JPH06509324A

JPH06509324A - 新規ペプチド、その製造及び使用

Info

Publication number: JPH06509324A
Application number: JP4510722A
Authority: JP
Inventors: エムリンク，フランツ; ハウプト，アンドレアス; クルーゲ，ミヒャエル; クローナー，マティアス; ハース，ゲルハルト; シュミット，ウルリッヒ; グリーサー，ヘルムート; リードル，ベルント
Original assignee: ビーエーエスエフ　アクチェンゲゼルシャフト
Priority date: 1991-06-20
Filing date: 1992-06-17
Publication date: 1994-10-20
Also published as: WO1993000362A1; US5504189A; DK0589949T3; MX9203100A; EP0589949A1; CA2111083C; DE59206961D1; EP0589949B1; ATE141616T1; CA2111083A1; DE4120327A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】新規ペプチド、その製造及び使用本発明は、新規ペプチド、その製造並びに病気の治療におけるその使用に関する。

トリジデムヌム・ソリデュム（Ｔｒｉｄｉｄｅｍｎｕｍ　Ｓｏｌｉｄｕｍ）及びトリジデムヌム・シアノホルム（７ｒｉｄｉｄｅｗｎｕｍＣｙａｎｏｐｈｏｒｕ１１）種の被嚢類（７Ｈｉｃａｔｅｎ）から、種々の化合物が単離されていて、その構造が明らかにされており（米国特許（ＵＳ）第４４９３７９６号明細書、米国特許（ＵＳ）第４５４８８１４号明細書、米国特許（ＵＳ）第４７８２１３５号明細書、欧州特許（ＥＰ）第４８１４９号明細書、欧州特許（Ｅ　Ｐ）第３９３８８３号明細書）、これらは抗ウイルス性、及び抗腫瘍性の作用を有する。

［式中、Ｘｌは、酸素原子又はＮＨ−基を表わし、Ｘ２は、酸素原子又はＮＨ−基を表わし、Ｒ１は、アミノ保護基、１〜３０個のＣ−原子を有する直鎖、分枝鎖又は脂環状の飽和又は不飽和脂肪族、脂肪族−芳香族又は芳香族アシル基を表わし、これは弗素原子、ニトロ−、オキソ−、ヒドロキシ−１Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ− 又は場合により保護されたアミノ基によって置換されていてよ（、Ｒ２は、水素原子、メチル−又はエチル基を表わし、Ｒ３は、水素原子又はメチル基を表わし、Ｒ４は、水素原子又はメチル基を表わし、Ｒ５は、水素原子又はＣ１〜Ｃ４−アルキル基を表わし、かつＲ６は、水素原子又はメチル基を表わす］のペプチド（式中で同時にｘｌ及びＸ２が酸素原子を表わし、Ｒ３及びＲ４がメチル基を表わし、Ｒ５がイソプロピル基を表わし、かつＲ１が保護された又は遊離のＮ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｅｕを表わす化合物を除く）並びに生理学的に認容性の酸とのその塩が比較的に簡単に製造可能であり、かつ改善された作用を有することが判明した。

Ｎ、Ｏ−ジメチルチロシル基は、分子中に、Ｒ−又はＳ−立体配置を有していてよい。

式Ｉの化合物のうち、式中のＸｌが、ＮＨ−基を表わし、Ｘ２が、ＮＨ−基を表わし、Ｒ１が、Ｈ１脂肪族Ｃ１〜Ｃｌ０−アシル基、ウレタン系アミノ保護基、Ｃ１又はＯＨによって置換されていてよいベンゾイル基、遊離又はＮ−末端で保護されたＤ−アミノアシル基又はザルコシル基を表わし、Ｒ２が、ＣＨ３、Ｃ２ＨＩｉを表わし、Ｒ３が、水素原子又はメチル基を表わし、Ｒ４が、ＣＨ，を表わし、かつＲ５が、ＣＲ２ＣＨ（ＣＲ３）！及びＣＨ（ＣＨ１１）２を表わすものが有利である。

生理学的に認容性の酸として、特に次のものが挙げられる：塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、燐酸、メタンスルホン酸、酢酸、蟻酸、マレイン酸、フマール酸、リンゴ酸、コハク酸、マロン酸、硫酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、無性ブドウ酸、粘液酸、安息香酸、グルクロン酸、蓚酸、アスコルビン酸、アセチルグリシン。

新規化合物を、公知方法により、製造することができる。

すなわち、アミノ酸誘導体から、又は適当な小さなフラグメント（Ｆｒａｇｍｅｎｔｅ）の結合によって、連続的に化合物を構成することができる。連続的な構成の場合には、ペプチド鎖もしくはベプトリド鎖（Ｐｅｐｔｏｌｉｄｋｅｔｔｅ）が、段階的に、各々１個のアミノ酸誘導体のまわりで延長される。フラグメント結合では、異なる長さのフラグメントを相互に結合することができ、この際フラグメントそのものは再びアミノ酸誘導体からの連続的構成によって、又はフラグメント結合によって得られる。環状化合物は、開鎖ペプチドもしくはペブトリドの合成に従い、環化反応によって、得られる連続的構成においても、フラグメント−結合においても、構成要素は、アミド結合もしくはエステル結合の生成によって、結合されなければならない。そのためには、酵素的及び化学的方法が好適である。

アミド結合生成のための化学的方法は、ミューラ−（Ｍｕｅｌｌｅｒ）　、メトーデン・デア・オルガニッシエンー　ヒ　エ　ミ　−　（ｌｌｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ）　、ＸＶ／２巻、１−３６４頁、ティータ（Ｔｈｉｅｍｅ）出版、シュッッッガルト、１９７４年；シュテワルト（５ｔｅｖａｒｔ）　、ユング（Ｙｏｕｎｇ）　、ソリッド・フェイズ・ペプチド・シンセージス（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）　、３１−３４頁、７１−８２頁、ピアスｅケミカル・カンパニイ（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、ロックホード、１９８４年；ポダンスキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）　、クラウスナー（Ｋｌａｕｓｎｅｒ）　、オンプツチ（０ｎｄｅｔｔｉ）　、ペプチド・シンセージス（Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　、８５　１２８頁、ジョン・ウィリー・アンド・ソング（Ｊｏｈｎ　ｆｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ）　、−ｘ−ヨーク、１９７６年、及び他のペプチド化学の標準著書に詳しく取り扱われている。特に、アジド法、対称及び混合無水物法、その場で製造した又は既成の活性エステル（例えばシアン−チオピリジルエステル）及び結合試薬（活性剤）、特にジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）　、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）　、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ）　、ｎ−プロパンホスホン酸アンヒドリド（ＰＰＡ）　、Ｎ、Ｎ−ビス（２−オキソ−３−オキソゾリジニル）アミド燐酸クロリド（ＢＯＰ− Ｃ１）　、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、カスドロ試薬（Ｃａｓｔｒｏ’ｓ　Ｒｅａｇｅｎｚ）　（Ｂ　ＯＰ　）、０−ベンゾトリアゾリル−Ｎ、Ｎ、Ｎ’　、Ｎ’　−テトラメチルウロニウムー塩（ＨＢＴＵ）　、２．５−ジフェニル−２，３−ジヒドロ−３−オキソ−４−ヒドロキシチオフェンジオキシド（ステグリヒス試薬（Ｓｔｅｇｉｔｃｈｓ　Ｒｅａｇｅｎｚ）　；　ＨＯＴ　Ｄ　Ｏ）及び１，１°−カルポニルージイミダゾル（ＣＤＩ）を用いるアミド結合生成が有利である。結合試薬は、単独で、又は添加剤、例えばＮ、Ｎ’−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアジン（ＨＯＯＢ　ｔ）　、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド（ＨＯ８Ｕ）又は２−ヒドロキシピリジンと組合せて、使用することができる。

エステル結合生成のための化学的方法は、ミューラ−（Ｍｕｅｌｌｅｒ）　、メトーデン・デア・オルガニツシエンーヒエミー（Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅｍｉｅ）、Ｒ５巻、６５６−７７３頁、テイーメ（Ｔｈｉｅｍｅ）出版、シュツッツガルト、１９８５年、に詳しく取り扱われている。特にジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及びＮ、Ｎ−ジメチル− ４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いる、カルボン酸及びアルコールの反応が有利である。

酵素的ペプチド合成においては、通例、保護基を断念することができるが、化学的合成については、アミド−もしくはエステル結合の生成に関与しない両反応成分の反応性官能基の可逆的保護が必要である。化学的ペプチド合成において、３種の文献公知の、アミンのための保護基−技術が有利である：ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）−１ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）−及び９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏ　ｃ）−保護基技術。ＯＨ−基については、特に、ｔ−ブチル−、ベンジル−１２−クロロアセチル−及びｔ−ブチル−ジメチル−ジチル−保護基が好適である。

三官能性のアミノ酸誘導体もしくはペプチド−又はペブトリド構成要素の側鎖保護基は、それらが必らずしも一緒に離脱されないように、選択する。アミノ酸保護基についての詳細な概要は、ミューラー、メトーデン・デア・オルガニッシエン・ヒエミー、ＸＶ／１巻、２０−９０６頁、ティーメ出版、シュツッツガルト、１９７４年、にある。

新規化合物は、極めて良好な抗ウィルスおよび抗腫瘍作用を有し、従って、腫瘍疾患及び自己免疫疾患に対して、並びに移植における感染及び拒絶反応の治療及び予防のために使用することができる。

新規化合物の作用は、極めて選択的である。

本発明による化合物は、通例、経口又は腸管外（皮下、静脈内、筋向、腹膜内）で投与され得る。

投与量は、患者の年令、状態及び体重並びに適用種類に依る。通例、経口投与では、１日の作用物質投与量は、約１０〜１０００ｍｇ／体重に９であり、かつ腸管外投与では、約０．１〜３５ｍｑ／体重面積ｍ２である。

新規化合物は、慣用のガレメス適用形で、固体で、又は液状で、例えば錠剤、被膜錠剤（Ｆｉｌｍ−Ｔａｂｌｅｔｔｅｎ）、カプセル剤、粉末、顆粒、糖衣錠、米菓又は溶液として使用され得る。これらは通常の方法で製造される。この際、作用物質は、通常のガレヌス助剤、例えば錠剤結合剤、填料、保存剤、錠剤砕解剤、流動調節剤、軟化剤、湿潤剤、分散剤、乳化剤、溶剤、遅延剤、酸化防止剤及び／又は駆出ガス（Ｔｒｅｉｂｇａｓｅｎ）と共に加工され得る（ズッカー等（Ｈ，５ｕｃｋｅｒ　ｅｔ　ａｌ）　：ファルマツオイテイッシエ・テヒノロジ −（Ｐｈａｒ■ａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ　Ｔｅｃｂｎｏｌｏｇｉｅ）　、テイーメ出版、シュツツツガルト、１９７８年、参照）。そうして得られる適用形は、作用物質を、通例、１〜９０重量の量で、含有する。

次の実施例につき、本発明を詳説する：例１化合物１　（Ｒ’＝ベンジルオキシカルボニル、Ｒ２＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ’＝　ＣＲ３、Ｒ’＝　ＣＲ３、Ｒ’＝　ＣＲ２−ＣＨ（ＣＨａ）２　、Ｘ’＝Ｏ，Ｘ”＝０、Ｓ−４体配置）の製造０−モノクロルアセチル−Ｌ−ヒドロキシイソバレリアン酸クロリド（１）Ｌ−ヒドロキシイソバレリアン酸１１．８９　（０，１モル）を、ＣＨＣＨ２Ｃｌ２５Ｏ！中に、０℃で、前もって装入した：次いで、ＣＨＣＨ２Ｃｌ２５Ｏ中のクロルアセチルクロリド１１．３ｓ　（０，１モル）、次いでピリジン８ｍＡ ’（７，９ｇ、０．１モル）を添加した。少なくとも２０時間室温で放置した。

ＥＥでの希釈後に、ＩＮ　ＫＨＳＯ３及び水で洗浄し、乾燥しくＭｇ５Ｏ４）、かつ真空中で濃縮した。その先の反応に十分に純粋である帯黄色の油状物１９．８＋（０，１モル）を得た。

そうして得たクロルアセチル保護のヒドロキシイソバレリアン酸（１当量）に、２当量の塩化チオニルを加え、ガス発生が止むまで、３時間５０℃に加熱した。

過剰の試薬を真空中で除去した。酸クロリド（１）を蒸留した。収率７９％、沸点１０３℃／　１０　Ｔｏｒｒ。

［α］　ｏ”　”　９．４　（Ｃ＝２７．ＣＨ２Ｃ（２）。

０−モノクロルアセチル−（２Ｒ８，４Ｓ）−ヒドロキシイソバレリルプロピオン酸（２）（１）５６ミリモル（１１，９）を、ＰＥ８０ｙ＋ｚｌ中に溶かし、Ｔ　ＨＦ　２２０　ｍ　ｌ及び１．６Ｎ　ＢｕＬｔ（指示薬ベンジリデンベンジルイミンに対して）１２Ｑ　ｍ　１中でメチルマロン酸ビス（トリメチルシリル）エステル４９．３ｍｌから一６０℃で前もって製造したメチルマロンエステルエノラート溶液に、−６０℃で滴加した。−晩で室温にし、２Ｎ　ＫＨＳＯ３１０Ｑ　ｍ　ｌで、酸性反応まで、加水分解し、かつエーテルで４回抽出し、全ての有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、かつ真空中で濃縮した。残留シロップをドルオール１００ｒｎｌ中に入れ、２時間撹拌し、かつドルオール５０ｍ１で後洗浄した不溶のメチルマロン酸を濾別した。ドルオール抽出物を、飽和ＮａＨＣＯ３−溶液で３回（１００，５０，５０ｙ＋ｚ７り　、強力に抽出した：集めた水相を、ドルオール５Ｑｍｌで１回洗浄し、ＣＨＣ／ｓ　８０ｍ１の層の上に加えかつ固体のＫＨＳＯ３で慎重に（発泡り酸性にした。水性−酸性相を、更に、ＣＨＣｔｓ　各８０ｍ１で２回抽出し、有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、かつ真空中で濃縮した。

無臭の無色油状物を得た。

収量：１１．２＋（４４，８ミリモル、８０％）β−ケト酸は約８５〜９０％純粋であり、直ちに更に加工された。貯蔵は冷時でも無制限でないが可能である。

”Ｈ−ＮＭＲ（８０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３　）：δ＝９．３（ｓ、ＩＨ）、５．３５　（ｄ、Ｊ＝４Ｈｚ、０．６Ｈ）、５．２５　（ｄ、Ｊ＝４Ｈｚ、０．４Ｈ）、４．２　（ｓ、２Ｈ）、３．５−４．０　（ｍ、ＩＨ）、２．０−２．５（ｍ、ＩＨ）、１．４　（ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、３Ｈ）、１゜３５　（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）、１．０　（ｍ、６Ｈ）０−モノクロルアセチル＝（２Ｒ５，４Ｓ）−ヒドロキシイソバレリルプロビオニル−し−ロイシン−トリクロルエチルエステル（３）（２）１２．８ｇ（５１，１ミリモル）を、Ｌ−ロインンートリクロルエチルエステル１２．７ｙ（５１，１ミリモル）と共に、ＣＨ２ＣＪ２１００　ｍ　ｌ中に溶かし、０℃に冷却し、かつ固体のＤＣＣＤ　１０．５ｇ（５１，１ミリモル）を加えた。０℃で２時間後に、尿素を濾別し、濃縮蒸発させ、かつＰＥ／ＥＥ　７／３でクロマトグラフィーにかけた。浄化生成物１４．０ｓ（２８，３ミリモル、５６％）を得て、これは２日間後に固体になった。試料は、ジエチルエーテル／ＰＥから、極めて徐々に、再結晶することができた。融点７１−９５℃（ジアステレオマー混合物）。

（２Ｒ８，４Ｓ）−ヒドロキシイソバレリルプロピオニル−し−ロイシントリクロルエチルエステル（４（３）７．００ｇ（１４，１ミリモル）を、ジオキサン７０　ｍ　ｌ中に溶かし、かつトリエチルアミン２．１４ｍｆ（１５ミリモル）及びペンタメチレンチオ尿素２．２２＋（１５ミリモル）を順番に加え、かつ３時間７０℃に加熱した。その後に真空中で濃縮し、ＥＥ中に入れ、かつ常法で後処理した。残留した、やや黄色の油状物を、ＰＥ／ＥＥ　７／３で、短かい珪酸ゲルカラムを通して濾過し、得られる結晶性塊状物を、エーテル５５　ｍ　ｌ中に溶かし、Ｐ　Ｅ　１９０　ｍ　ｊ！を加え、かつ開口フラスコ中に放置した。

極めてゆっくりな、分別結晶化によって、融点１０１−１０３℃の、無色の小針状物を得た。収量：４．６＋（ＩＩミリモル、７８％）。

Ｂｏｃ−（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチン（ＴＢＤＭＳ）−ＯＨ（５）ａ）　Ｂｏｃ−（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチン−ＯＨ（シンセージス（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）　（１９８９）、Ｎｏ、ｌｌ、８３２−８３５）７．０ｓ（２５，３ミリモル）を、Ｄ　Ｍ　Ｆ　８０　ｍ　ｌ中に溶かした。冷却した溶液に、イミダゾール１１．１ｇ（１６３モル）及びＴＢＤＭＳ−Ｃ１１０，６ツ（７０，３ミリモル）を加えた。混合物を３０分間室温で放置した。ＥＥｌ、２ｊ！の添加後に、反応混合物を、速かに、ＩＮ　ＫＨＳＯ３（２００ｍ　ｌ　）で、かつ水（４Ｘ１５０ｍｊりで４回洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、かつ蒸発乾固させた。

収量：　１２．２＋　（２５，３ミリモル）、油状物［α］　ｏ２０＝＋７．７ °　（ｃ”３．７．ＣＨＣ（ａ　）。

ｂ）　ビスシリル化生成物（１２，２＋、２５．３ミリモル）を、ジオキサン２００　ｍ　ｌ中に溶かし、かつＩＮ　ＮａＯＨ（２６ｍｊりを、溶液のｐＨ−値がアルカリ性で留まるまで滴加した。ジオキサンを蒸発除去し、残分にＥＥ２００ｍｌを加え、かつ０℃で強力な撹拌下に、ＩＮ　ＨＣｌ３０ｍ１を添加した。

水相をＥＥ　（２Ｘ１００ｍｊりで抽出し、かつ集めた有機相を、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、かつ蒸発乾固させた。

収量：　９．９＋　（２５，３ミリモル）、油状物［α］　ｏ２０＝＋１．７４　（ｃ＝２．６４．ＣＨＣｔ３）Ｎ−ｔ−プチルオキシ力ルポニルー〇−１−ブチルジメチルシリル−（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチンー（２Ｒ８，４Ｓ） −ヒドロキシイソバレリルプロピオニル−Ｌ−ロイシントリクロルエチルエステル（（５）５８０ｍｇ（１，４９ミリモル）を、（４）６３０ｍｗ（１，５０ミリモル）及びＤＭＡＰ２０ｍｇと共に、ＣＨ２Ｃ１２３ｍ　１２中に溶かし、かつ−３０℃でＣＨ２ＣＩ２２　ｍ　ｌ中のＤＣＣＤ３１０１７！９　（１，４９ミリモル）を加えた。−晩かかって徐々に室温まで加温し、ジエチルエーテルで希釈し、かつ尿素を濾別した。有機性溶液を常法で速かに洗浄し、かつ残った油状物を、短かい珪酸ゲルカラムを通して、Ｐ　Ｅ／ＥＥ　８／２で濾過した。

収量　１．１１　ｙ　（１，４０ミリモル、９４％）、無色油状物、Ｒ，（ＰＥ／ＥＥ　８／２）＝０．６　（２斑点Ｃ３５Ｈ６３Ｎ２０ｏＣｌａＳ　ｌ　（７９０，３３）計算値　Ｃ５３，１９Ｈ８，０３Ｎ　３．５４　Ｃ１１３，４６実測値　Ｃ５３，３１Ｈ８，１１Ｎ　３．５４　ＣＩ　１３．２３（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチン−（２Ｒ８゜４Ｓ）−ヒドロキシイソバレリルプロピオニル−Ｌ−ロイシントリクロルエチルエステルー塩酸塩（７）（６）２．０＋（２，５３ミリモル）を、アセトニトリルｌ　Ｑｍｎ中に溶かし、かつ水性弗化水素酸（約５０％の）２ｍｌを加えた。４時間室温で撹拌し、固体の炭酸水素カリウムで中和し、かつクロロホルムで３回抽出し、有機性抽出物を乾燥させ（Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏａ　）、かつ真空中で速かに蒸発させた。残分を直ちに０℃でＨＣｌ／ジオキサン２０ｍ１中に入れ、かつ１時間室温で撹拌した。濃縮し、塩化メチレンと共に３回蒸発させ、かつ高真空中で乾燥させた。収量＋１．５５＋（２，５３ミリモル、定量的）。

Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−スレオニンフェナシルエステル（８）Ｚ−スレオニン２５．３＋（０，１モル）を、ＥＥ２００　ｍ　ｌ中に懸濁させ、かつトリエチルアミン１４ＴｒＬｆ　（０，１モル）を加えた。撹拌下で、固体のω−ブロムアセトフェノン１９．０ｆ（０，１モル）を少量ずつ加え、かつ先ず澄明な溶液を得ると、これは間もなく混濁した。２日間放置し、ＥＥ５００ｍｆで希釈し、かつ常法で後処理した。結晶性の残分をイソプロパツール４２０ｍ／中に熱時に溶かし、温水３００ｍｊ！を加え、かつ２日間暗所で放置した。

析出した白色長針状物を濾過し、後洗浄し、かつ空気中暗所で乾燥させた。

収量：　２７．８ｙ　（０，０７５モル、７５％）融点・１２９−１３０℃ ［α］　。”　＝−３２，２（ｃ＝２．０４．　ＥＥ）Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｎ、Ｏ −ツメチルチロシン（９）ＮａＨ−懸濁液６．０ｇを、ＰＥで３回洗浄し、かつ傾瀉し、ＴＨＦ５Ｑｍｊ！を注ぎ、かつ０℃に冷却した。その後に、ＴＨＦ１１０ｔｒｔｌ中に溶かしたＢｏｃ−チロシン３２ミリモルを、徐々に滴加し、かつ引続いて、沃化メチル１６ｍ！！を加えた。懸濁液を２５時間光遮断下で室温で撹拌し、Ｅ　Ｅ　５０　ｍ　ｊ！を加えかつ水で慎重に加水分解した。真空中で濃縮して小量にし、その上・にＥＥを加え、かつ２　Ｎ　ＫＨＳ　ｏ４で酸性化した。ＥＥで抽出した後に、有機相を１０％のチオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥しくＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ＜　）かつ真空中蒸発濃縮させた。

収率：９５％ ’ＨＮＭＲ（８０ＭＨｚ、ＣＤＣＩｇ　）：δ＝８．５（ｓ、ＩＨ）、７．２　（ｄ、２Ｈ）、６．９　（ｄ、２Ｈ）、４．７　（ｍ、ＩＨ）、３．８　（ｓ、３Ｈ）、３．２（ｍ、２Ｈ）、２．７５　（ｓ、３Ｈ）、１．４　（ｓ、９Ｈ）０−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−Ｎ、Ｏ−ジメチルチロシル）−Ｎ−ベンジルオキシ−カルボニル−Ｌ−スレオニン−フェナシルエステル（１０）（８）２．０Ｏｒ（５，３８ミリモル）、（９）１．６７ｒ（５，４ミリモル）及びＤＭＡ　Ｐ　７０　ｍ　ｑ　（０，５４ミリモル）を、ＣＨ２Ｃ１２２０ｍ　Ｉ中に溶かし、−３０℃に冷却し、かつＤＣＣＤ　１．１３ｇ（５，５ミリモル）を加えた。−晩かかつて室温にし、尿素を濾別し、濾液を濃縮し、残分をエーテル中に入れ、１時間放置し、かつ新たに尿素を濾別した。ＰＥ／ＥＥ　７／３での珪酸ゲル濾過によって、十分に純粋なペブトリド（１０）を得た。

収量　３．５１（５，２８ミリモル、９８％）［α］。２０＝−２８，７（ｃ＝０．９６．ＣＨＣｌ３）０−　（Ｌ−Ｎ、０−ジメチルチロシル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−スレオニンフェナシルエステル（１１）（１０）３．５ｓ（５，２８ミリモル）を、５ＮＨＣ１／ジオキサン２０　ｍ　ｆと共に、０℃で溶かし、かつ１０分間後に、更に２時間室温で放置した。ジオキサンを真空中で除去し、残分を少量のＥＥ中に溶かし、ジエチルエーテル２００ｍｊｉ中に、強撹拌下で、徐々に滴加し、かつ更に２時間撹拌した。沈殿を吸引濾過し、かつ真空中乾燥させた。

収量：２．８０ｇ（４，ロアミリモル、８８％）Ｃ３１Ｈ８，Ｎ２０ＢＣＩ（５９９，０８）計算値　Ｃ６２，１５Ｈ５，８９Ｎ　４．６７実測値Ｃ６１，５６Ｈ５，９９Ｎ　４．５９そうして得た生成物を、クロロホルム３０ｍ１中に溶かし、かつｌＮ　ＫＨＣＯｓ　２０ｍ１で振出した。水相を更にクロロホルムで２回抽出し、集めた有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ，）かつ真空中で蒸発濃縮させた。

収量：２．４５＋（４，３５ミリモル、９３％）、無色の泡状物、Ｒ，（ＰＥ／ＥＥ　１／１）＝０．２Ｏ−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｌ −Ｎ、０−ジメチルチロシル）−Ｎ−ペンジルオキシカルボニルーし一スレオニンフェナシルエステル（１１）２．３５ｇ（４，１８ミリモル）及びＢｏｃ−プロリン０．９４　ｔ　（４，３８ミリモル）を、塩化メチレン６　ｍ　ｌ中に溶かし、かつ−２０℃で、Ｎ−エチルジイソプロピルアミン１．１９＊（１，６ｍｆ１９．２ミリモル）及びＢＯＰ−Ｃｌ　１．１７ｓ　（４，６ミリモル）を加え、かつ−晩かかって徐々に室温まで加温した。塩化メチレンでの希釈後に、常法で後処理し、かつｐＥ／ＥＥ　４／６で、短かい珪酸ゲルカラムを通して、濾過した。

収量：　３．０２ｇ　（３，９７ミリモル、９５％）、Ｒ，（ＰＥ／ＥＥ　１／１）＝０．４Ｃａｔｌ（４□Ｎ５Ｏｘｘ　（７５７，８５）計算値　Ｃ６４，８１Ｈ６，５０Ｎ　５．５３実測値　Ｃ６４，７１Ｈ６，５３Ｎ　５．４６０−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ、Ｏ−ジメチルチロシル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−スレオニン（１３）（１２）２．８０ｇ（３，６８ミリモル）を、９０％の水性酢酸２０ｍ１中で、亜鉛末１．８ｇと共に、４時間室温で撹拌した：不溶の亜鉛を濾別し、かつ真空中で濃縮させた。残分をＥＥとＩＮ　ＫＨＳＯ３の間に分配させた。集めた有機相を、乾燥させ（Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４）、かつ真空中で濃縮させた。残留した樹脂状物を、ドルオールと共に３回、真空中で蒸発させた。その後に、ＩＮ　ＫＨＣＯａ　１０ｍＩ！中に入れ、エーテルで２回洗浄し、かつエーテル相をＨ２Ｏで２回逆洗した。集めた水相の上に、ＥＥを加え、かつ冷却下でＩＮＫＨ３Ｏ４で酸性化した。更にＥＥで２回抽出し、かつ集めた有機溶液を乾燥させ（ＭｇＳ０４）、かつ真空中で蒸発濃縮させた。

収量：２．２５＋（３，５ミリモル、９５％）０−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｌ−Ｎ、Ｏ−ジメチルチロシル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−スレオニル−（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチルー（２Ｒ８，４Ｓ）−ヒドロキシイソバレリルプロピオニル−し−ロイシントリクロルエチルエステル（１４）（７）１．５５ｙ（２，５３ミリモル）及び（１３）１．７９９　（２，７８ミリモル）を、ＣＨＣＨ２Ｃｌ２１Ｏ中に溶かし、０℃に冷却し、ＢＯＰ−（１７０８ｍｖ　（２，７８ミリモル）及びＮ−エチル−ジイソプロピルアミン１．１５ｇ（１，５５ｍ１１８．９ミリモル）を加え、かつ−晩に渡って徐々に室温まで加温した。塩化メチレンでの希釈後に、常法で後処理した。

ＰＥ／ＥＥ　１／１での珪酸ゲル濾過によって、ヘキサペブトリド（１４）２．４３＊（２，０２ミリモル、８０％）を得た。

ＭＳ　（Ｆｄ、５０℃）：１１９８　（Ｍ＋１）Ｃ５７Ｈ８□Ｎｌ５Ｏ１Ｂ（１１９９，６６）計算値Ｃ５７，０６Ｈ６，８９Ｎ　５．８４　ＣＩ　８．８６実測値　Ｃ５７，３０Ｈ６，８２Ｎ　５．６５　Ｃ１８，７２０−（ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｌ−Ｎ、Ｏ−ジメチルチロシル）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−し−スレオニル−（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチルー（２Ｒ８，４Ｓ）−ヒドロキシイソバレリルプロピオニル−し−ロイシン（１５）トリクロロエチルエステル（１４）６９０ｍｇ（０゜５７ミリモル）を、９０％の水性酢酸２０ｍｊｉ中に溶かし、かつ亜鉛末２ｇと共に一晩撹拌した。濾過し、かつ濾液を真空中濃縮した。残分をＥＥ中に入れ、かつＩＮ　ＫＨＳＯ３及び水で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、かつ真空中で蒸発濃縮させた。

残った残分を、ドルオールと共に３回真空中で蒸発させた。収量：６１０ｍｇ（０，５７ミリモル）樹脂状物。

シクロ−［Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−〇−［［Ｎ−［（２Ｓ、３Ｓ、４Ｓ）−４−［（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−４−アミノ−３−（ヒドロキシ）−５−メチルヘプタノイル］オキシ−３−（ヒドロキシ）−２，５−ジメチルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル］−Ｌ＝プロリル−Ｎ、Ｏ−ジメチル−し−チロシル］−Ｌ− スレオニル］　（１７）ａ）　ペンタフルオルフェニルエステル（１６）の製造ヘキサペブトリド酸（１５）１０６ｍｇ（０，１ミリモル）及びペンタフルオルフェノール２２．１ｍｇ（０，１２ミリモル）に、ＣＨ２Ｃ１ｗ　Ｏ，５ｍｊ！中で、−２０℃で、ＣＨａＣｌａ　０．１ｒｒｔｌ中のＤＣＣＤ２２゜６ｍｓ＋　（０，１１ミリモル）を加えた。−夜で室温にした。ＢＯＣ−保護基の離脱のために、この溶液を、更に処置せずに、使用した。

ｂ）　閉環ペンタフルオルフェニルエステル（１６）０．１ミリモルを、塩化メチレンでｌ　ｍ　１に希釈した。次いで０℃でトリフルオル酢酸０　、５　ｍ　ｌを性用し、かつ３時間０℃に保った。溶剤及び過剰の酸を真空中で留去し、かつ残った残分をクロロホルム２００ｍ／中に溶かした。

この溶液を、振動ロート中に前もって装入し、かつ飽和炭酸水素ナトリウム溶液５０ｍ１で５分間強力に振出した。更に１時間放置し、クロロホルム層を分離し、かつ水相を更にクロロホルム各３０ｍ１で３回後洗浄した。有機溶液を乾燥させ（Ｍ　ｇ　Ｓ　０４　）　、かつ真空中で濃縮させた。ＰＥ／ＥＥ　３５／６５でのクロマトグラフィーによって、エピマー環を分離した。

収量：　（２Ｓ）−Ｈｉｐ−エピマー４８ｍ９　（０，０５１ミリモル、５１％）；　（２Ｒ）−Ｈｉｐ−エピマー２３ｍｑ　（０，０２４ミリモル、２４％）。

（２Ｓ）−Ｈｉｐ−エピマー［α］。２０＝−１４７゜５　（ｃ＝０．７２．ＥＥ）ＭＳ　：　９５０　（Ｍ＋１．２４％）ＣｓｏＨ７ｘＮｓＯｘｓ　（９５０，１４）計算値　Ｃ６３，２Ｌ　Ｈ７，５３Ｎ　７．３７実測値　Ｃ６３，１３Ｈ７，５５Ｎ　７．３２例２シクロ−［Ｎ−ヘキサノイル−〇−［［Ｎ−［（２Ｓ、３Ｓ、４Ｓ）−４−［（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−４−アミノ−３−（ヒドロキシ）−５−メチルヘプタノイル］オキシ−３−（ヒドロキシ）−２，５−ジメチル−ヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル］−Ｌ−プロリル−Ｎ、Ｏ−ジメチル−し−チロシル］−Ｌ−スレオニル］　（１８）（１７）５５０ｙｎｇ　（０，５１８ミリモル）を、９０％の水性酢酸４０ｍＩ！中に溶かし、ＩＮ　Ｈ（１１，１ｍＩ！を加え、かつＰｄ／ＣＣ１５０ｙｒＬで、標準圧下で、６時間水素添加した。その後に、常法で後処理し、かつ残分をドルオール５　ｍ　ｌと共に２回真空中で蒸発させた。塩酸塩が白色粉末として残留した。水素添加後に、各々の場合に、より安定な（２Ｓ）−Ｈｉｐ−エピマーを得た。

そうして得た塩酸塩５００ｍｇ（０，５８ミリモル）の、無水ＣＨ２Ｃｌ２１０ｍｌ中の溶液に、−１０℃で、ヘキサン酸クロリド０．０９ｍ１（０，６５ミリモル）及びコリジン０．３３ｍｇ　（２，５ミリモル）を加えた。成分を２時間 −１０℃で、かつ１時間室温で撹拌した。ＣＨ、ｃ　／２を真空中で留去し、残分をＥＥ中に溶かし、かつＩＮ　Ｈ１ｌＳＯ４−及びＮ　ＫＨＣＯｓ−溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、かつ濃縮させた。ＥＥ／ＰＥ　１：１からの残分の再結晶で、純粋な（１８）４００ｍｑを得た。濾液を濃縮させ、かつＭＰＬＣ（ＥＥ／ＰＥ　７／３）によって精製した。総収量：　４８０ｍｇ＝９０％例１及び２と同様にして、次の化合物Ｉを製造することができる：Ａ　：　Ｘ１＝Ｏ，Ｘ２＝Ｏ，Ｒ３＝ＣＨ２、Ｒ３＝ＣＨ２。

Ｒ’　＝ＣＨａ　、Ｒ３＝ＣＨ２ＣＨ（ＣＨａ）２　Ｓ−立体配置Ｎｏ、Ｒ” ３　ＣＨ３−Ｃ０４Ｈ−Ｃ０５ＣＨａ　ＣＨ２Ｃ０６ＣＨ８（ＣＨ２）１４　Ｃ０Ｚ　ＢＯＣ９ＣＨｓ　ＣＨ２Ｃ０１０Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ　− １１ｐ−０Ｈ−ベンゾイル１２　（ＣＨｓ）ｓｃ−Ｃ０１３ＨＯ−（ＣＨａ）ｓ　Ｃ０１４ＣｅＨδ−０−ＣＯ１５ＣＦ３−Ｃ０１６　・　（ＣＦ８）２　ＣＨＯＣ０１７ＣＨＢ−ＣＨ２−０−Ｃｏ　−（ＣＦ２）２−ＣＯ１８ｐ−ＨＯ−Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）２−ＣＯｌ　９　ＣＨ，−Ｃｏ−ＣＨ２−Ｃ０２０ＣＦａ　ＣＨ２０Ｃ０２１Ａｃ−ザルコシルＢ　：　Ｘ１＝０．Ｘ２＝Ｏ，Ｒ２＝Ｃ２Ｈ，、Ｒ８＝ＣＨ，。

Ｒ’　＝ＣＨ５、Ｒ’　＝ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２）２　Ｒ−立体配置Ｎｏ、Ｒ” ２２　ｎ−ヘキサノイル２３　Ａｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−ＬｅｕＣ：　Ｘ１＝Ｏ，Ｘ”＝Ｏ，Ｒ２＝ＣＨ８，Ｒ”＝ＣＨ３゜Ｒ’　＝ＣＨ３、Ｒ ’　＝ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨａ）２　Ｓ　−立体配置Ｎｏ、Ｒ’ ２４　ＣＨ３−Ｃ０２５ＣＨｓ（ＣＨ２）４ｃ。

２６　ナフチル−１−スルホニル２７　Ｈ−Ｃ０２８ＣＨｓ　ＣＨ２−ＣＯ２９ＣＨＩＩ　（ＣＨ２）＋４−Ｃ０３２ＣＨ３ＣＨ２０Ｃ０３３Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ３４　Ａｃ−ザルコシル３５ｐ−ＨＯ−ベンゾイル３６　（ＣＨｓ）ｓＣ−Ｃ０３７ＨＯ（ＣＨ２）ｓ　ＣＯ３８ＣｅＨｓ　ＯＣ０３９ＣＦ３−Ｃ０４０（ＣＦａ）２ＣＨＯＣ０４１ＣＨＩＩ　ＣＨ２０Ｃｏ　（ＣＦ２）２　Ｃ０４２１）　ＨＯ−Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）２　ＣＯ４３ＣＨ，−Ｃｏ−ＣＨ２−ＣＯ４４ＣＦｓ−ＣＨ２−０−Ｃ０Ｄ　：　Ｘ１＝Ｏ，Ｘ２＝Ｏ，Ｒ２＝ＣＨ，、Ｒ３＝ＣＨ３゜Ｒ’　＝ＣＨ５、Ｒ’　＝ＣＨ２ＣＨ（ＣＨＩＩ）２　Ｒ−立体配置Ｎｏ、Ｒ’ ４５　ＣＨ３Ｃ０４６ＣＨ３（ＣＨ２）４　Ｃ０４７（ＣＨ３）２ＣＨ−Ｃ０４８：Ｘ’　＝Ｏ，Ｘ２＝０．Ｒ’　＝Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌ　ｅ　ｕ、Ｒ２＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ３＝＝ｃ）（３、Ｒ’　＝Ｈ。

Ｒ２＝Ｃ２ＨＣＨ（ＣＨＩＩ）２　Ｓ−立体配置例４９化合物Ｉ　（Ｒ１＝ベンジルオキシカルボニル、Ｒ２＝Ｃ２Ｈ，、Ｒ８＝ＣＨ３、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ”＝ＣＨ。

−ＣＨ（ＣＨ３）２　、Ｘ”　＝ＮＨ，Ｘ２＝Ｏ，Ｓ−立体配置）の製造 ′Ｎ−ベンジルオキシカルボニルールオキシカルボニル−Ｌ−Ｎ，０−ジメチルチロシル］　−　（２Ｓ，３Ｒ）− ジアミノ酪酸メチルエステル（ＨＣＩ−　Ｚ−Ｄａ　ｂ−ＯＭｅ　（ホッペーセイラーズ（Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ’ｓ）　Ｚ．　Ｐｈｙｓｉｏｌ．　Ｃｈｅｌｌ．　３　５　４、６８９　（１９７３））６ミリモル（１．８２ツ）を、ＥＥ及びＮａＨＣＯ８−溶液の間に分配させ、かつ水相を更に２回ＥＥで抽出した。集めた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発濃縮させ、Ｂｏｃ−Ｎ，Ｏ −ジメチル−し−チロシン６、３ミリモル（１．９Ｆｚ）と−緒に、ジクロルメタン１　５　ｍ　ｆ中に溶かし、かつ−２０℃でＤＣＣＤ６．３ミリモル（１１．３０＋）を加える。

一晩に渡って室温に加温した後に、十分なジエチルエーテルで希釈し、濾過し、かつ蒸発濃縮させた。残分を新たにエーテル中に入れ、１時間放置し、濾過し、かつ蒸発濃縮させた。珪酸ゲル濾過及び中圧クロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＥ＝１／１）によって、無色の泡状物３．０４ｙ（９１％）を得た。融点：　４６− ４８　℃　：　［　α　コ　。２０　＝−２．３　（ｃ＝１．１　；　ＣＨＣｒｓ）：　ＤＣ　（ＰＥ／ＥＥ＝１／１）；　Ｒ．＝０．３３　；　ＨＰＬＣ　（Ｈｅｘ／ＥＥ＝１／１）：　ｔ−＝３．６分：″Ｎーベンジルオキシカルボニルーチルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｌ−Ｎ，Ｏ−ジメチルチロシル］　−　（２Ｓ，３Ｒ）−ジアミノ酪酸メチルエステル（２０）（１９）４．８ミリモル（２．６８ｇ）をジクロルメタン５　ｍ　Ａ！中に溶かし、ＨＣＮ／ジオキサン１　０ｍｌを加え、かつ１時間室温で撹拌した。その後に、蒸発濃縮させ、ＥＥ中に入れ、かつＮ　ａ　Ｈ　Ｃ　Ｏ　ｓ−溶液で強力に振出した。水相を更に２回ＥＥで抽出した。合一した有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過しかつ蒸発濃縮させた。

その際得られる無色の泡状物を、Ｂｏｃ−Ｌ−プロリン５ミリモル（１．０８ｇ）と−緒に、ジクロルメタンｌ　５ｍｌ中に溶かし、かつ−２０℃で、最初にＢＯｐ−Ｃ１５ミリモル（１．２７ｓ）、次いでエチルジイソプロピルアミン１１ミリモル（１．４２ｇ）を加えた一晩に渡って室温に加温し、常法で後処理し、かつ珪酸ゲルを介して濾過した。中圧クロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＥ＝４／６）後に、無色の泡状物２，７７１（８８％）を得た。

［α］。”０＝−５５．１　（ｃ＝１．０　：　ＣＨＣＩＢ　）；ＤＣ　（ＰＥ／ＥＥ＝４．６）；Ｒ，＝０．３　；ＨＰＬＣ（　Ｈ　ｅ　ｘ　／　Ｅ　Ｅ　＝　４　、　６　）　：　ｔ　Ｒ　＝　４　、　８分：１Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−’−Ｎ−［ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｌ−Ｎ、Ｏ− ジメチルチロシル］　−（２Ｓ、３Ｒ）−ジアミノ酪酸ジオキサン／水（２：１）１５ｙ＋ｚｌ中の（２３）３゜５ミリモル（２，２９ｒ）に、ＩＮ　ＮａＯＨ４ｍｊ！を、ｐＨ−調整（ｐＨ＜１０）下で、徐々に滴加した。十分な反応後に（ＤＣ−調整）、ジオキサンを真空中で除去し、かつ水相を２回ジエチルエーテルで抽出した。エーテル相から、場合により未反応のエステルを回収することができ、一方、水相の上にＥＥを入れかつ０℃で固体の硫酸水素カリウムでｐＨ１〜２に酸性化した。ＥＥで数回抽出し、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、かつ溶剤を蒸発させた後に、相応するカルボン酸を得た。

収量：　２．１＋　（９３，７％）無色の無定形固体；’Ｎ−ベンジルオキシカルボニルー’−Ｎ−［ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｌ−Ｎ、Ｏ −ジメチルチロシル］　−（２Ｓ、３Ｒ）−ジアミノブチリル−（２Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチルー（２Ｒ５，４Ｓ）−オキシイソバレリルプロピオニル− し−ロイシントリクロルエチルエステル（２２）（２１）１．１ミリモル（７０５ｍｗ）及び（７）１．１ミリモル（６７４ｍｇ）を、ジクロルメタン８ｍＩ中に溶かし、０℃で、Ｂｏｐ−Ｃｆ　１．１モル（２８０ｙｒｘｖ）及びエチルジイソプロピルアミン３．４ミリモル（４４０ｙｒｃ９）を加え、かつ−晩に渡って室温に加温した。常法の後処理及び中圧クロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＥ＝３／７）の後に、無色の泡状物５７０ｍｇ（４３％）を得た。

ＤＣ（ＰＥ／ＥＥ＝３／７）：　Ｒ１＝０．３２　；ＨＰＬＣ（Ｈｅｘ／ＥＥ＝３／７）：　を訳＝３．１分：’Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−’−Ｎ−［ｔ −ブチルオキシカルボニル−し−プロリル−Ｌ−Ｎ、Ｏ−ジメチルチロシル］　 −（２Ｓ、３Ｒ）−ジアミノブチリル−（２Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−イソスタチル− （２Ｒ８，４Ｓ）−オキシイソバレリルプロピオニル−Ｌ−ロイシン（２３）トリクロルエチルエステル（２２）０．４７５ミリモルを、９０％の水性酢酸２０　ｍ　ｌ中に溶かし、かつ−夜中、亜鉛末（新たに塩酸で腐食させ、かつ水、エタノール及びエーテルで洗浄した）２ｇと共に、強力に撹拌した。

濾過後に、酢酸を、オイルポンプ真空中で留去し、残分をＥＥ中に入れ、１０％のクエン酸で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、かつ濃縮させる。

酢酸を完全に除くために、残分を更に２回ドルオールと共に蒸発濃縮させ、かつ高真空中で乾燥させた。

収量：　４５３ｍｗ　（８９，３％）無色の固体ニジクロー［Ｎ″−ベンジルオキシカルボニル−Ｎβ−［［Ｎ−［（２Ｓ、３Ｓ、４Ｓ）−４−［（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−４−アミノ−３−（ヒドロキシ）−５−メチルヘプタノイル］オキシ −３−（ヒドロキシ）−２，５−ジメチルヘキサノイル］−Ｌ−ロイシル］−Ｌ −プロリル−Ｎ、０−ジメチル−し−チロシル］−（２Ｓ、３Ｒ）−ジアミノブチリル］　（２４）ヘキサペブトリド酸０．３７４ミリモル（４００ｍ　ｑ）を、閉環のための一般的作法により、反応させた。

ａ）　ペンタフルオルフェニルエステルの製造及びＢｏｃ−保護基の離脱（２３）４００ｍｇ　（０，３７４ミリモル）及びペンタフルオルフェノール０．５６ミリモルに、ジクロルメタン２　ｍ　ｌ中で、−２０℃で、ＤＣＣＤ　０．４５ミリモルを加え、かつ−晩に渡って室温に加温した。

濾過しかつ濃縮させ、直接、０℃で、トリフルオル酢酸１ｍｌを加え、かつ１〜４時間撹拌した。その後に、トリフルオル酢酸を高真空中で除去し、かつ得られる樹脂状物を、閉環のために使用した。２つの反応工程を、ＤＣ中で、完全な変換について検査することができた。

ｂ）　閉環ＢｏＣ−離脱の際に得られる樹脂状物（０，３７ミリモル）を、無水クロロホルム４００ｍｊ！中に入れ、かつ飽和炭酸水素ナトリウム溶液１００　ｍ　ｊ！と共に５分間強力に振盪した。１時間放置し、その後に水相を更に２回クロロホルムで抽出した。集めた有機相を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過しかつ蒸発濃縮させた。

ジクロロヘキシル尿素の分離のために、無水ジエチルエーテル中に入れ、１時間放置し、かつ綿を詰めたパスツールピペットを通して濾過した。

ペンタフルオルフェノールを、ジクロルメタンでの珪酸ゲル濾過によって、分離した。生成物は、珪酸ゲル上に付着残留し、引続いて、これをＥＥで溶離することができた。その後に最終精製を中圧クロマトグラフィーによって行なった。

中圧クロマトグラフィー（Ｐ　Ｅ／Ｅ　Ｅ　＝　３５／６５）により、無色の固体１５０ｍｇ（４２，２％）を得たＤＣ（ＰＥ／ＥＥ＝３５／６５）：Ｒ，＝０．３４　；Ｆｐ、；１１２℃：［α］。”＝　１６５．３（ｃ＝０．９；ＣＨＣｌ５）；ＭＳ　：　９４８．４　（Ｍ）、９４９．４　（Ｍ＋Ｈ）；シクロ−［Ｎ’　−［Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ− ｏイシル］−Ｎ’−［［Ｎ−［（２Ｓ、３Ｓ、４Ｓ）　−４−［（３Ｓ、４Ｒ，５Ｓ）−４−アミノ−３−（ヒドロキシ）−５−メチルヘプタノイル］オキシ− ３−（ヒドロキシ）−２，５−ジメチルヘキサノイル］　−り一ロイシル］−Ｌ −プロリル−Ｎ、Ｏ−ジメチル−し−チロシル］　−（２Ｓ、３Ｒ）−ジアミノブチリル］（２５）（２，４）　０．０８４ミリモルを、９０％の水性酢酸１０ｍ１中で、ＩＮ−Ｈ（１２００１１１及びＰｄ／Ｃ３０ｍｑを用いて、室温及び１バールで、６時間水素添加した（ＤＣ−調整）。

触媒の濾別、真空中での酢酸の留去及びドルオールとの２回の蒸発濃縮により、シクロペプトリドー塩酸塩を、定量的収率で得た。

シクロペブトリドー塩酸塩に、ジクロルメタン０゜５ｍｌ中で、０℃で、Ｚ−Ｎ −Ｍｅ−Ｄ−Ｌｅ　ｕ−３−シアノ−４，６−シメチルー２−チオピリジルエステル０．１２ミリモル及びトリエチルアミン０．１２ミリモルを加えｔ：。更に室温で一晩撹拌し、かつ次のように後処理した。

先ず、黄色のチオピリドン誘導体を濾別し、かつ濃縮した濾液を、短かい珪酸ゲルカラム上に装入した。

過剰のチオピリジルエステルを、ＰＥ／ＥＥ＝７／３での洗浄によって除去した。引続いて、生成物をＰＥ／ＥＥ＝２／８で溶離することができた。その後に、チオピリジルエステルを含有しない粗生成物を、ＥＥ中で、１０％のクエン酸、ＩＮ　ＮａＯＨ（残りのチオピリドンの除去）及び飽和食塩溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、かつ蒸発濃縮させた。

中圧クロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＥ＝３／７）により、無色の固体６２ｍｑ　（６８，６％）を得た。

Ｆｐ、：１０２−１０３℃、ＤＣ（ＰＥ／ＥＥ＝３／７）　：　Ｒ，＝０．２５　；［α］　ｏ”　＝　１１３　（ｃ＝０．９　；　ＣＨＣＩＢ　）　：同様にして（一部分、相応するノルスタチン誘導体及び／又は相応するＤ−チロシン−誘導体及び／又は（２Ｒ８，４Ｓ）−フルオルエニルメチルオキシカルポニルーアミノイソバレリルプロビオン酸及び／又は（２Ｓ）−２，３−ジアミノプロパン酸の使用下で）、次の式Ｉの化合物を製造することができる：Ｆ　：　Ｘ１＝ＮＨ，Ｘ２＝０．Ｒ２＝Ｃ２Ｈ，、Ｒ８＝ＣＨ３、Ｒ２＝Ｃ２Ｈ、Ｒ２＝Ｃ２ＨＣＨ（ＣＨ３）２　Ｓ−立体配置Ｎｏ、Ｒ’ ５１　Ｂｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｅｕ５２　Ａｃ−ザルコシル５３　ＣＨ３ＣＯ５４ＣＨ３（ＣＨ２）４ＣＯ５５ＣＦ　ａ　Ｃ０５６Ｐｈ０ＣＯ５７ｐ−ＯＨ−ベンゾイル５８　Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ５９　ＣＨ３ＣＨ２０ＣＯ− ６０Ａｃ−Ｇｌｙ６１　ナフタリン−２−スルホニル６２　Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｖａｌ６３　ペルフルオルプロピオニル６４　Ｂｏｃ６５　エチルオキシカルボニルＧ　：　Ｘ１＝ＮＨ，Ｘ２＝ＮＨ，Ｒ２＝ＣＨ，、Ｒ８＝ＣＨ。

、Ｒ’　＝ＣＨ３、Ｒ’　＝ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨａ）ｇ、Ｓ−立体配置Ｎｏ、Ｒ１６６ＣＨ９−Ｃ０６７ＣＨ３−（ＣＨ２）４　Ｃ０６８Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｅｕ６９　Ｚ−ザルコシルＨ：　Ｘｉ　＝ＮＨ，Ｘ２　＝ＮＨ，Ｒ２＝ＣＨ３，Ｒ８＝Ｈ，Ｒ’　＝ＣＨ５、Ｒ’　＝ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）２　。

Ｓ−立体配置Ｎｏ、Ｒ’ ７０　ＣＨ３ＣＯ７１ＣＨ３（ＣＨ２）４Ｃ０７２Ｂｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｅｕ７３　ＣＦ３ＣＯ７４ｐ−ＯＨ−ベンゾイル７５　Ａｃ−ザルコシルア６　Ｃ（ＣＦ３）２０ＣＯ７７Ｐｈ０ＣＯ１：　Ｘｉ　＝ＮＨ，Ｘ２　＝Ｏ，Ｒ２＝ＣＨ３，Ｒ３＝Ｈ、Ｒ’　＝ＣＨ３、Ｒ’　＝ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２Ｎｏ、Ｒ’ ７８　ＣＨｓＣＯ７９ＨＣＯ３０ＣＨｓ　（ＣＨ２）４ｃ。

８１　（ＣＨａ）ａｃｃ。

８２　ＣＦ、Ｃ０８３ｐ−ＯＨ−ベンゾイル４　Ｚ８５　Ｂｏｃ８６　Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ８７　Ｚ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｅｕ８８　Ａｃ−ザルコシル８９　Ｐｈ０ＣＯ９０Ｃ（ＣＦ３）２０ＣＯ９１ＣＨｓ　ＣＨ２０ＣＯＮ　−Ｍ　ｅ　Ｄ　−Ｌ　ｅ　ｕ９２　ＣＨ３ＣＨ２０ＣＯ９３ナフタリン−１−スルホニル９４　ナフタリン−２−スルホニル９５　ペルフルオルヘプタノイル細胞毒性試験細胞毒性を、フリック（Ｆｌｉｃｋ）及びギフオード（Ｇｉｆｆｏｒｄ）の方法（クリスタルバイオレット−アッセイ）　（Ｋｒｉｓｔａｌｌｖｉｏｌｅｔｔ− ＾５ｓａｙ）　）により［Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１ｌｅｔｈ、、１９８４　；　６８．　１６７−１７５．１、着生セルライン（ａｄｈａｒｅｎｔｅ　ｚｅｌｌｉｎｉｅｎ）のための広く汎用されている標準試験系で、試験した。標的細胞として、七トセルラインＣＸ−１（結腸癌）、ＭＸ−■（乳癌）及びＬＸ−Ｉ（肺癌）を使用した。

各々の細胞を、９６個の穴を有する平底の微量滴定プレート中で、１穴当り２〜３Ｘ１０”細胞の細胞密度で被覆し、かつ２４時間、標準培養条件下で（１０％胎生牛血清及び１％非必須アミノ酸を有するＲＰＭＩ　１６４０）、３７℃で、かつ５％ＣＯ２／９５％空気で、恒温保持した。その後に、細胞を更に７２時間これと同一の条件下で、しかし異なる濃度の試験−化合物の存在で、恒温保持した（培地中でのみ細胞調整）。細胞毒性の定量（Ｑｕａｎｔｉｆｉｚｉｅｒｕｎｇ）は、培地及びこれに伴なう非着性の死んだ細胞の除去の後に行なった。残留着生細胞を、クリスタルバイオレット−色素溶液５０μｌと一緒に、２０分間恒温保持し、引続いて、非結合水溶性色素を除去するために、微量滴定プレートを水で強力に洗浄した。

残留した水に不溶の色素クリスタルを、１穴ごとに、５０％ＥｔＯＨ及び０．１％酢酸よりなる溶液１００μｌで溶かした。各々の、穴の吸収率を、微量滴定プレート光度計（Ｔｉｔｅｒｔｅｃ、　Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ、　Ｆｌｏｗ　Ｌａｂ、。

１１ｅｃｋｅｎｈｅｉｍ、Ｂ　ＲＤ　）を用いて測定し、かつ各々の試験物質の半最大（ｈａｌｈａ＋ａｘｉｍａｌｅ）有効濃度を調査したこの試験で、新規化合物は、試験されたヒト腫瘍セルラインへの、良好な細胞毒作用を示した。

例中で使用した略字は次の意味を有する：ＡＣ；アセチルＡｅｑｖ：当量ＢＯＣ：ｔ−ブチルオキシカルボニルＢＯＰ−Ｃ１：Ｎ、Ｎ−ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）アミド燐酸クロリドＤａｂ　：　（２Ｓ、３Ｒ）−ジアミノ酪酸ＤＣ：薄層クロマトグラフィーＤＣＣＤ　ニジシクロへキシルカルボジイミドＤＭＡＰ：Ｎ、Ｎ−ジメチル−４ −アミノピリジンＥＥ　：酢酸エチルエステルＨｉｐ　：ヒドロキシイソバレリルプロピオン酸１ｓｔ　：イソスタチンｔ、ｖａｋ、：真空中ｋｏｎｚ、：濃縮されたＭＣＡ　：モノクロルアセチルＮＭＲ：核磁気共鳴ＰＥ　；石油エーテルＴｃｅ　：）リクロルエチルＲＴ　：室温ＴＢＤＭＳ　：　ｔ−ブチル−ジメチル−シリルＴＨＦ　：テトラヒドロフランＺ　：ベンジルオキシカルボニル、、　、、、、、ｈ、　ＰＣＴ／ＥＰ　９２１０１３０４フロントページの続き（７２）発明者　ハウブト、アンドレアスドイツ連邦共和国　Ｄ−６３７０オーバーウアゼル　カールスバーダー　シュトラーセ（７２）発明者　クルーゲ、ミヒャエルドイツ連邦共和国　Ｄ−６７０１カルシュタット　アム　ヒューバウム　３（７２）発明者　クローナー、マティアスドイツ連邦共和国　Ｄ−６７１９アイゼンベルクーシュタインホルン　ブルックナーシュトラーセ　２５（７２）発明者　ハース、ゲルハルト・ドイツ連邦共和国　Ｄ−７８６７ヴエールツア　クネーベルハルデ　１０（７２）発明者　シュミット、ウルリッヒドイツ連邦共和国　Ｄ　−７０００シュツットガルト　ゾムバルトシュトラーセ　４０３（７２）発明者　グリーサー、ヘルムートドイツ連邦共和国　Ｄ−７０１６ゲルリンゲン　ゲルトアイゼンシュトラーセ　３８（７２）発明者　リードル、ベルントドイツ連邦共和国　Ｄ−７０００シュツットガルト　８０　リアスヴエーク　３

Claims

【特許請求の範囲】

１．式Ｉ： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ［式中、Ｘ１は、酸素原子又はＮＨ−基を表わし、Ｘ２は、酸素原子又はＮＨ−基を表わし、Ｒ１は、アミノ保護基、１〜３０個のＣ−原子を有する直鎖、分枝鎖又は脂肪環状の飽和又は不飽和の脂肪族、脂肪−芳香族又は芳香族アシル基を表わし、これは弗素原子、ニトロー、オキソ−、ヒドロキシ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ基又は場合により保護されたアミノ基によって置換されていてよく、Ｒ２は、水素原子、メチル−又はエチル基を表わしＲ３は、水素原子又はメチル基を表わし、Ｒ４は、水素原子又はメチル基を表わし、Ｒ６は、水素原子又はＣ１〜Ｃ４− アルキル基を表わし、かつＲ６は、水素原子又はメチル基を表わす］のペプチド（式中で同時にＸ１及びＸ２が酸素原子を表わし、Ｒ３及びＲ４がメチル基を表わし、Ｒ５がイソプロピル基を表わし、かつＲ１が保護された又は遊離のＮ−Ｍｅ−Ｄ−Ｌｅｕを表わす化合物を除く）並びに生理学的に認容性の酸とのその塩。
２．病気の治療の際に使用するための請求項１に記載の式Ｉのペプチド。