JPH09292452A - 核磁気共鳴測定方法 - Google Patents
核磁気共鳴測定方法Info
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- JPH09292452A JPH09292452A JP8106671A JP10667196A JPH09292452A JP H09292452 A JPH09292452 A JP H09292452A JP 8106671 A JP8106671 A JP 8106671A JP 10667196 A JP10667196 A JP 10667196A JP H09292452 A JPH09292452 A JP H09292452A
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- hmbc
- nucleus
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 13Ｃ−13Ｃ遠距離スピン結合を観測すること
のできる核磁気共鳴測定方法を提供する。 【解決手段】 ＨＭＢＣ測定用パルス列の最初の励起パ
ルスをＴＡＮＧＯパルスに置換したパルス列を用いて測
定する。ＴＡＮＧＯパルスに続けてスピンロックパルス
を印加しても良い。ＴＡＮＧＯパルスに先立ってＢＩＲ
Ｄパルスを印加しても良い。検出期間中にデカップリン
グ用高周波を照射しても良い。
のできる核磁気共鳴測定方法を提供する。 【解決手段】 ＨＭＢＣ測定用パルス列の最初の励起パ
ルスをＴＡＮＧＯパルスに置換したパルス列を用いて測
定する。ＴＡＮＧＯパルスに続けてスピンロックパルス
を印加しても良い。ＴＡＮＧＯパルスに先立ってＢＩＲ
Ｄパルスを印加しても良い。検出期間中にデカップリン
グ用高周波を照射しても良い。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、核磁気共鳴（ＮＭ
Ｒ）測定方法に関し、特に生合成研究に用いて好適な核
磁気共鳴測定方法に関するものである。
Ｒ）測定方法に関し、特に生合成研究に用いて好適な核
磁気共鳴測定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＮＭＲを利用して天然有機化合物の生合
成経路を解明する際の一つの有効な方法は、二重標識
（ダブルラベル）法である。この方法のポイントは、13
Ｃ−13Ｃ結合を有するラベル体を用いて目的化合物を標
識（ラべリング）し、その13Ｃ−13Ｃスピン結合の観測
によって標識位置を決定することにあるが、場合によっ
ては、転位反応のため、13Ｃ−12Ｃ−13Ｃという標識位
置関係になることがある。その例としてスクアレンから
トリテルペンが生成する過程を図１に示す。
成経路を解明する際の一つの有効な方法は、二重標識
（ダブルラベル）法である。この方法のポイントは、13
Ｃ−13Ｃ結合を有するラベル体を用いて目的化合物を標
識（ラべリング）し、その13Ｃ−13Ｃスピン結合の観測
によって標識位置を決定することにあるが、場合によっ
ては、転位反応のため、13Ｃ−12Ｃ−13Ｃという標識位
置関係になることがある。その例としてスクアレンから
トリテルペンが生成する過程を図１に示す。
【０００３】この場合、13ＣＨ3 13ＣＯ2 Ｈを用いてラ
ベルすると、メチル基の１，２転位反応により、13ＣＨ
3 −12ＣＨ−13ＣＨ−という１，３の標識関係が部分的
に生ずる。
ベルすると、メチル基の１，２転位反応により、13ＣＨ
3 −12ＣＨ−13ＣＨ−という１，３の標識関係が部分的
に生ずる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】生合成経路を厳密に証
明するには、１，３位の炭素が同時に13Ｃでラベルされ
ていることを証明する必要がある。13Ｃ−13Ｃスピン結
合Ｊc-c(＝30〜60Hz）を観測する最も一般的な手法とし
てINADEQUATE法(Incredible Natural AbundanceDouble
Quantum Transfer Experiment 法）があるが、この方
法による13ＣＨ3 − 12ＣＨ−13ＣＨ−という標識関係の
証明は、13Ｃ−13Ｃスピン結合のスピン結合定数 2Ｊc-
c が通常数Hz程度と非常に小さくなるため特殊な例外を
除いては困難であった。しかも、この方法には、測定感
度が低く多数回の積算が必要なため、測定時間が非常に
長くなるという欠点もある。
明するには、１，３位の炭素が同時に13Ｃでラベルされ
ていることを証明する必要がある。13Ｃ−13Ｃスピン結
合Ｊc-c(＝30〜60Hz）を観測する最も一般的な手法とし
てINADEQUATE法(Incredible Natural AbundanceDouble
Quantum Transfer Experiment 法）があるが、この方
法による13ＣＨ3 − 12ＣＨ−13ＣＨ−という標識関係の
証明は、13Ｃ−13Ｃスピン結合のスピン結合定数 2Ｊc-
c が通常数Hz程度と非常に小さくなるため特殊な例外を
除いては困難であった。しかも、この方法には、測定感
度が低く多数回の積算が必要なため、測定時間が非常に
長くなるという欠点もある。
【０００５】本発明は、上述した諸点に鑑み、INADEQUA
TE法によらず13Ｃ−13Ｃスピン結合を観測できる核磁気
共鳴測定方法を提供することを目的とするものである。
TE法によらず13Ｃ−13Ｃスピン結合を観測できる核磁気
共鳴測定方法を提供することを目的とするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】この目的を達成するた
め、本発明の核磁気共鳴測定方法は、ＨＭＢＣ測定用パ
ルス列の最初の励起パルスをＴＡＮＧＯパルスに置換し
たパルス列を用いて測定することを特徴としている。
め、本発明の核磁気共鳴測定方法は、ＨＭＢＣ測定用パ
ルス列の最初の励起パルスをＴＡＮＧＯパルスに置換し
たパルス列を用いて測定することを特徴としている。
【０００７】
【発明の実施の形態】以下図面を参照して本発明の実施
の形態を詳説する。ＨＭＢＣ(HeteronuclearMultiple-B
ond Correlation) 法は 1Ｈ核観測異種核相関法の一種
である。この1Ｈ核観測異種核相関法は、従来の13Ｃ核
を観測する異種核相関法（ 1Ｈ−13ＣＣＯＳＹや 1Ｈ−
13ＣロングレンジＣＯＳＹ等）に比べて感度が著しく向
上するという特徴を持っている。図２は、13Ｃ核観測異
種核相関法（上）と 1Ｈ核観測異種核相関法（下）の違
いを説明した模式図である。13Ｃ核観測異種核相関法で
は、 1Ｈ核で展開した磁化を13Ｃ核に移し、13Ｃ核につ
いて観測を行うのに対し、 1Ｈ核観測異種核相関法で
は、 1Ｈ核の磁化を一旦13Ｃ核に移して展開させた後 1
Ｈ核へ戻して 1Ｈ核について観測を行うことが特徴であ
り、13Ｃ核観測異種核相関法に比べ最大で約８倍の感度
向上が得られる。
の形態を詳説する。ＨＭＢＣ(HeteronuclearMultiple-B
ond Correlation) 法は 1Ｈ核観測異種核相関法の一種
である。この1Ｈ核観測異種核相関法は、従来の13Ｃ核
を観測する異種核相関法（ 1Ｈ−13ＣＣＯＳＹや 1Ｈ−
13ＣロングレンジＣＯＳＹ等）に比べて感度が著しく向
上するという特徴を持っている。図２は、13Ｃ核観測異
種核相関法（上）と 1Ｈ核観測異種核相関法（下）の違
いを説明した模式図である。13Ｃ核観測異種核相関法で
は、 1Ｈ核で展開した磁化を13Ｃ核に移し、13Ｃ核につ
いて観測を行うのに対し、 1Ｈ核観測異種核相関法で
は、 1Ｈ核の磁化を一旦13Ｃ核に移して展開させた後 1
Ｈ核へ戻して 1Ｈ核について観測を行うことが特徴であ
り、13Ｃ核観測異種核相関法に比べ最大で約８倍の感度
向上が得られる。
【０００８】ＨＭＢＣ法は、その様な特徴を持っている
1Ｈ核観測異種核相関法の中に分類され、特に、 1Ｈの
ロングレンジＪスカラー結合を持っている13Ｃとの間の
化学シフト相関スペクトルを取得する手法である。この
方法で得られるＨＭＢＣスペクトルは、13Ｃ観測では、
例えば 1Ｈ−13ＣロングレンジＣＯＳＹスペクトルに相
当する。図３はＨＭＢＣ法の基本パルスシーケンスを示
しており、 1Ｈ核に対しては90°−180 °パルスを、13
Ｃ核に対しては90°−90°−90°パルスを夫々印加し、
観測は 1Ｈ核について検出時間ｔ2 にわたり行われる。
展開時間ｔ1 は13Ｃ核に対する第２の90°パルスと第３
の90°パルスの間に設定され、展開時間ｔ1 の半分の時
点で 1Ｈ核へ 180°パルスが加えられる。この 180°パ
ルスにより、磁化は、展開時間の前半を２量子遷移（Do
uble-Quantum Coherence＝ＤＱＣ）の状態で展開され、
後半は０量子遷移（Zero-Quantum Coherence＝ＺＱＣ）
の状態で展開されることになる。
1Ｈ核観測異種核相関法の中に分類され、特に、 1Ｈの
ロングレンジＪスカラー結合を持っている13Ｃとの間の
化学シフト相関スペクトルを取得する手法である。この
方法で得られるＨＭＢＣスペクトルは、13Ｃ観測では、
例えば 1Ｈ−13ＣロングレンジＣＯＳＹスペクトルに相
当する。図３はＨＭＢＣ法の基本パルスシーケンスを示
しており、 1Ｈ核に対しては90°−180 °パルスを、13
Ｃ核に対しては90°−90°−90°パルスを夫々印加し、
観測は 1Ｈ核について検出時間ｔ2 にわたり行われる。
展開時間ｔ1 は13Ｃ核に対する第２の90°パルスと第３
の90°パルスの間に設定され、展開時間ｔ1 の半分の時
点で 1Ｈ核へ 180°パルスが加えられる。この 180°パ
ルスにより、磁化は、展開時間の前半を２量子遷移（Do
uble-Quantum Coherence＝ＤＱＣ）の状態で展開され、
後半は０量子遷移（Zero-Quantum Coherence＝ＺＱＣ）
の状態で展開されることになる。
【０００９】測定は、展開時間ｔ1 を微小ステップで順
次変化させて所定回数繰り返し行われ、その結果得られ
た一連のＦＩＤ信号（自由誘導減衰信号）を、時間ｔ2
についてフーリエ変換した後、更に時間ｔ1 についてフ
ーリエ変換することにより、２次元ＮＭＲスペクトルを
得ることができる。
次変化させて所定回数繰り返し行われ、その結果得られ
た一連のＦＩＤ信号（自由誘導減衰信号）を、時間ｔ2
についてフーリエ変換した後、更に時間ｔ1 についてフ
ーリエ変換することにより、２次元ＮＭＲスペクトルを
得ることができる。
【００１０】上述した13Ｃ核に対する最初の90°パルス
は、低域Ｊフィルター(Low-Pass Jfilter) として機能
し、直接結合している 1Ｈ核と13Ｃ核の相関を消去する
（弱める）役割を果たしている。
は、低域Ｊフィルター(Low-Pass Jfilter) として機能
し、直接結合している 1Ｈ核と13Ｃ核の相関を消去する
（弱める）役割を果たしている。
【００１１】この様にロングレンジカップリングに関す
る情報を取得できるＨＭＢＣ法であるが、13Ｃ核に直接
結合した 1Ｈ核からのクロスピークを消去するために低
域Ｊフィルターを使用しているので、生合成実験で観測
すべきサテライトピークは、このローパスＪフィルター
で消去されてしまう。そこで、本発明者は、このフィル
ターを使用せずに（即ち、13Ｃ核に対する最初の90°パ
ルスを除去して低域Ｊフィルターの作用を無くして）、
生合成実験で観測すべきサテライトピークが消去されな
いような測定を行うことを検討した。しかしながら、Ｈ
ＭＢＣ法においてローパスＪフィルターの作用を取り除
いた場合、13Ｃ核に直接結合した 1Ｈ核からのクロスピ
ークに加え、従来型ＨＭＢＣによるクロスピークが混在
して観測されるため、スペクトルは非常に複雑になり、
解析が困難となる。
る情報を取得できるＨＭＢＣ法であるが、13Ｃ核に直接
結合した 1Ｈ核からのクロスピークを消去するために低
域Ｊフィルターを使用しているので、生合成実験で観測
すべきサテライトピークは、このローパスＪフィルター
で消去されてしまう。そこで、本発明者は、このフィル
ターを使用せずに（即ち、13Ｃ核に対する最初の90°パ
ルスを除去して低域Ｊフィルターの作用を無くして）、
生合成実験で観測すべきサテライトピークが消去されな
いような測定を行うことを検討した。しかしながら、Ｈ
ＭＢＣ法においてローパスＪフィルターの作用を取り除
いた場合、13Ｃ核に直接結合した 1Ｈ核からのクロスピ
ークに加え、従来型ＨＭＢＣによるクロスピークが混在
して観測されるため、スペクトルは非常に複雑になり、
解析が困難となる。
【００１２】図４はその様子を説明するためのＨＭＢＣ
スペクトルを示している。試料はポートミシン化合物
で、左側のスペクトルは図３の基本パルスシーケンスで
得られた従来型のＨＭＢＣスペクトル、右側のスペクト
ルは図３のパルスシーケンスから13Ｃ核に対する最初の
90°パルスを除去して測定したＨＭＢＣスペクトルで、
低域フィルタを外したことにより、右側のスペクトルの
ピークパターンが複雑になっていることが分かる。
スペクトルを示している。試料はポートミシン化合物
で、左側のスペクトルは図３の基本パルスシーケンスで
得られた従来型のＨＭＢＣスペクトル、右側のスペクト
ルは図３のパルスシーケンスから13Ｃ核に対する最初の
90°パルスを除去して測定したＨＭＢＣスペクトルで、
低域フィルタを外したことにより、右側のスペクトルの
ピークパターンが複雑になっていることが分かる。
【００１３】そこで本発明者は、低域Ｊフィルターの作
用を取り除くと共に、ＴＡＮＧＯ(Testing for Adjacen
t Nuclei with a Gyration Operator)パルスを用いるこ
とにより、従来型ＨＭＢＣによるクロスピークを消去し
13Ｃ核に直接結合した 1Ｈ核からのクロスピークのみを
観測できる核磁気共鳴測定方法を開発した。
用を取り除くと共に、ＴＡＮＧＯ(Testing for Adjacen
t Nuclei with a Gyration Operator)パルスを用いるこ
とにより、従来型ＨＭＢＣによるクロスピークを消去し
13Ｃ核に直接結合した 1Ｈ核からのクロスピークのみを
観測できる核磁気共鳴測定方法を開発した。
【００１４】図５（ａ）は、本発明による核磁気共鳴測
定方法の基本パルスシーケンスを示している。図３のＨ
ＭＢＣ法の基本パルスシーケンスと比較すると、低域Ｊ
フィルターとして機能する13核への最初の90°パルスが
除かれると共に、 1Ｈ核への最初の90°パルス（励起パ
ルス）がＴＡＮＧＯパルスとそれに続くスピンロックパ
ルスと置き換えられている。
定方法の基本パルスシーケンスを示している。図３のＨ
ＭＢＣ法の基本パルスシーケンスと比較すると、低域Ｊ
フィルターとして機能する13核への最初の90°パルスが
除かれると共に、 1Ｈ核への最初の90°パルス（励起パ
ルス）がＴＡＮＧＯパルスとそれに続くスピンロックパ
ルスと置き換えられている。
【００１５】ＴＡＮＧＯパルスは、Ｒ．ＦＲＥＥＭＡＮ
等によって最初に発表され(JOURNALOF MAGNETIC RESONA
NCE 58, 348-353(1984))、図５（ａ）に示されているよ
うに1Ｈ核への 135°−180 °−45パルスと、 1Ｈ核へ
の 180°パルスにタイミングを合わせた13Ｃ核への 180
°パルスから構成される。
等によって最初に発表され(JOURNALOF MAGNETIC RESONA
NCE 58, 348-353(1984))、図５（ａ）に示されているよ
うに1Ｈ核への 135°−180 °−45パルスと、 1Ｈ核へ
の 180°パルスにタイミングを合わせた13Ｃ核への 180
°パルスから構成される。
【００１６】図６にＴＡＮＧＯパルスのベクトルモデル
を示す。図６において、Ｘ軸方向から135 °パルスを印
加すると、Ｚ磁化はＹ軸方向に135 °回転する。スピン
展開時間（τ）の後、直接結合由来の速いスピン（Ｆ）
と遅いスピン（Ｓ）が円錐上のＸ軸方向に配向する。こ
の時、遠距離スピン結合に由来する磁化（Ｌ）は、その
地点に留まる。この段階で 180°パルスを水素核と炭素
核に同時に加えると、遠距離スピン結合由来の磁化
（Ｌ）は180 °反転する。また、速いスピン（Ｆ）と遅
いスピン（Ｓ）も同時に反転するが、スピン（Ｆ）とス
ピン（Ｓ）の入れ替えが起こる。更に、同一スピン展開
時間（τ）後には、速いスピン（Ｆ）と遅いスピン
（Ｓ）は円錐上の＋Ｙ軸方向に配向する。
を示す。図６において、Ｘ軸方向から135 °パルスを印
加すると、Ｚ磁化はＹ軸方向に135 °回転する。スピン
展開時間（τ）の後、直接結合由来の速いスピン（Ｆ）
と遅いスピン（Ｓ）が円錐上のＸ軸方向に配向する。こ
の時、遠距離スピン結合に由来する磁化（Ｌ）は、その
地点に留まる。この段階で 180°パルスを水素核と炭素
核に同時に加えると、遠距離スピン結合由来の磁化
（Ｌ）は180 °反転する。また、速いスピン（Ｆ）と遅
いスピン（Ｓ）も同時に反転するが、スピン（Ｆ）とス
ピン（Ｓ）の入れ替えが起こる。更に、同一スピン展開
時間（τ）後には、速いスピン（Ｆ）と遅いスピン
（Ｓ）は円錐上の＋Ｙ軸方向に配向する。
【００１７】一方、遠距離スピン結合由来の磁化（Ｌ）
は、−Ｙ軸方向に留まっている。この状態でＸ軸方向か
ら45°パルスを印加すると、遠距離スピン結合由来の磁
化はＺ軸方向に、直接結合由来の速いスピン（Ｆ）と遅
いスピン（Ｓ）はＹ軸方向に配向する。このＹ軸方向に
配向したスピン（Ｆ）とスピン（Ｓ）のみが、その後の
ＨＭＢＣ測定のシーケンスで二次元展開されて検出され
る。その際、遠距離スピン結合由来の磁化（Ｌ）はＺ軸
方向に配向しているため、観測されない。この遠距離ス
ピン結合由来の磁化の消去をより完全に行うため、Ｙ軸
方向にスピンロックパルスＳＬを印加し、Ｙ軸方向の磁
化の位相を揃えると同時にＺ軸磁化を消去する。
は、−Ｙ軸方向に留まっている。この状態でＸ軸方向か
ら45°パルスを印加すると、遠距離スピン結合由来の磁
化はＺ軸方向に、直接結合由来の速いスピン（Ｆ）と遅
いスピン（Ｓ）はＹ軸方向に配向する。このＹ軸方向に
配向したスピン（Ｆ）とスピン（Ｓ）のみが、その後の
ＨＭＢＣ測定のシーケンスで二次元展開されて検出され
る。その際、遠距離スピン結合由来の磁化（Ｌ）はＺ軸
方向に配向しているため、観測されない。この遠距離ス
ピン結合由来の磁化の消去をより完全に行うため、Ｙ軸
方向にスピンロックパルスＳＬを印加し、Ｙ軸方向の磁
化の位相を揃えると同時にＺ軸磁化を消去する。
【００１８】図５（ｂ）は、本発明による核磁気共鳴測
定方法の他のパルスシーケンスを示しており、図５
（ａ）のパルスシーケンスに比べＦＩＤ信号の検出期間
を遅らせると共に、ＦＩＤ信号検出期間の間13Ｃ核にデ
カップリング用高周波を照射するようにしている。
定方法の他のパルスシーケンスを示しており、図５
（ａ）のパルスシーケンスに比べＦＩＤ信号の検出期間
を遅らせると共に、ＦＩＤ信号検出期間の間13Ｃ核にデ
カップリング用高周波を照射するようにしている。
【００１９】図７（ａ）は、本発明による核磁気共鳴測
定方法の他のパルスシーケンスを示しており、図５
（ａ）のパルスシーケンスのＴＡＮＧＯパルスの前にＢ
ＩＲＤパルスを付け加えると共に、磁場勾配パルスＧ1
，Ｇ2 を加えている。
定方法の他のパルスシーケンスを示しており、図５
（ａ）のパルスシーケンスのＴＡＮＧＯパルスの前にＢ
ＩＲＤパルスを付け加えると共に、磁場勾配パルスＧ1
，Ｇ2 を加えている。
【００２０】図７（ｂ）は、本発明による核磁気共鳴測
定方法の他のパルスシーケンスを示しており、図５
（ｂ）のパルスシーケンスのＴＡＮＧＯパルスの前にＢ
ＩＲＤパルスを付け加えると共に、磁場勾配パルスＧ1
，Ｇ2 を加えている。
定方法の他のパルスシーケンスを示しており、図５
（ｂ）のパルスシーケンスのＴＡＮＧＯパルスの前にＢ
ＩＲＤパルスを付け加えると共に、磁場勾配パルスＧ1
，Ｇ2 を加えている。
【００２１】図８は、13Ｃの二重標識体でラベルされた
メナキノンをモデル化合物として測定した、（ａ）従来
型ＨＭＢＣで低域Ｊフィルタを取り除いた測定法により
得られた従来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図７（ａ）
のパルスシーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣス
ペクトル、（ｃ）図７（ｂ）のパルスシーケンスで得ら
れたＤecoupled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルであ
る。
メナキノンをモデル化合物として測定した、（ａ）従来
型ＨＭＢＣで低域Ｊフィルタを取り除いた測定法により
得られた従来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図７（ａ）
のパルスシーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣス
ペクトル、（ｃ）図７（ｂ）のパルスシーケンスで得ら
れたＤecoupled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルであ
る。
【００２２】従来型ＨＭＢＣスペクトルでは、Ｂ１，Ｃ
１のメチル基のサテライトプロトンからのＢ１−Ｂ２，
Ｃ１−Ｃ２のＨＭＢＣクロスピークが観測され、同時に
従来型ＨＭＢＣクロスピークも観測される。このスペク
トルでは、サテライトプロトンからのクロスピークと従
来型ＨＭＢＣクロスピークが混在しているため、スペク
トルは複雑となり、解析が困難となる。
１のメチル基のサテライトプロトンからのＢ１−Ｂ２，
Ｃ１−Ｃ２のＨＭＢＣクロスピークが観測され、同時に
従来型ＨＭＢＣクロスピークも観測される。このスペク
トルでは、サテライトプロトンからのクロスピークと従
来型ＨＭＢＣクロスピークが混在しているため、スペク
トルは複雑となり、解析が困難となる。
【００２３】ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルでは、従
来型ＨＭＢＣクロスピークが非常に低く抑えられ、サテ
ライトプロトンからのクロスピークＡ１−Ａ２，Ｂ１−
Ｂ２，Ｃ１−Ｃ２等が明確に観測され解析が可能となっ
ている。
来型ＨＭＢＣクロスピークが非常に低く抑えられ、サテ
ライトプロトンからのクロスピークＡ１−Ａ２，Ｂ１−
Ｂ２，Ｃ１−Ｃ２等が明確に観測され解析が可能となっ
ている。
【００２４】図９はＨＭＢＣクロスピークの模式図であ
る。図９において、（上）は12Ｃに直接結合した水素に
由来するＨＭＢＣクロスピーク、（下）は本発明のＴＡ
ＮＧＯ−ＨＭＢＣ法により得られる13Ｃに直接結合した
水素に由来するＨＭＢＣクロスピークを説明する模式図
である。12Ｃに直接結合した水素は、その水素と13Ｃの
化学シフトの位置Ｈ-2，Ｃ-4の交点に一つのクロスピー
クを与えるのに対し、13Ｃに直接結合した水素は、 1Ｊ
C-H 結合により大きく分裂し、そのサテライトピークの
位置に二つのピークを与える。この13Ｃに直接結合した
水素から三結合離れた炭素とのＨＭＢＣクロスピークを
観測することにより、転位反応により生じた13Ｃ−12Ｃ
−13Ｃの 1,3の関係を証明することができる。
る。図９において、（上）は12Ｃに直接結合した水素に
由来するＨＭＢＣクロスピーク、（下）は本発明のＴＡ
ＮＧＯ−ＨＭＢＣ法により得られる13Ｃに直接結合した
水素に由来するＨＭＢＣクロスピークを説明する模式図
である。12Ｃに直接結合した水素は、その水素と13Ｃの
化学シフトの位置Ｈ-2，Ｃ-4の交点に一つのクロスピー
クを与えるのに対し、13Ｃに直接結合した水素は、 1Ｊ
C-H 結合により大きく分裂し、そのサテライトピークの
位置に二つのピークを与える。この13Ｃに直接結合した
水素から三結合離れた炭素とのＨＭＢＣクロスピークを
観測することにより、転位反応により生じた13Ｃ−12Ｃ
−13Ｃの 1,3の関係を証明することができる。
【００２５】しかし、本発明によるＴＡＮＧＯ−ＨＭＢ
Ｃスペクトルの一つの問題点は、サテライトプロトンが
1ＪC-H によって大きく二本に分裂するため、クロスピ
ークも二本に分裂して観測されることである。そのた
め、クロスピークの位置は一次元プロトンＮＭＲスペク
トルに対応せず、スペクトルが複雑な場合、解析が困難
になる。この問題は、次のＤecoupled−ＴＡＮＧＯ−Ｈ
ＭＢＣスペクトルにより解決される。
Ｃスペクトルの一つの問題点は、サテライトプロトンが
1ＪC-H によって大きく二本に分裂するため、クロスピ
ークも二本に分裂して観測されることである。そのた
め、クロスピークの位置は一次元プロトンＮＭＲスペク
トルに対応せず、スペクトルが複雑な場合、解析が困難
になる。この問題は、次のＤecoupled−ＴＡＮＧＯ−Ｈ
ＭＢＣスペクトルにより解決される。
【００２６】Ｄecoupled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペク
トルではスペクトルは単純化され、二つに分裂したクロ
スピークは一つになり、クロスピークの解析は従来のＨ
ＭＢＣスペクトルと同様に一次元プロトンＮＭＲの化学
シフトに対応するため、容易となる。
トルではスペクトルは単純化され、二つに分裂したクロ
スピークは一つになり、クロスピークの解析は従来のＨ
ＭＢＣスペクトルと同様に一次元プロトンＮＭＲの化学
シフトに対応するため、容易となる。
【００２７】図１０は13Ｃの二重標識体でラベルされた
アゴノミン酸をモデル化合物として測定した、（ａ）従
来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図５（ａ）のパルスシ
ーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、
（ｃ）図５（ｂ）のパルスシーケンスで得られたＤecou
pled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルである。これら
のスペクトルを解析した結果証明されたアゴノミン酸の
生合成のスキームを図１１に示す。この化合物でメチル
基における 1,2転位反応を証明するのにＴＡＮＧＯ−Ｈ
ＭＢＣ法が使用された。
アゴノミン酸をモデル化合物として測定した、（ａ）従
来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図５（ａ）のパルスシ
ーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、
（ｃ）図５（ｂ）のパルスシーケンスで得られたＤecou
pled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルである。これら
のスペクトルを解析した結果証明されたアゴノミン酸の
生合成のスキームを図１１に示す。この化合物でメチル
基における 1,2転位反応を証明するのにＴＡＮＧＯ−Ｈ
ＭＢＣ法が使用された。
【００２８】なお、本発明によるＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣ
法にとって重要なパラメータは、適切なスピン展開時間
Δ2 の設定である。図１２は、ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣ法
において二重標識されたスピン系−12ＣＨY −13ＣＨM
（13ＣＨ3A）−12ＣＨX −のメチル基プロトンに注目し
て、（ａ）一結合、（ｂ）二結合の炭素とのスピン結合
によるクロスピーク強度とスピン展開時間の依存性につ
いてそれぞれプロットした図である。
法にとって重要なパラメータは、適切なスピン展開時間
Δ2 の設定である。図１２は、ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣ法
において二重標識されたスピン系−12ＣＨY −13ＣＨM
（13ＣＨ3A）−12ＣＨX −のメチル基プロトンに注目し
て、（ａ）一結合、（ｂ）二結合の炭素とのスピン結合
によるクロスピーク強度とスピン展開時間の依存性につ
いてそれぞれプロットした図である。
【００２９】どちらも、直接結合(direct bond) 由来の
Ｊ-modulation を受け、ピーク強度はサインカーブを描
いて変化することが分かる。この図から、例えばτ＝60
msecの時は一結合の炭素によるシグナルはＳ／Ｎ良く観
測できるが、二結合の炭素ではＳ／Ｎの低下のために観
測ができない。それに対してτ＝64msecでは、一結合の
炭素によるシグナルは低く押さえられて観測に適さず、
逆に二結合の炭素によるシグナルはＳ／Ｎが増加し観測
に適していることが分かる。この様に、ＴＡＮＧＯ−Ｈ
ＭＢＣ法では、スピン展開時間の設定如何によってはク
ロスピークの観測できない場合があるので、注意を払う
必要がある。
Ｊ-modulation を受け、ピーク強度はサインカーブを描
いて変化することが分かる。この図から、例えばτ＝60
msecの時は一結合の炭素によるシグナルはＳ／Ｎ良く観
測できるが、二結合の炭素ではＳ／Ｎの低下のために観
測ができない。それに対してτ＝64msecでは、一結合の
炭素によるシグナルは低く押さえられて観測に適さず、
逆に二結合の炭素によるシグナルはＳ／Ｎが増加し観測
に適していることが分かる。この様に、ＴＡＮＧＯ−Ｈ
ＭＢＣ法では、スピン展開時間の設定如何によってはク
ロスピークの観測できない場合があるので、注意を払う
必要がある。
【００３０】
【発明の効果】以上詳述したごとく、本発明によれば、
13Ｃに直接結合したサテライトプロトンからのＨＭＢＣ
シグナルを観測することができ、生合成研究における標
識位置の帰属に対して非常に有効である。特に、転位反
応に伴う１，３位の関係の証明には非常に威力を発揮す
る。
13Ｃに直接結合したサテライトプロトンからのＨＭＢＣ
シグナルを観測することができ、生合成研究における標
識位置の帰属に対して非常に有効である。特に、転位反
応に伴う１，３位の関係の証明には非常に威力を発揮す
る。
【図１】 スクアレンからトリテルペンが生成する過程
を示す図である。
を示す図である。
【図２】 13Ｃ核観測異種核相関法と 1Ｈ核観測異種核
相関法の違いを説明した模式図である。
相関法の違いを説明した模式図である。
【図３】 本発明の前提となるＨＭＢＣ法に用いられる
基本パルスシーケンスを示す図である。
基本パルスシーケンスを示す図である。
【図４】 従来型のＨＭＢＣスペクトルと低域フィルタ
を外したＨＭＢＣスペクトルの違いを示す図である。
を外したＨＭＢＣスペクトルの違いを示す図である。
【図５】 （ａ）は本発明による核磁気共鳴測定方法の
基本パルスシーケンスを示す図、（ｂ）は本発明による
核磁気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図で
ある。
基本パルスシーケンスを示す図、（ｂ）は本発明による
核磁気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図で
ある。
【図６】 ＴＡＮＧＯパルスのベクトルモデルを示す図
である。
である。
【図７】 （ａ），（ｂ）はそれぞれ本発明による核磁
気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図であ
る。
気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図であ
る。
【図８】 13Ｃの二重標識体でラベルされたメナキノン
をモデル化合物として測定した、（ａ）従来型ＨＭＢＣ
で低域Ｊフィルタを取り除いた測定法により得られた従
来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図６（ａ）のパルスシ
ーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、
（ｃ）図６（ｂ）のパルスシーケンスで得られたＤecou
pled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルを夫々示す図で
ある。図である。
をモデル化合物として測定した、（ａ）従来型ＨＭＢＣ
で低域Ｊフィルタを取り除いた測定法により得られた従
来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図６（ａ）のパルスシ
ーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、
（ｃ）図６（ｂ）のパルスシーケンスで得られたＤecou
pled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルを夫々示す図で
ある。図である。
【図９】 ＨＭＢＣクロスピークの模式図である。
【図１０】 13Ｃの二重標識体でラベルされたアゴノミ
ン酸をモデル化合物として測定した、（ａ）従来型ＨＭ
ＢＣスペクトル、（ｂ）ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクト
ル、（ｃ）Ｄecoupled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクト
ルである。
ン酸をモデル化合物として測定した、（ａ）従来型ＨＭ
ＢＣスペクトル、（ｂ）ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクト
ル、（ｃ）Ｄecoupled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクト
ルである。
【図１１】 アゴノミン酸の生合成のスキームを示す図
である。
である。
【図１２】 ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣ法において、（ａ）
一結合、（ｂ）二結合の炭素とのスピン結合によるクロ
スピーク強度とスピン展開時間の依存性についてそれぞ
れプロットした図である。
一結合、（ｂ）二結合の炭素とのスピン結合によるクロ
スピーク強度とスピン展開時間の依存性についてそれぞ
れプロットした図である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成８年７月１２日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】 スクアレンからトリテルペンが生成する過程
を示す図である。
を示す図である。
【図２】 13Ｃ核観測異種核相関法と 1Ｈ核観測異種核
相関法の違いを説明した模式図である。
相関法の違いを説明した模式図である。
【図３】 本発明の前提となるＨＭＢＣ法に用いられる
基本パルスシーケンスを示す図である。
基本パルスシーケンスを示す図である。
【図４】 従来型のＨＭＢＣスペクトルと低域フィルタ
を外したＨＭＢＣスペクトルの違いを示す図である。
を外したＨＭＢＣスペクトルの違いを示す図である。
【図５】 （ａ）は本発明による核磁気共鳴測定方法の
基本パルスシーケンスを示す図、（ｂ）は本発明による
核磁気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図で
ある。
基本パルスシーケンスを示す図、（ｂ）は本発明による
核磁気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図で
ある。
【図６】 ＴＡＮＧＯパルスのベクトルモデルを示す図
である。
である。
【図７】 （ａ），（ｂ）はそれぞれ本発明による核磁
気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図であ
る。
気共鳴測定方法の他のパルスシーケンスを示す図であ
る。
【図８】 13Ｃの二重標識体でラベルされたメナキノン
をモデル化合物として測定した、（ａ）従来型ＨＭＢＣ
で低域Ｊフィルタを取り除いた測定法により得られた従
来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図６（ａ）のパルスシ
ーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、
（ｃ）図６（ｂ）のパルスシーケンスで得られたＤecou
pled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルを夫々示す図で
ある。図である。
をモデル化合物として測定した、（ａ）従来型ＨＭＢＣ
で低域Ｊフィルタを取り除いた測定法により得られた従
来型ＨＭＢＣスペクトル、（ｂ）図６（ａ）のパルスシ
ーケンスで得られたＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、
（ｃ）図６（ｂ）のパルスシーケンスで得られたＤecou
pled−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルを夫々示す図で
ある。図である。
【図９】 ＨＭＢＣクロスピークの模式図である。
【図１０】 13Ｃの二重標識体でラベルされたアゴノミ
ン酸をモデル化合物として測定した、従来型ＨＭＢＣス
ペクトル、ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、Ｄecoupl
ed−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルを示す図である。
ン酸をモデル化合物として測定した、従来型ＨＭＢＣス
ペクトル、ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトル、Ｄecoupl
ed−ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣスペクトルを示す図である。
【図１１】 アゴノミン酸の生合成のスキームを示す図
である。
である。
【図１２】 ＴＡＮＧＯ−ＨＭＢＣ法において、（ａ）
一結合、（ｂ）二結合の炭素とのスピン結合によるクロ
スピーク強度とスピン展開時間の依存性についてそれぞ
れプロットした図である。
一結合、（ｂ）二結合の炭素とのスピン結合によるクロ
スピーク強度とスピン展開時間の依存性についてそれぞ
れプロットした図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 ＨＭＢＣ測定用パルス列の最初の励起パ
ルスをＴＡＮＧＯパルスに置換したパルス列を用いて測
定することを特徴とする核磁気共鳴測定方法。 - 【請求項２】 ＨＭＢＣ測定用パルス列の最初の励起パ
ルスをＴＡＮＧＯパルスとそれに続くスピンロックパル
スに置換したパルス列を用いて測定することを特徴とす
る請求項１記載の核磁気共鳴測定方法。 - 【請求項３】 請求項１又は請求項２に記載の核磁気共
鳴測定方法であって、置換したＴＡＮＧＯパルスに先立
ってＢＩＲＤパルスを加えることを特徴とする核磁気共
鳴測定方法。 - 【請求項４】 請求項１乃至請求項３のいずれかに記載
の核磁気共鳴測定方法であって、検出期間中にデカップ
リング用高周波を照射することを特徴とする核磁気共鳴
測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8106671A JPH09292452A (ja) | 1996-04-26 | 1996-04-26 | 核磁気共鳴測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8106671A JPH09292452A (ja) | 1996-04-26 | 1996-04-26 | 核磁気共鳴測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09292452A true JPH09292452A (ja) | 1997-11-11 |
Family
ID=14439545
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8106671A Withdrawn JPH09292452A (ja) | 1996-04-26 | 1996-04-26 | 核磁気共鳴測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09292452A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004508858A (ja) * | 2000-09-12 | 2004-03-25 | アメルシャム ヘルス アクスイェ セルスカプ | 磁気共鳴映像剤が分極された核スピンを用いる試料の磁気共鳴研究の方法 |
| CN106153660A (zh) * | 2015-04-27 | 2016-11-23 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 聚酯酰胺的鉴定方法 |
-
1996
- 1996-04-26 JP JP8106671A patent/JPH09292452A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004508858A (ja) * | 2000-09-12 | 2004-03-25 | アメルシャム ヘルス アクスイェ セルスカプ | 磁気共鳴映像剤が分極された核スピンを用いる試料の磁気共鳴研究の方法 |
| CN106153660A (zh) * | 2015-04-27 | 2016-11-23 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 聚酯酰胺的鉴定方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20030701 |