JPH07291996A

JPH07291996A - ヒトにおけるプログラムされた細胞死に関連したポリペプチド、それをコードするｄｎａ、そのｄｎａからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞、そのポリペプチドの抗体、およびそのポリペプチドまたはその抗体を含有する薬学的組成物

Info

Publication number: JPH07291996A
Application number: JP7061533A
Authority: JP
Inventors: Yuu Honshiyo; 佑本庶; Yasumasa Ishida; 靖雅石田; Takashi Shinohara; 隆司篠原
Original assignee: Ono Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Ono Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1994-03-01
Filing date: 1995-02-27
Publication date: 1995-11-07
Also published as: CA2143491A1; CN1080311C; US5698520A; JP2003230395A; CN1113518A; EP0670369A3; EP0670369A2; KR100391227B1; US5629204A; CA2143491C; KR950032279A

Abstract

(57)【要約】【構成】ヒトのプログラムされた細胞死に関連した新
規な膜結合ポリペプチド（ＰＤ−１）、そのポリペプチ
ドをコードするＤＮＡ、そのＤＮＡからなる複製及び発
現ベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞、
そのポリペプチドの抗体、及びそのポリペプチド又はそ
の抗体を含有する薬学的組成物。【効果】ヒトＰＤ−１は、感染症、免疫機能の低下又
は亢進、腫瘍等の治療剤等として用いることができる。
ＰＤ−１をコードするＤＮＡはＰＤ−１を生産する際の
必須の鋳型として用いられ、そのＤＮＡ又は断片を用い
てＰＤ−１遺伝子の検出ができ、その遺伝子と生体防御
機能、免疫機能、腫瘍等の疾患との関係の研究、疾患の
診断等に利用できる。またＰＤ−１の抗体はＰＤ−１関
連疾患の診断或いは治療剤としてに利用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は細胞死に関連したポリペ
プチドに関する。さらに詳しくいえば、本発明は、ヒト
におけるプログラムされた細胞死に関連した新規なポリ
ペプチド、そのポリペプチドをコードするＤＮＡ、その
ＤＮＡからなるベクター、そのベクターで形質転換され
た宿主細胞、そのポリペプチドの抗体、およびそのポリ
ペプチドまたはその抗体を含有する薬学的組成物に関す
る。

【０００２】

【発明の背景】発生学的に、また生理学的にコントロー
ルされた細胞の死は、種々の動物のほとんどあらゆる組
織で観察することができる。そのような細胞の死は一般
的に「プログラムされた細胞死」と呼ばれ、病理学的メ
カニズムによって起こる「偶然に起こる細胞死」とは区
別されている。動物における、種々のタイプのプログラ
ムされた細胞死を一律に定義することは不可能である
が、死をプログラムされた細胞のほとんどは、死ぬため
には新たにＲＮＡまたは蛋白のドゥノボ（de novo ）合
成が必要であることが示されている。これらすべての事
実は、何らかの遺伝子が（もしかしたら細胞死に特定の
遺伝子ではないかもしれないが）、プログラムされた細
胞死を起こすために発現されなければならないことを示
している。

【０００３】一方、あるクラスの細胞死の形態学的特徴
を表わすのに「アポトーシス」ということばが好んで用
いられる。アポトーシスを受けた細胞では、染色体は核
の周辺部に凝集してくるが、ミトコンドリアや他の細胞
内小器官は大きく変化しない。生化学的には、アポトー
シスによって死につつある細胞は、染色体は不規則にい
くつかのヌクレオソームを単位としたＤＮＡ断片に分断
されている。哺乳動物において、死をプログラムされた
ほとんどの細胞は、アポトーシスの形態学的および生化
学的状態を示すようであるが、明らかにアポトーシス状
態を示さない細胞もある。さらに、いかなる蛋白合成が
行なわれなくてもアポトーシスによる細胞死が引き起こ
されることもある。このように、アポトーシスはプログ
ラムされた細胞死と同義語でないことを理解しておくこ
とは重要なことであろう。最近になって、発ガン遺伝子
のひとつであるｂｃｌ−２は、細胞死を防ぐことにより
Ｂ細胞を不死化していることが明らかにされ、細胞死の
制御の重要性が示された。

【０００４】

【従来の技術】これまでに、プログラムされた細胞死に
関連したポリペプチドが数種類報告されている。代表的
なものとしてＦａｓ抗原が知られている［Itoh, N. et
al.,Cell, 66, 233 (1991)］。ヒトのＦａｓ抗原は３３
５個のアミノ酸からなるポリペプチドで、Ｎ末端には１
６個の疎水性アミノ酸よりなるシグナルペプチドを有
し、成熟蛋白はＮ末端側より細胞外領域（１５７アミノ
酸）、膜貫通領域（１７アミノ酸）および細胞質領域
（１４５アミノ酸）に区分されるような構造を有すると
推定されている。そしてＦａｓ抗原は、細胞死を誘導す
る因子（リガンド）の受容体として機能していると考え
られている。

【０００５】

【発明の目的】本発明は、Ｆａｓ抗原に代表される既知
のポリペプチドとはまったく別個の、新規な哺乳動物の
プログラムされた細胞死に深く関わるポリペプチドおよ
びそれをコードするＤＮＡを提供することを目的とす
る。本発明の他の目的は、前記ＤＮＡからなる複製およ
び発現ベクター、前記ベクターで形質転換された宿主細
胞、前記ポリペプチドの製造方法を提供することにあ
る。さらに、本発明の他の目的は、前記ポリペプチドの
モノクローナルおよびポリクローナル抗体、および前記
ポリペプチドまたはその抗体および薬学的に許容される
賦形剤および／または担体を含有する薬学的組成物を提
供することにある。本発明者等は、プログラムされた細
胞死に深く関わる遺伝子を単離し、その塩基配列を決定
し、アミノ酸配列を推定した。その結果、まったく新規
なポリペプチドおよびそれをコードするＤＮＡを見出す
ことに成功し、本発明を完成した。

【０００６】ヒトにおけるプログラムされた細胞死に深
く関わる遺伝子を単離するために、本発明者らは、マウ
スのＴ細胞ハイブリドーマ、２Ｂ 4.11 から得たマウス
ＰＤ−１（特開平5-336973号）をプローブとして用い
た。本発明で同定された、プログラムされた細胞死に関
連したポリペプチドのアミノ酸配列を、ナショナルバイ
オメディカルリサーチファンデーションのデータベース
に登録されている既知のポリペプチドのアミノ酸配列と
比較してみたが、同一または類似のアミノ酸配列を有し
ているものは、マウスＰＤ−１以外にはなかった。もち
ろん、該ポリペプチドはＦａｓ抗原とはまったく相同性
のないことも確認された。

【０００７】

【発明の構成】本発明は、ヒトにおける、プログラムさ
れた細胞死に深く関わるポリペプチド（以下、ヒトＰＤ
−１という。）に関する。本発明は、実質的に純粋な形
である配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるポリ
ペプチド、そのホモローグ、その配列のフラグメント、
およびそのホモローグに関する。本発明はさらにそれら
のポリペプチドをコードするＤＮＡに関する。より具体
的には、配列番号２または３で示される塩基配列を有す
るＤＮＡ、および配列番号２または３で示される塩基配
列に選択的にハイブリダイズするフラグメントを有する
ＤＮＡに関する。

【０００８】特に本発明は、（１）配列番号１で示され
るアミノ酸配列からなるポリペプチド、（２）前記
（１）に記載したポリペプチドをコードするＤＮＡ、
（３）配列番号２で示される塩基配列を有するＤＮＡ、
および（４）配列番号３で示される塩基配列を有するＤ
ＮＡに関する。

【０００９】実質的に純粋な形である配列番号１で示さ
れるアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、一般に、
生産時のポリペプチドの９０％以上、例えば９５、９８
または９９％が配列番号１で示されるアミノ酸配列を有
するポリペプチドであることを意味する。

【００１０】配列番号１で示されるアミノ酸配列からな
るポリペプチドのホモローグとは、一般に少なくとも２
０個、好ましくは少なくとも３０個、例えば４０、６０
または１００個の連続したアミノ酸領域で、少なくとも
７０％、好ましくは少なくとも８０または９０％、より
好ましくは９５％以上相同性のあるものであり、そのよ
うなホモローグは、以後本発明のポリペプチドとして記
載される。さらに、配列番号１で示されるアミノ酸配列
からなるポリペプチドのフラグメント、またはそれらの
ホモローグのフラグメントとは、少なくとも１０アミノ
酸、好ましくは少なくとも１５アミノ酸、例えば２０、
２５、３０、４０、５０または６０アミノ酸部分を意味
する。

【００１１】配列番号２または３で示される塩基配列を
有するＤＮＡに選択的にハイブリダイズするＤＮＡと
は、一般に、少なくとも２０個、好ましくは少なくとも
３０個、例えば４０、６０または１００個の連続した塩
基配列領域で、少なくとも７０％、好ましくは少なくと
も８０または９０％、より好ましくは９５％以上の相同
性のあるものであり、そのようなＤＮＡは、以後本発明
のＤＮＡとして記載される。配列番号２または３で示さ
れる塩基配列を有するＤＮＡのフラグメントとは、少な
くとも１０塩基、好ましくは少なくとも１５塩基、例え
ば２０、２５、３０または４０塩基部分を意味し、その
ようなフラグメントも本発明のＤＮＡに含まれる。

【００１２】さらに、本発明には、本発明のＤＮＡから
なる複製または発現ベクターが含まれる。ベクターとし
ては、例えば、ｏｒｉ領域と、必要により上記ＤＮＡの
発現のためのプロモーター、プロモーターの制御因子な
どからなるプラスミド、ウィルスまたはファージベクタ
ーが挙げられる。ベクターはひとつまたはそれ以上の選
択的マーカー遺伝子、例えばアンピシリン耐性遺伝子を
含んでいてもよい。ベクターは、イン・ビトロ（in vit
ro）において、例えば、ＤＮＡに対応するＲＮＡの製
造、宿主細胞の形質転換に用いることができる。

【００１３】さらに、本発明には、配列番号２または３
で示される塩基配列、またはそれらのオープンリーディ
ングフレームを有するＤＮＡを含む本発明のＤＮＡを複
製または発現させるためのベクターで形質転換された宿
主細胞も含まれる。細胞としては、例えば細菌、酵母、
昆虫細胞または哺乳動物細胞が挙げられる。

【００１４】さらに、本発明には、本発明のポリペプチ
ドを発現させるための条件下で、本発明の宿主細胞を培
養することからなる本発明のポリペプチドの製造方法も
含まれる。培養は、本発明のポリペプチドが発現し、宿
主細胞より製造される条件下で行われることが好まし
い。本発明のＤＮＡは、上記のようなベクターのアンチ
センス領域に挿入することでアンチセンスＲＮＡを製造
することもできる。このようなアンチセンスＲＮＡは、
細胞中の本発明のポリペプチドのレベルを制御すること
に用いることもできる。

【００１５】本発明は、本発明におけるポリペプチドの
モノクローナルまたはポリクローナル抗体も含む。さら
に本発明におけるポリペプチドのモノクローナルまたは
ポリクローナル抗体の製造方法も含む。モノクローナル
抗体は、本発明のペプチドまたは、その断片を抗原とし
て用い、通常のハイブリドーマの技術により製造するこ
とができる。ポリクローナル抗体は、宿主動物（例え
ば、ラットやウサギ等）に本発明のポリペプチドを接種
し、免疫血清を回収する、通常の方法により製造するこ
とができる。

【００１６】本発明には、本発明のポリペプチド、その
抗体と薬学的に許容される賦形剤および／または担体を
含有する薬学的組成物も含まれる。本発明のポリペプチ
ドとしては、配列番号１で示されたアミノ酸配列を有す
るもの以外に、その一部が欠損したもの（例えば、配列
番号１中、生物活性の発現に必須な部分だけから成るポ
リペプチド）、その一部が他のアミノ酸と置換したもの
（例えば、物性の類似したアミノ酸に置換したもの）、
およびその一部に他のアミノ酸が付加または挿入された
ものも含まれる。

【００１７】よく知られているように、ひとつのアミノ
酸をコードするコドンは１〜６種類（例えば、Ｍｅｔは
１種類、Ｌｅｕは６種類）知られている。従って、ポリ
ペプチドのアミノ酸配列を変えることなくＤＮＡの塩基
配列を変えることができる。（２）で特定される本発明
のＤＮＡには、（１）の配列番号１で示されるポリペプ
チドをコードするすべての塩基配列群が含まれる。塩基
配列を変えることによって、ポリペプチドの生産性が向
上することがある。

【００１８】（３）の配列番号２で特定されるＤＮＡ
は、（２）で示されるＤＮＡの一態様であり、天然型配
列を表わす。（４）の配列番号３で示されるＤＮＡは、
（３）で特定されるＤＮＡに天然の非翻訳部分を加えた
配列を示す。

【００１９】本発明のＤＮＡは、遺伝子組換え法、合成
法あるいは当業者に公知の方法によって取得することが
できる。ヒトＰＤ−１には、Ｆａｓ抗原とはその構造的
特徴のまったく異なる一連の（種々の哺乳動物に共通
の）ポリペプチド群が含まれる。すなわち、本発明によ
ってそのアミノ酸配列が明らかにされたヒトＰＤ−１を
はじめとし、これらと高いホモロジー（ヒトＰＤ−１の
抗体と交差反応を生じるというような免疫学的同等性を
意味する）を有する他の哺乳動物のＰＤ−１が含まれ
る。

【００２０】本発明のヒトＰＤ−１の構造的特徴は以下
のとおりである。ヒトＰＤ−１は２８８個のアミノ酸か
らなる膜結合型蛋白であると考えられる。Ｎ末端部分と
中間部分にふたつの疎水性領域を有しており、それらは
それぞれシグナルペプチと細胞膜貫通領域に相当すると
思われる。ヒトＰＤ−１のＮ末端のシークエンスを、典
型的シグナルペプチドの切断部位と較べてみると、ヒト
ＰＤ−１のシグナルペプチドは、１番目のＭｅｔから２
０番目のＡｒｇまでと推定される。従って、成熟蛋白部
分は２１番目のＰｒｏから２８８番目のＬｅｕまでの２
６８アミノ酸よりなり、細胞外領域（１４７アミノ
酸）、膜貫通領域（２５アミノ酸）および細胞質領域
（９６アミノ酸）で構成されているものと考えられる。
また細胞外領域には４ヶ所のＮ−グリコシレーションサ
イトが存在する可能性がある。

【００２１】ヒトＰＤ−１のアミノ酸配列をナショナル
バイオメディカルリサーチファンデーションのデータベ
ースに登録されたすべてのアミノ酸配列と照合してみる
と、ヒトＰＤ−１の細胞外領域は、既知の免疫グロブリ
ンスーパーファミリーに属する数種類のポリペプチドと
ホモロジーを有していることがわかる。免疫グロブリン
ドメインは、保持されたアミノ酸パターンと逆行性β−
ストランドの数に基づいて分類されているＶ、Ｃ１およ
びＣ２セットを有する。５４番目のＣｙｓと１２３番目
のＣｙｓに挟まれた６８個のアミノ酸配列はジスルフィ
ドで結合されたＶセット配列に類似している。また、４
個のアミノ酸残基（９４Ａｒｇ，９５Ｐｈｅ，１１７Ａ
ｓｐおよび１１９Ｇｌｙ）は多くの免疫グロブリンのＶ
セット配列に特徴的なものである。

【００２２】細胞質領域は、既知のいかなる配列とも明
白なホモロジーを有していないが、注意深く調べると、
抗原受容体やＦｃ受容体に関連する数種のポリペプチド
が有する細胞質領域の尾部にみられる共通の配列（Asp/
Glu-X8-Asp/Glu-X2-Tyr-X2-Leu/Ile-X7-Tyr-X2- Leu/Il
e ）の変形した配列を含んでいることがわかる。最近、
この共通配列が１単位あれば、シグナルを伝えるのに十
分であることが示されている。他の哺乳動物のＰＤ−１
も配列中のアミノ酸の数や種類に多少の違いはあるが、
その構造上の特徴はヒトＰＤ−１に類似したものである
と考えられる。

【００２３】本発明のヒトＰＤ−１ポリペプチドをコー
ドするＤＮＡは、以下の方法により作製することができ
る。ＰＤ−１をコードするＤＮＡの塩基配列が、一旦確
定されると、その後は、化学合成によって、あるいは該
塩基配列の断片を化学合成し、またはＰＣＲ法によりこ
れをプローブとしてハイブリダイズさせることにより、
本発明のＤＮＡを得ることができる。さらに、本ＤＮＡ
を含有するベクターＤＮＡを適当な宿主に導入し、これ
を増殖させることによって、目的とする本発明ＤＮＡを
必要量得ることができる。

【００２４】本発明のＰＤ−１ポリペプチドを取得する
方法としては、（１）生体または培養細胞から精製単離
する方法、（２）ペプチド合成する方法、または（３）
遺伝子組換え技術を用いて生産する方法、などが挙げら
れるが、工業的には（３）に記載した方法が好ましい。
遺伝子組換え技術を用いてポリペプチドを生産するため
の発現系（宿主−ベクター系）としては、例えば、細
菌、酵母、昆虫細胞および哺乳動物細胞の発現系が挙げ
られる。

【００２５】例えば、大腸菌で発現させる場合には、成
熟蛋白部分をコードするＤＮＡの５′末端に開始コドン
（ＡＴＧ）を付加し、得られたＤＮＡを、適当なプロモ
ーター（例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモー
ター、λＰＬプロモーター、Ｔ７プロモーター等）の下
流に接続し、大腸菌内で機能するベクター（例えば、ｐ
ＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９等）に挿入して発
現ベクターを作製する。次に、この発現ベクターで形質
転換した大腸菌（例えば、E.ColiＤＨ１、E.ColiＪＭ１
０９、E.ColiＨＢ１０１株等）を適当な培地で培養し
て、その菌体より目的とするポリペプチドを得ることが
できる。

【００２６】また、バクテリアのシグナルペプチド（例
えば、ｐｅｌＢのシグナルペプチド）を利用すれば、ペ
リプラズム中に目的とするポリペプチドを分泌すること
もできる。さらに、他のポリペプチドとのフュージョン
・プロテイン (fusion protein) を生産することもでき
る。また、哺乳動物細胞で発現させる場合には、例え
ば、ＰＤ−１の全長をコードするＤＮＡを適当なベクタ
ー（例えば、レトロウイルスベクター、パピローマウイ
ルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ＳＶ４０
系ベクター等）中の適当なプロモーター（例えば、ＳＶ
４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、メタロチオネ
インプロモーター等）の下流に挿入して発現ベクターを
作製する。

【００２７】次に、得られた発現ベクターで適当な哺乳
動物細胞（例えば、サルＣＯＳ−７細胞、チャイニーズ
ハムスターＣＨＯ細胞、マウスＬ細胞等）を形質転換
し、形質転換体を適当な培地で培養することによって、
その培養液中に目的とするポリペプチドが分泌される。
以上のようにして得られたポリペプチドは、一般的な生
化学的方法によって単離精製することができる。本発明
によって得られるＰＤ−１遺伝子をコードするＤＮＡ
は、これをプローブとして他の動物のＰＤ−１遺伝子を
分離することができる。配列番号３で示される塩基配列
を有するｃＤＮＡの作製は、以下の方法に従って行なわ
れる。

【００２８】すなわち、(i) 本発明のポリペプチドを産
生する細胞、例えば、ヒト食道癌セルラインからｍＲＮ
Ａを分離し、(ii)該ｍＲＮＡからファーストストランド
（１本鎖ｃＤＮＡ）、次いでセカンドストランド（２本
鎖ｃＤＮＡ）を合成し（ｃＤＮＡの合成）、(iii) 該ｃ
ＤＮＡを適当なファージベクターに組込み、(iv) 得ら
れた組換えファージを宿主細胞に感染させ（ｃＤＮＡラ
イブラリーの作製）、(v) 得られたｃＤＮＡライブラリ
ーをマウスＰＤ−１ｃＤＮＡをプローブに用いてプラ
ークハイブリダイゼーションによりスクリーニングし、
(vi)得られたポジティブクローンよりファージＤＮＡを
調製し、切り出したｃＤＮＡをプラスミドベクターにサ
ブクローニングし、制限酵素地図を作成し、(vii) 各制
限酵素断片の塩基配列を決定し、連結させることで全長
をシークエンスする事によって作成することができる。

【００２９】より詳細に説明すると、工程(i) は、ヒト
セルラインを適当な刺激剤（例えば、ＩＬ−１等）で刺
激するか、または無刺激のままで、オカヤマ（Okayama,
H.）等の方法（Method in Enzymology, 154 , 3 (198
7) 参照）に従って行なわれる。本ポリペプチドを産生
する細胞としては、好ましくはヒトＹＴＣ３セルライン
が挙げられる。工程(ii)、(iii) および(iv)は、ｃＤＮ
Ａライブラリー作製の工程であり、改変した Gubler ＆
Hoffman法（Gene, 25, 263 (1983)参照）に準じて行な
われる。工程(iii) で用いられるベクターとしては、
プラスミドベクター（例えば、ｐＢＲ３２２、ｐBluesc
ript II 等）やファージベクター（例えば、λｇｔ１
０、λＤＡＳＨ II 等）が多数知られているが、好適に
はファージベクターλｇｔ１０（43.3 kbp；Stratagene
社より販売）が用いられる。

【００３０】工程(iv)で用いられる細胞宿主としては、
好ましくは、大腸菌ＮＭ５１４（Stratagene社より販
売）が用いられる。工程(v) および(vi)は、Molecular
Cloning （Sambrook, J., Fritsh, E. F.,および Mania
tis, T, Cold Spring Harbor Laboratory Press (198
9)）に記載の方法に準じて行なわれる。工程(vii) のシ
ークエンシングは、マキサム−ギルバート(Maxam-Gilbe
rt) 法やジデオキシターミネーター法により行なわれ
る。

【００３１】この様にして得られたｃＤＮＡは、該ｃＤ
ＮＡが全長またはほぼ全長であることを確認する必要が
ある。この確認は、該ｃＤＮＡをプローブとして、ノー
ザン（Northern）解析により行なわれる（前記 Molecul
ar Cloning 参照）。ハイブリダイズしたバンドから得
られるｍＲＮＡのサイズと該ｃＤＮＡのサイズを比較
し、ほぼ同じであれば該ｃＤＮＡはほぼ全長であると考
えられる。それらのＰＤ−１遺伝子をコードするＤＮＡ
あるいはＤＮＡ断片はプローブあるいはプライマーとし
てＰＤ−１遺伝子の検出ができ、これによって該遺伝子
と生体防御機能、免疫機能あるいは腫瘍等の疾患との関
係の研究あるいは疾患の診断等に利用することができ
る。

【００３２】また、それらのＤＮＡは通常の遺伝子組換
え法によって多大な有用性が期待されるＰＤ−１ポリペ
プチド、ポリペプチド断片あるいはその誘導体を生産す
る際の必須の鋳型として用いることができる。そのよう
にして生産されたポリペプチド、ポリペプチド断片ある
いは修飾ポリペプチドは感染症、免疫機能の低下または
亢進あるいは腫瘍等の治療剤として用いることが期待さ
れる。

【００３３】さらに、本発明のポリペプチドあるいはそ
の断片を抗原として常法によりポリクローナル抗体およ
びモノクローナル抗体を作製できるので、それらを用い
て該ポリペプチドを定量することによって該ポリペプチ
ドと疾患との関係の研究あるいは疾患の診断等に利用す
ることができる。また、該モノクローナル抗体はそのま
まの形あるいはヒト抗体とのキメラ抗体の形で治療剤と
して用いることができる。

【００３４】

【医薬品への適用】本発明の目的のために本発明のポリ
ペプチドは通常、全身的又は局所的に、一般的には経口
または非経口の形で投与される。好ましくは、経口投
与、静脈内投与および脳室内投与である。投与量は、年
齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等によ
り異なるが、通常、成人一人あたり、一回につき、１０
０μｇから１００ｍｇの範囲で、一日一回から数回経口
投与されるかまたは、成人一人当り、一回につき、１０
μｇから１００ｍｇの範囲で、一日一回から数回非経口
投与される。もちろん前記したように、投与量は、種々
の条件により変動するので、上記投与量より少ない量で
十分な場合もあるし、また範囲を越えて必要な場合もあ
る。

【００３５】本発明化合物を投与する際には、経口投与
のための固体組成物、液体組成物およびその他の組成
物、非経口投与のための注射剤、外用剤、座剤等として
用いられる。経口投与のための固体組成物には、錠剤、
丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。カプセ
ルには、ソフトカプセルおよびハードカプセルが含まれ
る。このような個体組成物においては、一つまたはそれ
以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤
（例えば、ラクトース、マンニトール、グルコース、ヒ
ドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デン
プン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マ
グネシウム等）と混合される。組成物は、常法に従っ
て、不活性な希釈剤以外の添加物、例えば、潤滑剤（ス
テアリン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコー
ル酸カルシウム等）、安定化剤（ヒト血清アルブミン、
ラクトース等）、溶解補助剤（アルギニン、アスパラギ
ン酸等）を含有していてもよい。

【００３６】錠剤または丸剤は、必要により白糖、ゼラ
チン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロ
ピルメチルセルロースフタレート等の胃溶性あるいは腸
溶性のフィルムで皮膜してもよいし、また２以上の層で
皮膜してもよい。さらにゼラチンのような吸収されうる
物質のカプセルも包含される。経口投与のための液体組
成物は、薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、
シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般に用いられる
不活性な希釈剤（例えば、精製水、エタノール等）を含
んでいてもよい。この様な組成物は、不活性な希釈剤以
外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、
芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。

【００３７】経口投与のためのその他の組成物として
は、ひとつまたはそれ以上の活性物質を含み、それ自体
公知の方法により処方されるスプレー剤が含まれる。こ
の組成物は不活性な希釈剤以外に亜硫酸水素ナトリウム
のような安定剤と等張性を与えるような安定化剤、塩化
ナトリウム、クエン酸ナトリウムあるいはクエン酸のよ
うな等張剤を含有していてもよい。スプレー剤の製造方
法は、例えば米国特許第2,868,691 号および同第3,095,
355 号明細書（参考のために記載した）に詳しく記載さ
れている。

【００３８】本発明による非経口投与のための注射剤と
しては、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳
濁剤を包含する。水性または非水性の溶液剤、懸濁剤と
しては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも
一つの不活性な希釈剤と混合される。水性の希釈剤とし
ては、例えば注射用蒸留水および生理食塩水が挙げられ
る。非水性の希釈剤としては、例えばプロピレングリコ
ール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植
物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベー
ト８０（登録商標）等が挙げられる。

【００３９】このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤
剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、ヒト血清アル
ブミン、ラクトース等）、溶解補助剤（例えば、アルギ
ニン、アスパラギン酸等）のような補助剤を含んでいて
もよい。これらはバクテリア保留フィルターを通す濾
過、殺菌剤の配合または照射によって無菌化される。こ
れらはまた無菌の固体組成物を製造し（例えば、凍結乾
燥法等により）、使用前に無菌の注射用蒸留水または他
の溶媒に溶解して使用することもできる。非経口投与の
ためのその他の組成物としては、ひとつまたはそれ以上
の活性物質を含み、常法により処方される外用液剤、軟
膏、塗布剤、直腸内投与のための坐剤およびペッサリー
等が含まれる。

【００４０】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、これらは本発明の範囲を制限するものでは
ない。

【００４１】実施例１：細胞の培養ヒトセルライン（CESS、HPB-ALL 、Jarkat、YTC3、CCRF
-CEM、ＪＭおよびMOLT-4F ）を、１０％熱非働化ウシ胎
児血清、２ｍＭグルタミン、５０μＭ２−メルカプト
エタノール、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μ
ｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ 1640
（Gibco 社製）中で培養した。

【００４２】実施例２：ノザンブロッティンググアニジウム・イソシアネート法（前記 molecular clo
ning 参照）によりそれぞれのセルラインより全ＲＮＡ
を調製した。次にオリゴテックスｄＴ３０スーパー（ol
igotex−ｄＴ３０「ｓｕｐｅｒ」）（第一化学薬品）に
より、全ＲＮＡからpoly（Ａ）⁺ＲＮＡのみを分離し
た。３μg のpoly（Ａ）⁺ＲＮＡを 1.2％ホルムアルデ
ヒド−アガロースゲル上で電気泳動により分離した後、
ナイロン膜フィルター（Biodyne Ａ，日本ジェネティッ
ク社）に移した。フィルターは、８０℃で２時間焼き付
けた。ランダムプライミング法によって、³²Ｐでラベル
されたマウスＰＤ−１のコーディング領域を含むＥｃｏ
ＲＩ断片（１ｋｂ）をプローブとして用いた。このプロ
ーブの比活性は、１×１０⁹ d.p.m./μｇであった。ハ
イブリダイゼーションは、１０×Denhardt′s、１ＭＮ
ａＣｌ、５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ 7.5）、１０ｍＭ
ＥＤＴＡ、１％ＳＤＳおよび１ｍｇ／ｍｌの超音波処理
されたサケ精子ＤＮＡを含む溶液中、６０℃で１５時間
行った。次にフィルターを、１×ＳＳＣ、0.1％ＳＤＳ
中、６０℃で１０分間洗浄した。オートラジオグラフィ
ーの結果、リンパ系セルラインＹＴＣ３より、約 2.3ｋ
ｂのハイブリダイズ信号が得られた。

【００４３】実施例３：ｃＤＮＡライブラリーの作成お
よびヒトＰＤ−１ｃＤＮＡのクローニングＹＴＣ３細胞株から抽出された５μｇのpoly（Ａ）⁺Ｒ
ＮＡから、タイム・セイバー・ｃＤＮＡ合成キット（Ti
me Saver cDNA Synthesis Kit ）(Pharmacia社製) を用
いて、ｃＤＮＡのライブラリーを作成した。ファースト
ストランドｃＤＮＡの合成には、 Oligo（ｄＴ）プライ
マーを用いた。ＥｃｏＲＩ−ＮｏｔＩアダプターをつな
いだ二本鎖ｃＤＮＡをλｇｔ１０ベクターにクローニン
グし、パッケージングを行った（GIGAPACK II GOLD, St
ratagene社製）。これを E.ColiＮＭ５１４を蒔いたプ
レートに重層した。ファージＤＮＡを各プレートにつ
き、２枚ずつのフィルターに移しとり、８０℃で２時間
焼きつけた後、６０℃で１５時間ハイブリダイズした。
Bluescript ＳＫプラスミドベクター（Stratagene社
製）から、ＥｃｏＲＩで切り出したマウスＰＤ−１コー
ド領域（１ｋｂ）をプローブとして用いた。フィルター
は、１×ＳＳＣ、 0.1％ＳＤＳで６０℃、１０分間洗浄
した。オートラジオグラフィーの結果、 1.2×１０⁶フ
ァージのうち、５１個がポジティブな信号を与えた。単
一になるまで精製した後、２３クローンを選び、さらに
解析をした結果、最長のｃＤＮＡはインサートは、 2.1
ｋｂであった。この結果は、サザンブロッティングの結
果とよく一致した。

【００４４】実施例４：ＤＮＡのシークエンシングヒトｃＤＮＡライブラリーから分離されたファージのｃ
ＤＮＡ挿入部を Bluescript ＳＫプラスミドベクター
（Stratagene社製）にサブクローニングし、修飾Ｔ７
ＤＮＡポリメラーゼ（United States Biochemical 社
製）および［α−３２Ｐ］ｄＣＴＰ（3000Ｃｉ/mmol, A
mersham 社製）を用いたジデオキシヌクレオチドチェー
ンターミネーション法（Sangerら, 1977）によりシーク
エンシングを行った。シークエンシングプライマーに
は、Bluescript プラスミドに特異的なプライマーを用
いた。ヌクレオチド配列決定は、ｃＤＮＡの両鎖を完全
解析することにより行った。これにより、配列番号２に
示されるヌクレオチド配列を得た。全長のヌクレオチド
配列を配列番号３に示す。配列番号２のヌクレオチド配
列より、配列番号１で示されるペプチド配列を決定し
た。推定されるアミノ酸の総数は２８８個であり、マウ
スＰＤ−１と同数であった。また、そのホモロジーは、
約６０％であった。また、配列番号３で示される全長の
ヌクレオチド配列とそれによってコードされる推定アミ
ノ酸を併せて配列番号４に示す。

【００４５】実施例５：サザンブロッティング常法（前記のmolecular cloning 参照）により、種々の
動物細胞からゲノムＤＮＡを分離した。ＤＮＡをＥｃｏ
ＲＩ、ＢａｍＨＩまたはＨｉｎｄ IIIによって、マニュ
ファクチュアーズレコメンデーションに従い消化し、電
気泳動（１００Ｖ、 0.8％アガロースゲル、ＴＥＡ緩衝
液）により、分離した。ＤＮＡ断片を、0.25 ＮＨＣ
ｌで１０分間洗浄し、 0.2ＮＮａＯＨ／ 0.6ＭＮａ
Ｃｌで３０分間変性し、 0.6ＭＮａＣｌ／ 0.2Ｍトリ
ス（ｐＨ 7.5）で１時間中和したのち、通常のサザンブ
ロッティングに使用されるナイロン膜（ Bidyne Ａ）に
移した。フィルターは、８０℃で２時間焼きつけた。

【００４６】ヒトＰＤ−１のコード領域を含むEcoRI-St
uI断片（９００ｂｐ）を、ランダムプライミング法によ
って、³²Ｐでラベルし、プローブとして用いた。このプ
ローブの比活性は、９×１０⁸d.p.m./ μg であった。
ハイブリダイゼーションは、１０×Denhardt′ｓ１Ｍ
ＮａＣｌ、５０ｍＭトリス（ｐＨ 7.5）、１０ｍＭＥ
ＤＴＡ、１％ＳＤＳおよび１ｍｇ／ｍｌの超音波処理さ
れたサケ精子ＤＮＡ中で６５℃で１５時間行った。フィ
ルターは、 0.1×ＳＳＣ、 0.1％ＳＤＳ中、６５℃で１
０分間洗浄した。オートラジオグラフィーの結果、ヒト
ゲノムＤＮＡをいずれの酵素で切断した場合も１つのバ
ンドが得られたので、ヒトＰＤ−１遺伝子は、１コピー
で存在することが判った。

【００４７】次に、マウスＰＤ−１のコード領域を含む
ＥｃｏＲＩ断片（１ｋｂ）をプローブとして用い、実
施例２で記載したハイブリダイゼーションおよび洗浄の
条件で種々の動物のゲノムＤＮＡとサザンブロッティン
グを行った。マウスＰＤ−１とハイブリダイズしたの
は、マウスとヒトのみであり、ショウジョウバエ、ツメ
ガエル、ウサギのＤＮＡはハイブリダイズしなかった。

【００４８】実施例６：ヒトＰＤ−１ゲノムクローンの
分離食道癌のセルラインのゲノムをＳａｕ３ＡＩで部分消化
し、λＤＡＳＨ II ベクターのＢａｍＨＩサイトにつな
いで、構築したＤＮＡゲノムライブラリー（入手先：京
都大学医学部第一病理学教室、西山博士）を用いた。ヒ
トＰＤ−１遺伝子は、Bluescript ＳＫベクターからＥ
ｃｏＲＩで切断したヒトＰＤ−１ｃＤＮＡとのハイブ
リダイゼーションによって、このライブラリーから分離
した。プローブは、ランダムプライミングにより³²Ｐで
ラベルした。１×１０⁶ファージからポジティブなクロ
ーン２個を分離し、プラーク精製によって単一にし、制
限酵素により消化した後、同じプローブを用いて、サザ
ンハイブリダイゼーションにより解析した。この結果、
ＣＩＳＳ（chromosomal in situ suppression ）によ
り、ヒトＰＤ−１遺伝子は、２ｑ37.3上にマップされる
ことが判明した。

【００３６】

【配列表】

配列番号:1 配列の長さ:288 配列の型: アミノ酸トポロジー: 直鎖状配列の種類: 蛋白質配列 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln -20 -15 -10 -5 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 1 5 10 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 15 20 25 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 30 35 40 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 45 50 55 60 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 65 70 75 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 80 85 90 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 95 100 105 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 110 115 120 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 125 130 135 140 Arg Ser Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly 145 150 155 Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys 160 165 170 Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro 175 180 185 Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly 190 195 200 Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro 205 210 215 220 Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly 225 230 235 Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg 240 245 250 Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 255 260 265

【００３６】配列番号：２配列の長さ：８６４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列 ATGCAGATCC CACAGGCGCC CTGGCCAGTC GTCTGGGCGG TGCTACAACT GGGCTGGCGG 60 CCAGGATGGT TCTTAGACTC CCCAGACAGG CCCTGGAACC CCCCCACCTT CTCCCCAGCC 120 CTGCTCGTGG TGACCGAAGG GGACAACGCC ACCTTCACCT GCAGCTTCTC CAACACATCG 180 GAGAGCTTCG TGCTAAACTG GTACCGCATG AGCCCCAGCA ACCAGACGGA CAAGCTGGCC 240 GCCTTCCCCG AGGACCGCAG CCAGCCCGGC CAGGACTGCC GCTTCCGTGT CACACAACTG 300 CCCAACGGGC GTGACTTCCA CATGAGCGTG GTCAGGGCCC GGCGCAATGA CAGCGGCACC 360 TACCTCTGTG GGGCCATCTC CCTGGCCCCC AAGGCGCAGA TCAAAGAGAG CCTGCGGGCA 420 GAGCTCAGGG TGACAGAGAG AAGGGCAGAA GTGCCCACAG CCCACCCCAG CCCCTCACCC 480 AGGTCAGCCG GCCAGTTCCA AACCCTGGTG GTTGGTGTCG TGGGCGGCCT GCTGGGCAGC 540 CTGGTGCTGC TAGTCTGGGT CCTGGCCGTC ATCTGCTCCC GGGCCGCACG AGGGACAATA 600 GGAGCCAGGC GCACCGGCCA GCCCCTGAAG GAGGACCCCT CAGCCGTGCC TGTGTTCTCT 660 GTGGACTATG GGGAGCTGGA TTTCCAGTGG CGAGAGAAGA CCCCGGAGCC CCCCGTGCCC 720 TGTGTCCCTG AGCAGACGGA GTATGCCACC ATTGTCTTTC CTAGCGGAAT GGGCACCTCA 780 TCCCCCGCCC GCAGGGGCTC AGCTGACGGC CCTCGGAGTG CCCAGCCACT GAGGCCTGAG 840 GATGGACACT GCTCTTGGCC CCTC 864

【００３６】配列番号：３配列の長さ：９２１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列 CACTCTGGTG GGGCTGCTCC AGGCATGCAG ATCCCACAGG CGCCCTGGCC AGTCGTCTGG 60 GCGGTGCTAC AACTGGGCTG GCGGCCAGGA TGGTTCTTAG ACTCCCCAGA CAGGCCCTGG 120 AACCCCCCCA CCTTCTCCCC AGCCCTGCTC GTGGTGACCG AAGGGGACAA CGCCACCTTC 180 ACCTGCAGCT TCTCCAACAC ATCGGAGAGC TTCGTGCTAA ACTGGTACCG CATGAGCCCC 240 AGCAACCAGA CGGACAAGCT GGCCGCCTTC CCCGAGGACC GCAGCCAGCC CGGCCAGGAC 300 TGCCGCTTCC GTGTCACACA ACTGCCCAAC GGGCGTGACT TCCACATGAG CGTGGTCAGG 360 GCCCGGCGCA ATGACAGCGG CACCTACCTC TGTGGGGCCA TCTCCCTGGC CCCCAAGGCG 420 CAGATCAAAG AGAGCCTGCG GGCAGAGCTC AGGGTGACAG AGAGAAGGGC AGAAGTGCCC 480 ACAGCCCACC CCAGCCCCTC ACCCAGGTCA GCCGGCCAGT TCCAAACCCT GGTGGTTGGT 540 GTCGTGGGCG GCCTGCTGGG CAGCCTGGTG CTGCTAGTCT GGGTCCTGGC CGTCATCTGC 600 TCCCGGGCCG CACGAGGGAC AATAGGAGCC AGGCGCACCG GCCAGCCCCT GAAGGAGGAC 660 CCCTCAGCCG TGCCTGTGTT CTCTGTGGAC TATGGGGAGC TGGATTTCCA GTGGCGAGAG 720 AAGACCCCGG AGCCCCCCGT GCCCTGTGTC CCTGAGCAGA CGGAGTATGC CACCATTGTC 780 TTTCCTAGCG GAATGGGCAC CTCATCCCCC GCCCGCAGGG GCTCAGCTGA CGGCCCTCGG 840 AGTGCCCAGC CACTGAGGCC TGAGGATGGA CACTGCTCTT GGCCCCTCTG ACCGGCTTCC 900 TTGGCCACCA GTGTTCTGCA G 921

【００３６】配列番号：４配列の長さ：９２１配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：Homo Sapiens セルライン：ＹＴＣ３配列の特徴特徴を表す記号：ＣＤＳ存在位置：25..888 特徴を決定した方法：Ｐ特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：25..84 特徴を決定した方法：Ｓ特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：85..888 特徴を決定した方法：Ｓ配列 CACTCTGGTG GGGCTGCTCC AGGC ATG CAG ATC CCA CAG GCG CCC TGG CCA GTC 54 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val -20 -15 GTC TGG GCG GTG CTA CAA CTG GGC TGG CGG CCA GGA TGG TTC TTA GAC 102 Val Trp Ala Val Leu Gln Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp -10 -5 1 5 TCC CCA GAC AGG CCC TGG AAC CCC CCC ACC TTC TCC CCA GCC CTG CTC 150 Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu 10 15 20 GTG GTG ACC GAA GGG GAC AAC GCC ACC TTC ACC TGC AGC TTC TCC AAC 198 Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn 25 30 35 ACA TCG GAG AGC TTC GTG CTA AAC TGG TAC CGC ATG AGC CCC AGC AAC 246 Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn 40 45 50 CAG ACG GAC AAG CTG GCC GCC TTC CCC GAG GAC CGC AGC CAG CCC GGC 294 Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly 55 60 65 70 CAG GAC TGC CGC TTC CGT GTC ACA CAA CTG CCC AAC GGG CGT GAC TTC 342 Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe 75 80 85 CAC ATG AGC GTG GTC AGG GCC CGG CGC AAT GAC AGC GGC ACC TAC CTC 390 His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu 90 95 100 TGT GGG GCC ATC TCC CTG GCC CCC AAG GCG CAG ATC AAA GAG AGC CTG 438 Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu 105 110 115 CGG GCA GAG CTC AGG GTG ACA GAG AGA AGG GCA GAA GTG CCC ACA GCC 486 Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala 120 125 130 CAC CCC AGC CCC TCA CCC AGG TCA GCC GGC CAG TTC CAA ACC CTG GTG 534 His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Ser Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val 135 140 145 150 GTT GGT GTC GTG GGC GGC CTG CTG GGC AGC CTG GTG CTG CTA GTC TGG 582 Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp 155 160 165 GTC CTG GCC GTC ATC TGC TCC CGG GCC GCA CGA GGG ACA ATA GGA GCC 630 Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala 170 175 180 AGG CGC ACC GGC CAG CCC CTG AAG GAG GAC CCC TCA GCC GTG CCT GTG 678 Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val 185 190 195 TTC TCT GTG GAC TAT GGG GAG CTG GAT TTC CAG TGG CGA GAG AAG ACC 726 Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr 200 205 210 CCG GAG CCC CCC GTG CCC TGT GTC CCT GAG CAG ACG GAG TAT GCC ACC 774 Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr 215 220 225 230 ATT GTC TTT CCT AGC GGA ATG GGC ACC TCA TCC CCC GCC CGC AGG GGC 822 Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly 235 240 245 TCA GCT GAC GGC CCT CGG AGT GCC CAG CCA CTG AGG CCT GAG GAT GGA 870 Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly 250 255 260 CAC TGC TCT TGG CCC CTC TGAC CGGCTTCCTT GGCCACCAGT GTTCTGCAG 921 His Cys Ser Trp Pro Leu 265

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｎ 1/21 8828−4Ｂ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ 21/08 9161−4Ｂ // Ａ６１Ｋ 39/395 ＮＣ１２Ｎ 5/10 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） 7729−4ＢＣ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者石田靖雅アメリカ合衆国，マサチューセッツ02146, ニュートン，コテージ・ストリート35 (72)発明者篠原隆司京都府京都市左京区永観堂西町19 藤井永観堂文庫102号室 (54)【発明の名称】ヒトにおけるプログラムされた細胞死に関連したポリペプチド、それをコードするＤＮＡ、そのＤＮＡからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞、そのポリペプチドの抗体、およびそのポリペプチドまたはその抗体を含有する薬学的組成物

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】実質的に純粋な形である配列番号１で示
されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、そのホモロ
ーグ、そのフラグメントまたはそのフラグメントのホモ
ローグ。
【請求項２】配列番号１で示されるアミノ酸配列から
なる請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】請求項１に記載されたポリペプチドをコ
ードするＤＮＡ。
【請求項４】配列番号２で示される塩基配列を有する
請求項３記載のＤＮＡ、またはその配列に選択的にハイ
ブリダイズするフラグメント。
【請求項５】配列番号３で示される塩基配列を有する
請求項３記載のＤＮＡ、またはその配列に選択的にハイ
ブリダイズするフラグメント。
【請求項６】請求項３から５のいずれかの項に記載の
ＤＮＡからなる複製または発現ベクター。
【請求項７】請求項６記載の複製または発現ベクター
で形質転換された宿主細胞。
【請求項８】請求項１または２に記載されたポリペプ
チドを発現させるための条件下で請求項７記載の宿主細
胞を培養することからなる該ポリペプチドの製造方法。
【請求項９】請求項１または２に記載されたポリペプ
チドのモノクローナルまたはポリクローナル抗体。
【請求項１０】請求項１または２に記載されたポリペ
プチドまたは請求項９記載の抗体および薬学的に許容さ
れる賦形剤および／または担体を含有することを特徴と
する薬学的組成物。