JPH0753762B2

JPH0753762B2 - 新規な多糖体

Info

Publication number: JPH0753762B2
Application number: JP23583686A
Authority: JP
Inventors: 陽城山田; 宗鉄丁; 恭男大塚
Original assignee: Tsumura and Co; Kitasato Institute
Current assignee: Tsumura and Co; Kitasato Institute
Priority date: 1986-10-03
Filing date: 1986-10-03
Publication date: 1995-06-07
Anticipated expiration: 2010-06-07
Also published as: JPS6390505A

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は抗補体活性を有し、関節リウマチ、甲状腺炎、
慢性肝炎、慢性腎炎等の自己免疫疾患の治療に有効な新
規な多糖に関するものである。

［従来の技術および問題点］血清中に存在する補体系は、アレルギー反応にも関与す
ることが知られており、この補体系の活性を抑制する物
質、すなわち抗補体活性を有する物質が、自己免疫疾患
の治療に有効であることが示唆されている。

従って、抗補体活性を有する薬剤の開発が望まれてい
た。

［問題点を解決するための手段］本発明者等は、抗補体活性を有する物質を見いだすべく
鋭意研究が重ねた結果、セリ科（Umbelliferae）のミシ
マサイコ（Bupleumfalcatum L.）の根である生薬、すな
わち柴胡（Bupleuri Radix）に含有される本発明の多糖
体を単離し、本発明を完成した。本発明の多糖体の理化
学的性質を示すと次の如くである。

性状：白色繊維状分子量:36,000（ゲル濾過クロマトグラフイー）、比旋光度：▲［α］²⁰ _D▼＝＋120、構成糖：ラムノース、アラビノース、ガラクトース、
ガラクツロン酸、単一性：電気泳動、ゲル濾過クロマトグラフイー、高
速液体クロマトグラフイーにより単一性を示す、構成糖結合様式：１−５結合アラビノフラノース 1.4％末端ガラクトース 2.7％末端ガラクツロン酸 2.7％３−５分岐アラビノフラノース 2.8％２−４分岐ラムノース 2.2％１−４結合ガラクツロン酸 80.0％１−６結合ガラクトース 1.9％１−４結合ガラクトース 4.2％３−６分岐ガラクトース 0.7％本発明の多糖体は上記に示した如くの糖構成、結合様式
を持つものであり、このような多糖体に関する発表は全
くなされていないことから、本発明の多糖体は新規な多
糖体であることが認められる。

本発明の多糖体は例えば次のようにして得ることができ
る。

柴胡を粉砕し、10倍量程度の水性溶剤にて抽出し、抽出
液を濾過して得た濾液を遠心分離し、上清を凍結乾燥し
て乾燥物を得る。この乾燥物をアセトン、メタノール、
エタノール等の有機溶媒に溶解し、場合によっては還流
した後、遠心分離して脂質成分を除いた沈澱物を精製水
に溶解し、更に透析を行い、非透析物を凍結乾燥して粗
分画を得る。

この粗分画を精製水に溶解し、臭化セチル−トリメチル
−アンモニウム等の４級アンモニウムを加えて混和し、
放置した後遠心分離する。その沈澱物を５〜30％程度の
塩化ナトリウム水溶液に溶解し、エタノールを加え、遠
心分離して得た沈澱物を更に精製水に溶解し、透析を行
い、非透析分画を凍結乾燥して多糖含有分画を得る。

この多糖含有分画を、通常用いられるゲル濾過カラムク
ロマトグラフイーおよび／またはイオン交換クロマトグ
ラフイーに付すことにより本発明の多糖体を得る。

抽出する水性溶剤としては水、特に精製水が好ましく、
抽出にあたつては熱時抽出が望ましい。遠心分離の条件
としては6000〜8000rpm、20〜40分程度であれば十分で
ある。透析に際しては、流水または精製水に対し２〜５
日間程度で行うことができる。

ゲル濾過カラムクロマトグラフイーのゲルの具体例とし
はセフアロース（Sepharose）CL−6B等が挙げられ、イ
オン交換クロマトグラフイーのゲルの具体例としてはDE
AE−セフアロース（Sepharose）CL−6B等が挙げられ
る。

次に本発明の多糖体の製造の具体例を示す。

具体例柴胡1.0kgに10の精製水を加え、液量が半量になるま
で加熱抽出した。抽出液を濾過し、濾液を7500rpm、30
分間遠心分離し、上清を得た。沈澱物に上記と同様の操
作を繰り返し、上清を合併し、凍結乾燥して得た乾燥物
136.3gをメタノールに溶解し、還流、遠心分離、沈澱物
を精製水に溶解した後、流水に対し３日間、精製水に対
し２日間透析した。非透析分画を凍結乾燥し、粗分画3
5.3gを得た。

この粗分画のうち15.8gを精製水に溶解し、同量の８％
臭化セチル−トリメチル−アンモニウムを加え、混和し
て20℃で４時間放置した。この溶液を遠心分離し、沈澱
物を10％塩化ナトリウム水溶液に溶解し、更にエタノー
ルを加えて遠心分離した。得られた沈澱物を精製水に溶
解後、流水に対して３日間、精製水に対して２日間透析
し、得られた非透析分画を凍結乾燥して多糖含有分画3.
54gを得た。

次に、多糖含有分画500mgを精製水に溶解し、精製水で
平衡化したDEAE−セフアロースCL−6Bカラムに吸着さ
せ、ギ酸アンモニウムを溶媒として、順次濃度を変えて
溶出させた。0.3Mギ酸アンモニウムで溶出した溶出液を
濃縮し、更に0.2M塩化ナトリウムで平衡化したセフアロ
ースCL−6Bカラムでゲル濾過を行い白色繊維状の物質を
得た。

次に本発明の多糖体が、抗補体活性を有し、慢性腎炎等
の自己免疫疾患の治療に有効であることを実験例を挙げ
て説明する。

実験例具体例で得た多糖体１〜10mgを生理食塩水に溶解し、そ
のうち50μを、50μＭのMg²⁺および150μＭのCa²⁺を
含むゼラチン添加ベロナール緩衝液（pH7.4,GVB⁺⁺）で
希釈し、更に正常ヒト血清を添加して、37℃で30分間イ
ンキユベートした。

この溶液を２倍連続希釈し、試験管に分注し、一定量の
IgM−ヘモリジン感作ヒツジ赤血球を加え、更に37℃で6
0分間、混和しながら反応させた。

反応終了後、直ちにリン酸−生理食塩水緩衝液（PBS^-）
を加え、250rpmで８分間遠心分離し、溶血反応に基づく
波長412nmでの上清の吸光度より、総残存補体価（TC
H₅₀）を測定した。

具体例で得た多糖体を加えない以外は、上記と同様に反
応させた場合のTCH₅₀を100として、本発明の多糖体によ
るTCH₅₀の減少率をもつて抗補体活性とした。

その結果、本発明の多糖体の抗補体活性は、80〜100％
であつた。

本発明の多糖体はそのまま、あるいは慣用の製剤担体と
共に動物および人に投与することができる。投与形態と
しては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用
され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口剤、注射剤、
坐剤等の非経口剤が挙げられる。

錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の経口剤は常法に従つて製
造される。錠剤は本発明の多糖体をゼラチン、でん粉、
乳糖、ステアリン酸マグネシウム、滑石、アラビアゴム
等の製剤学的賦形剤と混合し賦形することによりつくら
れ、カプセル剤は、上記化合物を不活性の製剤充填剤、
もしくは希釈剤と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質
ゼラチンカプセル等に充填することによりつくられる。
シロツプ剤、エリキシル剤は、本発明の多糖体をシヨ糖
等の甘味剤、メチルパラベンおよびプロピルパラベン類
等の防腐剤、着色剤、調味剤、芳香剤、補助剤と混合し
て製造される。

非経口剤は常法に従つて製造され、希釈剤として一般に
注射用蒸留水、生理食塩水、デキストロース水溶液、プ
ロピレングコール等を用いることができる。さらに必要
に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。ま
た、この非経口剤は安定性の点から、カプセル等に充填
後冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使
用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもでき
る。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】セリ科のミシマサイコの根より得られ、下
記の理化学的性質性状：白色繊維状分子量:36,000（ゲル濾過クロマトグラフイー）、比旋光度：▲［α］²⁰ _D▼＝＋120、構成糖：ラムノース、アラビノース、ガラクトース、
ガラクツロン酸、単一性：電気泳動、ゲル濾過クロマトグラフイー、高
速液体クロマトグラフイーにより単一性を示す、構成糖結合様式：１−５結合アラビノフラノース 1.4％末端ガラクトース 2.7％末端ガラクツロン酸 2.7％３−５分岐アラビノフラノース 2.8％２−４分岐ラムノース 2.2％１−４結合ガラクツロン酸 80.0％１−６結合ガラクトース 1.9％１−４結合ガラクトース 4.2％３−６分岐ガラクトース 0.7％を有する多糖体。