JPH0718864B2

JPH0718864B2 - 乾式液体分析要素

Info

Publication number: JPH0718864B2
Application number: JP32070987A
Authority: JP
Inventors: 光利田中; 憲行細井; 鉄平池田; 茂長友
Original assignee: Fuji Photo Film Co Ltd
Current assignee: Fujifilm Holdings Corp
Priority date: 1987-12-18
Filing date: 1987-12-18
Publication date: 1995-03-06
Anticipated expiration: 2010-03-06
Also published as: JPH01162151A

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、生物体液中、たとえば血液中の特定物質の定
量に用いる乾式化学分析要素に関する。

［従来技術とその欠点］体液中に存在する各種の代謝成分、例えばグルコース、
ビリルビン、尿素窒素、尿酸、コレステロール、乳酸脱
水素酵素、クレアチンキナーゼ、GOT、GPT等の定量分析
は、臨床医学上重要で、疾患の診断、治療経過の追跡、
予後の判定などに不可欠である。血液等を試料とする臨
床化学検査では、微量の液体試料で、精度の高い検査を
行うことができることが望ましい。従来、溶液試薬を用
いる湿式法が広く用いられているが、迅速性に欠ける。

乾式化学分析、すなわち実質的に乾燥状態の分析要素、
例えば、試験片や多層分析要素の水浸透性担体中に導入
された分析試薬系を利用する臨床分析法が知られてい
る。乾式化学分析は湿式法による化学分析より、例えば
使用上の簡易性、必要な検体量が小さいこと、分析の迅
速さなどの点で優れている。すなわち乾式多層分析要素
を用いると、微量の液体試料で、精度の高い検査を簡便
かつ迅速に行うことができる。乾式多層分析要素は例え
ば、特公昭53−21677号、特開昭55−164356号、特開昭6
0−222769号等で知られている。

典型的な乾式多層分析要素は透明支持体、試薬層、反射
層、展開層から構成されている。水不浸透性透明支持体
（例えば下塗り処理を施したプラスチックフィルム）の
上に塗布された試薬層には、液体試料中に含まれる被検
成分と反応し、その成分量に応じた光学濃度に発色する
試薬が含まれる。反射層は、試薬層に入射した光が展開
層に達するのを防ぎ、試薬層の光学測定の際展開層に点
着した液体試料の影響を受けないようにする役割を持
つ。展開層は、点着された液体試料を均一に、液の量に
ほぼ比例する面積に広げる。このような乾式分析要素を
用いて定量分析するには、液体試料、例えば全血を展開
層の表面に一定量滴下する。展開層で展開された血液
は、反射層を通って試料層に達し、ここで試薬と反応
し、発色する。試料点着後、化学分析スライドを適当な
時間、一定温度に保って発色反応を進行させた後、透明
支持体側から特定波長域で試薬層の反射光学濃度を求
め、予め定めた検量線に基づいて定量分析を行う。

特開昭58−70163号に記載されている通り、試薬層がゼ
ラチンのような親水性高分子から成る場合、高分子成
分、たとえばアルブミンのような蛋白質、蛋白質の一種
でもある種々の酵素、多糖類、あるいは疎水性成分、例
えばコレステロールエステル、トリグリセリド、ビリル
ビンは、試薬層に拡散することが出来ず、試薬と反応し
ないため検出できない。

このような問題を解決するために、高分子成分や疎水性
成分を展開層で反応させる方法がすでに知られている。
すなわち、これらの成分を試薬層まで拡散させることな
しに、展開層で反応させるもので、展開／試薬層で生成
した色素を光反射層を通してその下（支持体に近い位
置）に設けられた検出層に拡散させ、ここで検出するも
の（例えば、特開昭51−40191号に記載の乾式多層分析
要素）や展開層での反応で生じた低分子の中間体をその
下（支持体に近い位置）にある発色試薬層へ拡散させ発
色試薬層で検出するもの（例えば、特開昭50−137192号
に記載の乾式多層分析要素）がある。しかし前者は検出
層に拡散する色素の割合が低いことによる分析感度の不
足、後者は妨害成分の干渉を受けやすい欠点をもつ。前
者において、展開層以外の層を省き、展開層中で生成し
た色素を他の層に拡散させることなしに検出する方法も
あるが、バックグラウンドが不安定であり、全血の分析
が困難である。

高分子または疎水性成分の検出を可能にするために、重
合体粒子の結合した粒子構造物から成る試薬層を有する
乾式多層分析要素が特開昭55−90859号、同58−70163号
で提案されている。しかしこのような試薬層の改良を行
っても、展開層と試薬層の間にある光反射層等が、高分
子または疎水性成分の拡散を妨げるならば、それらの分
析はやはり困難である。

乾式多層分析要素の光反射層として酸化チタン、硫酸バ
リウム等の無機物粒子が親水性高分子を結合剤として分
散された層が米国特許3,992,158号＝特公昭53−21677
号、米国特許4,042,335号＝特開昭51−40191号（特公昭
58−18628号）等で知られている。このような層で結合
剤の占める率（体積または重量）が高いと高分子または
疎水性成分の透過が困難である。一方、結合剤の占める
割合が低いと、高分子または疎水性成分の透過はある程
度可能となるが、層の機械的性質が悪くなる。すなわち
極めて脆く、ひび割れしやすくなり、粒子の脱落が生ず
ることもある。

［解決しようとする技術的課題］本発明の技術的課題は高分子または疎水性成分の透過が
容易で、しかもひび割れや粒子の脱落を起こさない光反
射／遮蔽層を有する乾式多層分析要素を提供することで
ある。

さらには光反射／遮蔽層に、入手しやすく、取り扱い易
い優れた光反射体である酸化チタン、硫酸バリウム等の
固体粒子を用いて、高分子または疎水性成分の透過が容
易であり、しかもひび割れや粒子の脱落を起こさない光
反射／遮蔽層を有する乾式多層分析要素を提供すること
である。

［技術的課題の解決手段］本発明において上記課題は水不浸透性透明支持体の上に、少なくとも試薬層、光反
射／遮蔽層、展開層がこの順に設けられ、これらの３つ
の層がともに水浸透性であり、被検成分の存在下に光学
的に検出し得る物質を生成し得る試薬組成物を、前記試
薬層を包含する少なくとも１つの水浸透性層に含む多層
の乾式液体分析要素であって、前記試薬層と展開層とは多孔質であって高分子または疎
水性成分の透過が容易であり、前記光反射／遮蔽層は光反射性粒子又は光吸収性粒子を
有機液体中に分散させてなる芯体と、硬化した高分子か
らなる壁とを有するマイクロカプセルと親水性ポリマー
バインダーから構成されており、高分子又は疎水性成分
が透過し得ることを特徴とする乾式液体分析要素によっ
て解決された。

［発明の具体的構成］本発明の分析要素は水不浸透性透明支持体の上に、少な
くとも試薬層、光反射／遮蔽層（光反射層又は光遮蔽層
を意味する）、展開層をこの順に有する。支持体を含め
た前記４つの層互いに隣接してもよく、またそれらの間
にさらに他の水浸透性層を有してもよい。

例えば支持体と試薬層の間に、第２の試薬層、色素等を
受容する検出層、水性液体試料の浸透を促進するための
吸水層等を有してもよい。検出層は一般に被検成分の存
在下で生成した色素等が拡散し、光透過性支持体を通し
て光学的に検出され得る層で、親水性ポリマーにより構
成することができる。媒染剤、例えばアニオン性色素に
対してカチオン性ポリマーを、含んでもよい。吸水層は
一般に、被検成分の存在下で生成する色素が実質的に拡
散しないような層を言い、膨潤しやすい親水性ポリマー
により構成することができる。

展開層と光反射／遮蔽層との間に血球濾過層（例えば米
国特許3,992,158号＝特公昭53−21677号、特開昭62−13
8756号、特開昭62−138757号、特開昭62−138758号のよ
うな）、妨害物除去層（例えば米国特許4,303,408号＝
特開昭56−122956号のような）等を設けてもよい。光反
射／遮蔽層と試薬層との間に妨害物除去層等を設けても
よい。また前記検出層と試薬層との間に、妨害物除去
層、光反射層（例えば米国特許4,042,335号＝特公昭58
−18628号のように）等を設けてもよい。

水不透過性透明支持体の材料として好ましい例はポリエ
チレンテレフタレートである。セルローストリアセテー
ト等のセルロースエステル類でもよい。親水性層を強固
に接着させるため通常、下塗り層を設けるか、親水化処
理を施す。

試薬組成物は、被検成分の存在下に、光学的に検出し得
る物質、例えば染料を、生成し得る組成物であって、被
検成分と直接に反応して、あるいは被検成分と試薬との
反応により生成する中間体と反応して、光学的に検出し
得る物質、例えば染料を、生成し得る組成物（指示薬）
を含む。指示薬としてはロイコ色素の酸化によって染料
を生成する化合物（例えば米国特許4,089,747号、特開
昭59−193352号等に記載されたようなアリールイミダゾ
ールロイコ色素）を含む組成物、ジアゾニウム塩、酸化
されたときに他の化合物とカップリングにより染料を生
成する化合物を含む組成物（例えば４−アミノアンチピ
リン類と、フェノール類またはナフトール類）、還元型
補酵素と電子伝達剤の存在下で染料を生成することので
きる化合物から成るもの等を、含むことができる。ま
た、酵素活性を測定する分析要素の場合には、例えばｐ
−ニトロフェノールのような有色物質を遊離しうる自己
顕色性基質を、試薬層または展開層に含むことができ
る。

試薬組成物は、総てを多孔性試薬層に含んでもよいが、
一部を別の多孔性層または無孔性層に含有させてもよ
い。例えば被検成分と試薬との反応により中間体を生成
する組成物を試薬層に、中間体と反応して染料等を生成
し得る組成物（指示薬）を試薬層と支持体との間にある
第２の試薬層に含んでもよい。この場合第２の試薬層
は、親水性ポリマーを結合剤とする実質的に均一な層で
あってもよい。親水性ポリマーとして例えば、ゼラチン
およびその誘導体（例えばフタル化ゼラチン）、セルロ
ース誘導体（例えばヒドロキシプロピルセルロース）、
アガロース、アクリルアミド重合体、メタアクリルアミ
ド重合体、アクリルアミドまたはメタアクリルアミドと
各種ビニル性モノマーとの共重合体等が利用できる。第
１の試薬層と第２の試薬層の間に、気体透過層、妨害物
除去層（例えば米国特許4,066,403号＝特公昭58−19062
号のように）を設けてもよく、これらの層は必要なら水
浸透過性であってもよい。

試薬層としては、濾紙、不織布のような繊維質多孔性層
を用いてもよいが、非繊維多孔性層を用いることもでき
る。特公昭53−21677号、米国特許1,421,341号等に記載
されたセルロースエステル類、例えば、セルロースアセ
テート、セルロースアセテート／ブチレート、硝酸セル
ロースからなるブラッシュ・ポリマーの層が好ましい。
６−ナイロン、6,6−ナイロン等のポリアミド、ポリエ
チレン、ポリプロピレン等の微多孔性膜でもよい。特開
昭62−27006号に記載されたポリスルホンから成る微孔
性膜でもよい。その他、特公昭53−21677号、特開昭55
−90859号等に記載された、ポリマー小粒子、ガラス粒
子、珪藻土等が親水性または非吸水性ポリマーで結合さ
れた連続空隙をもつ多孔性層、特開昭57−101760号、特
開昭57−101761号に記載されたポリマー粒子構造物も利
用できる。

相分離法により作られたいわゆるブラッシュ・ポリマー
から成るメンブランフィルターでは、厚さ方向の液体通
過経路は膜の製造の際の自由表面側（即ち光沢面）で最
も狭くなっており、本発明の分析要素の試薬層にこの種
の膜を用いる場合には、層の支持体に近い側にメンブラ
ンフィルターの光沢面を向けることが好ましい。

親水性ポリマーを結合剤とし試薬組成物を含む均一層を
塗布した後、試薬組成物を含まない非繊維多孔性層を特
開昭55−164356号のような方法で接着させることによっ
て、試薬組成物を表１の非繊維多孔性層に実質的に含有
させることができる。

試薬組成物には必要に応じ、活性化剤、緩衝剤、硬膜
剤、界面活性剤等を含有させることができる。本発明の
分析要素の試薬層に含有させることができる緩衝剤の例
としては、炭酸塩、ホウ酸塩、燐酸塩やBiochemistry誌
第５巻第２号、467ページより477ページ（1966年）
に記載されているグッド（Good）の緩衝剤などを挙げる
ことができる。これらの緩衝剤は『蛋白質・酵素の基礎
実験法』（堀尾武一ほか著、南江堂、1981年）、前記Bi
ochemistry誌第５巻等の文献を参考にして選択すること
ができる。

試薬組成物は酵素を含むものでもよく、特開昭62−1387
56号（長友ら）明細書第18ページから第20ページに記載
されたものを用いることができる。

多孔性試薬層を接着し積層するための接着層を、支持体
（下塗り層）、吸水層、検出層等の層の上に設けてもよ
い。接着層は水で膨潤したときに多孔性層を接着するこ
とができるような親水性ポリマー例えば、ゼラチン、ゼ
ラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からなるこ
とが好ましい。

光反射／遮蔽層は、検出層、試薬層等に生じた検出可能
な変化（色変化、発色等）を光透過性の支持体側から反
射測光する際に、全血中の赤血球のヘモグロビンの赤色
を遮蔽するとともに、光反射層または背景層として機能
する。本発明において光反射／遮蔽層は、光反射性粒子
又は光吸収性粒子を含む高分子から成る芯体と、該粒子
を実質的に含まない硬化した高分子から成る壁とを有す
るマイクロカプセルと親水性ポリマーバインダーから構
成されていることを特徴としている。

芯体は、有機液体中に光反射粒子または光吸収粒子を分
散させたものである。有機液体は通常、鉱物油、動物
油、植物油、合成油等である。

鉱物油の例：石油、ケロシン、ナフサ、パラフィン、動物油の例：魚油、ラード、植物油の例：落花生油、亜麻仁油、大豆油、ひま子油、
とうもろこし油、合成油の例：ビフェニル化合物（例えばイソプロピルビフェニル、イ
ソアミルビフェニル）、ターフェニル化合物、アルキルナフタレン（例えばジイソプロピルナフタレ
ン）、アルキル化ジフェニルアルカン（例えば2,4−ジメチル
ジフェニルアルカン）、塩素化パラフィン、フタル酸エステル類（例えばジブチルフタレート、ジオ
クチルフタレート）これらの有機液体中に分散される光反射粒子としては例
えば白色または明色の顔料を用いる。例えば、酸化チタ
ン、亜鉛華、リトポン、シリカ、アルミナ、硫酸バリウ
ム、硫酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウ
ム、カオリナイト、ハロイサイト、白雲母、タルクであ
る。これらのうち酸化チタンが優れている。

光遮蔽性粒子を分散してもよく、例えばカーボンブラッ
ク、黒化鉄のような黒色顔料を用いることができる（こ
の場合、本発明の光反射／遮蔽層は光遮蔽層である）。

これらの固体粒子の平均粒子径は通常２μｍ以下が適当
で、0.02ないし１μｍが好ましい。固体粒子と液体の体
積比は通常約1:1（ほぼ最密充填に相当）から1:20程度
の範囲であるが、十分な光遮蔽力を与える量の固体粒子
を含む必要がある。しかし固体粒子の表面がカプセル粒
子の外面に露出しない量を限度とすべきである。液体中
には固体粒子、例えば顔料が、液体中に安定に分散する
ための助剤、例えば界面活性剤を含有してもよい。

壁材は、コラーゲン、ゼラチン、カゼイン等の蛋白質、
ポリペプチド、ポリウレタン、ポリウレア、ポリアミ
ド、ポリエステル、尿素ホルマリン縮合物、ポリスチレ
ン、ポリエチレン、ワックス、ポリアクリルアミド、ポ
リアクリル酸、ポリビニルアルコール、アルギン酸、セ
ルロース誘導体（例えばメチルセルロース、エチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース）、アラビアゴ
ム、澱粉等から選ぶことができる。壁の厚さは通常、0.
01ないし数μｍの範囲である。壁の有する電荷は特に制
限されず、正電荷、負電荷、無電荷いずれでもよい。

カプセル化の方法は、用いる壁材に応じて、公知の種々
の方法、すなわち界面重合法、インシチュ（in situ）
法、液中硬化法、コアセルベーション法、相分離法、液
中乾燥法、融解分散冷却法、気中けん濁法、噴霧乾燥
法、静電合体法等から適宜に選ぶ。

マイクロカプセルの平均粒子径は通常１ないし50μｍ程
度が適当であり、２ないし30μｍとするのが好ましい。
マイクロカプセルを含む光反射／遮蔽層には、疎水性ま
たは高分子アナライトの透過を妨げない程度の水溶性高
分子物質（例えばヒドロキシプロピルメチルセルロー
ス）を含むことができる。

本発明で用いるマイクロカプセルは、分析要素に面方向
からの少なくとも30kg/cm²の圧力に対して壁の破壊を生
じないことが好ましい。

展開層は試料液に対して液体計量作用を有する層である
ことが好ましい。液体計量作用とは、その表面に点着供
給された液体試料を、その中に含有している成分を実質
的に偏在させることなく、面方向に単位面積当りほぼ一
定量の割合で広げる作用である。展開層を構成する繊維
質多孔性材料としては、紙、不織布、織物生地（例え
ば平織生地）、編物生地（例えば、トリコット編）、ガ
ラス繊維紙等を用いることができる。これらのうち織
物、編物等が好ましい。織物等は特開昭57−66359号に
記載されたようなグロー放電処理をしてもよい。展開層
には、展開面積、展開速度等を調節するため、特開昭60
−222770号、特願昭61−122875号（特開昭63−219397
号）、特願昭61−122876号（特開昭63−112999号）、特
願昭61−143754号（特開昭62−182652号）に記載したよ
うな親水性高分子あるいは界面活性剤を含有してもよ
い。展開層はまた、特公昭53−21677号の記載のような
非繊維展開層でもよい。

［発明の効果］本発明の乾式分析要素は、全血中のグルコース、尿素、
尿酸等の低分子成分の定量は勿論、総蛋白、アルブミ
ン、各種酵素等の高分子成分、ビリルビン等の蛋白質と
結合した成分、コレステロール、グリセリド等の疎水性
成分の定量を迅速に高い感度で行うことができ、特に有
用である。

米国特許3,992,158号＝特公昭53−21677号、米国特許4,
042,335号＝特公昭58−18628号等で知られているような
酸化チタン、硫酸バリウム等の無機物粒子が直接に親水
性高分子を結合剤として分散された層で、高分子または
疎水性成分の透過が可能な程度に結合剤の占める割合を
低くした場合のような、層の脆さによる光反射／遮蔽層
のひび割れや粒子の脱落が生ずることがない。

本発明の乾式分析要素は多孔性層に抗原、抗体の少なく
とも一方を含有させて、免疫学的方法による抗原または
抗体の定量にも、用いることもできる。

［実施例１］１）マイクロカプセルの調製モノイソブチルジフェニルエタン12g、メタクリル酸エ
ステル／アクリル酸共重合体（分子量10万）8gを80℃で
溶解し、これに酸化チタン粉末（石原産業（株）PE65
6、平均粒子径0.2μｍ）15gを加え、電動乳鉢で８時間
分散した。この分散物に下記の混合物を加え、ガラス棒
でよく混合した。

メタクリル酸エステル／アクリル酸共重合体＊（分子量
約10万） 12 ｇ酢酸エチル 18.5g パラフィンオイル（平均炭素原子数12） 12 ｇ＊藤倉化成「アクリベースMM2002−２」次にこの中に、下記混合物を加え、ガラス棒でよく混合
し、これを液Ｉとした。

酢酸エチル 14g シリコーンオイル（信越化学（株）製KF96 1000） 4g 1,1,1−トリ（ｐ−イソシアナトメチルベンジルアミノ
カルボニルオキシメチル）プロパン 28g メチルセルロース４％水溶液180gにジエチレントリアミ
ン2.5％水溶液10gを加え、家庭用ミキサー中で攪拌しつ
つ、この中に前記液（Ｉ）を加え、分散した。分散に
は、松下電器産業（株）製クッキングミキサーMX915Cを
用い、電圧調整器で電圧を40Vとし、マヨネーズモード
（低速）で20秒攪拌後、電圧100V、粉ひきモード（高
速）で３分30秒分散させた。

さらにジエチレントリアミン５％水溶液64gを加え、60
℃で３時間反応させた。反応後、水洗し、乾燥して、マ
イクロカプセル（II）を得た。

２）分析要素の作製ゼラチン下塗りしてある厚さ180μｍのポリエチレンテ
レフタレート無色透明平滑フィルム上に、下記組成
（ａ）の液を乾燥後の塗布量がそれぞれ記載のようにな
るように塗布し、乾燥した（試薬層）。

（ａ）ゼラチン 1.2 g/m² ポリオレフィン粒子 41 g/m² （三井石油化学工業（株）、ケミパールM200、粒子径約
５μｍ、密度0.92）界面活性剤 0.22g/m² （ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）トリスヒドロキシメチルアミノメタン 0.32g/m² リン酸１カリウム 0.32g/m² α−ケトグルタール酸 0.1 g/m² Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム 0.5 g/m² オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ 2520 IU/m² FAD ６ mg/m² TPP 24 mg/m² ピルビン酸オキシダーゼ 7000 IU/m² ペルオキシダーゼ 1280 IU/m² 色素（下記構造） 0.36g/m² （希NaOH溶液でpHを7.5に調整して塗布した）色素：２−（3,5−dimethoxy−４−hydroxyphenyl）−４−phe
nethyl−５−（４−dimethylaminophenyl）imidazole （ｂ）前記マイクロカプセル（II） 39g/m² メチルセルロース 2g/m² （信越化学（株）製65SH50）次に、ポリエステル製のトリコット編物（厚さ0.25mm、
空隙体積約18μL/cm²）の面に100メッシュのスクリーン
を通してスクリーン印刷法により澱粉糊を付着させ、こ
れを上記マイクロカプセル層上にラミネートし、一体化
し、AST（アスパラギン酸アミノトランフェラーゼ）活
性測定用一体型多層分析要素を作製した。

［比較例１］前記組成（ｂ）の代わりに下記組成（ｃ）の液を用いた
他は、実施例１と同様にしてAST活性測定用一体型多層
分析要素を作製した。

（ｃ）脱イオンゼラチン 11 g/m² 界面活性剤 0.4g/m² （ポリオキシエチレンｎ＝40 ノニルフェニルエーテ
ル）酸化チタン（ルチル型） 18 g/m² （石原産業（株）R780）（希NaOH溶液でpHを7.5に調整した）［測定例１］本発明の実施例１および比較例１の分析要素に、第１表
に示すごとくAST活性値の異なる管理用血清（Dade社製M
oni−Trol Iに必要量のSIGMA社製ブタ由来ASTを添加し
た）各10μＬ点着し、分析要素を密閉容器中で37℃に保
って、４分後および６分後の反射濃度を波長640nmで測
定し、１分あたりの反射濃度変化を求め、AST標準分析
法によりあらかじめ作成しておいた検量線からAST活性
を算出した。結果を第１表に示す。

比較例１では発色濃度が低く、AST活性の測定値を得る
ことができなかったのに対し、本発明の実施例１では、
第１表に示されるようにAST活性をすぐれた正確度で測
定できた。

［実施例２］ゼラチン下塗りしてある厚さ180μｍのポリエチレンテ
レフタレート無色透明平滑フィルム上に、乾燥後の膜厚
が７μｍになるようにゼラチン水溶液を塗布、乾燥し
て、吸水層を形成した。

吸水層表面を約25℃の水でほぼ一様に濡らした後、最小
孔径３μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセルロース
アセテートメンブレンフィルター（富士写真フィルム
（株）製ミクロフィルターFM300）を重ね合わせ、乾燥
させて、吸水層にメンブレンフィルターを接着させた。

次にこのメンブレンフィルターの上から、下記組成物１
および組成物２を表示の割合で順次塗布し、乾燥して、
多孔質試薬層とした。

組成物1: ゼラチン 0.64g/m² 界面活性剤 2.5 g/m² （ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）トリスヒドロキシメチルアミノメタン 0.46g/m² リン酸１カリウム 0.46g/m² α−ケトグルタール酸 0.5 g/m² Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム 2.5 g/m² オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ 12600 IU/m² 塩化マグネシウム（無水） 0.3 g/m² FAD 28 mg/m² チアミンピロりん酸 118 mg/m² ピルビン酸オキシダーゼ 35,000 IU/m² ペルオキシダーゼ 6,400 IU/m² 溶媒：水（希NaOH溶液でpHを7.5に調整して塗布した）組成物2: ロイコ色素（下記構造） 1.8g/m² 界面活性剤 0.6g/m² （ポリオキシエチレン（ｎ＝40）ノニルフェニルエーテ
ル）溶媒：エタノールロイコ色素：２−（3,5−dimethoxy−４−hydroxyphenyl）−４−phe
nethyl−５−（４−dimethylaminophenyl）imidazole 次にこの上から実施例１のマイクロカプセル（II）とメ
チルセルロースの混合液を下記の割合で塗布し、メンブ
レンフィルターの上に光反射／遮蔽層を設けた。

前記マイクロカプセル（II） 20g/m² メチルセルロース 4g/m² （信越化学（株）製65SH50）次に富士写真フイルム（株）製ミクロフィルターFM300
（最小孔径3.0μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセル
ロースアセテートメンブレンフィルタ）の表面に、100
メッシュの網（面積率約20％）を通してスクリーン印刷
法で澱粉糊を固形成分3g/m²の割合で付着させたものを
ラミネートし、乾燥して血球ろ過層とした。

次に100S相当のPET紡績糸からなる厚さ約250μｍのトリ
コット編物生地を、第２非繊維多孔質層上に上記と同じ
網点接着法により接着し、一体化させ、AST活性測定用
分析要素とした。

［比較例２］実施例２で、マイクロカプセルを含む光反射／遮蔽層を
省略して、多孔質試薬層の上に直接血球ろ過層をラミネ
ートした他は、実施例２と同様に作製した。

［参考例］実施例２と比較例２の光反射／遮蔽層の光遮蔽効果を比
べるため、次の様な測定を行った。

分析要素の血球ろ過層以上を剥離して、光反射／遮蔽
層以下を残す。

残った分析要素に水を含ませる。

この状態で支持体側より反射測光する。この際背景に
黒板を置いた場合と白板を置いた場合の光学濃度（OD）
を測定する。

第２表に示した様に、比較例２ではその背景が白の場合
と黒の場合で0.25〜0.3の光学濃度の差を生じたが、実
施例２では0.01〜0.03となりその差が1/10以下に減少し
た。

次に実施例２の光反射／遮蔽層が高分子を通過させるか
どうか、次のような方法で確認した。

SIGMA社から購入したBLUE DEXTRAN（カタログNO.D−575
1、分子量約200万）10mgを水1mLに溶解し、これを実施
例２の分析要素に10μＬ点着した。10秒後に支持体側よ
り青い色が観察された。

［測定例２］血漿（ヘマトクリット値０％）およびヘマトクリット値
30％の新鮮全血（ヘパリン採血）に、ブタ由来のAST（S
IGMA社製）をAST活性が320および790unit/Lになるよう
に加え、合計４種類の血液を作成した。実施例２の分析
要素を1.5×1.5cm角に切断し、点着孔と測定孔を備えた
プラスチックマウントに挿入し、これに上記４種類の血
液をそれぞれ点着した。点着後37℃にて反応させ、640n
mの吸収を支持体側より2.5分後と４分後に反射測光し、
ODT（透過光学濃度）に換算した値（Clinical Chemistr
y,Vol.24,1335（1978）の原理による）を用いてAST活性
値を算出した。結果を第３表に示す。

第３表の結果から、本実施例の分析要素は全血でも、血
漿と代わらないAST活性値を示すことがわかる。

［実施例３］ゼラチン下塗りしてある厚さ180μｍのポリエチレンテ
レフタレート無色透明平滑フィルム上に、乾燥後の膜厚
が７μｍになるようにゼラチン水溶液を塗布、乾燥し
て、吸水層を形成した。

吸水層表面を約25℃の水でほぼ一様に濡らした後、最小
孔径1.2μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセルロース
アセテートメンブレンフィルター（富士写真フィルム
（株）製ミクロフィルターFM120）をラミネート（重ね
合わせ）し、乾燥させて、吸水層にメンブレンフィルタ
ーを一体化させた。

次ぎにこのメンブレンフィルターの上から、下記組成物
１および組成物２を表示の割合で順次塗布し、乾燥し
て、多孔質試薬層とした。

組成物1: ロイコ色素（下記構造） 1.36g/m² 界面活性剤 0.43g/m² （ポリオキシエチレン（ｎ＝40）ノニルフェニルエーテ
ル）溶媒：エタノールロイコ色素：２−（3,5−dimethoxy−４−hydroxyphenyl）−４−phe
nethyl−５−（４−dimethylaminophenyl）imidazole 組成物2: ゼラチン 2.13g/m² ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル；オキシエチレン単位10 2.13 g/m² オキシエチレン単位40 0.13 g/m² コレステロールエステラーゼ 8070 unit/m² コレステロールオキシダーゼ 88,500 unit/m² ペルオキシダーゼ 28,200 unit/m² 次にこの上から実施例１のマイクロカプセル（II）とメ
チルセルロースの混合液を下記の割合で塗布し、メンブ
レンフィルターの上に光反射／遮蔽層を設けた。

前記マイクロカプセル（II） 48 g/m² メチルセルロース 4.1 g/m² （信越化学（株）製65SH50）ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル 0.11g/m² （オキシエチレン単位40）次に富士写真フィルム（株）製ミクロフィルターFM300
（最小孔径3.0μｍ、厚さ140μｍ、空隙率約80％のセル
ロースアセテートメンブレンフィルタ）の表面に、100
メッシュの網（面積率約20％）を通してスクリーン印刷
法で澱粉糊を固形成分3g/m²の割合で付着させたものを
ラミネートし、乾燥して血球ろ過層とした。

次に100S相当のPET紡績糸からなる厚さ約250μｍのトリ
コット編物生地を、第２非繊維多孔質層上に上記と同じ
網点接着法により接着し、一体化させ、総コレステロー
ル乾式分析要素を完成した。

［測定例３］新鮮ヒト全血（ヘパリン採血管使用）から分離した血球
をDade社製管理用血清Moni−Trol Iに加えて、総コレス
テロール115mg/Lを含むヘマトクリット40％の人工血
（Ｉ）を、同じく（株）栄研化学製リピッドセーラムII
に加えて、総コレステロール351mgを含むヘマトクリッ
ト40％の人工血（II）を調製した。

人工血（Ｉ），（II）を各10μＬ点着し、分析要素を密
閉容器中で37℃に保って、４分後の反射濃度を波長640n
mで測定した。

第４表から明らかなように、実施例３の乾式分析要素は
総コレステロールをすぐれた正確度で測定できた。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１の多層分析要素の断面図、第２図は実
施例２の多層分析要素の断面図である。図面中の記号の意味は次のとおり。 10……支持体 20……試薬層（多孔質） 30……血球濾過層 40……光反射／遮蔽層 50……展開層 60……吸水層

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】水不浸透性透明支持体の上に、少なくとも
試薬層、光反射／遮蔽層、展開層がこの順に設けられ、
これらの３つの層がともに水浸透性であり、被検成分の
存在下に光学的に検出し得る物質を生成し得る試薬組成
物を、前記試薬層を包含する少なくとも１つの水浸透性
層に含む多層の乾式液体分析要素であって、前記試薬層と展開層とは多孔質であって高分子または疎
水性成分の透過が容易であり、前記光反射／遮蔽層は光反射性粒子又は光吸収性粒子を
有機液体中に分散させてなる芯体と、硬化した高分子か
らなる壁とを有するマイクロカプセルと親水性ポリマー
バインダーから構成されており、高分子又は疎水性成分
が透過し得ることを特徴とする乾式液体分析要素。
【請求項２】前記マイクロカプセルが硬化した親水性高
分子からなる壁を有する特許請求の範囲第１項に記載の
乾式液体分析要素。