JPH07504924A - 洗剤用酵素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 洗剤用酵素 技術分野 本発明は、洗剤用酵素の分野に存する。更に詳しくは、本発明は洗剤の目的のた めのメタリジウム（Ｍｅｔａｒｒｈｉｚｕｍ）属の構成員から由来するプロテア ーゼの使用に関する。

背景技術 メタリジウム　アニソブリＳ−（Ｍｅｔａｒｒｈｉｚｕｍ　ａｎｉｓｏｐｌｉａ ｅ）（Ｍｅｔｓｃｈｎ、　）ソロキン（Ｓｏｒｏｋｉｎ）由来のプロテアーゼは 、文献に完全に記載されている。

ｒＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｕｔｉｃｌｅ−Ｄｅｇｒａｄｉ ｎｇ　Ｐｒｏｔｅａｓｅｓ　Ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙ　ｔｈｅ　Ｅｎｔｏｍｏｐａ ｔｈｏｇｅｎ　Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ　ａｎｉｓｏｐｌｉａｓｅ　Ｊ　（Ｒ， Ｊ、　ｓｔ。

リーガ、Ａ、に、カルネイ、およびＲ，Ｍ、　クー／＜；　Ａｒｃｈｉｖｅｓ　 ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ　（１９８７） ２５３．２２１−２３２）において、株（ＭＨＩ）が記載されこれは培養濾液を 生産しこの濾液から２種のキモエラスターゼ（ｃｈｙｍｏｅｌａｓｔａｓｅ）お よび３種のトリプシン様プロテアーゼが検出できた。２種の主なアルカリプロテ アーゼ成分；キモエラスターゼ（Ｐｒｌと称する）およびトリプシン様プロテア ーゼ（Ｐｒ２と称する）が精製された。Ｐｒｌは約１Ｏ０３のｐＬ約２５．００ ０の分子量および例えばＮ−スクシニル−し−アラニル−し−アラニル−Ｌ−プ ロリル−し−フェニルアラニル−ｐ−ニトロアニリド（５ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ −Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡ）、ハイド（ｈｉｄｅ）タンパク質アズール（ａｚｕ ｒｅ）、ロカスト　カーティクル（ｌｏｃｕｓｔ　ｃｕｔｉｃｌｅ）、エラスチ ン−コンゴレッド（ｅｌａｓｔｉｎ−Ｃｏｎｇｏ　Ｒｅｄ）およびカゼインに対 する活性によって特徴づけられている。Ｐｒ２は約４．４２のｐ１１約２８．５ ００の分子量、および例えばＮ−ベンゾイル−し−アルギニル−ｐ−ニトロアニ リド、ハイデ（ｈｉｄｅ）蛋白質アズール（ｃａｚｕｒｅ）　、およびカゼイン に対する活性によって特徴づけられる。Ｐｒ２のアイソザイムは、４．０および ４．２のｐＨ値を育する。Ｐｒ２はＰｒｌの５％未満のクチクラ−分解活性を有 し、そして従ってＰｒｌはＰｒ２よりも寄生においてより重要な役割を有してい ると考えられる。

ｒＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｙｍｏｅｌｓｔａｓｅｓ　ａｎｄ　Ｔ ｒｙｐｓｉｎ−１ｉｋｅ　Ｅｎｚｙａ＋ｅｓｉｎ　Ｆｉｖｅ　５ｐｅｃｉｅｓ　 ｏｆ　Ｅｎｌｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ＤｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓＪ　 （Ｒ，Ｊ。

ｓｔ、リーガー、　Ｒ，Ｍ、　クーパー、およびＡ、　Ｋ、カルネイ；Ａｒｃｈ ｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｊｏｐｈｙｓｉｃｓ　 ２５８．１２３−１３１）において、４種の他の株であるムタリジウム　アニソ ブリー（Ｍｅｔａｒｒｉｚｉｕｍａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）が言及されている。そ れらは全て５ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに対する活性およ び約１０．４．１０．７．１０．５および１Ｏ００のｐｌを育する主りリモエス ラターゼ（Ｐｒｌ）並びにＢ　＊−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−１）ＮＡおよび酸 性範囲にｐｔを有するトリプシン一様プロテアーゼ（Ｐｒ２）を有していた。２ 種の単離物Ｍ、アニソブリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）変異体上Ｒ５３２４およ びＭ、アニソブリーｒ−（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）変異体上Ｒ５２９８は、Ｐｒ ２酵素を有しこれは極めて特異的基質配列を要求しそしてそれらは大豆トリプシ ン阻害剤によって阻害されない。これらの高い特異性のＰｒ２酵素はヨーロッパ 特許出願３３５．０２３で権利要求されており、該出願ではそれらが薬学的、農 業的又は工業的適用を存することが述べられている。

しかしＭ、アニソブリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉｅａ）のＰｒｌ酵素の実際的使用に ついてはこれまで決して示されてきていない。

発明の要約 驚くべきことに、メタリジウム（Ｍｅｔａｒｒｈｉｚｉｕｍ）属の菌類由来のア ルカリプロテアーゼが秀れた洗浄作用を有することが見出された。

（Ｓｏｒｏｋｉｎ、）　、例えば株ＤＳＭ　Ｎｏ、　６５９２又はその突然変異 体もしくはその変異体から、洗剤用酵素として得ることのできるプロテアーゼの 使用に関する。

一ゼの免疫化学的性質と同−又は部分的同一である免疫化学的性質を有するプロ テアーゼの使用に関する。

株ＤＳＭ　Ｎｏ、　６５９２又はそれらの突然変異体又は変異体から得ることの テアーゼの免疫化学的性質と同−又は部分的同一の免疫化学的性質を有するプロ テアーゼを含んでなる洗剤組成物を提供する。

発明の詳細な開示 本発明は、洗剤用酵素としてメタリジウム（Ｍｅｔａｒｒｈｉｚｉｕｍ）属の菌 類（ｆｕｎｇｉ）由来のプロテアーゼの使用に関する。

の構成員から得ることができる。Ｍ、アニソブリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）　（Ｍｅｔｓｃｈｎ、）ソロキンの株は、ＤＳＭ、　Ｎ ｏ、　６５９２から得ることができる。

微生物の培養 微生物は、同化性炭素および窒素源並びに他の必須の栄養源を含有する栄養源媒 地中、好気性条件のもとで培養することができ、該媒地は当業者に公知の原則に 従つて構成される。微生物は、例えばグルロース、デンプン、デキストリン、大 豆粉、綿実粉、コーンステイープリカー、および無機塩の如き通常使用される成 分を含有する液体栄養源媒地中に本発明の細胞外プロテアーゼを産生じ得る。

プロテアーゼの回収および精製 発酵後、菌類によって産生された細胞外プロテアーゼは、当業者に公知の原則に 従い、例えば遠心分離又はドラム濾過（ｄｒｕｍｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）により 培養ブロスから粗い物質の除去、蒸発又は限外濾過によるブロスの精製、および 調製的エレクトロフォーカッシング、陰イオン交換クロマトグラフィー又はアフ ィニティークロマトグラフィーによる精製の工程を用いて回収されそして精製さ れ得る。

組換え方式により製造されるプロテアーゼ本発明のプロテアーゼは、組換えＤＮ Ａ−工学により得ることができる。

プロテアーゼの製造方法は、プロテアーゼをコードするＤＮＡ断片を単離し；　 ＤＮＡ断片を適当な発現シグナルと適当なプラスミドベクター中で一緒にし；プ ラスミドベクターを自己複製プラスミドとして又は染色体に組込むかして適当な 宿主に導入し；宿主生物をプロテアーゼの発現に至る条件下で培養し；そしてプ ロテアーゼを培地からプロテアーゼを回収することを含んでなる。この組換えプ ロセスを構成する種々の工程は、当業者に自体公知である。

好ましい宿主生物はＥ、コリー又は属バシラス、アスペルギルス又はストレプト マイセスの構成員である。

タンパク分解作用の分析 タンパク分解作用を、基質としてカゼインを用いて測定する。ｌカゼインプロテ アーゼ単位＜　ｃｐｕ）を、標準的条件下、すなわち２５℃およびｐＨ９，５で ３０分間インキュベーションし、１分当たり１ｍＭの第一アミノ基（セリン標準 法と比較して決定）を放出する酵素の量として規定する。分析方法を記載する印 刷物ＡＰ２２８をノボノルディスＡ／Ｓに要求により入手可能であり、この印刷 物は参考のため本明細書に導入される。

」！ 本発明の酵素は、属メタリジウム（Ｍｅｔａｒｒｈｉｚｉｕｍ）の構成員から、 例えば種Ｍ、アニソブリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）　（Ｍｅｔｓｃｈｎ、）ソ ロキン（その例はＤＳＭ　Ｎｏ、６５９２である）から入ることができる。

本発明のプロテアーゼは、５ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに 対する活性並びに８．０を超える等電点を有するアルカリプロテアーゼである。

本発明の特定のプロテアーゼは、約９．２−９．３のｐＩ；約３２．０００の分 子量：ヘモグロビンを有し、カゼイン、脱脂乳および５ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ− Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに対して活性であり、モしてＭ、アニソプリエ（ａｎｉ ｓｏｐｌｉａｅ）、　ＤＳＭ　Ｎｏ、６５９２から由来するプロテアーゼの免疫 化学的性質を同−又は部分的同一の免疫化学的性質を存するプロテア−免疫化学 的性質は、交差反応同一性試験によって免疫学的に測定することができる。同一 性試験は周知のオフテルロ二−二重免疫拡散法又はＮ、　Ｈ，アクセルセンによ る双頭交差免疫電気泳動；）１ａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉ ｐｉｔａｔｉｏｎ−ｉｎ−Ｇｅｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　；ブラックウェル　 サイエンティフィック出版社（１９８３）、５章および１４章により行うことが できる。語句「免疫的同一」および［部分的に免疫的同一」は、同書、５，１９ および２０章に記載されている。

洗剤組成物 本発明によれば、前述のプロテアーゼが良好な洗浄性能を有することが見出され た。

本発明の洗剤組成物は、１種又はそれ以上の界面活性剤を含むことができ、この 界面活性剤はアニオン、非イオン、カチオン、両性又は双性イオンタイプ、又は これらの混合物であってよい。アニオン界面活性剤の典型的例は、直鎖アルキル ベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）　；アルキルスルフェート（ＡＳ）　；αオレ フインスルホネート（ＡＯＳ）　；アルコールエトキシスルフェート（ＡＥＳ） および天然脂肪酸のアルカリ金属塩である。非イオン界面活性剤の例は、アルキ ルポリエチレングリコールエーテル；ノニルフェノール　ポリエチレングリコー ル　エーテル：スクロースおよびグルコースの脂肪酸エステル；およびポリエト キシル化アルキルグルコシドのエステルである。

本発明の洗剤組成物は又、当業者に公知の他の洗剤成分、例えばビルダー、漂白 剤、漂白活性剤、錆止め剤、金属イオン封鎖剤、配合助剤、蛍光増白剤、起泡増 進剤、キレート化剤、充填剤、布帛柔軟等を含有できる。本発明の洗剤組成物は 、Ｊ、フォルベに記載される如く実質的に製剤化できる〔フォルベ、Ｊ、；　５ ｕｒｆａｃｔａｎｔｓ　ｉｎＣｏｎｓｕｍｅｒ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、　Ｔｈｅｏ ｒｙ、　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　；スブリン ゲル　フェルラ−２１９８７年、特に章ｒＦｒａｍｅ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｓ　ｆｏｒｌｉｑｕｉｄ／ｐｏｗｄｅｒ　ｈｅａｖｙ−ｄｕｔｙ　ｄｅｔｅｒｇ ｅｎｔｓＪを参照のこと〕。

現在、本発明の洗剤組成物は洗浄液ｌ】当たり蛋白分解酵素の０、０００５−０ ．５　ＣＰＵに相当する量の酵素調製品を含有できると考えられる。

本発明の洗剤組成物は、如何なる通常の形態、例えば粉末、液体等に製剤化でき る。

本発明の洗剤組成物は、好都合には１種又はそれ以上の他の洗剤、例えばリパー ゼ；アミラーゼ；セルラーゼ；オキシダーゼ；および／又はペルオキシダーゼを 含有でき、好都合には洗剤組成物中に含むことができる。

本発明のプロテアーゼは、洗剤用プロテアーゼを含有する別個の添加剤を添加す ることにより、又は異なる洗剤用酵素を含んでなる一緒にした添加剤を添加する ことにより洗剤組成物中に含有せしめることができる。

本発明の添加剤は、例えば粒質物、液体、スラリー等として製剤化できる。好ま しい洗剤用添加製剤は、無粉塵性粒質物、液体、特に安定化液体、スラリー又は 保護された酵素である。無塵の粒質物は、例えば英国特許１．３６２．３６５又 は米国特許４．１０６．９９１に従って製造でき、更に所望により当業者に公知 の方法で被覆できる。洗剤用組成物は、造粒前又は造粒後に混合できる。液体酵 素調製品は、例えばポリオール、例えばポリエチレングリコール；糖又は糖アル コール；乳酸又はホウ酸を確立された方法に従って添加することにより安定化で きる。他の酵素安定化剤は、当業者に周知である。好ましい酵素は、ヨーロッパ 特許出願２３８．２１６に記載される方法に従って調製できる。

本発明を更に次の実施例により説明するが、いかなる場合も権利要求される如き 本発明の範囲を制限するものではない。

例１ 培養例 洗剤用プロテアーゼを製造するため、Ｍ、アニソブリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ ）ＤＳＭ　Ｎｏ、６５９２を、下記の組成の培地１００ｍ１を含有する２０５０ ０ｍｌのじゃま板を設けたエルシンマイヤーフラスコ中、回転振動テーブル（２ ８０ｒｐｍ）上で２６℃で７日間培養した。

ファルマメディア（ｐｈａｒｍａｍｅｃｌ　ｉａ）　５０　ｇデキストリン　３ ０ｇ Ｍｇ５Ｏａ、７Ｈｔ０　０，２ｇ Ｎａ＊ＨＰＯ４，１２Ｈｔ０　８　ｇ ＫＨＩＰ０４　３　ｇ プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）　（登録商標）　Ｌ−６１０，６ｍｌオート クレーブ処理前にｐ）Ｉを７．０に調節培養後、ブロスの酵素活性は９．６ＣＰ Ｕ／　１であった。培養ブロスの遠心分離試料の上澄みを、ＬＫＢアムホリン（ Ａｍｐｌｏｌｉｎｅ）　（登録商標）　ＰＡＧブレー）　（ｐＨ３，５−９，５ ）上で等電点電気泳動に委ね、次いで等電点電気泳動ゲル上にｐＨ８で１％の脱 脂乳を含有するアガロースのオーバレイヤー（ｏｖｅｒｌａｙｅｒ）ゲルを適用 し次いで適当な時間インキュベーションすると、プロテアーゼによってもたらさ れた２つの主な明確なゾーンを得ることができる。このゾーンをもたらすプロテ アーゼは、５ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに対して活性を有 し、モしてＮ−ベンゾイル−ＤＬ−アルギニル−ｐ−ニトロアニリド（ＢＡＰＮ Ａ）に対して活性がない。小さな帯域は約４．７のｐｌでおこる。この帯域をも たらすプロテアーゼは、ＢＡＰＮＡに対して活性を有しそして５ｕｃ−Ａｌａ− Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに対して活性がない。従って、この株のプロテ アーゼの組成は、文献に記載される組成物に類似しているようであり、すなわち 酸性域にｐＩを有するトリプシン一様プロテアーゼおよびアルカリ域でｐｌを有 する、５ｕｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡに対し活性を有するプ ロテアーゼである。

加えて、７．２．６．５．６．０および５．７のｐ【に相当する明確なゾーンが 、延長されたインキュベーション後に観察できる。

例２ 精製例 例１で得られた培養ブロスを、ベックマンＪ−６遠心機中、４０００ｒｐｍで３ ０分間遠心分離した。

９００ｍ１の上澄みを集めそして更に陰イオン交換クロマトグラフィーにより精 製した：上澄みを、２５ｍＭのボレート、５ｍＭのＣａＣｌ＊　；　ｐＨ８，５ 中、ＤεＡＨ−セフアゾエックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　Ａ−５０とバッチプロ セスで反応させた。高いｐＩのプロテアーゼが、マトリックスに結合していない 物質中に存在した。

高いｐｌのプロテアーゼを更にＩＩＰＬＣカラムを用いたアフィニティクロマト グラフィーにより精製した。

このようにして得られたプロテアーゼ調製品は、高ｐ１プロテアーゼのみを含有 していた。５ＤＳ−ＰＡＧＥにより判断される如く、プロテアーゼは全蛋白質含 量の約９０％を含有していた。ＬＫＢアムホリン（Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ）　（登 録商標）　ＰＡＧプレート（ｐＨ３，５−９，５）上での等電点電気泳動により 測定される如く、精製されたプロテアーゼのｐＩは９．３であり、そしてＭＷは ５ＤＳ−ＰＡＧＥにより測定される如＜　３２．０００であった。

精製されたプロテアーゼは、カゼイン（ハムマーステン（Ｈａａ＋ｍａｒｓｔｅ ｎ）（登録商標））、ヘモグロビン、脱脂乳および５ｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐ ｒｏ−Ｐｈｅ−ｐＮＡを分解する能力を特徴とする。プロテアーゼは、色原体基 質ＢＡＰＮＡおよびＺ　−Ｇｌｕ−ｐＮＡ（Ｎ−ベンゾイルカルボニル−し−グ ルタミル−ｐ−ニトロアニリド）に対して全く活性を有しないか又は極めて低い 活性を有する。プロテアーゼは、ＥＤＴＡによって阻害されない。

例３ 洗浄性能 洗浄性能試験を草汁で汚した綿について２０°Ｃで等温的に１０分間行った。

２．０ｇ／ｌの商業上のアメリカのタイプ粉末洗剤を用いた。

洗剤を約６°ｄ）ｌ（ドイツ硬度）水に溶解した。ｐＨは９．５であった。

繊維／洗液比は、洗液１１当たり繊維１０ｇであった。

洗浄に続き、流れる水道水を布にどっと流しそして風乾した。規約反射率（％Ｒ ）を４６０ｎｍで測定した。

洗浄性能の測定として、示差規約反射率、ΔＲ１を用いたが、これは添加した酵 素を用いた洗浄後の規約反射率らしく、酵素を添加しないでの洗浄後の規約反射 率に等しい。

表１ アメリカのタイプの粉末洗浄組成物中で洗浄後測定した示差規約反射率、ΔＲ 示差規約反射率の値によって示される如く、本発明のプロテアーゼは良好な洗浄 能を有している。

国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　リンネガールト、ボウルデンマーク国、デーニー−２１００コ ペンハーゲン　ニー６．オニステル　スエガゼ

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．洗剤用酵素として、メタリジウム（Ｍｅｔａｒｒｈｌｚｉｕｍ）属の株、又 はその突然変異体もしくは変異体から得ることのできるプロテアーゼの使用。
2. ２．種Ｍ．アニソプリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔｓｃｈｎ．）ソロキ ンの株、又はその突然変異体もしくは変異体から得ることのできるプロテアーゼ の請求の範囲第１項記載の使用。
3. ３．株Ｍ．アニソプリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔｓｃｈｎ．）ソロキ ン；ＤＳＭＮｏ．６５９２、又はその突然変異体もしくは変異体から得ることの できるプロテアーゼの請求の範囲第２項記載の使用。
4. ４．洗剤用酵素として、Ｍ．アニソプリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔｓ ｃｈｎ．）ソロキン；ＤＳＭ　Ｎｏ．６５９２から由来するプロテアーゼの免疫 化学的性質と同一又は部分的同一の免疫化学的性質を有するプロテアーゼの使用 。
5. ５．Ｎ−スクシニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニ ルアラニル−ｐ−ニトロアニリドに対して活性を有するプロテアーゼの請求の範 囲第１〜４項のいずれかに記載の使用。
6. ６．８．０を超えるｐＩを有するプロテアーゼの請求の範囲第１〜５項のいずれ かに記載の使用。
7. ７．ＬＫＢアムホリン（Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ）（登録商標）ＰＡＧプレート（ｐ Ｈ３．５〜９．５）上で測定するとき、約９．２−９．３のｐＩを有するプロテ アーゼの請求の範囲第１〜６項のいずれかに記載の使用。
8. ８．メタリジウム（Ｍｅｔａｒｒｈ１ｚｉｕｍ）属の株、又はその突然変異体も しくは変異体から得ることのできるプロテアーゼを含んでなる洗剤組成物。
9. ９．種Ｍ．アニソプリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔｓｃｈｎ．）ソロキ ンの株、又はその突然変異体もしくは変異体から得ることのできるプロテアーゼ を含んでなる、請求の範囲第８項記載の洗剤組成物。
10. １０．株Ｍ．アニソプリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔｓｃｈｎ．）ソロ キン；ＤＳＭＮｏ．６５９２、又はその突然変異体もしくは変異体から得ること のできるプロテアーゼを含んでなる、請求の範囲第９項記載の洗剤組成物。
11. １１．Ｍ．アニソプリエ（ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ）（Ｍｅｔｓｃｈｎ．）ソロキ ン；ＤＳＭＮｏ．６５９２から由来するプロテアーゼの免疫化学的性質と同一又 は部分的同一の免疫化学的性質を有するプロテアーゼを含んでなる洗剤組成物。
12. １２．Ｎ−スクシニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェ ニルアラニル−ｐ−ニトロアニリドに対して活性を有するプロテアーゼの請求の 範囲第８〜１１項のいずれかに記載の洗剤組成物。
13. １３．８．０を超えるｐＩを有するプロテアーゼを含んでなる請求の範囲第８〜 １２項のいずれかに記載の洗剤組成物。
14. １４．ＬＫＢアムホリン（Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ）（登録商標）ＰＡＧプレート（ ｐＨ３．５〜９．５）上で測定するとき、約９．２−９．３のｐＩを有するプロ テアーゼを含んでなる請求の範囲第８〜１３項のいずれかに記載の洗剤組成物。
15. １５．更に１種又はそれ以上の酵素、特にアミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、 オキシダーゼ又はペルオキシダーゼを含んでなる、請求の範囲８〜１４項のいず れかに記載の洗剤組成物。
16. １６．洗剤添加剤、好ましくは無粉塵性粒質物、液体、特に安定化液体、スラリ ー又は保護された酵素の形態で提供される、請求の範囲第８〜１５項のいずれか に記載の洗剤組成物。