JPH07308196A

JPH07308196A - タキサン型ジテルペンの製造方法

Info

Publication number: JPH07308196A
Application number: JP6104211A
Authority: JP
Inventors: Takahito Yukimune; 敬人行宗; Yasuhiro Hara; 康弘原
Original assignee: Mitsui Petrochemical Industries Ltd
Current assignee: Mitsui Petrochemical Industries Ltd
Priority date: 1994-05-18
Filing date: 1994-05-18
Publication date: 1995-11-28

Abstract

(57)【要約】【構成】タキサン型ジテルペンを産生する植物の細胞
又は組織をジャスモン酸類の存在下に培養し、得られる
培養物からタキサン型ジテルペンを回収することを特徴
とするタキサン型ジテルペンの製造方法。【効果】本発明方法は、タキサン型ジテルペンの生産
性の向上を可能にする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、卵巣癌、乳癌、肺癌等
の治療薬として有用であるタキソールを含むタキサン型
ジテルペンの製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】卵巣癌、乳癌、肺癌等の治療薬として有
用であるタキソール(Taxol）は、イチイ科イチイ属植物
であるタイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia NUTT）よ
り単離同定されたタキサン型ジテルペンであり、活性と
関連する複雑なエステルグループを有している。タキソ
ールはタイヘイヨウイチイ植物体中のどの部位にも存在
し、その含量は樹皮で最も高いことが報告されている。
現在、タキソールは天然の又は栽培された植物体中から
採取されているが、イチイ属植物は地上20cmの高さに成
長するのに10年以上かかる生育の遅い植物であり、また
樹皮を剥ぐと木が枯れてしまうことから容易に大量のタ
キソールを得ることは困難である。もし、タキソール又
はタキソールの前駆物質であるバッカチンIII等のタキ
サン型ジテルペンの合成が組織培養を利用して行なうこ
とができれば、樹木を伐採する事なく、大量のタキソー
ルを容易に得ることができるので有利である。

【０００３】これまでの植物の培養細胞を利用したタキ
ソール生産方法については、タイヘイヨウイチイ（Taxu
s brevifolia NUTT ）培養細胞によるタキソール生産が
米国で特許〔U.S.P.No.5019504〕になっているが、その
タキソール生産量は１〜３mg/lと記載されており、工業
的生産には不十分である。また、細胞培養によるタキソ
ールの生産性は不安定であり、選抜で一次的には生産性
の高い細胞が得られるが、継代培養してその含量を維持
することは難しい〔E.R.M.Wickremesine et al., World
Congress on Cell and Tissue Culture (1992)〕。

【０００４】一方、タキソール生産法の先行技術として
は、タキソールの生合成前駆体であるバッカチンIII(ba
ccatinIII)からの半合成法がHoltonらの米国特許に開示
されている〔U.S.P.No.5015744〕。植物の組織培養法を
用いれば、バッカチンIII等半合成原料の生産も可能で
あり、前記半合成法によるタキソール生産にも利用でき
る。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、植物
組織培養により、タキサン型ジテルペンの簡便な製造方
法を提供することである。

【０００６】

【課題を達成するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、タキサン型ジテルペンを産生する植物の培養細
胞又は培養組織の組織培養培地中にジャスモン酸類を添
加して組織培養を行うことによって、また、培養細胞又
は培養組織に後述する特別な処理を施して培養細胞又は
培養組織自らが生産するジャスモン酸類（内在性ジャス
モン酸類）の生産を促進することによって、培養物中の
タキサン型ジテルペン生産性が向上することを見出し、
本発明を完成した。

【０００７】即ち、本発明は、タキサン型ジテルペンを
産生する植物の細胞又は組織を一般式〔Ｉ〕：

【化３】〔式中、Ｒ¹は、炭素数１〜４のアルキル基又は次式：

【化４】−（ＣＨ₂ ）_n−ＣＯ−Ｒ⁶ ｛式中、Ｒ⁶は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子、又はＮＨ₄を表
す。）、ＮＨＲ⁷（ここで、Ｒ⁷は水素原子、炭素数１
〜４のアシル基、炭素数１〜４のアルキル基、又はアミ
ノ酸残基を表す。）、又はＯＲ⁸（ここで、Ｒ⁸は炭素
数１〜４のアルキル基、又は炭水化物残基を表す。）を
表し、ｎは１〜７の整数を表す。｝で示される基を表
し；Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、及びＲ⁵はそれぞれ水素原子で
あるか、あるいはＲ²とＲ ³、Ｒ³とＲ⁴、又はＲ⁴と
Ｒ⁵は、共同して二重結合を表してもよく；Ｒ⁹は水酸
基、又は−Ｏ−炭水化物残基を示し；前記５員環は、更
に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原
子間で二重結合を形成してもよい。〕で示される化合物
の存在下に培養し、得られる培養物からタキサン型ジテ
ルペンを回収することを特徴とするタキサン型ジテルペ
ンの製造方法である。

【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
製造方法の対象となるタキサン型ジテルペンとしては、
タキサン骨格を有するジテルペンであれば特に制限はな
く、例えばタキソール、バッカチンIII、セファロマニ
ン、10−デアセチルバッカチンIII、10−デアセチルセ
ファロマニン、10−デアセチルタキソール等が挙げられ
る。

【０００９】本発明の製造方法に用いられるタキサン型
ジテルペンを産生する植物としては、例えばセイヨウイ
チイ(Taxus baccata LINN)、イチイ(T. cuspidata SIE
B.etZUCC）、キャラボク(T. cuspidata SIEB.et ZUCC v
ar. nana REHDER)、タイヘイヨウイチイ(T. brevifolia
NUTT)、カナダイチイ(T. canadiensis MARSH)、中国イ
チイ（T.chinensis)、T. media等のイチイ属植物をあげ
ることができる。

【００１０】前記植物の組織培養は、ジャスモン酸類及
びその誘導体、つまり本発明により前記一般式〔Ｉ〕で
示される化合物を添加すること、又は内在性ジャスモン
酸類の生産を促進するための処理を行うこと以外は、従
来から知られている方法によって行うことができる。

【００１１】前記一般式〔Ｉ〕で示される化合物におい
て、Ｒ¹、Ｒ⁷、又はＲ⁸で表される炭素数１〜４のア
ルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プ
ロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル
基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基を例示することが
できる。

【００１２】Ｒ⁶がＯＭである場合において、Ｍで表さ
れるアルカリ金属原子又はアルカリ土類金属原子として
は、例えばナトリウム、カリウム、カルシウムが挙げら
れる。

【００１３】Ｒ⁶がＮＨＲ⁷である場合において、Ｒ⁷
で示される炭素数１〜４のアシル基は、直鎖、分岐鎖の
いずれでもよく、例えばホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ブチリル基、アクリロイル基が挙げられ
る。

【００１４】Ｒ⁶がＮＨＲ⁷である場合において、Ｒ⁷
で示されるアミノ酸残基とは、イソロイシル基、チロシ
ル基、トリプトフィル基が挙げられる。

【００１５】Ｒ⁶がＯＲ⁸である場合において、Ｒ⁸で
示される炭水化物残基、及びＲ⁹が−Ｏ−炭水化物残基
である場合における炭水化物残基としては、グルコピラ
ノシル基が挙げられる。

【００１６】また、前記一般式〔Ｉ〕で示される化合物
は、５員環は、さらに水酸基で置換されていてもよく、
隣接する環員炭素原子間で二重結合を形成してもよい。

【００１７】一般式〔Ｉ〕で示される化合物の具体例と
しては、以下に示す化合物が挙げられるが、中でもツベ
ロン酸、又はツベロン酸メチルがタキサン型ジテルペン
の生産性向上に対する大きさの点から特に好ましい。

【化５】

【００１８】

【化６】

【００１９】

【化７】

【００２０】

【化８】

【００２１】前記一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、種
々の立体異性体（シストランス異性体、光学異性体）が
存在するが、それぞれの異性体を単独で用いても、混合
物の形で用いてもよい。

【００２２】これら一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、
合成により、あるいは植物からの抽出により調製される
（H. Yamane et al. Agric. Biol. Chem. 44, 2857-286
4 (1980)。

【００２３】一方、ジャスモン酸類は、生長促進や組織
の成熟、病害抵抗性の発現にかかわる諸反応を誘起する
植物ホルモン様物質として、種々の植物が自ら生産する
ことが、吉原照彦著、植物細胞工学第２巻第４号５２３
頁〜５３１頁（１９９０年）に記載されている。

【００２４】従って、本発明に係るジャスモン酸類は、
培養系外から添加するほかに、使用する培養細胞又は培
養組織に自ら生産させることもできる。この内在性ジャ
スモン酸類の培養細胞又は培養組織による生産を促進す
る方法としては、微生物の培養物又はその抽出物、熱処
理物あるいは植物抽出物などの培地への添加を例示する
ことでき、具体的にはM.J.Mueller et al., Proc. Nat
l. Acad. Sci. U.S.A., 90 (16), 7490-7494 (1993) に
記載の、カビ細胞壁画分を添加する方法を例示すること
ができる。更に、使用する培養細胞又は培養組織に、機
械的に又は紫外線、熱などによって部分的に障害を与え
ることによって、内在性ジャスモン酸の生産量を高める
ことが可能であり、具体的には、R.A.Cleeman et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , 89 (11), 4938-4941
(1989) に記載の、機械的に一部の細胞を破壊する方法
を例示することができる。

【００２５】一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、水に対
して難溶性のため、通常エタノールあるいはメタノール
等の有機溶媒、あるいは界面活性剤等に溶解した後、培
地に添加する。また、遊離形の該化合物は、そのまま用
いても良いし、アルカリで中和して塩にして用いてもよ
い。

【００２６】一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、５員環
カルボニル基のα位が、酸、アルカリ、熱によってエピ
マー化を起こすため、不安定なシス型より安定なトラン
ス型になりやすい。天然あるいは合成ジャスモン酸を用
いた平衡実験では、トランス型が90％、シス型が10％の
状態で存在する。一般にはシス型の方が活性が強いとさ
れているが、本発明で使用される一般式〔Ｉ〕で示され
る化合物はすべての立体異性体化合物及びその混合物を
包含する。

【００２７】一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、培地に
おける濃度が0.01〜1000μＭとすることが必要であり、
この中でも特にその濃度を0.1〜500μＭの範囲に調整す
ることが本発明の方法にとって好ましい。

【００２８】植物細胞培養物にジャスモン酸を添加して
二次代謝産物が誘導されることはドイツで特許公告［DE
4122208C1］になっているが、タキサン型ジテルペン産
生植物の組織培養において、培地中にジャスモン酸類を
存在させて組織培養をおこなった例は報告されておら
ず、しかもそれによりタキサン型ジテルペンの産生量が
増大することは予想外のことであった。

【００２９】本発明の使用される培地としては、従来か
ら知られている植物の組織培養に用いられる培地、例え
ばムラシゲ・スクーグ(1962年)〔Murashige & Skoog〕
の培地、リンスマイヤー・スクーグ (1965年)〔Linsmai
er Skoog〕の培地、ウッディー・プラント・メディウム
(1981年)〔Woody Plant Medium〕の培地、ガンボルグ
〔Gamborg〕のＢ−５培地、三井のＭ−９培地等が挙げ
られる。これら培地に植物ホルモンを添加し、更に必要
に応じて炭素源、無機成分、ビタミン類、アミノ酸等を
添加することもできる。

【００３０】炭素源としては、シュクロース、マルトー
ス、ラクトース等の二糖類、グルコース、フルクトー
ス、ガラクトース等の単糖類、デンプンあるいはこれら
糖源の２種類以上を適当な比率で混合したものを使用で
きる。

【００３１】無機成分としては、例えばリン、窒素、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マン
ガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウ
ム、ヨウ素、コバルト等があげられ、これらの成分は例
えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、
塩化カリウム、リン酸１水素カリウム、リン酸２水素カ
リウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナト
リウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸
亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸
化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合
物として添加できる。

【００３２】植物ホルモンとしては、例えばインドール
酢酸（ＩＡＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、２, ４−
ジクロロフェノキシ酢酸（２, ４−Ｄ）等のオーキシン
類、カイネチン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイ
トカイニン類が用いられる。

【００３３】ビタミン類としては、例えばビオチン、チ
アミン（ビタミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ
６）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が用
いられる。

【００３４】アミノ酸類としては、例えばグリシン、フ
ェニルアラニン、ロイシン、グルタミン、システイン等
を添加できる。

【００３５】一般に前記の各成分は、無機成分が約0.1
μＭ、ないし100mＭ、炭素源が約１〜約30g/l 、植物ホ
ルモン類が約0.01〜約10μＭ、ビタミン類及びアミノ酸
類がそれぞれ約0.1〜約100mg/lの濃度で用いられる。

【００３６】尚、本発明には液体培地及び寒天やゲラン
ガム等を通常0.1〜１％含有する固形培地のいずれも使
用できるが、通常は液体培地が好ましい。

【００３７】本発明における組織培養においては、上記
植物の植物体、例えば、根、生長点、葉、茎、種子、花
粉、葯、がく等の組織片又は細胞を上記培地あるいは他
の従来の培地によって組織培養して得られる培養細胞を
使用することができる。

【００３８】これらの組織又は細胞を本発明により化合
物〔Ｉ〕で示される化合物を添加した培地を用いて組織
培養すると、無添加の場合と比較して、タキサン型ジテ
ルペンの生産性が高い培養組織又は培養細胞が得られ
る。

【００３９】以上のようにして得られた培養組織、培養
細胞、培地等の培養物から、メタノール等の有機溶媒に
よる抽出によってタキサン型ジテルペンを分離すること
ができる。また、培地中に適当な吸着剤や有機溶媒を共
存させ、連続的にタキソン型ジテルペンを回収すること
ができる。

【００４０】本発明の組織培養の好ましい一例として
は、次の方法が挙げられる。

【００４１】先ずイチイ属に属する植物の植物体、例え
ば根、生長点、葉、茎、種子などから採取される植物片
を殺菌処理後、ゲランガムで固めたウッディー・プラン
ト・メディウムの固体培地上に置床し、10〜35℃で14〜
60日程度経過させて組織片の一部をカルス化させる。こ
のようにして得られたカルスを継代培養すると生育速度
が漸次高まり安定化したカルスが得られる。ここで、安
定化したカルスとは、培養中にカルスの一部がシュート
や根に分化しないでカルスの状態を保持する性質をもち
細胞の生育速度が均質であるものをいう。

【００４２】この安定化したカルスを増殖に適した液体
培地、例えばウッディー・プラント・メディウムの液体
培地に移して増殖させる。液体培地において更に生育速
度が高められる。本発明では、この安定化したカルス又
は該カルスを構成する細胞は、一般式〔Ｉ〕で示される
化合物を含有する固体培地又は液体培地で培養される。
また、この安定化カルス又は該カルスを構成する細胞
は、比重の違いにより複数の層に分け、少なくとも１つ
の層に含まれる細胞を一般式〔Ｉ〕で示される化合物を
含有する培地で培養してもよい。

【００４３】細胞を比重によって分離する方法として
は、一般に遠心分離用媒体を用いて密度勾配を作成し、
細胞を重層した後、遠心分離する方法が知られている。
遠心分離用媒体としては、Ficoll、Percoll(共にPharma
cia LKB Biotechnology社製）、ショ糖、塩化セシウム
等が用いられる。実施例５では、Ficollを用いて密度勾
配を作成したが、細胞に傷害を与えないものであれば特
に制限はない。

【００４４】密度勾配を形成する層の数に特に制限はな
い。各層の比重差は、特に限定されるものではなく、ま
た各比重差は同じであっても異なっていてもよい。従っ
て、この密度勾配の定義には勾配が連続的に変化する場
合（密度勾配を形成する層の数が無限大、各層の比重差
が０に近い状態）も含む。

【００４５】このようにして密度勾配を形成し、細胞を
重層、遠心分離することにより細胞を比重の違いにより
複数の層に分けることができる。作成する層の比重は通
常1.00〜1.20g/ml、好ましくは1.03〜1.11g/mlの範囲で
ある。培養の対象となる層としては、少なくとも１つの
層を選択し、また全ての層を選択して培養してもよい。

【００４６】複数の層を選択して培養する場合、これら
の複数の層は、それぞれ個別に培養することもできる
が、選択した複数の層のうちの２層以上の層を混合して
培養することもできる。

【００４７】タキサン型ジテルペン産生能の高い培養細
胞は、通常、比重が1.07以下の層に含まれる細胞を培養
して得られるが、培養する細胞や培養の条件により変動
する場合があり、必ずしもこの範囲に限定されるもので
はない。また、単に比重の違いによって分画しただけで
は、比重の高い層の細胞の方がタキサン型ジテルペン含
量が高くなる傾向が認められる。従って、より確実にタ
キサン型ジテルペン高産生培養細胞を取得するために
は、分画されたすべての層の細胞を一定期間培養した
後、各層の細胞に含まれるタキサン型ジテルペン濃度を
測定し、それらの中からタキサン型ジテルペン高産生細
胞を含む層を選択することが望ましい。

【００４８】また、本発明では、例えば1.07g/mlのよう
に、ある１つの特定の比重の遠心分離用媒体を作成し、
上述の方法で遠心分離することによっても、培養細胞を
比重の違いにより複数の層に分けることができる。

【００４９】一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、培養細
胞が増殖期ないし定常期に添加することがもっとも効果
的であり、この中でも特に増殖期ないし定常期に移行す
る時期に一般式〔Ｉ〕で示される化合物を添加すること
が本発明の方法にとって好ましい。たとえば21日おきに
細胞を移植している場合には７〜16日目が一般式〔Ｉ〕
で示される化合物の添加の適期にあたる。また、添加方
法としては、一度に所定の量を添加しても良いし、複数
回に分けて逐次添加しても良い。

【００５０】本発明における組織培養の培養温度として
は、通常は約10〜約35℃、特に約23〜28℃が増殖速度が
大きいので好適である。また、培養期間としては、14〜
42日間が好適である。

【００５１】本発明における培養において液体培地を用
いた場合には、培養終了後に培養細胞をデカンテーショ
ン又は濾過等の方法によって培地から分離し、分離した
培養細胞及び／又は培養培地から生成蓄積したタキサン
型ジテルペンを有機溶媒により抽出等の方法によって分
離することができる。

【００５２】

【実施例】以下、実施例及び比較例により本発明を更に
具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に
限定されるものではない。

【００５３】〔実施例１〕ナフタレン酢酸を10^-5Ｍの濃
度になるように添加したウッディー・プラント・メディ
ウムの固体培地（ゲランガム0.25重量％）に、前もって
２％アンチホルミン溶液又は70％エタノール溶液等で滅
菌処理したセイヨウイチイ(Taxus baccataLINN)の茎の
一部を置床し、25℃で暗所にて静置培養してセイヨウイ
チイカルスを得た。次にこのカルス１ｇ（新鮮重）を、
上記成分を同じ濃度で添加したウッディー・プラント・
メディウムの液体培地20ml入りの三角フラスコに移し、
ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅25mm、120rp
m）し、21日毎に植えつぎ、該カルスの生育速度を速め
た。

【００５４】このようにして得られた培養細胞１ｇ（新
鮮重）を、上記成分を同じ濃度で添加したウッディー・
プラント・メディウムの液体培地20ml入りの三角フラス
コに移して25℃で14日間振盪培養した。培養14日目に一
般式〔Ｉ〕で示される化合物としてツベロン酸のメチル
エステル〔前記式〔Ｉ〕において、Ｒ¹がＣＨ₂ＣＯＯ
ＣＨ₃であり、Ｒ²及びＲ³がＨであり、Ｒ⁴、Ｒ⁵が
共同して二重結合を形成する化合物〕をその終濃度が0.
01〜1000μＭになるように添加し、さらに７日間培養し
た。

【００５５】培養終了後、セイヨウイチイ培養細胞を濾
過により採取し、凍結乾燥した後その乾燥重量を測定
し、液体培地１Ｌ当たりの培養細胞の生育重量を求め
た。得られた乾燥カルスからメタノール等を用いてタキ
サン型ジテルペンを抽出し、高速液体クロマトグラフィ
ーを用いて標準品タキソール、セファロマニン、バッカ
チンIIIと比較定量することによってタキサン型ジテル
ペン収量を測定した。その結果を表１に示す。

【００５６】〔比較例１〕実施例１において、ツベロン
酸のメチルエステルを添加しない以外は該実施例と同様
に操作した。その結果を表１に示す。

【００５７】〔実施例２〕実施例１において、ツベロン
酸のメチルエステルを培養７日目より１日置きに計４回
逐次添加（一回当たりの終濃度は25μＭ、合計100μ
Ｍ）した以外は該実施例と同様に操作した。その結果を
表１に示す。

【００５８】〔実施例３〕実施例１において、ツベロン
酸のメチルエステル100μＭを培養１日目に添加し、さ
らに20日間培養した以外は該実施例と同様に操作した。
その結果を表１に示す。

【００５９】〔実施例４〕実施例１において、ツベロン
酸のメチルエステル100μＭを培養７日目に添加し、さ
らに14日間培養した以外は該実施例と同様に操作した。
その結果を表１に示す。

【００６０】

【表１】

【００６１】〔実施例５〕実施例１の方法で得られる生
育速度の速められた細胞を、まず、ステンレスメッシュ
により250〜840μｍのサイズの細胞集塊に分別した。つ
ぎに、Ficollを用いて、比重1.07(g/ml)の密度の媒体を
作成し、上記細胞を重層し、700回転で６分間遠心を行
った。細胞は、比重の違いによって２層に分離した。1.
07g/ml以下の層に含まれる細胞を分画し、２％ショ糖液
で最低３回以上洗浄し、Ficollを洗い流した。洗浄後細
胞１ｇ（新鮮重）をウッディー・プラント・メディウム
の液体培地20ml入りの三角フラスコに移して25℃で14日
間振盪培養した。培養14日目にツベロン酸のメチルエス
テルをその終濃度が250μＭになるように添加し、さら
に７日間培養した。培養終了後は、実施例１と同様に操
作した。その結果を表２に示す。特定比重の細胞の選別
とツベロン酸メチルエステルの添加とを組み合わせるこ
とによりタキサン型ジテルペンの生産性を大幅に向上す
ることができた。

【００６２】〔比較例２〕実施例５において、ツベロン
酸のメチルエステルを添加しない以外は該実施例と同様
に操作した。その結果を表２に示す。

【００６３】

【表２】

【００６４】〔実施例６〕実施例１と同様の方法によっ
て得られるタイヘイヨウイチイの培養細胞（培養14日
目）にツベロン酸のメチルエステル250μM を添加して
７日間培養を行った。培養終了後は、該実施例と同様に
操作した。その結果を表３に示す。

【００６５】〔比較例３〕実施例６において、ツベロン
酸のメチルエステルを添加しない以外は該実施例と同様
に操作した。その結果を表３に示す。

【００６６】〔実施例７〕実施例６において、Ｔ．ｍｅ
ｄｉａの培養細胞を用いる以外は、該実施例と同様に操
作した。その結果を表３に示す。

【００６７】〔比較例４〕実施例７において、ツベロン
酸のメチルエステルを添加しない以外は該実施例と同様
に操作した。その結果を表３に示す。

【００６８】

【表３】

【００６９】

【発明の効果】本発明によれば、ジャスモン酸類の存在
下にタキサン型ジテルペン産生植物を組織培養すること
によって、大量のタキサン型ジテルペンを簡便に得るこ
とが可能になった。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】タキサン型ジテルペンを産生する植物の
細胞又は組織を一般式〔Ｉ〕：【化１】〔式中、Ｒ¹は、炭素数１〜４のアルキル基又は次式：【化２】−（ＣＨ₂）_n−ＣＯ−Ｒ⁶ ｛式中、Ｒ⁶は水酸基、ＯＭ（ここで、Ｍはアルカリ金
属原子、アルカリ土類金属原子、又はＮＨ₄を表
す。）、ＮＨＲ⁷（ここで、Ｒ⁷は水素原子、炭素数１
〜４のアシル基、炭素数１〜４のアルキル基、又はアミ
ノ酸残基を表す。）、又はＯＲ⁸（ここで、Ｒ⁸は炭素
数１〜４のアルキル基、又は炭水化物残基を表す。）を
表し、ｎは１〜７の整数を表す。｝で示される基を表
し；Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、及びＲ⁵はそれぞれ水素原子で
あるか、あるいはＲ²とＲ ³、Ｒ³とＲ⁴、又はＲ⁴と
Ｒ⁵は、共同して二重結合を表してもよく；Ｒ⁹は水酸
基、又は−Ｏ−炭水化物残基を示し；前記５員環は、更
に水酸基で置換されていてもよく、隣接する環員炭素原
子間で二重結合を形成してもよい。〕で示される化合物
の存在下に培養し、得られる培養物からタキサン型ジテ
ルペンを回収することを特徴とするタキサン型ジテルペ
ンの製造方法。
【請求項２】タキサン型ジテルペンが、タキソール、
バッカチンIII、セファロマニン、10−デアセチルバッ
カチンIII、10−デアセチルセファロマニン及び／又は1
0−デアセチルタキソールであることを特徴とする請求
項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。
【請求項３】前記一般式〔Ｉ〕で示される化合物が、
ツベロン酸又はツベロン酸メチルであることを特徴とす
る請求項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。
【請求項４】タキサン型ジテルペンを産生する植物が
イチイ属植物であることを特徴とする請求項１記載のタ
キサン型ジテルペンの製造方法。
【請求項５】イチイ属植物が、セイヨウイチイ(Taxus
baccata LINN)、イチイ(T. cuspidata SIEB.et ZUC
C）、キャラボク(T. cuspidata SIEB.et ZUCC var. nan
a REHDER)、タイヘイヨウイチイ(T. brevifolia NUT
T)、カナダイチイ(T. canadiensis MARSH)、中国イチイ
（T.chinensis)、T. mediaから選ばれる、請求項４記載
のタキサン型ジテルペンの製造方法。
【請求項６】組織培養培地中の前記一般式〔Ｉ〕で示
される化合物の濃度が0.01〜1000μＭであることを特徴
とする請求項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方
法。
【請求項７】前記一般式〔Ｉ〕で示される化合物を、
培養細胞の増殖期ないしは定常期に添加することを特徴
とする請求項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方
法。
【請求項８】前記一般式〔Ｉ〕で示される化合物を、
複数回に分けて培養培地に添加することを特徴とする請
求項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。
【請求項９】タキサン型ジテルペンを産生する植物の
細胞を比重の違いにより複数の層に分け、少なくとも一
つの層に含まれる細胞を培養することを特徴とする請求
項１記載のタキサン型ジテルペンの製造方法。