JPH08311098A - 新規ペプチド類およびそれを含有するインターロイキン６拮抗剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 構成アミノ酸数が比較的少ないペプチド又は
その誘導体でＩＬ−６に拮抗的に作用し、その活性発現
を阻害出来るペプチド類およびそれを含有するＩＬ−６
拮抗剤を提供する。 【構成】 一般式（Ｉ）：Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｙ（式中、
Ｘは水素、アミノ保護基、アミノ酸残基または２〜１０
個のアミノ酸が結合したペプチド残基を示す。Ｙは水酸
基、アミノ基、カルボキシル保護基、アミノ酸残基また
は２〜５個のアミノ酸が結合したペプチド残基を示す。
Ａはグアニジノ基に保護基を有してもよいＡｒｇ残基ま
たはそれ以外のアミノ酸残基を示す。Ｄはグアニジノ基
に保護基を有してもよいＡｒｇ残基である。ＢはＬｅｕ
残基または非天然型アミノ酸を含むそれ以外のアミノ酸
残基で、そのアミノ酸の有する側鎖官能基には保護基を
有していてもよい。）で示されるペンタペプチド類、ま
たはそれを含有するインターロイキン６拮抗剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はインターロイキン６拮抗
作用を有する新規なペプチド類または医薬として許容さ
れるその塩類ならびに医薬として許容される担体と共に
前記ペプチド類もしくはその塩類を含有し、ヒトインタ
ーロイキン６の活性発現を阻害する新規なインターロイ
キン６拮抗剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】Ｂ細胞の抗体産生を誘導するＢ細胞分化
因子（ＢＣＤＦ／ＢＳＦ−２）に関するｃＤＮＡのクロ
ーニングやアミノ酸配列の決定等がなされたことによ
り、該Ｂ細胞分化因子は、これまで互いに異なる物質と
して独立して研究されていたインターフェロンβ₂（Ｉ
ＦＮβ₂）、ハイブリドーマ／プラズマサイトーマ増殖
因子（ＨＰＧＦ）そして肝細胞刺激因子（ＨＳＦ）と同
一物質であることが判明し、これらの物質を総称してイ
ンターロイキン６（以下、ＩＬ−６と略記する）と呼ぶ
ようになった。

【０００３】このＩＬ−６は、上述したようにＢ細胞分
化因子として抗体産生を増強させたり、また肝細胞刺激
因子として急性期タンパク質の合成を誘導する等、炎症
や感染に対する生体防御機構において極めて重要な機能
を担う重要なタンパク質であるが、その一方では、該Ｉ
Ｌ−６の過剰産生が原因と考えられる疾患も問題になっ
ている。例えばメディカル・イムノロジー（Medical Im
munology）第１５巻、１９５〜２０１頁（１９８８年）
には、ＩＬ−６と自己免疫疾患との関連について報告さ
れている。また、現代化学増刊１８「サイトカイン」免
疫応答及び細胞の増殖・分化因子、大沢利昭編、７１〜
８５頁（１９９０年、出版：東京化学同人）にはＩＬ−
６が原因物質として関与する疾患として、慢性関節リュ
ウマチ、心房内粘液腫、キャッスルマン病、ミエロー
マ、レンネルＴリンパ腫、メサンギウム増殖性腎炎等の
種々の自己免疫疾患が挙げられている。

【０００４】この様にＩＬ−６は種々の自己免疫疾患の
原因物質と考えられるので、これらの疾患を治療するこ
とを目的として、ＩＬ−６分子の活性発現部位に関する
研究、及びこの活性発現部位に対して拮抗的に作用し、
ＩＬ−６の働きを阻害する物質の開発が進められてい
る。

【０００５】ＩＬ−６分子の活性発現部位に関する研究
報告によれば、例えばJust P. J. Brakennhoff等は、従
来シグナルペプチドと考えられていたＩＬ−６分子のＮ
末端の２８個のアミノ酸からなるペプチド残基はＩＬ−
６の活性発現には不要であると報告している（The Jour
nal of Immunology、１４３巻、１１７５〜８２頁、１
９８９年）。また、A. Kruttgen等は、ＩＬ−６のＣ端
から３番目のアミノ酸が活性発現に必須であると報告し
ている（FEBS Letters、２７３巻、９５〜９８頁、１９
９０年）。更に、C. Nishimura等はＩＬ−６分子をＮＭ
Ｒにより解析し、ＩＬ−６がその受容体に結合する際に
は、Ｃ端に近い部分が結合に重要な働きをすると予測し
ている（FEBS Letters、２８１巻、１６７〜１６９頁、
１９９１年）。しかしながら、いずれの報告においても
ＩＬ−６の活性発現部位は特定できておらず、その活性
発現に対して拮抗作用を有する物質は未だ発見されてい
ない。

【０００６】また、ＩＬ−６の活性発現部位に対して拮
抗的に作用し、ＩＬ−６の働きを阻害すると考えられる
物質として、例えばＢＳＦ−２（ＩＬ−６と同一物質）
のＮ末端及びＣ末端から複数個のアミノ酸が欠損したポ
リペプチドが開示されている（特開平２−１８８６００
号公報）。しかし、上記公開公報で開示されている物質
は全アミノ酸数が２０個以上からなるペプチドであり、
この様な長鎖のペプチドを製造するには複数の化学合成
法を駆使する必要があり、操作が煩雑で、且つ技術的に
も困難な問題を伴うことが多く、実用性に欠けるもので
ある。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な問題に鑑みてなされたものであり、その目的は、構成
アミノ酸数が比較的少ないペプチドまたはその誘導体で
あってＩＬ−６に対して拮抗的に作用し、その活性発現
を阻害することの出来るペプチド類または医薬として許
容されるその塩類およびそれを含有するＩＬ−６拮抗剤
を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、一般式
（Ｉ）：Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｙ（式中、Ｘは水素、アミノ
保護基、アミノ酸残基または２〜１０個のアミノ酸が結
合したペプチド残基を示す。Ｙは水酸基、アミノ基、カ
ルボキシル保護基、アミノ酸残基または２〜５個のアミ
ノ酸が結合したペプチド残基を示す。Ａはグアニジノ基
に保護基を有してもよいアルギニン残基またはそれ以外
のアミノ酸残基を示す。Ｄはグアニジノ基に保護基を有
してもよいアルギニン残基である。Ｂはロイシン残基ま
たは非天然型アミノ酸を含むそれ以外のアミノ酸残基
で、そのアミノ酸の有する側鎖官能基には保護基を有し
ていてもよい。）で示されるペプチド類または医薬とし
て許容されるその塩類を提供し、更にはこれらと共に医
薬として許容される担体を含有することを特徴とするイ
ンターロイキン６拮抗剤を提供するものである。また本
発明は一般式（ＩＩ）：Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ａｒｇ−ＮＨ
₂（式中、Ｅ、Ｆ及びＨはその官能基に保護基を有して
いてもよいアミノ酸残基であり、Ｇはグアニジノ基に保
護基を有してもよいアルギニン残基またはそれ以外のア
ミノ酸残基を示す。）で示されるペンタペプチド類また
は医薬として許容されるその塩類を提供し、更にはこれ
らと共に医薬として許容される担体を含有することを特
徴とするインターロイキン６拮抗剤を提供するものであ
る。

【０００９】なお、本明細書においてアミノ酸残基、保
護基、溶媒等を略号で表示する場合には、ＩＵＰＡＣ及
びＩＣＢの規定または当該分野における慣用記号に従う
ものとする。表−１から表−３にそれらの慣用記号を示
す。またペプチド中のアミノ酸配列は慣用の記載方法に
従い、Ｎ末端のアミノ酸残基が左側に位置し、Ｃ末端の
アミノ酸配列が右側に位置するように記述する。

【００１０】

【表１】

【００１１】

【表２】

【００１２】

【表３】

【００１３】本発明の一般式（Ｉ）において、Ｘは水
素、アミノ保護基、アミノ酸残基または２〜１０個のア
ミノ酸が結合したペプチド残基である。上記アミノ保護
基としては、Ｂｏｃ基、トリクロロエトキシカルボニル
基、ｔ−アミルオキシカルボニル基等の置換基を有して
もよいアルコキシカルボニル基；シクロペンチルオキシ
カルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基等の
置換基を有してもよいシクロアルコキシカルボニル基；
Ｚ基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｃｌ
−Ｚ基、Ｂｒ−Ｚ基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボ
ニル基、アダマンチルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ基
等の置換基を有してもよいアラルキルオキシカルボニル
基；アセチル基、トリフルオロアセチル基、ホルミル
基、プロピオニル基、フェニルアセチル基、フェニルプ
ロピオニル基、ベンゼンスルフォニル基、Ｔｏｓ基等の
置換基を有してもよいアシル基等を例示することができ
る。また、アミノ酸残基としてはＰｈｅまたはＴｙｒを
例示することができる。さらにペプチド残基としては、
Ｈ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ
−、Ｈ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−、
Ｈ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−、Ｈ−Ｓｅｒ−
Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−、Ｈ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−を例示するこ
とができる。

【００１４】また一般式（Ｉ）において、Ｙは水酸基、
アミノ基、カルボキシル保護基、アミノ酸残基または２
〜５個のアミノ酸が結合したペプチド残基である。上記
カルボキシル保護基としては、メチルアミノ基またはエ
チルアミノ基等の、モノまたはジ（低級）アルキルアミ
ノ基；ベンジルアミノ基またはフェネチルアミノ基等の
置換基を有してもよいアリールアルキルアミノ基；アニ
リド基またはナフチルアミノ基等の置換基を有してもよ
いアリルアミノ基；メトキシ基、エトキシ基等の低級ア
ルコキシ基；フェニルオキシ基またはナフチルオキシ基
等のアリールオキシ基；ベンジルオキシ基等のアリール
（低級）アルコキシ基；複素環（低級）アルコキシ基等
を例示することができる。また、アミノ酸残基として
は、Ｇｌｙ、Ｐｈｅを例示することができる。さらに、
ペプチド残基としては、−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−ＮＨ₂を例
示することができる。

【００１５】一般式（Ｉ）中、Ａはグアニジノ基に保護
基を有してもよいＡｒｇ残基またはそれ以外のアミノ酸
残基を示し、Ｄはグアニジノ基に保護基を有してもよい
Ａｒｇ残基である。それらの保護基としては、ニトロ
基；Ｂｏｃ基、Ｚ基またはアダマンチルオキシカルボニ
ル基等のアラルキルオキシカルボニル基；Ｔｏｓ基等の
置換基を有してもよいアリールスルフォニル基；トリチ
ル基等を例示することができる。一般式（Ｉ）中、Ａが
アミノ酸残基である場合、Ｔｙｒ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｔ
ｒｐ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｓ
ｐ、Ｇｌｕ、Ｍｅｔなどのアミノ酸残基を例示すること
ができる。

【００１６】ＢはＬｅｕ残基または非天然型アミノ酸を
含むそれ以外のアミノ酸残基であり、これらアミノ酸の
有する側鎖官能基はＣｌ₂−Ｂｚｌを含む適当な保護基
で保護されていてもよい。ここで用いられる具体的な非
天然型アミノ酸を含むアミノ酸残基としては、D型アミ
ノ酸の他、Ｔｒｐ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、
Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｍ
ｅｔ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、ノルロイシン、ｔｅｒ
ｔ−ロイシン、シクロヘキシルアラニン、フェニルグリ
シン、ホモフェニルアラニン、β−アラニン、ホモセリ
ン、ペニシラミン、ナフチルアラニン等の天然型または
非天然型アミノ酸の残基を例示することができる。

【００１７】一方、一般式（ＩＩ）において、Ｅ、Ｆ及
びＨはアミノ酸残基を示し、Ｇはグアニジノ基に保護基
を有していてもよいアルギニン残基またはそれ以外のア
ミノ酸残基を示す。それらＥ、Ｆ及びＨのアミノ酸とし
てはＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌ
ｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅ
ｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙ
ｒ、Ｖａｌから任意に選ぶことが出来る。

【００１８】上記本発明において用いられるペプチド類
を合成するに当たっては、ペプチド合成において通常用
いられる方法、例えば固相合成法または液相合成法を用
いることが出来る。具体的には例えば、「続医薬品の開
発 第１４巻 ペプチド合成」監修 矢島治明（廣川書
店発行、１９９１年）に記載の方法に準じて行えばよ
い。固相合成法としては例えば、有機溶媒に不溶性であ
る支持体に、合成しようとするペプチドのＣ末端に対応
するアミノ酸を結合させ、α−アミノ基及び側鎖官能基
を適当な保護基で保護したアミノ酸をＣ端からＮ端方向
の順番に、１アミノ酸ずつ縮合させる反応と、樹脂上に
結合したアミノ酸またはペプチドのα−アミノ基の該保
護基を脱離させる反応を交互に繰り返すことにより、ペ
プチド鎖を延長させる方法が用いられる。固相ペプチド
合成法は、用いられる保護基の種類により、Ｂｏｃ法と
Ｆｍｏｃ法とに大別される。

【００１９】この様にして目的ペプチドを合成した後、
脱保護反応及びペプチド鎖の支持体からの切断を行う。
ペプチド鎖との切断反応には、Ｂｏｃ法ではフッ化水素
またはトリフルオロメタンスルホン酸を、またＦｍｏｃ
法ではＴＦＡを用いるのが適当である。例えばＢｏｃ法
では、フッ化水素中で上記保護ペプチド樹脂をアニソー
ル存在下にて処理し、保護基の脱離と支持体からの切断
を行ってペプチドを回収する。これを凍結乾燥すること
により、粗ペプチドが得られる。一方、Ｆｍｏｃ法では
ＴＦＡ中において上記と同様の操作で脱保護反応及びペ
プチド鎖の支持体からの切断反応を行うことが可能であ
る。

【００２０】この様にして得られた粗ペプチドを高速液
体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略記する）に供
することにより分離・精製を行う。その溶出に当たって
は、タンパク質の精製に通常用いられる水−アセトニト
リル系溶媒を用いて最適条件下で行うのがよい。得られ
たクロマトピークに相当する画分を分取し、これを凍結
乾燥する。この様にして精製した精製ペプチド画分につ
いて、マススペクトル分析による分子量解析、アミノ酸
組成分析、或いはアミノ酸配列解析等により同定を行
う。

【００２１】本発明において用いられる、医薬として許
容される上記ペプチド類の塩類とは生理学的に許容され
る塩類であり、例えば、塩酸、硫酸、燐酸、ギ酸、酢
酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸、フ
マル酸、シュウ酸、リンゴ酸、クエン酸、オレイン酸、
パルミチン酸等の無機酸または有機酸との塩；ナトリウ
ム、カリウム、カルシウム等のアルカリ金属またはアル
カリ土金属との塩；トリエチルアミン、ジエタノールア
ミン、ｔ−ブチルアミン、ベンジルアミン、ジシクロヘ
キシルアミン、アルギニン等の有機塩基との塩等が挙げ
られる。これらのペプチド類の塩類は、通常の塩生成反
応を用いて調製することが出来る。

【００２２】本発明に用いられる上記ペプチド類及び医
薬として許容されるその塩類（以下、これらを単にペプ
チド類で代表する場合がある）は、ヒトＩＬ−６の受容
体もしくはその情報伝達タンパク質であるｇｐ１３０に
拮抗的に作用する結果、種々の活性発現を阻害すること
が出来ると考えられる。従って、本発明のペプチド類は
ＩＬ−６過剰産生が原因と考えられる自己免疫疾患等の
種々の疾患等の治療薬として有用である。この様な自己
免疫疾患としては、膠原病としてＳＬＥ（全身性エリテ
マトーデス）、慢性関節リュウマチ、強皮症（進行性全
身性硬化症）、結節性多発性動脈炎、ベーチェット病
（腸型、血管型、神経型、口腔、皮膚、目、外陰部、関
節、副睾丸、肺、腎）、乾癬、ウエゲナー肉芽腫、大動
脈炎症候群、シェーグレン症候群、自己免疫睾丸炎等、
腎疾患としてＩ型糖尿病（膵島炎）、ネフローゼ症候
群、糸球体腎炎（糸球体硬化症）、間質性腎炎、グッド
パスチャー症候群、糖尿病性腎症、溶血性尿毒症、虚血
性急性腎不全、慢性腎不全、糸球体内血栓抑制等が挙げ
られる。また、原発性粘膜水腫、バセドウ病、悪性貧
血、自己免疫性萎縮性胃炎、早発閉経、男性不妊症、重
症筋無力症、若年性糖尿病、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、
交感性眼炎、水晶性ぶどう膜炎、多発性硬化炎、溶血性
貧血、持発性血小板減少症、原発性胆汁性肝硬変、活動
性慢性肝炎、持発性肝硬変、潰瘍性大腸炎、円板状紅斑
性狼瘡、皮膚筋炎、橋本甲状腺炎、アジソン病、クロー
ン病等も挙げられる。

【００２３】本発明において用いられる上記ペプチド類
またはそれらの塩類は、カプセル剤、マイクロカプセル
剤、錠剤、顆粒剤、粉末、トローチ剤、丸剤、軟膏、坐
剤、注射剤、懸濁剤、シロップ剤、乳剤、液剤、腸溶コ
ーティング剤、噴霧剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤等の慣
用の医薬製剤の形で投与することが出来る。投与経路と
しては経口、皮下、筋肉内、静脈内、膣内、直腸内、口
腔内（頬側及び舌下を含む）、経皮、鼻粘膜等を含む様
々な経路によって投与することが出来る。

【００２４】上記ペプチド類の製剤化に当たっては、医
薬として許容される担体を用いて常法によって製造する
ことが出来る。この様な担体としては、例えばスクロー
ス、デンプン、マンニット、ソルビット、ラクトース、
グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、
炭酸カルシウム等の賦形剤；例えばセルロース、メチル
セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリプロピ
ルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレン
グリコール、スクロース、デンプン等の結合剤；例えば
デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプ
ロピルデンプン、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウ
ム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤；例えばステアリン
酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナ
トリウム等の滑択剤；例えばクエン酸、メントール、グ
リシン、オレンジ末等の矯味剤；例えば安息香酸ナトリ
ウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパラベン、プロピル
パラベン等の保存剤；例えばクエン酸、クエン酸ナトリ
ウム、酢酸等の安定化剤；例えばメチルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸
濁化剤；例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース等
の分散剤；例えば水等の希釈剤；例えばカカオバター、
白色ワセリン、ポリエチレングリコール等の基剤ワック
スのような、製剤化に慣用の有機または無機の各種担体
が挙げられる。

【００２５】上記本発明の薬剤の投与量は、症状の程
度、患者の全身状態、年齢、体重等に応じて十分な治療
（または予防）効果を発揮し得る量であり、投与経路や
剤形等を考慮して適宜決定されるものであるが、有効成
分であるペプチド類の量として、経口投与の場合は、通
常成人において一日当たり０．０１μｇ〜２ｇ／ｋｇ／
日であり、好ましくは０．１μｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ／
日である。また、通常成人において一回当たり０．０１
μｇ〜２００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは０．１μｇ
〜１００ｍｇ／ｋｇである。また、非経口投与の場合
は、通常成人において一日当たり０．００１μｇ〜１ｇ
／ｋｇ／日であり、好ましくは０．０１μｇ〜２００ｍ
ｇ／ｋｇである。また、通常成人において一回当たり
０．００１μｇ〜５００ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは
０．０１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。

【００２６】

【実施例】以下実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明
するが、下記実施例は本発明を制限するものではなく、
前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で実施することは全て
本発明の技術的範囲に包含される。

【００２７】（実施例１；化合物（１）：H-Trp-Asn-Se
r-Ser-Phe-Tyr-Arg-Leu-Arg-NH₂の合成）化合物（１）
の合成は、アプライド・バイオシステムズ社製ペプチド
合成装置ＡＢＩ４３０Ａを用い、一般にＢｏｃ法と呼ば
れる固相合成法で行った。使用した樹脂は、通常のＢｏ
ｃ法による固相合成法においてＣ端がアミド基であるペ
プチドを合成する際に用いられるｐ−メチルベンズヒド
リルアミン樹脂（ＭＢＨＡ樹脂、ＮＨ₂基含量：０．５
７ｍｅｑ／ｇ、（株）ペプチド研究所より購入）であ
る。なお、使用樹脂量は８７７ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ相
当量）である。本実施例で使用したアミノ酸は、Ｂｏｃ
基でアミノ基を保護したＬ−アミノ酸であり、ＭＢＨＡ
樹脂に対して等量関係で４倍に相当する量（今回は樹脂
が０．５ｍｍｏｌ等量なので、保護アミノ酸は２ｍｍｏ
ｌ）を用いた。具体的に用いた保護アミノ酸及びそれら
の量を表−４に示す。化合物の合成は、上記樹脂に目的
とするペプチドのＣ末端からＮ末端方向へ順次対応する
アミノ酸を縮合反応させることにより得た。なお本発明
において保護アミノ酸の樹脂への結合は、縮合させるア
ミノ酸がＡｓｎ、Ｇｌｎ及びＡｒｇの場合にはダブルカ
ップリング法（Ｂ）で行い、それ以外の保護アミノ酸の
場合には、シングルカップリング法（Ａ）を用いた。得
られた化合物は、ＨＰＬＣ分析とアミノ酸分析とを行っ
た。ＨＰＬＣ分析の条件及びアミノ酸分析法、固相合成
法を以下に示す。なお、各実施例１から８６で得られた
ペプチド類をそれぞれ化合物（１）〜化合物（８６）と
し、その構造式を表−５、表−６に示す。

【００２８】（ＨＰＬＣによる分析条件）カラムにＴＳ
Ｋｇｅｌ ＯＤＳ−１２０Ｔ（０．４６ｃｍφ×２５ｃ
ｍ）（東ソー社製）を使用し、溶出液にアセトニトリル
と０．１％（Ｗ／Ｗ）ＴＦＡ水溶液の混合溶液を流速
１．０ｍｌ／ｍｉｎで使用した。検出装置はＵＶ検出器
を用い波長２１４ｎｍで測定した。

【００２９】（アミノ酸の測定）６Ｎ塩酸で各化合物を
酸分解した（１１０℃、２４時間）後、各化合物のアミ
ノ酸組成を日立アミノ酸分析装置（Ｌ−８５００）で分
析した。

【００３０】（固相合成法） （Ａ）シングルカップリング法で行う場合 ａ）３３％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で８０秒間攪拌する。 ｂ）更に、５０％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で１８．５分間
攪拌する。 ｃ）更に、ＤＣＭで３回洗浄する。 ｄ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌を
２回繰り返す。 ｅ）更に、ＤＭＦで５回洗浄する。 ｆ）縮合試薬としてＤＣＣを用い、保護アミノ酸の縮合
反応を行う。 ｇ）ＤＣＭで５回洗浄する。 （Ｂ）ダブルカップリング法で行う場合 ａ）３３％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で８０秒間攪拌する。 ｂ）更に、５０％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で１８．５分間
攪拌する。 ｃ）更に、ＤＣＭで３回洗浄する。 ｄ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌を
２回繰り返す。 ｅ）更に、ＤＭＦで５回洗浄する。 ｆ）縮合試薬としてＤＣＣ−ＨＯＢｔを用い、保護アミ
ノ酸の第１回目の縮合反応を行う。 ｇ）ＤＣＭで３回洗浄する。 ｈ）次に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌す
る。 ｉ）更に、ＤＭＦで１回洗浄する。 ｊ）更に、ＤＣＭで３回洗浄する。 ｋ）縮合試薬としてＤＣＣ−ＨＯＢｔを用い、保護アミ
ノ酸の第２回目の縮合反応を行う。 ｌ）ＤＭＦで１回洗浄する。 ｍ）次に、ＤＣＭで５回洗浄する。

【００３１】上記固相合成法によって、Ｃ末端から順次
保護アミノ酸を樹脂に縮合させ化合物（１）を樹脂上に
合成した。次いでＴＦＡを用いて化合物（１）のＮ末端
保護基であるＢｏｃ基を除去した。得られたペプチド樹
脂をグラスフィルター上にとり、ＤＣＭで洗浄後真空乾
燥し１．４９ｇの保護ペプチド樹脂を得た。この保護ペ
プチド樹脂からのペプチドの切り出しはＬｏｗ−Ｈｉｇ
ｈ法によった。すなわち、この保護ペプチド樹脂８３０
ｍｇを、フッ化水素反応装置（（株）ペプチド研究所
製）を用い、フッ化水素９ｍｌ、アニソール１．０ｍ
ｌ、エチルメチルスルフィド０．１ｍｌの混液中で０℃
で１時間処理した。混液中のフッ化水素と添加試薬を減
圧留去した後、残査を再びフッ化水素８ｍｌ、アニソー
ル０．８ｍｌ、エタンジチオール０．０８ｍｌの混液中
で０℃で１時間処理した。混液中のフッ化水素と添加試
薬を減圧留去した後、残査をグラスフィルター上でジエ
チルエーテルにより十分に洗浄し、減圧下で乾燥させ
た。次に、得られた残査を０．１Ｍ酢酸水溶液で抽出
し、その抽出液を凍結乾燥することにより化合物（１）
を含む粗生成物２３０ｍｇを得た。このうち１００ｍｇ
の粗生成物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：東ソー社製「ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ１２０−Ｔ」、
２．５４ｃｍφ×３０ｃｍ）を用いて、アセトニトリル
と０．１％（Ｗ／Ｗ）ＴＦＡ水溶液の混合溶媒による直
線グラジュエント法で溶出させ、化合物（１）を含む画
分を分取し、精製物３２ｍｇを得た。得られた精製物を
５０％（Ｗ／Ｗ）の酢酸溶液に溶解し、陽イオン交換樹
脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＡ−４１０（オルガノ株式
会社製）に通すことにより、化合物（１）の酢酸塩２５
ｍｇを得た。化合物（１）のＨＰＬＣ測定結果及びアミ
ノ酸分析による確認の結果をそれぞれ表−１３、表−１
４に示す。ここに、表−１３においてＡは溶出開始時に
おけるアセトニトリルと０．１％（Ｗ／Ｗ）ＴＦＡ水溶
液の混合比率を示し、Ｂは溶出開始３０分後の溶出液の
混合比率を示す。溶出液の混合比率は直線的に変化させ
た。

【００３２】（実施例２；化合物（２）：H-Asn-Ser-Se
r-Phe-Tyr-Arg-Leu-Arg-NH₂の合成）表−７に記載の保
護アミノ酸を用いて、Ｂｏｃ法により化合物（２）を合
成した。保護ペプチドの処理として、全ての保護アミノ
酸を樹脂に縮合させた後に、ＴＦＡを用いて目的ペプチ
ドのＮ末端保護基であるＢｏｃ基を除去した。得られた
ペプチド樹脂をグラスフィルター上にとり、ＤＣＭで洗
浄後真空乾燥することにより、１．３２ｇの保護ペプチ
ド樹脂を得た。この保護ペプチド樹脂４５７ｍｇを、フ
ッ化水素反応装置（（株）ペプチド研究所製）を用い、
フッ化水素９ｍｌ、アニソール１．０ｍｌの混液中で０
℃で１時間処理した。混液中のフッ化水素と添加試薬を
減圧留去した後、残査をグラスフィルター上でジエチル
エーテルにより十分に洗浄し、減圧下で乾燥させた。こ
の様にして得られた残査を０．１Ｍ酢酸水溶液で抽出
し、その抽出液を凍結乾燥することにより化合物（２）
を含む粗生成物９８ｍｇを得た。そのうち、９０ｍｇの
粗生成物を分取用ＨＰＬＣ（カラム：東ソー社製「ＴＳ
Ｋｇｅｌ ＯＤＳ１２０−Ｔ」、２．５４ｃｍφ×３０
ｃｍ）を用い、アセトニトリルと０．１％（Ｗ／Ｗ）Ｔ
ＦＡ水溶液の混合溶媒による直線グラジュエント法で溶
出させ、化合物（２）を含む画分を分取し、精製物３２
ｍｇを得た。得られた精製物を５０％（Ｗ／Ｗ）の酢酸
溶液に溶解し、陽イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ
ＩＲＡ−４１０（オルガノ株式会社製）に通すことによ
り、化合物（２）の酢酸塩２８ｍｇを得た。

【００３３】（実施例３〜１０）表−５に記載した構造
式の化合物（３）〜（１０）の合成を、実施例２の方法
と同様にして、表−７に示す保護アミノ酸を使用して行
った。なお、化合物（６）の合成の際には、Ｃ末端のア
ミノ酸がフリーのカルボン酸であるため、Ｂｏｃ−Ａｒ
ｇ（Ｔｏｓ）−ＰＡＭ樹脂をＭＢＨＡ樹脂の代わりに使
用した。

【００３４】（実施例１１；化合物（１１）：H-Arg-Le
u-Arg-Gly-NH₂の合成）化合物（１１）の合成は、簡易
型ペプチド合成装置（国産化学（株）製、商標「コック
さん」）を用い、一般にＦｍｏｃ法と呼ばれる固相合成
法で行った。本実施例に用いる樹脂は、Ｃ末端がアミド
基であるのでＦｍｏｃ用のアミド樹脂（国産化学（株）
より購入）（アミノ基含量が０．３ｍｍｏｌ相当の樹脂
量を使用する）を用いた。

【００３５】Ｆｍｏｃ法による化合物（１１）の合成 ａ）ＤＭＦ６ｍｌで上記樹脂を１分間攪拌する。これを
３回繰り返す。 ｂ）更に、２０％（Ｗ／Ｗ）ピペリジンのＤＭＦ溶液６
ｍｌで３分間攪拌する。これを３回繰り返す。 ｃ）更に、２０％（Ｗ／Ｗ）ピペリジンのＤＭＦ溶液６
ｍｌで１５分間攪拌する。 ｄ）更に、ＤＣＭ６ｍｌで１分間攪拌する。これを２回
繰り返す。 ｅ）更に、ＤＭＦ６ｍｌで１分間攪拌する。これを２回
繰り返す。 ｆ）更に、メタノール６ｍｌで１分間攪拌する。 ｇ）更に、ＤＣＭ６ｍｌで１分間攪拌する。これを２回
繰り返す。 ｈ）更に、ＮＭＰ６ｍｌで１分間攪拌する。これを３回
繰り返す。 ｉ）次に、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（３５７ｍｇ，１．
２ｍｍｏｌ）の組成からなる保護アミノ酸のＮＭＰ
（２．６ｍｌ）溶液に、ＨＯＢｔ（１．２ｍｍｏｌ）及
びＴＢＴＵ（１．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（２．４ｍ
ｌ）、並びにＤＩＥＡ（２．４ｍｍｏｌ）のＮＭＰ溶液
（１．０ｍｌ）を加え、室温で７分間攪拌する。なお、
以下に用いるアミノ酸は全て上記樹脂中に含まれるアミ
ノ基の含量の４倍量（１．２ｍｍｏｌ）を加える。 ｊ）上記ｉ）で得られた溶液を、上記ａ）〜ｈ）の工程
を経た樹脂に添加した後、３０分間攪拌する。 ｋ）上記樹脂をメタノール６ｍｌで１分間攪拌し、洗浄
する。 ｌ）更に、上記樹脂をＮＭＰ６ｍｌで１分間攪拌し、洗
浄する。これを３回繰り返す。 ｍ）更に、上記樹脂をＤＣＭ６ｍｌで１分間攪拌、洗浄
する。これを５回繰り返す。この様にして、樹脂にＦｍ
ｏｃ−Ｇｌｙを結合させる。 ｏ）上記ｉ）においてＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨの代わり
にＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（７９５ｍｇ，
１．２ｍｍｏｌ）を用いたこと以外はｉ）と同様にして
溶液を調製し、引き続きｊ）〜ｍ）の工程を行うことに
より、樹脂に上記組成の保護アミノ酸を結合させる。 ｐ）上記ｉ）においてＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨの代わり
にＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（４２４ｍｇ，１．２ｍｍｏ
ｌ）を用いたこと以外はｉ）と同様にして溶液を調製
し、引き続きｊ）〜ｍ）の工程を行うことにより、樹脂
に上記組成の保護アミノ酸を結合させる。 ｑ）上記ｉ）においてＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨの代わり
にＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（７９５ｍｇ，
１．２ｍｍｏｌ）を用いたこと以外はｉ）と同様にして
溶液を調製し、引き続きｊ）〜ｍ）の工程を行うことに
より、樹脂に上記組成の保護アミノ酸を結合させる。

【００３６】化合物（１１）を構成する全ての保護アミ
ノ酸を樹脂に結合させた後、真空乾燥することにより８
４０ｍｇの保護ペプチド樹脂を得た。このうち、４３０
ｍｇの保護ペプチド樹脂を５％フェノールを含むＴＦＡ
溶液（１５ｍｌ）で処理し、目的ペプチドを樹脂から切
り出すと同時に不要な側鎖保護基の除去を行った。反応
液中の不溶物をグラスフィルターで除去し、濾液にジエ
チルエーテルを加え、得られた沈澱物をグラスフィルタ
ーで回収し、真空乾燥することにより化合物（１１）を
含む粗生成物７０ｍｇを得た。得られた粗生成物のうち
４０ｍｇを、分取用ＨＰＬＣ（カラム：東ソー社製「Ｔ
ＳＫｇｅｌ ＯＤＳ１２０−Ｔ」、２．５４ｃｍφ×３
０ｃｍＬ）を用い、アセトニトリルと０．１％（Ｗ／
Ｗ）ＴＦＡ水溶液の混合溶媒による直線グラジュエント
法で溶出させ、化合物（１１）を含む画分を分取し、精
製物２５ｍｇを得た。これを５０％（Ｗ／Ｗ）の酢酸溶
液に溶解し、陽イオン交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ Ｉ
ＲＡ−４１０（オルガノ株式会社製）に通すことによ
り、化合物（１１）の酢酸塩１８ｍｇを得た。

【００３７】（実施例１２〜１６）表−５に記載の化合
物（１２）〜（１６）は、表−７に示す保護アミノ酸を
用い、実施例１１と同様の方法により合成した。

【００３８】（実施例１７；化合物（１７）：H-Arg-Le
u-Arg-NHCH₂C₆H₅の合成）Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）
−ＯＨ（６６３ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（３２１
ｍｇ，１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１３５ｍｇ，１ｍｍｏ
ｌ）、ＤＩＥＡ（１２９ｍｇ，１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ
（１０ｍｌ）に溶解し攪拌した。その溶液にベンジルア
ミン（１０７ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を加え、５時間室温で
攪拌した。次いで、溶媒を留去し、残査を酢酸エチルで
抽出した。酢酸エチル溶液を水、１０％クエン酸水溶
液、冷却した５％重曹水溶液で洗浄、次いで乾燥し、酢
酸エチルを留去しＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣ
Ｈ₂Ｃ₆Ｈ₅を５２０ｍｇ得た。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍ
ｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅（４９０ｍｇ，０．６５ｍｍｏ
ｌ）を２０％ピペリジンを含むＤＭＦ溶液（４ｍｌ）に
溶解し、１時間室温で攪拌した。減圧で溶媒を留去し、
そこにＦｍｏｃ−Ｌｅｕ（２４８ｍｇ，０．７ｍｍｏ
ｌ）、ＴＢＴＵ（２２５ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）、ＨＯ
Ｂｔ（９５ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（９１
ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液を加
え、１５時間室温で攪拌した。溶媒を留去し、残査を酢
酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶液を水、１０％クエ
ン酸水溶液、冷却した５％重曹水溶液で洗浄、次いで乾
燥し、酢酸エチルを留去しＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅を４９０ｍｇ得た。Ｆｍ
ｏｃ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ
₅（４５０ｍｇ，０．５２ｍｍｏｌ）を２０％ピペリジ
ンを含むＤＭＦ溶液（４ｍｌ）に溶解し、１時間室温で
攪拌した。減圧で溶媒を留去し、そこにＦｍｏｃ−Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（３６５ｍｇ，０．５５ｍｍｏ
ｌ）、ＴＢＴＵ（１７７ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）、Ｈ
ＯＢｔ（７５ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ
（７８ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍｌ）溶
液を加え、１５時間室温で攪拌した。溶媒を留去し、残
査を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶液を水、１０
％クエン酸水溶液、冷却した５％重曹水溶液で洗浄、次
いで乾燥し、酢酸エチルを留去しＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｍｃ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅
を７００ｍｇ得た。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅（６００ｍ
ｇ）を２０％ピペリジンを含むＤＭＦ溶液（４ｍｌ）に
溶解し、１時間室温で攪拌した。減圧で溶媒を留去し、
そこに５％フェノールを含むＴＦＡ溶液（１０ｍｌ）を
加え、１時間攪拌した。ＴＦＡ溶液をジエチルエーテル
に注ぎ、析出した沈澱物（１２０ｍｇ）を濾取した。こ
の沈澱物を実施例１１と同様にＨＰＬＣにより精製し、
目的ペプチド（化合物１７）３６ｍｇを得た。

【００３９】（実施例１８；化合物（１８）：H-Arg-Le
u-Arg-NHCH₂CH₂C₆H₅の合成）ベンジルアミンをフェニル
エチルアミンに代えた以外は実施例１７と同様に反応さ
せ、化合物（１８）を２５ｍｇ得た。

【００４０】（実施例１９；化合物（１９）：H-Arg-Le
u-Arg(NO₂)-OCH₂C₆H₅の合成）出発物質のＦｍｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅をＢｏｃ−Ａｒｇ
（ＮＯ₂）−ＯＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅に代え、ＴＦＡ溶液で処理
し、Ｂｏｃ基を除去した以外は実施例１７と同様に反応
させ、化合物（１９）を１８ｍｇ得た。

【００４１】（実施例２０；化合物（２０）：(CH₃)₃CC
O-Arg-Leu-Arg-NHCH₂C₆H₅の合成 実施例１７と同様の方法により、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｍｃ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅
を合成後、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｌｅｕ−Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅（７５０ｍｇ）を２０
％ピペリジンを含むＤＭＦ溶液（５ｍｌ）に溶解し、１
時間室温で攪拌した。溶媒を留去後、イソプロピルエー
テルで沈澱化させて得られた沈澱物をＤＭＦに溶解し、
ピバリン酸（７０ｍｇ）、ＴＢＴＵ、ＨＯＢｔ、ＤＩＥ
Ａをそれぞれ０．７ｍｍｏｌ相当量を加え２時間室温で
攪拌した。減圧で溶媒を留去後、酢酸エチルで抽出し
た。酢酸エチル溶液を水、１０％クエン酸水溶液、冷却
した５％重曹水溶液で洗浄、次いで乾燥し、酢酸エチル
を留去後、５％フェノールを含むＴＦＡ溶液（１０ｍ
ｌ）を加え１時間攪拌した。ＴＦＡ溶液をジエチルエー
テルに注ぎ、析出した沈澱物（３２０ｍｇ）を濾取し
た。この沈澱物を実施例１１と同様にＨＰＬＣにより精
製し、化合物（２０）を５６ｍｇ得た。

【００４２】（実施例２１；化合物（２１）：(CH₃)₃CC
O-Arg-Leu-Arg-NHCH₂CH₂C₆H₅の合成）実施例１８と同様
にして反応させ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅を合成後、
実施例２０に記載したと同様にピバリン酸を反応させ、
化合物（２１）を１８ｍｇ得た。

【００４３】（実施例２２；化合物（２２）：(CH₃)₃CC
O-Arg-Leu-Arg(NO₂)-OCH₂C₆H₅の合成）実施例１９と同
様にして反応させ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−ＯＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅を合成後、実施例
２０に記載したと同様にピバリン酸を反応させ、化合物
（２２）を２１ｍｇ得た。

【００４４】（実施例２３；化合物（２３）：Z-Arg-Le
u-Arg-NHCH₂C₆H₅の合成）実施例２０と同様にして得ら
れたＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｐ
ｍｃ）−ＮＨＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅（２５０ｍｇ）をピペリジン
処理後、ＤＭＦ中でＺ−ＯＳｕ（５０ｍｇ）と反応さ
せ、実施例２０と同様に処理し、化合物（２３）を１８
ｍｇ得た。

【００４５】（実施例２４；化合物（２４）：Z-Arg-Le
u-Arg-NHCH₂CH₂C₆H₅の合成）実施例２１と同様にして得
られたＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
（Ｐｍｃ）−ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅（２１０ｍｇ）をピ
ペリジン処理後、ＤＭＦ中でＺ−ＯＳｕ（５０ｍｇ）と
反応させ、実施例２０と同様に処理し、化合物（２４）
を２１ｍｇ得た。

【００４６】（実施例２５；化合物（２５）：Z-Arg-Le
u-Arg(NO₂)-OCH₂C₆H₅の合成）実施例２２と同様にして
得られたＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
（ＮＯ₂）−ＯＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅（２６０ｍｇ）をピペリジン
処理後、ＤＭＦ中でＺ−ＯＳｕ（６０ｍｇ）と反応さ
せ、実施例２０と同様に処理し化合物（２５）を１８ｍ
ｇ得た。

【００４７】（実施例２６〜３２）化合物（２６）〜
（３２）の合成は実施例１１に記載した方法と同様に行
い、目的とする各化合物（２６）〜（３２）を得た。

【００４８】（実施例３３〜４５）化合物（３３）〜
（４５）の合成は実施例２に記載した方法と同様に行
い、目的とする化合物を得た。但し化合物（４１）の合
成の際のみ、保護ペプチド樹脂からペプチドの切り出し
のフッ化水素を用いた反応を実施例１に記載したＬｏｗ
−Ｈｉｇｈ法により行った。

【００４９】（実施例４６〜８６）化合物（４６）〜
（８６）の合成は、実施例１１に記載した方法と同様に
行い目的とする各化合物（４６）〜（８６）を得た。

【００５０】

【表４】

【００５１】

【表５】

【００５２】

【表６】

【００５３】

【表７】

【００５４】

【表８】

【００５５】

【表９】

【００５６】

【表１０】

【００５７】

【表１１】

【００５８】

【表１２】

【００５９】

【表１３】

【００６０】

【表１４】

【００６１】

【表１５】

【００６２】（試験例：ヒトＳＫＷ６．４細胞を用いた
ＩＬ−６によるＩｇＭ抗体産生抑制試験）ヒトリコンビ
ナントＩＬ−６（ｈｒＩＬ−６）に対する、本発明のペ
プチド類のＩＬ−６拮抗作用を調べるために、被験物質
として、上記実施例で合成した化合物のうち（１７）及
び（２０）の２種類を用い、該化合物を最終濃度が５０
０μｇ／ｍｌになるように適宜希釈した。ＩｇＭ抗体産
生細胞としてヒトＳＫＷ６．４細胞を用い、９６穴マイ
クロプレートの各ウェルに１×１０⁴個の上記細胞を加
え、上記被験物質及び適当量のｈｒＩＬ−６と共に、炭
酸ガスインキュベーター中で３７℃で４日間培養した。
培養終了後、１，２００ｒｐｍで５分間遠心して得られ
た培養上清を集め、この上清中に含まれるＩｇＭ抗体量
をＥＬＩＳＡ法により定量した。なお、対照試験とし
て、被験物質を加えないで上記の方法と同様にしてＩｇ
Ｍ抗体量を定量した。上記化合物の添加によるＩｇＭ抗
体産生阻害率を次式により算出した。その測定結果を表
−１６に示す。

【００６３】

【数１】

【００６４】

【表１６】

【００６５】表−１６から明らかなように、化合物（１
７）および（２０）は、いずれも、ＩｇＭ抗体産生を著
しく阻害することが分かった。

【００６６】

【発明の効果】本発明によれば、ＩＬ−６に対して拮抗
的に作用し、その活性発現を阻害することが出来るペプ
チド類が提供されるので、ＩＬ−６に起因すると考えら
れる種々の自己免疫疾患の治療薬として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 伊藤 雅章 兵庫県姫路市網干区新在家1365 (72)発明者 妹尾 八郎 大阪府門真市千石東町12−１ (72)発明者 関 信男 大阪府茨木市橋の内２−12−28−303

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）：Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｙ （式中、Ｘは水素、アミノ保護基、アミノ酸残基または
   ２〜１０個のアミノ酸が結合したペプチド残基を示す。
   Ｙは水酸基、アミノ基、カルボキシル保護基、アミノ酸
   残基または２〜５個のアミノ酸が結合したペプチド残基
   を示す。Ａはグアニジノ基に保護基を有してもよいアル
   ギニン残基またはそれ以外のアミノ酸残基を示す。Ｄは
   グアニジノ基に保護基を有してもよいアルギニン残基で
   ある。Ｂはロイシン残基または非天然型アミノ酸を含む
   それ以外のアミノ酸残基で、そのアミノ酸の有する側鎖
   官能基には保護基を有していてもよい。）で示されるペ
   プチド類または医薬として許容されるその塩類。
2. 【請求項２】 一般式（Ｉ）中のＡ及びＤが共にグアニ
   ジノ基に保護基を有してもよいアルギニン残基であるこ
   とを特徴とする請求項１記載のペプチド類または医薬と
   して許容されるその塩類。
3. 【請求項３】 一般式（Ｉ）中のＡ及びＤが共にアルギ
   ニン残基であり、Ｂがロイシン残基であることを特徴と
   する請求項２記載のペプチド類または医薬として許容さ
   れるその塩類。
4. 【請求項４】 一般式（ＩＩ）：Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ａｒ
   ｇ−ＮＨ₂ （式中、Ｅ、Ｆ及びＨはその官能基に保護基を有してい
   てもよいアミノ酸残基であり、Ｇはグアニジノ基に保護
   基を有してもよいアルギニン残基またはそれ以外のアミ
   ノ酸残基を示す。）で示されるペンタペプチド類または
   医薬として許容されるその塩類。
5. 【請求項５】 一般式（ＩＩ）中、Ｅはアスパラギン、
   チロシン、プロリン、ロイシン、セリン、リジン、アル
   ギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アラニン、メチ
   オニン、アスパラギン酸またはグルタミン酸の各アミノ
   酸残基及びこれらの残基が有する官能基に保護基を有す
   るアミノ酸残基の群から選ばれるいずれか１つであり、
   Ｆはチロシン残基、Ｇはアルギニン残基、Ｈはロイシン
   残基であることを特徴とする請求項４記載のペンタペプ
   チド類または医薬として許容されるその塩類。
6. 【請求項６】 一般式（ＩＩ）中のＥがフェニルアラニ
   ン残基、Ｆがロイシン、フェニルアラニン、セリン、ア
   ルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン
   酸、グルタミン酸、メチオニン、プロリン、アラニン、
   リジン、グリシンまたはアスパラギンの各アミノ酸残基
   及びこれらの残基が有する官能基に保護基を有するアミ
   ノ酸残基の群から選ばれるいずれか１つであり、Ｇがア
   ルギニン残基、Ｈがロイシン残基であることを特徴とす
   る請求項４記載のペンタペプチド類または医薬として許
   容されるその塩類。
7. 【請求項７】 一般式（ＩＩ）中のＥがフェニルアラニ
   ン残基、Ｆがチロシン残基、Ｇがチロシン、リジン、ヒ
   スチジン、トリプトファン、プロリン、アラニン、ロイ
   シン、アスパラギン、セリン、アスパラギン酸、グルタ
   ミン酸またはメチオニンの各アミノ酸残基及びこれら残
   基が有する官能基に保護基を有するアミノ酸残基の群か
   ら選ばれるいずれか１つであり、Ｈがロイシン残基であ
   ることを特徴とする請求項４記載のペンタペプチド類ま
   たは医薬として許容されるその塩類。
8. 【請求項８】 一般式（ＩＩ）中のＥがフェニルアラニ
   ン残基、Ｆがチロシン残基、Ｇがアルギニン残基、Ｈが
   トリプトファン、アラニン、イソロイシン、アスパラギ
   ン、チロシン、フェニルアラニン、セリン、リジン、ア
   ルギニン、ヒスチジン、グルタミン酸、メチオニン、グ
   リシン、プロリンまたはアスパラギン酸の各アミノ酸残
   基及びこれら残基に有する官能基に保護基を有するアミ
   ノ酸残基の群から選ばれるいずれか１つであることを特
   徴とする請求項４記載のペンタペプチド類または医薬と
   して許容されるその塩類。
9. 【請求項９】 一般式（Ｉ）：Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｙ （式中、Ｘは水素、アミノ保護基、アミノ酸残基または
   ２〜１０個のアミノ酸が結合したペプチド残基を示す。
   Ｙは水酸基、アミノ基、カルボキシル保護基、アミノ酸
   残基または２〜５個のアミノ酸が結合したペプチド残基
   を示す。Ａはグアニジノ基に保護基を有してもよいアル
   ギニン残基またはそれ以外のアミノ酸残基を示す。Ｄは
   グアニジノ基に保護基を有してもよいアルギニン残基で
   ある。Ｂはロイシン残基または非天然型アミノ酸を含む
   それ以外のアミノ酸残基で、そのアミノ酸の有する側鎖
   官能基には保護基を有していてもよい。）で示されるペ
   プチド類または医薬として許容されるその塩類と共に医
   薬として許容される担体を含有することを特徴とするイ
   ンターロイキン６拮抗剤。
10. 【請求項１０】 一般式（Ｉ）中のＡ及びＤが共にグア
    ニジノ基に保護基を有してもよいアルギニン残基である
    ことを特徴とする請求項９記載のインターロイキン６拮
    抗剤。
11. 【請求項１１】 一般式（Ｉ）中のＡ及びＤが共にアル
    ギニン残基であり、Ｂがロイシン残基であることを特徴
    とする請求項１０記載のインターロイキン６拮抗剤。
12. 【請求項１２】 一般式（ＩＩ）：Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ａ
    ｒｇ−ＮＨ₂ （式中、Ｅ、Ｆ及びＨはその官能基に保護基を有してい
    てもよいアミノ酸残基であり、Ｇはグアニジノ基に保護
    基を有してもよいアルギニン残基またはそれ以外のアミ
    ノ酸残基を示す。）で示されるペンタペプチド類または
    医薬として許容されるその塩類と共に医薬として許容さ
    れる担体を含有することを特徴とするインターロイキン
    ６拮抗剤。
13. 【請求項１３】 一般式（ＩＩ）中、Ｅはアスパラギ
    ン、チロシン、プロリン、ロイシン、セリン、リジン、
    アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アラニン、
    メチオニン、アスパラギン酸またはグルタミン酸の各ア
    ミノ酸残基及びこれらの残基が有する官能基に保護基を
    有するアミノ酸残基の群から選ばれるいずれか１つであ
    り、Ｆはチロシン残基、Ｇはアルギニン残基、Ｈはロイ
    シン残基であることを特徴とする請求項１２記載のイン
    ターロイキン６拮抗剤。
14. 【請求項１４】 一般式（ＩＩ）中のＥがフェニルアラ
    ニン残基、Ｆがロイシン、フェニルアラニン、セリン、
    アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アスパラギ
    ン酸、グルタミン酸、メチオニン、プロリン、アラニ
    ン、リジン、グリシンまたはアスパラギンの各アミノ酸
    残基及びこれらの残基が有する官能基に保護基を有する
    アミノ酸残基の群から選ばれるいずれか１つであり、Ｇ
    がアルギニン残基、Ｈがロイシン残基であることを特徴
    とする請求項１２記載のインターロイキン６拮抗剤。
15. 【請求項１５】 一般式（ＩＩ）中のＥがフェニルアラ
    ニン残基、Ｆがチロシン残基、Ｇがチロシン、リジン、
    ヒスチジン、トリプトファン、プロリン、アラニン、ロ
    イシン、アスパラギン、セリン、アスパラギン酸、グル
    タミン酸またはメチオニンの各アミノ酸残基及びこれら
    残基が有する官能基に保護基を有するアミノ酸残基の群
    から選ばれるいずれか１つであり、Ｈがロイシン残基で
    あることを特徴とする請求項１２記載のインターロイキ
    ン６拮抗剤。
16. 【請求項１６】 一般式（ＩＩ）中のＥがフェニルアラ
    ニン残基、Ｆがチロシン残基、Ｇがアルギニン残基、Ｈ
    がトリプトファン、アラニン、イソロイシン、アスパラ
    ギン、チロシン、フェニルアラニン、セリン、リジン、
    アルギニン、ヒスチジン、グルタミン酸、メチオニン、
    グリシン、プロリンまたはアスパラギン酸の各アミノ酸
    残基及びこれら残基に有する官能基に保護基を有するア
    ミノ酸残基の群から選ばれるいずれか１つであることを
    特徴とする請求項１２記載のインターロイキン６拮抗
    剤。