JPH06502629A - Ｔｎｆに対する抗体またはその誘導フラグメントおよびキサンチン誘導体の組み合わせ治療およびそのための組成物についての使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＴＮＦに対する抗体またはその誘導フラグメントおよびキサンチン誘導体の組み 合わせ治療およびそのための組成物についての使用 光訓Ｂ針列！一 本発明は腫瘍壊死因子−α（以下ＴＮＦという）のレベル上昇に付随する状態を 治療する医薬生成物、および当該生成物の製造に関する。該医薬生成物は、例え ば敗血症の治療、特に敗血症性、または内毒素性ショックの治療に用いることが できる。

見１灸ｉ見 ＴＮＦは活性化されたマクロファージおよび他の細胞によって産生されるサイト カインで、炎症および免疫における重要な調節物質である。それは１敗血症性シ ョック（グラム陰性またはグラム陽性細菌に付随する。しばしば致死的な状態） のほか、その他の状態、例えば成人呼吸抑圧症候群、対宿主移植片疾患および自 己免疫疾患に関係している。

ＴＮＦに対する抗体（抗ＴＮＦ抗体）の使用を含む、このような状態の治療が提 案され、試験された。例えば、Ｂｅｕｔｌｅｒら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５） 、２２９，８６９−８７１）は、ＴＮＦに対するウサギのポリクローナル抗血清 による受動免疫は、グラム陰性菌の内毒素による致死効果からマウスを防御する ことを示した。同様に、ＴＮＦに対する抗体療法は、対宿主移植片疾患（ＧＶＨ Ｄ）に罹患しているマウスの死亡率を減少させ、さらに急性期ＧＶＨＤに付随す る肺臓、並びに皮膚および腸管病変を防ぐことが示された（Ｐ、Ｆ、Ｐｉｇｕｓ ｔら、Ｊ　、　Ｅ　ｘ　ｐ　、　Ｍ　ｅ　ｄ　、（１９８７）１６６：　１２８ ０：Ｍ、Ｒ，５ｈａｌａｂｙら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　（１９８９ ）４７：１０５７）。

さらに、セルチックリミテッド社の特許出願は、移植片拒絶に対する抗リンパ球 治療に付随する副作用を改善しくＷ。

８９１０８４６０号）、さらに抗腫瘍性化学療法に付随する副作用を改善する抗 ＴＮＦ抗体の使用を開示している（Ｗ○８９１０１９５０号）。

ある種のキサンチン誘導体もまたＴＮＦの抑制物質であることが知られている。

例えば、ヘキスト社（ＨｏｅｃｈｓｔＡｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ） の欧州特許公開公報第Ａ−０３４４５８６号は、ＴＮＦを抑制する効果をもつキ サンチン誘導体を開示している。このＴＮＦの遊離は、例えばアンホテロシンＢ のようなある種のＴＮＦ遊離物質によって誘発される。

本発明者らは、敗血症ショックのいくつかの実験モデルで、ＴＮＦに対する抗体 およびキサンチン誘導体を組み合わせて使用した場合、驚くべき組み合わせ効果 が生じることを発見した。

！朋Ｌ」１１列」杵 したがって、本発明の第一の特徴によれば、同時に組み合わせて、または同時で あるが別々に、または連続的に治療に使用するための組み合わせＩＩ物として、 ＴＮＦに対する抗体もしくはそのＴＮＦ結合フラグメントおよびキサンチン誘導 体を含む医薬生成物が提供される。

そのような医薬生成物は、ＴＮＦに対する抗体もしくはそのＴ　Ｎ　Ｆ結合フラ グメントおよびキサンチン誘導体が混合状態で、任意に医薬的に許容できる賦形 剤、希釈剤または担体とともに医薬組成物の形態を取ることができる。

該組成物におけるキサンチン誘導体対抗ＴＮＦ抗体の重量比は、４５０：１およ び１：１０の間で変化させることができるが、好ましくは１５０：　１−１　： 　５の範囲、特に好ましくは３ｏ：１および１：２の間１例えば１：１である。

本発明の医薬生成物に含まれる適切なキサンチン誘導体は次のものを含む： ｌ）式Ｉの化合物 式中、ラジカルＲ１およびＲ１の１つは、３から８個の炭素原子をもつ直鎖アル キル、（ω−１）−オキソアルキルまたは（ω−１）−ヒドロキシアルキル基を 表し、さらに他の２つのラジカル、Ｒ２およびＲ１またはＲ１およびＲ２は、Ｒ １およびＲ１の位置に１から８個の炭素原子を、さらにＲ８の位置に１から４個 の炭素原子をもつ直鎖または分枝フルキル基を表し、この場合、これら２つのア ルキル置換基の総炭素原子数は１０個を越えない； ２）式■の化合物 式中、Ｒは１から４個の炭素原子をもつアルキルラジカルを表す； ３）弐■の化合物 式中、ラジカルＲ４およびＲ’の少なくとも１つは、次の式の三級ヒドロキシア ルキル基を表し、 （ここで、Ｒ７は３個までの炭素原子をもつアルキル基を示し、ｎは２から５ま での整数を示し）、さらに、Ｒ４またはＲ＠ラジカルのうちただ１つが式Ｈａの ような三級ヒドロキシアルキル基を示す場合は、その他のラジカルは水素原子ま たは脂肪族炭化水素ラジカルＲ＠を表すが。

これは６個までの炭素原子をもち、その炭素鎖には２個までの酸素原子が介在す るか、または１個のオキソ基もしくは２個までの水酸基により置換されていて（ この場合、ラジカルＲ’に存在するオキソもしくは水酸基は、好ましくは、少な くとも２個の炭１ｉ４ＪＪ！子によって、窒素から分離されている）、さらに、 Ｒ５は１から４個の炭素原子をもつアルキル基を表す； ４）式■から■の化合物のプロドラッグ形および／または５）式■からｍまでの 化合物の代謝産物。

特に好ましい具体例では、キサンチン誘導体は、Ｒ１またはＲ３の位置にヘキシ ル、５−オキソヘキシルまたは５−ヒドロキシヘキシル基をもつ式１のものであ る。例えば、１−へキシル−３，７−ジメチルキサンチン、１−（５−ヒドロキ シヘキシル’）−３，７−ジメチルキサンチン、３，７−シメチルー１−（５− オキソヘキシル）キサンチン、７−　（５−ヒドロキシヘキシル）−１，３−ジ メチルキサンチン、１，３−ジメチル−７−（５−オキソヘキシル）キサンチン 、１゜３−ジ−ｎ−ブチル−７−（２−オキソプロピルまたは３−オキソブチル ）キサンチン、１−（５−ヒドロキシヘキシル）−３−メチル−７−プロピルキ サンチンおよび３−メチル−１−（Ｓ−オキソヘキシル）−７−プロピルキサン チン（＝プロベントフィリン）であり、特に３，７−シメチルー１−（５−オキ ソヘキシル）キサンチン（＝ペントキシフィリン）が該医薬生成物に含まれる。

この生成物に含まれる特に好ましい弐■の化合物は、Ｒｓがメチルまたはエチル 基を表す化合物である。同様に好ましいものは、２つのラジカル、Ｒ４またはＲ ６のうちのただ１つが、上記で定義された三級ヒドロキシアルキル基を表す弐■ の化合物である。さらに好ましいものは、Ｒ７がメチル基を表し、ｎが３から５ の整数を示し、それによって該三級ヒドロキシアルキルラジカルＨａが、［（ω −１）−ヒドロキシ−（ｃｖ−１）−メチルキサンチン、−ヘキシルまたはヘプ チルのいずれかを表す化合物、特にＲ５がメチルまたはエチルを示す化合物であ る。

また特に記載する価値があるものは、Ｒ４が三級ヒドロキシアルキル基を表し、 Ｒ６が水素、または各事例において１から４個の炭素原子をもつアルキル、ヒド ロキシアルキルもしくはアルコキシアルキルを表す弐■の化合物であり、例えば 、７−エトキシメチルー１−（５−ヒドロキシ−５−メチルヘキシル）−３−メ チルキサンチン、７−ブロビルー１−（５−ヒドロキシ−５−メチルヘキシル） −３−メチルキサンチンまたは１−（５−ヒドロキシ−５−メチルヘキシル）− ３−メチルキサンチンである。

上記に述べたように、本発明の医薬生成物のいくつかの実施態様には１式Ｉおよ び■のオキソアルキルキサンチンまたは式Ｉおよび■のヒドロキシアルキルキサ ンチンを含むことができ、またそのようなものだけでなく、プロドラッグの形態 も含まれる。該プロドラッグから、式１．ｆｆおよび■で定義された置換基をも つ治療的に活性なキサンチン化合物が、生体において体内変化によってのみ遊離 され得る。適切な誘導体は、アセタール化オキソアルキルキサンチン（これでは カルボニルｌ＆は次の弐■の構造エレメントによって置き換えおよび０−アシル 化ヒドロキシアルキルキサンチンを含む。

この０−アシル化ヒドロキシアルキルキサンチンは、水酸基の代わりに、Ｒ”− Ｃ○−０（式Ｖ）である式Ｖの構造エレメントをもつもので、この場合、Ｒ１お よびＲ”は各々４個までの炭素原子をもつアルキル基を表すか、または−緒にな ってエチレン、トリメチレンもしくはテトラメチレン基を表し、Ｒ″１は４個ま での炭素原子をもつアルキルラジカルまたは任意に置換されたフェニルもしくは ピリジルを示す。

特に本発明の医薬生成物に含まれる好ましいキサンチン誘導体は、ペントキシフ ィリン（３，７−シメチルー１−（５−オキソヘキシル）キサンチン）（トレン タールとしても知られている）および１−（５−ヒドロキシ−５−メチルヘキシ ル）−３−メチルキサンチン（以下ＨＷＡ　１３８という）である。

本発明の医薬生成物に含まれる抗ＴＮＦ抗体またはそのＴＮＦ結合フラグメント は、好ましくはＴＮＦ中和抗体または抗体フラグメントである。中和とは、イン ビトロもしくはインビボ試験で測定したとき、ＴＮＦの生物活性が減少もしくは 抑制されることを意図する。

本発明の医薬生成物に含まれる抗ＴＮＦ抗体もしくはフラグメントは、一般には 、いずれの種類の免疫グロブリンに属するものでもよい、したがって、例えば、 抗ＴＮＦ抗体は免疫グロブリンＧ抗体でも、または免疫グロブリンＭ抗体でもよ い、− 抗ＴＮＦ抗体は動物のもの１例えば哺乳類由来でもよく、さらに、例えばねずみ 、ラットまたはヒト由来でもよい、抗体は完全な免疫グロブリンでも、そのフラ グメント、例えば完全な抗体を蛋白分解によって切断して生じたフラグメント、 例えばＦ　（ａｂ’）　２．Ｆａｂ’もしくはＦａｂフラグメントまたは組み換 え体ＤＮＡ技術によって得られたフラグメント、例えばＦｖフラグメント（国際 特許出願第ＷＯ３９１０２４６５号に記載されたようなもの）でもよい。

抗ＴＮＦ抗体はポリスペシフィックでもよいが、ヒトＴＮＦに対してモノスペシ フィックであることが好ましい、この抗体はポリクローナル抗体でも、モノクロ ーナル抗体でもよい０本発明にしたがって用いられる特に有用な抗体には、組換 え体技ＴＮＦ抗体またはそのフラグメント（すなわち組換え体ＤＮＡ技術を用い て製造された抗ＴＮＦ抗体またはそのフラグメント）が含まれる。

特に有用な組換え体抗体には、（１）抗原結合部位の少なくとも一部が異なる抗 体に由来する抗原結合部位をもつもの、例えば１抗体の超可変もしくは相補性決 定領域が第二の別個の（好ましくはヒトの）抗体の可変基質領域に移し入れられ ているもの（欧州特許公開公報第２３９４００号で開示されたようなもの）；　 （２）その非−Ｆｖシーケンスが他の別個の抗体の非−Ｆｖシーケンスで置換さ れている組換え体抗体またはフラグメント（欧州特許公開公報第１７１４９６号 、同１７３４９４号および同１９４２７６号に記載されたようなもの）；または （３）実質的に天然の免疫グロブリン構造をもつが、そのヒンジ領域のシスティ ン残基数が天然の免疫グロブリンで見つけられている数と異なるか、または組換 え体抗体もしくはフラグメントの表在ポケットの１つもしくは２つ以上のシステ ィン残基が、天然の免疫グロブリンに存在する別のアミノ酸残基の位置に存在す る、組換え体抗体もしくはフラグメント（国際特許出願第ＷＯ８９１０１９７４ 号および同第ＷＯ３９１０１７８２号にそれぞれ記載されたようなもの）が含ま れる。

抗ＴＮＦ抗体は、抗原としてＴＮＦを用いて既知の免疫学的技術で調製すること ができる。したがって、例えば適切ないずれの宿主にもＴＮＦを注射することが でき、血清を集めて適切な精製及び／又は濃縮（例えば親和性媒体として固定Ｔ ＮＦを用いてアフィニティークロマトグラフィーによる）を経て所望のポリクロ ーナル抗ＴＩ’ＪＦ抗体を得ることができる。また別に、ＴＮＦを注射した宿主 から肺細胞またはリンパ球を回収し、例えばコーラらの方法（Ｋｏｈｌｅｒら、 Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、一旦−，５１１（１９７６）　）を用いて永久保 存し、慣用的な手法にしたがい、生じた細胞を希釈し、さらにクローン化して、 抗ＴＮＦ抗体を産生ずるモノクローナル系を得ることができる。抗体フラグメン トは慣用的な技術、例えば完全抗体を、例えばペプシン［Ｐａｔｈａｍ、Ｊ、Ｉ ｍｍｕｎｏｌ、１３１，２８９５　（１９８３）］、またはパパイン［Ｌａｍｏ ｙｉとＮ１５ｏｎｏｆｆ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈ、５６，２３５　（１ ９８３）］で酵酵素化して生成することができる」 組換え体技ＴＮＦα抗体を製造したい場合は、例えば上記の特許出頭明細書に記 載された一般的方法を用いて製造することができる。

本発明の第二の特徴にしたがえば、本発明の第一の特徴の医薬生成物の製造にお ける。ＴＮＦに対する抗体およびキサンチン誘導体の使用が提供される。

例えば、上記に記載したＴＮＦに対する抗体およびキサンチン誘導体を一緒に混 合し、さらに任意に医薬的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体をその中に混 ぜることができる。

該医薬生成物は、ヒトまたは動物体内に存在するＴＮＦレベルを減少させること を望む、いずれの治療にも用いることができる。このＴＮＦは体内で循環してい るか、または望ましくない高レベルで体内の特定の部位に局在しているであろう 。

例えば、ＴＮＦ値上昇は、免疫調節系および炎症性疾患、並びに敗血症性、内毒 素性および心脈管系ショックに関連する１本発明の第一の特徴による医薬生成物 は、敗血症、敗血症性もしくは内毒素性ショック、悪液質、成人呼吸抑圧症候群 、エイズ、アレルギー、乾擲、結核、炎症性骨疾患、血液凝固疾患、火傷、器官 もしくは組織移植後に併発する拒絶反応および自己免疫疾患（例えば甲状腺炎の ような器官特異的疾患並びにリューマチ性および骨関節炎のような非器官特異的 疾患）を含む状態の治療に用いることができる。

さらに、該医薬生成物は、新形成療法中のＴＮＦ生成に付随する副作用を改善し 、さらにまた抗リンパ球抗体を用いる移植拒絶の治療もしくは予防に付随するシ ョック関連症状を除外もしくは改善するために用いることができる。また、多臓 器不全（ＭＯＦ）の治療にも用いることができる。

本発明の第一の特徴による医薬生成物は、好ましくは敗血症または敗血症性／内 毒素性ショック治療用である。

本発明の第一の特徴による医薬生成物は、それが用いられる療法にしたがい、適 切ないずれの形態および量でも用いることができる。それは予防的に、例えばＴ ＮＦ水準の上昇が予想されるような状況にある場合に用いることができ、また別 に該生成物は、ＴＮＦ水準が望ましくない高水準に達した後、またはその水準が 上昇しているときに、それを減少させるために使用することもできる。

該医薬生成物は、適切ないずれの投与形態もとることができ、特に、非経口投与 に適切な形態（例えば注射もしくは輸液で１例えば単回注射もしくは持続輸液に よる）であるであろう、該生成物が注射用または輸液用の場合は、全成分が懸濁 液、溶液もしくは乳濁液の形であってもよく、また各成分が油性担体もしくは水 性担体であってもよく、さらに製剤化薬剤９例えば懸濁剤、安定剤および／また は分散剤を含んでいてもよい。

また別に、該生成物は、適切な滅菌液体で使用前に再構成できるよう乾燥形態で あってもよい。

医薬生成物の抗ＴＮＦおよびキサンチン誘導体成分が別々に投与される場合には 、各々は、慣用的な方法にしたがって製剤化することができ、各成分製剤は１つ −または２つ以上の他の活性成分を含むことができる。

特に、抗ＴＮＦ抗体は経口投与には不適切のようであるが。

一方そのような制限はキサンチン誘導体には適用されないであろう。

キサンチン誘導体が経口投与用であるとき、該製剤は、活性成分のほかに、例え ば澱粉（馬鈴薯、玉蜀黍もしくは小麦澱粉）またはセルロースまたは澱粉誘導体 （例えば微品質セルロース）；シリカ；種々の糖（例えばラクトース）；炭酸マ グネシウムおよび／またはリン酸カルシウムを含むことができる。製剤が経口投 与用の場合、それは患者の消化系に十分に耐えられるものであることが望ましい 、この目的のために、該製剤に粘液産生物および樹脂を含ませることが望ましい 、さらに、キサンチン誘導体を胃液に不溶のカプセルで製剤化することによって 耐性を改善することが望ましいであろう、また、キサンチン誘導体を徐放性製剤 に含有させることも好ましい。

本発明のまた別の特徴では、望ましくない高水準のＴＮＦに付随する疾患に罹患 し、またはその危険性があるヒトもしくは動物の治療方法が提供される。当該方 法は１本発明の第一の特徴の医薬生成物の有効量を、該主体に投与することを含 む、特に該ヒトまたは動物主体は１敗血症または敗血症性もしくは内毒素性ショ ックに椹患しているが、またはその危険性があるものでもよい。

各医薬生成物が投与される用量は、処置される症状の性質。

中和されるべき、もしくは中和されることが期待されるＴＮＦがどの程度、望ま しい水準を越えて上昇しているか、さらに該生成物が予防的に用いられるか、も しくは現存状態の治療用に用いられるかによって異なる。また用量は、患者の年 齢および状態にしたがって選択される。

したがって１例えば、生成物が敗血症性ショックの治療もしくは予防用の場合、 ＴＮＦに対する抗体の適切な用量は、０．００１−３０ｍｇ／ｋｇ／日、好まし くは０．０１−１０ｍｇ／ｋｇ／日および特に好ましくは０．１−２ｍｇ／ｋｇ Ｚ日の範囲にあり、一方、キサンチン誘導体の適切な用量は、０．５から１００ ｍｇ／ｋｇ／日の範囲で、好ましくは０．５から５０ｍｇ／ｋｇ／日、特に好ま しくは１から３０　ｍ　ｇ　／ｋｇ／日の範囲にある。一般に、望ましくない高 水準のＴＮＦに付随する状態を軽減するために必要な限り、この用量を継続させ ることができる。特に、この用量のキサンチン誘導体を輸液により持続的に投与 し、またはこの用量のキサンチン誘導体を規則的に、例えば２から２４時間間隔 で、好ましくは６から１２２時間隔で（たとえ抗ＴＮＦ抗体は反復投与されてい ない場合でも）反復することが望ましいであろう。

匿皿立ｉｌｆ腹匪 本発明の実施態様を、実施例および添付の図面を参考にしながら、下記に詳述す る。該図面は以下の通りのものを示している： 図１は、大腸菌（Ｅ、ｃ　ｏ　１１）ＬＰＳ誘発ショックモデルにおける時間に 対する。各実験当たりの死亡平均を示す図表である。ここでは、ペントキシフィ リンまたは抗マウスＴＮＦハムスター抗体ＴＮ３・１９．１２が実験動物に種々 の用量で投与された。

、ペントキシフィリン、３００ｍｇ／ｋｇ：Ｘ、ペントキシフィリン、Ｌｏｍｇ ／ｋｇ；Δ、ペントキシフィリン、１ｍｇ／ｋｇ；口、コントロールツ ＋、ＴＮ３−１９．１２．１ｍｇ／ｋｇ；◇、ＴＮ３　・１９．１２．３０ｍｇ ／ｋｇ　：図２は、大腸菌ＬＰＳ誘発ショックモデルにおける時間に対する。各 実験当たりの死亡平均を示す同様な図表であるが。

ペントキシフィリンおよび／またはＴＮ３・１９．１２は１ｍｇ／ｋｇの用量で 実験動物に投与された。

Δ、ペントキシフィリン、１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇおよびＴＮ３・１９．１２． １ｍｇ／ｋｇ； ◇、ペントキシフィリンのみ、１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ　；口、コントロール； ＋、ＴＮ３−１９．１２．１ｍｇ／ｋｇ；図３は、実験当たりの死亡平均が、大 腸菌ＬＰＳ誘発ショックモデルについて時間に対してプロットされている図２と 同様な図表を示すが、ペントキシフィリンおよび／またはＴＮ３・１９．１２は 実験動物に下記の濃度で投与された：Ａ−コントロール； Ｂ　−１ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのペントキシフィリン（単回投与）およびＴＮ３− １９．１２．１ｍｇ／ｋｇ：Ｃ−１ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのペントキシフィリン（ ２４，４８および７２時間に反復投与）およびＴＮ３−１９．１２の１ｍｇ／ｋ ｇ　（単回投与） 図４は、ウマ流産菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ａｂｏｒｔｕｓ　ｅｑｕｉ）ＬＰ Ｓ誘発ショックモデルにおける死亡率抑制百分率を示すブロックグラフである。

ここでは、種々の量のＴＮ３・１９．１２および／またはキサンチン誘導体ＨＷ Ａ１３８が、ガラクトサミンで感作しＬＰＳで攻撃したマウスに投与された。

図５は、ウマ流産菌ＬＰＳ誘発ショックモデルにおける死亡率抑制をプロットし た同様なブロックグラフであるが、種々の量のＴＮ３・１９．１２および／また はキサンチン誘導体ペントキシフィリンが、ガラクトサミン感作ＬＰＳ攻撃マウ スに投与された。

以下の実施例では、細菌ＬＰＳ　（リポ多糖類）を、マウスに敗血症性ショック を誘発するために用いた。

の　の紀 ス】１１Ｌ 第一の実験では、異系交配マウスをグループに分け、抗ねずみＴＮＦハムスター 抗体ＴＮ３・１９．１２またはキサンチン誘導体、ペントキシフィリンのいずれ かを与えた。

各グループの動物に、尾静脈から静注により６０　ｍ　ｇ　／　ｋｇの大腸菌Ｌ ＰＳを与えた。この用量のＬＰＳはマウスのＬＤ９０に匹敵する・ ＴＮ３・１９．１２で処置した各グループの動物に、０．１と３０　ｍ　ｇ　／ 　ｋ　ｇの間の抗体を、０，１ｍｌの液体の尾静脈　−への静注により、ＬＰＳ 投与２時間前に与えた。

ペントキシフィリン処置予定のグループは、ＬＰＳ投与５分前にｌ　ｍ　ｇ　／ 　ｋ　ｇと３００ｍｇ／ｋｇの間で静注投与された。

コントロール実験では、動物は同量の食塩水を注射された。

これらの実験の結果を図１に示す、ＴＮ３・１９．１２のみでは、≧１　ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇの用量で防御効果を示した。対照的に、ペントキシフィリンのみで は、１ｍｇ／ｋｇの用量では効果を示さず、より高濃度で死亡率は高まった。

第二の実験では、ＴＮ３・１９．１２およびペントキシフィリンの両方をｌ　ｍ 　ｇ　／　ｋ　ｇで投与したが、ＴＮ３抗体はＬＰＳ投与の２時間前、ペントキ シフィリンは前の実験のようにＬＰＳ投与の５分前に与えた。結果を図２に示す が、ＷＪ方の処置を受けたマウスは、ＬＰＳ投与後２４時間、ＬＰ、Ｓ誘発死か ら防御された。しがしその後、死亡率は、コントロールまたはペントキシフィリ ン単独群に匹敵する水準まで上昇した。

このことは、ペントキシフィリンがＴＮ３に対して短い半減期をもつことが原因 であると考えられ、治療期間中にペントキシフィリンを反復投与（例えば１２ま たは２４時間で）することによって補えると思われた。

この仮説を確認するために、２０匹のグループのマウスを用いて別の実験を行っ た。以下のように３種の異なる処置のうち１種を各グループに施した： Ａ）コントロール、６０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ大腸菌ＬＰＳの静注後食塩水を注 射； Ｂ）ＴＮ３−１９．１２の１　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇを静注、２時間後に６０　ｍ 　ｇ　／　ｋ　ｇの大腸菌ＬＰＳで静注攻撃、さらに１　ｍ　ｇ／ｋｇのペント キシフィリンを該攻１１５分前に静注；Ｃ）Ｂ）と同様であるが、さらにこれら のマウスは、ＬＰＳ攻撃後２４．４８および７２時間後に１　ｍ　ｇ　／　ｋ　 ｇのペントキシフィリンの反復投与を行った。

この実験結果を図３に示す。先の実験のように、Ｂ）グループは、２４時間では コントロールと比べて、ＬＰＳの攻撃に対してより高い生存率を示したが、より 長時間の観察では、生存率はコントロールと顕著には異ならなかった。対照的に 、Ｃ）グループの生存率はコントロールより顕著に改善されており、２０匹のう ち１７匹のマウスがＬＰＳ攻撃７２時間後に生存していた。

１１旌Ｉ 上記に記載したのと同様な実験を、ガラクトサミン感作Ｃ５７ＢＬマウスで実施 した。このマウスをウマ流産菌のＬＰＳで攻撃した。生存率はＬＰＳ攻撃後９６ 時間でめた。

マウス当たり０．２μｇのＬＰＳおよび１０ｍｇのガラクトサミン投与の１時間 前に、０．１から０．２５ｍｇ／ｋｇの間の低用量ＴＮ３を静注投与したときは 、全く防御効果はなかった。対照的に３０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのキサンチン誘 導体ＨＷＡ１３８の腹腔的投与は、部分的に防御効果を有していた（２０％死亡 率抑制）。

３０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのＨＷＡ　１３８と一緒に、≧０．２ｍｇ／ｋｇの用 量でＴＮ３を共働投与したとき、３０　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのＨＷＡ　１３８単 独と比べて、死亡率は顕著に減少した。これらの結果は図４に示す。

ＨＷＡ　１３８の代わりにペントキシフィリンを用いてこの実験を繰り返し、図 ５に示したように同じ結果が得られた。

コノ場合、１００　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇのペントキシフィリンを、単独または低 用量のＴＮ３　（０，１０または０．１５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ　）と組み合わ せて用いたときは、全く防御効果はなかった。しかし、ペントキシフィリンを１ ０Ｑ　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇおよびＴＮ３を０．２５ｍｇ／ｋｇを組み合わせて投 与することによって。

死亡率は完全に抑制することができた。

ヘ　Ｏａ）　ｔｏ　−ｒ　（’Ｊ　Ｏの　■　−ｊ　（Ｎ　Ｑへ　へ　、−一一 一 橢羊／張：ｌＬＭ瞬士 Ｎ　Ｏの　ＬＤ　＋ｓＩＮ　ＯＱ）　ＬＯ＜　（Ｎ　Ｏへ　へ　、−一一一 牧羊／身ユ諧鱗士 死亡数 時間 図３ （％）陣餅＊ユ鷲 １４餅市：］γ 補正書の翻訳文提出書（特許法１８４条の８）平成　５年　４月３０日−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．同時に組み合わせて、または同時ではあるが別々に、または連続的に治療に 使用するための組み合わせ調製物として、ＴＮＦに対する抗体もしくはそのＴＮ Ｆ結合フラグメントおよびキサンチン誘導体を含む医薬生成物。 ２．ＴＮＦに対する抗体またはそのＴＮＦ結合フラグメントおよびキサンチン誘 導体を混合状態で含む医薬組成物の形態をとる請求の範囲１に記載の医薬生成物 。 ３．キサンチン誘導体対抗ＴＮＦ抗体の比が、４５０：１および１：１０の範囲 にある請求の範囲２に記載の医薬生成物。 ４．該キサンチン誘導体が次の式Ｉの化合物である請求の範囲１から３のいずれ かに記載の医薬生成物。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）式中、ラジカルＲ１およびＲ３のうち の１つは、３から８個の炭素原子をもつ直鎖アルキル、（ω−１）−オキソアル キルまたは（ω−１）−ヒドロキシアルキル基で、その他の２つのラジカル、Ｒ ２およびＲ３またはＲ１およびＲ２は直鎖もしくは分枝アルキル基を表し、その Ｒ１およびＲ３の位置に１から８個の炭素原子を、さらにそのＲ２の位置に１か ら４個の炭素原子をもつが、これら２つのアルキル置換基の総炭素原子数は１０ 個を越えない。 ５．該キサンチン誘導体が次の式ＩＩの化合物である請求の範囲１から３のいず れかに記載の医薬生成物。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）式中、Ｒは１から４個の炭素原子を もつアルキルラジカルを表す。 ６．該キサンチン誘導体が次の式ＩＩＩの化合物である請求の範囲１から３のい ずれかに記載の医薬生成物。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）式中、ラジカルＲ４およびＲ６の 少なくとも１つは、次の式ＩＩＩａの三級ヒドロキシアルキル基を表し、▲数式 、化学式、表等があります▼ＩＩＩａここで、Ｒ７は炭素原子が３個までのアル キル基を示し、ｎは２から５までの整数を示し、さらに、ラジカルＲ４またはＲ ６の１つだけが式ＩＩＩａの三級ヒドロキシアルキル基を示す場合、他のラジカ ルは水素原子または脂肪族炭化水素ラジカルＲ■を表し、これは６個までの炭素 原子をもち、さらにその炭素鎖は２個までの酸素原子が介在するか、またはオキ ソ基もしくは２つまでの水酸基によって置換されることができ（この場合、ラジ カルＲ■に存在するオキソもしくは水酸基は、好ましくは少なくとも２個の炭素 原子によって窒素から分離されている）、さらに、Ｒ５は１から４個の炭素原子 をもつアルキル基を表す。 ７．該キサンチン誘導体が式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物のプロドラッグまた は代謝産物の形態である請求の範囲４、５または６のいずれかに記載の医薬生成 物。 ８．該キサンチン誘導体が次のものを含む請求の範囲４に記載の医薬生成物。 １−ヘキシル−３，７−ジメチルキサンチン１−（５−ヒドロキシヘキシル）− ３，７−ジメチルキサンチン ３，７−ジメチル−１−（５−オキソヘキシル）キサンチン ７−（５−ヒドロキシヘキシル）−１，３−ジメチルキサンチン １，３−ジメチル−７−（５−オキソヘキシル）キサンチン １，３−ジ−ｎ−ブチル−７−（２−オキソプロピル）キサンチン １，３−ジ−ｎ−ブチル−７−（３−オキシブチル）キサンチン １−（５−ヒドロキシヘキシル）−３−メチル−７−プロピルキサンチン ３−メチル−１−（５−オキソヘキシル）−７−プロピルキサンチンまたは ３，７−ジメチル−１−（５−オキソヘキシル）キサンチン。 該キサンチン誘導体が次のものを含む請求の範囲６に記載の医薬生成物。 ７−エトキシメチル−１−（５−ヒドロキシ−５−メチルヘキシル）−３−メチ ルキサンチン ７−プロピル−１−（５−ヒドロキシ−５−メチルヘキシル）−３−メチルキサ ンチン、または １−（５−ヒドロキシ−５−メチルヘキシル）−３−メチルキサンチン。 Ｏ．抗ＴＮＦ抗体またはそのＴＮＦ結合フラグメントがＴＮＦ中和抗体または抗 体フラグメントである先行する請求の範囲のいずれかに記載の医薬生成物。 １．抗ＴＮＦ抗体または抗体フラグメントがモノスペシフィックである先行する 請求の範囲のいずれかに記載の医薬生成物。 ２．抗ＴＮＦ抗体または抗体フラグメントが組換え体抗体または抗体フラグメン トである先行する請求の範囲のいずれかに記載の医薬生成物。 ３．抗ＴＮＦ抗体または抗体フラグメントがヒト化組換え体抗体または抗体フラ グメントである請求の範囲１２に記載の医薬生成物。 ４．新形成療法中のＴＮＦ生成に付随する副作用の改善に使用するための先行す る請求の範囲のいずれかに記載の医薬生成物。 ５．抗リンパ球療法に付随するショック関連症候群の除去または改善に使用する ための請求の範囲１から１３のいずれかに記載の医薬生成物。 ６．多臓器不全の治療に使用する請求の範囲１から１３のいずれかに記載の医薬 生成物。 ７．敗血症または敗血症性／内毒素性ショック治療に使用する請求の範囲１から １３のいずれかに記載の医薬生成物。 ８．同時に組み合わせて、または同時であるが別々に、または連続的に治療に使 用するための組合せ調製物として用いる医薬生成物の製造に使用する、ＴＮＦに 対する抗体またはそのフラグメントおよびキサンチン誘導体の使用。 ９．抗ＴＮＦ抗体またはそのフラグメントおよびキサンチン誘導体の有効量を混 合することを含む請求の範囲２に記載の医薬生成物の製造方法。 ０．該抗体またはそのフラグメントおよびキサンチン誘導体が、医薬的に許容さ れる賦形剤、希釈剤または担体とともに混合される請求の範囲１９に記載の方法 。 １．望ましくない高水準のＴＮＦに付随する疾患に罹患している、またはその危 険性があるヒトまたは動物の治療方法であって、請求の範囲１に記載の医薬生成 物の有効量を当該主体に投与することを含む治療方法。 ２．０．００１から３０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量の抗ＴＮＦ抗体または抗体 フラグメントおよび０．５から１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量のキサンチン 誘導体を投与することを含む請求の範囲２１に記載の方法。