【発明の詳細な説明】
他の薬物学的活性物質と組み合わせたヒアルロン酸のエステル
誘導体からなるスポンジ状材料を含んでなる薬学的組成物発明の分野
本発明は、ヒアルロン酸の全部または部分エステル誘導体の一種またはそれら
の混合物からなり、他の薬物学的活性物質を含む溶液と共凍結乾燥された、スポ
ンジ状材料を含んでなる新規な薬学的組成物、その製造方法、並びに該薬学的組
成物の外科、特に顕微外科での使用に関する。説明
公知のように、ヒアルロン酸は、次に示すいくつかの機能を果たすことにより
組織の修復プロセスで、特に、初期肉芽組織形成段階で、主要な役割を果たす：
凝塊マトリックスを安定化させ凝塊マトリックスの分解（ｄｅｇｒａｄａｔｉｏ
ｎ）を制御し、炎症性の細胞、例えば多形核細胞および単核細胞の応答、並びに
間葉細胞、例えば線維芽細胞および内皮細胞の応答を助け、上皮細胞の連続的な
移動を方向づける。
公知のように、ヒアルロン酸溶液の投与は、褥瘡性潰瘍、創傷および熱傷の患
者の回復をはやめる。
各種の組織の修復プロセスの段階の間のヒアルロン酸（ＨＡ）の役割は、Ｗｅ
ｉｇｅｌ Ｐ．Ｈ．らによる『炎症性応答と創傷の治癒の間の初期の事象でのヒ
アルロン酸とフィブリンの役割のモデル（Ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒ
ｏｌｅ ｏｆ ｈｙａｌｕ
ｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｆｉｂｒｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｅａｒｌｙ ｅ
ｖｅｎｔｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎ
ｓｅ ａｎｄ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ）』、Ｊ．Ｔｈｅｏｒ．Ｂｉｏｌ．
，１１９，２１９，１９８６により理論的モデルを使用して説明された。
今なお解決が求められている主な問題は、ビヒクルが用いられるにしても、Ｈ
Ａが損傷部位から非常に急速に排除されるので、ＨＡの投与を繰り返すことが必
要とされることである。
ＨＡ溶液を直接適用すると、薬剤放出のコントロールが不可能である。このこ
とは、損傷による薬剤の保持の短い時間をもたらし、よって、治療領域の湿潤と
冷浸を起こす繰り返し投与が必要となる。さらに、完全には生物適合性ではない
不活性マトリックス（ｎｏｎ−ｐｅｒｆｅｃｔｒｌｙ ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂ
ｌｅ ｉｎｅｒｔ ｍａｔｒｉｃｅｓ）を用いると、局部的な炎症性反応および
瘢痕癒着（ｃｉｃａｒｔｒｉｘ ａｄｈｅｓｉｏｎ）が現れる。
すでに公知の組成物に比較して、本発明の目的物を形成する新規な薬学的組成
物が、同じ問題を生じることなく、かつより良好な結果を与える点で著しい技術
的改良を提供することが見いだされた。
本発明の組成物は、ヒアルロン酸の全部または部分エステル誘導体からなるス
ポンジ状材料からできていて、ここで、適合性の活性成分を含む溶液が吸収され
て、後に共凍結乾燥されている。
該新規な組成物は、グリセリンまたは適当な可塑剤の添加によりより大きな柔
軟性と軟らかさを持つようになる。
本発明のもう１つの実施態様では、細胞成長を有利とさせ得る有孔（ｐｉｅｒ
ｃｅｄ）生物適合性膜が、共凍結乾燥された薬学的組
成物の片側または両側に付着する。
本発明の他の目的は、該組成物の製造方法および該組成物の外科特に顕微外科
の実施での使用である。
クレームした組成物は、大きな技術的前進を与えるものであり、スポンジ状材
料の化学物理的な特性と、それに吸収された活性成分の存在とにより、再上皮形
成の機械的なガイドとして働き得、同時に、治療部位における制御された薬剤放
出を与え得る。したがって、高い局所的な薬剤濃度と、薬剤のゆっくりした放出
とが保証される。
吸収され共凍結乾燥した溶液中のヒアルロン酸の存在により、新規な組成物は
、１つの生成物中で、迅速で完全な組織修復プロセスを誘引するＨＡの能力とヒ
アルロン酸エステル誘導体の許容性、弾性および適用性の特性とを一緒にし、こ
れらは、組織修復プロセスについて優れた機械的なガイドである。
さらに、スポンジ状材料の生物適合性と、それに吸収されたヒアルロン酸の薬
物学的活性とは、新規な組成物が、さまざまな外科分野で、例えば、耳科学およ
び耳神経学の顕微外科、機能的で外傷後でありかつ内視鏡検査の鼻洞の顕微外科
、整形および再構成外科、並びに薬物学的活性物質の制御された放出システムの
ような非再吸収性の物質の使用をもくろむ他の外科的な実施で、使用するための
理想的なバイオ物質であることを示唆する。
新規な組成物は、治療部位での活性成分例えばヒアルロン酸の高い局所的濃度
の保持を可能とし、単一投与の大きな利点を提供し、これは、医師の関与、診療
室コントロール（ｄｉｓｐｅｎｓａｒｙ ｃｏｎｔｒｏｌ）および入院の数の減
少をもたらす。
新規な組成物は、最適弾性と生物適合性特性の固体マトリックスを保証する構
成を有し、これにより、通常の組織修復プロセスについての、特に鼓膜修復プロ
セスについての機械的ガイドとして働き得る。
クレームされた組成物へのグリセリンまたは他の適当な可塑剤の添加は、柔軟
で軟らかいスポンジ状の材料を与え、これが次のさらなる２つの利点を提供する
：
−取扱の容易さと治療部位への適用の容易さ（物質の軟らかさは、適用を痛みの
少ないものとする）、
−高度に増加した水和（スポンジ状材料は、３〜４秒でその初めの重量の約１０
倍の水を吸収する）。
本発明のもう１つの実施態様では、例えば線維芽細胞およびケラチノサイトの
ようなその表面での細胞成長を有利にし得る有孔の生物適合性膜が、損傷と接触
するようにした薬学的組成物の表面に適用される。
本発明の薬学的組成物は、ヒアルロン酸の全部または部分エステル誘導体、特
にＨＡエチルエステル（ＨＹＡＦＦ−７）およびＨＡベンジルエステル（ＨＹＡ
ＦＦ−１１）、単独またはそれらの混合物からなるスポンジ状材料からなり、こ
れは、ヒアルロン酸を含む溶液または他の薬物学的活性成分（例えば、成長因子
、殺菌剤、抗生物質、バクテリア戦闘化合物（ｂａｃｔｅｒｉａ−ｆｉｇｈｔｉ
ｎｇ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、ステロイドおよび非ステロイド抗炎症剤など）を吸
収させ、特に、Ｆｉｄｉａ Ｓ．ｐ．Ａの名前で出願された欧州特許出願ＥＰＡ
０１９７７１８およびＥＰＡ０２１６４５３に示してあるような薬物学的に活性
なヒアルロン酸誘導体を
吸収させ、これはその後、凍結乾燥される。
向上した弾性と軟らかさのある最終生成物を得る観点から、グリセリンまたは
適当な可塑剤を、最終凍結乾燥の前に添加してもよい。
最終生成物の特徴は、スポンジ状材料をつくろうとして使用したＨＡエステル
誘導体溶液と、吸収された溶液とに依存して変わり得る。
該特徴を表１にまとめた。
本発明のもう１つの実施態様では、スポンジ状材料の一方の表面に適用した有
孔膜が、生物的適合性であり、好ましくはＨＡベンジルエステルである天然、合
成または半合成由来の材料で、細胞例えば線維芽細胞およびケラチノサイトのそ
の表面上での成長を有利にする材料からなる。
特に、使用され得る膜は、Ｆｉｄｉａ Ｓ．ｐ．Ａの名前で１９９１年５月２
８日に出願の欧州特許出願ＥＰＡ９１１０８６５４．４に示されるような、１０
〜５００μの厚さであり、１０〜１０００μの明確で一定の大きさの規則的な一
連の孔が相互に５０〜１０００μの一定の間隔で開けられている。
スポンジ状材料の表面に適用した有孔膜を用いることにより、新規な組成物は
、その上記の利点を有孔膜の特異的作用と結びつける、すなわち、再上皮形成を
も有利にする。
本発明の生成物は、次のプロセスに基づき得られる。
１）可溶化
ヒアルロン酸の全部または部分エステル誘導体の一種かまたはそれらの混合物
からなる出発材料を適当な溶剤に完全に可溶化させて濃度２０〜５０ｍｇ／ｍｌ
、好ましくは３５ｍｇ／ｍｌとする。得られた溶液を４０μｍの孔のフィルター
に通してろ過する。
２）凝固
得られる溶液を適当な容器に流し、後に、材料のはっきりした凝固まで、相対
湿度６０〜１００％、好ましくは８５％の部屋に置く。
３）洗浄
得られた固体のパネルを適当な大きさの塊に切り、これらの塊を、濃度８０〜
１２０ｇ／ｌ、好ましくは１００ｇ／ｌのＮａＣｌ溶液に入れる。この溶液は周
期的に更新する。
４）凍結乾燥
凍結乾燥は、次のように行う：
４．１）塊を凍結乾燥器皿に載せる。
４．２）室温から始めて、皿温度の降下を−４５℃に設定する。温度降下速度は
、システムにより認められる最大である。
４．３）皿を凍結温度まで冷却し、その温度に３時間保持して塊が該温度まで冷
却されるようにする。
４．４）部屋内圧力を３ｘ１０-1〜２ｘ１０-1バールに設定し、加熱を開始する
。加熱温度は、−１２℃である：この温度は、４時間かけて徐々に到達されねば
ならず、この値に３５〜５５時間、好ましくは４８時間、すなわち完全な昇華に
必要な時間保つようにする。
４．５）次に温度上昇を２０℃に設定し、この温度に１２時間かけて達成するよ
うにし、この値に３時間保つ。
５）洗浄
得られるパネルを脱イオンした非発熱性の（ａｐｙｒｏｇｅｎｏｕｓ）水浴に
入れ、少なくとも１６時間洗浄する：この工程の間、浴は、２または４時間ごと
に周期的に更新する。
６）活性成分溶液による膨潤
０．１％から溶質の溶解の限度までの濃度で薬剤を含む溶液で塊が膨潤（吸収
）される。柔らかで柔軟なスポンジを得るように、グリセリンまたは適当な可塑
剤を５〜３０重量％、好ましくは２０重量％の量で溶液に加える。
７）凍結乾燥による乾燥
４）に記載のようにして追加の凍結乾燥サイクルを行う。
得られた生成物は、ガンマ線または同等なシステムにより滅菌してもよい。
次の例は、本発明の生成物の調製法を示す。これらの例は、説明
のためだけのものであり、本発明の範囲を限定するものとみなされるものではな
い。
例１それぞれ１０ｍｇのヒアルロン酸を含む直径１５ｍｍｘ１０ｍｍ、厚さ４ｍｍの ＨＹＡＦＦ−７卵形スポンジタンポンの調製法
２５℃に温度が安定化された、攪拌機を備えた反応器中で、４０ｇのＨＹＡＦ
Ｆ−７をＤＭＳＯ（１１４２ｍｌ）中に可溶化した。
生成物の可溶化が完了した時点で、すなわち、約８時間後、溶液を４０μｍの
孔を有した膜に通してろ過した。その溶液を３０ｘ４５ｃｍのステンレス鋼のト
レーにあけた。
２５℃の温度の制御下にあり、凝固溶剤として働く蒸気を飽和させた部屋にト
レーを置いた。凝固は、約６０時間持続した。
ゼラチン状ＨＹＡＦＦ−７ケーキが得られた。取扱を容易にするため、これを
１００ｘ１５０ｍｍの塊に切り、ＮａＣｌ濃度１００ｇ／ｌの塩水（２０００ｍ
ｌ）に３日間入れた。
塩水浴は、４時間毎に更新した。
塊は、予めセットした凍結乾燥器の皿に載せて凍結乾燥のサイクルにかけた。
凍結乾燥は次のようにして行った：
−室温から始めて、皿温度降下は、システムにより認められる最大降下速度で−
４５℃に設定した；
−皿を凍結温度まで冷却し、該温度に３時間保持して、塊が該温度に冷却される
ようにした；
−部屋内圧力は、３ｘ１０-1〜２ｘ１０-1バールに設定して加熱を開始した。加
熱温度は、−１２℃とした；該温度は、４時間かけて
ゆっくりと到達させねばならず、約４８時間該値に保って、昇華を完結させた；
−次に、温度上昇は２０℃に設定し、この温度に１２時間かけて到達させ、この
値に３時間保った。
このようにして得られたスポンジ状生成物は、蒸留した非発熱性の水（１００
０ｍｌ）で６回洗浄してＮａＣｌを除去した。それぞれの洗浄は約４時間継続し
た。
直径１５ｃｍｘ１０ｃｍで厚さ５ｍｍの塊に、打ち抜きを行い、１５ｍｍｘ１
０ｍｍの直径の約３００の卵形のタンポンを得た。
濃度２４ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸溶液（１５０ｍｌ）を適当な反応器中で調
製した。
それぞれのタンポンを絞って、ほとんどの洗浄水を除去した。次に、１０ｍｇ
のヒアルロン酸に相当する予め調製しておいた溶液４１２μｌを、投与システム
により一方のタンポンの側に散布した。
溶液の完全な吸収とスポンジ状構造内への広がりに要した時間は、３０分であ
った。
浸したタンポンを、最終生成物が得られるまで、前のサイクルのパラメーター
にしたがってさらに凍結乾燥させた。
例２それぞれ１０ｍｇのヒアルロン酸を含む直径１５ｍｍｘ１０ｍｍ、厚さ４ｍｍの ＨＹＡＦＦ−７卵形スポンジタンポンであり、４０μｍの大きさの孔を等間隔（ ８０μｍ）であけた接着性ＨＹＡＦＦ−１１フィルムを張りつけたスポンジタン ポンの調製法
例１に従って調製したいくつかのタンポンを４０μｍの大きさの
孔を等間隔（８０μｍ）であけたフィルムに次の手順により接着させた。
有孔フィルムシート（１２０ｘ１２０ｍｍ）を２０ｘ２５ｍｍの大きさに小片
に切った。一方、濃度２０ｍｇ／ｍｌのＨＹＡＦＦ−７のヘキサフルオロイソプ
ロパノール（ＨＦＩＰ）溶液を、適当な反応器内で調製した。可溶化が完了した
時、溶液を４０μｍの孔を有する膜を使用してろ過した。
ＨＦＩＰ中のＨＹＡＦＦ−７溶液の５つの１５μｌの液滴を、次に示すように
適当な投与システムにより一方のタンポンの側に散布した：端の点で４つの液滴
とし、中央の点で１つの液滴とした。
５つの液滴を散布したタンポンの側を、わずかの圧力をかけて有孔フィルムの
中央に接着させた。
１５分後、すなわち、低沸点溶剤が蒸発するのに要する時間の後、フィルムと
タンポンとの間の完全な接着が得られた。
接着が完了した後、タンポンを、温度３０℃、圧力１ｘ１０-2ミリバールのオ
ーブンに２４時間放置した。
例３それぞれ１０ｍｇのヒアルロン酸を含む直径１５ｍｍｘ１０ｍｍで厚さ４ｍｍの 卵形の柔軟で乾燥成形可能なＨＹＡＦＦ−７スポンジタンポンの調製法
１５０ｍｍｘ１００ｍｍの大きさで、厚さ５ｍｍのスポンジ状材料のＮｏ．６
の塊を、例１にしたがってつくり、第１回の凍結乾燥サイクルの後、ＮａＣｌに
よる材料の洗浄段階まで行った。蒸留した非発熱性の水中の濃度８％のグリセリ
ン１０００ｍｌを別に調製した。
洗浄が完了した時点で、６つの塊を、機械的なシステムにより絞り、吸収した
水のほとんどを除去してから、予め用意したグリセリン溶液の中に入れた。スポ
ンジ状塊を、この溶液に約６０分間入れたまま放置した。
プロセスは、例１に従って進行する。
グリセリン含量２０％が、化学分析により検出された。
例４１０ｍｇのヒアルロン酸を含む４０％ＨＡＦＦ−１１と６０％ＨＹＡＦＦ−７と からなるスポンジ状材料の調製
ＤＭＳＯ（１１４２ｍｌ）中のＨＹＡＦＦ−７（２４ｇ）とＨＹＡＦＦ−１１
（６ｇ）の溶液を、真空／圧力システムおよび攪拌機を備え、２５℃に温度を安
定化した反応器中での混合により得た。
可溶化が完了してから、溶液を４０μｍの孔を有する膜を用いてろ過した。
プロセスは例１にしたがって進行する。
本発明の組成物の効果を証明する観点から、いくつかの生体内テストを行った
。
ラットの鼓膜修復プロセスを有利にする新規な組成物の効果を評価するために
したテストの結果を以下に報告する。
テスト１
ラットの鼓膜修復プロセスと修復時間を有利にする新規な組成物の効果を評価
する観点から、テストは、実験モデルとして糖尿病ラットを用いて行った。
８カ月令で、２５０−３５０ｇの重さがあり、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ、
６０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）による処理により生じさ
せた６カ月の糖尿病にかかった８匹の成熟ラット（Ｔ、Ｄ、Ｃ、ＴＤ、ＴＣ、Ｔ
ＤＣ、Ｂ、ＧＡＤ）を、両側鼓膜穿孔させた。
左耳の鼓膜（ＴＭ）の上部後方四分円を、手術用顕微鏡の助けを借りて、皮針
形のメス（ｌａｎｃｅｏｌａｔｅ ｂｉｓｔｏｕｒｉ）の手段により両側穿孔し
た。
ＴＭは、例１にしたがって得、かつ生理的食塩水１滴を浸したタンポンで保護
した。タンポンは、外耳道への十字縫合によりＴＭに固定した。
右耳のＴＭは処理せずに、対照として用いた。十字縫合は、右耳の外耳道にも
行った。
タンポンは、６日間その場に放置した：その期間の間、２回の外部からの観察
を行い、保護と縫合とがきちんと所定の位置にあることを確かめた。すべての保
護を６日目に取り除いた。
顕微鏡によるＴＭコントロールを、６日目、８日目、１０日目、１２日目およ
び１５日目に行った。
左のＴＭの完全な修復が、ラットＤ、ＴＣおよびＢで６日目に観察された；８
日目にさらに２匹のラット、すなわちＣおよびＧＡＤに観察された；１０日目に
３匹の残りのラット、すなわちＴ、ＴＤおよびＴＤＣに観察された。常に１０日
目には右耳ＴＭの完全な修復が、ラットＤおよびＣで観察された；１２日目には
、ラットＴＣおよびＢに観察された；１５日目には、残りの４匹のラットＴ、Ｔ
Ｄ、ＴＤＣおよびＧＡＤに観察された。
得られた結果を表２にまとめた。
手短に述べると、１０日目に行ったコントロールは、新規な組成物により処理
したすべてのＴＭが修復され、２つの未処理のＴＭだけが同じ結果を示したこと
を示している。さらに、手術用顕微鏡による最後の観察では、新規な組成物によ
り修復されたＴＭが、艶と透明性の向上した特性、鼓膜退縮無し、異常変色無し
、形の異常無しを示した。結論として、新規な組成物は、自然修復により必要と
されるよりもより短い時間で向上したＴＭ修復を有利にするのに効果的であるこ
とを証明した。
実験のために選択した動物モデルすなわち６カ月の糖尿病になっていて８カ月
令のラットは、最も困難な実験条件であることを暗示
した：公知のように、実際は、該動物は、誘発させた代謝障害病状（ｄｙｓｍｅ
ｔａｂｏｌｉｃ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）の結果として顕著に遅くなった組織修復
プロセスを示す。該困難な実験条件は、長い糖尿病条件（６カ月）によりさらに
明確であった。
よって、得られた結果は、新規な組成物が、単一の投与で、損傷したＴＭとの
数日の接触でさえ、完全で非常に迅速な組織修復を引き起こすのに高度に効果的
である証拠を与える。我々により得られた実験結果は、新規な組成物が、外科、
特に、顕微外科に加えて鼓膜穿孔の治療でも有利に使用され得ることを示唆する
。
さらに、スポンジ状材料の生物適含性特性とスポンジ状材料に吸収されたヒア
ルロン酸の薬物学的活性とは、この新規な組成物を、さまざまな外科の分野、例
えば、耳科学と耳神経学の顕微外科、機能的で外傷後でかつ内視鏡検査の鼻洞顕
微外科、整形および再構成外科、並びに非再吸収性材料の使用を意図する他の外
科の実施、例えば組織修復プロセスを有利にするのに適する薬物学的に活性な物
質の制御された放出システム、で使用する理想的なバイオ物質とする。
さらに、スポンジ状材料は、例えば抗生物質、殺菌剤、バクテリア戦闘化合物
、成長因子、コルチコステロイド、非ステロイド抗炎症剤（例えば、Ｆｉｄｉａ
Ｓ．ｐ．Ａ．の名前で欧州特許出願ＥＰＡ０１９７７１８およびＥＰＡ０２１
６４５３に示されている）などの薬物学的活性成分を、単独でまたはＨＡもしく
はＨＡ塩もしくはＨＡエステルとの混合物として含む溶液を吸収できるので、外
部保護、空洞内および術後の保護に用いる広い範囲の高度に関心のもたれる生成
物を得ることができる。
本発明の組成物の可能な応用のいくつかの例は、以下に、限定することを意図
することなく、示す。
−治療の部位で抗生物質とＨＡとを放出し得る生成物が、例えば、感染した傷、
皮膚の潰瘍および外科手術の傷の保護、並びに外部オチチデス（ｏｔｉｔｉｄｅ
ｓ）、細菌性腟炎などの治療に使用され得る。
−ＨＡと殺菌剤の組み合わさった放出が、通常、皮膚の真菌症の治療、特に、外
部聴覚管真菌症の治療に大いに好都合であり、適切な特別な局所治療が可能であ
る。
−ＨＡとコルチコステロイドとの組み合わせた放出は、湿疹皮膚炎の治療と、コ
ルチコステロイドによる局所的治療に有利に影響されるすべての皮膚の病理の治
療とに大いに好都合である。特定の応用は、外部聴覚管の湿疹皮膚炎に関する。
−ＨＡと成長因子との組み合わせた放出は、細胞成長と、浅在もしくは深在の組
織再構成とが有利にされかつ高められるべきときは常に、整形外科と再構成外科
の実施に用途がある。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION A pharmaceutical composition comprising a sponge-like material consisting of an ester derivative of hyaluronic acid in combination with other pharmacologically active substances. FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to full or partial ester derivatives of hyaluronic acid. , A pharmaceutical composition comprising a sponge-like material, which is co-lyophilized with a solution containing another pharmacologically active substance, a process for producing the same, and the pharmaceutical composition. In surgery, especially in microsurgery. Description As is known, hyaluronic acid plays a major role in the process of tissue repair by performing several functions, particularly in the early granulation tissue formation stage: Stabilizes the clot matrix Controls the degradation of the bulk matrix, assists in the response of inflammatory cells, such as polymorphonuclear cells and mononuclear cells, and the response of mesenchymal cells, such as fibroblasts and endothelial cells, and continuous epithelial cells. Direct movement. As is known, the administration of hyaluronic acid solutions stops the recovery of patients with decubitus ulcers, wounds and burns. The role of hyaluronic acid (HA) during various stages of the tissue repair process has been described by Weigel P. et al. H. Et al., "A model for the ole of hyaluronic acid and fibrin in the early elite vents during at the inferior atmosphere of early events between inflammatory response and wound healing." wound healing), J. Theor. Biol. , 119, 219, 1986 using a theoretical model. The main problem that still needs to be solved is that HA, even if a vehicle is used, is cleared very rapidly from the site of injury, necessitating repeated administration of HA. . Direct application of HA solution does not allow for controlled drug release. This results in short retention of the drug due to injury, thus necessitating repeated dosing that causes wetting and cold soaking of the treatment area. Furthermore, with non-perfectly biocompatible inert matrices, local inflammatory reactions and cicatrix adhesions appear. Compared to already known compositions, the novel pharmaceutical composition forming the object of the invention provides a significant technical improvement in that it does not cause the same problems and gives better results. Was found. The compositions of the present invention are made of a sponge-like material consisting of all or partial ester derivatives of hyaluronic acid, in which a solution containing compatible active ingredients is absorbed and subsequently co-lyophilized. The new composition becomes more flexible and soft by the addition of glycerin or a suitable plasticizer. In another embodiment of the invention, a pierced biocompatible membrane that can favor cell growth is attached to one or both sides of the co-lyophilized pharmaceutical composition. Another object of the invention is a process for the preparation of the composition and its use in the practice of surgery, in particular microsurgery. The claimed composition represents a major technological advance, which, due to the chemo-physical properties of the sponge-like material and the presence of active ingredients absorbed therein, can serve as a mechanical guide for re-epithelialisation, At the same time, it may provide controlled drug release at the treatment site. Thus, a high local drug concentration and a slow release of drug are guaranteed. Due to the presence of hyaluronic acid in the absorbed and co-lyophilized solution, the novel composition has the ability of HA to elicit a rapid and complete tissue repair process and the tolerance of hyaluronic acid ester derivatives in one product. Combined with their elasticity and applicability properties, these are excellent mechanical guides for the tissue repair process. Furthermore, the biocompatibility of the sponge-like material and the pharmacological activity of hyaluronic acid absorbed therein make it possible for the novel composition to be used in various surgical fields, for example in microsurgery, functioning of otology and otoneurology. And post-traumatic and endoscopic nasal sinus microsurgery, orthopedic and reconstructive surgery, and envisioning the use of non-resorbable substances such as controlled release systems of pharmacologically active substances Surgical practice suggests that it is an ideal biosubstance for use. The novel composition allows the retention of high local concentrations of active ingredients, such as hyaluronic acid, at the treatment site, offering the great advantage of a single administration, which involves the involvement of the physician, the dispensary control. And results in a reduction in the number of hospitalizations. The novel composition has a composition that ensures a solid matrix of optimal elasticity and biocompatibility properties, which can serve as a mechanical guide for normal tissue repair processes, especially for eardrum repair processes. Addition of glycerin or other suitable plasticizer to the claimed composition provides a soft, soft sponge-like material which offers two additional advantages: -Ease of handling and application to the treatment site. Ease (the softness of the material makes the application less painful), highly increased hydration (the spongy material absorbs about 10 times its original weight in 3-4 seconds). To). In another embodiment of the invention, a pharmaceutical composition is provided in which a porous biocompatible membrane, such as fibroblasts and keratinocytes, which may favor cell growth on its surface, is contacted with the lesion. Applied to the surface. The pharmaceutical composition of the present invention comprises a sponge-like material consisting of all or partial ester derivatives of hyaluronic acid, in particular HA ethyl ester (HYAFF-7) and HA benzyl ester (HYA FF-11), alone or in a mixture thereof. , Which contains solutions containing hyaluronic acid or other pharmacologically active ingredients such as growth factors, fungicides, antibiotics, bacterial-compound compounds, steroids and non-steroidal anti-inflammatory agents. Absorption, especially Fidia S. p. Absorb a pharmacologically active hyaluronic acid derivative as shown in European patent applications EPA 0197718 and EPA 0216453, filed under the name A, which is then lyophilized. Glycerin or a suitable plasticizer may be added prior to the final lyophilization in view of obtaining a final product with improved elasticity and softness. The characteristics of the final product may vary depending on the HA ester derivative solution used to make the sponge-like material and the absorbed solution. The characteristics are summarized in Table 1. In another embodiment of the invention, the porous membrane applied to one surface of the sponge-like material is a biocompatible, preferably HA benzyl ester, material of natural, synthetic or semi-synthetic origin, It consists of cells, such as fibroblasts and materials that favor the growth of keratinocytes on their surface. In particular, the membranes that can be used are those described by Fidia S. p. A regular series of 10-500μ thick and 10-1000μ of clear and constant size, as shown in European patent application EPA 91108654.4, filed May 28, 1991 under the name A. The holes are formed at regular intervals of 50 to 1000 μ. By using a porous membrane applied to the surface of the sponge-like material, the novel composition combines its above-mentioned advantages with the specific action of the porous membrane, ie also favors re-epithelialisation. The product of the invention is obtained according to the following process. 1) Solubilization The starting material consisting of one or a mixture of all or partial ester derivatives of hyaluronic acid is completely solubilized in a suitable solvent to a concentration of 20 to 50 mg / ml, preferably 35 mg / ml. The solution obtained is filtered through a filter with 40 μm pores. 2) Coagulation The resulting solution is poured into a suitable container and later placed in a room with a relative humidity of 60-100%, preferably 85%, until a clear solidification of the material. 3) Washing The resulting solid panel is cut into chunks of suitable size and these chunks are placed in a NaCl solution with a concentration of 80-120 g / l, preferably 100 g / l. This solution is updated periodically. 4) Freeze-drying Freeze-drying is carried out as follows: 4.1) Place the mass in a freeze-dryer dish. 4.2) Starting from room temperature, set the pan temperature drop to -45 ° C. The rate of temperature drop is the maximum allowed by the system. 4.3) Cool the dishes to the freezing temperature and hold at that temperature for 3 hours to allow the mass to cool to that temperature. 4.4) Set the room pressure to 3x10 -1 to 2x10 -1 bar and start heating. The heating temperature is −12 ° C .: this temperature must be gradually reached over 4 hours and is kept at this value for 35 to 55 hours, preferably 48 hours, ie the time required for complete sublimation. To do. 4.5) The temperature rise is then set to 20 ° C. and this temperature is achieved over 12 hours and kept at this value for 3 hours. 5) Washing The resulting panels are placed in a deionized apyrogenic water bath and washed for at least 16 hours: during this step, the bath is refreshed every 2 or 4 hours. 6) Swelling with active ingredient solution The mass is swollen (absorbed) with the solution containing the drug at a concentration from 0.1% to the limit of dissolution of the solute. Glycerin or a suitable plasticizer is added to the solution in an amount of 5 to 30% by weight, preferably 20% by weight, so as to obtain a soft and flexible sponge. 7) Drying by freeze-drying Perform an additional freeze-drying cycle as described in 4). The resulting product may be sterilized by gamma irradiation or an equivalent system. The following example illustrates how to prepare the products of this invention. These examples are for illustration only and are not to be considered as limiting the scope of the invention. Example 1 Preparation of HYAFF-7 egg-shaped sponge tampon 15 mm x 10 mm and 4 mm thick, each containing 10 mg hyaluronic acid In a reactor equipped with a stirrer, the temperature was stabilized at 25 ° C, 40 g of HYAF F- 7 was solubilized in DMSO (1142 ml). When the solubilization of the product was complete, ie after about 8 hours, the solution was filtered through a membrane with 40 μm pores. The solution was poured into a 30x45 cm stainless steel tray. The tray was placed in a room saturated with steam, which was under the control of a temperature of 25 ° C. and served as a coagulating solvent. Clotting lasted about 60 hours. A gelatinous HYAFF-7 cake was obtained. For ease of handling, it was cut into 100 × 150 mm chunks and placed in brine (2000 ml) with a NaCl concentration of 100 g / l for 3 days. The salt water bath was updated every 4 hours. The lumps were placed in a preset lyophilizer dish and cycled through lyophilization. Freeze-drying was carried out as follows: -starting at room temperature, the dish temperature drop was set at -45 ° C with the maximum rate of decline allowed by the system; -cooling the dish to freezing temperature and at that temperature for 3 hours A hold was made to allow the mass to cool to this temperature; -in-room pressure was set to 3x10 -1 to 2x10 -1 bar to start heating. The heating temperature was -12 ° C; the temperature had to be reached slowly over 4 hours and was kept at that value for about 48 hours to complete the sublimation; -then the temperature rise was 20 ° C. The temperature was reached for 12 hours and kept at this value for 3 hours. The spongy product thus obtained was washed 6 times with distilled non-pyrogenic water (1000 ml) to remove NaCl. Each wash lasted about 4 hours. A lump having a diameter of 15 cm × 10 cm and a thickness of 5 mm was punched to obtain about 300 egg-shaped tampon having a diameter of 15 mm × 10 mm. A hyaluronic acid solution with a concentration of 24 mg / ml (150 ml) was prepared in a suitable reactor. Each tampon was squeezed to remove most of the wash water. Next, 412 μl of a pre-prepared solution corresponding to 10 mg hyaluronic acid was applied to one tampon side by the dosing system. The time required for complete absorption of the solution and spreading into the sponge-like structure was 30 minutes. The soaked tampon was further lyophilized according to the parameters of the previous cycle until the final product was obtained. Example 2 A HYAFF-7 egg-shaped sponge tampon having a diameter of 15 mm × 10 mm and a thickness of 4 mm, each containing 10 mg of hyaluronic acid , and an adhesive HYAFF-11 film having 40 μm-sized holes formed at equal intervals ( 80 μm) was attached. the pore size of 40μm to several tampons prepared was bonded to the film spaced at regular intervals (80 [mu] m) by the following procedure according to the preparation method example 1 of the sponge Tan Pont. A perforated film sheet (120 x 120 mm) was cut into small pieces of size 20 x 25 mm. On the other hand, a solution of HYAFF-7 in hexafluoroisopropanol (HFIP) having a concentration of 20 mg / ml was prepared in an appropriate reactor. When the solubilization was complete, the solution was filtered using a membrane with 40 μm pores. Five 15 μl drops of HYAFF-7 solution in HFIP were sprayed on one tampon side by a suitable dosing system as follows: 4 drops at the end points and 1 at the center point. One drop. The side of the tampon with the 5 droplets applied was adhered to the center of the apertured film with slight pressure. After 15 minutes, ie after the time required for the low boiling solvent to evaporate, complete adhesion between the film and the tampon was obtained. After the bonding was completed, the tampon was left in an oven at a temperature of 30 ° C. and a pressure of 1 × 10 -2 mbar for 24 hours. Example 3 Preparation of an egg-shaped flexible and dry-moldable HYAFF-7 sponge tampon having a diameter of 15 mm × 10 mm and a thickness of 4 mm each containing 10 mg of hyaluronic acid . A lump of 6 was made according to Example 1 and carried out after the first freeze-drying cycle up to the step of washing the material with NaCl. 1000 ml of 8% strength glycerol in distilled nonpyrogenic water was prepared separately. When the wash was completed, the 6 lumps were squeezed by a mechanical system to remove most of the absorbed water and then placed in a pre-prepared glycerin solution. The spongy mass was left in this solution for about 60 minutes. The process proceeds according to example 1. A glycerin content of 20% was detected by chemical analysis. Example 4 Preparation of a sponge-like material consisting of 40% HAFF-11 and 60% HYAFF-7 containing 10 mg hyaluronic acid A solution of HYAFF-7 (24 g) and HYAFF-11 (6 g) in DMSO (1142 ml) was added, Obtained by mixing in a reactor temperature-stabilized to 25 ° C., equipped with vacuum / pressure system and stirrer. After solubilization was completed, the solution was filtered using a membrane with 40 μm pores. The process proceeds according to Example 1. Several in-vivo tests were performed in order to prove the efficacy of the composition of the present invention. The results of tests carried out to evaluate the effect of the novel composition on favoring the eardrum repair process in rats are reported below. Test 1 In order to evaluate the effect of the novel composition in favor of the eardrum repair process and repair time in rats, tests were performed using diabetic rats as an experimental model. At the age of 8 months, eight adult rats (T, D, C, weighing 250-350 g, 6 months of diabetes produced by treatment with streptozotocin (STZ, 60 mg / kg, ip) (T, D, C, TD, TC, TDC, B, GAD) were bilateral tympanic perforated. The upper posterior quadrant of the eardrum (TM) of the left ear was bilaterally perforated by means of a lanceolate bistomy with the aid of a surgical microscope. TM was obtained according to Example 1 and protected with a tampon soaked with 1 drop of saline. The tampon was fixed to the TM with a cross suture to the ear canal. The right ear TM was untreated and used as a control. Crucifixion was also performed on the external auditory meatus of the right ear. The tampon was left in place for 6 days: during that period, two external observations were made to ensure that the protective and sutures were in place. All protection was removed on day 6. Microscopic TM control was performed on the 6th, 8th, 10th, 12th and 15th days. Complete repair of the left TM was observed in rats D, TC and B on day 6; on day 8 an additional 2 rats, ie on C and GAD; on day 10 3 It was observed in the rest of the rats, namely T, TD and TDC. Complete repair of the right ear TM was always observed in rats D and C on day 10; on day 12 in rats TC and B; on day 15 the remaining 4 Observed in rat T, T D, TDC and GAD. The results obtained are summarized in Table 2. Briefly, the controls performed on day 10 show that all TM treated with the novel composition were repaired and only two untreated TMs showed the same results. In addition, in the final observation under a surgical microscope, the TM restored with the novel composition showed improved luster and transparency properties, no eardrum retraction, no abnormal discoloration, no abnormal shape. In conclusion, the new composition proved to be effective in favoring improved TM repair in a shorter time than required by natural repair. The animal model chosen for the experiment, namely the 6 month old diabetic and 8 month old rat, implied to be the most difficult experimental condition: as is known, in fact, the animals were induced. Figure 7 shows a significantly slower tissue repair process as a result of dysmetabolic pathology. The difficult experimental conditions were further defined by the long diabetic condition (6 months). Thus, the results obtained show that the novel composition is highly effective at causing a complete and very rapid tissue repair, even with a single administration, even a few days of contact with damaged TM. Give proof. The experimental results obtained by us suggest that the novel composition may be advantageously used in surgery, in particular in microsurgery as well as in the treatment of eardrum perforation. Furthermore, the biocompatible properties of the sponge-like material and the pharmacological activity of hyaluronic acid absorbed in the sponge-like material make this novel composition useful in various fields of surgery, such as otology and otoneurology. Of microsurgical, functional, post-traumatic and endoscopic nasal sinus microsurgery, orthopedic and reconstructive surgery, and other surgical practices intended to use non-resorbable materials, such as tissue repair processes A controlled release system for pharmacologically active substances, suitable for use as an ideal biosubstance. Furthermore, sponge-like materials are for example antibiotics, bactericides, bacterial fighting compounds, growth factors, corticosteroids, non-steroidal anti-inflammatory agents (eg European patent applications EPA 0197718 and EPA 021 6453 in the name of Fidia SpA). A wide range of uses for external protection, intracavity and post-operative protection, as it is possible to absorb solutions containing pharmacologically active ingredients such as those described above) either alone or as a mixture with HA or HA salts or HA esters. Highly interesting products of can be obtained. Some examples of possible applications of the compositions of the invention are given below, without being intended to be limiting. -Products capable of releasing antibiotics and HA at the site of treatment are for example used in the protection of infected wounds, cutaneous ulcers and surgical wounds, and in the treatment of external otitides, bacterial vaginosis and the like. Can be used. The combined release of HA and bactericide is usually very convenient for the treatment of cutaneous mycoses, in particular of external auditory tube mycoses, and suitable special topical treatments are possible. The combined release of HA and corticosteroids is of great advantage for the treatment of eczema dermatitis and for the treatment of all skin pathologies that are favorably influenced by topical treatment with corticosteroids. A particular application relates to eczema dermatitis of the external auditory canal. -The combined release of HA and growth factors has application in performing orthopedic and reconstructive surgery whenever cell growth and superficial or deep tissue remodeling is to be favored and enhanced. .
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