JPH06211884A - 糖脂質の定量的精製方法 - Google Patents
糖脂質の定量的精製方法Info
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- JPH06211884A JPH06211884A JP5275217A JP27521793A JPH06211884A JP H06211884 A JPH06211884 A JP H06211884A JP 5275217 A JP5275217 A JP 5275217A JP 27521793 A JP27521793 A JP 27521793A JP H06211884 A JPH06211884 A JP H06211884A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
- C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
- C07H13/04—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals attached to acyclic carbon atoms
- C07H13/06—Fatty acids
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 糖脂質を定量的に精製するための方法。
【構成】 この方法による糖脂質の精製は、糖脂質含有
溶液をpH５.０以下に酸性化し、次にバッチを６０〜１
３０℃に加熱し、次にバッチを５０℃以下に冷却し、そ
して５００ｇ以上で遠心分離して糖脂質含有相を沈降さ
せることにより行なわれる。
溶液をpH５.０以下に酸性化し、次にバッチを６０〜１
３０℃に加熱し、次にバッチを５０℃以下に冷却し、そ
して５００ｇ以上で遠心分離して糖脂質含有相を沈降さ
せることにより行なわれる。
Description
【０００１】糖脂質は脂肪酸および糖残基よりなる。最
もよく知られた糖脂質の１つはトレハロース脂質（Suzu
ki et al., 1969, Agric. Biol. Chem. 33, 1619〜162
7）である。これは２糖類トレハロースおよび２つのα
−分枝鎖β−ヒドロキシ脂肪酸（クリノマイコリック
酸）を有し、これらが糖のヒドロキシル基でエステル化
されている。ラムノースおよびβ−ヒドロキシ脂肪酸を
含有する糖脂質は欧州特許０１５３６３４号に記載され
ている。最初に構造が決定されたラムノ脂質は、Ｌ−ラ
ムノース２分子およびβ−ヒドロキシデカン酸２分子を
有する（EwardsとHayashi, 1965, Arch. Biochem. Biop
hys., 111, 415〜421）。
もよく知られた糖脂質の１つはトレハロース脂質（Suzu
ki et al., 1969, Agric. Biol. Chem. 33, 1619〜162
7）である。これは２糖類トレハロースおよび２つのα
−分枝鎖β−ヒドロキシ脂肪酸（クリノマイコリック
酸）を有し、これらが糖のヒドロキシル基でエステル化
されている。ラムノースおよびβ−ヒドロキシ脂肪酸を
含有する糖脂質は欧州特許０１５３６３４号に記載され
ている。最初に構造が決定されたラムノ脂質は、Ｌ−ラ
ムノース２分子およびβ−ヒドロキシデカン酸２分子を
有する（EwardsとHayashi, 1965, Arch. Biochem. Biop
hys., 111, 415〜421）。
【０００２】今日まで知られている糖脂質は、それぞ
れ、糖および脂肪酸の部分により、２５０〜２０００ダ
ルトンの分子量を有する。これらは、例えば、細菌によ
り周囲の栄養培地に放出され、いくつかの異なる糖脂質
の混合物として蓄積する（欧州特許０１５３６３４）。
糖脂質は例えば、乳化剤、生物界面活性剤または乳液用
の安定剤として使用することができる。
れ、糖および脂肪酸の部分により、２５０〜２０００ダ
ルトンの分子量を有する。これらは、例えば、細菌によ
り周囲の栄養培地に放出され、いくつかの異なる糖脂質
の混合物として蓄積する（欧州特許０１５３６３４）。
糖脂質は例えば、乳化剤、生物界面活性剤または乳液用
の安定剤として使用することができる。
【０００３】糖脂質を精製するための方法は、抽出、結
晶化およびクロマトグラフィー法に基づく（欧州特許０
２８２９４２号；米国特許４８１２２７２号）。しかし
ながら、この方法では大量の溶媒が生じる。Mulligan
と Gibbs (J. Chem. Tech. Biotechnol. 1990, 47, 23
〜29）はサーファクチン（surfactin）およびラムノ脂
質のような生物界面活性剤を精製するための限外濾過法
を記載している。しかしながら、この文献に記載されて
いる膜の保持容量は孔径が増大するに従い減少する。３
０,０００ダルトンのカットオフ点を有する膜について
は、これは、７７％を超える糖脂質の損失をもたらす。
晶化およびクロマトグラフィー法に基づく（欧州特許０
２８２９４２号；米国特許４８１２２７２号）。しかし
ながら、この方法では大量の溶媒が生じる。Mulligan
と Gibbs (J. Chem. Tech. Biotechnol. 1990, 47, 23
〜29）はサーファクチン（surfactin）およびラムノ脂
質のような生物界面活性剤を精製するための限外濾過法
を記載している。しかしながら、この文献に記載されて
いる膜の保持容量は孔径が増大するに従い減少する。３
０,０００ダルトンのカットオフ点を有する膜について
は、これは、７７％を超える糖脂質の損失をもたらす。
【０００４】これらの損失が生じない別の膜分離方法
は、欧州ＰＣＴ出願９１０１７５６号に記載されてい
る。この方法の不都合な点は、精製および濃縮の回数が
増大するに従って透過性が減少する点である。ラムノ脂
質はまた、培養溶液を酸性化し、次いでバッチ全体を２
〜３日間約４℃に冷却することにより、培養溶液から精
製できる(Jarvis, F.G., Johnson, M.J., J. Amer. Che
m. Soc. 71, 4124 (1949)）。Davis等(米国特許４,９３
３,２８１号）もまた、培養溶液を酸性化し、次にバッ
チ全体を冷却することにより、培養溶液からラムノ脂質
を精製している。実施例３は培養溶液をどのように硫酸
でpH２.５に合わせ、次に、一夜４℃に保持するかの方
法を記載している。遠心分離の後のラムノ脂質の収率は
７３％である。
は、欧州ＰＣＴ出願９１０１７５６号に記載されてい
る。この方法の不都合な点は、精製および濃縮の回数が
増大するに従って透過性が減少する点である。ラムノ脂
質はまた、培養溶液を酸性化し、次いでバッチ全体を２
〜３日間約４℃に冷却することにより、培養溶液から精
製できる(Jarvis, F.G., Johnson, M.J., J. Amer. Che
m. Soc. 71, 4124 (1949)）。Davis等(米国特許４,９３
３,２８１号）もまた、培養溶液を酸性化し、次にバッ
チ全体を冷却することにより、培養溶液からラムノ脂質
を精製している。実施例３は培養溶液をどのように硫酸
でpH２.５に合わせ、次に、一夜４℃に保持するかの方
法を記載している。遠心分離の後のラムノ脂質の収率は
７３％である。
【０００５】今回意外にも、糖脂質含有溶液を酸性化
し、次にバッチ全体を加熱し、次にバッチを冷却した
後、遠心分離することにより、糖脂質を定量的に精製で
きることが判かった。従って本発明は、糖脂質含有溶液
をpH５.０以下に酸性化し、次にバッチを６０〜１３０
℃に加熱し、次にバッチを５０℃以下に冷却し、バッチ
を遠心分離して糖脂質含有相を分離することにより糖脂
質を精製する、糖脂質の定量的精製のための方法に関す
る。本発明を、特にその好ましい実施態様において、以
下に詳細に記載する。
し、次にバッチ全体を加熱し、次にバッチを冷却した
後、遠心分離することにより、糖脂質を定量的に精製で
きることが判かった。従って本発明は、糖脂質含有溶液
をpH５.０以下に酸性化し、次にバッチを６０〜１３０
℃に加熱し、次にバッチを５０℃以下に冷却し、バッチ
を遠心分離して糖脂質含有相を分離することにより糖脂
質を精製する、糖脂質の定量的精製のための方法に関す
る。本発明を、特にその好ましい実施態様において、以
下に詳細に記載する。
【０００６】「定量的」という表現は、糖脂質の収率
が、出発溶液中に含有される糖脂質の量に基づいて、９
０％〜９９％となることを指す。略号「ｇ」の定義はｇ
＝９.８０６６５ｍ／ｓ2である。この値は、重力により
加速度に対する確立された標準値として、重量および測
定に関する第３回会議で１９０１年に定義された。本発
明の方法は、実験室規模（ミリリットル〜リットル範
囲）および工場規模（立法メートル規模）の両方の精製
のために用いることができる。糖脂質は植物または細菌
に存在する。微生物の醗酵は糖脂質の調製に好適であ
る。この目的のために、微生物をそれ自体知られた方法
で培養する。培地に分泌された糖脂質は、醗酵終了後、
本発明の方法を用いて定量的に精製する。
が、出発溶液中に含有される糖脂質の量に基づいて、９
０％〜９９％となることを指す。略号「ｇ」の定義はｇ
＝９.８０６６５ｍ／ｓ2である。この値は、重力により
加速度に対する確立された標準値として、重量および測
定に関する第３回会議で１９０１年に定義された。本発
明の方法は、実験室規模（ミリリットル〜リットル範
囲）および工場規模（立法メートル規模）の両方の精製
のために用いることができる。糖脂質は植物または細菌
に存在する。微生物の醗酵は糖脂質の調製に好適であ
る。この目的のために、微生物をそれ自体知られた方法
で培養する。培地に分泌された糖脂質は、醗酵終了後、
本発明の方法を用いて定量的に精製する。
【０００７】本発明の方法は好ましくは、ラムノ脂質の
精製のために用いる。α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−
ヒドロキシデカン酸、２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシ
ル−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカン
酸、２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−α−Ｌ−ラム
ノピラノシル−β−ヒドロキシデカノイル−β−ヒドロ
キシデカン酸またはα−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒ
ドロキシデカノイル−β−ヒドロキシデカン酸の精製が
特に好ましい。本発明の方法は下記に示すとおり、一連
の工程からなる。
精製のために用いる。α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−
ヒドロキシデカン酸、２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシ
ル−α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカン
酸、２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−α−Ｌ−ラム
ノピラノシル−β−ヒドロキシデカノイル−β−ヒドロ
キシデカン酸またはα−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒ
ドロキシデカノイル−β−ヒドロキシデカン酸の精製が
特に好ましい。本発明の方法は下記に示すとおり、一連
の工程からなる。
【０００８】１． 糖脂質含有溶液、好ましくは細菌醗
酵から得られる培養溶液をpH≦５.０に酸性化する。好
ましくは溶液はpH２.５〜４.０に調節する。酸性化は化
学者の知る全ての酸で行なうことができる（例えば硫
酸、発煙硫酸、塩酸、リン酸など）。本発明の方法のた
めには何れの所望の濃度の酸を用いてもよい。糖脂質含
有溶液の希釈が望ましくない場合は、結果的に極めて濃
縮された酸を使用しなければならない。酸は溶液を撹拌
しながら、pHを連続的にモニタリングしながら添加す
る。
酵から得られる培養溶液をpH≦５.０に酸性化する。好
ましくは溶液はpH２.５〜４.０に調節する。酸性化は化
学者の知る全ての酸で行なうことができる（例えば硫
酸、発煙硫酸、塩酸、リン酸など）。本発明の方法のた
めには何れの所望の濃度の酸を用いてもよい。糖脂質含
有溶液の希釈が望ましくない場合は、結果的に極めて濃
縮された酸を使用しなければならない。酸は溶液を撹拌
しながら、pHを連続的にモニタリングしながら添加す
る。
【０００９】２． 酸性化の後、バッチを６０〜１３０
℃、好ましくは９０〜１１０℃に加熱する。加熱工程に
必要な時間は変えることができる。例えば所望の最高温
度に達した直後に加熱工程を停止することができる。バ
ッチ内に病原性微生物が含まれる場合は、微生物を不活
性化するために必要な温度を、これらの微生物が不活性
化されるまで維持する。どの微生物が病原性であり、ど
の温度および時間が不活性化に必要であるかは、当業者
により知られる程度のものである。
℃、好ましくは９０〜１１０℃に加熱する。加熱工程に
必要な時間は変えることができる。例えば所望の最高温
度に達した直後に加熱工程を停止することができる。バ
ッチ内に病原性微生物が含まれる場合は、微生物を不活
性化するために必要な温度を、これらの微生物が不活性
化されるまで維持する。どの微生物が病原性であり、ど
の温度および時間が不活性化に必要であるかは、当業者
により知られる程度のものである。
【００１０】３． 酸性化および上昇温度工程の後、バ
ッチ全体を５０℃以下、好ましくは２０〜３０℃に冷却
する。冷却工程の時間は冷却の性質（例えば、比較的小
型のバッチの場合は冷蔵庫内で、大型の醗酵器の冷却は
熱交換機で）および／または使用する冷却剤（河川水、
冷却塩水）により決定する。好都合には、冷却工程は、
使用するエネルギーの費用と冷却工程の時間との関係か
ら好ましい経済的方法で実施する。
ッチ全体を５０℃以下、好ましくは２０〜３０℃に冷却
する。冷却工程の時間は冷却の性質（例えば、比較的小
型のバッチの場合は冷蔵庫内で、大型の醗酵器の冷却は
熱交換機で）および／または使用する冷却剤（河川水、
冷却塩水）により決定する。好都合には、冷却工程は、
使用するエネルギーの費用と冷却工程の時間との関係か
ら好ましい経済的方法で実施する。
【００１１】４． 最後の工程では、５０℃以下、好ま
しくは２０〜３０℃に冷却しておいたバッチを遠心分離
する。遠心分離は層が分離するまで、５００ｇ以上で行
なう。遠心分離後は、糖脂質は下層に存在する。工程を
実験室規模で実施する場合は、単に上層を除去すること
により下層を回収してその後の処理に付す。工程を工場
規模で実施する場合は、市販の分離器（例えばドイツの
Westfalia社製またはAlpha-Laval社製）およびデカンタ
ーを用いて層を分離し、糖脂質含有層を単離する。
しくは２０〜３０℃に冷却しておいたバッチを遠心分離
する。遠心分離は層が分離するまで、５００ｇ以上で行
なう。遠心分離後は、糖脂質は下層に存在する。工程を
実験室規模で実施する場合は、単に上層を除去すること
により下層を回収してその後の処理に付す。工程を工場
規模で実施する場合は、市販の分離器（例えばドイツの
Westfalia社製またはAlpha-Laval社製）およびデカンタ
ーを用いて層を分離し、糖脂質含有層を単離する。
【００１２】糖脂質の収率は出発溶液中に含有される糖
脂質の量に基づき、９０〜９９％である。本発明の方法
の工程１で使用する溶液を出発溶液とする。糖脂質含有
溶液を先ず６０〜１３０℃に加熱した後に室温に冷却し
てpH５.０以下に酸性化しても、糖脂質の定量的精製は
達成できないことが比較実験により解っている。本発明
の方法は、既に説明したとおり、糖脂質の定量的精製に
用いる。当然ながらこれらを濃縮するためにも用いるこ
とができる。既存の方法と比較して、本発明の方法は以
下の利点を有する。
脂質の量に基づき、９０〜９９％である。本発明の方法
の工程１で使用する溶液を出発溶液とする。糖脂質含有
溶液を先ず６０〜１３０℃に加熱した後に室温に冷却し
てpH５.０以下に酸性化しても、糖脂質の定量的精製は
達成できないことが比較実験により解っている。本発明
の方法は、既に説明したとおり、糖脂質の定量的精製に
用いる。当然ながらこれらを濃縮するためにも用いるこ
とができる。既存の方法と比較して、本発明の方法は以
下の利点を有する。
【００１３】本発明の方法は、一夜、即ち１２〜１６時
間４℃に冷却するという従来技術（米国特許４,９３３,
２８１号）に記載されている操作工程が省略されるた
め、時間の節約になる。収率が、米国特許４,９３３,２
８１号に記載されている７３％から９０〜９９％に向上
する。醗酵に病原性微生物を使用した場合、多くの国で
法的に規定されている微生物の破壊が、本発明の方法で
は加熱操作の間に行われるため、通常では必要となる付
加的な操作工程が省略できる。
間４℃に冷却するという従来技術（米国特許４,９３３,
２８１号）に記載されている操作工程が省略されるた
め、時間の節約になる。収率が、米国特許４,９３３,２
８１号に記載されている７３％から９０〜９９％に向上
する。醗酵に病原性微生物を使用した場合、多くの国で
法的に規定されている微生物の破壊が、本発明の方法で
は加熱操作の間に行われるため、通常では必要となる付
加的な操作工程が省略できる。
【００１４】
実施例１ Ｌ−ラムノースを単離するための工場規模でのバッチ醗
酵 ａ） 予備培養 予備培養栄養溶液（表１）４リットル中のPseudomonas
aeruginosa DSM 7107株の第１回目の予備培養液を振と
うフラスコ（各々、栄養溶液５００mlの入った２リット
ル容の三角フラスコ、３０℃、２００rpm、２０時間）
中で調製した。第１回目の予備培養液全体を接種して第
２回目の予備培養液（３５０リットル）とした。この目
的のために、菌株ＤＳＭ７１０７を、通気速度１８０リ
ットル／分および撹拌速度３００rpmで複合予備培養栄
養溶液（表１）３５０リットルの入った４５０リットル
の醗酵器中、１６時間２８℃で好気的に醗酵させた。
酵 ａ） 予備培養 予備培養栄養溶液（表１）４リットル中のPseudomonas
aeruginosa DSM 7107株の第１回目の予備培養液を振と
うフラスコ（各々、栄養溶液５００mlの入った２リット
ル容の三角フラスコ、３０℃、２００rpm、２０時間）
中で調製した。第１回目の予備培養液全体を接種して第
２回目の予備培養液（３５０リットル）とした。この目
的のために、菌株ＤＳＭ７１０７を、通気速度１８０リ
ットル／分および撹拌速度３００rpmで複合予備培養栄
養溶液（表１）３５０リットルの入った４５０リットル
の醗酵器中、１６時間２８℃で好気的に醗酵させた。
【００１５】（表１） 予備培養栄養溶液 １０ｇ／リットル グルコース ５ｇ／リットル カゼインペプトン １ｇ／リットル 酵母エキス ０.５ｇ／リットル ＮａＣｌ 第２回目の予備培養液全体を接種して本培養とした。
【００１６】ｂ） 本培養 表２に示す栄養溶液１７ｍ3を名目容量約３０ｍ3の醗酵
器中に調製した。 （表２） 本培養栄養溶液 ６.４７ｇ／リットル ７５％濃度のＨ3ＰＯ4 約８.９４ｇ／リットル ３３％濃度のＮａＯＨ ０.５ｇ／リットル ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １ｇ／リットル ＫＣｌ １５ｇ／リットル ＮａＯＨ １２５ｇ／リットル 大豆油
器中に調製した。 （表２） 本培養栄養溶液 ６.４７ｇ／リットル ７５％濃度のＨ3ＰＯ4 約８.９４ｇ／リットル ３３％濃度のＮａＯＨ ０.５ｇ／リットル ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １ｇ／リットル ＫＣｌ １５ｇ／リットル ＮａＯＨ １２５ｇ／リットル 大豆油
【００１７】この溶液を調製では、必要量の水を準備し
た後にＨ3ＰＯ4とＮａＯＨを用いてpH６.８とした。栄
養溶液の残りの成分を添加した後に、Ｈ2ＳＯ4でpH６.
２に補正した。４５分間滅菌した後のpHは約６.３であ
った。微量元素（表３）を含有する溶液を別の容器中で
滅菌した。このために、以下に示す物質を脱イオン水１
５０リットル中に溶解し、滅菌した。
た後にＨ3ＰＯ4とＮａＯＨを用いてpH６.８とした。栄
養溶液の残りの成分を添加した後に、Ｈ2ＳＯ4でpH６.
２に補正した。４５分間滅菌した後のpHは約６.３であ
った。微量元素（表３）を含有する溶液を別の容器中で
滅菌した。このために、以下に示す物質を脱イオン水１
５０リットル中に溶解し、滅菌した。
【００１８】（表３） 微量元素溶液 ２mg／リットル クエン酸ナトリウム２水塩 ０.２８mg／リットル ＦｅＣｌ3・６Ｈ2Ｏ １.４mg／リットル ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １.２mg／リットル ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １.２mg／リットル ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０.８mg／リットル ＭｎＳＯ4・１Ｈ2Ｏ 脱イオン水 濃度データは本培養１リットルを参照
【００１９】この微量元素溶液は接種前、次いでその後
３回、即ち醗酵約２０、４０および７０時間後に、滅菌
条件下で本醗酵器に添加した。予備培養器中の内容物全
体（３５０リットル）を種菌として用いた。醗酵温度は
３０℃であった。醗酵の最初の１０時間は、培養液は２
５０ｍ3／時間で通気し、１０時間目から３０時間目ま
では４００ｍ3／ｈで、そして、３０時間目からは１０
０〜７５ｍ3／ｈで通気した。
３回、即ち醗酵約２０、４０および７０時間後に、滅菌
条件下で本醗酵器に添加した。予備培養器中の内容物全
体（３５０リットル）を種菌として用いた。醗酵温度は
３０℃であった。醗酵の最初の１０時間は、培養液は２
５０ｍ3／時間で通気し、１０時間目から３０時間目ま
では４００ｍ3／ｈで、そして、３０時間目からは１０
０〜７５ｍ3／ｈで通気した。
【００２０】発泡を制御するために、別途、滅菌したシ
リコーン消泡剤ＶＰ １１３３（Wacker社製）を用い
て、これを醗酵溶液の発泡挙動に応じて、そして泡沫電
極を用いて、少しずつ醗酵器に計量投入した。直径１０
４０mmのタービン４個を有するラジアル撹拌機を撹拌エ
レメントとして用いた（撹拌機直径：醗酵器直径＝０.
４：１）。醗酵の最初の１０時間の回転速度は５０rpm
であり、そして、１０時間以降は７５rpmとした。ラム
ノ脂質約７８ｇおよびラムノース約３２ｇのラムノース
含有分を、上記醗酵条件下の１６７時間の醗酵で、培養
溶液１リットル当り得た。
リコーン消泡剤ＶＰ １１３３（Wacker社製）を用い
て、これを醗酵溶液の発泡挙動に応じて、そして泡沫電
極を用いて、少しずつ醗酵器に計量投入した。直径１０
４０mmのタービン４個を有するラジアル撹拌機を撹拌エ
レメントとして用いた（撹拌機直径：醗酵器直径＝０.
４：１）。醗酵の最初の１０時間の回転速度は５０rpm
であり、そして、１０時間以降は７５rpmとした。ラム
ノ脂質約７８ｇおよびラムノース約３２ｇのラムノース
含有分を、上記醗酵条件下の１６７時間の醗酵で、培養
溶液１リットル当り得た。
【００２１】実施例２ Ｌ−ラムノース製造のための工場規模での供給バッチ醗
酵 実施例１の組成物を有する本培養培地１８.５ｍ3に予備
培養液３５０リットル（実施例１に記載のとおり）を接
種した。Pseudomonas aeruginoss DSM7108株を生産菌株
として用いた。接種前、および醗酵２０、４０、７０お
よび１２０時間後に、微量元素溶液（実施例１参照）を
各々、滅菌条件下に添加した。通気速度は以下の通りと
した。即ち、醗酵開始時は２５０ｍ3／ｈ、醗酵１０時
間後は３５０ｍ3／ｈ、そして醗酵３０時間後は発泡強
度に応じて１００〜１３０ｍ3／ｈとした。撹拌は、醗
酵の最初の１０時間は５０rpmで、そしてその後は７５r
pmで行なった。醗酵７２時間〜１０９時間は、更に５６
４リットルの大豆油を継続的に計量投入した。発泡は実
施例１と同様に制御した。所定の醗酵条件下でラムノ脂
質９５ｇおよびラムノース含量３９〜４０ｇを９日間で
培養溶液１リットル当り得た。
酵 実施例１の組成物を有する本培養培地１８.５ｍ3に予備
培養液３５０リットル（実施例１に記載のとおり）を接
種した。Pseudomonas aeruginoss DSM7108株を生産菌株
として用いた。接種前、および醗酵２０、４０、７０お
よび１２０時間後に、微量元素溶液（実施例１参照）を
各々、滅菌条件下に添加した。通気速度は以下の通りと
した。即ち、醗酵開始時は２５０ｍ3／ｈ、醗酵１０時
間後は３５０ｍ3／ｈ、そして醗酵３０時間後は発泡強
度に応じて１００〜１３０ｍ3／ｈとした。撹拌は、醗
酵の最初の１０時間は５０rpmで、そしてその後は７５r
pmで行なった。醗酵７２時間〜１０９時間は、更に５６
４リットルの大豆油を継続的に計量投入した。発泡は実
施例１と同様に制御した。所定の醗酵条件下でラムノ脂
質９５ｇおよびラムノース含量３９〜４０ｇを９日間で
培養溶液１リットル当り得た。
【００２２】実施例３ 実施例１または２で得た醗酵溶液５０ｇを６Ｎ Ｈ2ＳＯ
4でpH３.０とし、１００℃に加熱し、この温度に６０分
維持した。その後、溶液を２０℃に冷却し、３２００ｇ
で１５分間実験用遠心分離器で遠心分離した。この遠心
分離により２相が形成されたが、これは、互いにはっき
りと分離していた。沈降容積２４％を有し、上相をデカ
ンテーションすることにより得られた下相は、醗酵試料
中に含有されるラムノ脂質混合物の９８％を超える量を
含有していた。
4でpH３.０とし、１００℃に加熱し、この温度に６０分
維持した。その後、溶液を２０℃に冷却し、３２００ｇ
で１５分間実験用遠心分離器で遠心分離した。この遠心
分離により２相が形成されたが、これは、互いにはっき
りと分離していた。沈降容積２４％を有し、上相をデカ
ンテーションすることにより得られた下相は、醗酵試料
中に含有されるラムノ脂質混合物の９８％を超える量を
含有していた。
【００２３】実施例４ 本実施例は加熱後に酸性化を行なったほかは実施例３と
同様に行なった。実施例１で得られた醗酵溶液５０ｇを
１００℃に加熱し、この温度で６０分間維持した。次に
溶液を２０℃に冷却し、６Ｎ Ｈ2ＳＯ4でpH３.０に調整
した。実験用遠心分離器で遠心分離（３２００ｇで１５
分間）したところ、２相は形成されず、その結果、ラム
ノ脂質混合物は分離できなかった。
同様に行なった。実施例１で得られた醗酵溶液５０ｇを
１００℃に加熱し、この温度で６０分間維持した。次に
溶液を２０℃に冷却し、６Ｎ Ｈ2ＳＯ4でpH３.０に調整
した。実験用遠心分離器で遠心分離（３２００ｇで１５
分間）したところ、２相は形成されず、その結果、ラム
ノ脂質混合物は分離できなかった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 デイーター・ヴルブラント ドイツ連邦共和国デー−65719ホーフハイ ム・イム・タウヌス．ツムリンデンホーフ 11
Claims (8)
- 【請求項１】 糖脂質含有溶液をpH≦５.０に酸性化
し、 次にバッチを６０〜１３０℃に加熱し、 次にバッチを≦５０℃に冷却し、そしてバッチを遠心分
離して糖脂質含有相を沈降させることにより糖脂質の精
製を行なう糖脂質の定量的精製方法。 - 【請求項２】 ラムノ脂質を精製する請求項１記載の方
法。 - 【請求項３】 ラムノ脂質を細菌培養溶液から精製する
請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 α−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロ
キシデカン酸、２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−α
−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキシデカン酸、２
−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−α−Ｌ−ラムノピラ
ノシル−β−ヒドロキシデカノイル−β−ヒドロキシデ
カン酸またはα−Ｌ−ラムノピラノシル−β−ヒドロキ
シデカノイル−β−ヒドロキシデカン酸を精製する請求
項２記載の方法。 - 【請求項５】 糖脂質含有溶液をpH２.５〜４.０に酸性
化する請求項１〜４いずれか一項記載の方法。 - 【請求項６】 バッチを９０℃〜１１０℃に加熱する請
求項１〜４いずれか一項記載の方法。 - 【請求項７】 バッチを２０℃〜３０℃に冷却する請求
項１〜４記載の方法。 - 【請求項８】 相が分離するまで５００ｇ以上でバッチ
を遠心分離する請求項１〜４記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4237334:4 | 1992-11-05 | ||
| DE4237334A DE4237334A1 (de) | 1992-11-05 | 1992-11-05 | Verfahren zur quantitativen Aufreinigung von Glycolipiden |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06211884A true JPH06211884A (ja) | 1994-08-02 |
Family
ID=6472148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5275217A Ceased JPH06211884A (ja) | 1992-11-05 | 1993-11-04 | 糖脂質の定量的精製方法 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5656747A (ja) |
| EP (1) | EP0597358B1 (ja) |
| JP (1) | JPH06211884A (ja) |
| AT (1) | ATE189680T1 (ja) |
| DE (2) | DE4237334A1 (ja) |
| DK (1) | DK0597358T3 (ja) |
| ES (1) | ES2143484T3 (ja) |
| FI (1) | FI106203B (ja) |
| NO (1) | NO180012C (ja) |
| SG (1) | SG86990A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014111595A (ja) * | 2012-11-26 | 2014-06-19 | Evonik Industries Ag | ラムノリピッドを単離するためのプロセス |
| JP2018500293A (ja) * | 2014-11-19 | 2018-01-11 | エボニック デグサ ゲーエムベーハーＥｖｏｎｉｋ Ｄｅｇｕｓｓａ ＧｍｂＨ | 低粘度のラムノリピッド濃縮組成物 |
| JP2018514222A (ja) * | 2015-05-05 | 2018-06-07 | ロゴス テクノロジーズ， エルエルシー．Ｌｏｇｏｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｌｌｃ． | 高収量および高力価でラムノリピッドを生産するための半連続方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6287977B1 (en) * | 1998-07-31 | 2001-09-11 | Applied Materials, Inc. | Method and apparatus for forming improved metal interconnects |
| US20170044586A1 (en) * | 2014-04-21 | 2017-02-16 | Cargill, Incorporated | Sophorolipid-containing compositions |
| WO2016115048A1 (en) | 2015-01-12 | 2016-07-21 | Logos Technologies, Llc | Production of rhamnolipid compositions |
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| US10259837B2 (en) | 2015-03-02 | 2019-04-16 | Conopco, Inc. | Method of separating rhamnolipids from a fermentation broth |
| US10829507B2 (en) | 2017-02-06 | 2020-11-10 | Stepan Company | Decolorization of concentrated rhamnolipid composition |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4814953B1 (ja) * | 1970-10-14 | 1973-05-11 | ||
| DE3405664A1 (de) * | 1984-02-17 | 1985-09-05 | Wintershall Ag, 3100 Celle | Verfahren zur biotechnischen herstellung von rhamnolipiden und rhamnolipide mit nur einem ss-hydroxidecancarbonsaeurerest im molekuel |
| US4933281A (en) * | 1987-03-17 | 1990-06-12 | The University Of Iowa Research Foundation | Method for producing rhamnose |
| EP0314959B1 (en) * | 1987-11-03 | 1992-05-27 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Selective hydrolysis |
| GB8727221D0 (en) * | 1987-11-20 | 1987-12-23 | Unilever Plc | Glycoside hydrolysis |
| DE4030264A1 (de) * | 1990-09-25 | 1992-04-23 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung gereinigter glycolipide durch membrantrennverfahren |
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1992
- 1992-11-05 DE DE4237334A patent/DE4237334A1/de not_active Withdrawn
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1993
- 1993-11-02 DK DK93117742T patent/DK0597358T3/da active
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