JPH05294996A - 合成ペプチド、それを含有する肺サーファクタント及び呼吸窮迫症候群治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記配列 【化１】 で表されるペプチド、該ペプチドと脂質混合物からなる
肺サーファクタント及び該肺サーファクタントを有効成
分として含有する呼吸窮迫症候群治療剤。 【効果】本発明合成ペプチドは、単離・精製が容易であ
り、短時間で大量に製造することができ、脂質混合物と
配合することにより強力な表面活性作用を有するペプチ
ドである。このペプチドと脂質混合物からなる肺サーフ
ァクタントは懸濁性が良好であり、強力な表面活性作用
を有することから呼吸窮迫症候群治療剤として有用であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、合成ペプチドに関す
る。詳しくは、脂質混合物と配合することにより強力な
表面活性作用を有する合成ペプチド、該合成ペプチドと
脂質混合物からなる肺サーファクタント及び該肺サーフ
ァクタントを有効成分として含有する呼吸窮迫症候群治
療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】呼吸窮迫症候群は、肺サーファクタント
の欠乏により肺胞が虚脱する結果、重篤な呼吸障害をき
たす疾病であり、未熟な新生児に多症し死亡率が高い。

【０００３】近年、この呼吸窮迫症候群に対し、外部か
ら経気道的に肺サーファクタントを投与する補充療法が
開発され、顕著な治療効果を収めている。

【０００４】補充される肺サーファクタントとしては、
哺乳動物の肺臓組織に存在するリン脂質、中性脂質、
総コレステロール及び炭水化物並びに微量の蛋白質から
なる物質（特公昭６１−９９２５号公報）、前記成分
のほかに脂肪酸を含有する物質（以下、Ｓ−ＴＡとい
う。：特公昭６１−９９２４号公報）、豚肺洗浄液よ
り分離し、これにＣａ⁺⁺を添加した物質（日本界面医学
会雑誌、第１２巻第１号第１頁、１９８０年）、コリ
ンホスホグリセリド、酸性リン脂質、脂肪酸類及び動物
肺由来のリポ蛋白質をそれぞれ特定の比率で含有する物
質（特公平３−７８３７１号公報）、ジパルミトイル
ホスファチジルコリン及び脂肪アルコールからなる物質
（特公平３−４３２５２号公報）等が知られている。

【０００５】本発明者等の一部は、先に動物由来の肺サ
ーファクタントからリポ蛋白質を分離し、そのリポ蛋白
質が肺表面活性を示すため不可欠の成分であり、脂質混
合物に配合することにより、サーファクタントの優れた
表面張力低下作用の発現並びにサーファクタント気液面
拡散作用の短縮及び低い平衡表面張力の発揮により、十
分な肺胞腔容量の確保等を可能にし、呼吸窮迫症候群の
治療に使用できることを発見した（特公平３−７８３７
１号公報）。

【０００６】近年、哺乳動物の肺サーファクタントに特
異的なアポ蛋白質として親水性のサーファクタントアポ
蛋白質Ａ及びサーファクタントアポ蛋白質Ｄ、並びに疎
水性のサーファクタントアポ蛋白質Ｂ（以下、ＳＰ−Ｂ
という。）及びサーファクタントアポ蛋白質Ｃ（以下、
ＳＰ−Ｃという。）の４種が確認された〔アポ蛋白質の
構造と機能についての総説（秋野豊明、黒木由夫著、呼
吸と循環、第３８巻第１８号第７２２頁、１９９０年；
安田寛基等編、「バイオサーファクタント」、第２章
サーファクタントの生化学 −サーファクタントとアポ
蛋白質第１３１頁、１９９０年、株式会社サイエンスフ
ォーラム）〕。

【０００７】ヒト肺由来のＳＰ−Ｃは、アミノ酸３５残
基からなり、Ｎ末端アミノ酸がフェニルアラニンでバリ
ン等の疎水性アミノ酸に富む疎水性が極めて強いアポ蛋
白質である。またウシ、ブタ、ラット等の肺から単離さ
れたＳＰ−Ｃも、アミノ酸３４〜３５残基からなり、Ｎ
末端側のアミノ酸配列が動物種により異なっているがヒ
トとの相同性が極めて高い。

【０００８】特表平３−５０２０９５号公報、特開平３
−９００３３号公報には、ＳＰ−Ｂ又はＳＰ−Ｃが肺サ
ーファクタントの気液界面への吸着、拡散を促進し、肺
サーファクタントの表面活性を改善することが記載され
ている。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】ＳＰ−Ｃを有効成分と
して含有する肺サーファクタントは、呼吸窮迫症候群治
療剤として極めて有効であるにもかかわらず、ＳＰ−Ｃ
の疎水性が極めて強く単離・精製が困難であること及び
生体中に極めて微量しか含まれていないこと等から、実
用化されるには至っていない。

【００１０】また、特表平３−５０２０９５号公報に
は、ＳＰ−Ｃの部分構造をもつ合成ペプチドと脂質との
混合物が、呼吸窮迫症候群治療に効果的である旨、記載
されている。

【００１１】しかしながら、一般的に合成ペプチドの製
造には、そのアミノ酸配列が長くなるにつれて合成時の
未成熟なペプチドの生成頻度が高くなり、単離・精製が
困難となること、製造に長時間を要すること及び大量合
成が困難なこと等の欠点があるといわれている。

【００１２】ところで、肺サーファクタント製剤は、品
質保全の点から、用時に生理食塩水懸濁液とする乾燥粉
末製剤として提供されることが多い。

【００１３】しかしながら、ＳＰ−Ｃのアミノ酸配列を
有する合成ペプチドをコリンホスホグリセリド、酸性リ
ン脂質及び脂肪酸類からなる脂質混合物に配合した肺サ
ーファクタント（以下、Ｓ−３５という。）製剤は、ペ
プチド中に存在するシステイン残基がジスルフィド結合
を形成するためペプチドの凝集性が高いこと、肺サーフ
ァクタント自体の疎水性が強いこと等の要因から、生理
食塩水に対する分散性が極めて悪く、製剤として使用で
きる程度に均一な懸濁液とすることが困難であった。

【００１４】肺サーファクタント製剤の懸濁性の改善法
として、マンニトール等の懸濁化剤を添加する方法（特
開昭６０−３４９０５号公報）及び凍結乾燥時に一時凍
結温度を−１〜−１０℃で行う凍結法（特開昭６３−１
０７１８号公報）が提案されているが、操作が煩雑であ
り、より簡便な製剤の製造法の開発が望まれていた。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記知見
に鑑み、脂質混合物と配合することにより強力な表面活
性作用を有する合成ペプチドにつき、鋭意研究した結
果、意外なことに、Ｎ末端にシステイン残基を有する本
発明合成ペプチドが、懸濁化剤無添加、−２０℃以下で
行う通常の凍結乾燥法により製造した場合でも、Ｓ−３
５、コリンホスホグリセリド、酸性リン脂質及び脂肪酸
類からなる脂質混合物のみからなる合成肺サーファクタ
ント（以下、ＳＦ−３という。）又はＳ−ＴＡに比べ、
均一懸濁性が良好で、しかもＳ−３５又はＳ−ＴＡと同
等の強力な表面活性作用を有することを知り本発明を完
成させた。

【００１６】本発明によれば下記特定配列で示されるペ
プチド（以下、本発明合成ペプチドという。）、すなわ
ち、製造時の未成熟なペプチドの生成頻度が低いため単
離・精製が容易であり、短時間で大量に製造することが
できる合成ペプチドであって、脂質混合と配合すること
により懸濁性が良好であり、かつ、強力な表面活性作用
を有する合成ペプチド、該合成ペプチドと脂質混合物か
らなる肺サーファクタント及び該肺サーファクタントを
有効成分として含有する呼吸窮迫症候群治療剤が提供さ
れる。

【００１７】

【化２】

【００１８】本発明合成ペプチドは、化学的又は遺伝子
工学的手法により製造することができるが、単離・精製
の点から化学的製造法が好ましい。

【００１９】化学的製造法としては、「ペプチド合成
（泉屋信夫等著、丸善株式会社、１９７５年）」、「生
化学実験講座、第１巻、タンパク質の化学ＩＶ−化学修
飾とペプチド合成−（榊原俊平著、東京化学同人株式会
社、１９７３年）」、「続生化学実験講座、第２巻、タ
ンパク質の化学（下）ペプチド合成（木村皓俊著、東京
化学同人株式会社、１９８７年）」、「ソリド フェィ
ズ ペプチド シンテイシス(Solid phase pepitde syn
thesis - a practical approrch ) （アセルトン（E.At
herton) およびシェパード(R.C.Sheppard)著、２５〜１
８９、Oxford University Press,Oxford、１９８９
年）」及び「Kenichi, Akagi et al. （ Chem.,Pharm.,
Bull.,第３７巻、第１０号、第２６６１〜２６６４頁、
１９８９年）」又は「ザ・ペプチド(The Peptides)〔グ
ロス(Gross, E.) 及びマイネンホーフ(Meinenhofe, J.)
編、バラニー（Barany, G.) 及びメリフィールド（Ｍｅ
ｒｒｉｆｉｅｒｄ，Ｒ）著、第２巻第１〜２８４頁、ア
カデミックプレス、ニューヨーク、１９８０年）〕」に
記載されている方法、例えば、アジド法、酸クロライド
法、酸無水物法、混合酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エス
テル法（ｐ−ニトロフェニルエステル法、ｐ−ヒドロキ
シコハク酸イミドエステル法等）、カルボイミダゾール
法、酸化還元法、ＤＣＣ−活性化法等の液相合成法又は
固相合成法等により製造することができる。

【００２０】このうち固相合成法が好ましく、自動合成
装置により合成することが可能である。自動合成装置と
しては、例えば４３１Ａペプチド・シンセサイザ（アプ
ライドバイオシステム社製）又はペプチド合成装置モデ
ル９９０Ｅ（ベックマン社製）が挙げられる。

【００２１】本発明合成ペプチドに脂質混合物としてコ
リンホスホグリセリド、酸性リン脂質及び脂肪酸類を配
合することにより肺サーファクタント（以下、本発明サ
ーファクタントという。）を製造することができる。

【００２２】配合比は最終生成物の乾燥総重量に対する
これらの成分の重量比率が、合成ペプチドは０．１〜
５．０％（Ｗ／Ｗ） 、コリンホスホグリセリドは５
０．６〜８５．０％(W/W) 、酸性リン脂質は４．５〜３
７．６％(W/W) 、脂肪酸類は４．６〜２４．６％(W/W)
となるように設定するのが適当である。

【００２３】本発明サーファクタントにおいて使用でき
るコリンホスホグリセリドとしては、1,2-ジパルミトイ
ルグリセロ-(3)- ホスホコリン( 別名ジパルミトイルホ
スファチジルコリン) 、1,2-ジステアロイルグリセロ-
(3)- ホスホコリン、1-パルミトイル-2- ステアロイル
グリセロ-(3)- ホスホコリン若しくは1-ステアロイル-2
- パルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリン等の1,2-ジ
アシルグリセロ-(3)- ホスホコリン、1-ヘキサデシル-2
- パルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリン若しくは1-
オクタデシル-2- パルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコ
リン等の1-アルキル-2- アシルグリセロ-(3)- ホスホコ
リン又は1,2-ジヘキサデシルグリセロ-(3)- ホスホコリ
ン等の1,2-ジアルキルグリセロ-(3)- ホスホコリンが適
当である。これらの化合物についてはグリセロール残基
の２位の炭素に基づく光学異性体が存在するが、本発明
サーファクタントにおいてはＤ体、Ｌ体又はＤＬ体のい
ずれを問わず使用することができる。このほかにコリン
ホスホグリセリドとしては、上述の単品からなるコリン
ホスホグリセリド以外に、炭素数が１２〜２４個のアシ
ル基、好ましくは、飽和アシル基を２個有する1,2-ジア
シルグリセロ-(3)- ホスホコリンの２種以上からなる混
合物、更には当該混合物と上述の単品との混合物も使用
することができる。

【００２４】酸性リン脂質としては、1,2-ジアシル-sn-
グリセロ-(3)- リン酸( 別名L-α-ホスファチジン酸)
、1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホスホ-L- セリン
( 別名ホスファチジルセリン）、1,2-ジアシル-sn-グリ
セロ-(3)- ホスホ-sn-グリセロール( 別名ホスファチジ
ルグリセロール) 又は1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)-
ホスホ-(1)-L-myo- イノシトール( 別名ホスファチジル
イノシトール) が適当である。これらの化合物におい
て、１位及び２位は同一種類又は異なる種類のアシル基
でそれぞれ置換されていてもよい。ここで、アシル基の
炭素数は１２〜２４個が好ましい。

【００２５】脂肪酸類としては、遊離脂肪酸、脂肪酸の
アルカリ金属塩、脂肪酸アルキルエステル、脂肪酸グリ
セリンエステル若しくは脂肪酸アミド又はこれらの２種
以上からなる混合物、更には脂肪アルコール又は脂肪族
アミンが適当である。

【００２６】本明細書において「脂肪酸類」とは、ここ
でいう脂肪アルコール及び脂肪族アミンも包含する意味
である。

【００２７】遊離脂肪酸としてはミリスチン酸、パルミ
チン酸又はステアリン酸が適当であるが、パルミチン酸
が好ましい。

【００２８】脂肪酸のアルカリ金属塩としてはパルミチ
ン酸ナトリウムが、脂肪酸アルキルエステルとしてはパ
ルミチン酸エチルエステルが、脂肪酸グリセリンエステ
ルとしてはモノパルミチンが、脂肪酸アミドとしてはパ
ルミチン酸アミドがそれぞれ好ましい。

【００２９】脂肪アルコールとしてはヘキサデシルアル
コールが、脂肪族アミンとしてはヘキサデシルアミンが
好ましい。

【００３０】上述のコリンホスホグリセリド、酸性リン
脂質及び脂肪酸類は動植物から分離された製品、半合成
品又は化学合成品のいずれでもよく、それらの市販品を
使用することができる。

【００３１】本発明サーファクタントは、本発明合成ペ
プチド溶液と上記脂質混合物溶液との混合溶液を減圧乾
固し、得られた残留物を適当な懸濁溶媒を用いて懸濁
し、次いで凍結乾燥する方法により製造することができ
る。

【００３２】本発明合成ペプチド溶液の調製に使用され
る溶媒としては、例えば、ギ酸、トリフルオロ酢酸（Ｔ
ＦＡ）、トリフルオロエタノール、ジメチルスルホキシ
ド（ＤＭＳＯ）、クロロホルム／メタノール又はクロロ
ホルムが挙げられる。

【００３３】脂質混合物溶液の調製に使用される溶媒と
しては、例えば、クロロホルム、クロロホルム／メタノ
ール〔２：１〜５：１(V/V) 〕が挙げられる。

【００３４】懸濁溶媒としては水又は水−エタノール混
合液〔４：１〜２０：１(V/V) 〕が挙げられるが、水−
エタノール混合液が好ましい。懸濁は３０〜６０℃、好
ましくは４０〜５０℃で、５〜６０分間、好ましくは１
５〜３０分間かけて行う。

【００３５】本発明サーファクタントには製法上、微量
の水分の残存は避けられないが、その残存重量比率が総
重量に対して５．０％(W/W) 以下になるまで乾燥するこ
とが望ましい。かかる程度まで乾燥すれば、水−エタノ
ール混合液を用いる場合、エタノールの残存は検出不能
となる。

【００３６】また、本発明サーファクタント乾燥粉末製
剤は、可変速度式ミクスチャー又は超音波発生装置内で
適切な生理的な濃度の１価又は２価金属塩、例えば０．
９％塩化ナトリウム若しくは１．５mM塩化カルシウム又
はそれらを含有する生理的な緩衝液を用いて均一に懸濁
分散させて使用することができる。

【００３７】次に、このようにして製造された本発明サ
ーファクタントの表面活性、懸濁性及び薬理学的性質に
ついて詳述する。

【００３８】（１）表面活性 表面張力低下作用；表面張力低下作用の測定を田中等
の方法（日本界面医学会雑誌、第１３巻、第２号、第８
７頁、１９８２年）に準じて行った。

【００３９】本発明サーファクタント懸濁液を生理食塩
水（表面積；５４．０cm² ）上に、１cm² あたり本発明
サーファクタントが１．０〜２．０μg となるように滴
下し、該表面積を５４．０〜２１．６cm² の範囲内で２
〜５分かけて圧縮・拡張した際の表面張力をウィルヘル
ミー型表面張力測定装置（協和界面科学株式会社製）に
より、３７℃で連続的に測定した。 本発明サーファク
タントの表面張力低下作用は、最大表面張力が２９．７
〜３４．５dyne/cm 、最小表面張力が１．４〜８．９dy
ne/cm であり、生理食塩水の表面張力を低下させること
が認められた。

【００４０】同様にして測定したＳＦ−３の表面張力低
下作用は、最大表面張力が２５．８〜５０．３dyne/cm
、最小表面張力が１．０〜１３．５dyne/cm であっ
た。

【００４１】なお３７℃における生理食塩水の当初の表
面張力は７０．５dyne/cm であった。

【００４２】気液面拡散作用；生理食塩水の液面に、
表面積１cm² あたり０．８〜１．５μg の本発明サーフ
ァクタント懸濁液を滴下し、滴下直後からの表面張力を
垂直板法により経時的に測定した。測定温度は３７℃で
あった。

【００４３】なお、到達時間とは、試料の滴下直後から
表面張力が一定値にまでに要する時間をいい、平衡表面
張力とはその時の値をいう。

【００４４】本発明サーファクタントは３０〜６５秒と
いう短時間で気液面に膜を形成し、表面張力を２７．９
〜３４．８dyne/cm にまで低下させた。

【００４５】同様にして測定したＳＦ−３の気液面拡散
作用は、１２０秒経過後の表面張力が３８．１〜５２．
９dyne/cm であった。

【００４６】気液面吸着作用；１mlあたり０．２〜
１．０mgの本発明サーファクタントを含有する３７℃の
生理食塩水懸濁液を調製し、懸濁された本発明サーファ
クタントの生理食塩水気液面への吸着速度を測定した。

【００４７】吸着速度の測定はキングらの方法（ Ameri
can Journal of Physlology ，第２２３卷、第７１５
頁、１９７２年) に従った。

【００４８】すなわち、懸濁液を生理食塩水の入ってい
る直径５cmのテフロン水槽の底に注入後、マグネティッ
クスターラーでゆっくり攪拌し、攪拌を停止した後の表
面張力の変動値より吸着速度を求めた。

【００４９】本発明サーファクタントは、攪拌を停止し
てから３０〜１２０秒経過後に、表面張力を２８．１〜
３９．５dyne／cmの範囲に低下させ、その後、一定値を
示した。

【００５０】これは懸濁状態にある本発明サーファクタ
ントが３０〜１２０秒で気液面に浮上吸着し、強い表面
活性をもつ膜を形成したことを示している。

【００５１】同様にして測定したＳＦ−３は、表面張力
が４２．２〜５８．３dyne/cm の範囲で一定値を示し、
その所要時間は１５０秒以上であった。

【００５２】このことはＳＦ−３の気液面吸着作用が本
発明サーファクタントよりも弱いことを示し、本発明サ
ーファクタントが強力な表面吸着促進力をもつことを示
している。

【００５３】（２）懸濁性 肺サーファクタントの懸濁性試験を、特開昭６３−１０
７１８公報の方法に準じて行った。

【００５４】すなわち、懸濁開始後所定時間ごとの分散
率及び懸濁開始後２分経過時の最大分散粒子径により、
懸濁性を判定した。

【００５５】分散率の試験は、２０ml容バイアルに肺サ
ーファクタント６０mgを分取し、生理食塩水２mlを注入
し、当該バイアルをイワキＫＭシェーカーＶ−Ｓ型振盪
器（イワキ株式会社製）に装着して２７０ストローク／
分で振盪し、振盪開始３０秒後、１分以降４分まで１分
ごとに、更に４分以降１０分までは２分ごとに各試料の
分散状態を容器の外からルーペを通して肉眼で観察する
ことにより行った。

【００５６】懸濁状態の判定は、各時間ごとに各試料１
０本ずつ２人で行い、懸濁したか否かの判断は容器内に
小塊を全く認めず、製剤が生理食塩水中に均一に分散し
て白色のやや粘稠性の懸濁液が形成されたか否かで行っ
た。

【００５７】分散率は各人が各時間ごとに懸濁が完了し
た試料の全本数（１０本) に対する百分率を求め、これ
の２人による平均値で表示した。

【００５８】最大分散粒子径は各試料を２０ml容バイア
ルに肺サーファクタント６０mgを分取し、生理食塩水２
mlを注入し、上述と同一の振盪条件で２分間連続して振
盪し、懸濁液中の最大粒子を顕微鏡を用いて探し出し、
その直径をノギスで測定することにより求めた。

【００５９】本発明サーファクタントは、いずれも大部
分が２分以内に懸濁し、しかもその最大粒子径は０．９
mm以下であり、懸濁性が良好であった。

【００６０】（３）薬理学的性質 急性毒性；５週令の雄性ＩＣＲ系マウス及びウィスタ
ー系ラットを用いて本発明サーファクタントの急性毒性
を試験した。マウスでの経口ＬＤ₅₀及び腹腔内ＬＤ
₅₀は、２．５〜１０．０g/kg及び１．５〜５．０g/kgで
あり、ラットでのそれらは１．５〜５．０g/kg及び１．
５〜２．５g/kgであった。

【００６１】亜急性毒性；毎日３００〜６００mg／kg
ずつ１月間、本発明サーファクタントをウィスター系成
熟ラットに腹腔内投与したが、体重の変化及び主要臓器
の肉眼的、組織学的観察における異常は認められなかっ
た。

【００６２】肺胞腔容量維持作用；在胎期間２７日の
兎未熟胎仔は肺サーファクタントを殆ど産生せず、肺サ
ーファクタント欠乏状態にあることから、新生児呼吸窮
迫症候群のモデル動物とされている。

【００６３】この在胎期間２７日の兎胎仔５匹を用い
て、気道内圧の増減下における肺胞腔容量( 以下、肺容
量という。) を３７℃で測定した。

【００６４】測定は胎仔の頸部を切開し、気管に接続さ
せた水マノメーターを用いて、本発明サーファクタント
を経気道的に投与した５分後から連続的に行われた。気
管内圧を、気管に接続させた２チャンネル独立駆動シリ
ンジポンプＮｏ．９４０（米国ハーバード社製) を用い
て３０cm水圧まで加圧し、肺胞を拡張した。次いで、気
道内圧を０cm水圧まで減圧し肺胞を収縮させ、各水圧に
おける肺容量を測定した。肺容量は体重１kgあたりのミ
リリットル(ml/kg) で表示した。

【００６５】本発明サーファクタントの投与はその濃度
が１．０〜６．０％(W/V) になるように調製した生理食
塩水懸濁液０．０５〜０．５mlを気道内に直接注入する
方法で行った。

【００６６】機能的残気量を示す減圧時の５cm水圧の肺
容量が大きいほど肺サーファクタント活性が高いことを
意味する。

【００６７】対照として、本発明サーファクタント懸濁
液に代えて生理食塩水を投与した。対照群では、在胎期
間２７日の兎未熟胎仔の肺容量（５cm水圧) は１〜５ml
/kgで、肺胞が殆ど拡張していなかった。

【００６８】また、正常レベルの肺サーファクタントを
有する在胎３０日の満期胎仔は、肺容量（５cm水圧) が
３９〜５３ml/kg であり、肺胞が十分に拡張しており、
正常な呼吸を営むことが可能であることを示す。

【００６９】ＳＦ−３を投与した場合には、未熟胎仔の
肺容量（５cm水圧) が１５〜２５ml/kg と肺胞の拡張が
不十分であった。

【００７０】本発明サーファクタントを投与した未熟胎
仔の肺容量（５cm水圧) は３９〜５３ml/kg を示し、本
発明サーファクタントが未熟胎仔の肺容量を正常レベル
まで改善することが認められた。

【００７１】以上のように、本合成ペプチドは、脂質混
合物の表面活性を強力に賦活する作用を有し、本合成ペ
プチドと脂質混合物からなる本発明サーファクタント
は、表面活性、懸濁性及び薬理学的な性質から有効な呼
吸窮迫症候群治療剤であるといえる。

【００７２】本発明により提供される呼吸窮迫症候群治
療剤は１回投与量として、小児用には、５０〜１０００
ｍｇ、成人用には５００〜５０００ｍｇの本発明サーフ
ァクタントを含有する。この用量を水、生理食塩液又は
生理的に許容される緩衝液等に懸濁し、濃度が１．０〜
１０．０%(W/V)になるように調整し、これを呼吸障害発
現直後から４８時間に気道内に１〜１０回注入又は噴霧
することにより使用する。そのほか、懸濁させることな
く、そのまま粉末剤として直接、吸入させることもでき
る。用量、使用法及び回数は患者の症状及び併用療法に
応じて適宜変更しても良い。

【００７３】本発明治療剤には必要に応じて安定剤、保
存剤、等張化剤、緩衝剤、懸濁化剤等の医薬品添加物又
は気管支拡張剤、抗アレルギー剤、制癌剤、抗菌剤等の
医薬品を含有させることができる。

【００７４】剤型は液剤又は用時に懸濁して用いる粉末
剤が適当である。本発明治療剤はバイアル瓶又はアンプ
ル瓶等の密封容器内に充填され、無菌製剤として保存さ
れる。

【００７５】以下に、本発明を実施例をもって説明す
る。

【００７６】

【実施例】

〔ペプチドの製造〕以下の実施例において、合成したペ
プチドの分子量を高速原子衝撃法（ＦＡＢＭＳ）により
測定した。質量分析計には、ＪＭＳ−Ｓ１０２Ａ型（日
本電子株式会社製）を使用し、イオン源はセシウムガン
（１０ＫｅＶ）を用いた。

【００７７】〔実施例１〕〔配列番号１〕記載のペプチ
ド（以下、ペプチドＡという。）をアセルトン（E.Athe
rton) 及びシェパード(R.C.Sheppard ) 著「ソリド フ
ェィズ ペプチドシンテイシス(Solid phase pepitde s
ynthesis - a practical approrch ) 」（p.25〜189,19
89,Oxford University Press,Oxford 及びKenichi, A
kagi etal. Chem.,Pharm.,Bull.,37(10),p.2661 〜266
4(1989) に記載の方法を参考に、マルチペプチド固相
合成システム「コックさん」（商品名；国産化学株式会
社製) により固相合成した。

【００７８】初発の樹脂として、N-α-9- フルオレニル
メチルオキシカルボニル−ロイシン(Fmoc-Leu)を 4-(ヒ
ドロオキシメチル) フェノキシメチル−コポリ( スチレ
ン１％ジビニルベンゼン) 樹脂に結合させたN-α-9- フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル−ロイシン−Ｏ−樹
脂(Fmoc-Leu-O-樹脂) ０．２０mmol／０．５g を使用し
た。その樹脂をN,N-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で
２０分間膨潤させた後、ＤＭＦで４回樹脂を洗浄した。
２０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液を加え振盪し脱保護を行
った。この脱保護を完全に行うためにこの操作を３回繰
り返した。次いで、樹脂中の過剰のピペリジンを除去す
るためＤＭＦで３回、N-メチル-2- ピロリドンで３回、
更に、ＤＭＦで３回洗浄した。この際、ピペリジンの有
無の確認をpH試験紙で行った。

【００７９】その後、ＤＭＦ６ml、Fmoc-Leu０．５mmo
l、N-ヒドロキシベンゾトリアゾール０．５mmol及びN,
N'−ジイソプロピルカルボジイミド０．５mmolを加え９
０分間振盪し縮合反応を行った。次いで、ＤＭＦで４回
樹脂を洗浄し、過剰の試薬を除去した。この縮合反応の
確認は、ニンヒドリン法によるカイザーテストで行っ
た。

【００８０】このようにして合成計画に従い、順次アミ
ノ酸を樹脂上でＮ末端方向に延長し、Ｎ末端及び官能基
を完全に保護したペプチド−Ｏ−樹脂を合成した。

【００８１】なお、Arg 、Lys 、His 、Pro 、Cys 、Ph
e の導入時の縮合反応は、１２０分、２回行った。

【００８２】その後、保護したペプチド−Ｏ−樹脂に２
０％ピペリジン−ＤＭＦ溶液を加えＮ末端のFmoc保護基
の脱保護を行い、このペプチド−Ｏ−樹脂をＤＭＦで６
回、メタノールで６回洗浄し、減圧乾燥した。その乾燥
したペプチド−Ｏ−樹脂（１００mg）に氷冷下で攪拌し
ながら、m-クレゾール（０．２ml）、1,2-エタンジチオ
ール（０．５ml）、チオアニソール（１．２ml）、ＴＦ
Ａ（７．５ml）及びトリメチルシリルブロマイド（１．
４ml）を加えた後、１２０分間氷冷下で攪拌し、官能性
側鎖の脱保護とともにペプチドを樹脂から切り出し、グ
ラスフィルター（Ｇ３）で濾過した。この濾過液をエバ
ポレイターにより約５mlにまで減圧濃縮し、ジエチルエ
ーテルを加えてペプチドを沈殿させた。このペプチド沈
殿物をグラスフィルター（Ｇ３）で濾取し、ジエチルエ
ーテルで５回洗浄した後、減圧乾燥してペプチドＡを５
５mg取得した。

【００８３】尚、すべてのアミノ酸のＮ末端のアミノ基
は、Fmoc基で保護し、官能性側鎖を以下の基により保護
した。

【００８４】Arg-Mtr ；（４−メトキシ−２、３、６−
トリメチルベンゼンスルホニル）． Lys-Boc ；（ｔ−ブチルオキシカルボニル）． Cys-Trt ；（トリチル）． His-Trt ；（トリチル）． このペプチド約７mgを０．６mlのＴＦＡに溶解した。さ
らに、同溶液にクロロホルム−メタノール（Ｃ／Ｍ）
２：１，(V/V) を添加し、最終的に３．０mlとした。同
試料をＣ／Ｍ混合溶媒 ２：１，(V/V) で平衡化したセ
ファデクスＬＨ−６０カラム（φ２．５cmＸ９０cm）に
より精製し、純粋なペプチドＡを採取した。

【００８５】溶出液中のペプチドの存在は、２４５nm
（分光光度計；日本分光株式会社モデル８７０−ＵＶ）
及び示差屈折計（島津製作所株式会社 ;モデルＲＩＤ−
６Ａ）でモニターした。

【００８６】ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺ ) ；２８７８．０
（分子量の計算値；２８７６．７）。

【００８７】〔実施例２〕〔配列番号２〕記載のペプチ
ド（ペプチドＢ）を「ザ・ペプチド(The Peptides)」
〔グロス(Gross, E.) 及びマイネンホーフ(Meinenhofe,
J.)編、バラニー（Barany, G.) 及びメリフィールド(M
errifierd,R)著、第２巻第１〜２８４頁、アカデミック
プレス、ニューヨーク、１９８０年）〕に記載の方法に
従い、固相合成法によりフェニルアセトアミドメチル
（ＰＡＭ）樹脂上で合成した。

【００８８】Ｃ末端アミノ酸残基のロイシンをｔ−ブチ
ルオキシカルボニル−ロイシン（Boc-Leu)とし、オキシ
メチルフェニルアセトアミド結合を介してＰＡＭ樹脂に
結合させた。Ｃ末端結合後Boc-Leu-PAM 樹脂（０．７０
mol/g 、０．３５g ）をペプチド合成装置（モデル９９
０Ｅ、ベックマン社製）の反応容器に移した。保護処理
を施したアミノ酸を予め形成した対称無水物法により樹
脂上でＮ末端方向に延長し、完全に保護したペプチド−
Ｏ−樹脂を合成した。但し、アルギニンの縮合に際して
は、N,N-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）／
ヒドロキシベンゾトリアゾール［コニー等、Chem.Ber.,
103,788-798(1970) ］を用いてダブルカップリングし
た。

【００８９】尚、すべてのアミノ酸のＮ末端のアミノ基
は、Boc 基で保護し、官能性側鎖を以下の基により保護
した。

【００９０】Arg-Tos ；（トシル）． Lys-2CLZ；（２−クロロベンジルオキシカルボニル）． Cys-4MeBzl；（４−メチルベンジル）． His-Tos ；（トシル）． この縮合反応の確認はニンヒドリン法によるカイザーテ
ストで行った。

【００９１】完全に保護したペプチド−Ｏ−樹脂（１５
５mg）を塩化メチレン中で５分間膨潤させた。N-α-Boc
保護基を１％(v/v) インドール及び０．１％(v/v) エタ
ンジチオールを含有するＴＦＡを用いて脱保護した。次
いで、この脱保護したペプチド−Ｏ−樹脂を、p-クレゾ
ール（１ml）、p-チオクレゾール（０．２g ）及びＤＭ
ＳＯ（１ml）を添加した無水フッ化水素（ＨＦ）（１１
ml）で、０℃にて６０分間処理し、ペプチドを樹脂から
切り出した。

【００９２】ＨＦ及びＤＭＳＯを真空下、０℃にて留去
した。この切り出したペプチド及び樹脂を１５mlの冷ジ
エチルエーテルで３回洗浄し、次いで遊離のペプチドを
冷ＴＦＡの１０ml洗浄液で３回洗浄することにより抽出
した。この抽出液を直ちに濾過し、氷冷水（１２０ml〜
１５０ml）に加えて粗製のペプチドを沈澱させた。次い
で、この粗製のペプチドを、１０００×g,０℃にて３０
分間遠心分離し沈澱物として回収した。この沈澱物をジ
エチルエーテル（１５ml）で洗浄した。この洗浄工程
を、更にジエチルエーテル、酢酸エチル、蒸留水を用い
て繰り返し行いペプチドＢを８３ｍｇ得た。

【００９３】この粗製のペプチドを５０％ＤＭＳＯ水溶
液に溶解し、μ−ボンダスフェアー、Ｃ８−３００Åカ
ラムによる逆相系高速液体クロマトグラフィーで精製
し、純粋なペプチドＢを採取した。

【００９４】溶離液としては、０．１％ＴＦＡを含む５
０％アセトニトリル水溶液を用い５分間溶出した。次い
で、同溶離液と０．１％ＴＦＡを含む８０％アセトニト
リル水溶液による直線的な濃度勾配により３０分間溶出
した。

【００９５】溶出液中のペプチドの存在は、２４５nm
（分光光度計；日本分光株式会社モデル８７０−ＵＶ）
および示差屈折計（島津製作所株式会社モデルＲＩＤ−
６Ａ)でモニターした。

【００９６】ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺ ) ；２８６７．５
（分子量の計算値；２８６６．７）。

【００９７】〔実施例３〕〔配列番号３〕のペプチド
（ペプチドＣ）を実施例１と同様の方法で調製した。

【００９８】ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺ ) ；２８５４．６
（分子量の計算値；２８５３．６）。

【００９９】〔実施例４〕〔配列番号４〕のペプチド
（ペプチドＤ）を実施例１と同様の方法で調製した。

【０１００】ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺ ) ；２８４４．３
（分子量の計算値；２８４３．６）。

【０１０１】〔実施例５〕〔配列番号５〕のペプチド
（ペプチドＥ）を実施例１と同様の方法で調製した。

【０１０２】ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺ ) ；２８２６．８
（分子量の計算値；２８２５．６）。

【０１０３】〔実施例６〕〔配列番号６〕のペプチド
（ペプチドＦ）を実施例１と同様の方法で調製した。

【０１０４】ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｈ⁺ ) ；２８１６．７
（分子量の計算値；２８１５．６）。

【０１０５】本発明合成ペプチドを５％(v/v) フェノー
ルを含む１２規定塩酸／ＴＦＡ〔２：１(V/V) 〕で、真
空下、１５０℃にて２、４、６、１２、２４、４８及び
７２時間酸加水分解し、酸を除いた後に、加水分解生成
物を島津アミノ酸自動分析システム（ＬＣ−９Ａ）によ
り分析した。２〜７２時間加水分解において、より高い
回収率を示したアミノ酸値を採用し、アミノ酸組成値を
算出した。結果を〔表１〕に示す。

【０１０６】

【表１】

【０１０７】〔本発明サーファクタントの製造〕本発明
サーファクタントを、本合成ペプチドと脂質成分として
1,2-ジパルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリン、1,2-
ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホスホ-sn-グリセロール及
びパルミチン酸の３成分とを、混合して調製した。

【０１０８】〔実施例７〕無菌処理した1,2-ジパルミト
イルグリセロ-(3)- ホスホコリン６６０ｍｇ、1,2-ジア
シル-sn-グリセロ-(3)- ホスホ-sn-グリセロール（アシ
ル基の炭素数１４〜２４個：シグマ社製）２２０mg及び
パルミチン酸１００mgを常温でクロロホルム−メタノー
ル混合液〔２：１(V/V) 〕１０００mlに溶解し、ペプチ
ドＡの１２mgをＴＦＡ０．５mlに溶解した。これらの溶
液を混合し、減圧乾固した。得られた残留物を４０℃で
１５分間かけて水−エタノール混合液〔９：１(V/V) 〕
１００mlに懸濁した。この懸濁液を−５０℃で凍結させ
て真空度８５〜１００μHgで３６時間乾燥し、サーファ
クタント１０２２mgを白色粉末として得た。

【０１０９】この粉末中にはエタノールの残存は認めら
れず、サーファクタントの総重量に対する各成分の含量
は、1,2-ジパルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリンは
６４．６％(w/w) 、1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホ
スホ-sn-グリセロールは２１．５％(w/w) 、及びパルミ
チン酸は ９．８％(w/w) 、ペプチドＡは１．２％(w/
w) 及び水２．９％(w/w) であった。

【０１１０】得られたサーファクタントの各作用は次の
とおりであった。

【０１１１】表面張力低下作用： 最大表面張力； ３２．８dyne/cm 、 最小表面張力； ２．２dyne/cm 。

【０１１２】気液界面拡散作用： 到達時間； ４０秒 、平衡表面張力 ２９．８dyne/c
m 。

【０１１３】気液面吸着作用： 到達時間； ６０秒 、平衡表面張力；３１．９dyne/c
m 。

【０１１４】肺胞腔容量維持作用： 肺容量（５cm水圧）；５１ml／kg。

【０１１５】〔実施例８〕1,2-ジパルミトイルグリセロ
-(3)- ホスホコリン２０４mg、1,2-ジアシル-sn-グリセ
ロ-(3)- ホスホ-sn-グリセロール（アシル基の炭素数１
４〜２４個：シグマ社製）６３．０mg及びパルミチン酸
２７．０mgをクロロホルム−メタノール混合液〔２：１
(V/V) 〕３００ｍｌに溶解し、ペプチドＢの２．８mgを
ＴＦＡ０．３mlに溶解した。これらの溶液を混合し、減
圧乾固した。得られた残留物を４５℃で２０分間かけて
水−エタノール混合液〔９：１(V/V) 〕１００mlに懸濁
した。この懸濁液を−６０℃で凍結させて真空度６０〜
１１０μHgで４０時間乾燥し、白色粉末のサーファクタ
ントを３０１．９mg得た。

【０１１６】この粉末中にはエタノールの残存は認めら
れず、サーファクタントの総重量に対する各成分の含量
は、1,2-ジパルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリンは
６７．６％(w/w) 、1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホ
スホ-sn-グリセロールは２０．９％(w/w) 、及びパルミ
チン酸は８．９％(w/w) 、ペプチドＢは０．９％(w/w)
及び水１．７％(w/w) であった。

【０１１７】得られたサーファクタントの各作用は次の
とおりであった。

【０１１８】表面張力低下作用： 最大表面張力； ３４．５dyne/cm 、 最小表面張力； ６．７dyne/cm 。

【０１１９】気液界面拡散作用： 到達時間； ６０秒 、平衡表面張力；３１．２dyne/c
m 。

【０１２０】気液面吸着作用： 到達時間；１２０秒 、平衡表面張力；３４．７dyne/c
m 。

【０１２１】肺胞腔容量維持作用： 肺容量（５cm水圧）；４９ml／kg。

【０１２２】〔実施例９〕ペプチドＢの代わりにペプチ
ドＣを用いた以外は〔実施例８〕と同様にしてサーファ
クタントを製造した。

【０１２３】この粉末中にはエタノールの残存は認めら
れず、サーファクタントの総重量に対する各成分の含量
は、1,2-ジパルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリンは
６７．０％(w/w) 、1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホ
スホ-sn-グリセロールは２０．７％(w/w) 、及びパルミ
チン酸は ８．９％(w/w) 、ペプチドＣは０．９％(w/
w) 及び水２．５％(w/w) であった。

【０１２４】得られたサーファクタントの各作用は次の
とおりであった。

【０１２５】表面張力低下作用： 最大表面張力； ２９．７dyne/cm 、 最小表面張力； ２．３dyne/cm 。

【０１２６】気液界面拡散作用： 到達時間； ３０秒 、平衡表面張力；２７．９dyne/c
m 。

【０１２７】気液面吸着作用： 到達時間； ３０秒 、平衡表面張力；２８．１dyne/c
m 。

【０１２８】肺胞腔容量維持作用： 肺容量（５cm水圧）；５３ml／kg。

【０１２９】〔実施例１０〕ペプチドＢの代わりにペプ
チドＤを用いた以外は〔実施例８〕と同様にしてサーフ
ァクタントを製造した。

【０１３０】この粉末中にはエタノールの残存は認めら
れず、サーファクタントの総重量に対する各成分の含量
は、1,2-ジパルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリンは
６８．５％(w/w) 、1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホ
スホ-sn-グリセロールは２１．２％(w/w) 、及びパルミ
チン酸は ９．１％(w/w) 、ペプチドＤは０．９％(w/
w) 及び水０．３％(w/w) であった。

【０１３１】得られたサーファクタントの各作用は次の
とおりであった。

【０１３２】表面張力低下作用： 最大表面張力； ３０．８dyne/cm 、 最小表面張力； ５．４dyne/cm 。

【０１３３】気液界面拡散作用： 到達時間： ４５秒 、平衡表面張力；２８．３dyne/c
m 。

【０１３４】気液面吸着作用： 到達時間； ４０秒 、平衡表面張力；３０．７dyne/c
m 。

【０１３５】肺胞腔容量維持作用： 肺容量（５cm水圧）；４９ml／kg。

【０１３６】〔実施例１１〕ペプチドＢの代わりにペプ
チドＥを用いた以外は〔実施例８〕と同様にしてサーフ
ァクタントを製造した。

【０１３７】この粉末中にはエタノールの残存は認めら
れず、サーファクタントの総重量に対する各成分の含量
は、1,2-ジパルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリンは
６７．８％(w/w) 、1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホ
スホ-sn-グリセロールは２０．９％(w/w) 、及びパルミ
チン酸は ９．０％(w/w) 、ペプチドＥは０．９％(w/
w) 及び水１．４％(w/w) であった。

【０１３８】得られたサーファクタントの各作用は次の
とおりであった。

【０１３９】表面張力低下作用： 最大表面張力； ３０．３dyne/cm 、 最小表面張力； １．４dyne/cm 。

【０１４０】気液界面拡散作用： 到達時間； ６０秒 、平衡表面張力；２９．８dyne/c
m 。

【０１４１】気液面吸着作用： 到達時間； ９０秒 、平衡表面張力；３２．１dyne/c
m 。

【０１４２】肺胞腔容量維持作用： 肺容量（５cm水圧）；４７ml／kg。

【０１４３】〔実施例１２〕ペプチドＢの代わりにペプ
チドＦを用いた以外は〔実施例８〕と同様にしてサーフ
ァクタントを製造した。

【０１４４】この粉末中にはエタノールの残存は認めら
れず、サーファクタントの総重量に対する各成分の含量
は、1,2-ジパルミトイルグリセロ-(3)- ホスホコリンは
６８．５％(w/w) 、1,2-ジアシル-sn-グリセロ-(3)- ホ
スホ-sn-グリセロールは２１．１％(w/w) 、及びパルミ
チン酸は ９．１％(w/w) 、ペプチドＦは０．９％(w/
w) 及び水０．４％(w/w) であった。

【０１４５】得られたサーファクタントの各作用は次の
とおりであった。

【０１４６】表面張力低下作用： 最大表面張力； ３４．１dyne/cm 、 最小表面張力； ８．９dyne/cm 。

【０１４７】気液界面拡散作用： 到達時間； ６５秒 、平衡表面張力；３４．８dyne/c
m 。

【０１４８】気液面吸着作用： 到達時間；１１５秒 、平衡表面張力；３９．５dyne/c
m 。

【０１４９】肺胞腔容量維持作用： 肺容量（５cm水圧）；３９ml／kg。

【０１５０】

【表２】

【０１５１】本発明サーファクタントの懸濁性試験の結
果を〔表２〕に示した。

【０１５２】

【配列表】

【０１５３】配列番号：1 配列の長さ：２７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｖａｌ １ ５
１０ １５ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｌｅｕ 20 25

【０１５４】配列番号：2 配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Cys Cys Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu Ile Val Val Val Val Val 1 5 10 15 Val Leu Ile Val Val Val Ile Val Gly Ala Leu 20 25

【０１５５】配列番号：3 配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Cys Pro Val Asn Ile Lys Arg Leu Leu Ile Val Val Val Val Val Val 1 5 10 15 Leu Leu Val Val Val Ile Val Gly Ala Leu Leu 20 25

【０１５６】配列番号：4 配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Cys Cys Pro Val Asn Ile Lys Arg Leu Leu Ile Val Val Val Val Val 1 5 10 15 Val Leu Leu Val Val Val Ile Val Gly Ala Leu 20 25

【０１５７】配列番号：5 配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Cys Pro Val Asn Leu Lys Arg Leu Leu Val Val Val Val Val Val Val 1 5 10 15 Leu Val Val Val Val Ile Val Gly Ala Leu Leu 20 25

【０１５８】配列番号：6 配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Cys Cys Pro Val Asn Leu Lys Arg Leu Leu Val Val Val Val Val Val 1 5 10 15 Val Leu Val Val Val Val Ile Val Gly Ala Leu 20 25

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＤ 8314−4Ｃ 37/22 8314−4Ｃ // Ｃ０７Ｋ 99:00

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記特定配列 【化１】 で表されるペプチド。
2. 【請求項２】 特定配列のペプチド、コリンホスホグリ
   セリド、酸性リン脂質及び脂肪酸類からなる肺サーファ
   クタント。
3. 【請求項３】 特定配列のペプチド、コリンホスホグリ
   セリド、酸性リン脂質及び脂肪酸類を含有する肺サーフ
   ァクタントを、有効成分として含む呼吸窮迫症候群治療
   剤。
4. 【請求項４】 特定配列のペプチドが配列番号１〜６に
   記載のいずれかである請求項１、２又は３記載のペプチ
   ド。