JPH05500231A - 新規な凍結乾燥再構成細胞組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規な　。　物 本出願は１９８９年７月１１日付で出願された米国特許出願第３７８，３４９号 および１９８９年６月２日付で出願された米国特許出願第３６０，３８６号の一 部継続出願であり、後者の米国出願は１９８９年４月１０日付で出願された米国 特許出願第３３５，５５７号の継続出願であり；米国特許出願第３３５，５５７ 号は１９８８年５月１８日付で出願された米国特許出願第１９５，７４５号およ び１９８８年８月２５日付で出願された米国特許出願第２３７，５８３号の一部 継続出願であり；これら米国出願の記載はすべて参考として本明細書に引用する 。

発朋ｐ背量 血液は人体の主要組織であり、肺から末梢組織への酸素の配送という重要な役割 を有する。この役割は赤血球［ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ、即ち、ｒｅｄ　ｂｌ ｏｏｄ　ｃｅｌｌｓ（ＲＢＣ））によって行なわれる。酸素は赤色の鉄分含有た ん白質いわゆるヘモグロビンがもたらす交換−拡散システムによって肺から末梢 細胞に給送される。ヘモグロビンが酸素と結合したとき、オキシヘモグロビンが 形成されへ酸憚φｍ哉に放出されたとき、オキシヘモグロビンはデオキシヘモグ ロビンに還元される。

赤血球膜は２つの主要構成単位、膜層重層と細胞骨格からなっている。脂質二重 層と取込み膜たん白質が膜層重層を形成し、この膜層重層１ｔｚｌ″Ｍ成により 弱い構造強度とフラグメントを容易に有する。他の主要成分、即ち、膜骨格は膜 層重層を安定化し変形に対しての抵抗性を与える。細胞骨格は赤血球膜の二重層 に恐らくは脂質−たん白質およびたん白質−たん白質会合により結合している。

ヘモグロビンおよび他のＲＢＣ成分は赤血球膜内に含有されている。

成人においては、骨髄が新しい赤血球の生成において活性である。赤血球が血液 に入ると、これらの赤血球は約１２０日の平均寿命を有する。平均的な人におい ては、赤血球の約０．８３％が体内での食作用、溶血または機構的劣下により毎 日破壊されており、欠損血球は骨髄から再生される。

存される。そのような赤血球はクエン酸塩−リン酸塩−デキストロース中で４° Ｃで５週間までは、一般に約２００〜３００１ｎｌの容量と７０〜９０のへマド クリット値αシ求容量％とじて表わす）を有するパック詰め赤血球のユニットと して保存し得る。赤血球はまたグリセリンで処理し次いで一３０°Ｃ〜−１９６ ℃で凍結させてグリセリΔ容液中で７年間まで保存できるが、輸注のために十分 に生存させるには低温で凍結に保たねばならない。これらの両方法は、赤血球の 所望の生物学的活性の破壊を回避しかつ少なくとも７０％の輸注赤血球の２４時 間生存時間にれはアメリカ血液銀行協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ａｓ５ｏｃｉａｔ ｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｌｏｏｄ　Ｂａｎｋ）の基準による輸注実務における許容基準 値とみなされている〕を得るためには、保存本発明以前では、細胞をインタクト な１吹な）細胞骨格を保って、赤外血の場合には、生物学的に活性なヘモグロビ ンを保って、即ち、活性な赤血球として再構成するのを可能にする方法で凍結乾 燥することは不可能であると考えられていた。活性ＲＢＣは次の事項の１つ以上 に特徴を有する：ＡＴＰの合成能力；細胞形態学；Ｐ、。値；オキシ、タクトお よびヘメ値；ＭＣＶ、ＭＣＨおよびＭＣＨＣ値；細胞酵素活性：およびインビボ 生存性。ＲＢＣを従来の方法で、例えば、塩水液またはリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ ）中で凍結乾燥させる場合、再瑯訪鵡但泡は細胞がＡＴＰを代謝即ち合成するこ とができず、細胞ヘモグロビンが酸素を輸送できない程度まで損傷される。凍結 乾燥し再構成したグルタルアルデヒド固定赤血球は主として凝集アッセイにおけ る用途が見い出されている。

血小板は止血プロセスに関係する循環系における単一細胞である。血小板は凝集 プロセスに直接関係する。血管組織に損傷か起った場合、血小板はコラーゲンお よび露出した基底膜に付着により作用する。付着後、細胞内粒子からの諸成分る 。

血小板は巨核球母細胞の諸フラグメントからなる。血小板は大きさで５〜１２μ ｄの範囲にあり平！］？、　ｉ〜７．５μＭである。血小板は膜内に無数の陥入 を有する円盤状である。血小板は凝集の活性化に関係するたん白質コーティング によって被覆されている。この膜はリン脂質からなり、その下は、アクトミオシ ンの膜下フィラメントである。

血小板は骨髄内の巨核球から形成される。血小板は巨核球のフラグメント化によ り循環系に入る。血小板は循環系内で約１０日間生存する。殆んどが一般の循環 系に存在するが、約１／３はひ膜内にプールとして存在する。

種々の損傷は血小板の輸注を必要とする。殆んどは出血が過度である場合である 。血小板はクエン酸塩−デキストロース−リン酸塩−アデニン（ＣＰＤＡ）中に 抜き取った全血から分離したのち一般に保存可能である。この分離は収集６時間 内で室温（２２℃）の血液で通常行なわなければならない。血小板はポリオレフ ィンからなる容器中の濃縮物として室温で５〜７日間通常保存する。この期間室 温で保存した溶液中でのバクテリア増殖の危険性は、ＦＤＡによって定められて いるように、血小板を輸注医療で５日まで使用してもよい期間に制限している。

室温以下での温度での液状での保存は血小板凝集および放出応答、膜糖たん白質 発現等のような血小板機能の喪失をもたらす。血小板を凍結するために考案され たＤＭＳＯのような溶液は毒性および凍結に耐える血小板の能力に基づく問題を 生ずる。

従って、高保存温度（４℃〜ＲＴ）で長期間保存し得る細胞、特に、血小板を得 る切実な要求が存在している。本発明前には、血小板のような細胞をインタフる と考えられてい九活性血小板は上記の特性の１つ以上に特徴を有し得る。血小板 を従来の方法で、例えば、ＰＢＳ中で凍結乾燥させた場合、再構成細胞はインタ クトな膜を有さず、通常の形態性を示さず、ＡＤＰによる刺激時に凝集できず、 また通常の食作用を示さない。

物質（ヘモソームのような）、特に、血小板を炭水化物および好ましくは両親媒 性を有する生物学的に適合性のあるポリマーまたはポリマー混合物を含有する生 理学的に緩衝させた水溶液中に浸漬することによって調製する。両親媒性なる用 語は単分子上に疎水性部分ど親水性部分とが存在することを意味する。この浸漬 の後、溶液を凍結させ、凍結溶液を乾燥させてｌＯ％以下好ましくは約３％以下 の水分を含有する新規な凍結乾燥細胞を７尋、この凍結乾燥細胞は、再構成した とき、有意の割合の赤血球または血小板、あるいはへモソーム（ｈｅｍｏｓｏｍ ｅ）のような細胞様物質の活性のある輸注使用可能な細胞を生成する。細胞の再 構成方法もまた提供される。

発明の詳細な説明 本発明に従って細胞、特に血小板またはへモソームのような細胞様物質を調製す るのに用いる炭水化物は細胞またはへモソームと生物学的に適合性あるもの、即 ち、細胞またはへモソーム膜に対して非破壊性のものであって、かつ細胞または へモソームの膜に浸透するあるいは浸透し得るものである。炭水化物は、三糖類 が何ら有意な程度に細胞膜に浸透りないようであるので、単糖類からなる群より 選択し得る。単糖類ペントースとヘキソースはリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）中で約 ７．０〜３７．５重量％好ましくは約２６％の最終濃度であるので好ましい。キ シロース、グルコース、リボース、マンノースおよびフラクトースは特に有１り に使用し得る。

以下、本発明を血小板について説明するが、他のタイプの細胞、特に血液中に見 い出される細胞、細胞様物質（ヘモソーム）または赤血球にも応用可能であるこ とを理解されたい。

ポリマーは約０．７重１％の最終濃度ないし飽和までの濃度で存在しン尋、約Ｉ Ｋ〜約６００にの範囲の分子量を有する。好ましくは、ポリマーは約２．５に〜 約３６０Ｋ、最も好ましくは約５に〜５０にの範囲の分子量を有し、約３．６重 量％から溶液中でのポリマーの溶解性限界までの濃度で存在する。ポリビニルピ ロリドン（ＰＶＰ）およびポリビニルピロリドン誘導体、並びにデキストランお よびデキストラン誘導体からなる群より選択したポリマーカ侑意の利点を与える 。最も好ましいのはｌＯ〜４０に範囲の平均分子量のポリビニルピロリドン（両 親媒性ポリマー）の凍結乾燥前の溶液中での１２〜２０％Ｗ／Ｖの範囲の量での 使用である。アミノ酸系ポリマー（即ち、たん白質）、デキストランまたはヒド ロキシエチルスターチもまた使用し得る。任意のその種々の形状のポロキサマー （ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）のような他の両親媒性ポリマーも使用し得る。血小板の 凍結乾燥における炭水化物−ポリマー溶液の使用はインタクトな細胞の回収を可 能にし、その有意の割合は正常な形態性を有し、ＡＤＰによる襲檄時に凝集可能 であり、正常な食作用を示す。何ら理論によって拘束する積りはないけれども、 ポリマーの両親媒特性が、その親水性部分の水性環境中への延長により膜表面を 保護しながら、細胞膜へ結合せしめている。これにより、細胞凝集のような他の 問題を生ずる細胞膜に対する損傷を軽減し得る。

上述したように、本発明の方法はインタクトで生物学的に活性な血小板の凍結あ り、各実施例で用いる特定の温度および装置のみを本明細書では説明しているこ とを理解されたい。この説明から、当業者は本発明の媒体をインタクトな活性血 小板の凍結乾燥および再構成方法において使用できるであろう。

用語“凍結乾燥”とは物質を凍結させ次いで溶質の１つ、即ち、水の濃度を昇華 および脱離によりもはや生物学的または化学的反応を支持しないであろう基準ま で低下させることとして定義する。通常、乾燥工程は高真空で行う。しかしなが ら、細胞特に血ｌｊ！１ｌｉＥの保存に関連しては、乾燥度α留水分釦は室温で の長期保存に耐える細胞の能力において臨界的な重要性ををする。ポリマーにお いては、ポリマー混合物を単一ポリマーの代りに用い得る。ポリマー混合物は緩 衝凍結乾燥溶液中で約０．７％１１で）から飽和までの合計濃度で存在し得る。

好ましいのは、混合物中のポリマー種の各々は約ＩＫ〜約６００にの範囲の分子 量黴平均分子ｌを有する。好ましくは、混合物のポリマーの種数の少なくとも１ つは約ＩＫ〜４００に、最も好ましくは２．５にへ３６０にの分子量を有する。

ポリマー種の各々は約３．５％１１で）からその緩衝凍結乾燥溶液中での溶解性 限界までの濃度で存在し得る。また、混合物のポリマーの１種の約１００に〜約 ６００にの範囲最も好ましくは約１００に〜５００にの範囲の分子量を有する。

ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）　、ポリビニルピロリドン誘導体、デキストラ ン、デキストラン誘導体、アミノ酸系ポリマー（即ち、たん白質）、およびヒド ロキシエチル　スターチ（ＨＥＳ）からなる群より選択したポリマーを用い得る 。任意の種々の形状のポロキサマーのような他の両親媒性ポリマーも使用し得る 。好ましい実施態様においては、５％のＰＶＰ　（約２４にの分子量）と１５％ のＨＥＳＣ７１００に〜５００にの範囲の分子ｌの混合物を緩衝凍結乾燥溶液中 で用いる。

血ｌＪ版は好ましくは全血の遠ノ叙血漿上清と血小板の除去により調製し、次い で、血小板を上述の凍結乾燥緩衝液で炭水化物とポリマーの最終希釈濃度を所要 範囲に維持するようにして希釈する。

また、商業的に入手できるパック詰め血小板濃縮物も使用でき、これはＣＰＤＡ （クエン酸塩、リン酸塩、デキストロースおよびアデニンを含有する市販の溶存 υ中で典型的に調製されている。

通常の方法によりＩＯ％以下好ましくは３％以下の水分量に凍結乾燥させると、 その凍結乾燥細胞は、輸注可能な細胞として使用するために再構成するときその 所望の性質を有意に低下させることなしに、真空気密容器中で真空下にまたは窒 本発明のさらに有利な点は凍結乾燥血小板を通常温度、即ち約１７℃から約３７ ℃（この温度は正常ヒト体温に相当する）、好ましくは室温（約２２°Ｃ）で再 構成し得ることである。再構成媒体は好ましくは約１０〜約３０Ｗ／ｖ％の範囲 の濃度で存在する約ＩＫ〜３６０に好ましくは５　Ｋ−＃３６０　Ｋの分子量を 有するポ・ツマーｔ？二ｉ：ボ、マー混合物を含む溶液である。このポリマーは 上述の赤血球を凍延乾燥下るＣ：二毛・、−二のと同じポリマーであり得る。従 って、ポリビニルピロリドン、＝忙二、ニチルスターチおよびデキストランのポ リマーか好ましく、最も好まし−）の、；再構成溶液中で約１９’“／Ｖ％の濃 度で存在するポリビニルピロリドンである。再構成溶液は典型的にはリン酸緩衝 塩水で上述のようにして再度緩衝してｐＨを約７．０〜７．４の範囲に維持する 。最も特に好ましいポリマーは約１０にの平均分子量のポリビニルピロリドンで ある。

最も好ましい再構成緩衝液は塩化カリウム、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム およびリン酸二水素カリウムを含む溶液でありｔ等、これらのすべては約７．２ の塩基性塩バッファーを構成し、また約１９’／ｖ％のポリビニルピロリドン（ 平均分子量約１０Ｋ）も含有する。

再構成溶液はまた必要に応じて好ましくは約７．０〜３９．５　”／ｖ％の濃度 範囲で存在する単糖類も含有し得る。好ましい単糖類はキシロース、グルコース 、リボース、マンノースおよびフルクトースである。

最も好ましい実施態様においては、凍結乾燥血小板は等容量の再構成緩衝液と約 ３７℃の温度で混合し十分に水和されるまで混合することによって、再構成し得 る。“等員”とは容量が凍結乾燥前の出発容量と同じであることを意味する。

再構成後、溶液は好ましくはデキストロース−塩＊正陪シ）Ｈ７および２９０ｍ ０５ｍで１：ｌ希釈する。

次に、好ましいのは再水和血小板を次の手順に従って洗浄することである。しか しながら、血小板を一度再構成緩衝液で再構成した場合、血小板は輸注使用可能 な状態にあり、後述の洗浄との組合せは特に臨床目的において好ましいことであ ると認識されたい。

血小板を再構成緩衝液から遠心により分離したのち、得られた通常はペレ・ント 形のパック詰め血小板を好ましくはｐＨ７，２の塩基性塩緩衝液を含みさらに約 １０ＩＴ／ｖ％のポリビニルピロリドン（Ｗ量約２−５Ｋ）を含有する緩衝液中 で再懸濁させる（およそ再構成に用いた容量で）。遠心による分離は第１のポス ト（釦再水和工程、洗浄工程を意図する。この血小板はそのま＼使用してもよく あるいは同原血漿に戻してもよい。

本発明の再構成細胞はその性質が正常（即ち、前辺って凍結乾燥されていない） 血小板の性質と同様である点て輸注可能とし治療目的において有用とする特性を 有する。本発明に従って典型的に再構成した血小板はＡＤＰで刺激したとき約２ ５％〜８０％の範囲で凝集する。血小板の回収は正常な平円盤ま旭オ参吠性を有 して通学生なくとも２０％■ｌで）、平均で５０〜８０％である。幾つかの試験 においては、殆んど１００％の回収が得られ得る。さらに、回収細胞は食作用可 能であり、この食作用は正常なりエン酸サイクルとミトコンドリア機能が保たれ ている指標である。

本発明の好ましい実施態様を説明して来たが、以下の実施例は例示して説明する もので本発明を何ら限定する積りはない。

実施燃上 ＣＰＤＡ中の血ノＪｍ縮物として２〜４日間保存した血小板サンプルを１部の血 小板濃縮物を凍結乾燥緩衝液と１＝５容量比で室温で混合することにより凍結乾 燥用として調製した。

ＫＣｌ　２．ＯｍＭ　’　ＰＨ７，２±０．０５ＫＨ２ＰＯ４１，４７ｍＭ　２ ７００±２００ｍ０５ｍＮａＣ１９１，９ｍＭ ＮａＨＰ０．　８．１　ｍＭ イノシン　１０．０ｍＭ アデニン　５．０ｍＭ ニコチン酸　０．７５ｍＭ グルタミン　、７５ｍＭ Ｍｇ　Ｃｌ　２　”６Ｈ２０，４９ｍＭグルコース　１．９Ｍ プラストーン２４Ｋ　２００．０ｇ／　１（Ｐｌａｓｄｏｎｅ　２４Ｋ） この混合物を丸底フラスコに入ね−次いで、液体窒素Ｎ２　（１９６°Ｃ）に渦 巻攪拌させながら浸漬しサンプルをフラスコ壁に均一に分布させた。次いで、フ ラスコをラブコンコモデル４．５ベンチトツプリオフイリザー上に真空下に置い た真空を５〜１０ミリトールで−５０〜−６０°Ｃのコンデンサー温度で維持し たサンプルをこの方法で１２〜１６時間フラスコが室温に戻り内容物が触っても ろくなるまで乾燥させた。

サンプルを元の容量と等しい容量の下記の再構成緩衝液を上記の乾燥物質と３７ ０Ｃで混合することによって再構成した再構成緩衝液 ＫＣｌ　２．ＯｍＭ、　ＰＨ７，２０±０．０５６０５±１５ｍＯｓ　ｍ ＫＨ２ＰＯ４１，４７ｍＭ ＮａＣ１１１０，７ｍＭ ＮａｚＨＰＣＬ　８ｙ１．ｍＭ プラストーンＣ−１５１，９０，０ｇ／ｊ７この溶液をすべての乾燥物質が再水 和されるまで攪拌した。この後、Ｐ　Ｈ７，０および２９０〜３００ｍｏｓｍの ｌ：１容量デキストラン−塩水を再構成血小板懸濁液と混合した。各サンプルを 形態性について評価し、セラノーベーカーシステム９０００オートメーテツドヘ モトロジ−アナライザーを用いて計数しパーセント回収２　１０７％　１６０ ＊＊形態性評価 ０：死滅細胞、空胞　ａ ■＝擬足形　ｂ ２：球形　Ｃ ４：円盤形　ｄ 評価＝　（０＊ａ＋１＊ｂ＋２＊ｃ＋４＊ｄ）／２最高＝４００ 計数した２００個の細胞基準 ５％２４ＫＰＶＰ／１５％Ｍ−ＨＥＳ凍結乾燥緩衝液ＫＣｌ　２．ＯｍＭ　ＰＨ ７，２０±０．０５３８００±２００　ｍｏｓ　ｍ ＫＨ２ＰＯ４１，４７ｍＭ ＮａＣ１９１，９ｍＭ Ｎａｇ　ＨＰＯ４８，１ｍＭ イノシン　１０．０ｍＭ アデニン　５．０ｍＭ ニコチン酸　、７５ｍＭ グルタミン　、７５ｍＭ ＭｇＣ１・６８２０　．４９ｍＭ グルコース　２．３Ｍ プラストーン２４Ｋ　５０．０ｇ＃７ Ｍ−ＨＥ　Ｓ　５０．　Ｏｇ／　Ｉ！ 平均　１６７±１３６４±９．８ 実施剋主 実施例１で述べた手順を異なる再構成緩衝液を用いて繰返した。

再構成緩衝液 ＰＶＰ−デキストロース塩水 グルコース　１０．０　ｍＭ　Ｐ　Ｈ７，２±０．０５２８３±１５ｍＯｓ　ｍ Ｎａ２ＨＰ　ＣＬ　、７１ｇ／　（１ プラストーン２．５　Ｋ　１００．０ｇ＃！ＮａＣｌ！　６８．４ｍＭ １　１５０　５２．６％ 実施憇土 実施例１で述べた手順を以下を除いて繰返した：（１）、３８％クエン酸三ナト リウム中に新しく抜取った血液からの血小板濃縮物を用いた。

（２）実施例３の再構成を用い九 （３）血小板は同厚血漿中に再懸濁させた。

血小板凝集を次のようにして測定した：血小板濃度を約２１５Ｘ１０’血小板／ −に調整した。

■００μｌの２００μＭＡＤＰを９００μｌのサンプルにキュヴエット中で攪拌 させながら加えた。サンプル流動計を用いて５２０ｎｍにセットした励起・発出 により試験した。この方法において、９０°角での光散乱を用いて濁度変化を検 出できる。この形状変化および凝集は光拡散の低下により特性決定する。

光拡散の低下を室温で種々の時間保存した血小板で同し手順を用いたときに見ら れた低下のパーセントとして示す。

表　４ 凝集 実施剋１ 実施例３で述べた手順を繰返したつ 再構成血小板のビーズを食作用する能力を次のようにして評価した。：１０μｍ の、１５ミクロン蛍光ラテックスビーズ（１，２５％固形分）（ポリサイエンセ スｔＵを５０μｌの再構成血小板に３７°Ｃで加え總細胞をビーズと共に３７℃ で４５分間インキユベートシ九次いで、２μｌの２■／ｌロ一ダミン染色剤、Ｒ ，、（モレキュラーブローブス＋ｂで室温で暗中で３０分以上染色し九次いで、 蛍光顕微鏡で試験したところ、ビーズのインターナリセーションα巧Δみ）を示 した 上記の説明から、当業者であれば本発明の上記の本質的な特徴を容易に確認でき 、また、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、本発明を種々の用途およ び条件に適用し得る。形状の変更および等価物の置換は状況が便法を示唆または 開示しているので予期し得るものであり、また、本明細書では特定の用語を用い ているけれども、これらは説明上の意味のものであり限定を目的とするものでは ない。

浄書（内容に変更なし） 要約書 細胞、特に血小板、及び細胞様物質の凍結乾燥のための方法及び媒体であって、 モノサッカライドヘキソース及びペントースと、輸液に使用できるように細胞、 特に血小板、及び細胞様物質を再構成することを可能とする生体適合性両性ポリ マーとを含む溶液を使用する方法及び媒体が開示される。

平成　年　月　日

Claims (38)

【特許請求の範囲】
1. １．最終濃度約７〜３７．５重量％の単糖類または単糖類混合物と最終濃度約０ ．７重量％〜溶液の飽和点までの約１Ｋ〜６００Ｋの範囲の分子量を有するポリ マーまたはポリマー混合物を含む７．０〜７．４の範囲のｐＨのリン酸緩衝生理 食塩水溶液中の血小板水性懸濁液の凍結乾燥により調製した約３重量％以下の水 分を含有する凍結乾燥血小板含有組成物。
2. ２．ポリマーが両親媒性である請求項１記載の組成物。
3. ３．ポリマーが約２．５Ｋ〜３６０Ｋの範囲の分子量を有する請求項１記載の組 成物。
4. ４．単糖類がキシロース、グルコース、リボース、マンノースおよびフルクトー スからなる群より選ばれる請求項１記載の組成物。
5. ５．単糖類がグルコースを含む請求項４記載の組成物。
6. ６．ポリマーがポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルスターチ、デキストラ ンおよびこれらの混合物からなる群から選ばれる請求項３記載の組成物。
7. ７．ポリマーがポリビニルピロリドンを含む請求項６記載の組成物。
8. ８．容液中のポリビニルピロリドンの最終濃度が１２〜２０重量％の範囲にあり 、１０〜４０Ｋの平均分子量を有する請求項７記載の組成物。
9. ９．ポリビニルピロリドンが約２４Ｋの平均分子量を有する請求項７記載の組成 物。
10. １０．ポリビニルピロリドンが約３６０Ｋの平均分子量を有する請求項７記載の 組成物。
11. １１．組成物がポリビニルピロリドンとヒドロキシエチルスターチの混合物を含 む請求項９または１０記載の組成物。
12. １２．ヒドロキシエチルスターチが約５００Ｋの平均分子量を有する請求項１１ 記載の組成物。
13. １３．請求項１記載の組成物を、約７．０〜７．４の範囲のｐＨを有し約０．７ 重量％〜飽和濃度までの最終濃度の約１Ｋ〜約３６０Ｋの分子量を有するポリマ ーまたはポリマー混合物を含む十分な量のリン酸緩衝再構成溶液と約１５〜５０ ℃の範囲の温度で混合して輸注可能状態の血小板を調製する工程を含むことを特 徴とする本質的に請求項１記載の組成物からなる凍結乾燥血小板を輸注可能な状 態に再構成する方法。
14. １４．ポリマーが両親媒性である請求項１３記載の方法。
15. １５．ポリマーが約２．５Ｋ〜３６０Ｋの範囲の分子量を有する請求項１３記載 の方法。
16. １６．さらに、血小板を上記再構成溶液から遠心により分離し、血小板を約７． ０〜〜７．４の範囲のｐＨのデキストロースー塩水緩衝溶液中に再懸濁させ、血 小板を上記緩衝溶液から遠心により分離することによる少なくとも１回の洗浄工 程により血小板を洗浄する工程を含む請求項１３、１４または１５記載の方法。
17. １７．請求項１３の方法によって調製した輸注使用可能な血小板含有組成物。
18. １８．請求項１６の方法によって調製した輸注使用可能な血小板含有組成物。
19. １９．血小板を約１７℃以上の温度で約１Ｋ〜約６００Ｋの分子量を有し１０〜 ３０重量％の範囲の最終濃度で存在するポリマーまたはポリマー混合物の水溶液 と接触させる工程を含むことを特徴とする血小板を含む凍結乾燥組成物の再構成 方法。
20. ２０．ポリマーが両親媒性である請求項１９記載の方法。
21. ２１．ポリマーが約２．５Ｋ〜３６０Ｋの範囲の分子量を有する請求項１９記載 の方法。
22. ２２．ポリマーがポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルスターチ、デキスト ランおよびこれらの混合物からなる群より選ばれる請求項１９、２０または２１ 記載の方法。
23. ２３．ポリマーが約１０Ｋの平均分子量のポリビニルピロリドンを含む請求項２ ０記載の方法。
24. ２４．溶液がさらに単糖類を約７．０〜３７．５重量％の最終濃度で含む請求項 １９、２０または２１記載の方法。
25. ２５．個数基準で乾燥前の血小板の少なくとも約２０重量％の再構成回収率に特 徴を有し、ＡＤＰによる刺激時に約２５〜８０％が凝集しかつ食作用し得る乾燥 状態から再構成した輸注使用可能な血小板組成物。
26. ２６．約１Ｋ〜約６００Ｋの分子量を有するポリマーまたはポリマー混合物を約 １０〜３０重量％の濃度でさらに含む請求項２５記載の組成物。
27. ２７．ポリマーがポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルスターチ、デキスト ランおよびこれらの混合物からなる群より選ばれる請求項２６記載の組成物。
28. ２８．ポリマーが約１０Ｋの平均分子量のポリビニルピロリドンを含む請求項２ ７記載の組成物。
29. ２９．溶液がさらに単糖類を約７．０〜３７．５重量％の最終濃度で含む請求項 ２５記載の組成物。
30. ３０．複数の血小板を、約７．０〜３７．５％の最終濃度で存在する単糖類と約 １Ｋ〜約６００Ｋの範囲の数平均分子量を有し総濃度が約０．７〜溶液の飽和点 まであるポリマーまたはポリマー混合物とを含有する緩衝溶液中に浸漬し；この 溶液を凍結させ；細胞を水の昇華により乾燥させることを特徴とする血小板の凍 結乾燥方法。
31. ３１．ポリマーが両親媒性である請求項３０記載の方法。
32. ３２．ポリマーが約２．５Ｋ〜約３６０Ｋの範囲の分子量を有する請求項３０記 載の方法。
33. ３３．単糖類がキシロース、グルコース、リボース、マンノースおよびフルクト ースからなる群より選ばれる請求項３０記載の方法。
34. ３４．ポリマー混合物がポリビニルピロリドンとヒドロキシエチルスターチを含 む請求項３０記載の方法。
35. ３５．ポリマーがポリビニルピロリドンを含む請求項３０記載の方法。
36. ３６．ポリビニルピロリドンが約２４Ｋの平均分子量を有する請求項３４または ３５記載の方法。
37. ３７．ポリビニルピロリドンが約３６０Ｋの平均分子量を有する請求項３４また は３５記載の方法。
38. ３８．ヒドロキシエチルスターチが約５００Ｋの平均分子量を有する請求項３４ 記載の方法。