JPH0625005A - 緑内障の治療に有用な薬剤の製造のためのｘ−ａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ−ｙの使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 緑内障の治療に有用な薬剤の提供。 【構成】 緑内障の治療に有用な薬剤の製造のための、
式（Ｉ）の化合物の使用方法、ならびに活性成分として
式（Ｉ）の化合物を含有する眼科用薬剤組成物。 Ｘ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｙ （Ｉ） （式中、Ｘは、Ａｒｇのα−アミノ基に結合していて、
水素、Ｃ₁ −Ｃ₄ アシル基から選択され；Ｙは、Ａｓｐ
の位置１でカルボニル基に結合していて、ヒドロキシ
基、Ｃ₁ −Ｃ₄ アルコキシ基、ペプチド結合により前記
カルボニル基に結合しているアミノ酸セリンの残基から
選択される）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、緑内障の治療に有用な
薬剤の製造のための、式（Ｉ）： Ｘ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｙ （Ｉ） （式中、Ｘは、Ａｒｇのα−アミノ基に結合していて、
水素、炭素原子数１ないし４の（Ｃ₁ 〜Ｃ₄ ）アシル基
から選択され；Ｙは、Ａｓｐの位置１のカルボニル基に
結合していて、ヒドロキシ基、炭素原子数１ないし４の
（Ｃ₁ 〜Ｃ₄ ）アルコキシ基、ペプチド結合により前記
カルボニル基に結合したアミノ酸セリンの残基から選択
される）の化合物の使用法に関する。

【０００２】本発明に伴う使用法は、また式（Ｉ）の化
合物の薬学的に受容できる塩にも関係する。

【０００３】さらに、本発明は、活性成分として式Ｉの
化合物を含有する眼科用薬剤組成物にも関係する。

【０００４】

【従来の技術】トリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ
は、腫瘍細胞と細胞外基質との間の相互作用を阻害する
ことについて文献で周知である［ルオシュラティ（Ｒｕ
ｏｓｈｌａｔｉ）およびピエルシュバッチャー（Ｐｉｅ
ｒｓｃｈｂａｃｈｅｒ）、セル（Ｃｅｌｌ）４４：５１
７，１９８６］。

【０００５】Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐの免疫刺激活性
は、イタリア国特許第１，２２２，４３７に記載されて
いる。

【０００６】

【問題を解決するための手段】今、驚くべきことに、ト
リペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ、および前記一般式
（Ｉ）に包含されるその誘導体が、抗緑内障特性を有す
ることが見出された。

【０００７】Ｘがアセチル基であり、Ｙがアミノ酸セリ
ンの残基である式（Ｉ）の化合物が好ましい。トリペプ
チドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（本明細書では今後ＲＧＤ
と命名する）が特に好ましい。さらに、酢酸、トリフル
オロ酢酸、塩酸または硫酸との式（Ｉ）の化合物の付加
塩が好ましい。

【０００８】原発性解放角緑内障（ＰＯＡＧ）は、前眼
房のドレナージ流出系を通る房水経路の閉塞のために起
こると考えられる。

【０００９】比較的年長の患者の緑内障の眼の線維柱網
内への本発明の眼科用薬剤組成物の局所投与は、安定し
た低血圧効果を与える。上記の治療効果は、主として、
水分泌の有意の遮断を起こすことなく、水の流出能係数
（ａｑｕｅｏｕｓ ｏｕｔｆｌｏｗ ｆａｃｉｌｉｔｙ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）が有意に増大するためであ
る。抗緑内障効果はまた、本発明の化合物の非経口投与
後にも見られた。

【００１０】本発明の化合物の局所適用では、刺激、炎
症または眼高血圧のような局所的な副作用が全く起こら
ない。

【００１１】本発明の化合物の使用は、上部（ｅｐｉ）
−または内部（ｉｎｔｒａ）眼腫瘍の場合にはすすめら
れない。

【００１２】兎の眼のドレナージ流出系の形態学的な閉
塞は、リポソーム−ヒトフィブロネクチン複合体（ｌｉ
ｐｏｓｏｍｅ−ｈｕｍａｎ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ
ｃｏｍｐｌｅｘ）の単一房内投与によって作られた。

【００１３】リポソームは、逆相蒸発（ＲＥＶ）技術に
従う改良されたブリフ−ダイヤー法（Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙ
ｅｒ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）［ブリフ、イー・ジー（Ｂ
ｌｉｇｈ，Ｅ．Ｇ．）およびダイヤー、ダブリュー・ジ
ェイ（Ｄｙｅｒ，Ｗ．Ｊ．）（１９５９）Ｃａｎ．Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．３７，９１１−９
１７）を用いて、卵黄から製造した。フィブロネクチン
は、新鮮なまま凍結したクエン酸塩化ヒト血漿から、ア
キヤマ、エス・ケイ（Ａｋｉｙａｍａ，Ｓ．Ｋ．）およ
びヤマダ、ケイ・エム（Ｙａｍａｄａ，Ｋ．Ｍ．）（１
９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６０，４４９２−
４５００、の方法に従って精製した。

【００１４】下記の製造例で、実験モデルをさらに詳し
く説明する。製造例 リン脂質１００ｍｇを丸底フラスコ内のペンタン１５ｍ
ｌに溶解させ、ヒトフィブロネクチン（Ｆｎ）（２５μ
ｇ）を含有する、２価カチオンＣａ²⁺およびＭｇ²⁺を含
まないｐＨ７．２〜７．４のダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃ
ｃｏ）の標準リン酸塩−緩衝塩類溶液（ＮａＣｌ １４
０ミリモル／ｌ、ＫＣｌ ３ミリモル／ｌ、Ｎａ₂ ＨＯ
Ｐ₄ ・２Ｈ₂ Ｏ ６．５ミリモル／ｌ、ＫＨ₂ ＰＯ₄
１．５ミリモル／ｌ）［米国、ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）Ｌ
ａｂ．］５ｍｌを加えた。このフラスコを３０℃に温め
た水浴中に浸漬した。完全に混合した後、アルゴンを、
ガラス細管によって試料内に通した。ペンタンを、通常
は０．５−１．０ｍｌ／分の速度で除去した。混合物の
粘性の増加がペースト状の状態まで観察された。その
後、ゲルは比較的迅速に崩壊し、混濁した非粘性の間リ
ポソーム懸濁液が形成された。さらにアルゴンを散布し
た後、個々のゲル小滴が消失した。小胞の平均流体力学
的径は、多分散性２７％で３５０ｎｍであった。

【００１５】フィブロネクチン分子は、リポソーム小胞
のスペース内に組み入れられることができ、またはリポ
ソーム表面に結合することができる。製造中、酸化を妨
げるための予防措置がとられた。リポソーム−フィブロ
ネクチン複合体の組成物を得た。

【００１６】

【作用】リポソーム−フィブロネクチン複合体の眼内投
与前に、５％トリメカイン（Ｔｒｉｍｅｃａｉｎ）溶液
の点眼（１．５−２．０分間隔で３回）による局所麻酔
を行なった。続いて２％ノボカイン（Ｎｏｖｏｃａｉｎ
ｅ）溶液０．２ｍｌを結膜下に注射し、そして眼瞼の麻
酔および２つの垂直な直筋の麻酔をひき起こすために眼
外組織中に注射した。麻酔効果が達成された後、眼瞼を
ひろげて眼瞼ホルダーで固定し、そして眼球を下方（ｉ
ｎｆｅｒｉｏｒ）直筋の領域に鉗子によって固定した。
穿刺切開を、側頭上部四分円において縁から１．５−
２．０ｍｍ、角膜内に行なった。リポソーム８ｍｇ／ｍ
ｌおよび、ヒト血漿フィブロネクチン１０μｇ／ｍｌを
含む組成物（組成物Ａ）０．０７５ｍｌを、切開穴を通
じた房水の漏れを妨げるための針が角膜層を斜めに貫通
することができるようになっているインスリンシリンジ
に接続した２５ゲージ針で、兎の眼（ＯＤ）の前房内に
導入した。０．０７５ｍｌの量の偽薬［ダルベッコ（Ｄ
ｕｌｂｅｃｃｏ）の標準リン酸塩−緩衝塩類溶媒）を、
同様に片方の眼（ＯＳ）内に投与した。眼内圧（ＩＯ
Ｐ）値を、圧平眼圧計によって測定した。流体力学値
は、出発ＩＯＰ水準に従って５．５または１０ｇのプラ
ンジャー荷重をかけた電子サハロフ（Ｓａｃｈａｒｏ
ｖ）張力記録計を用いてグラント（Ｇｒａｎｔ）張力記
録法により監視した。張力記録法曲線は、前記組成物の
投与後３−５時間内およびその介入以来２４時間後に得
た。評価の２４時間後に、ＯＤはＩＯＰの有意の増大を
示し、これは房水流出うっ滞（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）の
ためＯＤにおいて２５．５６ｍｍＨｇに達した（Ｃ＝
０．１５ｍｍＨｇ）。対照（ＯＳ）眼における適当なＩ
ＯＰ値は、Ｃ値０．２４で９．３６ｍｍＨｇであった。

【００１７】実際には、リポソーム−フィブロネクチン
複合体の眼内投与の後３−５時間内には、ＩＯＰの増大
が起こった。基準値と比較して９．０−１２．０ｍｍＨ
ｇのＩＯＰの上昇は、通常、本組成物の投与後１時間で
すでに検出され、注射から最初の５時間以内は、上述の
増大した水準に保たれた。典型的には、本接着性組成物
の眼房内導入からの最初の４時間以内の房水産生の増大
は、おそらくは本組成物が増大した虹彩一毛様体組織要
素の透過性を誘発する能力のために、５．３８ｍｍ³ ／
分に達することができた。

【００１８】表１は、ＩＯＰ測定の結果を示している。

【００１９】 表 １ ４時間後の評価： 試験眼（リポソーム＋Ｆｎ） 対照眼（偽薬） Ｐｏ＝２４．３８mmＨｇ Ｐｏ＝１５．８８mmＨｇ Ｃ ＝ ０．３５ Ｃ ＝ ０．４４ Ｆ ＝ ５．３８ Ｆ ＝ ３．０３ 評価の２４時間後にドレナージ流出系の有意の細胞浸潤
が組織学的に観察され、リポソーム−フィブロネクチン
複合体に接着した細胞残屑が房水流出うっ滞をひき起こ
した。

【００２０】表２は、ＩＯＰ測定の結果を示す。

【００２１】 表 ２ ２４時間後の評価： 試験眼（リポソーム＋Ｆｎ） 対照眼（偽薬） Ｐｏ＝２６．５６mmＨｇ Ｐｏ＝ ９．３６mmＨｇ Ｃ ＝ ０．１５ Ｃ ＝ ０．２４ Ｆ ＝ ２．６ Ｆ ＝ ０．０８ 別の一連の対照実験は、リポソームの投与は眼内高血圧
または房水のうっ滞をひき起こさないだけであることを
示した。高血圧効果も房水流出のうっ滞も、純粋なヒト
血漿フィブロネクチンの房内導入後には検出されなかっ
た。

【００２２】

【実施例】下記の実施例によって本発明をさらに具体的
に説明する。実施例１ ７６匹の兎に、２価カチオンＣａ⁺²およびＭｇ⁺²を含ま
ないダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）の標準リン酸塩・
緩衝塩類溶液（ｐＨ７．２−７．４）中の０．５％のＲ
ＧＤ溶液４０μｌを３０分間右眼に滴下して前処理を行
なった。第一の眼の挑戦は、前記の製造例において得た
組成物Ａ ０．０７５ｍｌを用いて実施した。左眼は、
同一時間間隔内に同一体積の偽薬［ダルベッコ（Ｄｕｌ
ｂｅｅｃｏ）の標準リン酸塩−緩衝塩類溶液で同様に処
理した。眼の挑戦後に、両眼を２４−３０時間以内に、
前記製造例に記載したように試験した。組織学的試験は
この挑戦の２４時間後に実施した。摘出した眼を１０％
中性緩衝化ホルムアルデヒド溶液中に固定し、グレード
（等級）アルコール中で脱水し、パラフィン中に埋め込
んだ。ヘマトキシリンおよびリン脂質用のエオシンまた
はスダンブラック（リポソーム染色）で染色された全眼
の切片を、高血圧および房水流出能うっ滞のモデル化
中、眼における構造的変化または炎症反応を評価するた
めに使用した。挑戦された眼の組織の組織学的切片にお
ける炎症の程度は、虹彩および周囲の組織の急性炎症細
胞による浸潤について、そして前眼房内への浸潤の拡張
について採点された。局所的な許容可能性は眼の刺激反
応の評価をもとにした。処理眼と対照眼との間にＩＯＰ
基準線の上昇は、統計的に異なった（Ｐ＜０．０１）。
処理眼はＩＯＰ平均基準線１６．５ｍｍＨｇで出発し
て、相当するＣ値（流出能）０．３３をもち、１７．３
０ｍｍＨｇという評価の２４時間後の平均Ｐｏ値を示
し、一方対照眼のＩＯＰ増加は、同じ２４時間間隔で、
平均値２２．３８ｍｍＨｇをもつ顕著に増大したＰｏ値
および房水流出能（Ｃ＝０．１３）のうっ滞を示した。
そのため、０．５％、ＲＧＤＳの眼の局所処理は、房水
流出脳のうっ滞において２．５倍の防止を与える。０．
５％のＲＧＤＳペプチド溶液の局所適用は、障害、充
血、灼熱感のような刺激を誘発しなかった。リポソーム
−フィブロネクチン複合体の眼内投与の３０分前に０．
５％ ＲＧＤＳペプチド溶液で、単一の眼の前処理を行
なうと、前眼房角の流出通路における細胞／リポソーム
／フィブロネクチン残屑の沈着が妨げられ、そして眼内
炎症の誘発が予防され、一方リポソーム−フィブロネク
チン複合体を用いる前眼房挑戦の前に偽薬で処理する
と、はっきりした炎症反応が誘発された。実施例２ ０．２５％ＲＧＤペプチド溶液を使用することを除き、
実施例１と同じ方法に従って、下記の結果を得た。

【００２３】０．２５％ＲＧＤの単一用量の圧力低下効
果は、２４時間後まで観察され、その最も目立つ活性
は、房内投与後少なくとも４時間では続いており、一方
偽薬処理した眼は、同じ時間内に基準線から１４０％増
大を示した。処理眼と対照眼との間のＩＯＰの差異は有
意である（Ｐ＜０．００１）ことがわかった。前眼房の
リポソーム−フィブロネクチン複合体を用いた挑戦は、
最初の４時間以内には著しい眼の炎症反応をひき起こさ
なかったが、偽薬で処理した眼においては眼の挑戦後４
時間で相当する４０．１８ｍｍＨｇに達するＰｏ値の著
しい増大をともなって、有意の房水流出能うっ滞（Ｃ＝
０．１２）を誘発した。房水流出経路の閉塞は、組織学
的試験によってはっきりと述べることができ、いくつか
の関係する急性または慢性炎症細胞は前眼房における閉
塞の形態学的基質として注目された。基本的には、房水
流出うっ滞という現像は、前眼房挑戦の４時間後にピー
クとなるようにみえた。もう一方の眼を、０．２５％Ｒ
ＧＤ溶液４０μｌで単一前処理すると、かなり流出能が
増大し（Ｃ＝０．３７）、同じ間隔で監視したときの眼
内高血圧が防止された。リポソーム−細胞沈着物の解離
は、水流出経路において検出することができ、粒子状残
屑のない領域の保存が組織学的試験によって眼のドレナ
ージ領域に現われた。実施例３ 安定化した原発性開放角緑内障（進行した段階のＰＯＡ
Ｇ）によって冒された年長の患者を滴径約３５μｌで滴
びんから投与した０．５％ＲＧＤ洗眼薬で治療した。賦
形薬は、２価カチオンＣａ²⁺およびＭｇ²⁺を含まないダ
ルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）の標準リン酸塩−緩衝塩
類溶液（ｐＨ７．２−７．４）であった。滴剤を午前８
時および午後８時に投与した。眼内圧を午後３時に圧平
眼圧測定法によって測定した。眼の許容可能性は以下の
症状チェックリストを使用した後で評価した：障害、充
血、灼熱感、光恐怖、涙が起こらなかった。この研究の
短期間という性質のため、視野および視野神経乳頭形態
学の変化は評価しなかった。データを集めて、バリアン
ス（Ｖａｒｉａｎｃｅ）、スチューデント（Ｓｔｕｄｅ
ｎｔ）のｔ試験、および対になったスチューデント（Ｓ
ｔｕｄｅｎｔ）のｔ試験の分析を用いて分析した。Ｐ＜
０．０５という値は、行なわれたすべての統計学的試験
に対して統計学的に有意義であると考えられた。

【００２４】眼内圧の値は、治療の前および治療の間記
録された。表３には、緑内障治療の統計学的分析の結果
が示されている。

【００２５】症状のリストに基づく局所許容可能性は、
すべての治療に対して優れていた。前眼房には発赤また
は細胞（ｃｅｌｌｓ）はみられなかった。

【００２６】

【表３】 実施例４ 実施例３のものと同じ方法を使用して、ＰＯＡＧに冒さ
れた年長患者群について、用量−効果相関研究を実施し
た。各々０．１、０．２５、０．５％Ｗ／ＶＲＧＤを含
む溶液を試験した。

【００２７】表４は、用量−効果相関研究の結果を示し
ている。

【００２８】

【表４】 すべての患者は、全評価期間中経験を積んだ眼科医によ
って継続的に管理された。ＲＧＤ−ペプチドを用いた治
療が治療の最初の何日か以内に無効であった場合には、
この処置は中断され（０．１％ＲＧＤ溶液を用いたデー
タ参照）、そして患者は直ちにチモロールおよびピロカ
ルピンを用いた通常の治療に移された。

【００２９】式（Ｉ）の化合物はまた、眼の外傷および
硝子体増殖過程（ｖｉｔｒｅｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｉｖ
ｅ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ）の場合に網膜剥離の予防のた
めに、眼内水晶体移植、後水晶体色の線維症に関連する
炎症（続発性白内障）を予防するために使用することも
できるという実験的証拠もある。式（Ｉ）の化合物の別
の用途には、角膜上皮修復および外科手術後の傷の治癒
を促進するためのそれらのポリマー移植片、シートまた
はコンタクトレンズ上での固定がある。

【００３０】本眼科用薬剤組成物の中で、洗眼薬が特に
好ましい。洗眼薬は、塩化ベンザルコニウム、エチレン
ジアミン四酢酸、および当技術分野で公知のその他の任
意の賦形剤を含むリン酸塩緩衝塩類溶液のような眼科用
に適する賦形剤と混合した、治療上有効な量の式（Ｉ）
の化合物より成る。この洗眼薬の最終的なｐＨは、７．
２ないし７．４となっているであろう。そして溶液はＣ
ａ²⁺およびＭｇ²⁺のような２価の正イオンを含んでいて
はならない。

【００３１】本発明の眼科用組成物は、米国マック出版
社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．“レミントンズ・ファー
マシューティカル・サイエンシーズ・ハンドブック（Ｒ
ｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ）”に記載され
たような通常の技術に従って製造することができ、例え
ば、洗眼薬、液剤、軟膏、薬物を添加した栓子の形であ
ることができる。

【００３２】式（Ｉ）の化合物は、抗緑内障活性を働か
せるのに有用な量で含有される。

【００３３】用量ならびに薬量学は、病気の重さ、患者
の年令および身体の状態に従って専門医によって推定さ
れるであろう。

【００３４】例として、液剤の形の本薬剤組成物は、活
性成分０．１ないし１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．２
ないし５．０ｍｇ／ｍｌ、を含有するであろう。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成５年４月７日

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２８】

【表４】 すべての患者は、全評価期間中経験を積んだ眼科医によ
って継続的に管埋された。ＲＧＤ−ペプチドを用いた治
療が治療の最初の何日か以内に無効であった場合には、
この処置は中断され（０．１％ＲＧＤ溶液を用いたデー
タ参照）、そして患者は直ちにチモロールおよびピロカ
ルピンを用いた通常の治療に移された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｋ 5/08 8018−4Ｈ 5/10 ＺＮＡ 8018−4Ｈ

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 緑内障の治療に有用な薬剤の製造のため
   の、式（Ｉ）： Ｘ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｙ （Ｉ） （式中、Ｘは、Ａｒｇのα−アミノ基に結合していて、
   水素、炭素原子数１ないし４のアシル基から選択され；
   Ｙは、Ａｓｐの１の位置のカルボニル基に結合してい
   て、ヒドロキシ基、炭素原子数１ないし４のアルコキシ
   基、ペプチド結合により前記カルボニル基に結合してい
   るアミノ酸セリンの残基から選択される）の化合物およ
   びその薬学的に受容できる塩の使用法。
2. 【請求項２】 Ｘが水素であり、Ｙがヒドロキシ基であ
   る式（Ｉ）の化合物の請求項１に記載の使用法。
3. 【請求項３】 Ｘがアセチル基であり、Ｙがアミノ酸セ
   リンの残基である式（Ｉ）の化合物の請求項１に記載の
   使用法。
4. 【請求項４】 式（Ｉ）の化合物の塩が酢酸塩、トリフ
   ルオロ−酢酸塩、塩酸塩、硫酸塩から選択される、請求
   項１〜３に記載の使用法。
5. 【請求項５】 活性成分として式（Ｉ）の化合物を含有
   する眼科用薬剤組成物。
6. 【請求項６】 洗眼薬、液剤、軟膏の形の、請求項５に
   記載の薬剤組成物。