JPH06503357A - 骨の成長促進組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 肴の成長促進組成物 本発明は肴の成長促進組成物、特に骨の病気の治療に使用するための骨の成長促 進組成物に関する。

脊椎動物の肴の形成は、間断のない骨生成と骨吸収とを包含する動的プロセスで ある。肴の治癒には、新しい骨芽細胞（Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ）の増殖を必要と する。骨芽細胞は自ら分化し、骨の母組織（Ｋｎｏｅｈｅｎｓａｔｒｉｘ）を合 成する。骨の欠損においては、人は普通は自己由来の（ａｕｔｏｌｏｇｅｓ）骨 補綴材料（Ｋｎｏｃｈｅｎ−Ｐｒｏｎｐｆｍａｔｅｒｊａｌ）を使用する。この 継ぎ足し（＾ｎｓａｔｚｅｓ）の欠点は、自己由来の骨材料（　Ｋｎｏｃｈｅｎ Ｉｌａｔｅｒｌａｌ）が人が願うほど迅速に治癒を早め得す、しかも幾つかの場 合には、自己由来の骨材料を利用し得ないことである。

骨の病気を治療するのに使用されている医薬組成物の中には弗化物がある。弗化 物は、生体内で骨細胞（Ｋｎｏｃｈｅｎｚｅｌ　Ｉｅ）に対する直接的な分裂促 進効果によって骨形成を刺激することが明らかにされている。弗化物で治療され た患者の中軸骨格の骨無機質の密度が増大し、しかも血清アルカリホスファター ゼ濃度、すなわち該骨格における骨形成の指標もまた増大する。脊柱骨の密度の 顕著な増大は、弗化物での治療の約１２〜１８か月後に認められる。しかしなが ら、弗化物での治療は全ての患者に同等に有効であるとは限らない。その理由は 、ある患者は弗化物に対して極めて僅かしか応答しないし、別の患者は全く応答 しないからである。

弗化物での治療のほかに、骨塊（Ｋｏｃｈｅｎｍａｓｓｅ）を増大させるのに提 案されている多数の別の方法例えば１，２５−ジヒドロキンビタミンＥ及び他の 成長促進物質の使用があるが、これらの治療法は非常に不確かな効果を部分的に しか示さない。

欧州特許出願第０２８９３１４号明細書には、骨の障害の治療にＩＧＦ−ＩＩを 使用することが記載されている。さらにまた、該明細書にはＩＧＦ−■と弗素イ オンの組合わせが、骨細胞の増殖に対して予期しない高められた効果を生じ、該 弗素イオンがＩＧＦ−Ｉｌの骨芽細胞刺激活性を高めることが記載されている。

本発明の目的は、骨細胞の高められた増殖と分化をもたらす新規な組成物を提供 することにある。

本発明によれば、この課題は、成長因子ＦＧＦ　、　ＴＧＦ−β、ＩＣＦ−Ｉｌ 、ＰＤＧＦ並びにそれらの生物学的に活性な変異体（Ｍｕｔａｎｔ）及び断片（ Ｆｒａｇｍｅｎｔ）からなる群から選択される少なくとも１種の物質と、生理学 的に許容し得るバナジン酸塩、モリブデン酸塩及び弗化物からなる群から選択さ れる少なくとも１種の塩とを有効成分として含有してなる（但し、ＩＧＦ−ｎと 弗化物の組合わせを除く）骨の成長促進組成物によって達成される。ＩＧＦ−Ｉ ｌと弗化物の組合わせが骨細胞の増殖を増大させるのに有効であるばかりではな く、これに関して前記成長因子類（又はそれらの生物学的に活性な変異体及び断 片）の少なくとも１種と、前記の塩類の少なくとも１種との前記の組合わせのそ れぞれもまた少なくとも比較し得る水準で有効であるということは予想外のこと である。

これらの知見を説明するに、先ず第１に本発明者らは、弗化物、バナジン酸塩又 はモリブデン酸塩化合物の前記の増強効果は、これらのホスホチロシルプロティ ンホスファターゼに対する阻害作用によるものであると考える。この酵素は、分 裂促進信号（ｓｉｔｏｇｅｎｅｎＳｉｇｎａｌ）によって誘発されたリンタンパ ク質を脱リン酸し、それによって上記分裂促進信号を不活性化する。この脱リン 酸を阻害することにより、その場合には人は、前記成長因子によって生みだされ る分裂促進信号を促進する。

好ましい態様においては、本発明の組成物は、前記の成長因子の少なくとも２種 、最も好ましくはそれらのうちの３種（それらの１種又はそれ以上は場合によっ てはそれらの生物学的に活性な変異体及び断Ｉ伸こよって置換されていてもよい ）を組合わせて含有する。

これらの組合わせにおいて、前記の成長因子（又はそれらのそれぞれの変λ体及 び断片）の少なく、！も２種又は３種の組名わせが、骨細胞の増殖と分化に対し て付加的効果を有するばかりではなく、予想外の顕著な相乗作用を生み出すこと が明らかにされた。

バナジン酸イオン又はモリブデン酸イオンあるいは弗素イオンは、生理学的に特 に受容１．得るカチオ：／であるナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシ ウム及びアンモニウムからなる群から選択されるカチオンと会合し７ている（ｖ ｅｒｋｍ３ｆｅ口）が好ましい。

本発明の組成物に使用する成長因子は多数の種々の方法で調製し得る。

第１には、本発明によれば、前記の成長因子の少なくとも］種は、天然由来の材 料、好ましくは人の骨材料から、例えばＭｏｊａｎらの論文、Ｂｉｏｃｈｅｓ、 　Ｂｌｏｐｈｙｓ、＾ｃｔａ、　、８８４，２３４（１９８Ｂ）にＩＧＦ−１１ について記載のようにして単離し得ることが提案される。また、該成長因子は培 地中で増殖させた骨細胞からも単離し得る。

前記成長因子の収得の第２の方法は、血清例えばヒト血清、ウシ血清、ヒツジ血 清、ブタ血清又はウマ血清から慣用の方法を使用して単離することである。

しかしながら、第３の（極めて好ましい方法であり得る）調製方法は、組換えＤ ＮＡ技術すなわち遺伝子工学法によって成長因子又はそれらの生物学的に活性な 変異体及び断片を組換え体として収得することを包含する。かかる方法の幾つか は、例えば前記の欧州特許出願第０２８９３１４号明細書にＩＧＦ−１１につい て記載されている。

最後に、本発明の組成物は、分裂促進性の骨抽出物（ｍ　ｔ　ｔｏｇｅｎｅｎＫ ｎｏｃｈｅｎｅｘｔｒａｋｔ）を有効成分として含有することを特徴とし得る。

前記の成長因子の１種又はそれ以上を含有するかかる有効な肯抽出物の調製は、 慣用の方法に従って行い得る。

また、本発明は本発明の組成物を肴の病気の治療に使用する方法に関する。本発 明の組成物は、骨細胞の増殖と分化とをもたらす成長因子の作用を促進する。そ の場合に、これらの新しい儒細胞は骨の欠損を迅速に埋めるか、あるいは例えば 異常骨折の治療を促進するかいずれかの目的を達成する。本発明の組成物は、さ らに別の骨の病気例えば骨粗壓症の治療に有効であることを示す。

本発明を以下の実施例によりさらに詳しく説明する。

ヒト骨肉腫細胞を１％子ウシ血清を含有するＤＭＥＭ培地上に塗布した。翌日に 、培地を血清を含有していないＤＭＥＭ培地に代えた。その翌日に、因子〔すな わちＴＧＦ−β（及び／又はＩＣＦ−ＩＩ　）とバナジン酸塩〕を添加した。因 子添加の１８時間後に、細胞の増殖を３Ｈ−チミジンの取り込みにより測定した 。また平行して、別の平板をＰＢＳで一度に洗い落とし、細胞層を０．０１％Ｔ ｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００で抽出した。得られた抽出物についてタンパク質とアル カリホスファターゼ活性とを検定した。得られた結果により、ＴＧＦ−β（及び ＩＧＦ−１１又はそれらの併用）がバナジン酸塩のヒト骨細胞の増殖に対する効 果を高めることが明瞭に示された。

本実施例の方法は、添加した因子の量販外は実施例１と同様である。本実施例も また、得られた抽出物についてタンパク質とアルカリホスファターゼ活性とを検 定した。ＦＧＦもまたモリブデン酸塩のヒト骨細胞の増殖に対する効果を高める ことを示した。

本実施例の方法は、添加した因子以外は実施例１と同様である。

本実施例もまた、得られた抽出物についてタンパク質とアルカリホスファターゼ 活性とを検定した。ＰＤＦＧもまた弗化物のヒト骨細胞の増殖に対する効果を高 めることを示した。

前記の記載並びに請求の範囲及び図面に記載の本発明の特徴は、ｍ−で又は不特 定多数の組合わせの形態で種々の態様における本発明の具現に必要不可欠である 。

国際調査報告 フロントページの続き （７１）出願人　キルシュ、アクセル ドイツ連邦共和国、デー７０２４・フィルダーシュタット、タルシュトラーセ、 ２３ （７２）発明者　ペイリンク、デーピッド、ジェイアメリカ合衆国、カリフォル ニア・９２３５７゜ロマ・リンダ、ベントン・ストリート。

１１２０１、シェリー・エル、バチイス・ヴエテランズ・ホスブ、ロマ・リンダ ・ユニバースティ内 （７２）発明者　工ヴアース、リルフ オーストリア共和国、エイ−１１６０・ウィーン、リーベハルトスユタルシュト ラーセ。

（７２）発明者　キルシュ、アクセル ドイツ連邦共和国、デー７０２４・フィルダーシュタット、タルシュトラーセ、 ２３

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．成長因子ＦＧＦ、ＴＧＦ−β、ＩＧＦ−ＩＩ、ＰＤＧＦ並びにそれらの生物 学的に活性な変異体及び断片からなる群から選択される少なくとも１種の物質と 、生理学的に許容し得るバナジン酸塩、モリブデン酸塩及び弗化物からなる群か ら選択される少なくとも１種の塩からなる成分とを有効成分として含有する（但 し、ＩＧＦ−ＩＩと弗化物の組合わせを除く）ことを特徴とする骨の成長促進組 成物。
2. ２．前記成長因子のうちの少なくとも２種（それらのうちの一方又は両方は場合 によってそれらの生物学的に活性な変異体及び断片によって置換されていてもよ い）の組合わせを含有することを特徴とする請求の範囲第１項記載の組成物。
3. ３．前記成長因子のうちの３種（それらのうちの１種又はそれ以上は場合によっ てそれらの生物学的に活性な変異体及び断片によって置換されていてもよい）の 組合わせを含有することを特徴とする請求の範囲第２項記載の組成物。
4. ４．バナジン酸イオン、モリブデン酸イオン又は弗素イオンと会合したカチオン が、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアンモニウムからな る群から選択されるものであることを特徴とする請求の範囲第１項〜第３項記載 の組成物。
5. ５．前記成長因子のうちの少なくとも１種が、天然由来の骨材料から単離される ものであることを特徴とする前記請求の範囲のいずれか１項に記載の組成物。
6. ６．前記成長因子のうちの少なくとも１種がヒトの骨材料から単離されるもので あることを特徴とする請求の範囲第５項記載の組成物。
7. ７．前記成長因子のうちの少なくとも１種が血清例えばヒト血清、ウシ血清、ヒ ツジ血清、ブタ血清又はウマ血清から単離されるものであることを特徴とする前 記請求の範囲のいずれか１項に記載の組成物。
8. ８．前記成長因子のうちの少なくとも１種あるいはそれらの生物学的に活性な変 異体又は断片の少なくとも１種が、遺伝子工学法によって組換え体として収得さ れるものであることを特徴とする前記請求の範囲のいずれか１項に記載の組成物 。
9. ９．分裂促進性の骨抽出物を有効成分とすることを特徴とする前記請求の範囲の いずれか１項に記載の組成物。
10. １０．骨の病気の治療に前記請求の範囲のいずれか１項に記載の組成物を使用す る方法。