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JPH0554067B2 - - Google Patents

Info

Publication number
JPH0554067B2
JPH0554067B2 JP59052142A JP5214284A JPH0554067B2 JP H0554067 B2 JPH0554067 B2 JP H0554067B2 JP 59052142 A JP59052142 A JP 59052142A JP 5214284 A JP5214284 A JP 5214284A JP H0554067 B2 JPH0554067 B2 JP H0554067B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
reaction
sample
antigen
solution
prozone
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP59052142A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JPS60196669A (en
Inventor
Kyoko Makiguchi
Toshuki Sagusa
Yasushi Nomura
Yutaka Naka
Masatoshi Sawai
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nissui Pharmacetuical Co Ltd
Hitachi Ltd
Original Assignee
Nissui Pharmacetuical Co Ltd
Hitachi Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nissui Pharmacetuical Co Ltd, Hitachi Ltd filed Critical Nissui Pharmacetuical Co Ltd
Priority to JP5214284A priority Critical patent/JPS60196669A/en
Publication of JPS60196669A publication Critical patent/JPS60196669A/en
Publication of JPH0554067B2 publication Critical patent/JPH0554067B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]

〔発明の利用分野〕 本発明は抗原抗体反応用分析方法および装置に
係り、特にプロゾーン現象の影響があるか否かを
判定して反応液を測定する場合に適用するに好適
な分析方法および装置に関する。 〔発明の背景〕 病院等における臨床化学検査は、近年ますます
自動化の方向にあり、生化学検査のみならず血清
検査の自動化も盛んになつてきた。また各種疾患
に関して臨床知見が蓄積されるにつれて、これら
の疾患と密接な関係を持つとされる物質が明らか
にされつつある。これら最近クローズアツプされ
つつある物質は概して血清中に微量にしか存在し
ないことが多い。これらの物質は抗原抗体反応を
利用して分析測定される。なかでも標識としてラ
ジオアイソトープを用いる方法(RIA法)は微量
成分の測定に適している。又、免疫比濁法、ラテ
ツクス比濁法、蛍光標識免疫法、酵素標識免疫法
などの免疫学的測定法も最近用いられるようにな
つてきた。 ところが、抗原抗体反応を利用するこれらの分
析方法では、検体中に高濃度の抗体又は抗原が含
まれている場合に測定値が極めて低濃度を示すと
いうプロゾーン現象が、しばしば出現し、被検物
質(抗体又は抗原)の測定誤差をもたらしてい
た。 〔発明の目的〕 本発明の目的は、抗原抗体反応を生じ得る被検
免疫成分の分析測定に際して、反応前の試料に濁
りがあつてもプロゾーン現象による影響の有無を
適正に確認し得る抗原抗体反応用分析方法および
装置を提供することにある。 〔発明の概要〕 本発明による分析方法は、試料と抗原抗体反応
用試薬が混合された第1反応液を測光した後、第
1反応液を収容した反応容器に上記被検免疫成分
と同じ物質を含むプロゾーンチエツク用液を添加
すること、そのプロゾーン用液の添加によつて得
られた第2反応液を光度計によつて複数回測光
し、その複数回の測光で観測された吸光度変化を
上記第2反応液のレートアツセイ測定値として求
めること、および上記レートアツセイ測定値が負
であるときに制御装置によつて上記第1反応液に
プロゾーン現象の影響がある旨の判定をし、上記
レートアツセイ測定値が正であるときに上記制御
装置によつて上記第1反応液にプロゾーン現象の
影響が無い旨の判定をすることを特徴とする。 また、本発明による分析装置は、上述の分析方
法を実行し得るように構成したものであつて、特
に、第2反応液を収容した反応容器が測光位置を
複数回経由するように反応デイスクに反応容器列
移送運動を与える反応デイスク駆動装置を設ける
と共に、上記第2反応液に対する複数回の測光に
基づいて得たレートアツセイ測定値が負であると
きに第1反応液にはプロゾーン現象の影響がある
旨の判定をする制御装置であつて、上記レートア
ツセイ測定値が正であるときに上記第1反応液の
測光に基づいて演算された被検免疫成分濃度を出
力装置に出力せしめる制御装置を設けたことを特
徴とする。 ここで、被検免疫成分とは抗原と抗体の内の一
方を指し、抗原抗体反応用試薬とは被検免疫成分
と特異的に反応して抗原抗体複合体を形成し得る
ような物質(対応する抗体又は抗原)を含むもの
を指す。測定対象は抗原の場合もあれば抗体の場
合もある。 ここで述べるレートアツセイ測定は、同じ反応
液の時間的経過に伴つて抗原抗体複合体の生成量
が変化する状態を光学的に観測することを指し、
先の観測時点よりも後の観測時点の方が生成量が
減少する場合を負とし、増大する場合を正とす
る。本発明の実施例では反応過程を複数回吸光度
測光する。プロゾーンチエツク用液を添加するこ
とによつて形成された第2反応液において、所定
時間経過後の吸光度が先に測光された吸光度より
も小さい場合には、第2反応液における複合体生
成量が次第に減少したことを意味する。 血液試料では、しばしば濁りのある検体が存在
するが、本発明のレートアツセイ測定によるプロ
ゾーンチエツクは、濁りによる影響を受け難い。 〔発明の実施例〕 本発明に基づく具体的な実施例の説明に先立
ち、プロゾーン現象に関連する知見を説明する。
ここでは、抗原と抗体の反応によつて生成された
抗原抗体複合体を濁度として光学的に測定する免
疫比濁法を例にとつて説明する。 一般的に、抗原抗体複合体の濃度と濁度は正の
比例関係にある。従つて、検体試料中の被検物質
(抗原の場合も抗体の場合もある)の濃度に比例
して抗原抗体複合体が生成するような領域におい
ては、濁度を測定することにより目的物質の濃度
を定量し得る。すなわち、被検物質(抗原又は抗
体)の濃度に対して試薬中の反応物質(抗体又は
抗原)の濃度が充分に大きい場合は、被検物質の
濃度と濁度はほぼ正比例関係にある。被検物質の
濃度が増大するに従い比例定数は小さくなり、反
応容器内の被検物質の濃度と反応物質の濃度がほ
ぼ等量となる比例定数はゼロに近づく。さらに、
被検物質の濃度が反応物質の濃度より大きくなる
と比例定数は負の値となり、濁度は逆に減少す
る。従つて、このような領域において濁度から被
検物質を定量すると、実際には著しく高濃度の被
検物質を含んでいるにもかかわらず、異常に低い
測定値を与えるため臨床検査上致命的な誤りをお
かすことになる。 すなわち、測定方法として抗原抗体反応が利用
される場合には、常に得られた測定値が反応物質
過剰域での反応により得られたものであるか否か
を確認することが大切であることが理解される。
このプロゾーン現象のチエツクは、検査測定結果
の信頼性確保のために欠くことができない。 次に本発明に基づく一実施例を、第1図を参照
して説明する。 サンプラ1は、血液検体の入つたサンプルカツ
プ5を、順次又は特定の検体を選択的に試料吸入
位置に位置づけるようにサンプルカツプ列を移送
する。この移送機構としてはターンテーブルとス
テツプングモータ(パルスモータ)の組合せが好
ましいが、屈曲可能なチエーンを用いるものであ
つてもよい。一方、反応容器6の列2の移送路す
なわち反応ラインは、試料添加位置、第1試薬添
加位置、第1測光位置、第2試薬添加位置、およ
び第2測光位置を通る。 被検物質である抗原を含む血液は、ピペツタ機
構3のピペツトノズル4によつて、試料吸入位置
にきたサンプルカツプ5から吸入され、試料添加
位置で停止された反応容器6へ吐出される。反応
容器の列が間欠移送され、第1試薬添加位置に反
応容器が停止すると、反応物質である抗体を含む
第1試薬液が、第1試薬供給機構7のチユーブ8
を介して添加され、抗原抗体反応が開始される。
この反応により免疫複合体が生成される。この第
1の反応液は第1測光位置において第1の光度計
によつて吸光度が測定される。第1の光度計では
光源部12aから反応液へ白色光を照射し、分光
器11aで透過光を分光して受光する。光電変換
した信号はアナログ・デジタル変換器(A/D変
換器)15aを介してマイクロコンピユータ20
に送られ、必要な信号処理がなされたあとコンピ
ユータのメモリに記憶される。 特定の反応容器がさらに間欠移送されて第2試
薬添加位置に達すると、第2試薬供給機構9のチ
ユーブ10を介して、第1試薬液と同じ抗体を含
む第2試薬液が所定量添加される。このような追
加液の添加により免疫複合体の生成量が変化す
る。この第2の反応液は第2測光位置において第
2の光度計によつて吸光度が測定される。すなわ
ち、光源部12bからの白色光を反応液へ照射し
透過光を分光器11bで分散して必要な波長光を
光電変換する。信号はA/D変換器15bを介し
てマイクロコンピユータ20に導かれ、追加液の
添加による液量変化に基づく吸光度変化が補正さ
れた上で、同じ検体に関するこの第2の測定値は
先にメモリに記憶してあつた第1の測定値と比較
され、所定の基準に基づいてプロゾーン現象によ
る影響があるかどうかが判定される。 マイクロコンピユータ20による判定の結果、
プロゾーン現象の影響がないと判定された検体は
第1の光度計に基づく測定値が、その検体中の抗
原の濃度として、表示部21に表示される。プロ
ゾーン現象の影響があると判定された検体は、第
1の測定値に再測定が必要である旨のコメントが
付されて表示部21に表示される。従つてオペレ
ータは、この表示結果に基づいてこの問題のある
検体を測定条件を変えて測定することができる。 この実施例では、自動的に再測定させることも
できる。すなわち、特定の検体がプロゾーン現象
の影響があると判定された場合に、マイクロコン
ピユータ20は、その影響の程度に応じて、検体
採取量又は第1試薬添加量を変更するように、ピ
ペツタ機構3又は第1試薬供給機構7に指示す
る。再測定が必要な検体の入つたサンプルカツプ
5は、マイクロコンピユータ20の制御により試
料吸入位置に位置づけられ、ノズル4によつて変
更された試料量が反応容器6へ分配される。以下
前述の場合と同様にして分析操作が進行する。サ
ンプラ1では、再測定検体の割込分配動作が終了
すると、再び元の測定順番状態に戻り、分配動作
が続行される。 次に第2図〜第6図を参照して本発明に基づく
他の実施例について説明する。 第2図において、反応デイスク31はその円周
上に複数個の測定セルを兼ねた透光性の反応容器
6を有し、回転中心33のまわりを時計方向に回
転できる。試薬24a,24bの分注は分注器3
9,40によつて行われる。分光器11は多波長
同時測光形であり、光源ランプ12と相対し、反
応デイスク31が回転状態にある時に反応容器6
の列が光源ランプからの光束13を通過するよう
に構成してある。回転中心36を軸に両方向に回
転し得るサンプルテーブル34上の被測定試料
(血清など)の入つた試料容器5がサンプル吸入
位置30に来ると、ピペツトプローブ38により
血清の一定量が吸入され、吐出位置25に移送さ
れてきた反応容器内に吐出する。シリンジ37と
プローブ38による上記サンプリング動作が終る
と反応デイスクは時計方向に360度プラス反応容
器1ピツチ分回転して停止する。従つて反応デイ
スクの回転中に反応デイスク上のすべての反応容
器は光束を通過する。それぞれの反応容器が光束
を通過するときに分光器11によつて光吸収測定
がなされ、分光器の出力はマルチプレクサ16に
より現在必要な測定波長の信号が選択され、A/
D変換器を経てマイクロコンピユータ20の中央
処理装置に取り込まれて読出書込記憶装置に記憶
される。排出機構28は排液吸入管26を使つて
反応容器内の液を排出し、供給機構29は供給管
27を通して洗浄液を供給する。 上記の反応デイスク31の回転(17秒)および
停止(3秒)している間の時間の合計が20秒であ
り、20秒を1サイクルとして上記の動作を繰返
す。すなわち、サンプリングされた特定の被測定
試料は、上記サイクルが進むにつれ反応デイスク
が停止している状態での位置が反応容器1ピツチ
分ずつ時計方向に進むことになる。サンプリング
された特定の被測定試料についてみたとき、反応
デイスクが停止している状態での位置が例えば反
応容器1ピツチ分および16ピツチ分進んだ位置に
は、分注器39,40が設置してあり、第1の反
応および第2の反応を起こすための試薬を吐出す
る。 すなち、抗原(又は抗体)を含む特定の被測定
試料についてみると、第1の試薬分注器39によ
つて添加された抗体(又は抗原)を含む第1の試
薬により第1の抗原抗体反応が開始され、第2試
薬が添加されるまでの反応過程が20秒を1サイク
ルとして光度計により複数回観測記録され、この
第1の測定データに基いて試料中に含まれる抗原
(又は抗体)の濃度がコンピユータ20によつて
演算される。次に、第2の分注器40によつて抗
原(又は抗体)が第2試薬(プロゾーンチエツク
用液)として添加される。第2試薬24b添加後
に生じた第2の反応も、第1の反応と同様に20秒
を1サイクルとして光度計により観測され記録さ
れる。この第2の反応を測定することによつてコ
ンピユータ20はプロゾーンが起きているか否か
をチエツクする。 たとえば、抗原過剰なために第1反応液にプロ
ゾーンが起きているのであれば、第2試薬として
抗原含有液を添加すると第2反応の吸光度は第1
反応の最終測光吸光度よりも減少するし、逆に第
1反応液にプロゾーンが起きていないのであれ
ば、第2試薬として抗原含有液を添加すると第2
反応の吸光度は第1反応の最終測光吸光度よりも
さらに増加することになる。すなわち、第2反応
測定結果を第1反応の最終測定結果と比較してそ
の差を求めるか、あるいは、第2反応をレートア
ツセイにて測定することにより第1反応において
プロゾーンが起きていたか否かを判定することが
できる。 第2反応測定値と第1反応最終測定値との差が
負であるか、あるいはレートアツセイ測定値が負
であるときに、プロゾーンが起きていたと判定す
る。逆に、第2反応測定値と第1反応測定値との
差が正であるか、あるいはレートアツセイ測定値
が正であるときはプロゾーンは起きていないと判
定する。しかもこの実施例では、プロゾーンが生
じていると判定された場合には、第2反応の負の
測定値の大きさの程度によつて、その検体の再測
定時にシリンジ37の動作量を変えて適正な測定
値が得られるようなサンプリング量を自動的に決
定できる。第2図に示した試料サンプリング用シ
リンジ37はコンピユータ20によつて制御され
るパルスモータ駆動であり、サンプリング量を自
在に増減できる。又、第1試薬および第2試薬用
の分注器もコンピユータ20によつて制御される
パルスモータ駆動である。 第2図の実施例装置では、サンプルテーブル3
4上の試料をすべて測定した後、このサンプルテ
ーブル34はコンピユータ20でプロゾーン現象
の影響があると判定された血液試料を、選択的に
順次サンプル吸入位置に位置づけるように、コン
ピユータ20によつて動作される。又、これに対
応して、コンピユータ20はサンプリング用シリ
ンジ37による吸入量を減少するように動作制御
する。この再測定によつて、第2反応が正となれ
ば最終データとして表示部(プリンタ)21に表
示する。万一、第2反応が負であれば、その負の
大きさの程度によつてさらにサンプル分配量を減
少して、再々測定動作を自動的に行う。 次に、第2図の実施例装置を使つて、免疫グロ
ブリンA(IgA)を測定した例について、具体的
に説明する。この場合の好適な試薬組成の1例と
して、次の組成の溶液が使用できる。 第1試薬…抗血清液(抗IgA抗体を含む溶液) 第2試薬…クルード血清希釈液(IgAとして
13g/dl)を含む。 装置の測定条件は次のようである。 検体量 12μ 第1試薬量 350μ 第2試薬量 50μ 反応温度 37℃ 測定波長 340nm/700nm(2波長測光) 上記の第1試薬24a、第2試薬24bを試薬
槽に収容し、検体をサンプルテーブル34にセツ
トし、オペレータが分析スタートの指示を与える
と、装置は上述した動作原理によつて作動する。
今、反応容器内の反応を追跡すると、検体と第1
試薬が混合されると検体中の免疫グロブリンは試
薬中の抗体と特異的に反応し、不溶性の抗原抗体
複合体を形成する。生じる濁度は免疫グロブリン
量に比例するため光学的に濁度測定をすることに
よつて検体中の免疫グロブリン量が求まる。すな
わち、第1試薬添加後、第1反応液中の濁度を
340nm/700nmの2波長で光学的に追跡すること
により検体中の免疫グロブリン量が測定される。
この後、第2試薬を分注し、分注後の第2反応液
の吸光度の増減によつてプロゾーンが起きている
かいないかをチエツクする。すなわち、第2試薬
(抗原)分注後の吸光度変化がマイナスであれば、
抗原過剰によりプロゾーンが起きていると判断
し、又、第2試薬分注後の吸光度変化がプラスで
あればプロゾーンは起きていないと判断する。コ
ンピユータ20は、プロゾーンが起きていると判
断した検体についてのみ検体量を減少して再測定
を自動的に実行する。 第3図にIgAの高濃度検体(8250mg/dl)の濃
度希釈系列を作成し、第2図の装置により測定し
た結果(但し再測定を行なわない1回目の測定
値)を示す。検体と第1試薬添加後の吸光度測定
値は、希釈系列6/10を境として増加から減少へと
変わり、プロゾーン領域へ入つたことがわかる。
同じく6/10を境として第2試薬添加後の吸光度変
化はプラスからマイナスに転じており、プロゾー
ンが認められる検体は、すべてマイナス表示を示
していることがわかる。実測定値を表1に示す。
ただし、表中の数値は吸光度×104であり、Aは
第1反応の結果生じた抗原抗体反応生成物量(す
なわち検体中IgA濃度)に対応しており、Bは第
1反応と第2反応の吸光度差を示す。A′B′は再
測定の値を示した。
[Field of Application of the Invention] The present invention relates to an analytical method and apparatus for antigen-antibody reactions, and particularly to an analytical method and apparatus suitable for use in determining whether or not there is an influence of the prozone phenomenon and measuring a reaction solution. Regarding equipment. [Background of the Invention] In recent years, clinical chemistry tests in hospitals and the like have been increasingly automated, and automation of not only biochemical tests but also serum tests has become popular. Furthermore, as clinical knowledge regarding various diseases is accumulated, substances that are said to be closely related to these diseases are being revealed. These substances, which have recently been attracting attention, are generally present in serum in only trace amounts. These substances are analyzed and measured using antigen-antibody reactions. Among these, a method using a radioisotope as a label (RIA method) is suitable for measuring trace components. In addition, immunoassay methods such as immunoturbidimetry, latex turbidimetry, fluorescent labeling immunoassay, and enzyme labeling immunoassay have recently come into use. However, with these analytical methods that utilize antigen-antibody reactions, a prozone phenomenon often occurs in which the measured value shows an extremely low concentration when the sample contains a high concentration of antibody or antigen. This resulted in errors in the measurement of substances (antibodies or antigens). [Object of the Invention] The object of the present invention is to develop an antigen that can appropriately confirm the presence or absence of the influence of the prozone phenomenon even if the sample before the reaction is turbid when analyzing and measuring a test immune component that can cause an antigen-antibody reaction. An object of the present invention is to provide an analytical method and device for antibody reaction. [Summary of the Invention] In the analysis method according to the present invention, after photometrically measuring a first reaction solution in which a sample and an antigen-antibody reaction reagent are mixed, a substance identical to the above-mentioned immune component to be tested is placed in a reaction container containing the first reaction solution. The second reaction solution obtained by adding the prozone check solution containing the prozone check solution is photometered multiple times with a photometer, and the absorbance observed in the multiple photomeasurements is determining the change as a rate assay measurement value of the second reaction solution, and determining by a control device that the first reaction solution is affected by a prozone phenomenon when the rate assay measurement value is negative; The method is characterized in that when the rate assay measurement value is positive, the control device determines that the first reaction liquid is not affected by the prozone phenomenon. Further, the analyzer according to the present invention is configured to be able to carry out the above-described analysis method, and in particular, the analyzer is arranged so that the reaction container containing the second reaction liquid passes through the photometric position multiple times on the reaction disk. In addition to providing a reaction disk drive device for transferring the reaction vessel array, when the rate assay measurement value obtained based on multiple photometry for the second reaction liquid is negative, the first reaction liquid is affected by the prozone phenomenon. a control device that makes a determination that the rate assay value is positive, and causes the output device to output the concentration of the immune component to be tested calculated based on the photometry of the first reaction liquid when the rate assay measurement value is positive; It is characterized by having been provided. Here, the test immune component refers to either an antigen or an antibody, and the antigen-antibody reaction reagent refers to a substance that can specifically react with the test immune component to form an antigen-antibody complex (corresponding (antibodies or antigens). The measurement target may be an antigen or an antibody. The rate assay measurement described here refers to the optical observation of changes in the amount of antigen-antibody complexes produced in the same reaction solution over time.
If the amount of production decreases at a later observation point than at the previous observation point, it is considered negative, and if it increases, it is considered positive. In the examples of the present invention, the reaction process is measured by absorbance multiple times. In the second reaction solution formed by adding the prozone check solution, if the absorbance after a predetermined period of time is smaller than the previously measured absorbance, the amount of complex produced in the second reaction solution is determined. This means that the number gradually decreased. Blood samples often contain turbid specimens, but the prozone check based on rate assay measurement of the present invention is not easily affected by turbidity. [Embodiments of the Invention] Prior to describing specific embodiments based on the present invention, knowledge related to the prozone phenomenon will be explained.
Here, an explanation will be given as an example of immunoturbidimetry in which an antigen-antibody complex generated by a reaction between an antigen and an antibody is optically measured as turbidity. Generally, the concentration of antigen-antibody complex and turbidity are positively proportional. Therefore, in areas where antigen-antibody complexes are generated in proportion to the concentration of the test substance (either antigen or antibody) in the specimen sample, measuring the turbidity can determine the concentration of the target substance. The concentration can be quantified. That is, when the concentration of the reactant (antibody or antigen) in the reagent is sufficiently large relative to the concentration of the test substance (antigen or antibody), the concentration of the test substance and turbidity are approximately directly proportional. As the concentration of the analyte increases, the proportionality constant becomes smaller, and the proportionality constant approaches zero when the concentration of the analyte and the reactant in the reaction container are approximately equal. moreover,
When the concentration of the test substance becomes greater than the concentration of the reactant, the proportionality constant becomes a negative value, and the turbidity decreases. Therefore, quantifying the test substance from turbidity in such areas will give an abnormally low measurement value, even though the test substance actually contains an extremely high concentration, which can be fatal in clinical tests. You will make a big mistake. In other words, when an antigen-antibody reaction is used as a measurement method, it is important to always check whether the measured value obtained was obtained by a reaction in the region of excess reactant. be understood.
Checking for this prozone phenomenon is indispensable for ensuring the reliability of test and measurement results. Next, one embodiment based on the present invention will be described with reference to FIG. The sampler 1 transports sample cups 5 containing blood samples in a row so as to sequentially or selectively position a specific sample at a sample suction position. The transfer mechanism is preferably a combination of a turntable and a stepping motor (pulse motor), but a bendable chain may also be used. On the other hand, the transfer path of the row 2 of reaction containers 6, that is, the reaction line, passes through the sample addition position, the first reagent addition position, the first photometry position, the second reagent addition position, and the second photometry position. Blood containing an antigen, which is a test substance, is sucked in by the pipette nozzle 4 of the pipette mechanism 3 from the sample cup 5 that has come to the sample suction position, and is discharged into the reaction container 6 that has been stopped at the sample addition position. When the row of reaction vessels is intermittently transferred and the reaction vessels stop at the first reagent addition position, the first reagent solution containing the antibody as the reactant is transferred to the tube 8 of the first reagent supply mechanism 7.
, and an antigen-antibody reaction is initiated.
This reaction produces immune complexes. The absorbance of this first reaction solution is measured by a first photometer at a first photometric position. In the first photometer, a light source section 12a irradiates the reaction liquid with white light, and a spectrometer 11a separates the transmitted light and receives the light. The photoelectrically converted signal is sent to the microcomputer 20 via an analog-to-digital converter (A/D converter) 15a.
The signal is sent to the computer, undergoes the necessary signal processing, and then is stored in the computer's memory. When the specific reaction container is further intermittently transferred and reaches the second reagent addition position, a predetermined amount of the second reagent solution containing the same antibody as the first reagent solution is added via the tube 10 of the second reagent supply mechanism 9. Ru. Addition of such additional fluid changes the amount of immune complexes produced. The absorbance of this second reaction solution is measured by a second photometer at a second photometric position. That is, the reaction liquid is irradiated with white light from the light source section 12b, the transmitted light is dispersed by the spectroscope 11b, and light with a necessary wavelength is photoelectrically converted. The signal is guided to the microcomputer 20 via the A/D converter 15b, and after correcting the absorbance change based on the change in liquid volume due to the addition of additional liquid, this second measurement value regarding the same sample is stored in the memory first. The measured value is compared with the first measured value stored in , and it is determined based on a predetermined criterion whether there is an influence due to the prozone phenomenon. As a result of the determination by the microcomputer 20,
For a sample determined to be free from the influence of the prozone phenomenon, the measurement value based on the first photometer is displayed on the display section 21 as the concentration of the antigen in the sample. A sample determined to be affected by the prozone phenomenon is displayed on the display unit 21 with a comment indicating that re-measurement is required added to the first measurement value. Therefore, the operator can measure the problematic specimen by changing the measurement conditions based on the displayed results. In this embodiment, it is also possible to automatically re-measure. That is, when it is determined that a specific sample is affected by the prozone phenomenon, the microcomputer 20 controls the pipetting mechanism to change the sample collection amount or the first reagent addition amount depending on the degree of the effect. 3 or the first reagent supply mechanism 7. The sample cup 5 containing the specimen requiring re-measurement is positioned at the sample suction position under the control of the microcomputer 20, and the changed sample amount is distributed to the reaction vessel 6 by the nozzle 4. Thereafter, the analysis operation proceeds in the same manner as in the previous case. In the sampler 1, when the interrupt dispensing operation for the re-measured sample is completed, the sampler 1 returns to the original measurement order state and continues the dispensing operation. Next, other embodiments based on the present invention will be described with reference to FIGS. 2 to 6. In FIG. 2, a reaction disk 31 has a plurality of light-transmitting reaction vessels 6 serving as measurement cells on its circumference, and can rotate clockwise around a rotation center 33. The reagents 24a and 24b are dispensed using the dispenser 3.
9,40. The spectrometer 11 is of a multi-wavelength simultaneous photometry type, and faces the light source lamp 12, and when the reaction disk 31 is in a rotating state, the reaction vessel 6
The array is configured such that the light beam 13 from the light source lamp passes therethrough. When the sample container 5 containing the sample to be measured (serum, etc.) on the sample table 34, which can rotate in both directions around the rotation center 36, comes to the sample suction position 30, a fixed amount of the serum is aspirated by the pipette probe 38. , and is discharged into the reaction container that has been transferred to the discharge position 25. When the sampling operation by the syringe 37 and the probe 38 is completed, the reaction disk rotates 360 degrees clockwise plus one reaction container pitch and then stops. During rotation of the reaction disk, all reaction vessels on the reaction disk are thus passed through the light beam. When the light beam passes through each reaction vessel, light absorption measurement is performed by the spectrometer 11, and the output of the spectrometer is selected by the multiplexer 16 to select the signal of the currently required measurement wavelength, and the A/
The data is taken into the central processing unit of the microcomputer 20 via the D converter and stored in the read/write storage device. The discharge mechanism 28 discharges the liquid in the reaction container using the drain suction pipe 26, and the supply mechanism 29 supplies cleaning liquid through the supply pipe 27. The total time during which the reaction disk 31 is rotating (17 seconds) and stopping (3 seconds) is 20 seconds, and the above operation is repeated with 20 seconds as one cycle. That is, as the cycle progresses, the position of the sampled sample to be measured in the state where the reaction disk is stopped advances clockwise by one pitch of the reaction container. When looking at the sampled specific sample to be measured, the dispensers 39 and 40 are installed at the positions where the reaction disk is stopped and is advanced by, for example, 1 reaction container pitch and 16 pitches. It discharges reagents for causing the first reaction and the second reaction. In other words, regarding a specific sample to be measured containing an antigen (or antibody), the first antigen is removed by the first reagent containing the antibody (or antigen) added by the first reagent dispenser 39. The reaction process from the start of the antibody reaction until the addition of the second reagent is observed and recorded multiple times using a photometer with one cycle of 20 seconds, and based on this first measurement data, the antigen (or The concentration of the antibody) is calculated by the computer 20. Next, an antigen (or antibody) is added as a second reagent (prozone check liquid) using the second dispenser 40. The second reaction that occurs after the addition of the second reagent 24b is also observed and recorded by a photometer with one cycle of 20 seconds as the first reaction. By measuring this second response, computer 20 checks whether a prozone is occurring. For example, if a prozone occurs in the first reaction solution due to excess antigen, adding an antigen-containing solution as the second reagent will cause the absorbance of the second reaction to be lower than that of the first reaction solution.
The absorbance decreases from the final photometric absorbance of the reaction. Conversely, if prozone has not occurred in the first reaction solution, adding the antigen-containing solution as the second reagent will cause the second reaction to decrease.
The absorbance of the reaction will increase further than the final photometric absorbance of the first reaction. That is, by comparing the second reaction measurement result with the final measurement result of the first reaction to determine the difference, or by measuring the second reaction with a rate assay, it is possible to determine whether prozone occurred in the first reaction. can be determined. It is determined that a prozone has occurred when the difference between the second reaction measurement value and the first reaction final measurement value is negative, or when the rate assay measurement value is negative. Conversely, if the difference between the second reaction measurement value and the first reaction measurement value is positive, or if the rate assay measurement value is positive, it is determined that prozone is not occurring. Moreover, in this embodiment, if it is determined that prozone is occurring, the amount of movement of the syringe 37 is changed when remeasuring the sample depending on the magnitude of the negative measured value of the second reaction. The sampling amount can be automatically determined so that appropriate measurement values can be obtained. The sample sampling syringe 37 shown in FIG. 2 is driven by a pulse motor controlled by the computer 20, and the sampling amount can be increased or decreased as desired. Further, the dispensers for the first reagent and the second reagent are also driven by pulse motors controlled by the computer 20. In the embodiment device shown in FIG. 2, the sample table 3
4, this sample table 34 is moved by the computer 20 so that the blood samples determined by the computer 20 to be affected by the prozone phenomenon are selectively and sequentially positioned at the sample suction position. It is operated. Correspondingly, the computer 20 controls the operation to reduce the amount of suction by the sampling syringe 37. As a result of this re-measurement, if the second reaction is positive, it is displayed on the display section (printer) 21 as final data. If the second reaction is negative, the sample distribution amount is further reduced depending on the degree of the negative magnitude, and the measurement operation is automatically performed again. Next, an example in which immunoglobulin A (IgA) was measured using the apparatus of the embodiment shown in FIG. 2 will be specifically explained. As an example of a suitable reagent composition in this case, a solution having the following composition can be used. 1st reagent...antiserum solution (solution containing anti-IgA antibodies) 2nd reagent...crude serum dilution solution (as IgA
13g/dl). The measurement conditions of the device are as follows. Sample amount 12μ First reagent amount 350μ Second reagent amount 50μ Reaction temperature 37℃ Measurement wavelength 340nm/700nm (two-wavelength photometry) The above first reagent 24a and second reagent 24b are stored in a reagent tank, and the sample is placed on the sample table 34. When the operator issues an instruction to start analysis, the device operates according to the operating principle described above.
Now, if we trace the reaction inside the reaction container, we will see that the sample and the first
When the reagents are mixed, the immunoglobulin in the sample reacts specifically with the antibodies in the reagent to form an insoluble antigen-antibody complex. Since the turbidity produced is proportional to the amount of immunoglobulin, the amount of immunoglobulin in the sample can be determined by optically measuring the turbidity. That is, after adding the first reagent, the turbidity in the first reaction solution is
The amount of immunoglobulin in the sample is measured by optically tracking with two wavelengths of 340 nm and 700 nm.
After this, the second reagent is dispensed, and it is checked whether prozone has occurred or not based on the increase/decrease in the absorbance of the second reaction solution after dispensing. In other words, if the absorbance change after dispensing the second reagent (antigen) is negative,
It is determined that prozone is generated due to antigen excess, and if the change in absorbance after dispensing the second reagent is positive, it is determined that prozone is not generated. The computer 20 automatically executes re-measurement by reducing the sample amount only for the sample for which it is determined that prozone has occurred. FIG. 3 shows the results of preparing a concentration dilution series of a high-concentration IgA sample (8250 mg/dl) and measuring it using the apparatus shown in FIG. 2 (however, the first measurement without re-measurement) is shown. It can be seen that the measured absorbance values after adding the sample and the first reagent changed from increasing to decreasing after the dilution series 6/10, and entered the prozone region.
Similarly, the change in absorbance after the addition of the second reagent turned from positive to negative after June 10th, and it can be seen that all samples in which prozone was observed showed negative values. Actual measured values are shown in Table 1.
However, the numerical values in the table are absorbance x 104 , A corresponds to the amount of antigen-antibody reaction product produced as a result of the first reaction (i.e. IgA concentration in the sample), and B corresponds to the amount of the first reaction and second reaction. The difference in absorbance is shown. A′B′ indicates the value of remeasurement.

【表】【table】

【表】 実際の分析装置では第2反応の値が正であつて
も、ある一定値よりも小さいものは再検する方式
とした。これはその点では既にプロゾーン領域に
近い領域であり、第1反応の測定値が低くなつて
いる(検量線の曲つている領域である)可能性が
あるためである。ちなみに、第1の場合、第2反
応の測定値が800以下のものを再測定とした。す
なわち、800〜−200のものは5μ(1/2量)、−
201〜−500のものは3μ(3/10量)、−500以下の
ものは2μ(1/5量)のサンプリング量で自動的
に再測定するプログラムを用いた。これによつて
5/10〜10/10の系列を再測定した値が表1中の
A′,B′である。すなわち、このような測定法に
よれば、検査センターで1ヶ月に数検体〜数十検
体も出現する高値血清(IgA1000mg/dl以上、ま
れには5000〜10000mg/dlのものが出現する)の
測定において、プロゾーンによる測定ミスを完全
に防止できる。 表2に、第2図の装置を用いたIgA測定の同時
再現性を示す。
[Table] In the actual analyzer, even if the value of the second reaction is positive, if it is smaller than a certain value, it is retested. This is because the area is already close to the prozone area at that point, and there is a possibility that the measured value of the first reaction is low (an area where the calibration curve is curved). Incidentally, in the first case, those with a second reaction measurement value of 800 or less were re-measured. In other words, those with a value of 800 to -200 are 5μ (1/2 amount), -
A program was used that automatically remeasured samples of 201 to -500 with a sampling amount of 3 μ (3/10 amount) and samples of −500 or less with a sampling amount of 2 μ (1/5 amount). As a result, the values obtained by re-measuring the series from 5/10 to 10/10 are shown in Table 1.
A′, B′. In other words, according to this measurement method, high serum serum values (IgA of 1000 mg/dl or more, rarely 5000 to 10,000 mg/dl) appear in several to dozens of samples per month at testing centers. , it is possible to completely prevent measurement errors caused by Prozone. Table 2 shows the simultaneous reproducibility of IgA measurements using the apparatus shown in FIG.

【表】【table】

【表】 第4図にIgAを測定した直線性の検討結果を示
す。従来は2000mg/dl程度までの測定限界であつ
たが上述した自動再測定を適用することによつて
10000mg/dlまでほぼ直線的に測定できることを
示している。 第5図および第6図に、本発明に基づく方法
(y軸)と従来のレーザネフエロメータ法(x軸)
とのIgA測定値の相関性を示す。第5図ではデー
タの数n、相関係数r、回帰式yは次のようであ
つた。 n=155,r=0.9752,y=0.9326x+22.258ま
た、第6図では次のようであつた。 n=157,r=0.9967, y=1.021x+2.2911 このように本法によれば、同時再現性、直線
性、相関性ともに良好な結果が得られた。 上述の実施例では、第1反応液においてプロゾ
ーンが起きていたか否かを判定するときに、第2
試薬液の添加によつて増量したことによつて反応
液の吸光度が減少することを補正する。すなわ
ち、第1反応最終測定値の液量補正済の値Y2
第2反応測定値Y3を比較する。ここで、第1反
応最終測定値Y1の液量補正値Y2は Y2=Y1×VS+VR1/VS+VR1+VR2 …(1) として求められる。ここで VS:試料量 VR1:第1試薬量 VR2:第2試薬量 したがつて、第2反応測定値Y3と上記(1)式に
より算出したY2を比較して、Y3>Y2であるとき
にプロゾーンが起きていると判断し、Y3≦Y2
あるときにはプロゾーンは起きていないと判断す
る。 また上記実施例では再測定時試料のサンプリン
グ量を減少したが、逆に第1試薬の添加量を反比
例的に増大する変法が可能であることは言うまで
もない。 次に第7図〜第11図を参照して、本発明に基
づくもう1つの実施例について説明する。 第7図の実施例装置は、第2図のものと多くの
部分で共通点がある。しかし、試料供給系および
試薬系に違いがある。第2図の場合と同様の動作
をするものには、同じ符号が付してある。 被検項目である抗原を含む血清検体の入つた試
料容器5が、サンプル吸入位置30に移送される
と、第1の試料ピペツタのシリンジ37とサンプ
リングプローブ38が動作し、血清の一定量が吸
入保持され、添加位置25に位置づけられた対応
する反応容器6へ保持していた血清を吐出する。
この分配動作が終ると反応デイスク31は、17秒
かかつて時計方向に連続回転し、1回転(360度)
プラス1容器ピツチ分まで移動して3秒間停止す
る。この動作を各サイクル毎にくり返すことによ
り、反応デイスク31上の反応容器は1つずつ停
止位置が進められ、かつ各回転動作の都度列上の
反応容器のすべてが光束13を横切る。従つて各
サイクル毎に多数の反応容器内の液の光吸収が光
度計により測定される。サンプリングされた特定
の被測定試料についてみたとき、反応デイスクが
停止している状態での位置が例えば反応容器1ピ
ツチ分進んだ位置に分注器が設置してあり、第1
の反応を起こすための抗体(又は抗原)を含む試
薬24を分注器39より吐出する。これにより第
1の抗原抗体反応が開始され、反応過程が20秒を
1サイクルとして一定時間記録され、この測定デ
ータに基づいて試料中に含まれる抗原(又は抗
体)の濃度がコンピユータにより演算される。こ
の特定の被測定試料についてみたとき、反応容器
がたとえば16ピツチ分進んだ位置に来ると、第2
の試料ピペツタのシリンジ50とサプリングプロ
ーブ51が動作し、その特定の反応容器に再び同
じ試料が所定量添加される。この2度目に添加さ
れる試料は、抗原(又は抗体)を含む追加液とし
ての第2試薬の働きをする。すなわち、第2のサ
ンプリングプローブは常に16ピツチ分前(必ずし
もサンプルテーブル上の16ピツチ分前ではない)
の当該試料の一定量を吸入して、反応デイスク上
の16の位置の反応容器内に吐出する。当該試料の
再添加後に生じた第2の反応も第1の反応と同様
に20秒を1サイクルとして記録される。この第2
の反応を測定することにより第1と第2の測定値
を比較し、プロゾーンが起きているか否かをチエ
ツクする。 たとえば、試料中の目的とする成分が抗原であ
つて抗原過剰なためにプロゾーンが起きているの
であれば、第2反応開始にあたり再度当該試料
(抗原)を添加すると、第2反応の吸光度は第1
反応の最終測光吸光度よりも減少する。逆に、プ
ロゾーンが起きていないのであれば、抗原として
当該試料を再添加すると、第2反応の吸光度は第
1反応の最終測光吸光度よりもさらに増加するこ
とになる。すなわち第2反応測定結果を第1反応
の最終測定結果と比較してその差を求めるか、あ
るいは、第2反応をレートアツセイにて測定する
ことにより第1反応においてプロゾーンが起きて
いたか否かを判定することができる。コンピユー
タによるプロゾーン現象の影響があるかどうかの
判定は第2図の実施例の場合と同様である。たと
えば上記の場合であれば、第2反応測定値と第1
反応最終測定値との差が負であるか、あるいはレ
ートアツセイ測定値が負であるときに、プロゾー
ンが起きていたと判定する。逆に、第2反応測定
値と第1反応測定値との差が正であるか、あるい
はレートアツセイ測定値が正であるときはプロゾ
ーンは起きていないと判定する。 以上により、第1反応により試料中の成分濃度
を定量し、第1反応に続けて第2反応を測定する
ことによりプロゾーンのチエツクを実施すること
が可能となる。 又、本方法によれば、プロゾーンのチエツクを
実施しながら免疫項目と一般化学項目との同時測
定も支障なく行うことができ、検体処理能力も低
下させずに済む。 第7図の実施例装置を用いて、血清試料を分析
した具体例について詳細に説明する。 ここでは、免疫グロブリンM(IgM)を測定す
る場合を例を中心に説明する。この場合の使用す
るに好適な試薬組成の一例は、次のようである。 第1試薬…抗血清液(抗IgM抗体を含む溶液) 装置の測定条件は次のようである。 検体量(1) 20μ 検体量(2) 5μ 第1試薬量 350μ 反応温度 37℃ 測定波長 340nm/700nm(2波長法) 上記の第1試薬を分注器にセツトし、検体をサ
ンプルテーブル34にセツトしてオペレータが分
析スタートの命令をあたえると、装置は上述した
ように作動する。今、反応容器内の反応を追跡す
ると、検体と第1試薬が混合されると検体中の免
疫グロブリンは試薬中の抗体と特異的に反応し、
不溶性の抗原抗体複合体を形成する。生じる濁度
は免疫グロブリン量に比例するため、光学的に濁
度測定をすることによつて検体中の免疫グロブリ
ン量が測定できる。この後、当該反応液に当該試
料を再度分注し、分注後の吸光度の増減によつて
プロゾーンが起きているか否かをチエツクする。
すなわち、試料再分注後の吸光度変化がマイナス
であれば抗原過剰によりプロゾーンが起きている
と判断し、試料再分注後の吸光度変化がプラスで
あればプロゾーンは起きていないと判断する。測
定者(オペレータ)は、プロゾーンが起きている
と判断される試料についてのみ試料量減少などの
再検査の手続きをとることができる。再検査の際
に、測定に使用する試料量あるいは試料の希釈率
は、試料再分注後の反応(第2反応)のマイナス
の吸光度変化の大きさを参考として決定する。プ
ロゾーンチエツクの判定に用いた第2反応の測定
結果からプロゾーンの程度が推定できることによ
り、再検査への適応が迅速となる。 第8図にIgMの高濃度検体(11000mg/dl)の
濃度希釈系列を作成し、第7図の装置により測定
した結果を示す。検体と第1試薬添加後の吸光度
測定値は、希釈系列4/10を境として増加から減少
へと変わり、プロゾーン領域へ入つたことがわか
る。同じく4/10を境として試料再分注後の吸光度
変化はプラスからマイナスに転じており、プロゾ
ーンが認められる検体はすべてマイナス表示を示
していることがわかる。測定実測値を表3に示
す。ただし、表3中の数値は吸光度×104であり、
Aは第1反応の結果生じた抗原抗体反応物量(す
なわち検体中IgM濃度)に対応しており、Bは第
1反応と第2反応の吸光度差(第2反応における
吸光度変化)を示す。
[Table] Figure 4 shows the results of examining the linearity of IgA measurements. Previously, the measurement limit was around 2000mg/dl, but by applying the automatic remeasurement described above,
This shows that it can be measured almost linearly up to 10,000 mg/dl. Figures 5 and 6 show the method based on the present invention (y-axis) and the conventional laser nephelometer method (x-axis).
Shows the correlation of IgA measurements with In FIG. 5, the number of data n, the correlation coefficient r, and the regression formula y were as follows. n=155, r=0.9752, y=0.9326x+22.258 Also, in FIG. 6, it was as follows. n=157, r=0.9967, y=1.021x+2.2911 Thus, according to this method, good results were obtained in terms of simultaneous reproducibility, linearity, and correlation. In the above-mentioned example, when determining whether or not prozone has occurred in the first reaction solution, the second
This corrects for the decrease in the absorbance of the reaction solution due to the increase in volume due to the addition of the reagent solution. That is, the liquid volume corrected value Y 2 of the first reaction final measurement value is compared with the second reaction measurement value Y 3 . Here, the liquid volume correction value Y 2 of the first reaction final measurement value Y 1 is obtained as Y 2 =Y 1 ×V S +V R1 /V S +V R1 +V R2 (1). Here, V S : Sample amount V R1 : First reagent amount V R2 : Second reagent amount Therefore, by comparing the second reaction measurement value Y 3 and Y 2 calculated by the above formula (1), Y 3 >Y 2 , it is determined that a prozone is occurring, and when Y 3 ≦Y 2 , it is determined that a prozone is not occurring. Further, in the above embodiment, the amount of sample sampled at the time of re-measurement was reduced, but it goes without saying that a modified method in which the amount of the first reagent added is increased inversely proportionally is also possible. Next, another embodiment based on the present invention will be described with reference to FIGS. 7 to 11. The embodiment device shown in FIG. 7 has many features in common with the device shown in FIG. However, there are differences in the sample supply system and reagent system. Components that operate in the same way as in FIG. 2 are given the same reference numerals. When the sample container 5 containing the serum sample containing antigen, which is the test item, is transferred to the sample suction position 30, the syringe 37 of the first sample pipette and the sampling probe 38 are operated, and a certain amount of the serum is inhaled. The retained serum is discharged into the corresponding reaction container 6 positioned at the addition position 25.
When this dispensing operation is completed, the reaction disk 31 continuously rotates clockwise for 17 seconds or more, making one rotation (360 degrees).
Move to +1 container pitch and stop for 3 seconds. By repeating this operation for each cycle, the reaction vessels on the reaction disk 31 are advanced one by one to their stopping positions, and all of the reaction vessels on the row cross the light beam 13 with each rotational operation. Therefore, for each cycle, the light absorption of the liquid in a number of reaction vessels is measured by a photometer. When looking at a specific sample to be measured, the dispenser is installed at a position that is one pitch ahead of the reaction vessel when the reaction disk is stopped, and the first
A reagent 24 containing an antibody (or antigen) for causing a reaction is discharged from a dispenser 39. As a result, the first antigen-antibody reaction is started, the reaction process is recorded for a certain period of time with one cycle of 20 seconds, and the concentration of the antigen (or antibody) contained in the sample is calculated by a computer based on this measurement data. . When looking at this particular sample to be measured, when the reaction vessel reaches a position that has advanced by, for example, 16 pitches, the second
The syringe 50 of the sample pipette and the sampling probe 51 are operated, and a predetermined amount of the same sample is again added to that particular reaction container. This second added sample acts as a second reagent, an additional fluid containing the antigen (or antibody). That is, the second sampling probe is always 16 pitches earlier (not necessarily 16 pitches earlier on the sample table).
An aliquot of the sample is aspirated and dispensed into the reaction vessel at 16 positions on the reaction disk. The second reaction that occurred after the re-addition of the sample was also recorded with 20 seconds as one cycle, similar to the first reaction. This second
The first and second measured values are compared by measuring the reaction of the prozone to check whether a prozone is occurring. For example, if the target component in the sample is an antigen and prozone is occurring due to excess antigen, if the sample (antigen) is added again at the start of the second reaction, the absorbance of the second reaction will be 1st
decreases from the final photometric absorbance of the reaction. Conversely, if prozone has not occurred, re-adding the sample as an antigen will cause the absorbance of the second reaction to increase even more than the final photometric absorbance of the first reaction. In other words, the difference can be determined by comparing the second reaction measurement result with the final measurement result of the first reaction, or by measuring the second reaction with a rate assay, it can be determined whether or not prozone occurred in the first reaction. can be determined. The determination by the computer as to whether there is an influence of the prozone phenomenon is the same as in the embodiment shown in FIG. For example, in the above case, the second reaction measurement value and the first
It is determined that prozone has occurred when the difference from the final reaction measurement value is negative or when the rate assay measurement value is negative. Conversely, if the difference between the second reaction measurement value and the first reaction measurement value is positive, or if the rate assay measurement value is positive, it is determined that prozone is not occurring. As described above, it becomes possible to carry out a prozone check by quantifying the component concentration in the sample by the first reaction and measuring the second reaction following the first reaction. Furthermore, according to this method, it is possible to carry out the simultaneous measurement of immunology items and general chemistry items without any problem while checking the prozone, without reducing the sample processing capacity. A specific example in which a serum sample was analyzed using the example apparatus shown in FIG. 7 will be described in detail. Here, the case of measuring immunoglobulin M (IgM) will be mainly explained as an example. An example of a reagent composition suitable for use in this case is as follows. First reagent: Antiserum solution (solution containing anti-IgM antibody) The measurement conditions of the device are as follows. Sample amount (1) 20μ Sample amount (2) 5μ First reagent amount 350μ Reaction temperature 37℃ Measurement wavelength 340nm/700nm (dual wavelength method) Set the above first reagent in the dispenser and place the sample on the sample table 34. Once set and the operator issues a command to start analysis, the device operates as described above. Now, if we track the reaction inside the reaction container, when the sample and the first reagent are mixed, the immunoglobulin in the sample reacts specifically with the antibody in the reagent.
Forms an insoluble antigen-antibody complex. Since the turbidity produced is proportional to the amount of immunoglobulin, the amount of immunoglobulin in the sample can be measured by optically measuring the turbidity. After this, the sample is again dispensed into the reaction solution, and it is checked whether prozone has occurred based on the increase or decrease in absorbance after dispensing.
In other words, if the change in absorbance after redispensing the sample is negative, it is determined that prozone has occurred due to antigen excess, and if the change in absorbance after redispensing the sample is positive, it is determined that prozone has not occurred. . The measurer (operator) can take re-examination procedures such as reducing the amount of sample only for samples for which it is determined that a prozone has occurred. At the time of reexamination, the sample amount or sample dilution rate used for measurement is determined with reference to the magnitude of the negative absorbance change in the reaction (second reaction) after sample redispensing. Since the degree of prozone can be estimated from the measurement results of the second reaction used to determine the prozone check, adaptation to retesting can be made quickly. FIG. 8 shows the results of preparing a concentration dilution series for a high-concentration IgM sample (11000 mg/dl) and measuring it using the apparatus shown in FIG. It can be seen that the measured absorbance value after adding the sample and the first reagent changed from increasing to decreasing after the dilution series reached 4/10, indicating that it entered the prozone region. Similarly, after April 10th, the change in absorbance after redispensing the sample turned from positive to negative, and it can be seen that all the samples in which prozone was observed showed a negative value. Table 3 shows the measured values. However, the values in Table 3 are absorbance x 104 ,
A corresponds to the amount of antigen-antibody reactant produced as a result of the first reaction (ie, IgM concentration in the sample), and B shows the absorbance difference between the first reaction and the second reaction (absorbance change in the second reaction).

【表】 又、表4に本法によるIgM測定の同時再現性を
示す。
[Table] Table 4 also shows the simultaneous reproducibility of IgM measurement using this method.

【表】【table】

〔発明の効果〕〔Effect of the invention〕

本発明によれば、当初から濁りがある試料の場
合でも抗原抗体反応の生じた反応液の測定値がプ
ロゾーンの影響を受けているか否かを誤りなくチ
エツクすることができる。
According to the present invention, even in the case of a sample that is cloudy from the beginning, it is possible to check without error whether the measured value of the reaction solution in which the antigen-antibody reaction has occurred is influenced by prozone.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第1図は本発明の一実施例の概略構成を示す説
明図、第2図は本発明の他の実施例の概略構成を
示す図、第3図はIgAのプロゾーン現象の説明
図、第4図は第2図の装置による反応の直線性を
示す図、第5図および第6図は本発明に基づく方
法と従来のレーザネフエロメータ法のIgAの測定
値の相関を示す図、第7図は本発明のもう1つの
実施例の概略構成を示す図、第8図はIgMのプロ
ゾーン現象の説明図、第9図は第7図の装置によ
る反応の直線性を示す図、第10図および第11
図は本発明に基づく方法とレーザネフエロメータ
法のIgMの測定値の相関を示す図である。 1……サンプラ、4……ピペツトノズル、5…
…サンプルカツプ、6……反応容器、7……第1
試薬供給機構、9……第2試薬供給機構、11,
11a,11b……分光器、20……マイクロコ
ンピユータ、24,24a,24b……試薬、3
1……反応デイスク、34……サンプルテーブ
ル、39,40……分注器。
FIG. 1 is an explanatory diagram showing the schematic structure of one embodiment of the present invention, FIG. 2 is a diagram showing the schematic structure of another embodiment of the present invention, FIG. 3 is an explanatory diagram of the prozone phenomenon of IgA, and FIG. Figure 4 shows the linearity of the reaction using the apparatus shown in Figure 2. Figures 5 and 6 show the correlation between the IgA measurements of the method based on the present invention and the conventional laser nephelometer method. FIG. 7 is a diagram showing a schematic configuration of another embodiment of the present invention, FIG. 8 is an explanatory diagram of the prozone phenomenon of IgM, FIG. 9 is a diagram showing the linearity of the reaction by the apparatus of FIG. 7, and FIG. Figures 10 and 11
The figure is a diagram showing the correlation between the IgM measurement values of the method based on the present invention and the laser nephelometer method. 1... Sampler, 4... Pipette nozzle, 5...
…sample cup, 6…reaction container, 7…first
Reagent supply mechanism, 9... second reagent supply mechanism, 11,
11a, 11b...Spectroscope, 20...Microcomputer, 24, 24a, 24b...Reagent, 3
1... Reaction disk, 34... Sample table, 39, 40... Dispenser.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 1 光度計の測光位置を通るように循環移送され
る反応容器列の内の反応容器に被検免疫成分を測
定すべき試料と抗原抗体反応用試薬を添加し、上
記試料と上記抗原抗体反応用試薬が混合された第
1反応液を上記光度計により測光して上記被検免
疫成分の濃度を求める抗原抗体反応用分析方法に
おいて、測光後の上記第1反応液を収容した反応
容器に上記被検免疫成分と同じ物質を含むプロゾ
ーンチエツク用液を添加すること、上記プロゾー
ンチエツク用液の添加によつて得られた第2反応
液を上記光度計によつて複数回測光し、その複数
回の測光で観測された吸光度変化を上記第2反応
液のレートアツセイ測定値として求めること、お
よび上記レートアツセイ測定値が負であるときに
制御装置によつて上記第1反応液にプロゾーン現
象の影響がある旨の判定をし、上記レートアツセ
イ測定値が正であるときに上記制御装置によつて
上記第1反応液にプロゾーン現象の影響が無い旨
の判定をすること、を特徴とする抗原抗体反応用
分析方法。 2 (イ)反応容器の列が試料添加位置、抗原抗体反
応用試薬液添加位置、測光位置およびプロゾーン
チエツク用液添加位置を経由し得るように複数の
反応容器を配置した反応デイスク、(ロ)試料おび抗
原抗体反応用試薬液が添加済であつてプロゾーン
チエツク用液が未添加の第1反応液を上記測光位
置で測光すると共に、上記第1反応液に上記プロ
ゾーンチエツク用液を添加した後の第2反応液を
上記測光位置で測光し得る測光装置、(ハ)上記第2
反応液を収容した反応容器が上記測光位置を複数
回経由するように上記反応デイスクに反応容器列
移送運動を与える反応デイスク駆動装置、および
(ニ)上記第2反応液に対する複数回の測光に基づい
て得たレートアツセイ測定値が負であるときに上
記第1反応液にはプロゾーン現象の影響がある旨
の判定をする制御装置であつて、上記レートアツ
セイ測定値が正であるときに上記第1反応液の測
光に基づいて演算された被検免疫成分濃度を出力
装置に出力せしめる制御装置を備えた抗原抗体反
応用分析装置。
[Scope of Claims] 1. A sample to be measured for a test immune component and a reagent for antigen-antibody reaction are added to a reaction container in a row of reaction containers that are circulated through the photometry position of a photometer, and the sample is In the antigen-antibody reaction analysis method for determining the concentration of the test immune component by measuring the light of a first reaction liquid in which the above-mentioned antigen-antibody reaction reagent is mixed with the above-mentioned photometer, the above-mentioned first reaction liquid after photometry is stored. A prozone check solution containing the same substance as the immune component to be tested is added to the reaction container, and a second reaction solution obtained by the addition of the prozone check solution is measured using the photometer. measuring the light twice and determining the absorbance change observed in the plurality of photometry as a rate assay measurement value of the second reaction solution, and when the rate assay measurement value is negative, the control device controls the first reaction solution. determining that the first reaction liquid is not affected by the prozone phenomenon by the control device when the rate assay measurement value is positive; An antigen-antibody reaction analysis method characterized by: 2 (a) A reaction disk with a plurality of reaction vessels arranged so that the rows of reaction vessels can pass through the sample addition position, the antigen-antibody reaction reagent solution addition position, the photometry position, and the prozone check solution addition position; ) The first reaction solution to which the sample and antigen-antibody reaction reagent solution have been added but no prozone check solution is photometered at the photometry position, and the prozone check solution is added to the first reaction solution. a photometric device capable of photometrically measuring the added second reaction solution at the photometric position; (c) the second reaction solution;
a reaction disk drive device that applies a reaction vessel row transfer motion to the reaction disk so that the reaction vessel containing the reaction liquid passes through the photometry position multiple times;
(d) A control device that determines that the first reaction liquid is affected by the prozone phenomenon when the rate assay measurement value obtained based on multiple photometry of the second reaction liquid is negative; and an antigen-antibody reaction analyzer comprising a control device that causes an output device to output a test immune component concentration calculated based on photometry of the first reaction liquid when the rate assay measurement value is positive.
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CLINICAL CHEMISTRY=1977 *

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