ／ｌ
になるように添加後、４１％（ｖ／ｖ）となるようにア
セトンを添加した。

【００５５】該溶液を約５時間放置することにより、ヒ
アルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、該溶液の上澄
み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウムの沈降物を得
た。該沈殿物を８０％アセトンで洗浄後、１００％アセ
トンで洗浄した。該洗浄物を真空乾燥することにより、
精製ヒアルロン酸ナトリウムを４０ｇ取得した。

【００５６】取得したヒアルロン酸ナトリウム中の発熱
性物質含量を第８表に示した。

【００５７】

【表８】

【００５８】実施例９発熱性物質含量０.１ＥＵ／ｍｇ・分子量２３０万のヒ
アルロン酸ナトリウム１０ｇを、発熱性物質含量０.０
１ＥＵ／ｍｌ以下の水１０Ｌに溶解した。該溶解液に塩
化ナトリウムを１０ｇ／ｌになるように添加した。ｐＨ
３〜１０において正に帯電するマイクロフィルター[絶
対ろ過精度０.２μｍ・日本ポール(株)製のポジダイン
フィルター（商品名）]を用い、ろ過温度２５℃で、該
ヒアルロン酸溶解液をろ過処理し、ろ液を得た。

【００５９】該ろ液に塩化ナトリウムを５８.５ｇ／ｌ
になるように添加後、４４％（ｖ／ｖ）となるようにエ
タノールを添加した。該溶液を約５時間放置することに
よりヒアルロン酸ナトリウムを析出・沈降させ、該溶液
の上澄み液を抜き取り、ヒアルロン酸ナトリウムの沈降
物を得た。該沈降物を８０％エタノール水で洗浄後、１
００％エタノールで洗浄した。該洗浄物を真空乾燥する
ことより、精製ヒアルロン酸ナトリウムを２ｇ取得し
た。

【００６０】取得したヒアルロン酸ナトリウム中の発熱
性物質含量を第９表に示した。

【００６１】

【表９】

【００６２】

【発明の効果】本発明によれば、発熱性物質含量の低い
高純度のヒアルロン酸ナトリウムを容易に取得するため
の精製法および該精製法により取得されたヒアルロン酸
ナトリウムを提供することができる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒアルロン酸ナトリウムを含むヒアルロ
ン酸ナトリウム溶解液に塩および水溶性有機溶剤を添加
し、ヒアルロン酸ナトリウムを析出沈降させ、上澄み液
を抜き取ることにより発熱性物質を除去することを特徴
とするヒアルロン酸ナトリウムの精製法。
【請求項２】ヒアルロン酸ナトリウム溶解液に含まれ
るヒアルロン酸ナトリウムが、０.００１〜１％（Ｗ／
Ｖ）である、請求項１記載の精製法。
【請求項３】ヒアルロン酸ナトリウムが、鶏冠または
微生物由来のヒアルロン酸ナトリウムである、請求項１
記載の精製法。
【請求項４】微生物が、ストレプトコッカス属に属す
る微生物である、請求項３記載の精製法。
【請求項５】ストレプトコッカス属に属する微生物
が、ストレプトコッカス・ズーエピデミクスＮＣＴＣ７
０２３である、請求項４記載の精製法。
【請求項６】塩の添加が１〜３０％（Ｗ／Ｖ）であ
る、請求項１記載の精製法。
【請求項７】塩がナトリウム塩である、請求項１また
は６記載の精製法。
【請求項８】ナトリウム塩が、塩化ナトリウム、硫酸
ナトリウムおよび酢酸ナトリウムより選ばれる塩であ
る、請求項７記載の精製法。
【請求項９】水溶性有機溶剤の添加が３０〜４５％
（Ｖ／Ｖ）である、請求項１記載の精製法。
【請求項１０】水溶性有機溶剤が、メタノール、エタ
ノールまたはアセトンである、請求項１記載の精製法。
【請求項１１】ヒアルロン酸ナトリウムを含むヒアル
ロン酸ナトリウム溶解液が、ｐＨ３〜１０の溶液中で正
に帯電したマイクロフィルターに通す処理を行ったヒア
ルロン酸ナトリウム溶解液である、請求項１または２記
載のヒアルロン酸ナトリウムの精製法。
【請求項１２】正に帯電したマイクロフィルターの孔
径が０.２０〜５.０μｍである、請求項１１記載の精製
法。
【請求項１３】ヒアルロン酸ナトリウム溶解液が塩を
含むことを特徴とする、請求項１１記載の精製法。
【請求項１４】塩の添加が０.１〜３０％（Ｗ／Ｖ）
である、請求項１７記載の精製法。
【請求項１５】塩がナトリウム塩である、請求項１７
または１８記載の精製法。
【請求項１６】ナトリウム塩が、塩化ナトリウム、硫
酸ナトリウムおよび酢酸ナトリウムより選ばれる塩であ
る、請求項１９記載の精製法。
【請求項１７】請求項１〜２０のいずれかに記載の精
製法により取得されたヒアルロン酸ナトリウムに、５０
〜１００％（Ｖ／Ｖ）の水溶性有機溶剤を添加し、ヒア
ルロン酸ナトリウムを洗浄し、真空乾燥することからな
るヒアルロン酸ナトリウムの精製法。
【請求項１８】請求項１〜２１のいずれかに記載の精
製法により取得されることを特徴とするヒアルロン酸ナ
トリウム。
【請求項１９】発熱性物質の含量が０.００３エンド
トキシン・ユニット／ｍｇ以下であるヒアルロン酸ナト
リウム。