JPH06135836A - コントラサプレッサー細胞の誘導剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 コントラサプレッサー細胞の誘導剤、及び低
免疫症の治療剤を提供する。 【構成】 グリチルリチンを有効成分として、薬品基剤
に配合する。こうして得られるコントラサプレッサー細
胞の誘導剤を投与すると、コントラサプレッサー細胞が
誘導される。誘導されたコントラサプレッサー細胞は、
低免疫症の要因である抑制細胞の出現及びその作用を抑
制し、日和見感染を軽減・治療する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、コントラサプレッサー
細胞の誘導剤、及び低免疫症の治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】低免疫症は、癌などの基礎的疾患、スト
レス、大怪我や火傷、臓器移植後の移植拒否剤の使用に
より、あるいは老化時等に、しばしば誘発されることが
知られている（サージェリイ(Surgery) 156, 233 (198
3)、イムノロジイ・トウデイ(Immunology Today) 11, 17
0 (1990)、アドバンスズ・イン・ホスト・ディフェンス
・メカニズム(Advances in Host defense Mechanisms)
6, 81 (1986)、トランスプランティション・プロシイデ
ィングス(Transplantation Proceedings) 23, 2175 (19
91)および、アドバンスズ・イン・イムノロジー(Advanc
es in Immunology) 29, 287 (1980)等）。

【０００３】また細菌やウイルスなどの微生物による感
染自体も低免疫症の一因となり、近年大きな問題となっ
ているＡＩＤＳは低免疫症が誘引される顕著な例であ
る。ところで、癌や火傷などにより低免疫症に陥った患
者血清中からは、通常量に比し明らかに高い量のプロス
タグランジンＥ₂（アーチブス・オブ・サージェリィ(Ar
chives of Surgery) 123, 293 (1988)）、ステロイド
（ジャーナル・オブ・バーン・ケアー・リハビリテイシ
ョン(Journal of Burn Care Rehabilitation) 5, 143
(1984)）、形質転換増殖因子ーβ（ジャーナル・オブ・
クリニカル・ノムノロジイ(Journal of Clinical Immun
ology) 11, 95(1991)）など様々な液性の免疫抑制物質
が見つかり、これらが低免疫症誘引の一因となっている
と推定できる。

【０００４】さらに、これら低免疫症の患者では、イン
ターフェロン産生能（ザ・ジャーナル・オブ・イムノロ
ジイ(The Journal of Immunology) 129, 1806 (198
2)）、インターロイキン２産生能（クリニカル・エクス
ペリメンタル・イムノロジイ(Clinical Experimental I
mmunology) 65, 570 (1986)）、あるいは胸腺由来細胞
依存の細胞殺傷作用（トランスプランテイション(Trans
plantatation) 33, 422 (1982)）、ナチュラルキラー細
胞依存の細胞殺傷作用（セルラー・イムノロジイ(Cellu
lar Immunorogy) 86, 551 (1984)）などの免疫反応を低
下せしめる機能を有する抑制細胞（抑制マクロファー
ジ、抑制Ｔリンパ球、抑制Ｂリンパ球）が出現し、低免
疫症誘引に重要な役割を呈している。

【０００５】例えば、抑制細胞が宿主の腫瘍抵抗性を著
しく抑制する事実は、Northら（ジャーナル・オブ・エ
クスペリメンタル・メディシン(Journal of Experiment
al Medicine) 159, 1295 (1984)）の担癌マウスを使っ
た実験で明らかである。すなわち、マウスの同種移植系
でMeth A 腫瘍を用いた場合、移植後９日後をピークに
随伴免疫を司る抗腫瘍エフェクター細胞が検出される
が、その後は抑制細胞の出現によりエフェクター細胞の
活性が排除され、その結果として更に激しい腫瘍の増殖
が進行する。

【０００６】一方、臓器移植の場合には、移植された臓
器に対する拒否反応を抑制するために、サイクロスポリ
ンＡ（トランスプランテイション・プロシィディングス
(Transplantation Proceedings) 23, 2180 (1991)）、O
KT３（ザ・ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・
メディシン(The New England Journal of Medicine)31
3, 337 (1985)）などの免疫抑制剤が開発され、臨床の
場で利用できるようになったので、臓器移植患者の生存
日数は確実に伸長している。

【０００７】しかしながら、これら免疫抑制剤により、
Ｔ細胞の抑制（ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジイ(T
he Journal of Immunology) 128, 355 (1982)）や抑制
Ｔ細胞の誘導（クリニカル・アンド・エクスペリメンタ
ル・イムノロジイ(Clinicaland Experimental Immunolo
gy) 71, 369 (1988)）が捉され、その結果として患者の
細胞性免疫が顕著に低下し、やがて常在菌や空中雑菌で
すら排除できなくなり、多くの場合患者は敗血症などで
死に至る。

【０００８】火傷では、その物理的損傷による直接的な
死は、呼気および水分管理などを含めた現代治療医学の
進歩により殆ど回避できるようになったものの、低免疫
症により併発する日和見感染が原因となる敗血症などに
よる死が大きな問題となっている。

【０００９】火傷マウス由来の抑制細胞を、非火傷マウ
スに移入すると、移入されたマウスのヘルペスウイルス
に対する感染感受性が顕著に増大することから、火傷宿
主のヘルペスウイルス感染に対する感染感受性の上昇
は、火傷マウス脾に存在する抑制Ｔ細胞に依存すること
が確かめられた。

【００１０】クッパーら（ジャーナル・オブ・サージカ
ル・リサーチ(Journal of SurgicalResearch) 38, 606
(1985)）が敗血症モデルを用いて行った動物実験では、
抑制細胞（Lyt2⁺ Ｔ細胞）の移入は、本モデルでの平均
死亡率１５％を９２％にまで上昇させた。また、この際
抑制細胞が産生する抑制因子に対する単一抗体を同時に
投与すると、この様な死亡率の上昇は認められなかっ
た。この事実は、抑制細胞の日和見感染誘引における重
要性を明白にし、更に抑制細胞やその可溶性因子の働き
を阻止すれば、火傷宿主の感染抵抗性を非火傷の状態に
まで引き戻すことが出来る事を物語る。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】低免疫症個体から、そ
の一因となっている抑制細胞を取り除くため、これまで
に、Ｘ線照射（キャンサー・イムノロジイ・アンド・イ
ムノセラピイ（Cancer Immunology and Immunotherap
y） 16, 175 (1984)）、トピカル セリウム ナイトレ
イト（サージェリィ(Surgery) 99, 53 (1986)）、メル
フェラン（キャンサー・イムノロジイ・アンド・イムノ
セラピイ(Cancer Immunology and Immunotherapy) 20,
209 (1985)）やサイクロフォスファマイド（ネイチャー
(Nature) 262, 77 (1976)）などのアルキル化剤、シメ
チジン（ザ・ジャーナル・オブ・トラウマ(The journal
of Tnauma) 25, 131 (1985)）やラニチジン（ザ・ジャ
ーナル・オブ・イムノロジイ(The Journal of Immunolo
gy) 132, 3054 (1984)）などのヒスタミンの２型受容体
阻害剤、プロスタグランジンＥ₂産生阻害作用を示すイ
ンドメタシン（ジャーナル・オブ・バイオロジカル・レ
スポンス・モディファイヤーズ(Journal of Biological
Response Modifiers) 7, 568 (1988)）、アスピリン
（ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー(Bri
tish Journal of Canser) 38, 503 (1978)）、イブプロ
フェン（サージェリイ(Surgery) 97, 721 (1985)）など
の非ステロイド系抗炎症薬、その他ポリミキシンＢ（ジ
ャーナル・オブ・バーン・ケアー・リハビリテイション
（Journal of Burn Care Rehabilitation） 10, 213 (1
989)）、アクラシノマイシンＡ（イムノファーマコロジ
イ(Immunopharmacology) 10, 19 (1985)）、ヘパタミノ
ールＡＭＰ（ジャパン・ジャーナル・オブ・ファーマコ
ロジイ(Japan Journal of Pharmacology) 48, 417 (198
8)）、プロカイナミド（クリニカル・アンド・インベス
ティゲイティブ・オブ・メデイシン(Clinical and Inve
stigative of Medicine) 11, 425 (1988)）、リピドＡ
誘導体（インフェクション・アンド・イムニティ(Infec
ton and Immunity) 56, 1076 (1988)）、ＯＫ−４３２
（インターナショナル・ジャーナル・オブ・キャンサー
(International Journal of Canser) 26, 401 (1980)）
など多くの方法や物質が諸々の実験系において取り上げ
られて来た。

【００１２】しかしながら、抑制細胞を取り除くために
開発された従来の方法は、ある程度の効果は評価できも
のの、いづれも未だ不完全で、その他の効果的な方法の
開発が強く望まれている。

【００１３】ところで、抑制細胞の活性を効果的に、絶
対的に抑制するものとして、抑制細胞のブロッカー細胞
であるコントラサプレッサー細胞が報告されている（ア
ドバンシス・イン・キャンサー・リサーチ(Advances in
Cancer Research) 42, 277(1984)）。このコントラサ
プレッサー細胞は、抑制細胞が原因で誘発される１型ヘ
ルペスウィルス（HSVー1）の日和見感染症に著効を示
す。例えば、火傷マウスに１０ＬＤ₅₀量のHSV-1を腹腔
感染させる１日前に、コントラサプレッサー細胞を静脈
より移入すると、火傷マウスの９５％が生存した。

【００１４】本発明は、上記観点からなされたものであ
り、低免疫症患者の日和見感染等を効果的に軽減、治療
するために、抑制細胞を取り除くことを目的とし、コン
トラサプレッサー細胞の誘導剤、及び日和見感染の軽減
又は治療剤等、低免疫症の治療剤を提供することを課題
とする。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するために鋭意研究を行った結果、グリチルリチン
がコントラサプレッサー細胞を誘導する作用を有し、誘
導されたコントラサプレッサー細胞により日和見感染を
軽減、治療することができることを見出し、本発明に至
った。

【００１６】すなわち本発明は、グリチルリチンを有効
成分とするコントラサプレッサー細胞の誘導剤、及びグ
リチルリチンを有効成分とする低免疫症の治療剤であ
る。

【００１７】以下、本発明を詳細に説明する。 ＜１＞コントラサプレッサー細胞の誘導剤、低免疫症の
治療剤 本発明のコントラサプレッサー細胞の誘導剤、あるいは
低免疫症の治療剤は、グリチルリチンを有効成分とす
る。

【００１８】グリチルリチンは、甘草由来のサポニンで
あり、１分子のグリチルレチン酸に２分子のグルクロン
酸が結合した構造を有し、急性および慢性毒性が極めて
低いことが特徴である。またグリチルリチンは、インタ
ーフェロンγ産生能などの宿主の免疫機構を増殖させる
作用、宿主機能を介して発現される抗腫瘍効果や抗ウィ
ルス効果を有し、慢性肝炎の治療薬として現在広く臨床
の場で使用されている。

【００１９】本発明においては、剤型として、製薬上許
容される無害の一種、あるいは数種の賦形剤、例えば、
乳糖、バレイショデンプン、アルギン酸ナトリウム、又
はアミノ酢酸、スレオニン、炭酸カルシウム等を配合し
た散剤、顆粒剤、糖衣錠、及びカプセル剤とすることが
できる。注射剤の場合、溶媒は単に注射蒸留水又は生理
食塩水のみ、あるいは解毒アミノ酢酸等のアミノ酸を添
加してもよい。

【００２０】グリチルリチンは、注射用製剤として、シ
ステインとグリシンを加えた生理食塩水溶液が知られて
いるが、本発明に好適に使用することができる。

【００２１】＜２＞用法 本発明のコントラサプレッサー細胞の誘導剤の投与量
は、経口投与では、成人１日当たり２００〜４００ｍ
ｇ、非経口投与では成人１日当たり１０〜２００ｍｇの
範囲で用いることにより、所期の効果が期待できる。

【００２２】また、重度の患者においては、本発明のコ
ントラサプレッサー細胞の誘導剤、あるいは低免疫症の
治療剤を投与しても、コントラサプレッサー細胞の効果
的な誘導は、期待できない場合がある。そのような場合
は、コントラサプレッサー細胞誘導剤を健常人に投与
し、誘導されたコントラサプレッサー細胞を含む血液を
低免疫症患者に輸血し、あるいはリンパ球画分を能動的
トランスファーすることにより、日和見感染を軽減、治
療することができる。

【００２３】

【作用】以下に、本発明のコントラサプレッサー細胞の
誘導剤及び低免疫症の治療剤の作用を説明する。

【００２４】＜１＞グリチルリチンのコントラサプレッ
サー細胞誘導効果 グリチルリチンのコントラサプレッサー細胞誘導作用を
動物実験により説明する。

【００２５】コントラサプレッサー細胞は、ビシア ヴ
ィロサ レクチン（ＶＶレクチン）に特異的に付着する
性質を有する（ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イム
ノロジイ(European Journal of Immunology) 11, 937(1
981)）ので、グリチルリチン投与動物のＶＶレクチン付
着性細胞数の変化を調べた。

【００２６】グリチルリチンを腹腔内（i.p.）投与した
４８時間後のマウス、ラット、モルモット由来脾リンパ
球（５×１０⁷個）を、ＶＶレクチン（０.５μg/ml、２
時間）処理を施した直径９cmのプラスチックシャーレに
添加し、３７℃、４５分間培養した。レクチン非付着性
細胞を除去した後、ＮーアセチルーＤーガラクトサミン
（１mg/ml）をシャーレに添加し、さらに１５分間培養
を続けることにより、ＶＶレクチン付着性細胞をプレー
トから剥し、トリパンブルー染色法で生細胞数を血球計
算盤にて計測した。結果を表１に示す。

【００２７】

【表１】

【００２８】この結果から明らかなように、グリチルリ
チン投与マウス由来の脾リンパ球中に、ＶＶレクチン付
着性細胞の顕著な増加を認めた。また、対照の生理食塩
水投与群ではＶＶレクチン付着性細胞は殆ど検出されな
かった。このことから、グリチルリチン投与により脾リ
ンパ球中にコントラサプレッサー細胞が誘導されること
が確認された。

【００２９】同様の結果は０.１〜１００mg/kg量をラッ
トやモルモットに腹腔内、s.c.（皮下）あるいはp.o.
（経口）投与した際にも認められた。又グリチルリチン
の連続投与を試みたところ、レクチン付着性細胞は薬剤
の投与回数に依存して増加することが認められた。

【００３０】＜２＞グリチルリチンにより誘導されたコ
ントラサプレッサー細胞による抑制細胞を抑制する作用 （１）Con A誘発抑制細胞に対する作用 はじめに、コントラサプレッサー細胞が、Con Aにより
誘発される抑制細胞を抑制する作用を、リンパ球混合培
養（ＭＬＲ）系を用いて調べた。

【００３１】BALB/cマウス(H-2^d)由来脾リンパ球１×１
０⁶個／mlを、２４μg/mlのコンカナバリンＡ（Con A）
で４８時間培養することにより、抑制細胞（Lyt2 Ｔ細
胞）を誘導した（アクタ・パソロジカ・マイクロバイオ
ロジカ・イムノロジカ・スカンジナビア（Acta Patholo
gca,Microbiologica,et Immunoligica,Scandinavia,sec
tion C, 9, 277 (1982)）。

【００３２】９６穴マイクロプレートを用い、反応細胞
（BALB/cマウス由来リンパ球、１×１０⁵個／穴）と刺
激細胞（C57BL/6マウス由来リンパ球）の一方向ＭＬＲ
に、得られた抑制細胞とグリチルリチン投与（１０mg/k
g、i.p.）したBALB/cマウスより得られた脾リンパ球
（コントラサプレッサー細胞）を２：２：１：２の比率
で加え、３７℃で５日間、５％ＣＯ₂ふ卵器内で培養し
た。

【００３３】培養終了２４時間前に、１μＣｉ／穴のト
リチウムチミジン（³ＨーTdR）を添加した後、反応細胞
への³ＨーTdRの取り込み量を液体シンチレションカウン
ターにより測定することにより、抑制細胞の作用抑制を
調べた。下記式により得られる抑制率を、図１に示し
た。

【００３４】抑制細胞活性の抑制率（％）＝［１−（抑
制細胞添加群のCPM／抑制細胞にグリチルリチン投与マ
ウス由来脾リンパ球を添加した群のCPM）］×１００

【００３５】その結果、グリチルリチンを投与したマウ
スより得られた脾リンパ球は、ConAにより誘発されたＭ
ＬＲの抑制活性を５０〜７０％阻害した。同様の結果
は、グリチルリチン投与マウス由来肝リンパ球あるいは
未梢血中リンパ球でも認められ、ラットおよびモルモッ
トに０.１〜１００mg/kgのグリチルリチンをs.c.、i.v.
およびp.o.投与した際にも確認された。

【００３６】（２）火傷誘発抑制細胞に対する抑制作用 次に、火傷により誘発される抑制細胞を用い、コントラ
サプレッサー細胞が抑制細胞を抑制する作用を調べた。

【００３７】火傷（体表面積の３０％、３度）を施した
BALB/cマウス由来脾リンパ球（火傷６日後、１x１０⁶
個）と、同系マウス由来脾リンパ球（反応細胞、１×１
０⁵）と、異系マウス（C57BL/6）由来脾リンパ球（刺激
細胞）の三者で一方向ＭＬＲを行い、ＭＬＲを制御する
抑制細胞活性を調べた（イムノロジイ・レターズ(Immun
ology Letters) 19, 33 (1988)）。さらに、コントラサ
プレッサー細胞の活性を測定するために、反応細胞と刺
激細胞と抑制細胞に対し、グリチルリチン投与（１０mg
/kg、i.p.）マウスより得た脾リンパ球を１：１：１
０：１０：の比率で加え、培養した。

【００３８】前述の如く培養した後、反応細胞への³Ｈー
TdRの量を測定することにより火傷誘発抑制細胞の作用
抑制を測定した。抑制率を表２に示す。

【００３９】

【表２】

【００４０】その結果、グリチルリチンを投与したマウ
スより得られた脾リンパ球により、火傷誘発抑制細胞の
活性が５０〜８０％阻止された。すなわち、グリチルリ
チン投与マウス由来脾細胞中にコントラサプレッサー細
胞が誘導され、このコントラサプレッサー細胞により抑
制細胞の作用が抑制された。

【００４１】以上の結果から、コントラサプレッサー細
胞は、Con A及び火傷のいずれにより誘発される抑制細
胞に対しても、抑制する作用を有することが示された。

【００４２】＜３＞グリチルリチンによる抑制細胞出現
阻止作用 （１）火傷動物に対する抑制細胞出現阻止作用 BALB/Cマウスに火傷（体表面積の３０％、３度）を施
し、２日後および４日後に、グリチルリチンを腹腔内投
与（１０mg/kg）した。グリチルリチン投与あるいはグ
リチルリチン非投与の火傷マウスから経日的に得られた
脾リンパ球を、同系マウス由来脾リンパ球（反応細胞）
と異系マウス由来リンパ球（刺激細胞）の三者で一方向
ＭＬＲを行った。ＭＬＲは、反応細胞（１X１０⁵個）に
対し、刺激細胞とグリチルリチン投与火傷マウス由来脾
リンパ球を１：１：１０の比率で混合し、３７℃で５日
間、５％ＣＯ₂ふ卵器内で行った。前記と同様に抑制率
を算出し、図２に示した。

【００４３】その結果、グリチルリチン非投与の火傷マ
ウスから経時的に得られた脾リンパ球（○）は、火傷４
日目よりＭＬＲを有意に抑制し始め、その活性は火傷６
日目にピークに達し（６０〜８０％抑制）、１１日後に
は消失した。他方グリチルリチン投与火傷マウス由来脾
リンパ球（●）は、同様のＭＬＲを最大でも３０％抑制
（火傷６日後）するにすぎず、グリチルリチンにより火
傷誘発の活性が顕著に阻止された。

【００４４】また、このような脾リンパ球の効果は、Ｖ
Ｖレクチン付着性細胞を除去した時には消失した事か
ら、グリチルリチン投与マウスで抑制細胞の活性が低い
という結果は、グリチルリチンによりコントラサプレッ
サー細胞が誘導された事に起因するものである事が確認
された。

【００４５】（２）アロ抗原で誘導される抑制細胞阻止
効果 BALB/c(Hー2^d)マウスを、マウス当り５×１０⁷個のELー4
腫瘍細胞(Hー2^d)で免疫すると、アロ抗原反応性の抑制細
胞が誘導される。グリチルリチンを投与（１０mg／kg、
i.p.）したBALB/cマウスに同様の方法でアロリンパ球を
移入し、得られた脾リンパ球をＭＬＲ系に添加した。培
養後、反応細胞への³ＨーTdRの量を測定することにより
アロ抗原反応性抑制細胞の量を測定した。

【００４６】その結果、アロリンパ球を移植した時、抑
制細胞の活性は移入３日目より検出され（３０〜５０％
抑制）、５〜７日目をピークに（７０〜８０％抑制）、
９日目までに消失した。１０mg/kgのグリチルリチンで
処理したマウスに同様の方法でアロリンパ球を移植する
と、上述の如くには抑制細胞活性が検出されず、ピーク
と見られる５日目でも抑制細胞の抑制率は２０〜４０％
にすぎなかった。

【００４７】すなわち、グリチルリチンは火傷のみなら
ずアロ抗原により誘導される抑制細胞に対しても出現を
阻止する作用を有することが確かめられた。この事実は
すでに雑誌で発表されている（医学のあゆみ、158巻、1
35頁 (1991)）が、コントラサプレッサー細胞の関与、
コントラサプレッサー細胞がグリチルリチンにより誘導
されることについては、記載されていない。

【００４８】（３）担癌動物における抑制細胞出現阻止
作用 BALB/cマウスの左腹部にマウス当り１x１０⁵個のMeth A
腫瘍細胞を移植した７〜１０日後に再度同量の腫瘍細
胞を右腹部に移植しても、随伴免疫のため２次移植腫瘍
の増殖は認められない。これに対し移植２０日後に同様
の条件で腫瘍の再移植を試みると、腫瘍の増殖に伴って
出現した抑制細胞の働きにより随伴免疫が破壊され、２
次移植腫瘍の増殖が認められる（ジャーナル・オブ・エ
クスペリメンタル・メデイシン(Journal of Experiment
al Medicine) 159, 1295 (1984)）。

【００４９】同様の実験系で、腫瘍細胞を１次移植した
７日目に、グリチルリチン（１０mg/kg、i.p.）を頻回
投与した別のマウスより得られた脾細胞を移入し、その
１３日後に担癌マウスから得られた脾リンパ球中の抑制
細胞の活性をＭＬＲにより測定した。

【００５０】鼠径部皮下に１×１０⁵ 個のMeth A腫瘍を
移植した７日目のBALB/c担癌マウスに、同系正常マウス
にグリチルリチン投与（１０mg/kg、i.p.、１日おきに
２回）により得られた脾細胞（マウス当り１×１０⁸
個）を静脈より移入した。尚、対照群には、担癌７日後
のマウスに正常マウスより得られた脾細胞を同じく移入
した。腫瘍移植２０日目にそれぞれ得た担癌マウス由来
脾リンパ球の抑制細胞活性を、前記＜３＞（１）と同様
に、５日間培養の一方向ＭＬＲにより測定した。結果を
表３に示す。

【００５１】

【表３】

【００５２】その結果、グリチルリチン非投与の担癌マ
ウス由来脾リンパ球がＭＬＲを８０％抑制したのに対
し、グリチルリチン投与マウス由来脾細胞を移入された
担癌マウスのそれでは、ＭＬＲは２０％しか抑制されな
かった。

【００５３】すなわち、グリチルリチン投与マウス由来
脾細胞中には、１次腫瘍移植によって誘導される抑制細
胞を排除する作用が存在する訳である。しかし当該脾細
胞よりＶＶレクチン付着性細胞を除去するとその活性も
失われることから、グリチルリチンによる抑制細胞抑制
作用が、コントラサプレッサー細胞の誘導を介して生じ
た現象であることが確認された。

【００５４】＜４＞グリチルリチン誘導コントラサプレ
ッサー細胞による感染軽減作用 火傷動物のHSVー1感染に対するグリチルリチンの作用を
調べた 火傷直後のマウスにＨＳＶー１を感染させ、同時にグリ
チルリチン（１０mg/kg、i.p.）を投与あるいはグリチ
ルリチン誘導コントラサプレッサー細胞を移入し、マウ
スの生存を観察した。

【００５５】BALB/cマウスに火傷（体表面積の３０％、
３度）を施した２時間後、グリチリルリチンを投与（１
０mg/kg ×２、i.p.）することにより誘導したコントラ
サプレッサー細胞（１×１０⁸個／マウス）を、火傷マ
ウスに静脈より移入した。火傷マウス（○）およびコン
トラサプレッサー細胞の移入を受けた火傷マウス（●）
に、火傷マウスの９５％が感染死する量のHSV-1を腹腔
に感染させ、１５日間マウスを観察した。結果を図３に
示す。

【００５６】その結果、グリチルリチンの投与により全
体の９０％の火傷マウスがHSVー1による感染死を免れ
た。又同様のHSVー1感染火傷マウスに、グリチルリチン
により誘導したコントラサプレッサー細胞を能動的に静
脈移入すると、その死亡率が１０％まで低下した。脾細
胞の能動移入の前にＶＶレクチン付着性細胞画分を除去
するとこの様な活性が消失する事から、グリチルリチン
によるHSVー1感染火傷マウスの防御は、グリチルリチン
により誘導されたコントラサプレッサー細胞を介して生
じた現象であることが確かめられた。

【００５７】以上説明したように、グリチルリチンはコ
ントラサプレッサー細胞を誘導する作用を有し、コント
ラサプレッサー細胞を介して、抑制細胞の作用を抑制
し、また抑制細胞の出現を阻止する作用を有し、さら
に、その結果、感染を阻止する作用を有する。

【００５８】＜５＞グリチルリチン誘導コントラサプレ
ッサー細胞による感染治療作用 火傷直後のマウスにＨＳＶ−１を感染させ、その２４時
間後にグリチルリチン誘導コントラサプレッサー細胞を
移入し、マウスの生存を確認した。

【００５９】BALB/cマウスに火傷を施した２時間後、火
傷マウスの９５％が感染死する量のＨＳＶ−１を腹腔に
感染させ、その１日後にBALB/c normalマウスにグリチ
ルリチンを投与（１０mg/kg, i.p.）することにより誘
導したコントラサプレッサー細胞（１×１０⁸個／マウ
ス）を、ＨＳＶ−１感染火傷マウスに静脈より移入し、
１５日間マウスを観察した。結果を図４に示す。

【００６０】また、感染３、４、５日後に脾臓および肝
臓を摘出し、臓器内のウイルス量を、ＶＥＲＯ細胞を用
いたプラーク法により定量した。結果を図５に示す
（Ａ：脾臓、Ｂ：肝臓）。

【００６１】その結果、グリチルリチン誘導コントラサ
プレッサー細胞の移入により、８０％の火傷マウスがＨ
ＳＶ−１による感染死を免れた（図４）。また、グリチ
ルリチン誘導コントラサプレッサー細胞を移入された感
染火傷マウスは、感染後の脾臓および肝臓中のウイルス
量が、非移入群と比較して著しく減少していた（図
５）。

【００６２】以上説明したように、グリチルリチンによ
り誘導されるコントラサプレッサー細胞には、抑制細胞
の作用を抑制し、その結果感染を治療する作用を有す
る。尚、グリチルリチンにシステインとグリシンを加え
た生理食塩水溶液を用いた場合も、以上と同様の作用を
有する。

【００６３】＜６＞グリチルリチンで誘導されるコント
ラサプレッサー細胞の性状 グリチルリチンで誘導されたコントラサプレッサー細胞
の性状を調べた。グリチルリチン投与（１０mg/kg、i.
p.、１日おきに２回）マウスより得た脾リンパ球を、各
種単一抗体（４℃、４０分）と補体（３７℃、４０分）
で処理した。処理方法は、イムノロジイ・レターズ（Im
munology Letters 19, 33頁 (1988)記載の方法に従っ
た。

【００６４】これらの処理細胞（１×１０⁶ 個）と火傷
誘発抑制細胞（火傷６日後、１×１０⁶ 個）とを、＜２
＞（１）と同様に５日間培養のone-way システムのＭＬ
Ｒに添加し、抑制細胞の活性に対する阻止活動を指標に
その性状を検討した。その結果、グリチルリチンで誘導
されるコントラサプレッサー細胞はCD3、L3T4単一抗体
で感受性で、Ly 2.2単一抗体に非感受性であり、CD3陽
性、CD4陽性、CD8陰性のＴ細胞である事が判明した（表
４）。

【００６５】

【表４】

【００６６】尚、グリチルリチンにシステインとグリシ
ンを加えた生理食塩水溶液を用いても、同様であった。

【００６７】＜７＞火傷により誘発される抑制細胞の性
状 火傷６日目のマウス由来脾リンパ球を細胞表面マーカー
に対する各種単一抗体および補体で処理した後、抑制細
胞の性状をＭＬＲにて検討した。その結果、火傷誘発抑
制細胞は、CD3およびLyt 2.2単一抗体に感受性で、L3T4
単一抗体に非感受性であり、CD3陽性、CD4陰性、CD8陽
性のＴ細胞であることが判明した（表４）。これはすで
に雑誌で報告されている結果と同様である（ジャーナル
・オブ・サージカル・レサーチ(Journal of Surgical R
esearch) 38, 606 (1985)）。

【００６８】尚、グリチルリチンにシステインとグリシ
ンを加えた生理食塩水溶液を用いても、同様であった。

【００６９】＜８＞グリチルリチンで誘導したコントラ
サプレッサー細胞の火傷誘発抑制細胞に対する阻止能 マウスに、グリチルリチン処理（１０mg/kg、i.p.、１
日おきに２回投与）マウス由来の脾コントラサプレッサ
ー細胞と、火傷誘発抑制細胞（火傷６日後）とを様々な
比率（１：０.１〜１：１）で混合した後、ＭＬＲにて
コントラサプレッサー活性を測定した。その結果、火傷
マウス由来抑制細胞の抑制活性を完全に除去するには同
量のコントラサプレッサー細胞が必要であった（表
５）。

【００７０】

【表５】

【００７１】尚、グリチルリチンにシステインとグリシ
ンを加えた生理食塩水溶液を用いても、同様であった。

【００７２】

【実施例】以下に、本発明の実施例を説明する。

【００７３】

【製剤例】

＜製剤例１＞錠剤 下記組成の混合物を常法により錠剤とする。 グリチルリチン ２５ｍｇ バレイショデンプン ２２０ｍｇ ステアリン酸マグネシウム ５ｍｇ ───────────────────────── 合 計 ３００ｍｇ

【００７４】＜製剤例２＞糖衣錠 下記組成の混合物を常法により糖衣錠とする。 グリチルリチン ２５ｍｇ グリシン ２５ｍｇ メチオニン ２５ｍｇ 炭酸カルシウム 適量 乳糖 適量 カルボキシメチルセルロース 適量 ───────────────────────── 合 計 ３００ｍｇ

【００７５】＜製剤例３＞注射剤 グリチルリチン２００ｍｇを生理食塩水に溶解し、１０
０ｍｌとする。

【００７６】＜製剤例４＞注射剤 グリチルリチン２００ｍｇ、グリシン２０００ｍｇ、シ
ステイン１００ｍｇを生理食塩水に溶解し、１００ｍｌ
とする。

【００７７】

【発明の効果】本発明により、抑制細胞の作用を抑制す
るコントラサプレッサー細胞を誘導することができる。
また、コントラサプレッサー細胞を誘導することによ
り、低免疫症患者の日和見感染、敗血症等を軽減、治療
することができる。

【００７８】さらに、本発明により誘導された健常人の
コントラサプレッサー細胞を、患者に移入することによ
って、重度の患者に対しても日和見感染を軽減、治療す
ることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 グリチルリチン投与マウス由来コントラサプ
レッサー細胞によるＣｏｎＡ誘発抑制細胞の作用抑制を
示す図。

【図２】 火傷マウスにおけるグリチルリチンの抑制細
胞出現阻止効果を示す図。

【図３】 火傷マウスのＨＳＶー１感染に対するグリチ
ルリチン誘導コントラサプレッサー細胞による感染防御
効果を示す図。

【図４】 火傷マウスのＨＳＶ−１感染に対するグリチ
ルリチン誘導コントラサプレッサー細胞による感染治療
効果を示す図。

【図５】 臓器中のＨＳＶ−１量を示す図。

フロントページの続き (72)発明者 小林 真紀子 アメリカ合衆国 テキサス州 77550 ガ ルベストン市 フェリー ロード 500、 ＃414 (72)発明者 宇都宮 徳一郎 アメリカ合衆国 テキサス州 77551 ガ ルベストン市 セントラル シティ ブル バード 6315、＃117 (72)発明者 宇都宮 恭三 神奈川県大和市下鶴間4260

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 グリチルリチンを有効成分とするコント
   ラサプレッサー細胞の誘導剤。
2. 【請求項２】 コントラサプレッサー細胞の誘導を介し
   たグリチルリチンを有効成分とする低免疫症の治療剤。
3. 【請求項３】 健常人でのコントラサプレッサー細胞を
   誘導し、このコントラサプレッサー細胞を取得し、患者
   に移入することにより日和見感染を予防又は治療をする
   ために用いる請求項１記載のコントラサプレッサー細胞
   の誘導剤。