JPH08505146A - レトロウイルス阻害剤としてのクマリン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、抗ウイルス活性のある、ある種のイノフィルム、カラノライドならびに他の関連クマリン誘導体、該化合物の合成、および抗ウイルス治療のごとき臨床への適用におけるかかる化合物の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 レトロウイルス阻害剤としてのクマリン誘導体 発明の分野 本発明は、レトロウイルス感染を阻害する化合物に関する。さらに本発明は、 該化合物の合成および抗ウイルス治療のごとき臨床的適用におけるかかる化合物 の使用に関する。より詳細には、本発明は、抗ウイルス活性のある、ある種のイ ノフィルム（inophyllum）、カラノライド（calanolide）および他のクマリン誘 導体に関する。 発明の背景 ヒト・免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）であるレトロウイルスは、一般的には、エ イズ（ＡＩＤＳ）の発生要因であると考えられている。すべてのレトロウイルス と同様に、典型的なレトロウイルス配列は、実際にはプロセッシング反応により 複数の蛋白を生じる３つの遺伝子、ｇａｇ−ｐｏｌ−ｅｎｖをコードしている。 ｇａｇ遺伝子は、ウイルス粒子の核蛋白のコアの蛋白成分を生じる。ｅｎｖ遺伝 子は、宿主細胞の細胞質膜から成分を隔絶するウイルス外套の成分をコードして いる。ｐｏｌ遺伝子は、逆転写酵素（ＲＴ）をコードしている。レトロウイルス は、その遺伝情報をＲＮＡとしてコードしているので、そのウイルスＲＮＡはＤ ＮＡ複写物へと逆転写され、ついで、宿主細胞のゲノム中に組み込まれなければ ならない。哺乳動物細胞はＲＴを必要としないので、この酵素は、抗ウイルス化 合物の検索における魅力的なターゲットである。 ＡＺＴおよびｄｄＩのごとき現在のエイズ治療薬は、ＲＴを阻害するヌクレオ シドアナログである。ＡＺＴおよび関連化合物は有用であるが、少なくとも２つ のことによりＡｚｔおよび関連化合物の有用性が限定されている。その１つは、 これらのヌクレオシドが連続して使用された場合、生物学的抵抗性がしばしば生 じることである。もう１つは、毒性のある副作用により、長期にわたる使用が困 難となりうることである（リッチマン（Richmen）ら，ニュー・イングランド・ ジャーナル・オブ・メディシン（N．Engl．J．Med．）第３１７巻：１９２〜１ ９７頁（１９８７年））。結果として、ＲＴに対する非ヌクレオシド阻害剤は、 例えば、テトラヒドロ−イミダゾ［４，５，１−ｊｋ］［１，４］−ベンゾジア ゼピン−２−（１Ｈ）−オンおよび−チオン（通常、ＴＩＢＯと呼ばれる）であ ると同定されているが、やはりＴＩＢＯ化合物に対するＲＴの耐性が生じる可能 性がある。 いくつかの天然産物および生物が、広範囲の生物学的活性、例えば、抗ウイル ス、抗腫瘍および抗真菌特性を有する化学分子の有力な源であることが見いださ れている。カロフィルム（Calophyllum）属のいくつかの熱帯性植物由来の天然 産物の一群であるカラノライド類は、フロログルシノールコア（phloroglucinol core）の周りに組み立てられたクマリン、クロマン、およびクロメン環システム により特徴づけられている（ポロンスキー，ジェイ（Polonski，J．），ビュレ ・ソサ・キミ・フラ（Bull．Soc．Chim．Fr．）９１４頁（１９５６年）；ポロ ンスキー，ジェイ，ビュレ・ソサ・キミ・フラ９２９頁（１９５８年）；スタウ ト，ジー・エイチ（Stout，G．H．）ら,ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミ ストリー（J．Org．Chem．）第３３巻：４１９１頁（１９６８年）：グナセケラ ，エス・ピー（Gunasekera，S．P．）ら,ジャーナル・ケミ・ソサ・パーキンＩ （J．Chem．Soc．Perkin I）；ダールマランテ，エイチ・アール・ダブリュウ（ Dahrmarante，H．R．W．）ら，フィトケミストリー（Phytochemistry）第２４巻 ：１５５３頁（１９８４年）；カワズ，ケイ（Kawazu，K．）ら，ビュレ・イン スティ・ケミ・リサ・キョート・ユニバ（Bull.Inst.Chem.Res.Kyoto Univ.）第 ５０巻：１６０頁（１９７２年））。カラノライドＡ（２０）は、最近、ヒト・ 免疫不全ウイルス−Ｉの逆転写酵素（ＨＩＶ−Ｉ ＲＴ）に対する有効な阻害剤 であると同定された（カシュマン，ワイ（Kashman，Y．）ら、ジャーナル・オブ ・メディシナル・ケミストリー（J．Med．Chem．）第３５巻：２７３５頁（１９ ９２年））。ＴＩＢＯおよびネビラピンのごとき他の非ヌクレオシドＨＩＶ−Ｉ ＲＴ阻害剤に関するのと同 様に、カラノライド耐性ＲＴ変種が見いだされている（ボイヤー，ピー・エル （Boyer，P．L．）ら,ジャーナル・オブ・ウイロロジー（J．Virol．）第６７巻 ：２４１２頁（１９９３年））。しかしながら、耐性を付与するのに必要とされ るＲＴにおけるアミノ酸変化の独特のパターンにおいて、カラノライド類は他の 非ヌクレオシドとは異なっており、このことは、これらの化合物に対するＲＴ結 合部位が重なり合っているが同一でないことを示している（コールシュテット， エル・エイ（Kohlstaedt，L．A．）ら，サイエンス（Science）第２５６巻：１ ７８３頁（１９９２年））。それゆえ、カラノライドアナログおよびそのＲＴ結 合部位に関するさらなる研究は、ウイルスの耐性を誘導しにくい薬剤または薬剤 の組み合わせを同定することにおいて助けとなる。よって、おそらくは逆転写酵 素を阻害することにより選択的にレトロウイルス複製を阻害する化合物を同定し 製造することが本発明の目的である。 発明の概要 １の態様において、本発明は、構造式： ［Ｒ₁はＨ、アシル、ＣＯＣＨＲ₅ＮＲ₆Ｒ₇、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）₂またはＳ（Ｏ） （ＯＨ）₂であり；ここに、Ｒ₅はＨまたはいずれかの天然アミノ酸の側鎖であり ；Ｒ₆およびＲ₇は、ＨおよびＣ_1〜6アルキルからなる群より独立して選択され； Ｒ₆とＲ₇は一緒になって、該窒素を含む５〜７員の飽和複素環を形成することが でき； Ｒ₂はＨ、ヒドロキシル、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ（Ｃ_{1〜 6} アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル−アミノ− Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、シクロヘキシ ル、アリールまたは複素環であり、ここに、アリールまたは複素環は、それぞれ 、未置換であってもよく、あるいは１個またはそれ以上のＣ_1〜6アルキル、Ｃ_{1 〜6} アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ_1〜4アルキル、アミノ、Ｃ_1〜6アルキルアミノ 、ジ（Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル −アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、ヒ ドロキシル、ニトロ、アジドまたはハロゲンで置換されていてもよく； Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₈およびＲ₉は、Ｈ、メチルおよびエチルからなる群より独立して 選択される。ただし、Ｒ₂がｎ−プロピルであってＲ₁がＨである場合には、 Ｒ₈およびＲ₉の両方ともがメチルということはありえず；Ｒ₂がフェニルであっ てＲ₁がＨである場合には、Ｒ₈とＲ₉は、分子の平面に対してトランスの関係に あり、さらにＲ₉とＲ₁は分子の平面に対してシスの関係にある。］ により示される単独の化合物またはその医薬上許容される塩、あるいは担体と混 合された該化合物またはその医薬上許容される塩である。 関連した態様において、本発明は、構造式： で示される化合物からなる。 さらなる関連した態様において、本発明は、構造式： で示される、さらに２つの化合物である。 もう１つの関連した態様において、本発明は、有効で毒性のない量の本発明化 合物からなる医薬組成物である。 さらにもう１つの関連した態様において、本発明は、レトロウイルスに感染し た哺乳動物の治療方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物に、有効で毒 性のない量の本発明化合物を投与することからなる治療方法に関する。 さらに本発明は、（ａ）酸触媒下で、フロログルシノールをβ−ケト酸（ある いは、Ｒ₂＝Ｈの場合にはプロビオラートエステル）と反応させてクマリンラク トン環を形成し；（ｂ）置換ハロゲン化アクリロイルでアシル化し、ついで、塩 基触媒で閉環してジヒドロピラン−４−オン環を形成し；（ｃ）塩基の存在下で 、酸およびｎＢｕ４ＮＩをハロゲン化プロパルギルと反応させることによりクロ メン環を形成し、ついで、加熱してクロメンピラン環を形成し；ついで、（ｄ） テトラヒドロピラノンケト基を水素化還元することからなる、本発明化合物の合 成的製造方法に関する。 詳細な説明 本発明は、広範囲の種類のウイルスにより引き起こされる哺乳動物のウイルス 感染を治療するための化合物および化合物の使用に関する。詳細には、本発明は 、レトロウイルスにより引き起こされるウイルス感染の治療に有用である。より 詳細には、本発明は、ヒト・免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の複製を選択的に阻害 す る化合物に関する。 本発明化合物は、元来、グチフェラエ（Guttiferae）科のカロフィルム（Calo phyllum）属の植物由来のクマリンの１つのクラスに関連している。カロフィル ム属は１７５種の植物からなることが知られている（例えば、マバーリー，ディ ー・ジェイ（Mabberley，D．J．），「ザ・プラント・ブック（The Plant Book ）」,９２頁（ケンブリッジ大学出版,１９８７年参照）。該属は、タヒチから東 アフリカないし東南アジアにかけての多くの熱帯地方から報告されている。カロ フィルム属から単離されたことが報告されている化合物には、トリテルペン類（ グナチラカ（Gunatilaka）ら，フィトケミストリー（phytochem．）第２３巻： ３２３〜３２８頁（１９８４年））、キサントン類（クマー（Kumar），フィト ケミストリー第２１巻：８０７〜８０９頁（１９８２年））およびベンゾピラン 類（スタウト（Stout），ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー第３ ３巻：４１８５〜４１９０頁（１９６８年））が含まれている。 詳細には、本発明化合物は、元来、シー・イノフィルム（C．Inophyllum）由 来のクマリン誘導体であり、一般式（Ｉ）： ［Ｒ₁はＨ、アシル、ＣＯＣＨＲ₅ＮＲ₆Ｒ₇、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）₂またはＳ（Ｏ） （ＯＨ）₂であり；ここに、Ｒ₅はＨまたはいずれかの天然アミノ酸の側鎖であり ；Ｒ₆およびＲ₇は、ＨおよびＣ_1〜6アルキルからなる群より独立して選択され； Ｒ₆とＲ₇は一緒になって、該窒素を含む５〜７員の飽和複素環を形成することが でき； Ｒ₂はＨ、ヒドロキシル、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ（Ｃ_{1〜 6} アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル−アミノ− Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、シクロヘキシ ル、アリールまたは複素環であり、ここに、アリールまたは複素環は、それぞれ 、未置換であってもよく、あるいは１個またはそれ以上のＣ_1〜6アルキル、Ｃ_{1 〜6} アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ_1〜4アルキル、アミノ、Ｃ_1〜6アルキルアミノ 、ジ（Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル −アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、ヒ ドロキシル、ニトロ、アジドまたはハロゲンで置換されていてもよく； Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₈およびＲ₉は、Ｈ、メチルおよびエチルからなる群より独立して 選択される。ただし、Ｒ₂がｎ−プロピルであってＲ₁がＨである場合には、 Ｒ₈およびＲ₉の両方ともがメチルということはありえず；Ｒ₂がフェニルであっ てＲ₁がＨである場合には、Ｒ₈とＲ₉は、分子の平面に対してトランスの関係に あり、さらにＲ₉とＲ₁は分子の平面に対してシスの関係にある。］ により示される単独の化合物またはその医薬上許容される塩、あるいは担体と混 合された該化合物またはその医薬上許容される塩である。 好ましくは、Ｒ₁は、Ｈ、ＣＯＣＨＲ₅ＮＲ₆Ｒ₇、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）₂またはＳ （Ｏ）（ＯＨ）₂である。より好ましくは、Ｒ₁は、ＨまたはＣＯＣＨＲ₅ＮＲ₆Ｒ₇ である。最も好ましくは、Ｒ₁はＨである。 好ましくは、Ｒ₂は、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ（Ｃ_1〜6ア ルキル）アミノ、シクロヘキシル、アリールまたは複素環であり、ここにアリー ルまたは複素環は、それそれ、未置換であってもよく、あるいは１個またはそれ 以上のＣ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ_1〜4アルキル、アミ ノ、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ（Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8 アルキル、Ｃ_1〜8アルキル−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル） アミノＣ_1〜8アルキル、ヒドロキシル、ニトロ、アジドまたはハロゲンで置換さ れていてもよい。より好ましくは、Ｒ₂は、Ｃ_1〜3アルキル、Ｃ_1〜6アルキルア ミノ、ジ（Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、シクロヘキシル、フェニル、１置換フェニ ル（１個またはそれ以 上のＣ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ_1〜4アルキル、アミノ 、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ（Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8ア ルキル、Ｃ_1〜8アルキル−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）ア ミノＣ_1〜8アルキル、ヒドロキシル、ニトロ、アジドもしくはハロゲン（しかし 好ましくは、ニトロもしくはハロゲン）で置換されている）、または未置換複素 環である。さらにより好ましくは、Ｒ₂は、フェニル、ｐ−アミノメチルフェニ ル、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、メチル、エチル、ｎ−プロ ピル、イソプロピル、シクロヘキシル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、 ピリジル、ピリミジニル、フリルまたはテトラヒドロフリルである。最も好まし くは、Ｒ₂は、フェニル、ｐ−アミノメチルフェニル、ジメチルアミノ、ｎ−プ ロピルまたはイソプロピルである。 好ましくは、Ｒ₃およびＲ₄は両方ともがＨまたはメチルである。 好ましくは、Ｒ₈およびＲ₉は、Ｈおよびメチルからなる群より独立して選択さ れる。 好ましくは、Ｒ₂がフェニルである場合には、Ｒ₈およびＲ₉はトランスの位置 である。特に記載する以外は、本明細書において使用される「アルキル」は、標 記された数の炭素原子を有する分枝および直鎖飽和脂肪族炭化水素基を包含する 。「脂肪族」は、飽和および不飽和基を包含する。「脂肪族」は、二重結合およ び三重結合がいかなる組み合わせで存在していてもよい、飽和またはモノもしく はポリ不飽和鎖を包含する。「アルコキシ」は、酸素ブリッジを介して結合して いる、標記された数の炭素原子のアルキル基を表す。「アシル」は、末端カルボ ニル炭素を有する基を意味する。「ハロゲン」または「ハロ」は、本明細書にお いては、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。 「アリール」は、フェニル、置換フェニル、ビフェニル、置換ビフェニル、ナ フチルまたは置換ナフチル（置換基は、１個またはそれ以上のＣ_1〜6アルキル、 Ｃ_1〜6アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ_1〜4アルキル、アミノ、Ｃ_1〜6アルキルアミ ノ、ジ（Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキ ル−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、 ヒドロキシル、 ニトロもしくはハロゲンからなる）を包含する。 本明細書において、特に記載しないかぎり、「複素環」または「複素環式」は 、飽和または不飽和である、安定な５ないし７員の単環式または安定な８ないし １１員の２環式の複素環を表す。該複素環は、炭素原子およびＮ、Ｏ、およびＳ からなる群より選択される１ないし４個のヘテロ原子からなり、窒素および硫黄 ヘテロ原子は、所望により、酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は、所望に より４級になっていてもよく、さらに、該複素環には、上で定義したいずれかの 複素環の環がベンゼン環と縮合しているすべての２環式の基が含まれる。複素環 は、いずれかのヘテロ原子または炭素原子において結合し、安定な構造を生じる こともできる。かかる複素環エレメントの例としては、ピペリジニル、ピペラジ ニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジ ニル、２−オキソアゼピニル、アゼピニル、ピロリル、４−ピペリドニル、ピロ リジニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミ ダゾリジニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾ リル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホリ ニル、チアゾリル、イソチアゾリル、キヌクリジニル、イソチアゾリジニル、イ ンドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、チアジアゾイル 、ベンゾピラニル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、フリル、テトラヒ ドロフリル、ベンゾフラニル、テトラヒドロピラニル、チエニル、ベンゾチエニ ル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスル ホン、およびオキサジアゾリルが挙げられる。 構成成分または式Ｉにおいて、変数（例えば、アリール、複素環、Ｒ¹、Ｒ²、 Ｒ³等）が１個以上存在する場合、それそれの変数の定義は、他のそれそれのも のとは無関係である。さらに、置換基および／または変数の組み合わせは、その ような組み合わせが安定な化合物を生じる場合にのみ、許容される。 本発明は、さらに、当業者に知られた化学修飾を有する本発明化合物の誘導体 を包含する。化学修飾としては、加水分解、エステル化、アセチル化およびアル キル化が挙げられるがこれらに限定されない。該化学修飾は、本発明の阻害機能 を破壊するものでない。さらにそのうえ、該修飾体は、未修飾化合物と実質的に 同じ濃度またはそれより低濃度においてＨＩＶ感染を阻害する能力を保持してい るが、細胞毒性は減じられている。 さらに、本発明化合物がキラル中心またはある種形態の異性中心を含む場合、 すべての形態のかかる異性体（例えば、ラセミ体混合物、エナンチオマー等）を 、本発明の態様であるとみなす。 実施例２の化合物を、熱帯雨林の森林の樹木であり、東南アジアにおいて見ら れる大木であるカロフィルム・イノフィルム（Calophyllum inophyllum）の葉か ら単離することができる。別法として、本発明化合物を化学的に合成することも できる。例えば、本発明化合物製造の一般的合成スキームは、以下のステップか らなる。 改変ペヒマン反応（ペヒマン（Pechmann）ら，ベリ・ドイチェ・ヘミ・ゲセ（ Ber．Dtsch．Chem．Ges．）第１６巻：２１２７頁（１８８３年））を用いてク マリンラクトン類（化合物１）を合成する（セスナ（Sethna）ら,オーガニック ・リアクションズ（Org．Reactions）第７巻：１頁（１９５３年）参照）。該改 変法は、β−ケトエステル（Ｒ₂＝Ｈである場合、プロピオラートエステル）お よび縮合剤としてトリフルオロメタンスルホン酸（トリフリックアシッド）を必 要とするが、これらは、報告された他の酸よりも高収率できれいな反応を提供す る。生成物の収率および純度は、より一般的な硫酸触媒のかわりにトリフリック アシッドをそのまま使用することで改善され、１を定量的に得た。トリフリック アシッドによるフロログルシノールとアセト酢酸エチルまたはベンゾイル酢酸エ チルとの縮合においても良好な結果が得られた。Ｒ₂の性質に応じて、所望によ り、この反応のために保護基（例えば、ＣＢｚ、ＮＯ₂等）を使用してもよい。 ついで、置換ハロゲン化アクリロイルとのフリーデル−クラフツのアシル化（フ リーデル・クラフツ・アンド・リレイティッド・リアクションズ（Friedel Craf ts and Related Reactions）第３巻,ジー・エイ・オラー（G．A.Olah）（編）， ウィリー（Wiley）（１９６３年））を行って化合物２を得る。Ｒ₂がｎ−プロピ ルであって、Ｒ₈およびＲ₉が両方ともメチルである場合に、得られる生成物１０ （融点２６６〜２６８℃）は、８７％の収率で得られた。１０におけるアシル化 の選択化学（regiochemistry）は、芳香族プロトンＨ_b（δ_TMS６.４４ｐｐｍ； ＣＤＣｌ₃／アセトン−ｄ₆）とフェノール性ヒドロキシルプロトンＨ_aならびに Ｈ_c（δ_TMS９.５０,９.８７ｐｐｍ）の双方との間の相互増強を示すｎＯｅスタ ディー （nOe study）により確立された。 このフリーデル−クラフツ反応の選択化学的配向性により所望の環の最終配置 が保証され、かくして保護をせずにすんだ。ついで、１０を塩基処理（例えば、 アセトン還流中Ｋ₂ＣＯ₃）（ポロンスキーら，ビュレ・キミ・ソサ・フラ９２９ 頁（１９５８年）およびスタウトら，ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミス トリー第２９巻：３６０４頁（１９６４年）参照）して、２,３−ジメチルベン ゾ−ピラノン３の１：１のエピマー混合物を高収率で得た。 閉環および脱酸素に続く塩化ジメタクリロイルでの３のＣ−アシル化は、クロ メン環の形成においてはうまく行かなかった。化合物３は、フリーデル−クラフ ツ反応の間、不活性化されすぎて、３の水素化ホウ素ナトリウムでの還元は複雑 な混合物を生じた。ジメタクリル酸での３のエステル化の後、ＮａＢＨ₄を用い てケトン還元が容易に進行したが、試みられた保護アルコールのフリース転移に より、これが分解した。 塩基触媒（例えば、Ｋ₂ＣＯ₃）存在下でのハロゲン化プロパルギルによる３の 反応を行い（フルブチェク（Hlubucek）ら，オーストラリアン・ジャーナル・オ フ・ケミストリー（Aust．J．Chem．）第２４巻．２３４７頁（１９７１年）） 、ついで、加熱してクライゼン転移を行って生成物４および５を得る。アリール プロパギルエーテルは、典型的に、１６０〜２１５℃で転移してオルト−アレニ ルフェノール中間体を生じ、これは環化してクロメン類となる。３の場合、ジメ チルプロパルギルエーテル生成のための標準的条件（３−クロロ−３−メチルブ チン、 Ｋ₂ＣＯ₃、ＫＩまたは（ｎ−Ｂｕ）₄ＮＩ、Ｍｅ₂ＣＯもしくは２−ブタノン中１ ０％ＤＭＦ、５０〜７０℃）によっては何ら反応が起こらなかった。しかしなが ら、無水塩化亜鉛を反応混合物に添加すると、クロメン４および５のきれいな反 応が起こった。例えば、１０を塩基触媒閉環反応に付し、ついで、転移反応に付 した場合、化合物（Ｒ₈とＲ₉がトランス位のもの（融点１３０〜１３２℃）およ びＲ₈とＲ₉がシス位のもの（融点１３０〜１３１℃）がそれぞれ１.３：１の割 合）が生じ、クロマトグラフィー分離後合一した場合、収率６１％であった。該 反応は４０℃ないし１６０℃、好ましくは５０℃ないし１２０℃、より好ましく は７０℃で起こる。（ｎ−Ｂｕ）₄ＮＩがない場合、反応はきれいに進行せず、 低収率であり、塩基（例えばＫ₂ＣＯ₃）を省略した場合、明らかな生成物の形成 を伴わずに分解が徐々に起こった。推定されるプロパルギルエーテル中間体は検 出されなかったが、穏やかな反応条件下（すなわち７０℃）では、プロパルギル エーテル形成および転移の両方が塩化亜鉛により触媒されることが示される。ア リールアリールエーテルの転移は、プロトン酸（例えば、カレレト（Karreret） ら，ヘルベ・キミ・アクタ第５６巻：２６４４頁（１９７３年）；スバンホルメ ト（Svanholmet）ら，ケミ・ソサ・パーキンエII（Chem．Soc．PerkinII）１６ ９頁（１９７４年）；およびイスマイレト（Ismailet）ら，テトラヘドロン・レ ターズ（Tetrahedron Lett．）３７９５頁（１９９２年）参照）のみならず、Ｚ ｎＣｌ₂、ＢＣｌ₃、Ｅｔ₂ＡｌＣｌおよびＴｉＣｌ₄をはじめとする種々のルイス 酸により強力に触媒される（例えば、カレル（Karrer）ら，ヘルベ・キミ・アク タ（Helv．Chim．Acta）第２１巻：５２０頁（１９３８年）；スミス（Smith） ら，サイエンス第８８巻：３７頁（１９３８年）；ファーニ（Fahrni）ら，ヘル ベ・キミ・アクタ第４３巻：４４８頁（１９６０年）；ゾンネンベルク，エフ・ エム （Sonnenberg，F．M．）ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー第３５ 巻：３１６６頁（１９７０年）；ウェーリ（Wherli）ら，ジャーナル・オブ・オ ーガニック・ケミストリー第３６巻：２９１０頁（１９７１年）；ボルグルヤ （Borgulya）ら，ヘルベ・キミ・アクタ第５６巻：１４頁（１９７３年）；シュ ミーデト（Schmidet）ら，ヘルベ・キミ・アクタ第５６巻：１０５頁（１９７３ 年）；ナラサケト（Narasakaet）ら，ケミ・レタ（Chem．Lett．）１０４１頁（ １９７５年）；およびタチバナ（Tachibana），ワイ・ビュレ・ケミ・ソサ・ジ ャパン（Ｙ．Bull．Chem．Soc．Japan）第５０巻：２４７７頁（１９７７年）参 照）。さらに、アリールプロパルギルエーテルのクロメン類への転移は、水銀お よび銀の塩（例えば、コッホ−ポメランゼト（Koch-Pomeranzet）ら，ヘルベ・ キミ・アクタ第５６巻：２９８１頁（１９７３年）参照）およびＡｌＣｌ₃（例 えば、バテセト（Bateset）ら，ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリ ー第４３巻：３８５６頁（１９７８年）参照）により触媒されることが示されて いる。 引き続き、同じ合成ステップにおいてエーテル化および転移反応を行うことが できる。最終ステップとして、４または５のジヒドロピラノンケト基をヒドロキ シル基にまで還元し、本発明化合物を得る。実施例１記載のごとく、かかる化合 物をクロマトグラフィー分離により単離することができる。この一般的合成スキ ームにおいて、化合物４および５を得るための合成の順序を変更して本発明の同 じ化合物を得ることができることも理解されている。さらに、当業者は、適当な ハロゲン化アクリロイルを選択することにより、環の１０および１１位において メチル基を欠いているクマリン誘導体を合成することができる。 さらにそのうえ、天然起源から相抽出クロマトグラフィーにより有機溶媒中に 抽出し、ついで、精製することにより、本発明化合物を得ることができる。かか る溶媒は当業者に知られている。例えば、本発明化合物をメチルアルコール、エ チルアルコール、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、 アセトン等中へ抽出することができる。好ましい溶媒は、メチルアルコールまた は酢酸エチルである。しかしながら、抽出は、ただ１つの溶媒に限定されるもの ではない。より好ましくは、２種の混合可能な溶媒、例えば、メチルアルコール および１,２−ジクロロエタンを用いて本発明化合物を抽出するような、２溶媒 抽出が好ましい。 クロマトグラフィー分離を、慣用的なクロマトグラフィー（例えば、重力、フ ラッシュ、高圧（すなわちＨＰＬＣ）または薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ） ）を用いることにより行うことができる。使用する共通の材料は、当業者に知ら れ た他の材料のみならず、アルミナおよびシリカゲルである。例えば、非イオン性 樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーまたは逆相樹脂を用いる高性能液体クロ マトグラフィーを使用することができる。抗ウイルス活性を有するフラクション を、より十分に以下に記載されたように、インビトロＲＴアッセイ（例えば、Ｈ ＩＶ ＲＴ）によりアッセイすることができる。一般的には、１種以上のクロマ トグラフィー分離ステップを使用する。好ましい方法において、カラムクロマト グラフィーを用いて１回またはそれ以上の分離を行い、調製用薄層クロマトグラ フィーを用いて最終分離を行う。 慣用的なカラムクロマトグラフィーを使用する場合、シリカゲルは好ましい吸 着剤である。１種以上のクロマトグラフィー分離が必要な場合、異なる溶離剤を 用い、すべての分離においてシリカゲルを使用することができる。かかる異なる 溶離剤としては、異なる割合の２種の混合可能な溶媒の使用が挙げられる。さら に、有利には、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーを、異なる吸着剤（例え ばセファデックス（Sephadex）ＬＨ−２０）と組み合わせることもできる。アル ミナ、スチレン−ジビニルベンゼンコポリマー（例えば、ＨＰ−２０、ＨＰ−３ ０、ＨＰ−４０）およびおアンバーライト（Amberlite）（例えば、ＸＡＤ−２ 、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−１６）のごとき他の吸着剤を使用することもできる。 酢酸エチルとヘキサンとの混合物は、シリカゲル（ＳｉＯ₂）上の本発明活性 化合物の分画および回収において特に有用であることが見いだされている。該混 合物を、イソクラチック、段階的グラジエントまたは連続的グラジエント系にお いて使用することができる。単離後、均質な化合物を含むフラクションを減圧濃 縮することができる。 合成および／または単離後、ＮＭＲ（例えば、¹Ｈ、¹³Ｃ、ＤＥＰＴ、¹Ｈ−¹ Ｈ２Ｄ ＣＯＳＹ）、ＭＳ（高速原子衝撃質量スペクトル法）、ＩＲ、ＵＶ、 Ｘ線および化学分解のごとき方法により、精製された生成物を、純度、構造等に ついて分析することができる。 いかなる種類の塩であっても本発明化合物から製造することができる。ただし 、酸基または十分に塩基性の窒素が化合物中に存在する場合である。本発明の医 薬 上許容されるは特に好ましい。これらの塩を、医薬用途に適用することが許容さ れているものと定義した。すなわち、その塩は、もとの化合物の生物学的活性を 保持しており、その塩は、その疾病治療における適用および使用において、望ま しくない、あるいは有害な効果を有していないことを意味する。 本発明化合物の酸付加塩を、適当な溶媒中で、標準的方法において製造する。 簡単に説明すると、過剰の塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、マレイン酸 、またはコハク酸のごとき酸を、もとの化合物に添加する。特に、酢酸塩の形態 が特に有用である。さらに、ある種の化合物は、許容される内部塩または双性イ オンを形成しうる。過剰の適当なカチオンを含む水酸化物、カルボナートまたは アルコキシドのごときアルキル化剤でもとの化合物を処理することにより、カチ オン性の塩を製造する。Ｎａ⁺、Ｋ⁺、Ｃａ²⁺およびＮＨ₄ ⁺のごときカチオンは、 医薬上許容される塩に存在するカチオンの例である。 本発明化合物は、哺乳動物におけるウイルスの増殖または複製を阻害するのに 有用である。哺乳動物の例としては、ヒト、霊長類、ウシ、ヒツジ、ブタ、ネコ 、イヌ等が挙げられる。ウイルスの例としては、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ヘル ペス単純ウイルス（１型、２型）、水痘−帯状疱疹ウイルス、サイモメガロウイ ルス、乳頭腫ウイルス、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２、ネコ・白血病ウイルス、 ラウス・肉腫ウイルスのごときトリ・肉腫ウイルス、Ａ〜Ｅ型肝炎ウイルス、イ ンフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、おたふくかぜウイルスおよび風疹ウイル スが挙げられるが、これらに限定されない。より好ましくは、本発明化合物を用 いてレトロウイルスに感染したヒトを治療する。好ましくは、本発明化合物を用 いてヒト・免疫不全ウイルスに曝露または感染したヒトを、予防的あるいは治療 的に処置する。 ある種の本発明化合物の利点は、それらが、ＴＩＢＯ耐性であるある種のＨＩ Ｖ ＲＴ変種を阻害する能力を保持しているということである。このことは、現 在のエイズ薬剤治療（そこでは、ＲＴ阻害に用いられるヌクレオシドアナログに 対してしばしば生物学的耐性が生じる）に優る利点である。 それゆえ、本発明化合物は、ヒト・免疫不全ウイルスによる感染の予防または 治療において、さらに、結果として生じるエイズ関連病理学的徴候の治療におい て特に有用である。ＡＩＤＳ治療は、広範囲のＨＩＶ感染状態、エイズ、ＡＲＣ （エイズ関連合併症）（徴候に現れるものも現れないものも）、および急性また は潜在的なＨＩＶへの曝露に対する治療を包含するものと定義されるが、これら に限定されない。例えば、本発明化合物は、輸血、外科手術中の、あるいは不意 に針で剌したことによる患者の血液に対する曝露によるＨＩＶに対する曝露の疑 いが持たれた後のＨＩＶによる感染の治療に有用である。 公表されているプロトコールにより、本発明化合物を、抗ウイルス活性につい てアッセイすることができる。該プロトコールには、細胞数計数、細胞変性効果 、ディッシュでのコロニー形成、マイクロタイター増殖阻害およびチミジン取り 込みが含まれるが、これらに限定されない。さらに、感染性アッセイにより、本 発明化合物を、そのＨＩＶ感染を阻害する能力についてアッセイすることができ る。感染性アッセイは、Ｔリンパ球または大赤血球／マクロファージのＨＩＶ− １もしくはＨＩＶ−２いずれかでの感染からなる。感染後６日目またはそれ以上 の日数後、粒子関連逆転写酵素活性および／またはｐ２４抗原レベルの測定を行 い決定することができる（例えば、クラフマン（Claphman）ら，ネイチャー（Na ture）第３３７巻：３６８〜３７０頁（１９９０年）またはマクダウガル（McDo ugal）ら，ジャーナル・オブ・イミュノ・メソ（J．Immun．Meth．）第７６巻： １７１〜１８３頁（１９８５年）参照）。さらに、病巣感染アッセイ（ＦＩＡ） を用いて抗ウイルス剤に対するＨＩＶの感受性をアッセイすることもできる（例 えば、ピンカス（Pincus）ら，バイオ・テクノロジー（Bio Technology）第１０ 巻：３３６〜３４２頁（１９９１年）参照）。 さらにそのうえ、本発明化合物の抗ウイルス「活性」を、グラコウスキー（Gu lakowski）ら，（ジャーナル・オブ・ウイロロ・メソ（J．Virol．Meth．）第３ ３巻：８７〜１００頁（１９９１年））（これを参照により本明細書に取り入れ る）により開示された半自動的多パラメーター法による一連の相互関係のあるア ッセイにおいて、迅速に測定することができる。 本発明化合物の医薬組成物を、非経口投与用に、凍結乾燥粉末の溶液として処 方することができる。使用前に、適当な希釈剤または他の医薬上許容される単体 を添加することにより、粉末を復元することができる。一般的には、液体処方は 、緩衝化された等張の水溶液である。適当な希釈剤の例としては、通常の等張セ イライン溶液、標準の水中５％デキストロースまたは緩衝化酢酸ナトリウムもし くは酢酸アンモニウム溶液が挙げられる。かかる処方は、特に非経口投与に適す るが、経口投与にも用いることができる。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒ ドロキシセルロース、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、マンニトール、 塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムのごとき賦形剤を添加することが望ま しい。 別法として、本発明化合物を、カプセル封入、錠剤化、または経口投与用エマ ルジョンもしくはシロップの形態に調製することができる。医薬上許容される固 体または液体担体を添加して組成物の効力を増強もしくは安定化させるか、ある いは組成物の製造を容易にすることができる。固体担体としては、澱粉、ラクト ース、硫酸カルシウム２水和物、白陶土、ステアリン酸マグネシウムもしくはス テアリン酸、タルク、ペクチン、アラビアゴム、寒天またはゼラチンが挙げられ る。液体担体としては、水あめ、ピーナッツ油、オリーブ油、セイラインおよび 水が挙げられる。担体が、モノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸 グリセリルのみ、あるいはそれらとロウとの混合物のごとき除放性物質を含有し ていてもよい。固体担体の量は変更できるが、好ましくは、１剤形あたり約２０ ｍｇないし約１ｇとする。錠剤形態が必要である場合には、粉砕、混合、顆粒化 および打錠をはじめとする製薬における慣用的方法により医薬組成物を製造する ことができ、硬ゼラチンカプセル形態が必要な場合には、粉砕、混合および充填 により製造することができる。液体担体を用いる場合、その製造は、シロップ、 エリキシル、エマルジョンまたは水性もしくは非水性懸濁液の形態となるであろ う。かかる液体処方を直接投与してもよく、あるいは軟ゼラチンカプセル中に充 填してもよい。 使用に適した担体または希釈剤は、医薬処方分野において一般的に知られてい る。例えば、かかる物質への言及は、レミントンズ・ファーマシューティカル・ サイエンシズ（Remington’s Pharmaceutical Sciences），アメリカ合衆国ペン シルベニア州イーストン（Easton）のマック・パブリッシング・カンパニー（Ma ck Publishing Co．）のようなよく知られた編集物において見いだされる。 本発明化合物の投与用量範囲は、所望の効果を発揮し、それにより感染の徴候 が改善される用量である。例えば、本発明において、ＨＩＶ感染に対する医薬上 有効量とは、合胞体の形成により、あるいは、例えば、患部における抗ＨＩＶ抗 体の存在、培養可能なウイルスの存在ならびにｐ２４抗原の存在によりＨＩＶ感 染が明らかとなっている間じゅうウイルスを循環させることにより、２次感染を 抑制または阻害する量を維持するために投与される量をいう。標準的なＥＬＩＳ Ａまたはウェスタンアッセイ、例えば、抗ｇｐ１２０、抗ｇｐ４１、抗ｔａｔ、 抗ｐ５５、抗ｐ１７抗体等を用いて抗ＨＩＶ抗体の存在を決定することができる 。一般的には、用量を、年齢、感染の程度、および逆効果（もしあれば、例えば 、免疫耐性）に応じて変更する。用量を、０.００１ｍｇ／ｋｇ／日から５０ｍ ｇ／ｋｇ／日まで変化させることができるが、好ましくは、０.０１ないし１.０ ｍｇ／ｋｇ／日とする。 後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を処置（治療的または予防的）するために 、医薬組成物が、本発明化合物と混合された他の医薬を含有していてもよい。例 えば、他の医薬としては、他の抗ウイルス化合物（例えば、ＡＺＴ、ｄｄｃ、Ｔ ＩＢＯ誘導体、アシクロビア（acyclovir）、α−インターフェロン）、免疫賦 活剤（例えば、種々のインターロイキンおよびサイトカイン）、免疫調節剤およ び抗生物質（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤、抗肺炎剤）が挙げられるが、これら に限定されない。 さらに、本発明化合物は、レトロウイルスの逆転写酵素の阻害を研究するため の道具および／または試薬として有用である。例えば、本発明化合物は、選択的 にＨＩＶの逆転写酵素を阻害する。それゆえ、本発明化合物は、ＨＩＶを阻害す る他の分子の研究、選択および／または設計のためのＳＡＲ（構造活性相関）の 道具として有用である。 本明細書で参照したすべての出版物の全体を本明細書に取り入れる。 当業者は、上の記載を用いて、本発明を十分な程度にまで利用することができ ると確信する。以下の実施例は、説明的なものであって、本発明を限定するもの ではない。 実施例 一般 プロトンおよび¹³ＣＮＭＲスペクトルを、記載した溶媒中で、それぞれ 、４００ＭＨｚおよび１００ＭＨｚにおいて、ブルカー（Burker）ＡＭＸ４００ スペクトル分析計により得た。化学シフト（δ）は、（Ｍｅ）₄Ｓｉに対するも ので、ピークの多重度は、ｓ，シングレット、ｄ，ダブレット、ｔ，トリプレッ ト、ｑ，カルテット、ｍ，マルチプレット、ｂｒ，ブロード、ｄｄ，ダブレット のダブレット等である。吸収化学イオン化（ＤＣＩ）質量スペクトル（ＭＳ）を 、フィニガン−ＭＡＴ（Finnigan-MAT）４極質量スペクトル分析計を用いて得た 。イー・メルク（E．Merck）のキーゼルゲル６０（Kieselgel 60）を用いてフラ ッシュクロマトグラフィーを行った。ダイナマックスシリカ（Dynamax silica） （５μ）（レイニン（Rainin）社製）を用いて調製用ＨＰＬＣを行った。１.収集、抽出および単離 マレーシアおよびガーナ産のシー・イノフィルム（C．inophyllum）の葉およ び小枝（０.５ｋｇ）を得た。冷却濾過浸透法による、ＭｅＯＨ：ＣＨ₂Ｃｌ₂で の抽出により、強力な逆転写酵素阻害活性を示す濃緑色残渣（４６ｇ）を得た。 この残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂に分散して濃緑色油状物質（１９.５ｇ）を得た。ＣＨ₂Ｃ ｌ₂可溶性画分に対して、ＥｔＯＡｃとヘキサンとの混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキ サン（３０：７０）から開始）を用いるシリカゲル（８００ｇ）カラムクロマト グラフィーを行い、ついで、ヘキサン中のＥｔＯＡｃのパーセンテージを増加さ せた。全部で５５０個のフラクション（各１５ｍｌ）を集め、ＳｉＯ₂ゲルｔｌ ｃによりモニターした。化合物含有の可能性のあるフラクションを合一して、２ ０個の別個のフラクションを得た。フラクション９５〜１０７は、溶離液として ＣＨ₃ＣＮを用いたＲＰ−１８カラムクロマトグラフィーの後、数個のフ ラクションを生じた。このカラムからのフラクション２２〜４８（１０８ｍｇ） は、ＳｉＯ₂ゲルｈｐｌｃ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン，２５：７５）の後にカロフ ィロライド（calophyllolide）（０.０９４ｇ）を生じた。 ＳｉＯ₂ゲルカラムからのフラクション１０８〜１３４の合一した残渣（０.９ ２５ｇ）を、ＲＰ−１８ ＳｉＯ₂ゲル（Ｈ₂Ｏ：ＣＨ₃ＣＮ，５：９５）のカラ ムによるクロマトグラフィーに供して数個のサブフラクションを得た。これらは 、ＳｉＯ₂ゲルｈｐｌｃ（ＥｔＯＡｃ：へキサン，２５：７５）によりイノフィ ルムＡ（inophyllum A）（０.４０５ｇ）およびカロフィロライド（０.０２２ｇ ）を生じた。フラクション１３５〜１８０（０.９１２ｇ）は、ＲＰ−１８カラ ム（ＣＨ₃ＣＮ）、ついで、ＳｉＯ₂ゲルｐｔｌｃの後で、主成分としてさらなる イノフィルムＡ（０.４３７ｇ）を生じた。結晶で、ＴＬＣにより均一と思われ たＲＰ−１８カラムからの少量のサブフラクション（０.０１８ｇ）を、ＳｉＯ₂ ゲルＨＰＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン ２５：７５）を用いて分割して、イノフ ィルムＰ（０.００８ｇ）およびイノフィルムＢ（０.００７２ｇ）を得た。また 、ｔｌｃにより単一と思われたもう１つの少量のサブフラクション（０.０２２ ｇ）を、順相ｈｐｌｃ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン,２５：７５）により分離して、 ほとんど同じ保持時間を有する２種の化合物を得、Ｇ−１（０.００９ｇ）およ びＧ−２（０.００８ｇ）と呼ばれる新規立体異性体と同定した。ＳｉＯ₂ゲルカ ラムからのフラクション１９１〜２３５（０.３９９ｇ）は、繰り返しｐｔｌｃ （シリカゲル，ＭｅＯＨ：ＣＨ₂Ｃｌ₂，３：９７およびＥｔＯＡｃ：ヘキサン， ３５：６５）の後、イノフィルムＣ（０.０９９ｇ）およびイノフィルムＤ（０. ０３２ｇ）と同定された２種の化合物を生じた。フラクション２３６〜３１０（ ０.６３８ｇ）をＳｉＯ₂ゲルｐｔｌｃ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン，３５：６５）に より精製してイノフィルムＥ（０.２７７ｇ）およびさらなるイノフィルムＣを 得た（０.０７３ｇ）。フラクション４０４〜４６６ （０.４３１ｇ）は、比較的極性が強かった。ＳｉＯ₂ゲルｐｔｌｃ（ＥｔＯＡｃ ：ヘキサン，１：１）を用いる精製を行い、最終的に熱ＥｔＯＡｃから再結晶し 、２種の酸（カロフィリン酸（calophyllic acid）０.０９８ｇおよびイソカロ フィ リン酸（iso-calophyllic acid）０.１１６ｇ）を得、それらの構造および絶対 配置をＸ線結晶構造解析により決定した。カロフィリン酸およびイソカロフィリ ン酸は、両方とも、本発明のある種のイノフィルム（例えば、イノフィルムＢお よびＰ）合成のための中間体として使用することができる。２.構造決定 カロフィロイド（calophylloide）およびイノフィルム（inophyllum）Ａ〜Ｅ の構造を同定し、以下に示す。ＲＴａｓｅアッセイにおけるマイクロモル以下で の活性のため、イノフィルムＢおよびイノフィルムＰの相対的な立体化学は興味 深い。イノフィルムＰは、分子量４０４、分子式Ｃ₂₅Ｈ₂₄Ｏ₅の新規イノフィル ムであり、ＵＶスペクトルのλ_maxは２３５、２８０、２８６および３３７ｎｍ である。イノフィルムＰのＩＲスペクトルは、ヒドロキシル（３４３５ｃｍ^-1） 、α，β−不飽和ラクトン（１７１９ｃｍ^-1）および−置換ベンゼン（７６５お よび７０３ｃｍ^-1）に帰属されるバンドを示した。イノフィルムＰは、無水酢酸 およびピリジンで容易にアセチル化されてモノアセタートを生じる。該モノアセ タートの¹ＨＮＭＲスペクトルは、δ２.１４ｐｐｍにシングレット（３Ｈ）を示 し、それが、イノフィルムＣのＣ−１２ケトンが２級アルコール基により置換さ れているジヒドロ誘導体であることを示唆する。イノフィルムＡ、Ｂ、Ｄおよび Ｐの¹ＨＮＭＲスペクトルをイノフィルムＣおよびＥのものと比較すると、Ａの みならずＤもイノフィルムＥのヒドロキシアナログであるが、ＢおよびＰはイノ フィルムＣのヒドロキシアナログであることが示される。 イノフィルムＡの絶対配置を、Ｎ，Ｎ−デメチルアミノピリジンの存在下でイ ノフィルムＡを塩化４−ブロモベンゾイルで処理することにより得られた４−ブ ロモ安息香酸のＸ線分析により確認した。イノフィルムＡの絶対配置を確認した ならば、他のすべてのイノフィルムのクロメン環の相対的立体化学を、ｎＯｅお よび結合定数を測定することにより容易に測定することができる。これらの化合 物について観察された結合定数およびｎＯｅを系統的に研究することにより、一 般的な立体化学的帰属がわかる。結合定数およびｎＯｅ（最大の可能なｎＯｅの パーセンテージとして表される）を実施例４の末尾に示す。明確にするために、 クロメン環のみを示すこととし、プロトンＨ−１０、Ｈ−１１およびＨ−１２の 番号付けを、それぞれＨ−１、Ｈ−２およびＨ−３と変更した。イノフィルムＡ 〜Ｅのプロトン帰属は、文献値（グナセケラ（Gnasekera）ら，ジャーナル・ケ ミ・ソサ・パーキンス（J．Chem．Soc．Perkins）第１巻：１５０５頁〜１５１ １頁（１９７７年）およびカワズ（Kawazu）ら,ビュレ・インスティ・ケミ・リ サ（Bull．Inst．Chem．Res．）第５０巻：１６０〜１６７頁）とよく一致する 。ソウラトロライド（soulattrolide）と実質的に同一の化学シフトを有するイ ノフィルムＰは、公表されたソウラトロライド（グナセケラら，上記）に関する 符号とは逆の符号の光学回転を有している。よって、イノフィルムＰは、ソウラ トロライドのエナンチオマーであり、イノフィルムＢのエピマーである。このこ とは、イノフィルムＣの還元により確認された。室温において、ＭｅＯＨ中、過 剰量のＮａＢＨ₄でイノフィルムＣを処理し、ついで、仕上げを行い、イノフィ ルムＢおよびイノフィルムＰを得た。３種すべての化合物、ケトンおよびアルコ ールは、プロトンＨ−１とＨ−２との間の比較的大きな結合定数（９ないし１１ Ｈｚの間）およびプロトンＨ−１とＨ−２との間の比較的小さいｎＯｅのパーセ ンテージ（２ないし７％の間）を共有している。さらに、イノフィルムＤのよう なアルファアルコール類およびイノフィルムＰは、プロトンＨ−２とＨ−３との 間の小さい結合定数（２ないし４Ｈｚの間）を有するが、イノフィルムＡおよび Ｂのようなベータアルコール類は、プロトンＨ−２とＨ−３との間の大きい結合 定数（５ないし８Ｈｚの間）を与える。イノフィルムＥの還元によりイノフィル ムＡおよびイノフィルムＤの両方が得られる。３種すべての化合物は、プロトン Ｈ−１とＨ−２との間の比較的小さい結合定数（２ないし４Ｈｚの間）およびプ ロトンＨ−１とＨ−２との間の比較的大きいｎＯｅのパーセンテージ（１０ない し２１％の間）を共有している。単離された化合物の構造を以下に示す。 ３.修飾／誘導体 イノフィルムＣの還元：メタノール（１０ｍｌ）中のイノフィルムＣを、水素 化ホウ素ナトリウム（０.０５０ｇ）で処理した。混合物を室温で１２時間攪拌 し、過剰の水素化物を水で破壊し、生成物を塩化メチレンで抽出した。エバポレ ーションで得られたゴム状物質を、シリカゲルｐｔｌｃ（最初に、ＥｔＯＡｃ： ヘキサン（３５：６５）で溶離、ついで、アセトン：ヘキサン（３０：７０）で 溶離）により精製して２種の化合物とした。極性の強いほうの化合物（０.０１ １ｇ）をイノフィルムＰと、極性の弱いほうの化合物（０.０１７２ｇ）をイノ フィルムＢと同定した。 イノフィルムＥの還元：メタノール（２０ｍｌ）中のイノフィルムＥ（０.１ ００ｇ）を、水素化ホウ素ナトリウム（０.１００ｇ）で処理した。混合物を室 温で１２時間攪拌し、過剰の水素化物を水で破壊し、生成物を塩化メチレンで抽 出した。溶媒除去後得られた残渣を、シリカゲルｐｔｌｃ（最初に、ＥｔＯＡｃ ：ヘキサン（３５：６５）で溶離、ついで、アセトン：ヘキサン（３０：７０） で溶離）により精製した。ＥｔＯＡｃから容易に結晶化する極性の小さいほうの 化合物（０.３７ｇ）をイノフィルムＡと同定し、一方、極性の大きいほうの化 合物（０.０１１ｇ）をイノフィルムＤと同定した。これを後ほど脱水し て無水イノフィルムＤを得た。 イノフィルムＡの４−ブロモ安息香酸誘導体の製造：イノフィルムＡをアセトニ トリル（１０ｍｌ）に溶解し、その溶液にＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（５ ｍｇ）および過剰量の塩化４−ブロモベンゾイル（１００ｍｇ）を添加し、つい で、室温で１２時間攪拌した。反応混合物を０.１Ｎ ＨＣｌ（２５ｍｌ）で希 釈して過剰の塩化４−ブロモベンゾイルを除去し、エーテル（３ｘ２５ｍｌ）で 抽出し、最初はＮａＨＣＯ₃で洗浄し、ついで、ブライン、そして水で洗浄した 。エーテル層をエバポレーションして無色残渣を得た。Ｓｉゲルｐｔｌｃ（Ｅｔ ＯＡｃ：ヘキサン，３０：７０）による精製を行い、ＥｔＯＡｃから長い針状と して結晶化する純粋なブロモベンゾアートイノフィルムＡ（５２ｍｇ）を得た。 ４.スペクトルのデータ イノフィルム化合物の番号付けシステムを下に示す。 ¹ＨＮＭＲの情報： 構造： ¹ＨＮＭＲの情報： 構造： ¹ＨＮＭＲの情報： ５.逆転写酵素活性 以下のＴＣＡ沈殿アッセイにより、ＲＴ阻害を測定した。ＨＩＶ ・逆転写酵素に関するＴＣＡ−沈殿アッセイ ＨＩＶのｇａｇ領域由来の ６９１個のＲＮＡからなる分子［（＋）-ＧＡＧ６９１，ミズラヒ，ブイ（Mizra hi，V．）、バイオケミストリー（Biochemistry）第２８巻：９０８８〜９０９ ４頁（１９８９年）に記載のごとく調製］を、合成オリゴデオキシヌクレオチド （配列：５'−ＧＧＴＣＴＡＣＡＴＡＧＴＣＴＣＴＡＡＡＡ−３'）にハイブリダ イゼーションさせることにより、ヘテロポリマー性プライマー鋳型を調製した。 プライマー鋳型（１０ｎＭ）を、反応緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐ Ｈ７.８、８０ｍＭ ＫＣｌ、６ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１０ｍＭ ＤＴＴ、０.０１ ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ）中で、阻害剤、１０μＭ ｄＧＴＰ、１０μＭ ｄＡＴＰ 、および２８μＣｉ／ｍｌの［３Ｈ］ＴＴＰ（アマーシャム（Amersham）社製） とともにインキュベーションした。組み換え型ＨＩＶ逆転写酵素（ミズライら、 アーチ・バイオケミ・バイオフィジ（Arch．Biochem．Biophys．）第２７３巻： ３４７〜３５８頁（１９８９年）に記載のごとく調製）を２〜８ｎＭとなるよう 添加し、反応物を３７℃で１５分間インキュベーションした（全反応体積５０μ ｌ）。５０μｌの１００ｍＭピロリン酸ナトリウム中２０％ＴＣＡ（氷冷）で反 応を終了させ、氷で１５〜３０分冷却した。反応混合物を、セルハーベスターを 用いて、ガラスフィルターで濾過し、フィルターに付着した放射活性を、ＬＫＢ ベータプレートカウンターを用いて定量した。ＨＩＶ ・逆転写酵素に関するシンチレーション近似アッセイ ＨＩＶ・逆転写酵 素のＳＰＡ酵素アッセイ系キット（アイテム番号ＮＫ８９７２）をアマーシャム 社から購入し、包装中の説明書の記載のとおりに使用した。簡単に説明すると、 キット中にある１０μｌのプライマー鋳型を、７０μｌのｄＮＴＰ／［３Ｈ］Ｔ ＴＰ溶液に添加した。１０μｌの試験すべき阻害剤を添加し、ついで、組み換え 型ＨＩＶ ＲＴ（上記のごとく調製）を濃度２ｎＭになるように添加した。反応 混合物を室温で１０分間インキュベーションし、ついで、４０μｌの０.５ＭＥ ＤＴＡで反応を終結させた。１０μｌのストレプトアビジン−ＳＰＡビーズを各 試験管に添加し、取り込まれた放射活性をＬＫＢベータプレートカウンターで測 定した。結果を以下に示す。化合物 ＩＣ₅₀（μＭ） イノフィルムＡ ９ イノフィルムＢ ０.３ イノフィルムＣ ＞５０ イノフィルムＤ ３０ イノフィルムＥ ＞５０ イノフィルムＰ ０.６ カロフィロライド ＞５０ Ｇ１ ＞５０ Ｇ２ ＞５０ さらにそのうえ、イノフィルムＢおよびイノフィルムＰは、ＴＩＢＯ耐性の、 ある種のＨＩＶ ＲＴ変異種を阻害することが見いだされた。例えば、アミノ酸 ＃１８１がチロシンからシステインもしくはイソロイシンのいずれかに変化して いるＨＩＶ ＲＴ酵素は、野生型ＨＩＶ ＲＴに関して観察された阻害と比肩し うる能力でもって、イノフィルムＢおよびＰにより阻害された。６.ＨＩＶ−１感染性阻害アッセイ ＣＤ４＋細胞系であるＭｏｌｔ４について、細胞毒性を試験した。本発明化合 物をＤＭＳＯに溶解して最大溶解度とし、共通溶媒系を調製した。細胞毒性アッ セイにおけるＤＭＳＯ最終濃度は、全体積の２％を超えなかった。本発明化合物 に対する曝露後の宿主細胞中への³Ｈ−チミジンの取り込みに対する阻害として 、細胞毒性を測定した。当業者に使用可能な他の細胞系は、ＣＥＭ、ＡＡ５、Ｍ Ｔ −２およびＨ９を包含する（ジャコブス（Jacobs），ジャーナル・オブ・ナショ ナル・キャンサー・インスティチュート（J．Ｎat’l Cancer Inst．）第３４巻 ：２３１頁（１９６５年）参照）。別法として、本発明化合物に曝露後１８〜２ ０時間において、マイクロタイター形式で、細胞の還元能を測定することにより （例えば、ＭＴＴ［臭化３−（４,５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２,５ −ジフェニルテトラゾリウム］（例えば、ポーウェルス（Pauwels）ら，ジャー ナル・オブ・ウイロロ・メソ（J．Virol．Meth．）第２０巻：３０９〜３２１頁 （１９８８年参照）、またはＸＴＴ試薬）、細胞活力を測定することもできた。 さらに、以下のようにして、ウイルス中和、あるいはＨＩＶ感染性アッセイに より、本発明化合物をアッセイした。Ｍｏｌｔ４細胞の大量感染 大量感染用いて個々のウェルでの感染に固有のばら つきを克服する。以下のウェルあたりにウイルスと細胞の割合を維持するように 、１つの実験用の十分な細胞と希釈されたウイルスのストックとをＴ−７５フラ スコ（コーニング（Corning）社製）中で混合する。すなわち、ＴＣＩＤ₅₀４５ のウイルス（IIIＢストック）を含む１００μｌを、１００μｌのＭｏｌｔ４細 胞（３ｘ１０⁴個／ｍｌ）と混合する。ＣＯ₂インキュベーター中、３７℃で９０ 分間、ウイルスを吸着させる。ついで、２００μｌ／ウェルの細胞／ウイルス混 合物を、２４ウェルプレートのそれぞれのウェル中に分取する。阻害剤の希釈 ＤＭＳＯ中２００倍希釈の最終濃度の阻害剤希釈物のうち、体 積で約１／２００を添加する［すなわち、４９７.５μｌのウイルス感染細胞に 、２.５μｌの阻害剤ＤＭＳＯ希釈物または１００％ＤＭＳＯを適当なウェルに 注意深く添加］。希釈系列は、一般的に、５０ｐｇ／ｍｌから始まる５倍希釈で ある。フィーディングのスケジュール １倍濃度の阻害剤系列（すなわち実験開始にお ける初発濃度）を含む２０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ １６４０を、以下の時 間に以下の体積で、培養物に添加する。 １日目− ０.５ｍｌ ＲＰＭＩ １６４０＋２０％ ＦＢＳ＋阻害剤 ４日目− ０.５ｍｌ ＲＰＭＩ １６４０＋２０％ ＦＢＳ＋阻害剤 （各ウェル中最終体積＝１.５ｍｌ） ７日目− 収穫収穫 感染後７日目に培養上清を収穫する。一般的には、９０μｌの培養物を、 １０μｌのＰＢＳ中５％トライトンＸ−１００を入れた９６−ウェル培養プレー ト中に移す。プレートを密封し、７０％エタノール＋界面活性剤で飽和させたガ ーゼで拭き、マイクロＲＴｓ（Micro RTs）またはｐ２４ ＥＬＩＳＡ行うまで −８０℃にて貯蔵する。ＨＩＶ感染性、阻害の結果を以下に示す。 ７.カラノライドの合成 カラノライドＡ、Ｃ、Ｄおよび関連化合物を、以下のごとく合成した。 ^a（ａ）Ｃ₃Ｈ₇ＣＯＣＨ₂ＣＯ₂Ｅｔ、ＣＦ₃ＳＯ₃Ｈ（そのまま），０→２５℃ ， １６時間；（ｂ）塩化チグロイル、ＡｌＣｌ₃（４当量）、ＣＳ₂、ＰｈＮＯ₂ ，７５℃，１４時間（８７％）；（ｃ）Ｋ₂ＣＯ₃、２−ブタノン，７０℃，２時 間（８９％）；（ｄ）塩化１，１−ジメチルプロパルギル（５当量）、ＺｎＣｌ₂ 、（１.３当量）、Ｋ₂ＣＯ₃（２.５当量）、（ｎ−Ｂｕ）₄ＮＩ（１当量）、２ −ブタノン／ＤＭＦ／Ｅｔ₂Ｏ（１０：１：１），７０℃，１６時間（(±)−１ ７：３４％；(±)−１８：２７％）；（ｅ）ＮａＢＯ₄（２当量）、ＣｅＣｌ₃( Ｈ₂Ｏ)₆（１当量）、ＥｔＯＨ，２５℃（５９％）；（ｆ）ＮａＢＨ₄、ＥｔＯＨ ，２５℃（１００％）。 ５，７−ジヒドロキシ−４−ｎ−プロピルクマリン（化合物１５） ブチリル 酢酸エチル（２６.３ｇ，０.１６７ｍｏ１）中の無水フロログルシノール（２０ .０ｇ，０.１５９ｍｏｌ）の懸濁液を、アイスバスで冷却された、つねに攪拌さ れているトリフルオロメタンスルホン酸５０ｇに、３０分かけて添加した。つい で、乾燥チューブを反応容器に取り付け、混合物を２５℃で１６時間攪拌し、そ の後、得られた高粘性ペースト物を、氷（２００ｇ）および水（３００ｍｌ）と 激しく攪拌しながら合一した。３０分後、固体物質を真空濾過により集め、９５ ％エタノールから再結晶して化合物１５をレモンイエローの結晶として得た（３ ４.７g，９９％）。融点２３６〜２３８℃。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ ３：１）：δ ６.１３（１Ｈ，ｄ；Ｊ＝２.３Ｈｚ），６.０４（１Ｈ，ｄ； Ｊ＝２.３Ｈｚ），５.６８（１Ｈ，ｓ），２.７６（２Ｈ，ｔ；Ｊ＝７.４Ｈｚ） ，１.４７（２Ｈ，ｔｑ；Ｊ＝７.７，７.４Ｈｚ），０.８２（３Ｈ，ｔ；Ｊ＝７ .７Ｈｚ）。¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ ３：１）：δ１６３.１，１６ ０.７，１６０.６，１５７.３，１５６.７，１０７.８，１０２.５，９９.２， ９５.０，３７.７，２２.５，１３.４。元素分析 Ｃ₁₂Ｈ₁₂Ｏ₄・（Ｈ₂Ｏ）とし て、計算値：Ｃ，６０.５０；Ｈ，５.９２、実測値：Ｃ，６０.４７；Ｈ，５.９ ２。 化合物１０ 二硫化炭素（２ｍｌ）中の塩化チグロイル（３.０ｇ，２５ ｍｍｏｌ）の溶液を、二硫化炭素（５０ｍｌ）中のクマリン１５（５.００ｇ， ２２.７ｍｍｏｌ）および三塩化アルミニウム（１２.９ｇ，９５.５ｍｍｏｌ） からなる懸濁液に添加し、得られた混合物を２５℃で３０分間攪拌した。ついで 、ニトロベンゼン（２０ｍｌ）を添加し、混合物を７５℃で１４時間加熱し、そ して、氷（５０ｇ）および１Ｍ ＨＣｌ（２００ｍｌ）中に注いだ。混合物をＣ ＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（９５：５）（３ｘ１００ｍｌ）で抽出し、有機層をＮａ₂Ｓ Ｏ₄で乾燥し、溶媒を減圧除去して生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィ ー（９５：５のＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ）により所望生成物（５.９７g，８７％） を白色固体として得た。融点２６６〜２６８℃。¹ＨＮＭＲ（〜１０：１のＣＤ Ｃｌ₃／アセトン−ｄ₆）：δ９.８９（１Ｈ，ｓ）；９.５０（１Ｈ，ｓ）；６. ４４（１Ｈ，ｓ）；６.４１（１Ｈ，ｑ；Ｊ＝７.０Ｈｚ），５.８７（１Ｈ，ｓ ），２.９５（２Ｈ，ｔ；Ｊ＝７.０Ｈｚ）；１.７２（３Ｈ，ｓ），１.６７（３ Ｈ，ｄ；Ｊ＝７.４Ｈｚ）；１.２１（２Ｈ，ｍ）；１.０１（３Ｈ，ｔ；Ｊ＝７. ４Ｈｚ）。元素分析 Ｃ₁₇Ｈ₁₈０₅・（１／８Ｈ₂Ｏ）として、計算値：Ｃ,６７. ０４；Ｈ,６.０４、実測値：Ｃ，６７.３１；Ｈ，６.００。 シス−およびトランス−２,３−ジメチルクロマノン１６ 炭酸カリウム（４. １２ｇ，２９.８ｍｍｏｌ）を、２−ブタノン（４０ｍｌ）中の化合物１０の溶 液に添加し、混合物を加熱して２時間還流させた。反応混合物を室温まで冷却し 、ＩＮ ＨＣｌ（１５０ｍｌ）で酸性にし、酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）で抽 出した。合一した有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、溶媒を減圧除去して異性体クロ マノン１６（１：１混合物）を白色固体として得た（２.６６ｇ，８９％）。元 素分析 Ｃ₁₇Ｈ₁₈Ｏ₅として、計算値：Ｃ，６７.５４；Ｈ，６.００、実測値： Ｃ，６７.７５；Ｈ，６.０５。 １６の純粋なシスおよびトランス異性体を、ＨＰＬＣ（ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ ９５：５）により、スペクトル分析用に分離した。トランス−２,３−ジメチ ルクロマノン１６：¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ ３：１）：δ６.０９（ １Ｈ，ｓ），５.８３（１Ｈ，ｓ），１.３１（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝６.３Ｈｚ），１. ４３（２ Ｈ，ｔｑ；Ｊ＝７.４，７.３Ｈz），２.３３（１Ｈ，ｄｑ；Ｊ＝１０.７，５.７ Ｈｚ），４.０９（１Ｈ，ｄｑ；Ｊ＝１０.７，６.３Hz），２.７６（２Ｈ，ｔ； Ｊ＝７.４Ｈｚ），１.０１（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝５.７Ｈｚ），０.８２（３Ｈ，ｔ； Ｊ＝７.３Ｈｚ）。¹³ＣＮＭＲ（ＣＤＣ₁₃／ＣＤ₃ＯＤ ３：１）：δ１９０.６ ，１６４.３，１６１.９，１６１.０，１５９.３，１５６.０，１０９.９，９９ .０，１０４.１，１０２.７，７８.９，４６.９，３８.０，２２.５，１９.１， １３.４，１０.２。ＭＳ（ＤＣＩ／ＮＨ₃）：ｍ／ｚ ３２０.３（Ｍ＋ＮＨ₄）⁺ ，３０３.３（Ｍ＋Ｈ）⁺，２８７.３。シス−２，３−ジメチルクロマノン１６ ：¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ ３：１）：δ６.１１（１Ｈ,ｓ）,５.８ ５（１Ｈ,ｓ）,４.４８（１Ｈ,ｄｑ；Ｊ＝６.６，３.２Ｈｚ），２.７７（２Ｈ ，ｔ；Ｊ＝７.４Ｈｚ），２.４４（１Ｈ，ｄｑ；Ｊ＝７.２，３.２Ｈｚ），１. ４７（２Ｈ，ｔｑ；Ｊ＝７.４，７.３Ｈｚ），１.２２（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝６.６Ｈ ｚ），０.９６（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝７.２Ｈｚ），０.８２（３Ｈ，ｔ；Ｊ＝７.３Ｈ ｚ）。ＭＳ（ＤＣＩ／ＮＨ₃）：ｍ／z３２０.３（Ｍ＋ＮＨ₄）⁺，３０３.３（Ｍ ＋Ｈ）⁺，２８７.３。 クロメン（±）−１７および（±）−１８ 炭酸カリウム（１.７３ｇ，１２. ５ｍｍｏｌ）、塩化プロパルギル（２.５５ｇ，２５.０ｍｍｏｌ）およびヨウ化 ｎ−ブチルアンモニウム（１.８５ｇ，５.００ｍｍｏｌ）を、２−ブタノン（６ ５ｍｌ）および乾ＤＭＦ（６.５ｍｌ）中の化合物１６（１.５１ｇ，５.００ｍ ｍｏｌ；シス−およびトランス−ジメチル異性体の１：１混合物）の懸濁液に添 加した。反応混合物を６０℃で１時間加熱し、ついで、無水ＺｎＣｌ₂（６.５０ ｍｍｏｌ,エーテル中１Ｍ溶液６.６５ｍｌ）を添加した。混合物を７０℃で１６ 時間加熱し、ついで、冷却し、ＮＨ₄Ｃｌ飽和水溶液（１２５ｍｌ）で反応停止 し、酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）で抽出し、ブラインで洗浄し、ついで、Ｎａ₂ ＳＯ₄で乾燥した。溶媒を減圧除去して油状物質（２.２８ｇ）を得、フラッシ ュクロマトグラフィー（２：３ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製してクロメ ン（±）−１７（６２２ｍｇ，３４％）および（±）−１８（４８６ｍｇ，２７ ％）を白色固体として得た。化合物（±）−１７について：融点１３ ０〜１３２℃。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ ３：１）：δ６.６７（１Ｈ ，ｄ；Ｊ＝１１.８Ｈｚ），６.０９（１Ｈ，ｓ），５.５８（１Ｈ，ｄ；Ｊ＝１ １.８ＨＺ），４.２６（１Ｈ，ｄｑ；Ｊ＝１０.７，６.３Ｈｚ），１.６３（２ Ｈ,ｔｑ；Ｊ＝７.４，７.３Ｈｚ），１.５２（２ｘ３Ｈ，ｓ），２.３３（１Ｈ ，ｄｑ；Ｊ＝１０.７，５.７Ｈｚ），２.８２（２Ｈ，ｔ；Ｊ＝７.４Ｈｚ），１ .４６（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝６.３Ｈｚ），１.１８（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝５.７Ｈｚ），０ .９２（３Ｈ，ｔ；Ｊ＝７.３Ｈｚ）。ＭＳ（ＤＣＩ／ＮＨ₃）：ｍ／ｚ ３８６. １（Ｍ＋ＮＨ₄）⁺，３６９.０（Ｍ＋Ｈ）⁺，１８６.１，１６８.１，１５１.０ 。元素分析 Ｃ₂₂Ｈ₂₄Ｏ₅として、計算値：Ｃ，７１.７２；Ｈ，６.５７、実測 値：Ｃ，７１.５７，Ｈ，６.６４。化合物（±）−１８について：融点１３０〜 １３１℃。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ ３：１）：δ６.７８（１Ｈ，ｄ ；Ｊ＝１１Ｈｚ），５.９８（１Ｈ，ｓ），５.６１（１Ｈ，ｄ；Ｊ＝１１Ｈｚ） ，４.６９（１Ｈ，ｄｑ；Ｊ＝６.６，３.２Ｈｚ)，２.８５（２Ｈ，ｔ；Ｊ＝７. ４Ｈｚ），２.６１（１Ｈ，ｄｑ；Ｊ＝７.２，３.３Ｈｚ），１.６３（２Ｈ，ｔ ｑ；Ｊ＝７.４，７.３Ｈｚ），１.５０（２ｘ３Ｈ，ｓ），１.４２（３Ｈ，ｄ； Ｊ＝７.０Ｈｚ），１.１４（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝７.２Ｈｚ），１.０１（３Ｈ，ｔ； Ｊ＝７.３Ｈｚ）。ＭＳ（ＤＣｌ／ＮＨ₃）：ｍ／ｚ ３８６.２（Ｍ＋ＮＨ₄）⁺ ，３６９.１（Ｍ＋Ｈ）⁺，１８６.１，１６８.１，１５１.１。元素分析 Ｃ₂₂ Ｈ₂₄Ｏ₅として、計算値：Ｃ，７１.７２；Ｈ，６.５７、実測値：Ｃ，７１.７２ ；Ｈ，６.７０。 化合物（±）−１８に関する¹ＨＮＭＲおよび質量スペクトルのデータは、カ ラノライドＤについて報告されたデータと同じであった。（±）−１８を水素化 ホウ素ナトリウムで還元して定量的に（±）−１９（融点５４〜５６℃）とした 。そのスペクトルのデータはカラノライドＣのデータと一致した。ケトン（±） −１７の水素化ホウ素ナトリウムでの還元は、あまり選択的でなく、（±）−カ ラノライドＡ（（±）−２０）とそのヒドロキシエピマー（収率９０％）とが７ ：３である混合物を生じた。これらは、容易には分離できなかった。しかしなが ら、ケトン（±）−１７のルシェ（Luche）還元（ゲマル（Gemal）ら，ジャーナ ル・ オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（J．Am．Chem．Soc．）第１０３巻 ：５４５４頁（１９８１年））は、非常に立体選択的で、クロマトグラフィー後 、（±）−２０（融点５６〜５８℃）が収率５９％で得られた。（±）−２０の¹ ＨＮＭＲスペクトル、質量スペクトル、およびＨＩＶ−１ ＲＴ阻害能は、天 然のカラノライドＡについて報告されたデータとよく一致した。この（±）−カ ラノライドＡの５段階合成（全体として収率約１５％）は、有効なエイズ（ＡＩ ＤＳ）治療薬であるカラノライド族の化学的研究のための実用的な基礎を形成す る。 （±）−カラノライドＡ（（±）−２０） 水素化ホウ素ナトリウム（３０ｍ ｇ，０.８１ｍｍｏｌ）を、２５℃において攪拌されているエタノール（５ｍｌ ）中のクロメン（±）−１７（１５０ｍｇ，０.４１ｍｍｏｌ）およびＣｅＣｌ₃ （Ｈ₂Ｏ）₇（１５５ｍｇ，０.４２ｍｍｏｌ）からなる混合物に、一度に添加し た。３０分後、混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥（Ｎ ａ₂ＳＯ₄）し、濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１：６ＥｔＯＡ ｃ／ヘキサン）により精製して純粋な（±）−２０（８８ｍg，収率５９％）を 得た。融点５６〜５８℃。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ６.６３（１Ｈ，ｄ；Ｊ ＝１０Ｈｚ），５.９５（１Ｈ，ｓ），５.５５（１Ｈ，ｄ；Ｊ＝１０Ｈｚ），４ .７３（１Ｈ，ｄ；Ｊ＝７.９Ｈｚ），３.９５（１Ｈ,ｍ），３.５５（１Ｈ，ｂ ｓ），２.８７（２Ｈ，ｍ），１.９３（１Ｈ，ｍ），１.６７（２Ｈ，ｍ），１. ５１（３Ｈ，ｓ），１.４６（３Ｈ，ｓ），１.４７（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝６.３Ｈｚ ），１.１５（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝６.８Ｈｚ），１.０４（３Ｈ，ｔ；Ｊ＝７Ｈｚ） 。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／z ３７１.２（Ｍ＋Ｈ）⁺，３５３.２。元素分析 Ｃ₂₂ Ｈ₂₆Ｏ₅・（１／４Ｈ₂Ｏ）として、計算値：Ｃ，７０.４７；Ｈ，７.１２、実測 値：Ｃ，７０.６０；Ｈ，７.１７。 ＮａＢＨ₄でのクロメン（±）−１７の還元： 水素化ホウ素ナトリウム（２ ５ｍｇ，０.７４ｍｍｏｌ）を、２５℃において攪拌されているエタノール（５ ｍｌ）中のクロメン（±）−１７（１００ｍｇ，０.２７ｍｍｏｌ）の懸濁液 に添加した。３０分後、抽出仕上げおよびフラッシュクロマトグラフィー（１： ８ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を行って（±）−２０とそのヒドロキシエピマーと の７：３混合物（¹ＨＮＭＲによる）を得た（９０ｍｇ，収率９０％）。 （±）−カラノライドＣ（（±）−１９）： エタノール（５ｍｌ）中におけ る、水素化ホウ素ナトリウム（３０ｍｇ，０.８８ｍｍｏｌ）での（±）−１８ （９７ｍｇ，０.２６ｍｍｏｌ）での還元を、すぐ上に記載のごとく行い、つい で、抽出仕上げを行い、純粋な化合物（±）−１９（９７ｍｇ，収率１００％） を単一の異性体として得た。融点５４〜５６℃。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：δ６ .６３（１Ｈ，ｄ；Ｊ＝１０Ｈｚ），５.９４（１Ｈ，ｓ），５.５４（１Ｈ．ｄ ；Ｊ＝１０Ｈｚ），５.０９（１Ｈ，ｔ；Ｊ＝６，１Ｈｚ），４.３９（１Ｈ，ｄ ｑ；Ｊ＝６.７，３.３Ｈｚ），３.２９（１Ｈ，ｄ；Ｊ＝１Ｈｚ；ＯＨ）、２.９ ２（１Ｈ，ｍ），２.８６（１Ｈ，ｍ），２.２８（１Ｈ，ｍ），１.６６（２Ｈ ，ｍ），１.４９（６Ｈ，ｓ）１.４２（３Ｈ，ｄ；Ｊ＝７Ｈｚ），１.１４（３ Ｈ，ｄ；Ｊ＝７Ｈｚ），１.０４（３Ｈ，ｔ；Ｊ＝７Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳＩ）： ｍ／ｚ ３７１.２（Ｍ＋Ｈ）⁺，３５３.０。元素分析 Ｃ₂₂Ｈ₂₆Ｏ₅・（１／４ Ｈ₂Ｏ）として、計算値：Ｃ，７０.４７；Ｈ，７.１２、実測値：Ｃ，７０.５０ ；Ｈ，７.１７。 塩化メチルアクリロイルを塩化１，１−ジメチルプロパルギルのかわりに使用 した以外は、合成のステップ「ｄ」に記載した方法を用いて、下記のケトンを合 成した。 ¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃，４００ＭＨｚ）δ６.６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ） ，６.０５（ｓ，１Ｈ），５.６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），４.６２（ｍ，１ Ｈ），２.９１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ），２.６１（ｍ，２Ｈ），１.６２（ ｍ，２Ｈ），１.５５（ｓ，３Ｈ），１.５４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），１.５ ２（ｓ，３Ｈ），１.０２９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。 上記ケトンをＮａＢＨ₄で還元することにより下記のアルコール類を合成し、 ついで、ＨＰＬＣにより分離した。 ６.６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），５.９５（ｓ，１Ｈ），５.５４（ｄ，１ Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），５.１７３（ｂｓ，１Ｈ），４.４４（ｍ，１Ｈ），３.１ （ｓ，１Ｈ），２.９（ｍ，２Ｈ），１.６〜２.１（ｍ，４Ｈ），１.４９８（ｓ ，３Ｈ），１.４９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），１４７（ｓ，３Ｈ），１.０３（ ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）。 ６.６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），５.９５（ｓ，１Ｈ），５.５２（ｄ，１ Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），５.２０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），４.３５（ｍ，１Ｈ） ，３.６（ｂｓ，１Ｈ），２.９０（ｍ，２Ｈ），２.３５（ｍ，１Ｈ）,１.９５ （ｍ，１Ｈ），１.５〜１.７（ｍ，２Ｈ），１.５０（ｓ，３Ｈ），１.４９（ｄ ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ），１.４７（ｓ，３Ｈ），１.０３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ ）。 逆転写酵素活性： 化合物２２ 化合物２３ ＩＣ₅₀（μＭ）＝１.７８ ＩＣ₅₀（μＭ）＝０.６ 上記実施例および記載は、本発明を十分に開示し、その好ましい具体例を包含 している。しかしながら、本発明は、本明細書に記載された具体例のみに限定さ れるのではなく、以下の請求の範囲の技術範囲内のすべての変更を包含する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/505 9454−4Ｃ Ｃ０７Ｄ 311/18 9360−4Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，Ｌ Ｖ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ヘルツバーグ，ロバート・フィリップ アメリカ合衆国ペンシルベニア州19335、 ダウニングタウン、ロングフィールズ・ウ ェイ121番 (72)発明者 ドレイヤー，ジェフリー・ビー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19355、 マルバーン、マーリン・ドライブ２番 (72)発明者 フレイヤー，アラン・ジェームズ アメリカ合衆国ペンシルベニア州19335、 ダウニングタウン、ロバート・ディーン・ ドライブ 823番 (72)発明者 ウエストリー，ジョン・ダブリュー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19010、 ブリン・モール、サミット・ドライブ・ビ ー302番 (72)発明者 シェネラ，バラン アメリカ合衆国ペンシルベニア州19403、 オーデュボン、メイプルウッド・ミュウズ 2749番 (72)発明者 ウエスト，マイケル・レオ オーストラリア国クイーンズランド州 4072、セント・ルチア、ザ・ユニバーシテ ィ・オブ・クイーンズランド、ザ・センタ ー・フォー・ドラッグ・デザイン・アン ド・ディベロプメント（番地の表示なし)

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式： ［Ｒ₁はＨ、アシル、ＣＯＣＨＲ₅ＮＲ₆Ｒ₇、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）₂またはＳ（Ｏ） （ＯＨ）₂であり；ここに、Ｒ₅はＨまたはいずれかの天然アミノ酸の側鎖であり ；Ｒ₆およびＲ₇は、ＨおよびＣ_1〜6アルキルからなる群より独立して選択され； Ｒ₆とＲ₇は一緒になって、該窒素を含む５〜７員の飽和複素環を形成することが でき； Ｒ₂はＨ、ヒドロキシル、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ（Ｃ_{1〜 6} アルキル)アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル−アミノ−Ｃ_1〜8 アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、シクロヘキシル 、アリールまたは複素環であり、ここに、アリールまたは複素環は、それぞれ、 未置換であってもよく、あるいは１個またはそれ以上のＣ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6 アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ_1〜4アルキル、アミノ、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ （Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル−ア ミノ−Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、ヒドロ キシル、ニトロ、アジドまたはハロゲンで置換されていてもよく； Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₈およびＲ₉は、Ｈ、メチルおよびエチルからなる群より独立して 選択される。ただし、Ｒ₂がｎ−プロピルであってＲ₁がＨである場合には、 Ｒ₈およびＲ₉の両方ともがメチルということはありえず；Ｒ₂がフェニルであっ てＲ₁がＨである場合には、Ｒ₈とＲ₉は、分子の平面に対してトランスの関係に あり、さらにＲ₉とＲ₁は分子の平面に対してシスの関係にある。］ により示される単独の化合物またはその医薬上許容される塩、あるいは担体と混 合された上記化合物またはその医薬上許容される塩。 ２．Ｒ₁がＨである請求項１記載の化合物。 ３．Ｒ₉がＨである請求項２記載の化合物。 ４．Ｒ₈がメチルである請求項３記載の化合物。 ５．Ｒ₂がフェニルである請求項４記載の化合物。 ６．Ｒ₂がｎ−プロピルである請求項４記載の化合物。 ７．立体化学が下記のもの： である請求項６記載の化合物。 ８．立体化学が下記のもの： である請求項６記載の化合物。 ９．Ｒ₂が、さらに一置換フェニルからなる群より選択される請求項１記載の 化合物。 １０．一置換フェニルがハロまたはニトロである請求項９記載の化合物。 １１．Ｒ₂がｐ−アミノメチルフェニルである請求項９記載の化合物。 １２．Ｒ₂が、さらにメチルアミノ、エチルアミノおよびジメチルアミノから なる群より選択される請求項１記載の化合物。 １３．Ｒ₂が、さらにメチル、エチル、ｎ−プロピルおよびイソプロピルから なる群より選択される請求項１記載の化合物。 １４．Ｒ₂がｎ−プロピルである請求項１３記載の化合物。 １５．Ｒ₂がシクロヘキシルである請求項１記載の化合物。 １６．Ｒ₂が未置換複素環である請求項１記載の化合物。 １７．Ｒ₂がピロリル、ピラゾリルまたはイミダゾリルである請求項１６記載 の化合物。 １８．Ｒ₂がピリジルまたはピリミジニルである請求項１６記載の化合物。 １９．Ｒ₂がフリルまたはテトラヒドロフリルである請求項１６記載の化合物 。 ２０．構造式： により示される単独の実質的に純粋な形態の化合物またはその医薬上許容される 塩、あるいは担体と混合された上記実質的に純粋な形態の化合物またはその医薬 上許容される塩。 ２１．構造式： により示される単独の実質的に純粋な形態の化合物またはその医薬上許容される 塩、あるいは担体と混合された上記実質的に純粋な形態の化合物またはその医薬 上許容される塩。 ２２．構造式： により示される化合物またはその医薬上許容される塩。 ２３．有効で毒性のない量の請求項１記載の化合物からなる医薬組成物。 ２４．イノフィルムＢおよびＰからなる群より選択される有効で毒性のない量 の化合物からなる医薬組成物。 ２５．レトロウイルスに感染している哺乳動物を治療する方法であって、有効 で毒性のない量の請求項１記載の化合物を、かかる治療を必要とする哺乳動物に 投与することからなる方法。 ２６．哺乳動物がヒトである請求項２５記載の方法。 ２７．レトロウイルスがヒト・免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である請求項２６ 記載の方法。 ２８．構造式： ［Ｒ₁はＨ、アシル、ＣＯＣＨＲ₅ＮＲ₆Ｒ₇、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）₂またはＳ（Ｏ） （ＯＨ）₂であり；ここに、Ｒ₅はＨまたはいずれかの天然アミノ酸の側鎖であり ；Ｒ₆およびＲ₇は、ＨおよびＣ_1〜6アルキルからなる群より独立して選択され； Ｒ₆とＲ₇は一緒になって、上記窒素を含む５〜７員の飽和複素環を形成すること ができ； Ｒ₂はＨ、ヒドロキシル、Ｃ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ（Ｃ_{1〜 6} アルキル)アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル−アミノ−Ｃ_1〜8 アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、シクロヘキシル 、アリールまたは複素環であり、ここに、アリールまたは複素環は、それぞれ、 未置換であってもよく、あるいは１個またはそれ以上のＣ_1〜6アルキル、Ｃ_1〜6 アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ_1〜4アルキル、アミノ、Ｃ_1〜6アルキルアミノ、ジ （Ｃ_1〜6アルキル）アミノ、１−アミノ−Ｃ_1〜8アルキル、Ｃ_1〜8アルキル−ア ミノ−Ｃ_1〜8アルキル、ジ−（Ｃ_1〜6アルキル）アミノＣ_1〜8アルキル、ヒドロ キシル、ニトロ、アジドまたはハロゲンで置換されていてもよく； Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₈およびＲ₉は、Ｈ、メチルおよびエチルからなる群より独立して 選択される。］ により示される化合物またはその医薬上許容される塩の製造方法であって、 （ａ）酸触媒存在下でフロログルシノールをβ−ケトエステルと反応させ； （ｂ）置換ハロゲン化アクリロイルでのアシル化を行い、ついで、塩基により 触媒される閉環を行い； （ｃ）塩基、酸およびｎＢｕ₄ＮＩ（またはＫＩ）の存在下でハロゲン化プロ パルギルと反応させ、混合物を加熱するこによりクロメン環を形成し；ついで （ｄ）環の１２位のケト基を還元する からなる方法（ただし、Ｒ₂がＨである場合には、フロログルシノールと反応す るエステルはプロピオラートエステルである）。 ２９．酸触媒がトリフルオロメタンスルホン酸である請求項２８記載の方法。 ３０．酸が、ＺｎＣｌ₂、ＢＣｌ₃、Ｅｔ₂ＡｌＣｌ、ＴｉＣｌ₄、ＡｌＣｌ₃、 ＡｇＮＯ₃および水銀塩からなる群より選択される請求項２８記載の方法。 ３１．酸がＺｎＣｌ₂である請求項３０記載の方法。 ３２．クロメン環形成が５０℃ないし１２０℃で起こる請求項２８記載の方法 。 ３３．クロメン環形成が７０℃で起こる請求項３２記載の方法。 ３４．還元が、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ₄）により触媒される請求 項２８記載の方法。 ３５．還元が、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ₄）および三塩化セリウム （ＣｅＣｌ₃）により触媒される請求項２８記載の方法。