JPH09294589A

JPH09294589A - 牛のマクロファージの膜タンパク質をコードするｄｎａ、該ｄｎａを含むベクターおよび形質転換体

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Publication number: JPH09294589A
Application number: JP8129236A
Authority: JP
Inventors: Mayumi Komatsu; 真由美小松; Michiko Uchiyama; 美智子内山
Original assignee: NORIN SUISANSYO KACHIKU KAIRIY; NORIN SUISANSYO KACHIKU KAIRIYOU CENTER SHOCHO
Current assignee: NORIN SUISANSYO KACHIKU KAIRIY; NORIN SUISANSYO KACHIKU KAIRIYOU CENTER SHOCHO
Priority date: 1996-04-26
Filing date: 1996-04-26
Publication date: 1997-11-18
Anticipated expiration: 2016-04-26
Also published as: JP2857748B2

Abstract

(57)【要約】【課題】牛の細胞内侵襲性細菌に対する抵抗性に関与
するマクロファージのイオン透過性に関わる膜タンパク
質をコードする遺伝子を提供し、これを利用して細胞内
侵襲性細菌に対して抵抗性を有する牛を作出すること。【解決手段】牛のマクロファージの膜タンパク質であ
り、そのアミノ酸配列中に配列表の配列番号２に記載の
アミノ酸番号１から５４８までのアミノ酸配列を含むタ
ンパク質をコードするＤＮＡ、当該ＤＮＡを含む組換え
ベクターおよび当該ベクターで形質転換された大腸菌。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、牛のマクロファー
ジの膜タンパク質をコードするＤＮＡ、該ＤＮＡを含む
ベクターおよび形質転換体に関し、詳しくは牛の細胞内
侵襲性細菌（例えばサルモネラ菌）に対して有効なマク
ロファージのイオン透過性に関わる膜蛋白質をコードす
るＤＮＡ、該ＤＮＡを含むベクターおよび該ベクターで
形質転換された大腸菌に関する。本発明により、細胞内
侵襲性細菌に対して有効なマクロファージのイオン透過
性に関わる膜タンパク質の構造が解明され、この膜蛋白
質をコードするＤＮＡを利用することにより、細胞内侵
襲性細菌に対して抵抗性を有する牛を作出することが可
能である。

【０００２】

【従来の技術】畜産業者等にとって、牛におけるサルモ
ネラ菌等の細胞内侵襲性細菌に対する防御対策は重要な
課題である。細胞内侵襲性細菌に対する従来の防御対策
は、抗生物質やワクチンなどの薬剤による方法が主流で
あるが、この方法では、牛体内からのこれら細菌の完全
な排除は困難である。また、牛の育種において、細胞内
侵襲性細菌に対して十分な耐性を有する品種は未だ作出
されていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】牛のサルモネラ菌等へ
の抗病性は、菌を殺す能力を有するマクロファージの活
性度に依存する。このマクロファージの活性度は、ＤＮ
Ａが支配しており、抗病性を有する牛は、マクロファー
ジを活性化させるＤＮＡを有することが予想される。こ
のようなマクロファージの活性化に関与するＤＮＡとし
て、マクロファージのイオン透過性に関わる膜タンパク
質をコードする遺伝子が挙げられ、これに関する研究が
行われている。例えば、マウスにおいては細胞内侵襲性
細菌に対して有効であるマクロファージのイオン透過性
に関わる膜タンパク質（Natural Resistence-Associate
d Macrophage Protein、以下Ｎｒａｍｐと略記する。）
をコードする遺伝子が解明されている（Vidal et al.,C
ell, 73, 469-485 (1993))。また、羊においても当該遺
伝子のクローニングが行われ、Ｎｒａｍｐの一部が解明
された（Pitel et al.,第２４回国際動物遺伝学会、199
4年）。

【０００４】しかし、牛では当該遺伝子の存在や機能に
ついては未だ明らかにされていない。そこで、牛におい
てＮｒａｍｐ遺伝子のような細胞内侵襲性細菌に対して
有効な当該遺伝子を見出すことができれば、それがコー
ドするマクロファージの膜タンパク質が、細胞内侵襲性
細菌に対して抵抗性であるか感受性であるかの判別がで
き、これを選抜時の指標として抵抗性膜タンパク質をコ
ードする当該遺伝子を持つ牛を選び出し、細胞内侵襲性
細菌に対して抵抗性を有する牛を作出することが可能で
ある。したがって、本発明は牛の細胞内侵襲性細菌に対
する抵抗性に関与するマクロファージのイオン透過性に
関わる膜タンパク質をコードする遺伝子を提供すること
を目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
め、本発明者らは、羊Ｎｒａｍｐ遺伝子のうち、塩基配
列が解明されている部分を参考にしてプライマーを作製
し、該プライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応法（Sa
iki et al., Science, 230, 1350 (1985))により、牛Ｎ
ｒａｍｐ様遺伝子の一部を作出した。この牛Ｎｒａｍｐ
様遺伝子の一部をプローブとして用いて、牛の脾臓より
作成したｃＤＮＡライブラリーからのハイブリダイゼー
ションにより、牛の細胞内侵襲性細菌に対する抵抗性に
関与するマクロファージのイオン透過性に関わる膜タン
パク質をコードする遺伝子の全長を単離し、該遺伝子の
塩基配列を解析し、対応するアミノ酸配列を解明するこ
とにより、本発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、請求項１に記載の発明は、牛の
マクロファージの膜タンパク質であり、そのアミノ酸配
列中に配列表の配列番号２に記載のアミノ酸番号１から
５４８までのアミノ酸配列を含むタンパク質をコードす
るＤＮＡである。また、請求項２に記載の発明は、請求
項１記載のＤＮＡを含む組換えベクターであり、請求項
３に記載の発明は請求項２記載のベクターで形質転換さ
れた大腸菌である。

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。まず、牛のマクロファージのイオン透過性に関与
する膜タンパク質をコードする遺伝子の単離・同定につ
いて述べる。（１）牛の脾臓ｃＤＮＡライブラリーの作製牛の脾臓ｃＤＮＡライブラリーは、牛の脾臓からｍＲＮ
Ａを抽出し、これを鋳型として常法に従って作製する。
なお、本発明で用いるｍＲＮＡは、Ｐｏｌｙ（Ａ）を含
むｍＲＮＡ（Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ）と同様である。

【０００８】この方法について、より具体的に説明する
と、前記の牛の脾臓からｍＲＮＡを得た後、このｍＲＮ
Ａを鋳型とし、オリゴ（ｄＴ）と random hexamer をプ
ライマーとしてｃＤＮＡを合成する。次いで、このｃＤ
ＮＡを、例えばファージのＤＮＡであるλＺＡＰII等の
ベクターに組み込み、これをインビトロパッケージング
（Kretz,P.L., et al. Nucleic Acids Res. 17: 5409
(1989))してｃＤＮＡライブラリーを作製する。λＺＡ
ＰIIは、ファージからプラスミド（Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐ
ｔＳＫ（−））に転換する機能を有しており、この機能
を利用して容易にプラスミドを作製することができる。

【０００９】（２）牛Ｎｒａｍｐ遺伝子のプローブの作
出羊Ｎｒａｍｐ遺伝子のうち、塩基配列が解明されている
部分を参考にしてプライマーを作製し、該プライマーを
用いてポリメラーゼ連鎖反応法（Saiki et al., Scienc
e, 230, 1350 (1985))により、牛Ｎｒａｍｐ様遺伝子の
一部を作出する。この牛Ｎｒａｍｐ様遺伝子の一部をプ
ローブとして、以下のスクリーニングに用いる。

【００１０】（３）スクリーニング上記のｃＤＮＡライブラリーを大腸菌とともに適当な培
地プレートに撒いてプラークを形成させた後、牛Ｎｒａ
ｍｐ様遺伝子の一部をプローブとして、プラークハイブ
リダイゼーション（Benton,W.D. and Davis,R.W., Scie
nce, 196, 180(1977)) を行って、ポジティブなファー
ジを単離する。本発明の場合、このようなスクリーニン
グの結果、得られたファージは７個である。これらのフ
ァージをプラスミドに転換する。すなわち、Ｅ．ｃｏｌ
ｉＸＬ１−ＢｌｕｅにλＺＡＰIIとヘルパーファージを
感染させると、λＺＡＰIIよりＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳ
Ｋ（−）が切り出されるので、これを用いて大腸菌、例
えばＥ．ｃｏｌｉＸＬ１−Ｂｌｕｅ等を形質転換す
る。こうして、牛Ｎｒａｍｐ遺伝子と相同性のあると思
われるプラスミドをスクリーニングし、１．８ｋｂ程度
のフラグメントを有するプラスミドから目的の牛Ｎｒａ
ｍｐ遺伝子と類似性のあるＤＮＡ断片を得る。

【００１１】次に、上記のようにして単離した牛のマク
ロファージのイオン透過性に関与する膜蛋白質をコード
する遺伝子の塩基配列を決定する。（４）ＤＮＡの塩基配列決定スクリーニングされたｃＤＮＡの塩基配列の分析は常法
により行うことができる。例えば、得られたｃＤＮＡか
らいくつかのｃＤＮＡフラグメントを作製し、一般に広
く使用されているジデオキシ法（Sanger et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA., 74, 5463-5467 (1977)) やマ
クサム・ギルバート法(Maxam et al., Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA., 74, 560-564 (1977)) 等によって各々の
塩基配列を解析し、総合的に分析することで全配列を決
定することができる。

【００１２】この構造解析によって、得られた牛ｃＤＮ
Ａは全長１７８７塩基対であり、マウスＮｒａｍｐ遺伝
子のコード領域を含み、５４７アミノ酸を有するタンパ
ク質をコードしている。得られた牛ｃＤＮＡをマウスＮ
ｒａｍｐ遺伝子と比較したところ、類似性のあることが
明らかとなり、そのアミノ酸レベルの相同性は９８．７
％である（図１参照）。マウスＮｒａｍｐは、９５番目
のアミノ酸がトリプトファンであるが、牛Ｎｒａｍｐ
は、配列表の配列番号２に記載したようにアミノ酸番号
９５番目のアミノ酸が翻訳終止となっている。このため
翻訳領域が分断され、実際の翻訳開始はアミノ酸番号１
４７番目のメチオニンからであり、牛Ｎｒａｍｐは１０
個の膜貫通領域を有することが予想される。なお、マウ
スＮｒａｍｐは１２個の膜貫通領域を有することが報告
されている（Govoni et al.,Genomics, 27, 9-19 (199
5))。

【００１３】

【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明す
る。実施例１ｍＲＮＡの調製摘出後、氷上に保存した牛脾臓２５０ｍｇをＩＳＯＧＥ
Ｎ（株式会社ニッポンジーン製）とともにホモジナイザ
ー（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ、スイス国ＫＩＮＥＭＡＴＩＣ
ＡＡＧ製）でホモジナイズした。その後、室温で５分
間放置し、クロロホルムを加えて激しく振とう後、室温
で２分間放置した。次いで、４℃で１０分間、３５００
ｒｐｍで遠心分離した。上層を他の容器に移し、イソプ
ロパノールを加え、室温で５分間放置し、４℃で１０分
間、３５００ｒｐｍで遠心分離し、得られた沈澱に７５
％エタノールを加えて激しく振とうした後、４℃で６分
間、３５００ｒｐｍで遠心分離した。得られた沈澱を３
分間乾燥させた後、滅菌水２ｍｌに溶解し、−２０℃で
保存した。このようにして、２５０ｍｇの組織より約１
ｍｇの総ＲＮＡが得られた。

【００１４】上記の方法で得られた総ＲＮＡ５００μｇ
に最終濃度で０．５ＭＮａＣｌとなるように５ＭＮ
ａＣｌを加えた。さらに、オリゴ（ｄＴ）セルロース
（Collaborative Res.) を５０ｍｇ加え、２０分間振と
うし、室温で６分間、３０００ｒｐｍで遠心分離して上
清を除いた。これに、１０ｍｌの binding buffer （２
０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）／０．５Ｍ
ＮａＣｌ／１ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）／０．１％
Sodium lauryl sarcosinate) を加えて上下に攪拌し、
室温で４分間、３０００ｒｐｍで遠心分離した後、上清
を除いた（これを２回行った）。

【００１５】次に、０．８ｍｌの low salt wash buffe
r ( ２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）／０．
１ＭＮａＣｌ／１ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）) を
加え、スピンカラムに０．４ｍｌ入れ、４℃で１０秒
間、１４０００ｒｐｍで遠心分離し、下の水層を除いた
（これを２回行った）。さらに low salt wash buffer
を加え、４℃で１０秒間、１４０００ｒｐｍで遠心分離
し、下層を除去した（これを３回行った）。

【００１６】その後、スピンカラムを新しいチューブへ
移し、２００μｌの滅菌水を加えて４℃で１０秒間、１
４０００ｒｐｍで遠心分離した（これを２回行った）。
このことにより、Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ画分を集め
た。この画分をエタノール沈澱させ、滅菌水５０μｌに
溶解し、−２０℃に保存した。このようにして、５００
μｇの総ＲＮＡから約７．２μｇのＰｏｌｙ（Ａ）＋Ｒ
ＮＡが得られた。

【００１７】実施例２牛の脾臓ｃＤＮＡライブラリーの作製実施例１で得られたＰｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ（ｍＲＮ
Ａ）を鋳型とし、オリゴ（ｄＴ）_12-18（ファルマシア
社製）と random hexamer をプライマーとして、ｃＤＮ
Ａを合成させた。次に、これをベクターλＺＡＰII（St
ratagene社製) に組み込み、これをインビトロパッケー
ジングしてｃＤＮＡライブラリーを作製した。λＺＡＰ
IIは、制限酵素ＥｃｏＲＩによる切断サイトを１ヶ所も
つ４１ｋｂのＤＮＡである。これに、上記のｃＤＮＡを
Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（Stratagene社製) によって、４℃
で４２時間のＤＮＡ鎖の連結反応を行い、インビトロパ
ッケージングをギガパックIIゴールド（Stratagene社
製) を使用して行った。これにより、ｃＤＮＡ１００ｎ
ｇより５×１０⁹個のファージが得られた。

【００１８】実施例３牛のマクロファージのイオン透過性に関わる膜タンパク
質（Ｎｒａｍｐ）をコードする遺伝子の単離（１）牛Ｎｒａｍｐ様遺伝子のプローブの作出羊Ｎｒａｍｐ遺伝子のうち、塩基配列が解明されている
部分を参考にしてプライマーを作製し、該プライマーを
用いてポリメラーゼ連鎖反応法（Saiki et al., Scienc
e, 230, 1350 (1985))により、牛Ｎｒａｍｐ様遺伝子の
一部（１ｋｂ）を作出し、以下のスクリーニングに用い
る。

【００１９】（２）スクリーニング実施例２で作製したｃＤＮＡライブラリーを大腸菌ＸＬ
１−Ｂｌｕｅとともに下記の組成をもつＮＺＹ寒天培地
に撒いて培養し、プラークを形成させた後、ナイロンメ
ンブレンフィルターにレプリカをとり、フィルターを
０．５ＭＮａＯＨ／１．５ＭＮａＣｌで湿めらせア
ルカリ処理した後、０．５ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ
７．５）／１．５ＭＮａＣｌで処理し、さらに２×Ｓ
ＳＣで処理して風乾させた後、紫外線を照射してＤＮＡ
をナイロンメンブレンフィルターに固定した。

【００２０】ＮＺＹ培地（ｐＨ７．５）ＮＺアミン１０ｇ塩化ナトリウム５ｇイーストエキストラクト５ｇ硫酸マグネシウム２ｇ蒸留水１０００ｍｌＮＺＹ寒天培地：ＮＺＹ培地にバクトアガーを１．５％
有する。

【００２１】このナイロンメンブレンフィルターを５×
ＳＳＰＥ／２０％ホルムアミド／０．１×Denhardt溶液
／０．１ｍｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ／１％ＳＤＳを含む
溶液中で４０℃で２時間プレハイブリダイゼーションを
行った。既に得ている牛Ｎｒａｍｐ様遺伝子の１．０ｋ
ｂをニックトランスレーション法キット（ファルマシア
社製）を用いて〔α−³²Ｐ〕ｄＣＴＰで標識し、これを
ハイブリダイゼーション液に加え、４０℃で２日間ハイ
ブリダイゼーションを行った。この後、ナイロンメンブ
レンフィルターは１×ＳＳＰＥ／０．５％ＳＤＳを含む
溶液中で室温にて２０分間で２回、４５℃、２０分間で
２回洗浄後、フィルターを風乾させ、オートラジオグラ
フィー（Laskey,R.A., FEBS Letters, 82, 314(1977))
を行った。

【００２２】このようにしてスクリーニングした結果、
上記プローブにポジティブなファージを７個単離した。
これらのファージをプラスミドに変換し、これを用いて
大腸菌ＸＬ１−Ｂｌｕｅを形質転換した。本菌は工業技
術院生命工学工業技術研究所に寄託されており、その受
託番号はＦＥＲＭＢＰ−５４３４である。次いで、こ
の大腸菌をアンピシリンを含む下記組成のＬＢ寒天培地
（ｐＨ７．５）で３７℃で１日培養することにより、ア
ンピシリン耐性を示すコロニーを取得した。

【００２３】ＬＢ培地（ｐＨ７．５）ペプトン１０ｇ塩化ナトリウム１０ｇイーストエキストラクト５ｇ蒸留水１０００ｍｌＬＢ寒天培地：ＬＢ培地にバクトアガーを１．５％有す
る。

【００２４】（３）塩基配列の解析アルカリ−ＳＤＳ法（Birnboim,H.C. and Doly,J., Nuc
leic Acids Research,7, 1513 (1979))により、上記の
取得したコロニーからプラスミドを調製した。プラスミ
ド１μｇを５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ７．５）／１０
０ｍＭＮａＣｌ／１０ｍＭＭｇＣｌ₂／１ｍＭＤ
ＤＴ中で制限酵素ＥｃｏＲＩ（２ユニット）で３７℃で
６０分間処理して切断し、得られたＤＮＡ断片を電気泳
動にかけて分画した。このうち１．８ｋｂの分画を持つ
ものについてジデオキシ法により塩基配列の解析を行
い、マウスＮｒａｍｐ遺伝子と類似性のあることを確認
した。また、他のＤＮＡ断片の構造解析を行った結果、
該１．８ｋｂの分画を持つものが牛のＮｒａｍｐ遺伝子
に相当する塩基配列の全長を有することが明らかになっ
た。

【００２５】配列表の配列番号１に該１．８ｋｂの分画
の塩基配列を記載した。全長は１７８７塩基対であり、
配列表の配列番号１に記載の核酸番号２７〜１６７０番
目の塩基配列に対応するアミノ酸配列を配列表の配列番
号２に記載した。なお、配列表の配列番号２のアミノ酸
配列のうち、９５番目の＊＊＊の記号は、対応する塩基
配列が翻訳終止で対応するアミノ酸が存在しないことを
示す。この構造解析によって、得られた牛ｃＤＮＡは全
長１７８７塩基対であり、マウスＮｒａｍｐ遺伝子のコ
ード領域を含み、５４７アミノ酸を有するタンパク質を
コードしている。得られた牛Ｎｒａｍｐのアミノ酸配列
を、マウスＮｒａｍｐのアミノ酸配列と比較したとこ
ろ、そのアミノ酸レベルの相同性は９８．７％であった
（図１参照）。特に、マウスＮｒａｍｐは、９５番目の
アミノ酸がトリプトファンであるが、牛Ｎｒａｍｐは、
配列表の配列番号２に記載したようにアミノ酸番号９５
番目のアミノ酸が翻訳終止となっている。このため翻訳
領域が分断され、実際の翻訳開始はアミノ酸番号１４７
番目のメチオニンからであり、牛Ｎｒａｍｐは１０個の
膜貫通領域を有することが予想される。

【００２６】

【発明の効果】本発明により、牛の細胞内侵襲性細菌に
対する抵抗性に関与するマクロファージのイオン透過性
に関わる膜タンパク質をコードする遺伝子が提供され、
これを利用して細胞内侵襲性細菌に対して抵抗性を有す
る牛を作出することが可能となる。

【００２７】

【配列表】

【００２８】配列番号：１配列の長さ：1787 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 直接の起源：牛脾臓cDNAライブラリー配列の特徴特徴を表す記号：domain 存在位置：27..1673 特徴を決定した方法：S 配列 CAGAGTATCC TGCCGCCTGC GTCCTC ATG ATT AGT GAC AAG AGC CCC CCG AGG 53 CTG AGC AGG CCC AGT TAT GGC TCC ATT TCC AGC CTG CCT GGC CCA GCA 101 CCT CAG CCA GCG CCT TGC CTG GAG ACC TAC CTG AGT GAG AAG ATC CCC 149 ATT CCC AGC GCA GAC CAG GGT ACA TTC AGC CTG AGG AAG CTG TGG GCG 197 TTC ACG GGG CCT GGT TTC CTC ATG AGC ATC GCT TTC CTT GAC CCG GGA 245 AAC ATT GAG TCC GAC CTT CAA GCT GGC GCT GTG GCT GGG TTC AAA CTC 293 CTC TGG GTG CTG CTC TGA GCG ACT GTG CTA GGT TTG CTG TGC CAG CGG 341 CTG GCT GCC CGG CTG GGC GTG GTA ACA GGC AAG GAC TTG GGT GAA GTC 389 TGC CAT CTC TAC TAC CCC AAG GTG CCC CGC ATC CTC CTC TGG CTG ACC 437 ATT GAG CTG GCC ATT GTG GGC TCA GAT ATG CAG GAA GTC ATC GGG ACG 485 GCT ATC TCC TTC AAT CTG CTC TCC GCT GGA CGC ATC CCG CTG TGG GAC 533 GGT GTA CTG ATC ACC ATT GTG GAC ACC TTC TTC TTC CTC TTC TTG GAT 581 AAC TAT GGT TTG CGC AAG CTG GAA GCT TTC TTC GGT CTC CTC ATT ACC 629 ATA ATG GCT TTG ACC TTC GGC TAT GAG TAT GTG GTA GCA CAC CCT TCC 677 CAG GGA GCG CTC CTT AAG GGC CTG GTG CTG CCC ACC TGT CCG GGC TGT 725 GGG CAG CCC GAG CTG CTG CAG GCA GTG GGC ATC GTC GGT GCC ATC ATC 773 ATG CTC CAT AAC ATC TAC CTG CAC TCA GCC TTG GTC AAG TCT AGA GAA 821 GTA GAC AGA ACC CGC CGG GTG GAT GTT CGA GAA GCC AAC ATG TAC TTC 869 CTG ATT GAG GCC ACC ATC GCC CTA TCG GTG TCC TTC ATC GTC AAC CTC 917 TTC GTC ATG GCT GTT TTT GGT CAG GCC TTC TAC CAG CAA GCC AAT GAG 965 GAA GCG TTC AAC ATC TGT GCC AAC AGC AGC CTC CAG AAC TAT GCT AAG 1013 ATC TTC CCC AGG GAC AAT AAC ACT GTG TCA GTG GAT ATT TAT CAA GGA 1061 GGT GTG ATC CTA GGC TGT CTC TTT GGC CCT GCG GCC CTC TAC ATC TGG 1109 GCA GTA GGT CTC CTG GCA GCG GGG CAG AGT TCT ACT ATG ACC GGC ACC 1157 TAT GCA GGA CAG TTC GTG ATG GAG GGT TTC CTT AAG CTG CGG TGG TCC 1205 CGC TTC GCT CGG GTC CTT CTC ACG CGC TCT TGC GCC ATC CTG CCC ACT 1253 GTG TTG GTG GCT GTC TTC CGA GAC CTG AAG GAC CTG TCC GGC CTC AAC 1301 GAA CTA CTC AAT GTT CTG CAG AGT CTA CTG CTG CCC TTC GCT GTA CTG 1349 CCC ATT TTG ACT TTC ACC AGC ATG CCA GCT GTC ATG CAG GAG TTC GCC 1397 AAC GGC CGG ATG AGC AAA GCC ATC ACT TCG TGC ATC ATG GCG CTA GTC 1445 TGC GCC ATC AAC CTG TAC TTT GTG ATC AGC TAC CTG CCC AGC CTC CCG 1493 CAC CCT GCC TAC TTC GGC CTT GTG GCT CTG TTC GCA ATA GGT TAC TTG 1541 GGC CTG ACT GCT TAT CTG GCC TGG ACC TGT TGC ATC GCC CAC GGA GCC 1589 ACC TTC CTG ACC CAC AGC TCC CAC AAG CAC TTC TTA TAT GGG CTC CCT 1637 AAC GAG GAG CAG GGA GGC GTG CAG GGT TCC TGG TGA CCGCGGCATC 1683 CAGCAAGCAA AGAGGCAACA GGGCAGACAC AGCAGAGCAA TTGGAGGTCC CCTACTGGCT 1743 TTCTGGATTA CCGGTTTCCA GTTTGGACAA GTGCTTTACC TCGG 1787

【００２９】配列番号：２配列の長さ：548 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Ile Ser Asp Lys Ser Pro Pro Arg Leu Ser Arg Pro Ser Tyr Gly 1 5 10 15 Ser Ile Ser Ser Leu Pro Gly Pro Ala Pro Gln Pro Ala Pro Cys Leu 20 25 30 Glu Thr Tyr Leu Ser Glu Lys Ile Pro Ile Pro Ser Ala Asp Gln Gly 35 40 45 Thr Phe Ser Leu Arg Lys Leu Trp Ala Phe Thr Gly Pro Gly Phe Leu 50 55 60 Met Ser Ile Ala Phe Leu Asp Pro Gly Asn Ile Glu Ser Asp Leu Gln 65 70 75 80 Ala Gly Ala Val Ala Gly Phe Lys Leu Leu Trp Val Leu Leu *** Ala 85 90 95 Thr Val Leu Gly Leu Leu Cys Gln Arg Leu Ala Ala Arg Leu Gly Val 100 105 110 Val Thr Gly Lys Asp Leu Gly Glu Val Cys His Leu Tyr Tyr Pro Lys 115 120 125 Val Pro Arg Ile Leu Leu Trp Leu Thr Ile Glu Leu Ala Ile Val Gly 130 135 140 Ser Asp Met Gln Glu Val Ile Gly Thr Ala Ile Ser Phe Asn Leu Leu 145 150 155 160 Ser Ala Gly Arg Ile Pro Leu Trp Asp Gly Val Leu Ile Thr Ile Val 165 170 175 Asp Thr Phe Phe Phe Leu Phe Leu Asp Asn Tyr Gly Leu Arg Lys Leu 180 185 190 Glu Ala Phe Phe Gly Leu Leu Ile Thr Ile Met Ala Leu Thr Phe Gly 195 200 205 Tyr Glu Tyr Val Val Ala His Pro Ser Gln Gly Ala Leu Leu Lys Gly 210 215 220 Leu Val Leu Pro Thr Cys Pro Gly Cys Gly Gln Pro Glu Leu Leu Gln 225 230 235 240 Ala Val Gly Ile Val Gly Ala Ile Ile Met Leu His Asn Ile Tyr Leu 245 250 255 His Ser Ala Leu Val Lys Ser Arg Glu Val Asp Arg Thr Arg Arg Val 260 265 270 Asp Val Arg Glu Ala Asn Met Tyr Phe Leu Ile Glu Ala Thr Ile Ala 275 280 285 Leu Ser Val Ser Phe Ile Val Asn Leu Phe Val Met Ala Val Phe Gly 290 295 300 Gln Ala Phe Tyr Gln Gln Ala Asn Glu Glu Ala Phe Asn Ile Cys Ala 305 310 315 320 Asn Ser Ser Leu Gln Asn Tyr Ala Lys Ile Phe Pro Arg Asp Asn Asn 325 330 335 Thr Val Ser Val Asp Ile Tyr Gln Gly Gly Val Ile Leu Gly Cys Leu 340 345 350 Phe Gly Pro Ala Ala Leu Tyr Ile Trp Ala Val Gly Leu Leu Ala Ala 355 360 365 Gly Gln Ser Ser Thr Met Thr Gly Thr Tyr Ala Gly Gln Phe Val Met 370 375 380 Glu Gly Phe Leu Lys Leu Arg Trp Ser Arg Phe Ala Arg Val Leu Leu 385 390 395 400 Thr Arg Ser Cys Ala Ile Leu Pro Thr Val Leu Val Ala Val Phe Arg 405 410 415 Asp Leu Lys Asp Leu Ser Gly Leu Asn Glu Leu Leu Asn Val Leu Gln 420 425 430 Ser Leu Leu Leu Pro Phe Ala Val Leu Pro Ile Leu Thr Phe Thr Ser 435 440 445 Met Pro Ala Val Met Gln Glu Phe Ala Asn Gly Arg Met Ser Lys Ala 450 455 460 Ile Thr Ser Cys Ile Met Ala Leu Val Cys Ala Ile Asn Leu Tyr Phe 465 470 475 480 Val Ile Ser Tyr Leu Pro Ser Leu Pro His Pro Ala Tyr Phe Gly Leu 485 490 495 Val Ala Leu Phe Ala Ile Gly Tyr Leu Gly Leu Thr Ala Tyr Leu Ala 500 505 510 Trp Thr Cys Cys Ile Ala His Gly Ala Thr Phe Leu Thr His Ser Ser 515 520 525 His Lys His Phe Leu Tyr Gly Leu Pro Asn Glu Glu Gln Gly Gly Val 530 535 540 Gln Gly Ser Trp 545

【図面の簡単な説明】

【図１】牛のマウスＮｒａｍｐ様遺伝子のアミノ酸配
列とマウスＮｒａｍｐ遺伝子のアミノ酸配列との比較を
示す。図中の上段は、マウスＮｒａｍｐ遺伝子のアミノ
酸配列を、下段は牛のマウスＮｒａｍｐ様遺伝子のアミ
ノ酸配列を示す。なお、図中の──はアミノ酸が存在し
ていないことを示し、また、アミノ酸が同一であれば
*、類似していれば .印で示す。一文字表記したアミノ
酸名の対照表を以下に示す。一文字表記アミノ酸ＧグリシンＡアラニンＶバリンＬロイシンＩイソロイシンＳセリンＴトレオニンＤアスパラギン酸Ｅグルタミン酸ＮアスパラギンＱグルタミンＫリジンＲアルギニンＣシステインＭメチオニンＦフェニルアラニンＹチロシンＷトリプトファンＨヒスチジンＰプロリン

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】牛のマクロファージの膜蛋白質であり、
そのアミノ酸配列中に配列表の配列番号２に記載のアミ
ノ酸番号１から５４８までのアミノ酸配列を含むタンパ
ク質をコードするＤＮＡ。
【請求項２】請求項１記載のＤＮＡを含む組換えベク
ター。
【請求項３】請求項２記載のベクターで形質転換され
た大腸菌。