JPH06145195A - ペプチド合成における副反応防止法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 縮合剤を使用する、側鎖アミド基無保護のア
スパラギンまたはグルタミンを用いるペプチド合成法を
提供する。 【構成】 式｛Ａ−Ｏ−Ｂ｝Ｘ（Ｉ）〔式中Ａは （Ｒはハロゲン、アルキル基、アラルキル基、又はアリ
ール基、ｎは０〜４の整数を表わし、Ｒ_１，Ｒ_２，
Ｒ_３，及びＲ_４はＨ、アルキル基、アラルキル基、又は
アリール基を表わし）を表わし、Ｂは または （Ｒ_５及びＲ_６はアルキル基、アラルキル基、又はアリ
ール基であり）、Ｘはハロゲンイオン、（ＰＦ_６）⁻，
（ＢＦ_４）⁻を表わす〕で表わされる縮合剤で側鎖無保
護のアスパラギンまたは側鎖無保護のグルタミンのカル
ボキシル基を活性化し、フリーのアミノ基と縮合するペ
プチドの化学合成において、式 Ａ−ＯＨ（II）〔式
中、Ａは前記定義に同じ〕で表わされるアルコール成分
を添加する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ペプチドの化学合成に
おいて、アスパラギンまたはグルタミン由来の副反応を
抑え、簡便でしかも高収率で側鎖無保護のアスパラギン
またはグルタミンをペプチド鎖に導入する方法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】ペプチドの化学合成において側鎖無保護
のアスパラギンまたはグルタミンを用いると脱水が起こ
り、ニトリルが生成することが知られている（Ｉｎｔ．
Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．，３
４，２８７（１９８９））。縮合剤として反応速度が速
い縮合剤といわれているベンゾトリアゾール−１−イル
オキシ トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサ
フルオロフォスフェート（Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−
１−ｙｌ−ｏｘｙ−ｔｒｉｓ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉ
ｎｏ）ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐ
ｈｏｓｐｈａｔｅ，ＢＯＰ）あるいはそれと同様な反応
機構で用いることのできるものは、近年特にその利用が
増加してきているが、それら縮合剤を用いた場合問題で
あることが知られている。特にアスパラギンからβ−シ
アノアラニンの副生が顕著であり、収率が大きく低下す
ることが指摘されている（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，７４（１
９９１））。また、このような副反応が起こるとこの生
成したβ−シアノアラニンはさらに縮合剤により再度活
性化されて、合成中のペプチド鎖中に導入されてしまう
という問題がある。

【０００３】α−アミノ基の保護基として９−フルオレ
ニルメトキシカルボニル（９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅ
ｔｈｙｃａｒｂｏｎｙｌ，Ｆｍｏｃ）基を用いるＦｍｏ
ｃストラテジーにおいては既に側鎖アミドに保護基を用
いるのが常法となっているが、保護基除去の際の副反応
およびコストアップが問題となっている。しかし、αア
ミノ基の保護基としてｔ−ブトキシカルボニル（ｔｅｒ
ｔ．−Ｂｕｔｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ，Ｂｏｃ）基を用
いるＢｏｃストラテジーでは、以下に挙げる理由でこの
副反応はあまり重視されず側鎖アミド無保護の状態で用
いられてきた。 １）ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を縮合
剤として用いる場合、側鎖アミド基の脱水反応によるニ
トリルの副生自体が非常に少ない。 ２）副生したニトリルは最後のフッ化水素処理でほぼ定
量的に元のアミド基に戻る。 従来活性化剤として主に用いられてきたＤＣＣ法におい
ては，ほんの僅かに起こるニトリルの副生も，添加剤と
して１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１−Ｈｙｄｒ
ｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ，ＨＯＢｔ）を等モ
ル加えることによりほぼ完全に抑えられることが知られ
ている（Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１０３，７８８（１９７
０））。しかしＢＯＰを用いる方法においては、事情が
全く異なりアスパラギン側鎖に保護基を導入する方法以
外に効果的解決策は見いだされていないのが現状であ
る。ところがこの保護基を用いた場合にも、特に、側鎖
保護されたアスパラギンは高価であるとか、保護基除去
の際の副反応の危険性の問題もある。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、このよ
うな側鎖無保護アスパラギンに，近年活発に開発されて
いる反応速度の速い縮合剤を用いてペプチド合成を行な
うと、側鎖無保護アスパラギンからたとえ僅かでも生じ
たニトリルは続く脱Ｂｏｃ反応中にフッ化水素にたいし
て安定なＮ−ｔｅｒｔ．−ブチルアミド（Ｎ−ｔＢｕア
ミド）に変化することを見出した。そして、ペプチドの
主鎖に取り込まれた側鎖Ｎ−ｔＢｕアミド基は主鎖のア
ミド結合のように元のアミド基に戻すことはできず、目
的とするペプチドの収率低下の原因となるほか、精製の
妨げとなる。更に、Ｆｍｏｃストラテジーにおいては上
記したように既に側鎖アミドに保護基を用いるのが常法
となっているが、この場合コストアップが問題となって
おり、さらに保護基を効率よく除去することも問題であ
る。そこで本発明ではこのような問題点がなく且つ従来
のＤＣＣより活性化および反応速度が速い縮合剤を使用
する場合であっても、側鎖アミド基無保護のアスパラギ
ンまたはグルタミンを、簡便な操作でニトリル副生の無
い、または少ない縮合を実現することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は 式（１） ｛Ａ−０−Ｂ｝Ｘ （Ｉ） 〔式中、Ａは

【０００６】

【化５】

【０００７】または

【０００８】

【化６】

【０００９】（但し、Ｒはハロゲン、アルキル基、アラ
ルキル基、又はアリール基、ｎは０〜４ の整数を表わ
す）または

【００１０】

【化７】

【００１１】（但し、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４はそ
れぞれ互いに独立に水素、アルキル基、アラルキル基、
アリール基を表わし、Ｒ_１とＲ_３及びはＲ_２とＲ_４とは
それぞれ互いに独立に環を形成しても良い）を表わし、
Ｂは

【００１２】

【化８】

【００１３】（但し、Ｒ_５、及びＲ_６はそれぞれ互いに
独立にアルキル基、アラルキル基、又はアリール基であ
って、Ｒ_５はＲ_６と環を形成していてもよい）、Ｘはハ
ロゲンイオン、（ＰＦ_６）⁻，又は（ＢＦ_４）⁻を表わ
す〕で表わされる縮合剤で側鎖無保護のアスパラギンま
たは側鎖無保護のグルタミンのカルボキシル基を活性化
し、フリーのアミノ基と縮合するペプチドの化学合成法
において、式（ＩＩ） Ａ−ＯＨ （ＩＩ） 〔式中、Ａは前記定義に同じで且つ式（Ｉ）中のＡとは
独立に選ばれる〕で表わされるアルコール成分を添加す
ることを特徴とするペプチド合成法を提供する。

【００１４】本発明に従えば、ニトリルの副生成反応を
抑え、しかも高収率で縮合反応を行うことのできるペプ
チド合成法が提供される。本発明の式（Ｉ）で表わされ
る縮合剤としては、具体的にはベンゾトリアゾール−１
−イルオキシ トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム
（Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ−ｏｘｙ−ｔｒ
ｉｓ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｏｓｐｈｏｎ
ｉｕｍ）塩、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ ト
リスピロリジノホスホニウム（Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏ
ｌ−１−ｙｌ−ｏｘｙ−ｔｒｉｓ−ｐｙｒｒｏｌｉｄｉ
ｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ）塩、２−（１Ｈ−ベンゾ
トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメ
チルウロニウム（２−（１Ｈ−Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏ
ｌ−１−ｙｌ）−１，１，３，３−ｔｅｔｒａｍｅｔｈ
ｙｌｕｒｏｎｉｕｍ）塩、２−（５−ノルボルネン−
２，３−ジカルボキシイミド）テトラメチルウロニウム
（２−（５−Ｎｏｒｂｏｒｎｅｎｅ−２，３−ｄｉｃａ
ｒｂｏｘｉｍｉｄｏ）ｔｅｔｒａｍｅｔｈｌｕｒｏｎｉ
ｕｍ）塩塩等を挙げることができ、これらと同様の反応
性を有するものや同様の反応機構に従って縮合反応に関
与するものが挙げられる。なかでもベンゾトリアゾール
−１−イルオキシ トリス（ジメチルアミノ）ホスホニ
ウム ヘキサフルオロホスフェート（Ｂｅｎｚｏｔｒｉ
ａｚｏｌ−１−ｙｌ−ｏｘｙ−ｔｒｉｓ（ｄｉｍｅｔｈ
ｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ ｈｅｘａｆ
ｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＢＯＰ）、ベンゾトリ
アゾール−１−イルオキシ トリスピロリジノホスホニ
ウム ヘキサフルオロホスフェート（Ｂｅｎｚｏｔｒｉ
ａｚｏｌ−１−ｙｌ−ｏｘｙ−ｔｒｉｓ−ｐｙｒｒｏｌ
ｉｄｉｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ ｈｅｘａｆｌｕｏ
ｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＰｙＢＯＰ）、２−（１Ｈ−
ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テ
トラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
（２−（１Ｈ−Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ）
−１，１，３，３−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎｉ
ｕｍ ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＨＢ
ＴＵ）、２−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキ
シイミド）テトラメチルウロニウム テトラフルオロボ
レート（２−（５−Ｎｏｒｂｏｒｎｅｎｅ−２，３−ｄ
ｉｃａｒｂｏｘｉｍｉｄｏ）ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕ
ｒｏｎｉｕｍ ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ，
ＴＮＴＵ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イ
ル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム テト
ラフルオロボレート（２−（１Ｈ−Ｂｅｎｚｏｔｒｉａ
ｚｏｌ−１−ｙｌ）−１，１，３，３−ｔｅｔｒａｍｅ
ｔｈｙｌｕｒｏｎｉｕｍ ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏ
ｒａｔｅ，ＴＢＴＵ）が好ましく使用される。

【００１５】また、式（ＩＩ）で表わされるアルコール
としては、具体的には３−ヒドロキシ−３，４−ジヒド
ロ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（３−
Ｈｙｄｒｏｘｙ−３，４−ｄｉｈｙｄｒｏ−４−ｏｘｏ
−１，２，３−ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｉｎｅ，ＨＯＯＢ
ｔ）、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジ
カルボキシイミド（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙ−５−ｎｏｒｂ
ｏｒｎｅｎｅ−２，３−ｄｉｃａｒｂｏｘｉｍｉｄｅ，
ＨＯＮＢ）、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド（Ｎ−Ｈｙｄ
ｒｏｘｙｐｈｔｈａｌｉｍｉｄｅ）、１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（１−Ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｔｒ
ｉａｚｏｌｅ，ＨＯＢｔ）等を挙げることができ、特に
ＨＯＯＢｔ、ＨＯＮＢが好ましく使用される。式（Ｉ
Ｉ）で表されるアルコールとしては、前記したものと同
様の作用を有するものであれば、制限なく使用すること
ができよう。式（Ｉ）で表わされる縮合剤と式（ＩＩ）
で表わされるアルコールとの好ましい組合せは、式
（Ｉ）中のＡと式（ＩＩ）中のＡとが異なるものがよ
く、具体的には例えば、ＢＯＰとＨＯＮＢ、ＴＮＴＵと
ＨＯＢｔ、ＴＮＴＵとＨＯＯＢｔ等の組合せが好ましく
用いられる。式（ＩＩ）で表わされるアルコール成分の
使用量は式（Ｉ）で表わされる縮合剤の使用量に対して
０．５〜１００倍モルである。０．５倍モル未満ではそ
の効果は不十分であり、また１００倍モルを超えると反
応液の粘度が高くなりすぎる他にコストアップ要因とな
るので好ましくない。好ましい使用量は１〜５０倍モ
ル、更に好ましくは２〜１０倍モルである。 式（Ｉ
Ｉ）で表わされるアルコール成分の添加時期は縮合反応
が完結する以前であり、縮合反応開始以前が好ましい。

【００１６】本発明は側鎖アミド基無保護のアスパラギ
ンまたはグルタミンが対象となるが、特にニトリルを副
生し易い側鎖アミド基無保護のアスパラギンの縮合にお
いて最も効力を発揮する。また同様な側鎖アミド基を有
するアミノ酸にも応用することができる。なお、本発明
で使用するアミノ酸のα−アミノ基の保護基としては、
例えばＦｍｏｃ基、Ｂｏｃ基があるが、これに限定され
るものではない。ペプチド合成において通常用いられて
いる各種保護基のなかから選択して用いることができ
る。ベンジルオキシカルボニル（Ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃ
ａｒｂｏｎｙｌ，Ｚ）基などその他の各種保護基で保護
されたアミノ酸を使用できるが、特に保護基がＢｏｃ基
である場合に本発明はより効果的である。また、本発明
は液相法、固相法のいずれでも有効であり、通常のそれ
らに用いられる試薬、化合物、装置などを用いることが
できる。本発明によれば、Ｂｏｃストラテジー，Ｆｍｏ
ｃストラテジーにかかわらずアスパラギンまたはグルタ
ミンを側鎖無保護で導入することが可能で、より簡便で
且つ副反応がなく、しかも安いコストで合成することが
可能である。さらに側鎖保護基除去の収率、副反応を考
慮する必要がなく、より高純度のペプチドの合成が可能
となる。

【００１７】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を詳細、かつ具
体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。

【００１８】比較例１．「ＢＯＰによるＢｏｃ−Ａｓｎ
とＧｌｙ−ＯＢｚｌの縮合反応」ｔ−ブトキシカルボニ
ル−Ｌ−アスパラギン（Ｂｏｃ−Ａｓｎ）１００ｍｇ，
および（グリシン ベンジルエステル ｐ−トルエンス
ルホネート（Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ・Ｔｏｓ，Ｇｌｙｃｉｎ
ｅ ｂｅｎｚｙｌ ｅｓｔｅｒ ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓ
ｕｌｆｏｎａｔｅ）１４５ｍｇをＤＭＦ１ｍｌに溶解
し、ＤＩＥＡ ３００μｌを加えて溶液が均一になるま
で撹拌した。ＢＯＰ １９０ｍｇを粉末のまま加え、室
温で１時間撹拌した。反応液の１部を逆相ＨＰＬＣで分
析したところ、ペプチドに由来する２本のシグナルが２
０分（Ｉピーク）と２３分（ＩＩピーク）に現れた（面
積比＝５：２）。ＨＰＬＣで分取、分析を行い、ＮＭ
Ｒ，ＭＳよりＩピークがＮ−α−ｔ−ブトキシカルボニ
ルアスパラギニルグリシン ベンジルエステル（α−Ｂ
ｏｃ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ），ＩＩピークがｔ−
ブトキシカルボニル−β−シアノアラニルグリシン ベ
ンジルエステル（Ｂｏｃ−Ａｌａ（ＣＮ）−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｂｚｌ）であることが明らかとなった。

【００１９】Ｉピーク： ＭＳ（ＥＩ 法）：ｍ／ｚ ３８０（（Ｍ＋１）^＋） ＨＰＬＣ：保持時間：１９．５分 カラム：ＹＭＣ Ｒ−ＯＤＳ−５ Ｓ−５ １２０Ａ
ＯＤＳ（登録商標、ＹＭＣ社） 流速：１．５ｍｌ／ｍｉｎ． 移動相： Ａ＝０．１％ＴＦＡ／水 Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ 勾配： Ｂ ｃｏｎｃ．５〜６５％（３０
ｍｉｎ．）

【００２０】ＩＩピーク： ＨＰＬＣ：保持時間：２３．５分 ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３溶液）：δ １．４５（９Ｈ，
ｓ），２．８〜２．９（２Ｈ，ｄ），４．０〜４．２
（２Ｈ，ｄ），５．２（２Ｈ，ｓ），７．４（５Ｈ，
ｍ） ＩＲ（ＫＢｒ）：ν ２３００ｃｍ^−１ ＭＳ（ＥＩ 法）：ｍ／ｚ ３６１（Ｍ^＋）

【００２１】比較例２．「ＢＯＰによるＢｏｃ−Ａｓｎ
とＧｌｙ−ＯＢｚｌの縮合反応」

【００２２】実施例１と同様の試薬を用いて実験を行な
った。Ｂｏｃ−Ａｓｎ １００ｍｇをＤＭＦ １ｍｌに
溶解し、ＤＩＥＡ ３００μｌ及びＢＯＰ ３９０ｍｇ
を加え、０℃で５分間撹拌した。ＤＭＦ５００μｌに溶
解したＧｌｙ−ＯＢｚｌ・Ｔｏｓ（１５０ｍｇ）を加
え、０℃で３０分間撹拌した。反応液の一部をＨＰＬＣ
分析したところ、Ｉピークは殆ど現れず、定量的にβシ
アノアラニン体（ＩＩピーク）が生成することを確認し
た。得られたＩＩピーク成分１０ｍｇに２．０ｍｌの１
０％エタンジチオール／４０％ＴＦＡ／ジクロロメタン
を加え、室温で２０分間撹拌した。減圧により溶媒を除
去し、５０％メタノール／水に溶解し、ＨＰＬＣ分析を
行なった。１２分（ＩＩＩピーク）と１７分（ＩＶピー
ク）に現れた２本のピーク成分を分取、分析を行なっ
た。ＮＭＲ，ＦＡＢ−ＭＳよりＩＩＩピークはβ−シア
ノアラニルグリシン ベンジルエステル（Ａｌａ（Ｃ
Ｎ）−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ）、ＩＶピークはγ−Ｎ−ター
シャリーブチルアスパラギニルグリシン ベンジルエス
テル（Ａｓｎ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ）であるこ
とが確認された。

【００２３】ＩＩＩピーク： ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３溶液）：δ ２．９〜３．１（２
Ｈ，ｄ），４．１（２Ｈ，ｂｒ），５．２（２Ｈ，
ｓ），７．３（５Ｈ，ｍ） ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ２６２（（Ｍ＋Ｈ）^＋） ＩＶピーク： ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３溶液）：δ １．３（９Ｈ，ｓ），
４．０〜４．２（１Ｈ，ｂｒ），５．２（２Ｈ，ｓ），
６．６（１Ｈ，ｂｒ），７．３（５Ｈ，ｍ） ＦＡＢＭＳ：ｍ／ｚ ３３６（（Ｍ＋Ｈ）^＋）

【００２４】実施例１． 「ＢＯＰによるＢｏｃ−Ａｓ
ｎとＧｌｙ−ＯＢｚｌの縮合反応」 Ｂｏｃ−Ａｓｎ １００ｍｇ、およびＧｌｙ−ＯＢｚｌ
・Ｔｏｓ １４５ｍｇをＤＭＦ１ｍｌに溶解し、ＨＯＮ
Ｂ ２８０ｍｇとＤＩＥＡ ３００μｌを加えて室温で
３０分撹拌した。ＢＯＰ １９０ｍｇを加え、室温で３
０分間撹拌した。反応液の１部を逆相ＨＰＬＣで分析
し、実施例１．で現れたＩＩピークの面積が１％以下で
あることを確認した。

【００２５】実施例２．「ＢＯＰによるＢｏｃ−Ａｓｎ
とＧｌｙ−ＯＢＨｚｌの縮合反応」 添加剤としてＨＯＮＢのかわりにＨＯＯＢｔ ２８０ｍ
ｇを加えて実施例１．と同様の反応を行なった。ＨＰＬ
ＣよりＩＩピークの面積が１％以下であることを確認し
た。

【００２６】実施例３．比較例２と同じ反応で条件を変
えて実験を行った。分析も同様に行った。結果を表１に
示す。

【００２７】

【表１】

【００２８】実施例４．実施例３と同じ手順で種々の縮
合剤におけるアルコール添加剤の効果を検討した。分析
も同様に行った。結果を表２に示す。

【００２９】

【表２】

【００３０】比較例３． 「ＢＯＰを縮合剤に用いる固
相法によるアシルキャリアープロティン（６５〜７４）
（ＡＣＰ（６５〜７４））の合成」 メリフィールド レジン（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ Ｒｅ
ｓｉｎ）を出発原料に用いてステップワイズに合成を行
なった。

【００３１】１）脱Ｂｏｃ反応 Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏ−レジン（Ｒｅｓｉｎ）０．７９ｇ
（０．６３ｍｍｏｌ／ｇ）をナス型フラスコに入れ、４
０％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンを加えて３０分
間穏やかに撹拌した。溶液をグラスフィルターに注ぎ、
ろ過して溶液を取り除いた。残ったレジンをジクロロメ
タンで２回、１０％ＤＩＥＡ／ジクロロメタンで２回洗
浄し、ジクロロメタン、ジエチルエーテルで交互に洗浄
後、空気中で乾燥してＧｌｙ−Ｏ−レジンを得た。

【００３２】２）アスパラギンの縮合反応 Ｂｏｃ−Ａｓｎ ２３２ｍｇをＤＭＦ２０ｍｌに溶解し
た。ＤＩＥＡ ０．７ｍｌに続いて前項で得られたレジ
ンを加え、室温で穏やかに撹拌した。１０ｍｌＤＭＦに
溶解したＢＯＰ ９００ｍｇを加えて室温で３０分間撹
拌した。レジンの一部を取り、カイザーテストで定量的
に反応が進行していることを確認した。さらに１０分間
撹拌後、溶液をグラスフィルターにあけ、レジンをジク
ロロメタン、ジエチルエーテルで交互に洗浄し、空気中
で乾燥した。以後、上記１）及び２）の操作を繰り返し
た。計９回の縮合反応を行ない、１．４ｇのレジンを得
た。

【００３３】３）フッ化水素による脱保護 前項で得られたレジンのうち５００ｍｇを用いて常法に
従って脱保護した。２０％酢酸／水で抽出、凍結乾燥し
て２５０ｍｇの粗生成物を得た。乾燥後、一部をＨＰＬ
Ｃ分析した。目的物に相当する１４分（Ｖピーク）の他
に１７．５分にｔＢｕアミド体に相当するシグナル（Ｖ
Ｉピーク）が現れた。（面積比２：１）

【００３４】実施例５．「ＨＯＯＢｔを添加剤として用
いるＡＣＰ（６５〜７４）の合成」 アスパラギンの縮合反応時にＨＯＯＢｔを添加して比較
例３．と同様の反応を行なった。 １）脱Ｂｏｃ反応 比較例３と同様の処理を行なった。 ２）アスパラギンの縮合反応 Ｂｏｃ−Ａｓｎ ２３２ｍｇ，ＨＯＯＢｔ ２８０ｍｇ
をＤＭＦ２０ｍｌに溶解した。ＤＩＥＡ ０．７ｍｌに
続いて前項で得られたレジンを加え、室温で穏やかに撹
拌した。１０ｍｌＤＭＦに溶解したＢＯＰ ９００ｍｇ
を加えて室温で３０分間撹拌した。以後比較例３．と同
様の処理を行なった。以後、上記１）及び２）の操作を
繰り返したが、アスパラギン以外の縮合反応には添加剤
を加えずに反応を行った。計９回の縮合反応を行ない、
１．４ｇのレジンを得た。 ３）フッ化水素による脱保護 比較例３に従い脱保護を行なった。乾燥後、一部をＨＰ
ＬＣ分析したところ、目的物Ｖピークだけ現れ、副生成
物であるＶＩピークは検出されなかった。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ） ｛Ａ−０−Ｂ｝Ｘ （Ｉ） 〔式中、Ａは 【化１】 または 【化２】 （但し、Ｒはハロゲン、アルキル基、アラルキル基、又
   はアリール基、ｎは０〜４ の整数を表わす）または 【化３】 （但し、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、及びＲ_４はそれぞれ互いに
   独立に水素、アルキル基、アラルキル基、又はアリール
   基を表わし、Ｒ_１とＲ_３及びＲ_２とＲ_４とはそれぞれ独
   立に環を形成しても良い）を表わし、Ｂは 【化４】 （但し、Ｒ_５、及びＲ_６はそれぞれ互いに独立にアルキ
   ル基、アラルキル基、又はアリール基であって、Ｒ_５は
   Ｒ_６と環を形成していてもよい）、Ｘはハロゲンイオ
   ン、（ＰＦ_６）⁻，又は（ＢＦ_４）⁻を表わす〕で表わ
   される縮合剤で側鎖無保護のアスパラギンまたは側鎖無
   保護のグルタミンのカルボキシル基を活性化し、フリー
   のアミノ基と縮合するペプチドの化学合成法において、
   式（ＩＩ） Ａ−ＯＨ （ＩＩ） 〔式中、Ａは前記定義に同じで且つ式（Ｉ）の基Ａとは
   独立に選ばれる〕で表わされるアルコール成分を添加す
   ることを特徴とするペプチド合成法。
2. 【請求項２】 式（Ｉ）で表わされる縮合剤が、ベンゾ
   トリアゾール−１−イルオキシ トリス（ジメチルアミ
   ノ）ホスホニウム（Ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙ
   ｌ−ｏｘｙ−ｔｒｉｓ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）
   ｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ）塩、ベンゾトリアゾール−１
   −イルオキシ トリスピロリジノホスホニウム（Ｂｅｎ
   ｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ−ｏｘｙ−ｔｒｉｓ−ｐ
   ｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎｉｕｍ）塩、２
   −（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，
   ３，３−テトラメチルウロニウム（２−（１Ｈ−Ｂｅｎ
   ｚｏｔｒｉａｚｏｌ−１−ｙｌ）−１，１，３，３−ｔ
   ｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎｉｕｍ）塩、または２−
   （５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド）テ
   トラメチルウロニウム（２−（５−Ｎｏｒｂｏｒｎｅｎ
   ｅ−２，３−ｄｉｃａｒｂｏｘｉｍｉｄｏ）ｔｅｔｒａ
   ｍｅｔｈｙｌｕｒｏｎｉｕｍ）塩である請求項１記載の
   方法。
3. 【請求項３】 式（ＩＩ）で表わされるアルコール成分
   が、３−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−
   １，２，３−ベンゾトリアジン（３−Ｈｙｄｒｏｘｙ−
   ３，４−ｄｉｈｙｄｒｏ−４−ｏｘｏ−１，２，３−ｂ
   ｅｎｚｏｔｒｉａｚｉｎｅ）、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノ
   ルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド（Ｎ−Ｈｙｄ
   ｒｏｘｙ−５−ｎｏｒｂｏｒｎｅｎｅ−２，３−ｄｉｃ
   ａｒｂｏｘｉｍｉｄｅ）、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド
   （Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｔｈａｌｉｍｉｄｅ）、１−
   ヒドロキシベンゾトリアゾール（１−Ｈｙｄｒｏｘｙｂ
   ｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌｅ）である請求項１記載の方
   法。
4. 【請求項４】 使用するアミノ酸のα−アミノ基の保護
   基がｔ−ブトキシカルボニル基である請求項１記載の方
   法。