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JPH0595789A - 植物の形質転換用キメラ遺伝子 - Google Patents

植物の形質転換用キメラ遺伝子

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JPH0595789A
JPH0595789A JP4047142A JP4714292A JPH0595789A JP H0595789 A JPH0595789 A JP H0595789A JP 4047142 A JP4047142 A JP 4047142A JP 4714292 A JP4714292 A JP 4714292A JP H0595789 A JPH0595789 A JP H0595789A
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JP
Japan
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transit peptide
gene
plant
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sequence encoding
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JP4047142A
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Michel Lebrun
ミシエル・ルブラン
Bernard Leroux
ベルナール・ルル
Alain Sailland
アラン・サイラン
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Bayer CropScience SA
Original Assignee
Rhone Poulenc Agrochimie SA
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Publication date
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First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9410557&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPH0595789(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Rhone Poulenc Agrochimie SA filed Critical Rhone Poulenc Agrochimie SA
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】新規トランジットペプチドＤＮＡ配列、新規キ
メラ遺伝子、及び植物に一般的な除草剤、特にホスホノ
メチルグリシン系除草剤に対する強い耐性を与えるため
の植物中でのそれらの使用、これらの遺伝子により形質
転換された植物細胞、これらの細胞から再生した形質転
換植物並びにこれらの形質転換植物を用いる交雑育種か
ら誘導された植物の提供。 【構成】転写方向に、プロモーター領域、トランジット
ペプチド領域、グリフォセート耐性に対するコーディン
グ配列及びポリアデニル化シグナル領域を含み、トラン
ジットペプチド領域は、翻訳方向に、プラスチド−局在
化酵素をコードする植物遺伝子の少なくとも１つのトラ
ンジットペプチド、プラスチド−局在化酵素をコードす
る植物遺伝子のＮ−末端成熟部分の部分配列及びプラス
チド−局在化酵素をコードする植物遺伝子の第２のトラ
ンジットペプチドを含むキメラ遺伝子、及び除草剤グリ
フォセート−耐性植物の産生。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規トランジットペプ
チドＤＮＡ配列、新規キメラ遺伝子、及び植物に一般的
な除草剤、特にホスホノメチルグリシン系除草剤に対す
る強い耐性を与えるための植物中でのそれらの使用に関
する。本発明は、さらにこれらの遺伝子により形質転換
された植物細胞、これらの細胞から再生した形質転換植
物並びにこれらの形質転換植物を用いる交雑育種から誘
導された植物にも関する。
【０００２】
【従来の技術】グリフォセート（glyphosate）、スルフ
ォセート（sulfosate）またはフォサメチン（fosametin
e）は、ホスホノメチルグリシン系の広スペクトルの移
行性除草剤である。これらは本質的に、PEP（ホスホエ
ノールピルベート）に対し5-（エノールピルビル）シキ
メート-3-ホスフェートシンターゼ（EC2.5.1.19）即
ち、EPSPSの拮抗阻害剤として作用する。これらの除草
剤を植物に適用すると、これらは植物内を移行し、すぐ
に発育する部分、特に茎や根の先端に集まり、敏感な植
物を劣化させたり死滅させてしまう。
【０００３】プラスチドEPSPS、即ちこれらの除草剤の
主なターゲットは、１種以上の核内遺伝子によりコード
され且つ細胞質前駆体の形で合成され、次いでプラスチ
ドに運ばれそこでその本来の形で蓄積される芳香族アミ
ノ酸生合成経路の酵素である。
【０００４】グリフォセート及びこの系の除草剤に対す
る植物の耐性は、グリフォセートによるこの遺伝子産物
の阻害特性に関して変異していてもよい植物またはバク
テリア由来のEPSPS遺伝子をゲノムに安定導入すること
により得られる。グリフォセートの作用機序及び使用す
る遺伝子産物のグリフォセートに対する耐性度を仮定す
れば、この遺伝子の翻訳生成物を発現させてプラスチド
内に実質的に集積させることができることは有用であ
る。
【０００５】例えば、米国特許第4,535,060号より、酵
素をプラスチド区分に局在化した後その拮抗阻害剤（グ
リフォセート）に対しより強い耐性の酵素を作る少なく
とも１つの突然変異を有するEPSPSをコードする遺伝子
を、植物ゲノムに導入することにより、植物に上述のタ
イプの除草剤、特にＮ−（ホスホノメチル）グリシンま
たはグリフォセートに対する耐性を与えることは公知で
ある。しかしながらこれらの方法は、農業学条件下でこ
れらの植物を使用する際により大きな信頼性を得るため
には、改良されねばならない。
【０００６】本明細書に於いて、「植物」とは、光合成
し得る任意の分化した多細胞有機物であり、「植物細
胞」とは、植物から誘導した、未分化組織（カルスな
ど）または分化した組織（胚または植物部分、植物若し
くは種など）を形成し得る任意の細胞を表す。
【０００７】本発明の主題は、通常の除草剤、特にホス
ホノメチルグリシン系除草剤に対する耐性遺伝子を含む
新規キメラ遺伝子により形質転換した細胞を再生するこ
とにより、これらの除草剤に対し強い耐性を有する形質
転換した植物を産生することである。また本発明は、こ
れらの新規キメラ遺伝子、キメラ遺伝子が含む新規トラ
ンジットペプチド配列、並びに植物中でその成熟形で変
異酵素を集積することによりさらに耐性とされるキメラ
遺伝子を含む植物にも関する。
【０００８】さらに本発明の主題は、そのターゲットが
EPSPSである除草剤に対する高い耐性を植物に与えるた
めに、転写方向に、プロモーター領域、トランジットペ
プチド領域、グリフォセート耐性酵素をコードする遺伝
子配列及び３’の未翻訳ポリアデニル化シグナル領域か
らなるキメラ遺伝子であり、前記トランジットペプチド
領域は、転写方向に、プラスチド−局在化酵素をコード
する植物遺伝子のトランジットペプチド、プラスチド−
局在化酵素をコードする植物遺伝子のＮ−末端成熟部分
の部分配列及びプラスチド−局在化酵素をコードする植
物遺伝子の第２のトランジットペプチドからなる。
【０００９】本発明は、上記定義のトランジットペプチ
ド領域の任意のＤＮＡ配列にも関する。
【００１０】トランジットペプチド領域に使用し得るト
ランジットペプチドは、それ自体公知であり、且つ植物
由来（例えば、トウモロコシ、ヒマワリ、エンドウ豆、
タバコ等から誘導したもの）由来であってもよい。第１
及び第２のトランジットペプチドは同一、類似または異
なっていてもよい。これらはさらに、１個以上のトラン
ジットペプチドユニットを含んでいてもよい。リブロー
ス1,5-ジホスフェートカルボキシラーゼオキシゲナーゼ
（RuBisCO）遺伝子のSSUから誘導した配列が好ましい。
【００１１】N-末端成熟部分の部分配列は、プラスチド
−局在化酵素をコードする植物遺伝子（例えば、トウモ
ロコシ、ヒマワリまたはエンドウ豆遺伝子等）から誘導
され、元の植物の種類は第１及び第２のトランジットペ
プチド配列が各々誘導されたものと同一、類似または異
なっていてもよい。さらに、成熟部分の部分配列は、種
々の数、通常10〜40個、好ましくは18〜33個分のアミノ
酸を含み得る。リブロース1,5-ジホスフェートカルボキ
シラーゼオキシゲナーゼ（RuBisCO）遺伝子のSSUから誘
導した配列を使用するのが好ましい。
【００１２】全トランジット領域は、それ自体公知の方
法、特に融合または他の好適な手段により構築し得る。
この特性領域の役割は、成熟した野生の蛋白質を最大効
率で放出できることである。
【００１３】本発明のキメラ遺伝子に使用し得る除草剤
耐性のコーディング配列は、ある程度のグリフォセート
耐性を有する変異株EPSPSをコードする。特にEPSPS遺伝
子の突然変異により得られたこの配列は、バクテリア由
来［例えば、Salmonella typhymurium（以下、明細書中
では”AroA 遺伝子”と呼称する）から誘導されたも
の］または植物由来（例えば、ペチュニア若しくはトマ
トから誘導されたもの）であってもよい。この配列は、
１個以上の変異株、例えば、Pro 101〜Serの突然変異ま
たはGly 96〜Glyの突然変異を含んでいてもよい。
【００１４】本発明のキメラ遺伝子のプロモーター領域
は、植物中で自然に発現される遺伝子のフラグメント上
に少なくとも１つのプロモーター、つまり、ウイルス由
来［例えば、カリフラワーモザイクウイルス（CaMV 35
S）の35SＲＮＡ］または植物由来［作物（例えば、トウ
モロコシまたはヒマワリなど）のリボース1,5-ジホスフ
ェートカルボキシラーゼ（RuBisCO）の小さなサブユニ
ットなど］のプロモーターからなるのが都合がよい。
【００１５】本発明のキメラ遺伝子の３’の未翻訳ポリ
アデニル化シグナルは、任意の由来、例えばバクテリア
由来（例えば、ノパリンシンターゼ遺伝子など）または
植物由来（例えば、トウモロコシ若しくはヒマワリRuBi
sCOの小さなサブユニットなど）であってもよい。
【００１６】本発明のキメラ遺伝子は、上述の本質的な
部分に加えて、プロモーター領域とコーディング配列と
の間に、任意（例えば、バクテリア、ウイルスまたは植
物など）の由来であり得る翻訳されない中間領域（リン
カー）を含んでもよい。
【００１７】
【実施例】実施例１：キメラ遺伝子の 構築 本発明のキメラ遺伝子は、以下の要素を用いて構築し
た。
【００１８】１）”二重CaMV”プロモーター（複製部
分） CaMV 35Sプロモーターを、Odellら（1985）の方法によ
り単離した。クローン、即ち転写の開始サイトの上流に
約850bpを含むpJO 5-2を、EcoRI−HindIIIで切断し、こ
の単離フラグメントの末端を、ベクターpUC19のHincII
サイトに挿入したフラグメント及びクレノウポリメラー
ゼを用いてブラントとした（Yannish-Perronら，198
5）。このプロモーターをClaIで消化し、末端をクレノ
ウポリメラーゼを用いて埋め、次いでHindIIIで再消化
した。同一開始プロモーターから単離したHindIII−Eco
RVフラグメントを、これらの２つのサイトの間に挿入し
た。このような方法で得られたプロモーターは、CaMV35
Sプロモーターの調節要素の上流に二重増幅領域を有し
ていた。これを、仏国特許出願第88/04130号に記載され
ているHindIII及びEcoRIで切断したベクターpRPA-BL 15
0A α２にHindIII-EcoRIフラグメントの形で導入した。
【００１９】２）トランスファー領 域 使用した２つのトランジットペプチド並びに成熟蛋白質
要素は、Lebrunら（1987）により記載されたトウモロコ
シRuBisCOの遺伝子の小さなサブユニットのクローン化
ｃＤＮＡ及びWaksmanら（1987）により単離したヒマワ
リRuBisCOの遺伝子の小さなサブユニットのクローン化
ｃＤＮＡから誘導した。特に、最適化トランジットペプ
チドと呼称されるトランジット領域は、翻訳方向に、 −ヒマワリRuBisCOの小さなサブユニットのトランジッ
トペプチド、 −トウモロコシRuBisCOの小さなサブユニットの成熟部
分の22個のアミノ酸のＮ−末端配列、 −トウモロコシRuBisCOの小さなサブユニットのトラン
ジットペプチドを含む。
【００２０】この最適化トランスファーペプチド配列を
用いる構築物は、pRPA-BL 410と呼称される。
【００２１】10〜40個、好ましくは18〜33個のアミノ酸
の配列を各々含む他の同様の配列も使用され得る。
【００２２】比較要素を提供するために、従来法によ
り、第２のトランジットペプチドを使用せずに、第１の
トランジットペプチド及び同一の成熟配列部分を用いて
別の構築物を作成した（pRPA-BL 294）。
【００２３】３）構造遺伝子 これは、Stalkerら（1985）により単離されたSalmonell
a typhmuriumのEPSPSの位置（Pro101〜Ser）で変異株遺
伝子から誘導される。pMG34-2クローン（Calgeneにより
提供）を、XbaIで直線化し、次いでVigna radiataヌク
レアーゼで処理した。SamIで再切断後、２つのブラント
端を連結した。得られたクローンは、イニシエーターAT
GにNcoIサイト並びに停止コドンの下流に17-bpSalIサイ
トを有する。このクローンは、pRPA-BL 104と呼称され
る。
【００２４】４）ポリアデニル化シ グナル領域 フラグメントは、pTi37（Bevanら，1983）のノパリンシ
ンターゼ遺伝子から誘導する。このサイトは、５’及び
３’末端に各々BamHI及びEcoRIサイトを導入するため
に、クレノウポリメラーゼで処理し、次いでM13 mp 18
のSmaIサイトにクローンした260-bp MboIフラグメント
（Fraleyら，1983；PCT特許出願第84/02913号）中に含
まれる。
【００２５】BamHIで切断し、次いでVigna radiataヌク
レアーゼで処理した後、EcoRIで切断し、次いでクレノ
ウポリメラーゼで処理し、得られたフラグメントを、Xb
aI及びBamHIで切断し、クレノウポリメラーゼで処理し
たベクターp-BL 20（仏国特許出願第88/04130号）中に
導入した。SalI及びSstIで再切断後、SalIサイトの側に
３’nos配列、SstIサイトのt-ＤＮＡ側に右端を含む約
0.4kbpのフラグメントが得られた。
【００２６】種々の要素の組み立てを以下の如く実施し
た。
【００２７】”トウモロコシRuBisCOのSSUのトランジッ
トペプチド/AroA遺伝子”の融合 トウモロコシRuBisCO遺伝子のSSUのトランジットペプチ
ド配列を、Lebrunら（1987）の記載の如く、トウモロコ
シRuBisCO遺伝子のSSU遺伝子に対応するｃＤＮＡから得
られた192-bp EcoRI-SphIフラグメントから誘導した。
これは、翻訳用の開始コドンをスパンするNcoIサイト及
びトランジットペプチド配列の切断サイトに対応するSp
hIサイトを有していた。
【００２８】SphI端をバクテリオファージＴ４ポリメラ
ーゼで処理し、次いでEcoRIで再切断したpRPA-BL 104由
来のAroA遺伝子のクレノウポリメラーゼで処理したNcoI
端で連結することにより、トウモロコシトランジットペ
プチド配列とバクテリアEPSPS遺伝子の間で翻訳融合し
た。
【００２９】トウモロコシRuBisCOのSSUのトランジット
ペプチド/トウモ ロコシRuBisCOのSSUの成熟部分の22個
のアミノ酸配列/AroA遺伝子の融合 同様に、トウモロコシRuBisCO遺伝子のSSUのｃＤＮＡの
228-bp EcoRI-HindIIIフラグメントを、pRPA-BL104由来
のAroA遺伝子のクレノウポリメラーゼで処理したNcoI端
で連結し、EcoRIで再切断した。トウモロコシRuBisCOの
SSUのトランジットペプチド配列、トウモロコシRuBisCO
のSSUの成熟部分の22個のアミノ酸とバクテリアEPSPS遺
伝子の間で翻訳融合した。
【００３０】ヒマワリRuBisCOのSSUのトランジットペプ
チド フラグメントを、Waksman及びFreyssinet（1987）の方
法により単離したｃＤＮＡから誘導した。SphIサイト
を、Zoller及びSmith（1984）の方法によりトランジッ
トペプチド配列の切断サイトに作成した。このようにし
て得られたヒマワリRuBisCOのSSUのトランジットペプチ
ドは、171-bp EcoRI-SphIフラグメントであった。
【００３１】ヒマワリRuBisCOのSSUのトランジットペプ
チド/トウモロコ シRuBisCOのSS Uの成熟部分の22個のア
ミノ酸の配列/AroA遺伝子の融合 トウモロコシRuBisCOのSSUのトランジットペプチド/ト
ウモロコシ遺伝子の成熟部分のトウモロコシRuBisCOのS
SUの22個のアミノ酸の配列融合物を含む構築物を、ヒマ
ワリRuBisCOのSSUのトランジットペプチド配列に対応す
る171-bp EcoRI-SphIで切断した。得られた構築物は、E
coRI-SphIフラグメントの置換を示し、”ヒマワリRuBis
COのSSUのトランジットペプチド/トウモロコシRuBisCO
のSSUの成熟部分の22個のアミノ酸の配列/AroA遺伝子”
の翻訳融合物である。
【００３２】EcoRI-SalIフラグメントを３’nos配列と
Ｔ−ＤＮＡの右端を含むSalI-SstIフラグメントと連結
した。”ヒマワリRuBisCOのSSUのトランジットペプチド
/トウモロコシRuBisCOのSSUの成熟部分の22個のアミノ
酸の配列/AroA遺伝子/３’nos/Ｔ−ＤＮＡ右端”を含む
得られたEcoRI-SstIフラグメントを、二重CaMVプロモー
ターを含むプラスミド150Aα２のＴ−ＤＮＡの右端を含
むEcoRI-SstIフラグメントと置換した。ベクター150Ａ
α-２中の転写融合物”二重CaMV/ヒマワリRuBisCOのSSU
のトランジットペプチド/トウモロコシRuBisCOのSSUの
成熟部分の22個のアミノ酸の配列/AroA遺伝子/３’no
s”は、pRPA-BL 294と呼称される。
【００３３】”ヒマワリRuBisCOのSSUのトランジットペ
プチド/トウモロ コシRuBisCOのS SUの22個のアミノ酸 の
配列/トウモロコシR uBisCOのSSUの トランジットペプチ
ド/AroA遺伝子”の融合 先の構築物を、NcoI-HindIIIで切断し、AroA遺伝子を放
出した。次に、これを”トウモロコシRuBisCOのSSUのト
ランジットペプチド/AroA遺伝子”融合物を含む1.5kbp
NcoI-HindIIIフラグメントと連結した。得られた構築物
は、NcoI-HindIIIフラグメントの置換を示しており、”
ヒマワリRuBisCOのSSUのトランジットペプチド/トウモ
ロコシ遺伝子の成熟部分のRuBisCOのSSUの22個のアミノ
酸の配列/トウモロコシRuBisCOのSSUのトランジットペ
プチド/AroA遺伝子”翻訳融合物であった。
【００３４】EcoRI-SalIフラグメントを、３’nos配列
とｔ−ＤＮＡの右端を含むSalI-SstIフラグメントと連
結した。得られた”ヒマワリRuBisCOのSSUのトランジッ
トペプチド/トウモロコシ遺伝子の成熟部分のRuBisCOの
SSUの22個のアミノ酸の配列/トウモロコシRuBisCOのSSU
のトランジットペプチド/AroA遺伝子/３’nos/T-ＤＮＡ
右端”を含むEcoRI−SstIフラグメントは、二重のCaMV
プロモーターを含むプラスミド150Aα-２のT-ＤＮＡの
右端を含むEcoRI-SstIフラグメントと置換していた。ベ
クター150Ａα-２中の転写融合物”二重CaMV/ヒマワリR
uBisCOのSSUのトランジットペプチド/トウモロコシ遺伝
子の成熟部分のRuBisCOのSSUの22個のアミノ酸の配列/
トウモロコシRuBisCOのSSUのトランジットペプチド/Aro
A遺伝子/３’ｎｏｓ”は、pRPA-BL410と呼称される。
【００３５】実施例２：形質転換し た植物の耐性 １．形質転換：ベクターを、コスミドpTVK291（Komari
ら，1986）を保持する非発ガン性のアグロバクテリウム
株EHA 101に導入した（Hoodら，1987）。形質転換法
は、Horshら（1985）の方法を基にした。
【００３６】２．再生：葉状外植片を用いてタバコPBD6
（源SEITA，フランス）を、30g/l 蔗糖及び200g/ml カ
ナマイシンを含むMurashige及びSkoog（MS）塩基性培地
で再生した。葉状外植片は、温室またはin vitroで成長
させた植物から剥がし、葉状ディスク法（Science 198
5，Vol．227，p.1229~1231）により、３つの連続したス
テージで形質転換した。第１のステージは、0.05mg/l
ナフチル酢酸（ANA）及び２mg/lベンジルアミノプリン
（BAP）を含む30g/l 蔗糖を補ったMS培地上に新芽（sho
ot）を15日間誘導することからなる。このステージの間
に形成した新芽を、30g/l蔗糖を補ったがホルモンは含
まないMS培地上で10日間培養することにより成長させ
た。成長した新芽を剥がし、半分の量の塩、ビタミン及
び糖を含むがホルモンは含まないMS栽培培地で培養し
た。約15日後、深く根を張った新芽を土壌に植えた。
【００３７】３．グリフォセート耐性の測定 ａ）in vitro：35ppm グリフォセート及び200μg/ml カ
ナマイシンを含む30g/l 蔗糖、0.05mg/l ナフタレン酢
酸及び２mg/l BAPを補ったMS培地上で30日間成長させた
後、直径0.5cmの100個の葉状ディスクに外挿したカルス
重量を測定することにより耐性を測定した。これらの条
件下では、本発明のpRPA BL 410のキメラ遺伝子により
改質したタバコ植物の場合、カルス重量が34gであった
のに対し、第２のトランジットペプチドの無いキメラ遺
伝子により改質した植物の場合は、たったの12gであっ
た。
【００３８】ｂ）in vivo：pRPA-BL 294及びpRPA-BL 41
0を用いて形質転換したタバコの再生から誘導した30個
の植物を温室に移し、５葉期で0.6kg/ha グリフォセー
ト（Round up）に対応する投与量の水性懸濁液を噴霧す
ることにより処理した。21日後、形質転換しなかった対
照植物に対し植物の表現型実験を実施した。これらの条
件下では、pRPA-BL 410を用いて形質転換した植物の植
物毒性は無視できる程度であったのに対し、対照植物は
完全に枯れてしまった。さらに、第２のトランジットペ
プチドを有さない点で先のキメラ遺伝子と異なるキメラ
遺伝子を用いて形質転換した植物は、30%以上の死滅の
植物毒性を有していた。
【００３９】これらの結果は、明らかに、グリフォセー
ト耐性をコードする同一遺伝子に対し、本発明のキメラ
遺伝子を使用することによって改良できたことを示して
いる。
【００４０】本発明の形質転換した植物は、グリフォセ
ートに対し高い耐性を有する系統及びハイブリッドを製
造するための親として使用してもよい。
【００４１】実施例３ BOULTERら（PlantScience,70:91-99）の方法に従ってpR
PA-BL 410を用いて、グリフォセート耐性の春アブラナ
（Ｓpring colzas，Ｗestar品種）が得られた。これら
の植物は、400g a.s/haのグリフォセートの温室処理に
対し耐性を示した。この処理で、形質転換しなかった植
物は枯れた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 1/21 7236−4Ｂ 5/10 15/54 15/82 // Ｃ１２Ｎ 15/29 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (24)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 転写方向に、プラスチド−局在化酵素を
    コードする植物遺伝子のトランジットペプチドをコード
    する配列、プラスチド−局在化酵素をコードする植物遺
    伝子のＮ−末端成熟部分の部分配列及びプラスチド−局
    在化酵素をコードする植物遺伝子の第２のトランジット
    ペプチドをコードする配列を含む、トランジットペプチ
    ド領域植物ＤＮＡ配列。
  2. 【請求項２】 第２のトランジットペプチドをコードす
    る配列が、第１のトランジットペプチドをコードする配
    列と同一植物から誘導される請求項１に記載のトランジ
    ットペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  3. 【請求項３】 第２のトランジットペプチドをコードす
    る配列が、第１のトランジットペプチドとは異なる植物
    から誘導される請求項１または２に記載のトランジット
    ペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  4. 【請求項４】 トランジットペプチドの１つをコードす
    る少なくとも１つの配列が、RuBisCO遺伝子のSSUから誘
    導される請求項１〜３のいずれか１項に記載のトランジ
    ットペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  5. 【請求項５】 Ｎ−末端成熟部分の配列が、RuBisCO遺
    伝子のSSUから得られる請求項１〜４のいずれか１項に
    記載のトランジットペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  6. 【請求項６】 トランジットペプチドの１つをコードす
    る少なくとも１つの配列が、成熟部分の配列の元の遺伝
    子と同一遺伝子から誘導される請求項１〜５のいずれか
    １項に記載のトランジットペプチドをコードするＤＮＡ
    配列。
  7. 【請求項７】 トランジットペプチドの１つをコードす
    る少なくとも１つの配列が、トウモロコシ遺伝子から誘
    導される請求項１〜６のいずれか１項に記載のトランジ
    ットペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  8. 【請求項８】 トランジットペプチドの１つをコードす
    る少なくとも１つの配列が、ヒマワリ遺伝子から誘導さ
    れる請求項１〜７のいずれか１項に記載のトランジット
    ペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  9. 【請求項９】 成熟部分の配列が、トウモロコシ遺伝子
    から誘導される請求項１〜７のいずれか１項に記載のト
    ランジットペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  10. 【請求項１０】 成熟部分の配列が、ヒマワリ遺伝子か
    ら誘導される請求項１〜７のいずれか１項に記載のトラ
    ンジットペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  11. 【請求項１１】 成熟部分の配列が、10〜40個のアミノ
    酸を含む請求項１０に記載のトランジットペプチドをコ
    ードするＤＮＡ配列。
  12. 【請求項１２】 成熟部分の配列が、18〜33個のアミノ
    酸を含む請求項１〜１１のいずれか１項に記載のトラン
    ジットペプチドをコードするＤＮＡ配列。
  13. 【請求項１３】 転写方向に、プロモーター領域、トラ
    ンジットペプチド領域、グリフォセート耐性に対するコ
    ーディング配列及び３’に未翻訳ポリアデニル化シグナ
    ル領域を含み、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の
    トランジットペプチド領域を含む、除草剤に対し強い耐
    性を植物に与えるためのキメラ遺伝子。
  14. 【請求項１４】 除草剤がグリフォセートである請求項
    １３に記載のキメラ遺伝子。
  15. 【請求項１５】 除草剤がそのターゲットとしてEPSPS
    を有する請求項１３に記載のキメラ遺伝子。
  16. 【請求項１６】 グリフォセート耐性に対するコーディ
    ング配列がバクテリア由来である請求項１３〜１５のい
    ずれか１項に記載のキメラ遺伝子。
  17. 【請求項１７】 グリフォセート耐性に対するコーディ
    ング配列が、植物由来である請求項１３〜１５のいずれ
    か１項に記載のキメラ遺伝子。
  18. 【請求項１８】 請求項１３〜１７のいずれか１項に記
    載のキメラ遺伝子を含む植物を形質転換するためのベク
    ター。
  19. 【請求項１９】 請求項１８に記載のベクターを含むア
    グロバクテリウム属。
  20. 【請求項２０】 請求項１３〜１７のいずれか１項に記
    載のキメラ遺伝子を含む形質転換した植物細胞。
  21. 【請求項２１】 請求項２０に記載の細胞から得られ
    た、優れたグリフォセート耐性を有する形質転換した植
    物。
  22. 【請求項２２】 双子葉である請求項２１に記載の植
    物。
  23. 【請求項２３】 単子葉である請求項２１に記載の植
    物。
  24. 【請求項２４】 少なくとも２つのトランジットペプチ
    ド領域と、好適なプラスチド−局在化植物遺伝子の成熟
    部分の少なくとも１つの配列並びにグリフォセート耐性
    をコードする少なくとも１つの配列と好適なポリアデニ
    ル化シグナル領域を各々単離し、これらを耐性遺伝子の
    転写方向に組み立てる、請求項１３〜１７のいずれか１
    項に記載のキメラ遺伝子を構築するための方法。
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