JPH06510028A - ランチオニン架橋ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ランチオニン架橋ペプチド 医療または産業に利用するための分子を設計することがペプチド化学の基本目標 である。設計とは、様々な点で天然ペプチドに比べ長所を有する分子を得るため に生物学的活性を有する天然ペプチドを修飾することを意味する。ホルモンとし て、神経毒としであるいは植物調節剤として働くいくつかのペプチド群が存在す る。これらのペプチドは通常、ジスルフィド架橋を所望により有してもよい小さ な可撓性分子である。

モノスルフィド架橋を含んで成るペプチドを提供することが本発明の一つの目的 である。このチオエーテル結合は、ランチオニン架橋としても表記され、またジ スルフィド架橋がモノスルフィド連結により置き換えられているほがはシスチン 架橋に符号する。一般式 を有する二つのアミノ酸残基は合体してランチオニン架橋を形成するように表記 され、ここでそれら二つのアミノ酸の連結は−ＲＣＨ−３−ｎｃＲ’−（式中Ｒ およびＲ′はそれぞれ−１１、低級（ｃＩＮｃｌ。）アルキルまたはアルアルキ ル基を表わす）を意味する。好ましい一態様においては、ＲおよびＲ′はＨであ る。ランチオニン構造のアミノ酸末端は、ＲおよびＲ′がＨである場合には＾／ ａＬと、またＲまたはＲ′がＣ１１３である場合にはＴｈｒｔと表記される。そ の他のβ−置置換ランチエニン成分置換＾ｌａＬ誘導体、例えばβ−エチル＾／ ａ、、、と表記されランチオニン型のチオエーテル結合は一部の菌類毒素および 抗生物質に、例えばニシン（ｎｆｓｉｎ）　、エビダーミン（ｅｐｉｄｅｒｍｉ ｎ）　、ドゥナマイシン（ｄｕｎａｍｙｃｉｎ）　、またはマーサシジン（ｍｅ ｒｓａｃｉｄｉｎ）などのランチバイオティックス（１ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ）に知られている。モノスルフィド架橋を有する天然化合物は常に分子中に２個 より多いモノスルフィド架橋を有している。

１１、Ｆ、Ｂｅａｎらは、ｔｈｅ　Ｐｒｏｃｅｅｄｊｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ １ｔｈ　ＡｍｅｒｉｃａｎＰｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ、　ＥＳＣＯＭ 、　（Ｌｅｉｄｅｎ　１９９０．　ｐ、　４４３）に公表された”Ｉｄｅｎｔｉ ｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｔｈ１ｏｅｔｈｅｒ　Ｂｙ−ｐｒｏｄｕｃｔ　ｉ ｎ　ｔｈｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆ　ａ　Ｃｙｃｌｉｃ　Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ 　Ｐｅｐｔｉｄｅ　ｂｙ　Ｔａｎｄｅｍ　Ｍａｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ″、と題する論文において、内部ジスルフィド結合がチオエーテル結合に転化さ れたソマトスタチン類似体について報告している。

Ｐｈｅ−＾／ａ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−＾１ａ−Ｔｈｒ　（オール ）（ここで二つのへｌａ＋残基はチオエーテル架橋を介して連結されている）な る推定アミノ酸配列を有するソマトスタチン類似体がサンドスタチン類似体のＢ ｏｃ−ＴＦＡ−調製により得られた副生成物として記述されている。もともと存 在しているソマトスタチン誘導体はジスルフィド架橋を有している。

本発明の一つの目的は、分子中に少くとも一つのモノスルフィド架橋を有し、ま た改善された生物学的活性を示すペプチド化合物の類似体を提供することにある 。

本発明によるペプチド化合物の類似体は例えば次のような化合物の類似体より成 る　ＡＣＴｌｌ−類似体、アンジオテンシン類、マガイニン（ｍａｇａｉｎｉｎ ｅ）　、ボムベシン（ｂｏｍｂｅｓｉｎｅ）　、ブラジキニン、フィブロネクチ ンの断片、ＣＣＫ　、ヒルジンの断片、ＬＨＲ■−類似体、ニューロペプチド、 ニューロキニン、ニューロテンシン、サブスタンスＰ１ウイルス関連のペプチド 、例えばＩＩＩＶのペプチド、チモシン、チモボエイチン（ｔｈｙｍｏｐｏｅｉ 　ｔｉｎ）の断片、オンコジーンの断片、心房性ナトリウム利尿因子、上皮成長 因子、形質転換成長因子およびその断片、コノトキシン（ｃｏｎｏｔｏｘｉｎｅ ）および関連の神経毒、肥満細胞脱顆粒性ペプチド（ＭＣＤ）　、ウロテンシン （ｕｒｏｔｅｎｓｉｎｅ）■、ＨＩＶ　ｇｐ４１抗原性ペプチド１またはペプチ ド４またはチロシジンへ〇本発明の好ましい一態様においてペプチドは二個を超 えないモノスルフィド橋を有し、また特に好ましい一態様において、ペプチドは 一個のモノスルフィド架橋だけを有する。

本発明の化合物は、対応する天然ペプチドよりも高い生物学的活性を有している 。

本発明によれば一般式 〔式中、Ｒ８は天然アミノ酸およびそれらのＤ一対車体より成る群より選択され る２〜ｌＯ個のアミノ酸の短配列であり、またＲ３およびＲ８は各々Ｌ−または Ｄ一対掌体としての天然アミノ酸または２５個以下、好ましくは３個以下、の短 配列であり（ここで、Ｒ，残基のＮ−末端−ＩＩＩＦ＋、基が一〇〇、　−Ｈま たは−Ｎ）ｌｃＯＩ？＃　（式中Ｒ６はアルキル−またはアルアルキル残基であ る）で置き換えられていてもよく、あるいはＲ３アミノ酸残基のＣ−末端−ＣＯ Ｏ１１が−ＣＯＮＨ，または−ｃｏ、ｏｎで置き換えられていてもよい）、ある いはＲ２は−Ｈ１各々１〜１８個の炭素原子を有するアシルまたはアルアシルを 表わしてもよく、またＲ８は−０１１または−Ｎ１（、であってもよく、そして −Ｃｏ−Ｒ３はＣ１１２０Ｈで置き換えられていてもよいが、ただしＲ２がＰｈ ｅでＲ５がＴｈｒ　（オール）である場合はＲ１はＰｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔ ｈｒではな（、また以上においてＲ，、Ｒ，またはＲ３はペプチド擬似体例え（ ｊレトロ−インベルソー（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ−）　、カルバ−（ｃａ ｒｂａ−）　、アザ−、チオペプチドまたはペプチド環などより成っていてもよ （、またＲ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲｓは水素であるかまたは１〜１０個の炭素原 子を有する所望により置換されたアルキルである〕 で示されるランチオニソー架橋ペプチドが開示される。

本発明の好ましい一態様においては、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７およびＲ６は水素または メチル基を表わし、その場合Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７およびＲｓの各々がメチル基であ ってよい。

前記アミノ酸はＬ一対常体およびＤ一対掌体を含む天然アミノ酸より成る群より 選択され得る。天然アミノ酸群はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパ ラギン酸、システィン、シスチン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒス チジン、ヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、 フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン 、バリン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、ベタイン、カルニチン、シトルリン 、クレアチン、オルニチン、サツカロビン、３．４−ジヒドロキシフェニルアラ ニン、５−ヒドロキシトリプトファン、チロキシン、ホモンステイン、Ｓ−メチ ルメチオニン、ペニシラミン、ピペコリン酸およびナリジクス酸より成る。

ラジカルに０、Ｒ２またはＲ３はペプチド擬似体例えばレトロ−インベルソー、 カルバ−、アザ−、チオペプチドまたはペプチド環より成っていてもよい。

正規のペプチドは次式 ％式％ を有するものと理解されるのに対し、レトロ−インベルソー構造は次式 ％式％ 本発明の好ましい一態様においては、式（Ｉ）で示される本発明のペプチドは、 残基Ｒ１を表わす２〜７個、より好ましくは２〜４個の、アミノ酸の短配列を有 する。

好ましくは、残基Ｒ２およびＲ３のアミノ酸は、Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−β−Ｎａｌ 、Ｔｙｒ、　ＴｒｐＮＨ２、ＴｈｒＮＨ２、Ｔｈｒ　（オール）より成るアミノ 酸群より選択される。あるいはまた、置換性Ｒ２は、Ｈ１１〜１８、好ましくは ２〜１２個の炭素原子を有するアシルまたはアルアシルであってよく、そしてＲ ３は一０■または−Ｎｌ＋、の意味を有することができ、そして−ＣＯ−Ｒ３は ＣＦｌ、ＯＨで置き換えられていてもよい。さらに、Ｒ６およびＲ３は各々Ｐｒ ｏ−＾ｒｇ−ＧｌｙまたはＰｒｏ−Ｌｅｕ−Ｃ＋ｌｙの類アミノ酸配列であって よい。

本発明の好ましい態様においては、Ｒ５はＧｌｙ−Ｐｈｅ：　Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒ ｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ；　Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＶａＡ’；　Ｔｙｒ−Ｐ ｈｅ−Ｇｆｎ−＾５ｎＳＴｙｒ−Ｌｉｅ−Ｇ１！ｎ−＾ｓｎ。

Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ、　Ｇｌｙ−＾５ｎ−１−ｅｕ−３ｅｒ− Ｔｈｒ１Ｓｅｒ−＾５ｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−ＴｈｒまたはＧｌｕ−Ｌｙｓ−＾ｓ ｐ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−３ｅｒより成る群より選択される類アミノ酸配列 により代表される。

本発明の特に好ましいペプチドには式 （式中Ｒ３はＯＲまたはＮＨ２である）を有するランチオニシーエンケファリン 類、（式中、Ｘｘｘ＝Ｄ−Ｐｈｅ、　Ｄ−β−Ｎａｌ；　Ｙｙｙ＝Ｔｈｒ、Ｖａ ｎ；　Ｚｚｚ＝ＴｒｐＮｌ１２、ＴｈｒＮ＋１２またはＴｈｒ　（オール）であ るがただし、ＺｚｚがＴｈｒ（オール）であってＹＶＶがＴｈｒである場合には ＸｘｘはＰｈｅではない）を有するランチオニシーソマトスタチン類が包含され る。

式 （式中＾ａａ＝ＰｈｅおよびＢｂｂ−＾ｒｇ）を有するランチオニソーバソプレ ッシン、または、式（式中＾ａａ＝ＩｌｅおよびＢｂｂ＝Ｌｅｕ）を有するラン チオニソーオキシトンン。

本発明の更なる好ましいペプチドは、式（Ｖｌ）または式（■） 更なる好ましいペプチドは一般式（■）（式中、Ｒ２はＨ，アシルまたはアルア シルであり、Ｒ３はヒト、サケまたはウナギ−カルシトニンの８−３２断片であ り、そしてＧｇｇはＧｌｙまたはＳｅｒである） を有する。

本発明のもう一つの好ましい態様においては、その天然ジスルフィド架橋の１個 または２個がチオエーテル結合で置き換えられているエントチリンのアミノ酸配 列を有する（概略構造Ａについては下記参照）。従ってそれら化合物は概略構造 ＢＳＣおよびＤに記載されているように示すことができる。

概略構造 前述の本発明の好ましいペプチドは、該ペプチドが２個のチオエーテル結合を有 する場合、前述のような連続的に重複する（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ　ｏｖｅ ｒｌａｐｐｉｎｇ）チオエーテル結合を有することになる。このことは、アミノ 酸配列において、１個のランチオニソー架橋が第２のランチオニソー架橋を形成 する２個の＾ｌａｔ残基間に位置していることを意味する。

本発明のペプチドは薬学的に活性の化合物として用いることができる。従ってそ れらは少（とも一種の本発明ペプチドより成る薬学的組成物に用いることができ る。

生物学的に活性のペプチドの性質に応じて、それらは注射溶液、カプセル、錠剤 、軟膏、クリーム、スプレーおよび半割として用いることができる。

本発明のペプチドの代表例の一つはエンケファリンについて記述される次の手順 に従って製造することができる。

直線状ペプチド鎖は対称無水物ペプチドカプリング法によりｔｅｒｔ−ブトキシ カルボニル化学を用いてメチルベンズヒドリルアミン樹脂で組立てた。好ましく はセリン残基を２位に取り込み、その後にジスクシンイミドカーポネートを用い てデヒドロアラニンに転化した。そのＳ−保護基（フルオレニルメチル）はピペ リジンにより選択的に除去した。

わずかに塩基性の環境、好ましくは５％ピペリジン／ジメチルホルムアミド、が ＳＨ−基の二重結合へのミカエル付加を促進した。アミノ酸分析はセリンの４８ ％転化を示した。より大過剰のジスクシンイミドカーボネート試薬を用いればこ れら２工程の収率は増加したであろう。“低−高ＨＦ切断（ｌｏｗ−ｈｉｇｈ　 ｔｌＦ　ｃｌｅａｖａｇｅ）　”を用いて樹脂からペプチドを切断し、そして保 護基を除去した。生成粗製物の精製は、濃度勾配アセトニトリル−水溶出を用い た分取ＲＰ−１１ＰＬｃにより達成された。得られた物質を更に５ｅｐｈａｄｅ ｘ　Ｇ−１５カラム（２０％酢酸／水）でのゲル濾過により精製、脱塩した。

生成物はアミノ酸分析および質量分析により同定した。ミカエル付加は立体選択 的ではないが、この反応の結果、（２Ｄ、５Ｌ）ジアステレオマーだけが得られ た。予想された他方のジアステレオマー　（２Ｌ、５Ｌ）は反応混合物中に検出 し得なかった。ｓｕ基近傍の固体支持体からの立体障害が付加反応の立体選択性 の原因となっている可能性がある。固相合成アプローチはランチオニオン−架橋 シクロペプチドの速やかな組立てを可能にする。図１は本発明の方法を概略的に 示しでいる。以下の実施例は本発明を例説するものである。

ペプチド合成セクションに用いた略号 アミノ酸および保護基の標準的略号にｔｈｅ　ＩＩＪＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｊｏｉｎ ｔＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔ ｕｒｅ：　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｔ　１９７１゜２４７、　９７７に従ってなら った。使用略号＝へＣ１，アミドカルボキシメチル；　Ｂｏｃ、　ｔｅｒ−ブト キシカルボニル；　Ｂｚｌ、ベンジル、　ＤＣＣ，Ｎ、　Ｎ’−ジシクロへキシ ルカルボジイミド、　ＤＣ）ｌ、ジクロロメタン；　Ｄｈａ。

デヒドロアラニン、　ＤＭＦ、ジメチルホルムアミド、　ＤＩＥ＾、Ｎ、Ｎ−ジ イソプロピルエチルアミン、　ＤＳＣ，ジスクシンイミドカーボネート；ＥｔＯ Ａｃ、酢酸エチル；Ｆａ１フルオレニルメチル；　Ｆｍｏｃｓフルオレニルメチ ルオキシカルボニル、ｌｌ０Ｂｔ、　１−ヒドロキシベンズトリアゾール：＾ｌ ａｔ、ランチオニン、Ｍｅｌｔ＾、メチルベンズヒドリルアミン樹脂；　Ｐａｃ 、フェニルアシル、ＴＦ＾、トリフルオロ酢酸；　Ｔｍ５ｅ、トリメチルシリル エチル；Ｚ１ベンジルオキシカルボニル；ＮＣ＾、Ｎ−カルボキシアンヒドリド ；Ｔｒｔ、）リチル。

実験手順 すべてのアミノ酸は表示されている場合を除きＬ−配置のものであった。保護さ れたアミノ酸はＢａｃｈｅｍ、　Ｉｎｃ、社から購入した。４０８級溶媒（ＤＣ ＭＳＤｉｌＦ、アセトニトリル）はＦｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購 入し、窒素でパージし次いでＳｉｇｍａ社の分子ふるい上で貯蔵した。

ＤＩＥ＾（Ａｌｄｒｉｃｈ社）はＫＯＪＩ上で乾燥し、そしてニンヒドリンから 蒸留させた。ＭＢＨＡ樹脂・ＨＣＩ　（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）をＤＣＭ中で 膨潤させ、５％［）ＩＥ＾／ＤＣＭで洗浄した後、使用前にＤＣＩＩ洗浄した。

ＴＦＡ　、ピペリジン、ＤＳＣ（Ａｌｄｒｉｃｈ社）およびＤＣＣ（Ｆｌｕｋａ 社）はそれ以上精製することなく用いた。フラッシュクロマトグラフィー用シリ カゲルはＢａｋｅｒ社から購入した。

ペプチドはプレコートされたシリカゲル６０Ｆ−２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ社 ）において、（Ａ）クロロホルム：メタノール：酢酸、６５　：　３５　：１； （Ｂ）ブタノール・酢酸：水、４：１・５（上相）を用いて分析した。Ｕｖ１ニ ンヒドリン、塩素１０−トルイジンおよびＫ１１ｎＯａ溶液により可視化した。

ＲＰ−１１ＰＬｃ分析は、Ｃ−１８分析用カラムを用いた。

Ｗａｔｅｒｓ　（モデル５１０およびＷａｔｅｒｓ　４８４検出器）装置テ行ツ タ。

しかしながら、ペプチド製造にはもう一つの合成方法がある。ジアステレオマー ペプチド類似体を得ることがしばしば望ましい。ランチオニオン位のジアステレ オマー混合物の′使用によりクロマトグラフィー（）ＩＰＬＣ）により分離可能 な適切なジアステレオマー類似体を得ることができる。このような径路により２ 種（または４種）類の類似体を単一の合成法により調製することができる。ベン ジルオキシカルボニル、ｔ−プチルオキシ力ルポニルおよびフェナシル（または メチル、トリメチルシリルエチルなど）基の同時適用が口８１ Ｚ−八ＩＢ、（Ｂｏｃ−＾／ａじ０Ｐａｃ）−０Ｈを調製するための本発明の合 成手法を規定する。ＰＣＯＲ（オキシム樹脂におけるペプチド環化；　Ｐｅｐｔ ｉｄｅ規定されたランチオニン架橋を含有する新しい環状セグメントを得ること ができ（スキーム２）、その場合鎖を両端で延長することができる。ランチオニ ン架橋を伴わない方法は０ｓａｐａｙらによりＪ、＾町Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、１ ９９０．１１２．　Ｉ）、　６０４６−６０５１およびＴｅｔ、　Ｌｅｔｔ、　 １９９０．３１゜ｐ、６１２１−６１２４に詳述されている。最後の脱保護工程 に続いてクロマトグラフィー精製することにより所望の化合物が得られる。

畷 Ｂｏｃ−＾ｌａｔ−ＯＴｍｓｅ スキーム１．デヒドロアラニンからの保護されたランチオニンの合成りｃｘニー Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−〇−Ｎ＜−樹脂１）　ＢＯＰカプリングによる鎖延長↓２） 　ＴＦ＾／ＤＣＭ；　３）　ＤＩＥ＾スキーム２．オキシム樹脂における環化を 利用したランチオニソーサンドスクチンの合成 もう一つの極めて見込みある径路は、２つの保護された中間体を合成した後それ ら２成分をカプリングして光学的に純粋なランチオニン生成させることより成る 。これは保護されたセリンβ−ラクトン（＾ｒｎｏｌｄ　ｅｔ　ａｌ、　Ｊ、　 Ａｔ　Ｃｈｅｗ、　Ｓａｃ、　１９８８．１１０．　ｐ、　２２３７〜２２４１ ）および保護されたシスティンの合成により進行される。後者の化合物はメチレ ン基の部位でラクトン環を開環する際に核物質として働く（スキーム３）。

Ｂｏｃ−ＡｌａＬ−ＯＰａｃ スキーム３．セリン−ラクトンからの保護されたランチオニンの合成反応が立体 配置を保持しつつ進行する、保護されたランチオニンの合成のためのもう一つの 径路が開示されている。このランチオニン誘導体は核物質、すなわちシスティン または任意適切なＳＲ−含有アミノ酸によりアジリジン誘導体を開環することに より調製される（ｆａｋａｍｉｙａ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｕｌｌ、　ＣｈｅＩＩ ｌ、　Ｓｏｃ、　Ｊｐｎ、、　１９８２．５５．３８７８〜３８８１）　（スキ ーム４）。

イールに実質的相違をもたらすと予測される改変が得られる。そのＴｒｔ−Ｎ　 −ＣＩｌ−ＣＯＯＰａｃ ＣＨ２ Ｚ−ＣＩ　Ｚ−Ｎ−ＣＩｌ−ＣＯＯＰａｃ　Ｂｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＭｃ　Ｚ−＾１ ａＬ−ＯＰａＣようにして類似体の″生物活性配座”についての臨界情報を得る こと然アミノ酸で修飾することができる。このオピオイド群は、新規で臨床的に 有用なオピオイド薬を得るのに極めて有望である。

ランチオニシーソマトスタチン類 新しいランチオニソーソマトスタチン誘導体を合成することができる。まず、ソ マトスタチンまたは”キー−へキサペプチド”　（スキーム２）またはカイザー （ｋａｉｓｅｒ）−オキシム樹脂上のＲ８の定義に従うその他のソマトスタチン 類似体のモノスルフィド架橋を有する環状セグメントを製造しなければならない 。それを両末端のところで延長すれば（Ｎ−末端のＤ−ＰｈｅおよびＣ−末端の トレオニノール）、例えばサンドスタチンのランチオニン類似体が得られる。同 じ合成手法を天然ソマトスタチンテトラデカペプチドのランチオニン類似体の製 造に用いることができる。いずれの目的分子の効力および受容体選択性も有望で ある。

ランチオニソーサンドスタチン ランチオニンーソマトスタチン ランチオニシーカルシトニン類 Ｎ−末端ループ中のシスティン−シスナインジスルフィド架橋の代りにランチオ ニンを取り込むことができる。このループはＰＣＯＲ法により製造することがで きる（スキーム５）。

ヒトおよびラットカルシトニン：＾ａａ＝Ｇｌｙサケおよびウナギカルシトニン ：　Ａａａ＝Ｓｅｒランチオニンー力ルシトソーのループ Ｂｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−〇−Ｎ＝Ｃ−樹脂１）　ＢＯＰカプリングによる鎖 延長↓２）　ＴＦ＾／ＤＣＭ；　３）　ＤＩＥ＾ヒトおよびラットカルシトニン ：＾ａａ＝Ｇｌｙサケおよびウナギカルシトニン：＾ａａ＝ｓｅｔスキーム５． オキシム樹脂における環化を利用したランチオニシーカルシトニン類のループの 合成 最終カルントニソー類似体を得るためのＣ−末端における延長は通常の古典的断 片縮合により、あるいは後述のランチオニソーオキシトシンおよび−バソプレッ シン合成のバラグラフに示された手法により行うことができる（スキーム６）。

ランチオニシーオキシトシン類およびランチオニソーバソプレッシン類 天然オキ７トシン（ＯＴ）およびバソプレッシン（ＶＰ）中に認められる既存の ジスルフィド架橋を置き換えるランチオニン架橋の取込みがもう一つの例である 。これはそのペプチド配列への取込みに先立ちランチオニン成分を合成すること により行うことができ（スキーム６）。

■　オキシトンン・＾ａａ＝Ｔｌｅ　：　Ｂｂｂ＝Ｌｅｕ■　リジン−バソプレ ッシン：＾ａａ＝Ｐｈｅ　；　Ｂｂｂ＝Ｌｙｓ（２Ｃ１−Ｚ）■　アルギニンー バソプレッシン：＾ａａ＝Ｐｈｅ　；　Ｂｂｂ＝＾ｒｇ（ＮＯ２）スキーム６、 ランチオニソーオキシトシン類／ランチオニソーバｌプレッノン類の合成 実施例１： ａ）　Ｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚ／）−３ｅｒ−Ｇ／ｙ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｆｓ）−１１ Ｂ■＾（１）の製造メチルベンズヒドリルアミン樹脂（３ｇ）をＤＣＭ（３０Ｍ ｌ）中のＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｆｍ）Ｏｆ＋　（１，０９，２，５＋ｓｍｏＬ）およ びＩ）ＣＣ（０，５２９，２，５ｍｍｏｌ）と、５ＰＰＳ容器中、室温で３時間 反応させた。残っているアミノ基はアセチル化によりキャップした。得られたＢ ｏｃ−Ｃｙｓ（Ｆｍ）−ＭＢＨ＾樹脂（ピクリン酸滴定に基づく置換レベル０． ３６−−０１／９）を次に３０％ＴＦ＾／　ＤＣＩｉ（ｖ　／　ｖ　）で脱保護 し、そして１％ＤＩＥ＾／ＤＣＩＩ　（ｖ　／　ｖ　）溶液で中和した。次いで ＢｏｃＰｈｅＯＨ１ＢｏｃＧ／ｙＯ［ｌ５ＢｏｃＳｅｒＯＨおよびＺＴｙｒ（Ｂ ｚ／）Ｏｌｌの対称無水物（２，５当量）の順次添加および脱保護工程によりペ プチド鎖を組立てた。カプリングの完全さはカイザー試験により監視した。ＺＴ ｙｒ（Ｂｚ／）ＯＨのカプリングを１モル当量試薬を用いて繰り返した。Ｇｌｙ に基づくペプチド収率、１．０６ｍｍｏｌ（８４％）。アミノ酸分析：ＣｙＳｍ Ｇｌ’ｈ　、ｏｏＰｈｅｏ、５ｅＳｅｒ＋　４ｔＴＹｒ＋　、ｔｚ前記５ＰＰＳ 容器中の保護されたペプチジルＩＩＢＩＩ＾樹脂（１，１，０６ｍ■０１）を膨 潤させた後ＤＣＭ　（２０ｍｌ）に懸濁した。アセトニトリル（ｆｌｂ／）中の ＤＳＣ（３８７ｕ、１．５１ｍｍｏｌ）の溶液を反応混合物に添加し、次イテ５ ％ＤＩＥ＾／ＤＣＩＩ溶液（５，２２ｓ＋Ａ’、　１．５ｍｍｏｌ　ＤＩＥＡ） を添加した。窒素雰囲気中、室温で振盪しながら反応を４時間進行させた。反応 混合物をドレイン（ｄｒａｉｎ）　Ｌ、そして固相をＤＣＭ洗浄（４回）した。

生成物（２）を２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液（２０＊Ｃｖ／ｖ、２×５０分） で処理し、そして５％ピペリジン／ＤＭＦ−ＤＣＭ溶液（４０ｍ／、　１　／　 １、ｖ　／　ｖ　）中で一夜振盪した。その溶液相を除き、そして樹脂をＤＭＦ （１回）　、ＤＣＭ　（２回）モしてＥｔＯＨ（２回）で洗浄しそして乾燥した 。収量３．７ｇ。

前記ペプチジル樹脂（３，１，Ｏｑ　）をテフロンＨＦ装置中、アニソール（１ ｍｌ）の存在下に０℃で１時間無水１１Ｆ　（２０ｍｌ）で処理した。

揮発性成分を除去した後、残留物質をＥｔＯＡｃ　（２Ｘ２ｈｌ）で洗浄しそし て生成物を酢酸、次いで１０％酢酸／水溶液で抽出した。合一抽出液を凍結乾燥 した（収量２００ｍｇ）。この物質を、アセトニトリル／水中の０．１％ＴＦＡ で溶出されるＶｙｄａｃ　Ｃ−１８カラム（１，０Ｘ２５ｃ＋＋）　テ（７）分 取ＲＰ−４ＰＬＣにより精製した。１２分間に及ぶ１５％から２２％のアセトニ トリル直線勾配および１０ｍ１／分の流速を用いた。適切な画分を凍結乾燥して 固体生成物（収量８７す）を得た。最後に、３ｈ９の生成物をゲル浸透クロマト グラフィー（２０％酢酸で溶出される１、　５ｘ　１００ｃ諺５ｅｐｈａｄｅｘ 　Ｇ−１５）にかけた。ペプチド画分をプールしそして凍結乾燥シタ。収Ｊ１１ ６＋＋ｇ（化合物１に対する計算値２４％）　。Ｒ，（Ａ）０．４４　：Ｒ，Ｃ Ｂ）０．４９゜ＦＡＢ−１１ｓ　ｍ／　ｅ　＝５５７（Ｍ＋　１　）　。アミノ 酸分析Ｇｌ）’＋、ｏａＡｌａｔ−３−＾１ａｔ１．＋Ｐｈｅｏ　ｅｅＴＹｒｏ 　ｏｓ実施例２： 図２は溶液中のランチオニソーエンヶファリン合成を概略的に示したものである 。混合無水物、カルボジイミド、活性エステルおよびその他のカプリング手順を 用いてその他の一般的化学合成法に従うことができる。好ましい溶媒はＣＩ＋２ （Ｊ’ｚおよびＤＭＦである。切断は標準的な選択的反応に従って行われる。精 製は周知の抽出、沈殿およびクロマトグラフィー法に従って行われる。

実施例３： 前記ランチオニソーエンケファリンは、以下の工程を用いることにより、好まし いＦ！ｌ０Ｃ−ＮＣＡ−手法によっても合成された。

（１）脱保護（２０％ピペリジ：／／ＤＭＦ）　７分　３０ｍ１／分（２）洗浄 （ＤＭＦ）　５分　３０ｓｌ／分（３）カブリンク（下記参照）　２０分　３０ ＋＋／／分（４）洗浄（ＤＩＩＦ）　５　分３ｏＩＩｌｌ　分（５）工程１〜４ の反復 カプリングは次のようにして行った： ＃１：３当量、２０分：＃２：１当量＋ＤＩＥ＾　２ｏ分（ａ）　Ｆｍｏｃ−Ｐ ｈｅ−ＮＣＡ、 （ｂ）　Ｆｍｏｃ−Ｇ／ｙ−ＮＣＡ。

（ｃ）　Ｆｍｏｃ−３ｅｒ−ＯＨ／ＤＣＣ。

（ｄ）　Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−ＮＣＡ。

ＦＩｏｃ−手法によるペプチド鎖延長の場合には、システィンの−ＳＲ基を↑ｒ ｔ基でブロックした。

実施例４： ランチオコン−架橋環状ペプチド断片の製造の以下の製造により実証するニ ーＰｈｅ＝０−オキシム樹脂（樹脂上ペプチド、１．０９．１８７μｍｏｌ）を 固相ペプチド合成容器中、ＤＣＭ（１０＋＋１）中で膨潤させた。その反応容器 を３０分間振盪しなからＢｏｃ基を２５％ＴＦ＾／ＤＣＩＩで除去した。次にペ ブチ）ル樹脂カラ液体分を除き、ＤＣＭ（２回）　、ｉ　−ＰｒＯＨ（１回）　 、ＤＣ）１（２回）　、１−Ｐｒ０Ｈ（１回）およびＤＣＭ（２回）で洗浄した （１０ｖＩ／回）。そのペプチジル樹脂をＤＣＭ中５％ＤＩＲ＾で処理しく２ｘ １分）、次いでＯＣＭで洗浄する（２回）ことによりアミノ基を中和した。次に 、ＤＣＩＩｌｏＭＦ　（１：　Ｌ　ｖ／ｖ、　ＩＯ＋＋／）中でペプチジル樹脂 を１０当量のＡｃ０１１の存在下に室温で７２時間振盪することにより環化反応 を行った。

環状ペプチド生成物は、ドレインした後樹脂をＤＭＦで洗浄する（３回）ことに より反応容器から集めた。これらの溶液を合一しそして小量となるまで蒸発させ 、次に水、０．ＩＮ　ｌｌＣｌ、　５％Ｎａ１ｌＣＯｓおよびブラインで洗浄し た。次に溶媒を蒸発させ、そして粗製生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグ ラフィー（’；ｌ　Ｘ　’ｌＱｃｍ、酢酸エチル−ヘキサンｌ／１）により精製 した。適切な両分をプールしそして溶媒を蒸発させた。精製固化生成物をメタノ ール／エーテルから再結晶させた。収率４０．５１９　（３６，７％）　；　ｍ ｐ　２４１〜２４４℃（分解）　；　Ｒｒ　（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝　２／　 １　）　０．４２　；　ＦＡＢ−ＩＩｓ　ｍ／　ｅ　＝５９０　（ｉｌｌ’）　 ；　理論ｔｌ１通常の固相合成法により合成されたＺ−Ｄ−＾１ａｔ（Ｂｏｃ− Ｄ−＾１ａｔ−ＯＰａｃ）−一一８」 Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）−Ｌｙｓ（２Ｃ１−Ｚ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−０ −オキシム樹脂（樹脂上のペプチド１００ｍ、６．０μ１ｌＩｏｌ）を固相ペプ チド合成容器において、ＤＣＭ（１，０ｍ１）中で膨潤させた。反応容器を３０ 分間振盪しなからＢｏｃ基を２５％ＴＦ＾／ＤＣＭで除去した。次にペプチジル 樹脂をドレインし、そしてＤＣｉｌ（２回）、ｒ　−Ｐｒ０１１　（１回）　、 ＤＣＩＩ（２回）、ｉ　−ＰｒＯＨ（１回）およびＤＣＭ（２回）で洗浄した（ １．０ｍ／／回）。そのペプチジル樹脂をＤＣＭ中２，５％ＤＩＥ＾で処理しく ２ｘ１分）、次いでＤＣ謔で洗浄する（２回）ことによりアミノ基を中和した。

次にＤＣＭ／ＤＭＦ　（１：　１、Ｖ／Ｖ、　１．Ｑ＋＋１り中でペプチジル樹 脂をＩＯ当量の＾ｃＯＨの存在下に室温で７２時間振盪することにより環化反応 を行った。環状ペプチド生成物は、ドレイン操作、次いで樹脂のＤＩＩＦ洗浄（ ３回）により反応容器から集めた。これらの溶液を合一しそして蒸発させ、また 粗製生成物をアセトニトリル水中０．１％ＴＦＡを用いたＶｙｄａｃ　Ｃ−１８ カラム（１，０×２５ｃ■）でのＲＰ−ＨＰＩ、Ｃにより精製した。１５分間に 及ぶ５０〜８０％アセトニトリル直線勾配および４　ｍ１７分の流速を用いた。

生成物は６Ｈ％アセトニトリルで溶出し、そして凍結乾燥して固体生成物を得た 。

収率０．　ｈｅ　（２４％）　；　Ｒｒ　（ＣＨＣＡ’ｓ／）ｌｅＯＬ／Ａｃ０ Ｒ＝１８／１．５／　１　）　０．５４；　ＦＡＢ−ＭＳ　ｍ／　ｅ　＝１．２ ９３　（ＭＨ４）　；理論値１．２９３実施例５ニ ジスルフィド架橋を有する化合物と比較した場合にチオエーテル結合を有する化 合物の生物学的活性が優れていることを示す比較例摘出臓器調製物を用いたバイ オアッセイ全てのこれらのアッセイは文献に十分記載された櫟準的手順を示して いる。

（１）　Ｐａｔｏｎにより最初に開発された手順の変形バージョンに従ってＧＰ Ｉ　（モルモット回腸）アッセイを行った。雄モルモット（３００〜４５０ｇ） を頭蓋への打撃により層殺し、そして瀉血した。回置接部から１０ｃ＋＋以上離 れた２〜３ｃｍの回腸切片を２０ｍ１の臓器浴に取り付けた。

その浴には次の組成（■蓋濃度）のクレブス（ｋｒｅｂｓ）溶液を入れた：Ｎａ Ｃｌ、　１５０　：　ＫＣＩ、４．３　；　ＣａＣ１ｘ、１．２５　；　ＭｇＣ ／ｌ、１．０　；　ＮａＨｔＰＯ４・ＨＩＯｌｌ、　７　；　ＮａＨＣＯｓ、２ ５．　Ｏ；グルコース、１１．００温度は３７℃に保ち、そして溶液に９５％０ ，１５％Ｃ０２を通じた。ＧＲＡＳＳ　Ｅ　２Ｂ電極を陽極として用い、そして １．５ｃｍ白金線全体を管腔内に納めた。調製物の他端は浴溶液から突出しそし てストレインゲージに結びつけられた固いポリエチレン管片（４ｃ厘、外径２． ５８１）に結びつけた。もう一つのＧＲＡＳＳ　Ｅ　２Ｂ電極を経壁（ｔｒａ、 ｎｓ＋＊ｕｒａｌ）刺激が得られるように腸から約５１のところにそしてそれと 並行に設けた。持続時間４ミリ秒（Ｉｌｓｅｃ）の単パルスをバーバード（ｌｌ ａｒｖａｒｄ）刺激装置により１０ｍ１ｎ−’の周波数で伝達した。３〜６■の 範囲の電圧を印加して最大応答が得られるようにした。１ｇの張力変化につき１ ｃ寓のペン移動が得られるように補正されたバーバードバイオグラフ（ｂｉｏｇ ｒａｐｈ）装置におけるバーバード等尺性カドランスデューサーを介して回腸の 等尺性収縮を記録した。各用量レベルで得られた張力低下を少くとも１０回の先 行対照刺激により得られた平均張力に対する百分率として表現することにより結 果を標準化した。抑制率（％）をペプチド濃度の関数として半対数プロットする ことにより、５０％抑制の切片としてとったＩＣ５゜−値を測定することができ る。

（２）　ＭＶＤ　（！１ｏｕｓｅ　ｖａｓ　ｄｅｆｅｒｅｎｃｅ　；マウス輸精 管）アッセイを本質的にＨｅｎｄｅｒｓｏｎの記載するところに従って行った。

簡単にいえば、成体雄自マウス（Ｓｗｉｓｓ　Ｗｅｂｓｔｅｒ　３０〜５０９　 ）を頚部脱臼により層殺しそして輸精管を離断する。付着した脂肪および結合組 織を除去した後、輸精管から関連血管を除去しそして精液を管腔からゆるやかに 絞り出す。次にその輸精管を、次の組成（ＩｌｌＭ）を有する加温され（３７℃ ）、酸素供給された（９５％０２．５％Ｃ０２）　Ｍｇ”不含クレブス溶液を入 れた５ｍ／臓器浴内に０．５ｇ張力下に装着した：　ＮａＣ１，１１８；ＣａＣ ｌ２．２．５１１　；　ＫＣｌ、　４．７５　；　Ｋ１１２ＰＯ，、ｌ、　１９ 　；　Ｎａ１ｌＣＯ１，２５；グルコース、＋１；Ｌ−チロシン、０，２゜改変 されたバーバード刺激装置を用いて、対の矩形パルス（８０Ｖ、　０．１５１１ ７．１０ｍ５遅延時間、１．ｈｓ持続時間）より成る浴の頂部および底部の白金 線リング電極を通して反復フィールド刺激を伝達する。筋肉収縮をＨｅｗｌｅｔ ｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　７７０２Ｂ記録計に接続されたＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋ ａｒｄ　ｌ１ｏｄｅｌ　ＦＴ＾−１−１カドランスデユーサーを介して記録する 。様々な用量における単収縮高さの低下を測定することにより対数用量一応答曲 線を作成しそしてＩＣ，。−値を決めることができる。

表１ エンケファリン類似体のＧＰＩおよびＭＶＤアッセイ表１は、チオエーテル結合 を有する本発明化合物が、いずれの方法においても、特に最も適切なＧＰ■試験 において、対応するー５−８−化合物よりも強い効力を有していることを示して いる。

実施例６： ５ｃｈｉｌｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒ ｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１９８３．１１５゜ｐ、８６４〜８７０に記載された プロトコルを用いて、我々は３化合物、すなわちＬｅｕ’−エンケファリン、ジ スルフィド−エンケファリン、およびランチオニソーエンケファリンの半減期を 比較した。表２に示されるようにランチオニソーエンケファリンは他の２化合物 よりもはるかに安定している。

表２．エンケファリン類似体の酵素分解類似体　ｔ＋／ｚ　（分） ランチオニソーエンケファリン　１２２３ジスルフィド−エンケファリン　３３ ２Ｌｅｕ５−エンケファリン　３０ 実施例７： ランチオニンオピオイドは、試験管内および生体内試験において高活性である（ 表３）。生体内生物活性は髄腔内投与後にラット熱板試験を用いて測定した。

活性およびＤＣＬＣＥの２倍の活性を示す（表３）。同じ試験において（Ｌｅｕ ’〕−エンケファリンはＧＰＩおよびＭＶＤ調製物を用いた試験管内アッセイで １００μす投与後の全アゴニスト活性の４０〜５０％を示すに過ぎない。ランチ オニンオピオイドは、（Ｌｅｕ’）−エンケファリンよりも、ＧＰＩ　（μ−受 容体）にあっては４００倍高い、そしてＩＩＶＤ　（δ−受容体）にあっては２ ０倍高い生物活性を示す。これらの値はそのジスルフィド架橋された対応物のＤ ＣＤＣＥのそれよりも高い。前記ランチオニン類似体はβ−またはδ−受容体に 対する優先を示さない。

ＩＣ，、比（ＭＶＤ／ＧＰＩ）は０．９テある。

表３．ランチオニン架橋されたエンケファリン類似体の生物学的活性類似体　Ｇ ＰＩａ　ＩｆｆＤａ　ＩＩＶＤ／ＧＰＩ　生体内ｂＩＣｓｏ［ｎＭ］　ＩＣｌＣ ５６（ｎ　ＩＣ，０−比　ＥＤｓｏ（ｎｍｏｌｌＯ，６２０，５４０，９０，１ １ Ｔｙｒ−ｃ　ＣＤ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）　−ＮＨｚｌ、５１　０ ．７６　０．５　０．２４Ｌｅｕｌ′−エンケファリン２４６　１１．４　０． ０５　＞１０００モルフィン　５８．６’　６４４’　１１　１５ａ：ＧＰＩお よびＭＶＤ活性はＤｒ　Ｐ、Ｗ、　５ｃｈｉｌｌｅｒの実験室で測定。

ｂ：数値はＤｒ　Ｔ、　Ｙａｋｓｈの実験室で測定。

Ｃ：この分子は１００μ９投与時に最大効果の５０％を示す。

ｄ　：　５ａｌｖａｄｏｒｉ　ｅｔ　ａｌ、　１（ｏｐｐｅ−３ｅｙｌｅｒ、　 Ｚ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ。

３６５　：　１１９９．１９８４゜ 本発明によるランチオニシーエンケファリン類は卓越した活性ヲ有しているもの の高い受容体選択性を有しているとは思われない。

それらの選択性を改善するために、ランチオニンセグメントの１つまたは複数の β−位に１個または複数のアルキル（メチル）基を導入することができる。この 場合に、Ｒ４、Ｒｓ、Ｒ？、Ｒ８のうちの少（とも１個がアルキル（メチル）で あってよい。

図１ 区１　２ 溶液中でのランチオニソーエンケファ１ノンの合成国際調査報告　。、７，１゜ 。っ／ｌ’ｌＴ７゜。

、　Ｎｏ　ＰＣＴ／ＥＰ　９２１０１７１１９ｌｍｅ’ｆｉ絆０ＩＪＩ　ＡＩＸ ｌｔｕｌｌｍ　ｓｏ、　ＰＣＴ／εＰ９２１０１７１１９フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｋ　７／１６　８３ １８−４Ｈ ７／２６　８３１８−４Ｈ ７／３２　８３１８−４Ｈ ／／　Ｃ０７Ｋ　９９：０２　８３１８−４Ｈ９９：３８　８３１８−４Ｈ ９９：５８　８３１８−４Ｈ ９９ニア０　８３１８−４Ｈ Ｉ

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中、Ｒ１は天然アミノ酸およびそ れらのＤ−対掌体より成る群より選択される２〜１０個のアミノ酸の短配列であ り、またＲ２およびＲ３は各々Ｌ−またはＤ−対掌体としての天然アミノ酸また は２５個以下、好ましくは３個以下、の短配列であり（ここで、Ｒ２残基のＮ− 末端−ＮＨ２基が−ＯＨ、−Ｈまたは−ＮＨＣＯＲ６（式中Ｒ６はアルキル−ま たはアルアルキル残基である）で置き換えられていてもよく、あるいはＲ３アミ ノ酸残基のＣ−末端−ＣＯＯＨが−ＣＯＮＨ２または−ＣＨ２ＯＨで置き換えら れていてもよい）、あるいはＲ２は−Ｈ、各々１〜１８個の炭素原子を有するア シルまたはアルアシルを表わしてもよく、またＲ３は−ＯＨまたは−ＮＨ２であ ってもよく、そして−ＣＯ−Ｒ３はＣＨ２ＯＨで置き換えられていてもよいが、 ただしＲ２がＰｈｅでＲ３がＴｈｒ（オール）である場合はＲ１は【配列があり ます】ではなく、また以上においてＲ１、Ｒ２またはＲ３はペプチド擬似体例え ばレトローインベルソー（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ−）、カルバー（ｃａｒ ｂａ−）、アザ−、チオペプチドまたはペプチド環などより成っていてもよく、 またＲ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８は水素であるかまたは１〜１０個の炭素原子を 有する所望により置換されたアルキルである〕で示されるランチオニン−架橋ペ プチド。
2. ２．Ｒ１が２〜７個、特に２〜４個、のアミノ酸の短配列である請求項１記載の ペプチド。
3. ３．Ｒ２およびＲ３がＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−β−Ｎａｌ、Ｔｙｒ、ＴｒｐＮＨ２、Ｔ ｈｒＮＨ２、Ｔｈｒ（オール）より成る群より相互に独立【配列があります】ま たは【配列があります】のアミノ酸配列を表わし、あるいはＲ２が−Ｈ、アシル またはアルアシルでありそしてＲ３が−ＯＨまたは−ＮＨ２でありそして基−Ｃ Ｏ−Ｒ３がＣＨ２ＯＨで置き換えられていてもよい請求項１または２記載のペプ チド。
4. ４．Ｒ１が【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】、【 配列があります】、【配列があります】、【配列があります】または【配列があ ります】【配列があります】より成る群より選択されるアミノ酸配列を表わす請 求項３記載のペプチド。
5. ５．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ３はＯＨまたはＮＨ２である）を有する請求項４記載のペプチド。
6. ６．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＸｘｘはＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−β−Ｎａｌを表わし：ＹｙｙはＴｈｒまたは Ｖａｌであり、そしてＺｚｚはＴｒｐＮＨ２、ＴｈｒＮＨ２またはＴｈｒ（オー ル）であるが、ただしＺｚｚがＴｈｒ（オール）であるときはＸｘｘはＤ−Ｐｈ ｅではない）を有する請求項４記載のペプチド。
7. ７．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ または ▲数式、化学式、表等があります▼ を有する請求項４記載のペプチド。
8. ８．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＡａａはＰｈｅまたはＩｌｅであり、そしてＢｂｂはＡｒｇまたはＬｅ ｕである） を有する請求項４記載のペプチド。
9. ９．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＧｇｇはＧｌｙまたはＳｅｒであり、Ｒ２は−Ｈ、アシルまたはアルア シル（各々１〜１８個の炭素原子を有する）であり、そしてＲ３はヒト、サケま たはウナギーカルシトニンの８−３２断片を表わす）を有する請求項４記載のペ プチド。
10. １０．２個のジスルフィド架橋のうちの１個または２個が１個または２個のチオ エーテル結合で置き換えられ、また環が連続的に重複している、エンドテリンま たは関連のペプチドのアミノ酸配列を有する請求項１記載のペプチド。
11. １１．有効量の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）〔式中、Ｒ１は天然アミノ酸およびそ れらのＤ−対掌体より成る群より選択される２〜１０個のアミノ酸の短配列であ り、またＲ２およびＲ３は各々Ｌ−またはＤ−対掌体としての天然アミノ酸また は２５個以下、好ましくは３個以下、の短配列であり（ここで、Ｒ２残基のＮ− 末端−ＮＨ２基が−ＯＨ、−Ｈまたは−ＮＨＣＯＲ６（式中Ｒ６はアルキル−ま たはアルアルキル残基である）で置き換えられていてもよく、あるいはＲ３アミ ノ酸残基のＣ−末端−ＣＯＯＨが一ＣＯＮＨ２または−ＣＨ２ＯＨで置き換えら れていてもよい）、あるいはＲ２は−Ｈ、各々１〜１８個の炭素原子を有するア シルまたはアルアシルを表わしてもよく、またＲ３は−ＯＨまたは−ＮＨ２であ ってもよく、そして−ＣＯ−Ｒ３はＣＨ２ＯＨで置き換えられていてもよいが、 ただしＲ２がＰｈｅでＲ３がＴｈｒ（オール）である場合はＲ１はＰｈｅ−Ｔｒ ｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒではなく、また以上においてＲ１、Ｒ２またはＲ３はペプチ ド擬似体例えばレトローインベルソー（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ−）、カル バー（ｃａｒｂａ−）、アザ−、チオペプチドまたはペプチド環などより成って いてもよく、またＲ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８は水素であるかまたは１〜１０個 の炭素原子を有する所望により置換されたアルキルである〕で示される少くとも 一つのペプチドを含有することを特徴とする薬学的組成物。
12. １２．有効量の請求項２〜１０のいずれかに記載の少くとも一つのペプチドを含 有することを特徴とする薬学的組成物。
13. １３．少くとも一つのペプチド断片に含まれる部分を、使用樹脂に結合された状 態で、または樹脂から切断した後で、所望によりＮ−および／またはＣ−末端で 延長され得る所望のランチオニン−架橋された環状ペプチド断片に環化して断片 縮合または段階的合成により最終ペプチドを形成することより成る、固相ペプチ ド合成および／または古典的合成の適切な組合せを用いる請求項１〜１０のいず れかに記載のペプチドの製造方法。
14. １４．−環化される部分を含むペプチド断片を任意のペプチドカブリング法によ りｔｅｒｔ−プトキシカルボニル−化学を用いて適切な樹脂上で組み立て、 −セリンを所望の位置に取り込み、次いでそれをジスクシンイミドカーボネート を用いてデヒドロアラニンに転化し、−所望の位置でカプリングされたシステイ ンに結合したＳ−保護基を選択的に除去し、 −ＳＨ基の二重結合へのミカエル付加をわずかに塩基性の環境により促進し、そ して −ペプチドおよびその他の保護基をＨＦで処理することにより樹脂から切断する ことを特徴とする請求項１３記載のペプチドの製造方法。
15. １５．任意の再使用カプリング剤を用いたＦｍｏｃ−手法を用い、中間的にピペ リジン法によるＦｍｏｃ−保護基の切断を用いて任意の適切な樹脂でペプチド鎖 を組み立て、その際酸に不安定なＳ−保護基の切断を任意の適切な酸または試薬 により行うことを特徴とする請求項４記載の方法。
16. １６．溶液中での古典的合成を断片縮合としてまたは段階的合成として用い、そ の際、適切に保護されたアミノ酸の任意の既知のカプリング法および断片および 最終ペプチドの任意の切断法が用いられる請求項１３〜１５のいずれかに記載の ペプチドの製造方法。