JPH08157491A - トレハロース誘導体の製造方法 - Google Patents
トレハロース誘導体の製造方法Info
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- JPH08157491A JPH08157491A JP6341189A JP34118994A JPH08157491A JP H08157491 A JPH08157491 A JP H08157491A JP 6341189 A JP6341189 A JP 6341189A JP 34118994 A JP34118994 A JP 34118994A JP H08157491 A JPH08157491 A JP H08157491A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
- C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
- C07H13/04—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals attached to acyclic carbon atoms
- C07H13/06—Fatty acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 高品質のトレハロース誘導体を収量良く、廉
価に製造し得る方法を提供することにある。 【構成】 無水トレハロースに無水条件下で反応性試薬
を反応させることを特徴とするトレハロース誘導体の製
造方法を要旨とする。
価に製造し得る方法を提供することにある。 【構成】 無水トレハロースに無水条件下で反応性試薬
を反応させることを特徴とするトレハロース誘導体の製
造方法を要旨とする。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明はトレハロース誘導体の
新規な製造方法、殊に、無水トレハロースに無水条件下
で反応性試薬を反応させることを特徴とするトレハロー
ス誘導体の製造方法に関する。
新規な製造方法、殊に、無水トレハロースに無水条件下
で反応性試薬を反応させることを特徴とするトレハロー
ス誘導体の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】最近、脂肪酸エステル、硫酸エステルを
始めとするトレハロースの酸エステルやアルキルエーテ
ルが脚光を浴びている。すなわち、西川らは『日本化学
会誌』、第１０号、第１，６６１乃至１，６６６頁（１
９８２年）において、トレハロースのステアリン酸エス
テル、パルミチン酸エステル及びミリスチン酸エステル
が生体内外で悪性腫瘍の増殖を顕著に抑制したと報告
し、これら誘導体が抗腫瘍剤として有望であることを示
唆している。硫酸エステルは、例えば、特開平４−２９
０８０８号公報にも見られるように、皮膚の水分をバラ
ンス良く保ち、潤いを与える作用が顕著であり、優秀な
保湿剤、美肌剤として既に一部の化粧品に配合使用され
ている。また、炭素数８乃至２５のアルキルとのエーテ
ルは、安全且つ高活性な界面活性剤として有用であるこ
とが知られている。
始めとするトレハロースの酸エステルやアルキルエーテ
ルが脚光を浴びている。すなわち、西川らは『日本化学
会誌』、第１０号、第１，６６１乃至１，６６６頁（１
９８２年）において、トレハロースのステアリン酸エス
テル、パルミチン酸エステル及びミリスチン酸エステル
が生体内外で悪性腫瘍の増殖を顕著に抑制したと報告
し、これら誘導体が抗腫瘍剤として有望であることを示
唆している。硫酸エステルは、例えば、特開平４−２９
０８０８号公報にも見られるように、皮膚の水分をバラ
ンス良く保ち、潤いを与える作用が顕著であり、優秀な
保湿剤、美肌剤として既に一部の化粧品に配合使用され
ている。また、炭素数８乃至２５のアルキルとのエーテ
ルは、安全且つ高活性な界面活性剤として有用であるこ
とが知られている。
【０００３】シー・ケー・リー『デベロップメンツ・イ
ン・フード・カルボハイドレート』、１９８０年、アプ
ライッド・サイエンス・パブリッシャーズ社発行、第１
乃至８９頁やケー・ヨシモトら『ケミカル・アンド・フ
ァーマシューティカル・ブレティン』、第３０巻、第４
号、第１，１６９乃至１，１７４頁（１９８２年）にも
見られるように、トレハロース誘導体は、通常、トレハ
ロース含水結晶に無水条件下で反応性試薬を反応させて
調製されており、高品質のトレハロース誘導体を収量良
く得られるかどうかは、偏に、反応系から水分を除去し
きれるかどうかに掛かっている。ところが、トレハロー
ス含水結晶は、固状にしても、通常、１０％（ｗ／ｗ）
前後の水分を含んでおり、そのまま反応に供したのでは
良い結果は得られない。そのため、これまでは、反応に
先立ち、五酸化燐などの乾燥剤により無水状態にまで乾
燥する試みがなされていたものの、結晶水として含まれ
ている水分まで除去するのは容易ではなかった。それ
故、従来、高品質のトレハロース誘導体を高収量且つ廉
価に調製するのが極めて困難な状況にあった。
ン・フード・カルボハイドレート』、１９８０年、アプ
ライッド・サイエンス・パブリッシャーズ社発行、第１
乃至８９頁やケー・ヨシモトら『ケミカル・アンド・フ
ァーマシューティカル・ブレティン』、第３０巻、第４
号、第１，１６９乃至１，１７４頁（１９８２年）にも
見られるように、トレハロース誘導体は、通常、トレハ
ロース含水結晶に無水条件下で反応性試薬を反応させて
調製されており、高品質のトレハロース誘導体を収量良
く得られるかどうかは、偏に、反応系から水分を除去し
きれるかどうかに掛かっている。ところが、トレハロー
ス含水結晶は、固状にしても、通常、１０％（ｗ／ｗ）
前後の水分を含んでおり、そのまま反応に供したのでは
良い結果は得られない。そのため、これまでは、反応に
先立ち、五酸化燐などの乾燥剤により無水状態にまで乾
燥する試みがなされていたものの、結晶水として含まれ
ている水分まで除去するのは容易ではなかった。それ
故、従来、高品質のトレハロース誘導体を高収量且つ廉
価に調製するのが極めて困難な状況にあった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】斯かる状況に鑑み、こ
の発明の目的は、高品質のトレハロース誘導体を収量良
く、廉価に製造し得る方法を提供することにある。
の発明の目的は、高品質のトレハロース誘導体を収量良
く、廉価に製造し得る方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】この発明は、上記課題
を、無水トレハロースに無水条件下で反応性試薬を反応
させることを特徴とするトレハロース誘導体の製造方法
により解決するものである。
を、無水トレハロースに無水条件下で反応性試薬を反応
させることを特徴とするトレハロース誘導体の製造方法
により解決するものである。
【０００６】
【作用】この発明において基質に使用する無水トレハロ
ースは、実質的に水分を含まない。これにより、この発
明の製造方法によるときには、無水トレハロースをごく
簡単に乾燥するか、場合に依っては乾燥することなく、
そのまま反応に供しても、高品質のトレハロース誘導体
が収量良く生成する。
ースは、実質的に水分を含まない。これにより、この発
明の製造方法によるときには、無水トレハロースをごく
簡単に乾燥するか、場合に依っては乾燥することなく、
そのまま反応に供しても、高品質のトレハロース誘導体
が収量良く生成する。
【０００７】以下、実験例、実施例等に基づきこの発明
を説明するに、この発明でいうトレハロース誘導体と
は、トレハロースに無水条件下で反応性試薬を反応させ
て得られるエステル、エーテル、ハライド、含窒素誘導
体及び含硫黄誘導体を始めとするトレハロース誘導体全
般を包含するものとする。したがって、この発明でいう
反応性試薬とは、トレハロースに無水条件下で反応させ
て斯かる誘導体を与える酸、塩基、アルコール、ケト
ン、ハロゲン、アミン及びそれらの反応性誘導体を意味
することとなる。これにより、この発明は、例えば、反
応系の水分が反応性試薬の反応性を低下させたり、望ま
しくない副反応を惹起するか主反応を阻害して所期のト
レハロース誘導体の品質及び／又は収量を低下させた
り、その製造コストの高騰を招くような化学反応全般に
適用し得ることとなる。
を説明するに、この発明でいうトレハロース誘導体と
は、トレハロースに無水条件下で反応性試薬を反応させ
て得られるエステル、エーテル、ハライド、含窒素誘導
体及び含硫黄誘導体を始めとするトレハロース誘導体全
般を包含するものとする。したがって、この発明でいう
反応性試薬とは、トレハロースに無水条件下で反応させ
て斯かる誘導体を与える酸、塩基、アルコール、ケト
ン、ハロゲン、アミン及びそれらの反応性誘導体を意味
することとなる。これにより、この発明は、例えば、反
応系の水分が反応性試薬の反応性を低下させたり、望ま
しくない副反応を惹起するか主反応を阻害して所期のト
レハロース誘導体の品質及び／又は収量を低下させた
り、その製造コストの高騰を招くような化学反応全般に
適用し得ることとなる。
【０００８】この発明でいう無水トレハロースとは、通
常、カールフィッシャー法により水分含量３％（ｗ／
ｗ）未満の実質的に水分を含まない結晶性又は非晶質の
無水トレハロースを意味する。これら無水トレハロース
はこの発明において同様に使用し得るが、結晶性無水ト
レハロースは一般にトレハロース含量が高く、比較的廉
価に入手し得るので特に有用である。反応の種類や誘導
体の用途にも依るが、一般に、無水トレハロース中のト
レハロース含量は高ければ高いほどよく、通常、固形分
当たり７０％以上、望ましくは、８０％以上のものが使
用される。
常、カールフィッシャー法により水分含量３％（ｗ／
ｗ）未満の実質的に水分を含まない結晶性又は非晶質の
無水トレハロースを意味する。これら無水トレハロース
はこの発明において同様に使用し得るが、結晶性無水ト
レハロースは一般にトレハロース含量が高く、比較的廉
価に入手し得るので特に有用である。反応の種類や誘導
体の用途にも依るが、一般に、無水トレハロース中のト
レハロース含量は高ければ高いほどよく、通常、固形分
当たり７０％以上、望ましくは、８０％以上のものが使
用される。
【０００９】斯かる無水トレハロースのうち、非晶質無
水トレハロースは、例えば、トレハロースを少量の水に
溶解し、水溶液をそのまま凍結乾燥するか、噴霧乾燥な
どにより、トレハロース含水結晶の融点を上回る温度、
通常、１００℃を越える温度で乾燥することにより得る
ことができる。一方、結晶性無水トレハロースは、例え
ば、特開平６−１７０２２１号公報に開示されているよ
うに、固形分当たりトレハロースを６０％以上含む糖組
成物を水分含量１０％（ｗ／ｗ）未満、望ましくは、
２．０％（ｗ／ｗ）を越え、９．５％（ｗ／ｗ）を越え
ないシロップ状物とし、これに種晶として結晶性無水ト
レハロースを固形分当たり０．０１乃至２０％加え、４
０乃至１４０℃に保ちつつ助晶し、得られるマスキット
から結晶性無水トレハロースを採取するか、マスキット
のまま乾燥して固状物とすることにより得ることができ
る。斯くして得られる無水トレハロースは、通常、水分
含量３％（ｗ／ｗ）未満と実質的に水分を含まない。
水トレハロースは、例えば、トレハロースを少量の水に
溶解し、水溶液をそのまま凍結乾燥するか、噴霧乾燥な
どにより、トレハロース含水結晶の融点を上回る温度、
通常、１００℃を越える温度で乾燥することにより得る
ことができる。一方、結晶性無水トレハロースは、例え
ば、特開平６−１７０２２１号公報に開示されているよ
うに、固形分当たりトレハロースを６０％以上含む糖組
成物を水分含量１０％（ｗ／ｗ）未満、望ましくは、
２．０％（ｗ／ｗ）を越え、９．５％（ｗ／ｗ）を越え
ないシロップ状物とし、これに種晶として結晶性無水ト
レハロースを固形分当たり０．０１乃至２０％加え、４
０乃至１４０℃に保ちつつ助晶し、得られるマスキット
から結晶性無水トレハロースを採取するか、マスキット
のまま乾燥して固状物とすることにより得ることができ
る。斯くして得られる無水トレハロースは、通常、水分
含量３％（ｗ／ｗ）未満と実質的に水分を含まない。
【００１０】無水トレハロースの原料となるトレハロー
スの出所・由来について、特に制限はない。トレハロー
スが酵母の菌体から得られたものであっても、マルトー
スにマルトース・フォスフォリラーゼとトレハロース・
フォスフォリラーゼからなる複合酵素系を作用させて得
られたものであっても、あるいは、マルトース・トレハ
ロース変換酵素によりマルトースを直接トレハロースに
変換するか、澱粉部分加水分解物を酵素糖化して得られ
たものであってもよい。ただし、高品質のトレハロース
誘導体を廉価に製造するという経済的見地に立てば、上
記第三又は第四の方法により得られたものが望ましい。
スの出所・由来について、特に制限はない。トレハロー
スが酵母の菌体から得られたものであっても、マルトー
スにマルトース・フォスフォリラーゼとトレハロース・
フォスフォリラーゼからなる複合酵素系を作用させて得
られたものであっても、あるいは、マルトース・トレハ
ロース変換酵素によりマルトースを直接トレハロースに
変換するか、澱粉部分加水分解物を酵素糖化して得られ
たものであってもよい。ただし、高品質のトレハロース
誘導体を廉価に製造するという経済的見地に立てば、上
記第三又は第四の方法により得られたものが望ましい。
【００１１】澱粉からトレハロースを調製するには、ま
ず、澱粉を酸及び／又はα−アミラーゼにより糊化・液
化して得られる、マルトトリオース、マルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオースなどのグ
ルコース重合度３以上のマルトオリゴ糖を含んでなる還
元性澱粉部分加水分解物に特願平５−３４９２１６号明
細書、特願平６−９０７０５号明細書、特願平６−１６
６０１１号明細書又は特願平６−１９０１８３号明細書
に開示されている非還元性糖質生成酵素を作用させ、マ
ルトオリゴ糖を末端にトレハロース構造を有する非還元
性糖質に変換する。そして、この非還元性糖質に特願平
６−５９８３４号明細書、特願平６−７９２９１号明細
書、特願平６−１６６１２６号明細書又は特願平６−１
９０１８０号明細書に開示されているトレハロース遊離
酵素を作用させ、該非還元性糖質からトレハロースを遊
離する。このとき、非還元性糖質生成酵素とトレハロー
ス遊離酵素とは同時に反応させても逐次に反応させても
よく、また、両酵素にイソアミラーゼやプルラナーゼな
どの澱粉枝切酵素を併用すると、生成物中のトレハロー
ス含量が一段と向上する。一方、マルトースを直接トレ
ハロースに変換するには、マルトース又はマルトースを
含む糖組成物に、例えば、特願平６−１４４０９２号明
細書、特願平６−１５６３９９号明細書、特願平６−１
８７９０１号明細書又は特願平６−２６０９８４号明細
書に開示されているマルトース・トレハロース変換酵素
を作用させればよい。これら明細書にはマルトース・ト
レハロース変換酵素を使用するトレハロースの製造方法
が開示されており、いずれもこの発明で使用する無水ト
レハロースの調製に有利に適用できる。より高純度のト
レハロースが必要な場合には、斯くして得られる生成物
に塩型強酸性カチオン交換樹脂を固定床方式、移動床方
式又は擬似移動床方式で使用するカラムクロマトグラフ
ィーを適用してトレハロース高含有画分を採取すればよ
い。斯くして得られる生成物及び画分は固形分当たりト
レハロースを７０％以上含んでおり、無水トレハロース
の原料に好適である。
ず、澱粉を酸及び／又はα−アミラーゼにより糊化・液
化して得られる、マルトトリオース、マルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオースなどのグ
ルコース重合度３以上のマルトオリゴ糖を含んでなる還
元性澱粉部分加水分解物に特願平５−３４９２１６号明
細書、特願平６−９０７０５号明細書、特願平６−１６
６０１１号明細書又は特願平６−１９０１８３号明細書
に開示されている非還元性糖質生成酵素を作用させ、マ
ルトオリゴ糖を末端にトレハロース構造を有する非還元
性糖質に変換する。そして、この非還元性糖質に特願平
６−５９８３４号明細書、特願平６−７９２９１号明細
書、特願平６−１６６１２６号明細書又は特願平６−１
９０１８０号明細書に開示されているトレハロース遊離
酵素を作用させ、該非還元性糖質からトレハロースを遊
離する。このとき、非還元性糖質生成酵素とトレハロー
ス遊離酵素とは同時に反応させても逐次に反応させても
よく、また、両酵素にイソアミラーゼやプルラナーゼな
どの澱粉枝切酵素を併用すると、生成物中のトレハロー
ス含量が一段と向上する。一方、マルトースを直接トレ
ハロースに変換するには、マルトース又はマルトースを
含む糖組成物に、例えば、特願平６−１４４０９２号明
細書、特願平６−１５６３９９号明細書、特願平６−１
８７９０１号明細書又は特願平６−２６０９８４号明細
書に開示されているマルトース・トレハロース変換酵素
を作用させればよい。これら明細書にはマルトース・ト
レハロース変換酵素を使用するトレハロースの製造方法
が開示されており、いずれもこの発明で使用する無水ト
レハロースの調製に有利に適用できる。より高純度のト
レハロースが必要な場合には、斯くして得られる生成物
に塩型強酸性カチオン交換樹脂を固定床方式、移動床方
式又は擬似移動床方式で使用するカラムクロマトグラフ
ィーを適用してトレハロース高含有画分を採取すればよ
い。斯くして得られる生成物及び画分は固形分当たりト
レハロースを７０％以上含んでおり、無水トレハロース
の原料に好適である。
【００１２】無水トレハロースに無水条件下で反応性試
薬を反応させるには、斯界における慣用の方法を採用す
ることができる。例えば、シー・ケー・リー『デベロッ
プメンツ・イン・フード・カルボハイドレート』、１９
８０年、アプライッド・サイエンス・パブリッシャーズ
社発行、第１乃至８９頁、ケー・ヨシモトら『ケミカル
・アンド・ファーマシューティカル・ブレティン』、第
３０巻、第４号、第１，１６９乃至１，１７４頁（１９
８２年）及び『カルボハイドレーツ・アズ・オーガニッ
ク・ロー・マテリアルズ』、１９９１年、ＶＣＨ社発行
に記載された反応はいずれもこの発明において無水トレ
ハロースに適用可能であり、所望のトレハロース誘導体
に応じて適宜選択することができる。
薬を反応させるには、斯界における慣用の方法を採用す
ることができる。例えば、シー・ケー・リー『デベロッ
プメンツ・イン・フード・カルボハイドレート』、１９
８０年、アプライッド・サイエンス・パブリッシャーズ
社発行、第１乃至８９頁、ケー・ヨシモトら『ケミカル
・アンド・ファーマシューティカル・ブレティン』、第
３０巻、第４号、第１，１６９乃至１，１７４頁（１９
８２年）及び『カルボハイドレーツ・アズ・オーガニッ
ク・ロー・マテリアルズ』、１９９１年、ＶＣＨ社発行
に記載された反応はいずれもこの発明において無水トレ
ハロースに適用可能であり、所望のトレハロース誘導体
に応じて適宜選択することができる。
【００１３】代表的なトレハロース誘導体の製造方法に
つき概説すると、酢酸や安息香酸などとのカルボン酸エ
ステルは、ピリジンなどの塩基性有機溶媒中、無水トレ
ハロースに対応する酸無水物又は酸ハライドを反応させ
れば得ることができる。硫酸エステルを製造するには、
不活性ガス又は希ガス気流中、三酸化硫黄とジメチルス
ルホキシド又はピリジンとの錯体を反応させればよい。
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン
酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸などとの脂肪
酸エステルは、塩基性触媒下で縮合反応させるか、対応
する脂肪酸ハライドと反応させることにより得ることが
できる。メチルエーテル、ベンジルエーテル、トリチル
エーテル、メチルシリルエーテル、ドデシルエーテルな
どのエーテルは、酸触媒下で無水トレハロースに過剰量
の対応するアルコールを反応させるか、塩基性触媒下で
対応するアルキルハライドと反応させることにより得る
ことができる。
つき概説すると、酢酸や安息香酸などとのカルボン酸エ
ステルは、ピリジンなどの塩基性有機溶媒中、無水トレ
ハロースに対応する酸無水物又は酸ハライドを反応させ
れば得ることができる。硫酸エステルを製造するには、
不活性ガス又は希ガス気流中、三酸化硫黄とジメチルス
ルホキシド又はピリジンとの錯体を反応させればよい。
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン
酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸などとの脂肪
酸エステルは、塩基性触媒下で縮合反応させるか、対応
する脂肪酸ハライドと反応させることにより得ることが
できる。メチルエーテル、ベンジルエーテル、トリチル
エーテル、メチルシリルエーテル、ドデシルエーテルな
どのエーテルは、酸触媒下で無水トレハロースに過剰量
の対応するアルコールを反応させるか、塩基性触媒下で
対応するアルキルハライドと反応させることにより得る
ことができる。
【００１４】用途にも依るが、斯くして得られるトレハ
ロース誘導体を含む反応物は、通常、例えば、濾過、抽
出、分液、分別沈澱、透析、蒸留などにより未反応の反
応性試薬及び／又は溶媒を除去した後、そのまま使用さ
れる。さらに高純度のトレハロース誘導体が必要な場合
には、例えば、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマ
トグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ガスク
ロマトグラフィー、蒸留、結晶化などの糖又は糖誘導体
を精製するための斯界における慣用の方法を適用すれば
よく、これらの精製方法は、必要に応じて組合わせて適
用される。なお、周知のように、トレハロースは、非ア
ノマー性ヒドロキシル基を主体とする通常の置換反応に
おいて反応性官能基を８個提供する。このことは、反応
の種類と条件に依っては、置換度の相違するトレハロー
ス誘導体をいろいろな割合で含む組成物が生成し得るこ
とを意味している。斯かる組成物は、通常、そのまま使
用されるが、必要とあれば、使用に先立って上記精製方
法の１種又は２種以上を適用し、所望の成分のみ単離す
ればよい。
ロース誘導体を含む反応物は、通常、例えば、濾過、抽
出、分液、分別沈澱、透析、蒸留などにより未反応の反
応性試薬及び／又は溶媒を除去した後、そのまま使用さ
れる。さらに高純度のトレハロース誘導体が必要な場合
には、例えば、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマ
トグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ガスク
ロマトグラフィー、蒸留、結晶化などの糖又は糖誘導体
を精製するための斯界における慣用の方法を適用すれば
よく、これらの精製方法は、必要に応じて組合わせて適
用される。なお、周知のように、トレハロースは、非ア
ノマー性ヒドロキシル基を主体とする通常の置換反応に
おいて反応性官能基を８個提供する。このことは、反応
の種類と条件に依っては、置換度の相違するトレハロー
ス誘導体をいろいろな割合で含む組成物が生成し得るこ
とを意味している。斯かる組成物は、通常、そのまま使
用されるが、必要とあれば、使用に先立って上記精製方
法の１種又は２種以上を適用し、所望の成分のみ単離す
ればよい。
【００１５】この発明の製造方法により得られるトレハ
ロース誘導体は、食品工業、化粧品工業、医薬品工業な
どの諸分野に広範な用途を有する。脂肪酸エステル及び
アルキルエーテルは、活性高く、安全な界面活性剤とし
て飲食物、化粧品、医薬品などに有用であり、脂肪酸に
依っては、抗腫瘍剤としての用途が期待される。硫酸エ
ステルは優秀な保湿剤、美肌剤として化粧品に有利に配
合使用でき、また、ハライドは種々の誘導体を合成する
ための中間体として有用である。
ロース誘導体は、食品工業、化粧品工業、医薬品工業な
どの諸分野に広範な用途を有する。脂肪酸エステル及び
アルキルエーテルは、活性高く、安全な界面活性剤とし
て飲食物、化粧品、医薬品などに有用であり、脂肪酸に
依っては、抗腫瘍剤としての用途が期待される。硫酸エ
ステルは優秀な保湿剤、美肌剤として化粧品に有利に配
合使用でき、また、ハライドは種々の誘導体を合成する
ための中間体として有用である。
【００１６】次に、実験例に基づきこの発明の作用効果
を説明する。
を説明する。
【００１７】
【実験例１ 酵素の調製】
【００１８】
【実験例１−１ 非還元性糖質生成酵素の調製】５００
ｍｌ容三角フラスコに２．０％（ｗ／ｖ）マルトース、
０．５％（ｗ／ｖ）ペプトン、０．１％（ｗ／ｖ）酵母
エキス、０．１％（ｗ／ｖ）燐酸水素二ナトリウム及び
０．１％（ｗ／ｖ）燐酸二水素ナトリウムを含む液体培
地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつとり、１２０℃で２
０分間オートクレーブして滅菌した。冷却後、三角フラ
スコ内の液体培地にリゾビウム・スピーシーズＭ−１１
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を接種し、回転振盪下、
２７℃で２４時間種培養した。その後、３０ｌ容ジャー
ファーメンタに上記と同一組成の液体培地を２０ｌと
り、滅菌後、上記で調製した種培養液を１％（ｖ／ｖ）
接種し、ｐＨを６乃至８に保ちつつ、３０℃で２４時間
通気攪拌培養した。
ｍｌ容三角フラスコに２．０％（ｗ／ｖ）マルトース、
０．５％（ｗ／ｖ）ペプトン、０．１％（ｗ／ｖ）酵母
エキス、０．１％（ｗ／ｖ）燐酸水素二ナトリウム及び
０．１％（ｗ／ｖ）燐酸二水素ナトリウムを含む液体培
地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつとり、１２０℃で２
０分間オートクレーブして滅菌した。冷却後、三角フラ
スコ内の液体培地にリゾビウム・スピーシーズＭ−１１
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を接種し、回転振盪下、
２７℃で２４時間種培養した。その後、３０ｌ容ジャー
ファーメンタに上記と同一組成の液体培地を２０ｌと
り、滅菌後、上記で調製した種培養液を１％（ｖ／ｖ）
接種し、ｐＨを６乃至８に保ちつつ、３０℃で２４時間
通気攪拌培養した。
【００１９】次に、上記で調製した培養物約１８ｌを超
高圧菌体破砕装置にとり、菌体を破砕後、遠心分離によ
り採取した上清約１６ｌに硫酸アンモニウムを２０％飽
和になるように加え、４℃で１時間静置後、遠心分離に
より沈澱部を除去した。得られた上清に６０％飽和にな
るように硫酸アンモニウムを加え、４℃で２４時間静置
後、沈澱部を遠心分離により採取し、最少量の１０ｍＭ
燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、１０ｍＭ燐酸緩衝
液（ｐＨ７．０）に対して２４時間透析後、遠心分離に
より不溶物を除去した。新たに得られた上清を予め１０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化させておい
た東ソー製イオン交換クロマトグラフィー用カラム『Ｄ
ＥＡＥ−トヨパール』に負荷し、０Ｍから０．５Ｍに上
昇する塩化ナトリウムの濃度勾配下、カラムに１０ｍＭ
燐酸緩衡液（ｐＨ７．０）を通液した。溶出液より酵素
活性ある画分を採取し、２Ｍ硫酸アンモニウムを含む５
０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して１０時間透析
後、遠心分離により不溶物を除去した。その後、上清を
予め２Ｍ硫酸アンモニウムを含む５０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）により平衡化させておいた東ソー製疎水
クロマトグラフィー用カラム『ブチルトヨパール』に負
荷し、２Ｍから０Ｍに下降する硫酸アンモニウムの濃度
勾配下、カラムに５０ｍＭ燐酸緩衡液（ｐＨ７．０）を
通液した。溶出液から酵素活性ある画分を採取し、予め
５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化させて
おいた東ソー製ゲル濾過カラムクロマトグラフィー用カ
ラム『トヨパールＨＷ−５５』に負荷し、カラムに５０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を通液し、溶出液から酵
素活性ある画分を採取した。このようにして精製した非
還元性糖質生成酵素の比活性は約１９５単位／ｍｇ蛋白
質であり、収量は培養物１ｌ当たり約２２０単位であっ
た。
高圧菌体破砕装置にとり、菌体を破砕後、遠心分離によ
り採取した上清約１６ｌに硫酸アンモニウムを２０％飽
和になるように加え、４℃で１時間静置後、遠心分離に
より沈澱部を除去した。得られた上清に６０％飽和にな
るように硫酸アンモニウムを加え、４℃で２４時間静置
後、沈澱部を遠心分離により採取し、最少量の１０ｍＭ
燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、１０ｍＭ燐酸緩衝
液（ｐＨ７．０）に対して２４時間透析後、遠心分離に
より不溶物を除去した。新たに得られた上清を予め１０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化させておい
た東ソー製イオン交換クロマトグラフィー用カラム『Ｄ
ＥＡＥ−トヨパール』に負荷し、０Ｍから０．５Ｍに上
昇する塩化ナトリウムの濃度勾配下、カラムに１０ｍＭ
燐酸緩衡液（ｐＨ７．０）を通液した。溶出液より酵素
活性ある画分を採取し、２Ｍ硫酸アンモニウムを含む５
０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して１０時間透析
後、遠心分離により不溶物を除去した。その後、上清を
予め２Ｍ硫酸アンモニウムを含む５０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）により平衡化させておいた東ソー製疎水
クロマトグラフィー用カラム『ブチルトヨパール』に負
荷し、２Ｍから０Ｍに下降する硫酸アンモニウムの濃度
勾配下、カラムに５０ｍＭ燐酸緩衡液（ｐＨ７．０）を
通液した。溶出液から酵素活性ある画分を採取し、予め
５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化させて
おいた東ソー製ゲル濾過カラムクロマトグラフィー用カ
ラム『トヨパールＨＷ−５５』に負荷し、カラムに５０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を通液し、溶出液から酵
素活性ある画分を採取した。このようにして精製した非
還元性糖質生成酵素の比活性は約１９５単位／ｍｇ蛋白
質であり、収量は培養物１ｌ当たり約２２０単位であっ
た。
【００２０】なお、この発明において、非還元性糖質生
成酵素の活性を次の方法により測定し、活性値（単位）
で表示する。すなわち、マルトペンタオースを１．２５
％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を
４ｍｌとり、これに酵素液を１ｍｌ加え、４０℃で６０
分間インキュベートして反応させた後、反応液を１００
℃で１０分間加熱して反応を停止させる。反応液を蒸留
水で１０倍希釈した後、ソモギ・ネルソン法により還元
力を測定する。対照には、予め１００℃で１０分間加熱
して失活させた酵素を上記と同様に処置する。非還元性
糖質生成酵素の１単位とは、上記条件下において、１分
間にマルトペンタオース１μｍｏｌに相当する還元力を
低下させる酵素の量と定義する。
成酵素の活性を次の方法により測定し、活性値（単位）
で表示する。すなわち、マルトペンタオースを１．２５
％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を
４ｍｌとり、これに酵素液を１ｍｌ加え、４０℃で６０
分間インキュベートして反応させた後、反応液を１００
℃で１０分間加熱して反応を停止させる。反応液を蒸留
水で１０倍希釈した後、ソモギ・ネルソン法により還元
力を測定する。対照には、予め１００℃で１０分間加熱
して失活させた酵素を上記と同様に処置する。非還元性
糖質生成酵素の１単位とは、上記条件下において、１分
間にマルトペンタオース１μｍｏｌに相当する還元力を
低下させる酵素の量と定義する。
【００２１】
【実験例１−２ トレハロース遊離酵素の調製】５００
ｍｌ容三角フラスコに松谷化学工業製澱粉部分加水分解
物『パインデックス＃４』を２．０％（ｗ／ｖ）、ペプ
トンを０．５％（ｗ／ｖ）、酵母エキスを０．１％（ｗ
／ｖ）、燐酸水素二ナトリウムを０．１％（ｗ／ｖ）及
び燐酸二水素ナトリウムを０．１％（ｗ／ｖ）含む液体
培地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつとり、１２０℃で
２０分間オートクレーブして滅菌した。冷却後、三角フ
ラスコ内の液体培地にリゾビウム・スピーシーズＭ−１
１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を接種し、回転振盪
下、２７℃で２４時間種培養した。その後、３０ｌ容ジ
ャーファーメンタに上記と同一組成の液体培地を２０ｌ
とり、滅菌後、上記で調製した種培養液を１％（ｖ／
ｖ）接種し、ｐＨ６乃至８に保ちつつ、３０℃で２４時
間通気攪拌培養した。
ｍｌ容三角フラスコに松谷化学工業製澱粉部分加水分解
物『パインデックス＃４』を２．０％（ｗ／ｖ）、ペプ
トンを０．５％（ｗ／ｖ）、酵母エキスを０．１％（ｗ
／ｖ）、燐酸水素二ナトリウムを０．１％（ｗ／ｖ）及
び燐酸二水素ナトリウムを０．１％（ｗ／ｖ）含む液体
培地（ｐＨ７．０）を１００ｍｌずつとり、１２０℃で
２０分間オートクレーブして滅菌した。冷却後、三角フ
ラスコ内の液体培地にリゾビウム・スピーシーズＭ−１
１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を接種し、回転振盪
下、２７℃で２４時間種培養した。その後、３０ｌ容ジ
ャーファーメンタに上記と同一組成の液体培地を２０ｌ
とり、滅菌後、上記で調製した種培養液を１％（ｖ／
ｖ）接種し、ｐＨ６乃至８に保ちつつ、３０℃で２４時
間通気攪拌培養した。
【００２２】このようにして調製した培養物約１８ｌを
実験例１−１と同様に破砕し、破砕物を精製したとこ
ろ、比活性約２４０単位／ｍｇ蛋白質のトレハロース遊
離酵素が培養物１ｌ当たり約６５０単位得られた。
実験例１−１と同様に破砕し、破砕物を精製したとこ
ろ、比活性約２４０単位／ｍｇ蛋白質のトレハロース遊
離酵素が培養物１ｌ当たり約６５０単位得られた。
【００２３】なお、この発明において、トレハロース遊
離酵素の活性を次の方法により測定し、活性値（単位）
で表示する。すなわち、α−マルトトリオシルトレハロ
ースを１．２５％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）を４ｍｌとり、これに酵素液を１ｍｌ加
え、４０℃で３０分間インキュベートして反応させる。
そして、反応液を１ｍｌとり、ソモギ銅液２ｍｌに加え
て反応を停止させた後、ソモギ・ネルソン法により還元
力を測定する。対照には、予め１００℃で１０分間加熱
して失活させた酵素を上記と同様に処置する。トレハロ
ース遊離酵素の１単位とは、上記条件下において、１分
間に１μｍｏｌのグルコースに相当する還元力を増加さ
せる酵素の量と定義する。
離酵素の活性を次の方法により測定し、活性値（単位）
で表示する。すなわち、α−マルトトリオシルトレハロ
ースを１．２５％（ｗ／ｖ）含む５０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）を４ｍｌとり、これに酵素液を１ｍｌ加
え、４０℃で３０分間インキュベートして反応させる。
そして、反応液を１ｍｌとり、ソモギ銅液２ｍｌに加え
て反応を停止させた後、ソモギ・ネルソン法により還元
力を測定する。対照には、予め１００℃で１０分間加熱
して失活させた酵素を上記と同様に処置する。トレハロ
ース遊離酵素の１単位とは、上記条件下において、１分
間に１μｍｏｌのグルコースに相当する還元力を増加さ
せる酵素の量と定義する。
【００２４】
【実験例２ トレハロースの調製】
【００２５】
【実験例２−１ トレハロース含水結晶の調製】馬鈴薯
澱粉１重量部を水１０重量部に懸濁し、常法にしたがっ
て細菌液化型α−アミラーゼを加え、９０℃に加熱して
ＤＥ０．５まで糊化・液化した後、直ちに１３０℃に加
熱して酵素反応を停止させた。得られた澱粉液化液を４
５℃まで急冷後、澱粉固形分１ｇ当たり、実験例１−１
で調製した非還元性糖質生成酵素を１単位、実験例１−
２で調製したトレハロース遊離酵素を１単位、林原生物
化学研究所製イソアミラーゼ剤を２００単位加え、ｐＨ
を６．０付近に保ちながら４８時間糖化して固形分当た
りトレハロースを８０．５％含む反応物を得た。この反
応物を常法にしたがって活性炭により脱色し、イオン交
換樹脂により脱塩精製し、７５％（ｗ／ｗ）まで濃縮
し、助晶缶にとり、５０℃に加熱後、種晶としてトレハ
ロース含水結晶粉状物を固形分当たり１％加え、緩やか
に攪拌しながら２４時間で３０℃まで冷却した。斯くし
て得られたトレハロース含水結晶を含むマスキットをバ
スケット型遠心機により分蜜し、採取した結晶に水を少
量スプレーして洗浄したところ、固形分当たりトレハロ
ースを９９．０％含むトレハロース含水結晶が原料澱粉
固形分当たり４７％の収量で得られた。
澱粉１重量部を水１０重量部に懸濁し、常法にしたがっ
て細菌液化型α−アミラーゼを加え、９０℃に加熱して
ＤＥ０．５まで糊化・液化した後、直ちに１３０℃に加
熱して酵素反応を停止させた。得られた澱粉液化液を４
５℃まで急冷後、澱粉固形分１ｇ当たり、実験例１−１
で調製した非還元性糖質生成酵素を１単位、実験例１−
２で調製したトレハロース遊離酵素を１単位、林原生物
化学研究所製イソアミラーゼ剤を２００単位加え、ｐＨ
を６．０付近に保ちながら４８時間糖化して固形分当た
りトレハロースを８０．５％含む反応物を得た。この反
応物を常法にしたがって活性炭により脱色し、イオン交
換樹脂により脱塩精製し、７５％（ｗ／ｗ）まで濃縮
し、助晶缶にとり、５０℃に加熱後、種晶としてトレハ
ロース含水結晶粉状物を固形分当たり１％加え、緩やか
に攪拌しながら２４時間で３０℃まで冷却した。斯くし
て得られたトレハロース含水結晶を含むマスキットをバ
スケット型遠心機により分蜜し、採取した結晶に水を少
量スプレーして洗浄したところ、固形分当たりトレハロ
ースを９９．０％含むトレハロース含水結晶が原料澱粉
固形分当たり４７％の収量で得られた。
【００２６】
【実験例２−２ 結晶性無水トレハロースの調製】実験
例２−１で調製したトレハロース含水結晶の一部をと
り、少量の水に加熱溶解後、蒸発釜に移し、減圧下で煮
詰めて水分含量９．５％（ｗ／ｗ）のシロップ状物とし
た。このシロップ状物を助晶機にとり、種晶として結晶
性無水トレハロース粉状物を固形分当たり１％加え、攪
拌下、１００℃で５分間助晶した後、マスキットをプラ
スチック製バットに分注し、７０℃で３時間静置して熟
成させた。その後、バットよりブロック状に固化したマ
スキットを取出し、常法により粉砕し、流動乾燥して、
水分含量約１％（ｗ／ｗ）の結晶性無水トレハロース粉
状物を原料固形分当たり約９０％の収率で得た。
例２−１で調製したトレハロース含水結晶の一部をと
り、少量の水に加熱溶解後、蒸発釜に移し、減圧下で煮
詰めて水分含量９．５％（ｗ／ｗ）のシロップ状物とし
た。このシロップ状物を助晶機にとり、種晶として結晶
性無水トレハロース粉状物を固形分当たり１％加え、攪
拌下、１００℃で５分間助晶した後、マスキットをプラ
スチック製バットに分注し、７０℃で３時間静置して熟
成させた。その後、バットよりブロック状に固化したマ
スキットを取出し、常法により粉砕し、流動乾燥して、
水分含量約１％（ｗ／ｗ）の結晶性無水トレハロース粉
状物を原料固形分当たり約９０％の収率で得た。
【００２７】
【実験例２−３ 非晶質無水トレハロースの調製】実験
例２−１で調製したトレハロース含水結晶の一部をと
り、濃度約４０％（ｗ／ｗ）になるように水に溶解し、
凍結乾燥後、粉砕したところ、水分含量約２％（ｗ／
ｗ）の非晶質無水トレハロース粉状物が原料固形分当た
りほぼ１００％の収量で得られた。
例２−１で調製したトレハロース含水結晶の一部をと
り、濃度約４０％（ｗ／ｗ）になるように水に溶解し、
凍結乾燥後、粉砕したところ、水分含量約２％（ｗ／
ｗ）の非晶質無水トレハロース粉状物が原料固形分当た
りほぼ１００％の収量で得られた。
【００２８】
【実験例３ オクタアセチルトレハロースの調製】反応
容器に無水酢酸５０ｇを含む乾燥ピリジン６５ｇをと
り、０℃に冷却後、実験例２−１乃至２−３で調製した
トレハロース含水結晶、結晶性無水トレハロース又は非
晶質無水トレハロースのいずれかを３ｇ加え、同じ温度
で緩やかに攪拌して完全に溶解した。溶液を室温下で１
８時間静置して反応させた後、反応物を氷水に注ぎ、暫
時静置した後、傾斜により分液して有機溶媒層を採取
し、濃縮した。濃縮物をガスクロマトグラフィーを使用
する通常の方法により分析し、反応により生成したオク
タアセチルトレハロースを定量するとともに、その着色
状態を肉眼観察した。結果を表１に示す。
容器に無水酢酸５０ｇを含む乾燥ピリジン６５ｇをと
り、０℃に冷却後、実験例２−１乃至２−３で調製した
トレハロース含水結晶、結晶性無水トレハロース又は非
晶質無水トレハロースのいずれかを３ｇ加え、同じ温度
で緩やかに攪拌して完全に溶解した。溶液を室温下で１
８時間静置して反応させた後、反応物を氷水に注ぎ、暫
時静置した後、傾斜により分液して有機溶媒層を採取
し、濃縮した。濃縮物をガスクロマトグラフィーを使用
する通常の方法により分析し、反応により生成したオク
タアセチルトレハロースを定量するとともに、その着色
状態を肉眼観察した。結果を表１に示す。
【００２９】
【表１】
【００３０】表１の結果は、基質にトレハロース含水結
晶を使用すると、着色著しいオクタアセチルトレロハー
スが理論値の僅か６０％しか得られないところ、結晶性
又は非晶質無水トレハロースを基質にすると、着色少な
く、高品質のオクタアセチルトレハロースがほぼ理論値
で生成することを示している。このことは、基質に無水
トレハロースを使用するこの発明の製造方法によるとき
には、トレハロース含水結晶を使用する場合と比較し
て、トレハロース誘導体の収量及び品質が有意に向上す
ることを裏付けている。
晶を使用すると、着色著しいオクタアセチルトレロハー
スが理論値の僅か６０％しか得られないところ、結晶性
又は非晶質無水トレハロースを基質にすると、着色少な
く、高品質のオクタアセチルトレハロースがほぼ理論値
で生成することを示している。このことは、基質に無水
トレハロースを使用するこの発明の製造方法によるとき
には、トレハロース含水結晶を使用する場合と比較し
て、トレハロース誘導体の収量及び品質が有意に向上す
ることを裏付けている。
【００３１】以下、この発明の実施例について説明す
る。
る。
【００３２】
【実施例１ リノール酸エステル】実験例２−３の方法
により得た非晶質無水トレハロース１０ｇと無水ピリジ
ン２００ｍｌを反応容器にとり、アルゴン気流下、無水
ピリジン５ｍｌに溶解したチアゾリチオン−リノール酸
アミドを４ｇ加えた。６０％（ｗ／ｗ）油性水素化ナト
リウムを８５ｍｇ加え、室温下で２時間反応させ、反応
物に飽和塩化アンモニウム水溶液を１．５ｍｌ加えた
後、ピリジンを減圧留去し、残渣８．５ｇを得た。これ
をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製したとこ
ろ、平均置換度１．４のトレハロースリノール酸エステ
ルが５．３ｇ得られた。
により得た非晶質無水トレハロース１０ｇと無水ピリジ
ン２００ｍｌを反応容器にとり、アルゴン気流下、無水
ピリジン５ｍｌに溶解したチアゾリチオン−リノール酸
アミドを４ｇ加えた。６０％（ｗ／ｗ）油性水素化ナト
リウムを８５ｍｇ加え、室温下で２時間反応させ、反応
物に飽和塩化アンモニウム水溶液を１．５ｍｌ加えた
後、ピリジンを減圧留去し、残渣８．５ｇを得た。これ
をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製したとこ
ろ、平均置換度１．４のトレハロースリノール酸エステ
ルが５．３ｇ得られた。
【００３３】無味、無臭で高活性な本品は、安全な非イ
オン性界面活性剤として、飲食物、化粧品、医薬品など
に有利に配合使用できる。なお、対照として、実験例２
−１の方法により得たトレハロース含水結晶を同様に反
応させたところ、着色著しいトレハロースリノール酸エ
ステルが僅か２．３ｇ得られたに過ぎなかった。
オン性界面活性剤として、飲食物、化粧品、医薬品など
に有利に配合使用できる。なお、対照として、実験例２
−１の方法により得たトレハロース含水結晶を同様に反
応させたところ、着色著しいトレハロースリノール酸エ
ステルが僅か２．３ｇ得られたに過ぎなかった。
【００３４】
【実施例２ ミリスチン酸エステル】実験例２−２の方
法により得た結晶性無水トレハロース２２０ｇをＮ，Ｎ
´−ジメチルホルムアミド８００ｍｌに溶解し、ミリス
チン酸メチルエステル６０ｇと炭酸カルシウムを４ｇ加
え、１００乃至２００ｍｍＨｇの減圧下、攪拌しながら
８５乃至９５℃で２４時間反応させた。その後、反応物
から溶媒を減圧留去し、残渣をアセトン３００ｍｌに２
回浸漬し、浸出液を濃縮し、ベンゼン及び石油エーテル
で洗浄して得られる粘性の油状物を再度アセトン３００
ｍｌに浸漬した。浸出液を氷冷し、沈澱部を採取し、乾
燥したところ、平均置換度１．７のトレハロースミリス
チン酸エステルが３１０ｇ得られた。
法により得た結晶性無水トレハロース２２０ｇをＮ，Ｎ
´−ジメチルホルムアミド８００ｍｌに溶解し、ミリス
チン酸メチルエステル６０ｇと炭酸カルシウムを４ｇ加
え、１００乃至２００ｍｍＨｇの減圧下、攪拌しながら
８５乃至９５℃で２４時間反応させた。その後、反応物
から溶媒を減圧留去し、残渣をアセトン３００ｍｌに２
回浸漬し、浸出液を濃縮し、ベンゼン及び石油エーテル
で洗浄して得られる粘性の油状物を再度アセトン３００
ｍｌに浸漬した。浸出液を氷冷し、沈澱部を採取し、乾
燥したところ、平均置換度１．７のトレハロースミリス
チン酸エステルが３１０ｇ得られた。
【００３５】無味、無臭で高活性な本品は、安全な非イ
オン性界面活性剤として、飲食物、化粧品、医薬品など
に有利に配合使用できる。また、本品には生体内外で悪
性腫瘍の増殖を抑制する作用があり、医薬品の有効成分
としても有用である。なお、対照として、実験例２−１
の方法により得たトレハロース含水結晶を同様に反応さ
せたところ、着色著しいトレハロースミリスチン酸エス
テルが僅か９０ｇ得られたにすぎなかった。
オン性界面活性剤として、飲食物、化粧品、医薬品など
に有利に配合使用できる。また、本品には生体内外で悪
性腫瘍の増殖を抑制する作用があり、医薬品の有効成分
としても有用である。なお、対照として、実験例２−１
の方法により得たトレハロース含水結晶を同様に反応さ
せたところ、着色著しいトレハロースミリスチン酸エス
テルが僅か９０ｇ得られたにすぎなかった。
【００３６】
【実施例３ ドデシルエーテル】ｎ−ドデカノール３９
０ｇを反応容器にとり、１２５℃に加熱後、触媒として
ｐ−トルエンスルホン酸を１ｇ加え、容器内を５乃至１
０ｍｍＨｇに減圧した。別途、実験例２−３の方法によ
り得た非晶質無水トレハロース１００ｇをｎ−ドデカノ
ール１３０ｇに懸濁し、２．３ｇ／分の割合で１００分
間掛けて反応容器内に滴々加えて反応させた。その後、
反応物を飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、未反応の
アルコールを留去したところ、固形分当たりトレハロー
スドデシルエーテルを７９．９％含む組成物が約１４０
ｇ得られた。
０ｇを反応容器にとり、１２５℃に加熱後、触媒として
ｐ−トルエンスルホン酸を１ｇ加え、容器内を５乃至１
０ｍｍＨｇに減圧した。別途、実験例２−３の方法によ
り得た非晶質無水トレハロース１００ｇをｎ−ドデカノ
ール１３０ｇに懸濁し、２．３ｇ／分の割合で１００分
間掛けて反応容器内に滴々加えて反応させた。その後、
反応物を飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、未反応の
アルコールを留去したところ、固形分当たりトレハロー
スドデシルエーテルを７９．９％含む組成物が約１４０
ｇ得られた。
【００３７】高活性な本品は、安全な界面活性剤とし
て、洗濯用洗剤、台所用洗剤、シャンプーを始めとする
洗剤一般に有利に配合使用できる。なお、対照として、
実験例２−１の方法により得たトレハロース含水結晶を
同様に反応させたところ、トレハロースドデシルエーテ
ルを２７．５％含む着色著しい組成物が約８０ｇ得られ
たにすぎなかった。
て、洗濯用洗剤、台所用洗剤、シャンプーを始めとする
洗剤一般に有利に配合使用できる。なお、対照として、
実験例２−１の方法により得たトレハロース含水結晶を
同様に反応させたところ、トレハロースドデシルエーテ
ルを２７．５％含む着色著しい組成物が約８０ｇ得られ
たにすぎなかった。
【００３８】
【実施例４ 硫酸エステル】実験例２−３の方法で得た
非晶質無水トレハロース１重量部を反応容器にとり、窒
素気流下、常法にしたがって別途調製した三酸化硫黄−
ジメチルホルムアミド錯体５重量部を滴々加え、室温下
で４時間、その後、７０℃でさらに１時間反応させた。
５Ｎ水酸化ナトリウムを適量加えて中和し、メチルアル
コールを５倍容加え、暫時静置した後、沈澱部を吸引濾
過により採取したところ、平均置換度７．７のトレハロ
ース硫酸エステルが約９５％の収量で得られた。
非晶質無水トレハロース１重量部を反応容器にとり、窒
素気流下、常法にしたがって別途調製した三酸化硫黄−
ジメチルホルムアミド錯体５重量部を滴々加え、室温下
で４時間、その後、７０℃でさらに１時間反応させた。
５Ｎ水酸化ナトリウムを適量加えて中和し、メチルアル
コールを５倍容加え、暫時静置した後、沈澱部を吸引濾
過により採取したところ、平均置換度７．７のトレハロ
ース硫酸エステルが約９５％の収量で得られた。
【００３９】高品質の本品は、保湿剤、美肌剤として化
粧品一般に有利に配合使用できる。なお、対照として、
実験例２−１の方法により得たトレハロース含水結晶を
同様に反応させたところ、平均置換度６．５の着色著し
いトレハロース硫酸エステルが約６３％の収量で得られ
たにすぎなかった。
粧品一般に有利に配合使用できる。なお、対照として、
実験例２−１の方法により得たトレハロース含水結晶を
同様に反応させたところ、平均置換度６．５の着色著し
いトレハロース硫酸エステルが約６３％の収量で得られ
たにすぎなかった。
【００４０】
【実施例５ 硫酸エステル】
【００４１】
【実施例５−１ マルトース・トレハロース変換酵素の
調製】５００ｍｌ容フラスコに２．０％（ｗ／ｖ）グル
コース、０．５％（ｗ／ｖ）ポリペプトン、０．１％
（ｗ／ｖ）酵母エキス、０．１％（ｗ／ｖ）燐酸水素二
カリウム、０．０６％（ｗ／ｖ）燐酸二水素ナトリウ
ム、０．０５％（ｗ／ｖ）硫酸マグネシウム７水塩、
０．５％（ｗ／ｖ）炭酸カルシウム及び水からなる液体
培地（ｐＨ７．２）を１００ｍｌずつとり、１１５℃で
３０分間加熱して滅菌し、冷却後、ピメロバクター・ス
ピーシーズＲ４８（ＦＥＲＭ ＢＰ−４３１５）を接種
し、２７℃、２００ｒｐｍで２４時間種培養した。その
後、３０ｌ容ジャーファーメンタに上記と同一組成の新
鮮な液体培地を２０ｌずつとり、同様に滅菌し、２７℃
まで冷却後、上記で得た種培養液を１％（ｖ／ｖ）ずつ
接種し、培地のｐＨを６．０乃至８．０に保ちつつ、２
７℃で４０時間通気攪拌培養した。
調製】５００ｍｌ容フラスコに２．０％（ｗ／ｖ）グル
コース、０．５％（ｗ／ｖ）ポリペプトン、０．１％
（ｗ／ｖ）酵母エキス、０．１％（ｗ／ｖ）燐酸水素二
カリウム、０．０６％（ｗ／ｖ）燐酸二水素ナトリウ
ム、０．０５％（ｗ／ｖ）硫酸マグネシウム７水塩、
０．５％（ｗ／ｖ）炭酸カルシウム及び水からなる液体
培地（ｐＨ７．２）を１００ｍｌずつとり、１１５℃で
３０分間加熱して滅菌し、冷却後、ピメロバクター・ス
ピーシーズＲ４８（ＦＥＲＭ ＢＰ−４３１５）を接種
し、２７℃、２００ｒｐｍで２４時間種培養した。その
後、３０ｌ容ジャーファーメンタに上記と同一組成の新
鮮な液体培地を２０ｌずつとり、同様に滅菌し、２７℃
まで冷却後、上記で得た種培養液を１％（ｖ／ｖ）ずつ
接種し、培地のｐＨを６．０乃至８．０に保ちつつ、２
７℃で４０時間通気攪拌培養した。
【００４２】培養物を遠心分離し、得られた菌体（湿重
量約０．５ｋｇ）を１０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）
に浮遊させ、常法により粉砕後、遠心分離して粗酵素液
約４．５ｌを得た。この粗酵素液に硫酸アンモニウムを
３０％飽和になるように加え、４℃で４時間静置して塩
析した後、遠心分離して上清を採取した。この上清に硫
酸アンモニウムを８０％飽和になるように加え、４℃で
一夜静置後、遠心分離により沈澱部を採取し、少量の１
０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、１０ｍＭ燐
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して２４時間透析した。透
析内液を遠心分離して採取した上清を予め１０ｍＭ燐酸
緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化させておいた東ソー
製イオン交換クロマトグラフィー用カラム『ＤＥＡＥト
ヨパール』に負荷し、０Ｍから０．４Ｍに上昇する塩化
ナトリウムの濃度勾配下、カラムに１０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）を通液した。溶出液より酵素活性ある画
分を採取し、１Ｍ硫酸アンモニウムを含む１０ｍＭ燐酸
緩衝液（ｐＨ７．０）に対して１０時間透析後、遠心分
離して上清を採取した。この上清を予め１Ｍ硫酸アンモ
ニウムを含む１０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）により
平衡化させておいた東ソー製疎水クロマトグラフィー用
カラム『ブチルトヨパール』に負荷し、１Ｍから０Ｍに
低下する硫酸アンモニウムの濃度勾配下、カラムに１０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を通液した。溶出液から
酵素活性ある画分を採取し、予め１０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）により平衡化させておいたファルマシア
製イオン交換クロマトグラフィー用カラム『モノＱ Ｈ
Ｒ５／５』に負荷し、０Ｍから０．５Ｍに上昇する塩化
ナトリウムの濃度勾配下、カラムに１０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）を通液し、溶出液より酵素活性ある画分
を採取した。このようにして精製したマルトース・トレ
ハロース変換酵素の比活性は約１７単位／ｍｇ蛋白質で
あり、収量は培養物１１当たり約４６単位であった。
量約０．５ｋｇ）を１０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）
に浮遊させ、常法により粉砕後、遠心分離して粗酵素液
約４．５ｌを得た。この粗酵素液に硫酸アンモニウムを
３０％飽和になるように加え、４℃で４時間静置して塩
析した後、遠心分離して上清を採取した。この上清に硫
酸アンモニウムを８０％飽和になるように加え、４℃で
一夜静置後、遠心分離により沈澱部を採取し、少量の１
０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解し、１０ｍＭ燐
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して２４時間透析した。透
析内液を遠心分離して採取した上清を予め１０ｍＭ燐酸
緩衝液（ｐＨ７．０）により平衡化させておいた東ソー
製イオン交換クロマトグラフィー用カラム『ＤＥＡＥト
ヨパール』に負荷し、０Ｍから０．４Ｍに上昇する塩化
ナトリウムの濃度勾配下、カラムに１０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）を通液した。溶出液より酵素活性ある画
分を採取し、１Ｍ硫酸アンモニウムを含む１０ｍＭ燐酸
緩衝液（ｐＨ７．０）に対して１０時間透析後、遠心分
離して上清を採取した。この上清を予め１Ｍ硫酸アンモ
ニウムを含む１０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）により
平衡化させておいた東ソー製疎水クロマトグラフィー用
カラム『ブチルトヨパール』に負荷し、１Ｍから０Ｍに
低下する硫酸アンモニウムの濃度勾配下、カラムに１０
ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を通液した。溶出液から
酵素活性ある画分を採取し、予め１０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）により平衡化させておいたファルマシア
製イオン交換クロマトグラフィー用カラム『モノＱ Ｈ
Ｒ５／５』に負荷し、０Ｍから０．５Ｍに上昇する塩化
ナトリウムの濃度勾配下、カラムに１０ｍＭ燐酸緩衝液
（ｐＨ７．０）を通液し、溶出液より酵素活性ある画分
を採取した。このようにして精製したマルトース・トレ
ハロース変換酵素の比活性は約１７単位／ｍｇ蛋白質で
あり、収量は培養物１１当たり約４６単位であった。
【００４３】なお、この発明において、マルトース・ト
レハロース変換酵素の活性を次の方法により測定し、活
性値（単位）で表示する。すなわち、マルトースを２０
％（ｗ／ｖ）含む１０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を
１ｍｌとり、適宜濃度に希釈した酵素液を１ｍｌ加え、
２５℃で６０分間インキュベートして反応させた後、１
００℃で１０分間加熱して反応を停止させる。反応物を
５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．５）で１１倍希釈し、そ
の希釈した反応物を０．４ｍｌとり、これにトレハラー
ゼを１単位／ｍｌ含む溶液を０．１ｍｌ加え、４５℃で
１２０分間インキュベート後、反応物中のグルコース量
をグルコースオキシダーゼ法で定量する。同時に、１０
０℃で１０分間加熱して失活させた酵素液を用いる系を
設け、上記と同様に処置して対照とする。このようにし
て求めたグルコース量から反応により生成したトレハロ
ースの量を推定する。マルトース・トレハロース変換酵
素の１単位とは、上記条件下において、１分間に１μｍ
ｏｌのトレハロースを生成する酵素の量と定義する。
レハロース変換酵素の活性を次の方法により測定し、活
性値（単位）で表示する。すなわち、マルトースを２０
％（ｗ／ｖ）含む１０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を
１ｍｌとり、適宜濃度に希釈した酵素液を１ｍｌ加え、
２５℃で６０分間インキュベートして反応させた後、１
００℃で１０分間加熱して反応を停止させる。反応物を
５０ｍＭ燐酸緩衝液（ｐＨ７．５）で１１倍希釈し、そ
の希釈した反応物を０．４ｍｌとり、これにトレハラー
ゼを１単位／ｍｌ含む溶液を０．１ｍｌ加え、４５℃で
１２０分間インキュベート後、反応物中のグルコース量
をグルコースオキシダーゼ法で定量する。同時に、１０
０℃で１０分間加熱して失活させた酵素液を用いる系を
設け、上記と同様に処置して対照とする。このようにし
て求めたグルコース量から反応により生成したトレハロ
ースの量を推定する。マルトース・トレハロース変換酵
素の１単位とは、上記条件下において、１分間に１μｍ
ｏｌのトレハロースを生成する酵素の量と定義する。
【００４４】
【実施例５−２ 結晶性無水トレハロースの調製】玉蜀
黍澱粉を濃度１５％（ｗ／ｗ）になるように水に懸濁
し、ｐＨ５．５に調整後、ナガセ生化学工業製液化型α
−アミラーゼ剤『スピターゼＨＳ』を澱粉固形分１ｇ当
たり２単位加え、攪拌下、９０℃に加熱して澱粉を糊化
・液化した。澱粉液化液を１２０℃で２０分間オートク
レーブして酵素を失活させ、５５℃に急冷し、ｐＨ５．
０に調整後、澱粉固形分１ｇ当たり、林原生物化学研究
所製イソアミラーゼ剤とナガセ生化学工業製β−アミラ
ーゼ剤をそれぞれ３００単位又は２０単位加え、２４時
間反応させて固形分当たりマルトースを９２％含む反応
物を得た。この反応物を１００℃で２０分間加熱して酵
素を失活させ、２０℃、ｐＨ７．０に調整後、実施例５
−１で調製したマルトース・トレハロース変換酵素を澱
粉固形分１ｇ当たり１．５単位加え、７２時間反応させ
て固形分当たりトレハロースを７１％含む反応物を得
た。この反応物を９５℃で１０分間加熱して酵素を失活
させ、酵素を失活させ、冷却し、実験例２−１と同様に
精製後、水分含量９．５％（ｗ／ｗ）まで濃縮した。濃
縮物を助晶機にとり、種晶として結晶性無水トレハロー
ス粉状物を固形分当たり１％加え、攪拌下、１１０℃で
１０分間助晶した後、マスキットをプラスチック製バン
ドに分注し、７０℃で３時間静置して熟成させた。その
後、バットよりブロック状に固化したマスキットを取出
し、常法により粉砕し、流動乾燥して、水分含量約２％
（ｗ／ｗ）の結晶性無水トレハロース紛状物を原料澱粉
固形分当たり約９５％の収率で得た。
黍澱粉を濃度１５％（ｗ／ｗ）になるように水に懸濁
し、ｐＨ５．５に調整後、ナガセ生化学工業製液化型α
−アミラーゼ剤『スピターゼＨＳ』を澱粉固形分１ｇ当
たり２単位加え、攪拌下、９０℃に加熱して澱粉を糊化
・液化した。澱粉液化液を１２０℃で２０分間オートク
レーブして酵素を失活させ、５５℃に急冷し、ｐＨ５．
０に調整後、澱粉固形分１ｇ当たり、林原生物化学研究
所製イソアミラーゼ剤とナガセ生化学工業製β−アミラ
ーゼ剤をそれぞれ３００単位又は２０単位加え、２４時
間反応させて固形分当たりマルトースを９２％含む反応
物を得た。この反応物を１００℃で２０分間加熱して酵
素を失活させ、２０℃、ｐＨ７．０に調整後、実施例５
−１で調製したマルトース・トレハロース変換酵素を澱
粉固形分１ｇ当たり１．５単位加え、７２時間反応させ
て固形分当たりトレハロースを７１％含む反応物を得
た。この反応物を９５℃で１０分間加熱して酵素を失活
させ、酵素を失活させ、冷却し、実験例２−１と同様に
精製後、水分含量９．５％（ｗ／ｗ）まで濃縮した。濃
縮物を助晶機にとり、種晶として結晶性無水トレハロー
ス粉状物を固形分当たり１％加え、攪拌下、１１０℃で
１０分間助晶した後、マスキットをプラスチック製バン
ドに分注し、７０℃で３時間静置して熟成させた。その
後、バットよりブロック状に固化したマスキットを取出
し、常法により粉砕し、流動乾燥して、水分含量約２％
（ｗ／ｗ）の結晶性無水トレハロース紛状物を原料澱粉
固形分当たり約９５％の収率で得た。
【００４５】
【実施例５−３ 硫酸エステルの調製】実施例５−２で
調製した結晶性無水トレハロースを１００ｇとり、実施
例４の方法により硫酸化したところ、平均置換度約８の
トレハロース硫酸エステルを含む組成物が約２４０ｇ得
られた。
調製した結晶性無水トレハロースを１００ｇとり、実施
例４の方法により硫酸化したところ、平均置換度約８の
トレハロース硫酸エステルを含む組成物が約２４０ｇ得
られた。
【００４６】高品質の本品は、保湿剤、美肌剤として化
粧品一般に有利に配合使用できる。
粧品一般に有利に配合使用できる。
【００４７】
【発明の効果】以上説明したごとく、この発明は、無水
トレハロースに無水条件下で反応性試薬を反応させるこ
とにより、従来方法では容易に得られなかった高品質の
トレハロース誘導体を高収率で製造することを可能なら
しめるものである。トレハロース含水結晶と違って、無
水トレハロースは結晶水を持たないので、反応前の乾燥
工程を著しく短縮するか、場合に依っては省略すること
さえ可能となり、トレハロース誘導体の製造コストを大
幅に引下げることができることとなる。そして、この発
明の方法により得られたトレハロース誘導体は、界面活
性剤、保湿剤、美肌剤、抗腫瘍剤、合成中間体などとし
て飲食物、化粧品、医薬品、洗剤、化学品の製造又は合
成に多種多様の用途を有する。
トレハロースに無水条件下で反応性試薬を反応させるこ
とにより、従来方法では容易に得られなかった高品質の
トレハロース誘導体を高収率で製造することを可能なら
しめるものである。トレハロース含水結晶と違って、無
水トレハロースは結晶水を持たないので、反応前の乾燥
工程を著しく短縮するか、場合に依っては省略すること
さえ可能となり、トレハロース誘導体の製造コストを大
幅に引下げることができることとなる。そして、この発
明の方法により得られたトレハロース誘導体は、界面活
性剤、保湿剤、美肌剤、抗腫瘍剤、合成中間体などとし
て飲食物、化粧品、医薬品、洗剤、化学品の製造又は合
成に多種多様の用途を有する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｈ 15/04 Ａ Ｃ Ｃ１２Ｎ 9/24 Ｃ１２Ｐ 19/16 7432−4Ｂ 19/22 7432−4Ｂ
Claims (6)
- 【請求項１】 無水トレハロースに無水条件下で反応性
試薬を反応させることを特徴とするトレハロース誘導体
の製造方法。 - 【請求項２】 無水トレハロースが、結晶性又は非晶質
であることを特徴とする請求項１に記載のトレハロース
誘導体の製造方法。 - 【請求項３】 無水トレハロースが、固形分当たり、ト
レハロースを７０％以上含むことを特徴とする請求項１
又は２に記載のトレハロース誘導体の製造方法。 - 【請求項４】 無水トレハロースが、澱粉部分加水分解
物に非還元性糖質生成酵素を作用させて末端にトレハロ
ース構造を有する非還元性糖質を生成せしめ、これにト
レハロース遊離酵素を作用させ、遊離したトレハロース
を乾燥又は結晶化して得られたものであることを特徴と
する請求項１、２又は３に記載のトレハロース誘導体の
製造方法。 - 【請求項５】 無水トレハロースが、マルトースにマル
トース・トレハロース変換酵素を作用させ、生成したト
レハロースを乾燥又は結晶化して得られたものであるこ
とを特徴とする請求項１、２又は３に記載のトレハロー
ス誘導体の製造方法。 - 【請求項６】 トレハロース誘導体が、エステル又はエ
ーテルであることを特徴とする請求項１、２、３、４又
は５に記載のトレハロース誘導体の製造方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6341189A JPH08157491A (ja) | 1994-11-30 | 1994-11-30 | トレハロース誘導体の製造方法 |
| US08/563,764 US5906924A (en) | 1994-11-30 | 1995-11-28 | Process for producing trehalose derivatives |
| TW084112675A TW450973B (en) | 1994-11-30 | 1995-11-28 | Process for producing trehalose derivatives |
| DE69526182T DE69526182T2 (de) | 1994-11-30 | 1995-11-29 | Verfahren zur Herstellung von Trehalosederivaten |
| EP95308605A EP0714905B1 (en) | 1994-11-30 | 1995-11-29 | Process for producing trehalose derivatives |
| KR1019950045534A KR100387305B1 (ko) | 1994-11-30 | 1995-11-30 | 트레할로오스유도체제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6341189A JPH08157491A (ja) | 1994-11-30 | 1994-11-30 | トレハロース誘導体の製造方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006183970A Division JP2006342168A (ja) | 2006-07-04 | 2006-07-04 | トレハロース誘導体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08157491A true JPH08157491A (ja) | 1996-06-18 |
Family
ID=18344057
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6341189A Withdrawn JPH08157491A (ja) | 1994-11-30 | 1994-11-30 | トレハロース誘導体の製造方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5906924A (ja) |
| EP (1) | EP0714905B1 (ja) |
| JP (1) | JPH08157491A (ja) |
| KR (1) | KR100387305B1 (ja) |
| DE (1) | DE69526182T2 (ja) |
| TW (1) | TW450973B (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002363064A (ja) * | 2001-06-06 | 2002-12-18 | Kanebo Ltd | 皮膚洗浄料 |
| JP2002363598A (ja) * | 2001-06-06 | 2002-12-18 | Kanebo Ltd | 非身体用洗浄剤 |
| JP2002363037A (ja) * | 2001-06-06 | 2002-12-18 | Kanebo Ltd | 頭髪化粧料 |
| JP2017052809A (ja) * | 2016-12-22 | 2017-03-16 | 第一工業製薬株式会社 | ショ糖カルボン酸エステルの製造方法 |
| JP2017052808A (ja) * | 2016-12-22 | 2017-03-16 | 第一工業製薬株式会社 | ショ糖カルボン酸エステルの製造方法 |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PT679088E (pt) | 1992-09-29 | 2002-12-31 | Inhale Therapeutic Syst | Administracao pulmonar de fragmentos activos de hormona paratiroide |
| CA2183577C (en) | 1994-03-07 | 2007-10-30 | John S. Patton | Methods and compositions for pulmonary delivery of insulin |
| US6586006B2 (en) | 1994-08-04 | 2003-07-01 | Elan Drug Delivery Limited | Solid delivery systems for controlled release of molecules incorporated therein and methods of making same |
| US6290991B1 (en) | 1994-12-02 | 2001-09-18 | Quandrant Holdings Cambridge Limited | Solid dose delivery vehicle and methods of making same |
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| US6964771B1 (en) | 1995-06-07 | 2005-11-15 | Elan Drug Delivery Limited | Method for stably incorporating substances within dry, foamed glass matrices |
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| US5958455A (en) * | 1996-02-09 | 1999-09-28 | Quadrant Holdings Cambridge Ltd | Oral solid dosage forms, methods of making same and compositions thereof |
| US6632648B1 (en) | 1996-05-14 | 2003-10-14 | Elan Drug Delivery Limited | Methods of terminal sterilization of fibrinogen |
| US6468782B1 (en) | 1996-12-05 | 2002-10-22 | Quadrant Healthcare (Uk) Limited | Methods of preserving prokaryotic cells and compositions obtained thereby |
| US20060165606A1 (en) | 1997-09-29 | 2006-07-27 | Nektar Therapeutics | Pulmonary delivery particles comprising water insoluble or crystalline active agents |
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