JPH0585942A - インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 - Google Patents
インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体Info
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- JPH0585942A JPH0585942A JP4068989A JP6898992A JPH0585942A JP H0585942 A JPH0585942 A JP H0585942A JP 4068989 A JP4068989 A JP 4068989A JP 6898992 A JP6898992 A JP 6898992A JP H0585942 A JPH0585942 A JP H0585942A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 インターフェロンとヒアルロン酸及び／又は
その塩とを化学的に結合させてなることを特徴とするイ
ンターフェロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合
体である。 【効果】 本発明により得られたインターフェロン−ヒ
アルロン酸及び／又はその塩の結合体は、血中半減期が
長く改善され、抗ウイルス作用を保持し、抗原性が抑制
され、さらに抗癌効果も保持されているので、医薬とし
て有利に安全に使用でき、少ない投与回数でインターフ
ェロンの薬理効果を高める。
その塩とを化学的に結合させてなることを特徴とするイ
ンターフェロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合
体である。 【効果】 本発明により得られたインターフェロン−ヒ
アルロン酸及び／又はその塩の結合体は、血中半減期が
長く改善され、抗ウイルス作用を保持し、抗原性が抑制
され、さらに抗癌効果も保持されているので、医薬とし
て有利に安全に使用でき、少ない投与回数でインターフ
ェロンの薬理効果を高める。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、癌およびウィルス性疾
患等の治療に有用なインターフェロンをヒアルロン酸及
び／又はその塩（以下、総称してヒアルロン酸類とい
う）と結合させたインターフェロン−ヒアルロン酸類の
結合体に関する。
患等の治療に有用なインターフェロンをヒアルロン酸及
び／又はその塩（以下、総称してヒアルロン酸類とい
う）と結合させたインターフェロン−ヒアルロン酸類の
結合体に関する。
【０００２】
【従来の技術】インターフェロン（以下、ＩＦＮとい
う。）は、リンパ球や繊維芽細胞が産生する生理活用物
質で抗ウィルス作用や抗癌作用を示すことが知られてい
る。ＩＦＮには、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、およびＩＦ
Ｎ−γの３種類が存在し、細胞培養技術および遺伝子組
換え技術の目覚ましい進歩により、大量生産が可能とな
り、ＩＦＮは、医薬品として世界中で使用され始めてい
る。
う。）は、リンパ球や繊維芽細胞が産生する生理活用物
質で抗ウィルス作用や抗癌作用を示すことが知られてい
る。ＩＦＮには、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、およびＩＦ
Ｎ−γの３種類が存在し、細胞培養技術および遺伝子組
換え技術の目覚ましい進歩により、大量生産が可能とな
り、ＩＦＮは、医薬品として世界中で使用され始めてい
る。
【０００３】現在、ＩＦＮは多発性骨髄腫、腎癌、膠芽
腫、皮膚悪性黒色腫やＢ型肝炎の治療薬として認可さ
れ、さらに、非Ａ非Ｂ型肝炎、エイズ、その他の癌やリ
ウマチ等の治療薬としての臨床試験が開始されている。
治療薬としてのＩＦＮは、天然型と組換え型の双方が市
販されているが、世界的に組換え型が主流であり肝炎や
癌の治療においては、１日１回数週間の連続投与が行わ
れている。
腫、皮膚悪性黒色腫やＢ型肝炎の治療薬として認可さ
れ、さらに、非Ａ非Ｂ型肝炎、エイズ、その他の癌やリ
ウマチ等の治療薬としての臨床試験が開始されている。
治療薬としてのＩＦＮは、天然型と組換え型の双方が市
販されているが、世界的に組換え型が主流であり肝炎や
癌の治療においては、１日１回数週間の連続投与が行わ
れている。
【０００４】しかし、ＩＦＮの血中半減期が短く、期待
通りに治療効果が望めないのが現状である。しかも、特
に組換え型ＩＦＮにおいては、患者の体内に抗体が生
じ、治療効果を相殺してしまう問題が生じている（New
England Journal of Medicine,318(22)1409,1988）。か
かる問題を解消すべく、ＩＦＮをリポリーム封入（特開
昭63-502117 ）、コラーゲン包括（米国特許 4,855,13
4）および抗体結合（特開昭60-502104 ）させて、血中
半減期を増加させる試みが開示されている。
通りに治療効果が望めないのが現状である。しかも、特
に組換え型ＩＦＮにおいては、患者の体内に抗体が生
じ、治療効果を相殺してしまう問題が生じている（New
England Journal of Medicine,318(22)1409,1988）。か
かる問題を解消すべく、ＩＦＮをリポリーム封入（特開
昭63-502117 ）、コラーゲン包括（米国特許 4,855,13
4）および抗体結合（特開昭60-502104 ）させて、血中
半減期を増加させる試みが開示されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来の
これらには、血中半減期の長さ、抗原性及び医薬として
の安全性に対して十分に満足できるものではないという
欠点があった。
これらには、血中半減期の長さ、抗原性及び医薬として
の安全性に対して十分に満足できるものではないという
欠点があった。
【０００６】本発明者等は、ヒアルロン酸類が生体に対
し極めて安全な高分子物質であることに着目し、医薬
品、特に血中半減期の短い生理活性ペプチドの治療効果
向上につき検討し、かかる欠点を解決するための鋭意研
究を行った結果、ＩＦＮと医薬として安全性が確認され
ているヒアルロン酸類とを結合させることにより、得ら
れたＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体が、抗癌作用およ
び抗ウィルス作用を維持し、血中半減期も顕著に長くな
り、かつ免疫原性も抑制でき、しかも、医薬として安全
性が高いことを見出し、本発明を完成するに至った。
し極めて安全な高分子物質であることに着目し、医薬
品、特に血中半減期の短い生理活性ペプチドの治療効果
向上につき検討し、かかる欠点を解決するための鋭意研
究を行った結果、ＩＦＮと医薬として安全性が確認され
ているヒアルロン酸類とを結合させることにより、得ら
れたＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体が、抗癌作用およ
び抗ウィルス作用を維持し、血中半減期も顕著に長くな
り、かつ免疫原性も抑制でき、しかも、医薬として安全
性が高いことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、
（１）．ＩＦＮとヒアルロン酸類とを化学的に結合させ
てなることを特徴とするＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合
体、および（２）．（１）記載のＩＦＮ−ヒアルロン酸
類の結合体を含んで成る抗ウィルス剤、および（３）．
（１）記載のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体を含んで
成る抗癌剤である。
（１）．ＩＦＮとヒアルロン酸類とを化学的に結合させ
てなることを特徴とするＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合
体、および（２）．（１）記載のＩＦＮ−ヒアルロン酸
類の結合体を含んで成る抗ウィルス剤、および（３）．
（１）記載のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体を含んで
成る抗癌剤である。
【０００８】以下、さらに本発明について詳しく説明す
る。本発明に用いるＩＦＮとしては、特に制限はない
が、抗原性および早い血中消失速度の問題が指摘されて
いる遺伝子組換え技術を応用して生産された組換え型Ｉ
ＦＮが、望ましい。
る。本発明に用いるＩＦＮとしては、特に制限はない
が、抗原性および早い血中消失速度の問題が指摘されて
いる遺伝子組換え技術を応用して生産された組換え型Ｉ
ＦＮが、望ましい。
【０００９】一方、ヒアルロン酸は、Ｎ−アセチルグル
コサミン及びグルクロン酸単位の重合体であり、自然界
に広く存在し、多くの哺乳類中に見出される。例えば、
鶏冠から抽出されたヒアルロン酸が、変形性膝関節症の
治療剤として使用され、また、ある種の微生物、例えば
ストレプトコッカス属等の微生物により発酵法で産生さ
れたヒアルロン酸も、医薬品として開発されつつある。
コサミン及びグルクロン酸単位の重合体であり、自然界
に広く存在し、多くの哺乳類中に見出される。例えば、
鶏冠から抽出されたヒアルロン酸が、変形性膝関節症の
治療剤として使用され、また、ある種の微生物、例えば
ストレプトコッカス属等の微生物により発酵法で産生さ
れたヒアルロン酸も、医薬品として開発されつつある。
【００１０】本発明に用いられるヒアルロン酸類は、ヒ
アルロン酸、ヒアルロン酸の塩、又はヒアルロン酸とヒ
アルロン酸の塩の混合物を包含している。ヒアルロン酸
類は、遊離の形でもよく又その塩でもよく例えば、ナト
リウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
本発明に用いるヒアルロン酸としては、特に起源を問わ
ない。
アルロン酸、ヒアルロン酸の塩、又はヒアルロン酸とヒ
アルロン酸の塩の混合物を包含している。ヒアルロン酸
類は、遊離の形でもよく又その塩でもよく例えば、ナト
リウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
本発明に用いるヒアルロン酸としては、特に起源を問わ
ない。
【００１１】しかしながら、上記のようにある種の微生
物、例えばストレプトコッカス属により産生されるヒア
ルロン酸は、比較的均一なより高分子形態のものが高い
純度で得られることから好ましい。具体的に、発酵法で
使用する菌株は、特開昭63-123392 号公報に記載したス
トレプトコッカス・エキFM-100（微工研菌寄9027号）の
ように高収率で安定にヒアルロン酸を生産する変異株が
好ましい。
物、例えばストレプトコッカス属により産生されるヒア
ルロン酸は、比較的均一なより高分子形態のものが高い
純度で得られることから好ましい。具体的に、発酵法で
使用する菌株は、特開昭63-123392 号公報に記載したス
トレプトコッカス・エキFM-100（微工研菌寄9027号）の
ように高収率で安定にヒアルロン酸を生産する変異株が
好ましい。
【００１２】本発明に用いるヒアルロン酸類としては、
分子量が５千〜２００万のものが好ましい。また、ＩＦ
Ｎとヒアルロン酸類の結合割合は、１分子のＩＦＮあた
り、１〜８分子が良く、好ましくは、３〜６分子が良
い。さらに、ＩＦＮに対するヒアルロン酸類含量は、６
０．０〜９９．８重量％、好ましくは、７０〜９９重量
％である。
分子量が５千〜２００万のものが好ましい。また、ＩＦ
Ｎとヒアルロン酸類の結合割合は、１分子のＩＦＮあた
り、１〜８分子が良く、好ましくは、３〜６分子が良
い。さらに、ＩＦＮに対するヒアルロン酸類含量は、６
０．０〜９９．８重量％、好ましくは、７０〜９９重量
％である。
【００１３】本発明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体
は、ＩＦＮのアミノ基又は、カルボキシル基とヒアルロ
ン酸類のカルボキシル基又は、水酸基との反応によって
結合させてなるものであり、結合の条件としては、ＰＨ
は、３〜７が好ましい。またＩＦＮ濃度は、０．０１〜
１ｍｇ／ｍｌが好ましい。
は、ＩＦＮのアミノ基又は、カルボキシル基とヒアルロ
ン酸類のカルボキシル基又は、水酸基との反応によって
結合させてなるものであり、結合の条件としては、ＰＨ
は、３〜７が好ましい。またＩＦＮ濃度は、０．０１〜
１ｍｇ／ｍｌが好ましい。
【００１４】結合の方法としては、特に制限はないが、
臭化シアン法、エピクロヒドリン法、カルボジイミド
法、塩化シアヌル法や活性エステル法（橋田 充 続タ
ンパク質ハイブリッド132-166,1988）等が挙げられる。
臭化シアン法、エピクロヒドリン法、カルボジイミド
法、塩化シアヌル法や活性エステル法（橋田 充 続タ
ンパク質ハイブリッド132-166,1988）等が挙げられる。
【００１５】例えば、ヒアルロン酸のカルボキシル基
をＩＦＮのアミノ基と結合させるには、カルボジイミド
類を用いるが、このカルボジイミド類の好ましい代表例
としては、水溶性の１−エチル−３−（３−ジメチルア
ミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩や、１−シクロヘ
キシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）−カル
ボジイミド−Ｐ−トルエンスルホナート、１−ベンジル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
等がある。
をＩＦＮのアミノ基と結合させるには、カルボジイミド
類を用いるが、このカルボジイミド類の好ましい代表例
としては、水溶性の１−エチル−３−（３−ジメチルア
ミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩や、１−シクロヘ
キシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）−カル
ボジイミド−Ｐ−トルエンスルホナート、１−ベンジル
−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
等がある。
【００１６】ヒアルロン酸の水酸基をＩＦＮのアミノ
基と結合させるには、塩化シアヌル類を用いるが、この
塩化シアヌル類としては、塩化シアヌル、及び塩化シア
ヌルのＣｌ基をＮＨＣＨ2 ＣＯＯＨ基、ＯＣＨ2 ＣＯＯ
Ｈ基、ＮＨ2 基などで置換した化合物がある。
基と結合させるには、塩化シアヌル類を用いるが、この
塩化シアヌル類としては、塩化シアヌル、及び塩化シア
ヌルのＣｌ基をＮＨＣＨ2 ＣＯＯＨ基、ＯＣＨ2 ＣＯＯ
Ｈ基、ＮＨ2 基などで置換した化合物がある。
【００１７】このようにして、ＩＦＮとヒアルロン酸類
とを結合させることによって得られるＩＦＮ−ヒアルロ
ン酸類の結合体は、常法に従って、透析、アルコール沈
澱、ゲル濾過等により精製することが出来る。
とを結合させることによって得られるＩＦＮ−ヒアルロ
ン酸類の結合体は、常法に従って、透析、アルコール沈
澱、ゲル濾過等により精製することが出来る。
【００１８】本発明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体
は、長期治療を必要とする癌及びウィルス疾患の治療に
特に有望なものである。
は、長期治療を必要とする癌及びウィルス疾患の治療に
特に有望なものである。
【００１９】本発明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体
を医薬として適用するに際しては、固体または液体の医
薬用担体、または、賦形剤、安定剤等の添加剤とともに
含む製剤とすることが好ましい。好ましい塩としては、
薬学的に安全であるナトリウム塩、カリウム塩、マグネ
シウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
を医薬として適用するに際しては、固体または液体の医
薬用担体、または、賦形剤、安定剤等の添加剤とともに
含む製剤とすることが好ましい。好ましい塩としては、
薬学的に安全であるナトリウム塩、カリウム塩、マグネ
シウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
【００２０】投与形態としては、顆粒剤、錠剤もしくは
液剤として、経鼻または経口投与しても良いし、注射剤
として、静脈内投与、筋肉内投与または皮下投与しても
よい。注射剤としては、粉末として用時調製して使用し
てもよい。
液剤として、経鼻または経口投与しても良いし、注射剤
として、静脈内投与、筋肉内投与または皮下投与しても
よい。注射剤としては、粉末として用時調製して使用し
てもよい。
【００２１】また、注射剤として用いる場合には、本発
明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体として、成人に対
し、１日量１０〜１，０００ｍｇ投与するのが好ましい
が、年令、症状により適宜増減することも可能である。
前記１日量の本発明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体
は、１日１回投与することも可能だが、３日もしくは、
７日に１回投与でも十分の効果が望めるものである。
明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体として、成人に対
し、１日量１０〜１，０００ｍｇ投与するのが好ましい
が、年令、症状により適宜増減することも可能である。
前記１日量の本発明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合体
は、１日１回投与することも可能だが、３日もしくは、
７日に１回投与でも十分の効果が望めるものである。
【００２２】
【実施例】以下、実施例を掲げて本発明について具体的
に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるもの
ではない。なお、以下の実施例等において、ＩＦＮ力価
の測定はＶＳＶウィルスおよびヒト羊膜由来の株化細胞
（ＦＬ細胞）を用い、細胞変性効果法により国際単位
（Ｉ. Ｕ）に換算した。
に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるもの
ではない。なお、以下の実施例等において、ＩＦＮ力価
の測定はＶＳＶウィルスおよびヒト羊膜由来の株化細胞
（ＦＬ細胞）を用い、細胞変性効果法により国際単位
（Ｉ. Ｕ）に換算した。
【００２３】実施例１ １０ｍｇのヒアルロン酸ナトリウム（分子量１６５万）
をリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ６. ０）１０ｍｌに溶解
した。生成した濃厚な透明溶液に組換え型ヒト・ＩＦＮ
−α（バイオネイティブ社製）１×１０9 単位を入れ、
４℃で１０分間撹拌した。次いで、水溶性カルボジイミ
ド［１−エチル−３−( ３−ジメチルアミノプロピル)
カルボジイミド塩酸塩］、（ナカライテスク社製）１０
ｍｇを加え、更に４℃で１９時間反応させた。
をリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ６. ０）１０ｍｌに溶解
した。生成した濃厚な透明溶液に組換え型ヒト・ＩＦＮ
−α（バイオネイティブ社製）１×１０9 単位を入れ、
４℃で１０分間撹拌した。次いで、水溶性カルボジイミ
ド［１−エチル−３−( ３−ジメチルアミノプロピル)
カルボジイミド塩酸塩］、（ナカライテスク社製）１０
ｍｇを加え、更に４℃で１９時間反応させた。
【００２４】次いで、反応混合物を高速ゲル濾過カラム
（ＴＳＫｇｅｌ Ｇ６０００ＰＷ東ソー社製）を通し、
高分子量ＵＶ（２８０ｎｍ）−吸収付加物ピークを分取
し、次ぎに、ＩＦＮ−αが結合しなかった遊離ヒアルロ
ン酸ナトリウムをイオン交換クロマトグラフィー（ＳＰ
−Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ファルマシア社製）により、（Ｉ
ＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウムの結合物から分離
した。ＮａＣｌを用いることにより、（ＩＦＮ−α）−
ヒアルロン酸ナトリウムの結合体含有フラクションを集
めた。
（ＴＳＫｇｅｌ Ｇ６０００ＰＷ東ソー社製）を通し、
高分子量ＵＶ（２８０ｎｍ）−吸収付加物ピークを分取
し、次ぎに、ＩＦＮ−αが結合しなかった遊離ヒアルロ
ン酸ナトリウムをイオン交換クロマトグラフィー（ＳＰ
−Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ファルマシア社製）により、（Ｉ
ＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウムの結合物から分離
した。ＮａＣｌを用いることにより、（ＩＦＮ−α）−
ヒアルロン酸ナトリウムの結合体含有フラクションを集
めた。
【００２５】その（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリ
ウムの結合体含有フラクションを水に対し透析後、凍結
乾燥し、２. ５ｍｇの（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナ
トリウムの結合体を得た。この薬剤は、優れた特性を示
している。また、この薬剤の１ｍｇ蛋白当たりの細胞変
性効果（抗ウイルス活性）は、ＩＦＮ−α１ｍｇ蛋白当
たりの抗ウイルス活性の約９０％を保持していた。 血中濃度半減速度試験 ラット（ウイスター系、雄、体重２００ｇ、日本チャー
ルスリバー社）を用いて、実施例１の薬剤０．５ｍｇを
大腿部の筋肉内に注射投与した。結果を図１に示す。図
１において−●−は（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナト
リウム結合体の─○─は対照とした非修飾体の測定結果
である。図１より血中の半減期はＩＦＮ−α単独に比べ
て良好に延長されていた。
ウムの結合体含有フラクションを水に対し透析後、凍結
乾燥し、２. ５ｍｇの（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナ
トリウムの結合体を得た。この薬剤は、優れた特性を示
している。また、この薬剤の１ｍｇ蛋白当たりの細胞変
性効果（抗ウイルス活性）は、ＩＦＮ−α１ｍｇ蛋白当
たりの抗ウイルス活性の約９０％を保持していた。 血中濃度半減速度試験 ラット（ウイスター系、雄、体重２００ｇ、日本チャー
ルスリバー社）を用いて、実施例１の薬剤０．５ｍｇを
大腿部の筋肉内に注射投与した。結果を図１に示す。図
１において−●−は（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナト
リウム結合体の─○─は対照とした非修飾体の測定結果
である。図１より血中の半減期はＩＦＮ−α単独に比べ
て良好に延長されていた。
【００２６】実施例２ １０ｍｇのヒアルロン酸ナトリウム（分子量１０万）を
リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ６. ０）１０ｍｌに溶解し
た。生成した濃厚な透明溶液にヒト・ ＩＦＮ−β（ベー
ゼル社製）１×１０7 単位を入れ、４℃で１０分間撹拌
した。次いで、水溶性カルボジイミド［１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸
塩］、（ナカライテスク社製）１０ｍｇを加え、更に４
℃で１９時間反応させた。
リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ６. ０）１０ｍｌに溶解し
た。生成した濃厚な透明溶液にヒト・ ＩＦＮ−β（ベー
ゼル社製）１×１０7 単位を入れ、４℃で１０分間撹拌
した。次いで、水溶性カルボジイミド［１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸
塩］、（ナカライテスク社製）１０ｍｇを加え、更に４
℃で１９時間反応させた。
【００２７】次いで、反応混合物を高速ゲル濾過カラム
（ＴＳＫｇｅｌ Ｇ５０００ＰＷ東ソー社製）を通し、
高分子量ＵＶ（２８０ｎｍ）−吸収付加物ピークを分取
し、次ぎに、ＩＦＮ−βが結合しなかった遊離ヒアルロ
ン酸ナトリウムをイオン交換クロマトグラフィー（ＳＰ
−Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ファルマシア社製）により、（Ｉ
ＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナトリウムの結合物から分離
した。ＮａＣｌを用いることにより、（ＩＦＮ−β）−
ヒアルロン酸ナトリウムの結合体含有フラクションを集
めた。
（ＴＳＫｇｅｌ Ｇ５０００ＰＷ東ソー社製）を通し、
高分子量ＵＶ（２８０ｎｍ）−吸収付加物ピークを分取
し、次ぎに、ＩＦＮ−βが結合しなかった遊離ヒアルロ
ン酸ナトリウムをイオン交換クロマトグラフィー（ＳＰ
−Ｓｅｐｈａｄｅｘ、ファルマシア社製）により、（Ｉ
ＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナトリウムの結合物から分離
した。ＮａＣｌを用いることにより、（ＩＦＮ−β）−
ヒアルロン酸ナトリウムの結合体含有フラクションを集
めた。
【００２８】その（ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナトリ
ウムの結合体含有フラクションを水に対し透析後、凍結
乾燥し、２. ５ｍｇの（ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナ
トリウムの結合体を得た。この薬剤は、優れた特性を示
している。また、この薬剤の１ｍｇ蛋白当たりの細胞変
性効果（抗ウイルス活性）は、ＩＦＮ−β１ｍｇ蛋白当
たりの抗ウイルス活性の約９０％を保持していた。 血中濃度半減速度試験 ラット（ウィスター系、雄、体重２００ｇ、日本チャー
ルスリバー社）を用いて、実施例２の薬剤０．１ｍｇを
尾静脈内注射投与した。結果を図２に示す。図２におい
て−◆−は（ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナトリウム結
合体の─◇─は対照とした非修飾体の測定結果である。
図２より血中の半減期はＩＦＮ−β単独に比べて良好に
延長されていた。
ウムの結合体含有フラクションを水に対し透析後、凍結
乾燥し、２. ５ｍｇの（ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナ
トリウムの結合体を得た。この薬剤は、優れた特性を示
している。また、この薬剤の１ｍｇ蛋白当たりの細胞変
性効果（抗ウイルス活性）は、ＩＦＮ−β１ｍｇ蛋白当
たりの抗ウイルス活性の約９０％を保持していた。 血中濃度半減速度試験 ラット（ウィスター系、雄、体重２００ｇ、日本チャー
ルスリバー社）を用いて、実施例２の薬剤０．１ｍｇを
尾静脈内注射投与した。結果を図２に示す。図２におい
て−◆−は（ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナトリウム結
合体の─◇─は対照とした非修飾体の測定結果である。
図２より血中の半減期はＩＦＮ−β単独に比べて良好に
延長されていた。
【００２９】実施例３ Ｂａｌｂ／ｃマウス（８週令、雌）に実施例１で作製し
た（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウム結合体とＩ
ＦＮ−α単独で免疫学的感作能を調べた。投与当たり２
０μｇのタンパク質を連続１０日間皮下注射し、投与終
了後、２０日目に血清を採取し、抗ＩＦＮ抗体の有無を
調べた。ウサギの抗マウスＩｇＧ抗体とカップルさせた
セルロースに血清１０μｌを添加し、室温で２０時間反
応させた。次にセルロースを生理食塩水で十分に洗浄
し、それにＩＦＮ−αの１０００Ｉ．Ｕ／ｍｌ加えた。
反応５時間後に上清をサンプリングし、ＩＦＮ活性を測
定したところ、（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウ
ム結合体での感作マウス血清では、９２０Ｉ．Ｕ／ｍｌ
であるのに対し、ＩＦＮ非結合体感作では、７６０Ｉ．
Ｕ／ｍｌであった。その結果、（ＩＦＮ−α）−ヒアル
ロン酸ナトリウム結合体の方が抗原性が抑制されること
が示された。
た（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウム結合体とＩ
ＦＮ−α単独で免疫学的感作能を調べた。投与当たり２
０μｇのタンパク質を連続１０日間皮下注射し、投与終
了後、２０日目に血清を採取し、抗ＩＦＮ抗体の有無を
調べた。ウサギの抗マウスＩｇＧ抗体とカップルさせた
セルロースに血清１０μｌを添加し、室温で２０時間反
応させた。次にセルロースを生理食塩水で十分に洗浄
し、それにＩＦＮ−αの１０００Ｉ．Ｕ／ｍｌ加えた。
反応５時間後に上清をサンプリングし、ＩＦＮ活性を測
定したところ、（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウ
ム結合体での感作マウス血清では、９２０Ｉ．Ｕ／ｍｌ
であるのに対し、ＩＦＮ非結合体感作では、７６０Ｉ．
Ｕ／ｍｌであった。その結果、（ＩＦＮ−α）−ヒアル
ロン酸ナトリウム結合体の方が抗原性が抑制されること
が示された。
【００３０】実施例４ ヒト慢性骨髄性白血病細胞（Ｋ−５６２）を１０％牛胎
児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地５ｍｌ中に２×
１０4 個／ｍｌとなるように懸濁し、２５ｃｍ2 プラス
チック培養フラスコに入れ、次に実施例１で作製した
（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウム結合体１×１
０3 Ｉ．Ｕ／ｍｌとなるように加え、３７℃、５％ＣＯ
2 インキュベーターで４日間培養し、細胞数をカウント
したところ、コントロールに比べ、６０％の増殖阻害が
示された。
児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地５ｍｌ中に２×
１０4 個／ｍｌとなるように懸濁し、２５ｃｍ2 プラス
チック培養フラスコに入れ、次に実施例１で作製した
（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウム結合体１×１
０3 Ｉ．Ｕ／ｍｌとなるように加え、３７℃、５％ＣＯ
2 インキュベーターで４日間培養し、細胞数をカウント
したところ、コントロールに比べ、６０％の増殖阻害が
示された。
【００３１】製剤例 製剤例１ 単位バイアルあたり、２ｍｌの注射用蒸留水に溶解し、
下記組成を含む凍結乾燥製剤を製造した。 （組成：１バイアルあたり） （ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸の結合体 ３×１０6 Ｉ．Ｕ ヒト血清アルブミン ２０ｍｇ 塩化ナトリウム １６ｍｇ リン酸２水素１ナトリウム・２水塩 ０．５ｍｇリン酸１水素２ナトリウム・１２水塩 ６ｍｇ
下記組成を含む凍結乾燥製剤を製造した。 （組成：１バイアルあたり） （ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸の結合体 ３×１０6 Ｉ．Ｕ ヒト血清アルブミン ２０ｍｇ 塩化ナトリウム １６ｍｇ リン酸２水素１ナトリウム・２水塩 ０．５ｍｇリン酸１水素２ナトリウム・１２水塩 ６ｍｇ
【００３２】製剤例２ 単位バイアルあたり、２ｍｌの生理食塩水または、５％
ブドウ糖液に溶解し、下記組成を含む凍結乾燥製剤を製
造した。 （組成：１バイアルあたり） （ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸の結合体 ３×１０6 Ｉ．Ｕ ヒト血清アルブミン ２０ｍｇマンニット ５０ｍｇ
ブドウ糖液に溶解し、下記組成を含む凍結乾燥製剤を製
造した。 （組成：１バイアルあたり） （ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸の結合体 ３×１０6 Ｉ．Ｕ ヒト血清アルブミン ２０ｍｇマンニット ５０ｍｇ
【００３３】
【発明の効果】本発明のＩＦＮ−ヒアルロン酸類の結合
体は、血中半減期が長く改善され、抗ウイルス作用を保
持し、抗原性が抑制され、さらに抗癌効果も保持されて
いるので、医薬として有利に安全に使用でき、少ない投
与回数でＩＦＮの薬理効果を高めるものである。
体は、血中半減期が長く改善され、抗ウイルス作用を保
持し、抗原性が抑制され、さらに抗癌効果も保持されて
いるので、医薬として有利に安全に使用でき、少ない投
与回数でＩＦＮの薬理効果を高めるものである。
【図１】図１は、本発明の実施例１の（ＩＦＮ−α）−
ヒアルロン酸ナトリウム結合体の筋注におけるラット血
清中でのクリアランスの遅延効果を示す。図１において
−●−は（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウム結合
体の─○─は対照とした非修飾体の測定結果を示す。
ヒアルロン酸ナトリウム結合体の筋注におけるラット血
清中でのクリアランスの遅延効果を示す。図１において
−●−は（ＩＦＮ−α）−ヒアルロン酸ナトリウム結合
体の─○─は対照とした非修飾体の測定結果を示す。
【図２】図２は、本発明の実施例２の（ＩＦＮ−β）−
ヒアルロン酸ナトリウム結合体の静注におけるラット血
清中でのクリアランスの遅延効果を示す。図２において
−◆−は（ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナトリウム結合
体の─◇─は対照とした非修飾体の測定結果を示す。
ヒアルロン酸ナトリウム結合体の静注におけるラット血
清中でのクリアランスの遅延効果を示す。図２において
−◆−は（ＩＦＮ−β）−ヒアルロン酸ナトリウム結合
体の─◇─は対照とした非修飾体の測定結果を示す。
Claims (3)
- 【請求項１】 インターフェロンとヒアルロン酸及び／
又はその塩とを化学的に結合させてなることを特徴とす
るインターフェロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の
結合体。 - 【請求項２】 請求項１に記載のインターフェロン−ヒ
アルロン酸及び／又はその塩の結合体を含んで成る抗ウ
ィルス剤。 - 【請求項３】 請求項１に記載のインターフェロン−ヒ
アルロン酸及び／又はその塩の結合体を含んで成る抗癌
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4068989A JPH0585942A (ja) | 1991-02-26 | 1992-02-18 | インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3-53179 | 1991-02-26 | ||
| JP5317991 | 1991-02-26 | ||
| JP4068989A JPH0585942A (ja) | 1991-02-26 | 1992-02-18 | インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0585942A true JPH0585942A (ja) | 1993-04-06 |
Family
ID=26393895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4068989A Pending JPH0585942A (ja) | 1991-02-26 | 1992-02-18 | インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0585942A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001081103A (ja) * | 1999-09-13 | 2001-03-27 | Denki Kagaku Kogyo Kk | ヒアルロン酸結合薬剤 |
| WO2001005434A3 (en) * | 1999-07-20 | 2001-11-15 | Amgen Inc | Hyaluronic acid-protein conjugates |
| JP2002193830A (ja) * | 1998-10-19 | 2002-07-10 | High Chem Co Ltd | 経鼻投与用医薬製剤 |
| JP2004018750A (ja) * | 2002-06-18 | 2004-01-22 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | 親水性を向上したヒアルロン酸誘導体の製造方法 |
| JP2005532269A (ja) * | 2002-02-28 | 2005-10-27 | ヴラディミール エフゲニエヴィッチ ネボルシン | 細胞分化の誘発方法 |
| US8143391B2 (en) | 2004-09-07 | 2012-03-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification |
| WO2012118189A1 (ja) | 2011-03-03 | 2012-09-07 | 中外製薬株式会社 | アミノ－カルボン酸により修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
| WO2014038641A1 (ja) | 2012-09-05 | 2014-03-13 | 中外製薬株式会社 | アミノ酸およびステリル基が導入されたヒアルロン酸誘導体 |
| JP2016529362A (ja) * | 2013-08-29 | 2016-09-23 | ホーリー ストーン バイオテック カンパニー リミテッド | グリコサミノグリカン化合物、その調製方法および使用 |
-
1992
- 1992-02-18 JP JP4068989A patent/JPH0585942A/ja active Pending
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002193830A (ja) * | 1998-10-19 | 2002-07-10 | High Chem Co Ltd | 経鼻投与用医薬製剤 |
| WO2001005434A3 (en) * | 1999-07-20 | 2001-11-15 | Amgen Inc | Hyaluronic acid-protein conjugates |
| JP2001081103A (ja) * | 1999-09-13 | 2001-03-27 | Denki Kagaku Kogyo Kk | ヒアルロン酸結合薬剤 |
| JP2005532269A (ja) * | 2002-02-28 | 2005-10-27 | ヴラディミール エフゲニエヴィッチ ネボルシン | 細胞分化の誘発方法 |
| US7759313B2 (en) | 2002-02-28 | 2010-07-20 | Obschetstvo S Ogranichennoi Otvetstvennostiyu “Pharmenterprises” | Induction method for cell differentiation |
| JP4711626B2 (ja) * | 2002-02-28 | 2011-06-29 | オブシェストヴォス オグラニチェンノイ オトヴェツトヴェンノスティユ “ファルメンテルプリセス” | 細胞分化の誘発方法 |
| JP2004018750A (ja) * | 2002-06-18 | 2004-01-22 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | 親水性を向上したヒアルロン酸誘導体の製造方法 |
| US9394379B2 (en) | 2004-09-07 | 2016-07-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification |
| US8143391B2 (en) | 2004-09-07 | 2012-03-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification |
| WO2012118189A1 (ja) | 2011-03-03 | 2012-09-07 | 中外製薬株式会社 | アミノ－カルボン酸により修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
| US9243077B2 (en) | 2011-03-03 | 2016-01-26 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Derivative of hyaluronic acid modified with amino-carboxylic acid |
| EP3184553A1 (en) | 2011-03-03 | 2017-06-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Derivative of hyaluronic acid modified with amino-carboxylic acid |
| WO2014038641A1 (ja) | 2012-09-05 | 2014-03-13 | 中外製薬株式会社 | アミノ酸およびステリル基が導入されたヒアルロン酸誘導体 |
| KR20150048238A (ko) | 2012-09-05 | 2015-05-06 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 아미노산 및 스테릴기가 도입된 히알루론산 유도체 |
| US11564971B2 (en) | 2012-09-05 | 2023-01-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hyaluronic acid derivative having amino acid and steryl group introduced thereinto |
| JP2016529362A (ja) * | 2013-08-29 | 2016-09-23 | ホーリー ストーン バイオテック カンパニー リミテッド | グリコサミノグリカン化合物、その調製方法および使用 |
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