JPH05286868A - 制がん剤複合体およびそのスクリーニング法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ＡＨ６６ＤＲ細胞を用いた感受性試験におけ
る制がん剤自体とのＩＣ₅₀の比が１／１．５以下である
制がん剤−薬理学的に不活性なキャリア（担体）複合体
であって、ｐ−糖タンパク質（Ｐｇｐ）に基づく多剤耐
性を有するがん細胞に有効な制がん剤−キャリア複合
体。 【効果】 ｐ−糖タンパク質のポンプ機能阻害に基づ
き、安全性が高く、しかも副作用の少ない多剤耐性がん
治療用制がん剤複合体が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、薬剤耐性を有するがん
細胞に有効な制がん剤−キャリア（担体）複合体に関
し、より詳しくは、ｐ−糖タンパク質（以下「Ｐｇｐ」
という）に基く多剤耐性を有するがん細胞に有効な制が
ん剤−キャリア複合体に関する。

【０００２】

【従来の技術】薬剤耐性は用いている制がん剤がその効
力を示さなくなる現象であり、これはがん化学療法が直
面する最大の問題である。したがって、この薬剤耐性の
問題は、制がん剤を用いた治療成績の向上のためにはぜ
ひとも解決されなければならない。

【０００３】この薬剤耐性の現象においては、更にやっ
かいな問題すなわち多剤耐性の問題がある。この多剤耐
性とは、がん細胞が例えば制がん剤の１つであるアドリ
アマイシン耐性を示すようになると、この細胞は他の多
くの制がん剤にも耐性を示す現象である。この多剤耐性
の現象はがん細胞が細胞内制がん剤濃度を低く保つよう
にする作用を有するためとされている。更に、多剤耐性
がん細胞の細胞膜には分子量１７０〜１８０ｋＤａのタ
ンパク質（Ｐ糖タンパク、以下「Ｐｇｐ」という）が過
剰に発現しており、このＰ糖タンパクが制がん剤を細胞
外に排出するポンプとしての機能を有していることが見
出されている（例えば、ＢＩＯ medica，６（５），４
４２〜４４５（１９９１））。

【０００４】このような多剤耐性を克服するために、制
がん剤のがん細胞内における滞留時間（半減期）を長く
しようとする試みが種々行われている。例えば、抗Ｐｇ
ｐモノクローナル抗体を用いてＰｇｐの機能自体をブロ
ックする方法、(Jpn.J.Cancer Res., ８０，６２７−６
３１（１９８９）；ＢＩＯ medica ６（５），４４２〜
４４５（１９９１））、あるいは他の低分子（具体的に
は、カルシウム拮抗剤であるベラパミール等）を制がん
剤と同時に多量に投与して、ベラパミールを優先的にＰ
ｇｐで排出させることにより、結果的に制がん剤の細胞
内半減期を長くする方法が行われている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら上記モノ
クローナル抗体を用いた方法においては、このような抗
体は他の動物（例えばマウス）由来の抗体であるため、
それ自体の抗原性が強く実際の臨床への使用は必ずしも
容易ではない。一方、他の低分子たるカルシウム拮抗剤
を制がん剤と同時に大量に投与する方法においては、該
カルシウム拮抗剤自体による「副作用」が無視できな
い。したがって本発明の目的は、上記問題を解決し、安
全性が高く、しかも副作用の少ない多剤耐性がんの治療
用制がん剤複合体を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意研究の
結果、従来におけるように薬理学的な活性を利用してＰ
ｇｐ（Ｐ糖タンパク質）のいわゆるポンプ機能をブロッ
クするのではなく、むしろ制がん剤の分子サイズないし
はその嵩高さ（バルキーネス）を増すことにより、高い
安全性および少ない副作用をもってＰｇｐのポンプ機能
が働き得なくなることを見出し、更に、このようなＰｇ
ｐに対する制がん剤複合体の効果は、特定の細胞を用い
ることにより、極めて効果的にスクリーニング可能なこ
とを見出した。

【０００７】本発明の多剤耐性がん治療用制がん剤複合
体は上記知見に基くものであり、より詳しくは、制がん
剤と薬理学的に不活性なキャリアとの複合体からなるこ
とを特徴とするものである。

【０００８】本発明によれば、更に、制がん剤と分子量
１万未満のキャリアとからなることを特徴とする制がん
剤複合体が提供される。本発明によれば、更に、制がん
剤とキャリアとからなる複合体であって、ＡＨ６６ＤＲ
細胞を用いた感受性試験における該複合体と前記制がん
剤自体とのＩＣ₅₀の比が１／１．５以下であることを特
徴とする制がん剤複合体が提供される。

【０００９】本発明によれば、更に、ＡＨ６６ＤＲ細胞
を制がん剤複合体の存在下にインキュベーションして、
細胞成長に対する阻害を測定することを特徴とする制が
ん剤複合体のスクリーニング方法が提供される。

【００１０】以下、必要に応じて図面を参照しつつ本発
明を詳細に説明する。 （制がん剤）本発明において、制がん剤とはがん細胞の
発育／増殖を抑制する薬剤をいう。本発明においては、
制がん剤として、公知の代謝阻止物質、ホルモン、細胞
分裂阻止物質、核酸合成阻害物質、多糖体系等の物質を
特に制限なく用いることが可能であるが、特にＰｇｐ
（Ｐ−糖タンパク質）で輸送され易い制がん剤が効果的
に用いられる。ここに「Ｐｇｐで輸送され易い制がん
剤」とは、フリーの状態（他のキャリア等が結合してい
ない状態）において、後述するＡＨ６６ＤＲ細胞を用い
た感受性試験で、そのＩＣ₅₀（５０％増殖阻害濃度）
が、親株であるＡＨ６６細胞を用いた感受性試験でのＩ
Ｃ₅₀と比較して、５倍以上（更に好ましくは１０倍以
上、特に５０倍以上）のものをいう。

【００１１】ＡＨ６６ＤＲ細胞を用いた感受性試験 ＡＨ６６ＤＲの生細胞（２×１０⁴ 個）を２４穴の培養
プレート（米国ニューヨーク州、コーニング社製）中で
所定の培地（例えば、１０％胎児牛血清（ＦＢＳ）を含
むＲＰＭＩ１６４０）を用い、種々の濃度（例えば０．
０００１〜５００μｍｏｌ／Ｌ程度）のテストすべき制
がん剤とともに３７℃で９６時間インキュベートする。
その後、生細胞数をトリパンブルー色素排除法でカウン
トし、細胞の増殖の程度を細胞の酸不溶性分画への〔³
Ｈ〕−サイミジン(thymidine) 取り込みによって算定す
る（「組織培養の技術」第２版、日本組織培養学会編、
１９８８参照）。なお、上記感受性試験は、本発明に使
用すべき制がん剤自体の「Ｐｇｐによる輸送のされ易
さ」を評価するためにのみ使用されるものであって、該
試験における条件等は本発明の範囲を何ら限定するもの
ではない。

【００１２】本発明において好ましく用いられる制がん
剤としては、より具体的には例えば、ビンクリスチン、
ビンブラスチン、ビンデシン等のビンアルカロイド系制
がん剤；アドリアマイシン、ＴＨＰ−アドリアマイシ
ン、ダウノマイシン、アクラシノマイシンＡ等のアンス
ラサイクリン系制がん剤；エトポサイト、メイタンシ
ン、タキソール、マイトマイシンＣ、アクチノマイシン
Ｄ、ミトザントロン、メノガロール、等が挙げられる。

【００１３】（キャリア）本発明において、キャリアと
は制がん作用を有さず、しかもそれ自体が薬理学的に不
活性な物質をいう。本発明に用いるキャリアは、薬理作
用の指標となるＥＤ₅₀（５０％有効量）が１μｍｏｌ／
Ｌ以上（更に好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以上）の物質
であることが好ましい。本発明のキャリアには、特定の
抗原に対する抗体におけるような特定の抗原決定基（エ
ピトープ）認識作用はない。

【００１４】本発明に用いる上記キャリアは、天然物で
あっても合成、半合成物であってもよく、また生体内の
分解性／非分解性のいずれであってもよいが、その分子
量（ポリマー等の場合は平均分子量をいう、以下同じ）
は２００以上、更には５００以上（特に１，０００以
上）であることが好ましい。このキャリアは低分子（分
子量１０，０００未満）であっても高分子（分子量１
０，０００以上）のいずれであってもよいが、制がん剤
との結合のし易さ、ないしは生体内における血中半減期
の点からは、分子量は２，０００以上、更には１０，０
００以上（特に３０，０００以上）であることが好まし
い。キャリアの分子量の上限は、生体へ投与後がん細胞
へ到達され得る程度で、且つがん細胞内への制がん剤複
合体の取り込みが大きく阻害されない程度、より具体的
には、通常、分子量が８００万以下、更には５００万以
下（特に３００万以下）が好ましい。

【００１５】本発明においては、上記キャリアとして、
製剤添加剤として一般に用いられる結合剤（バインダ
ー）、崩壊剤(disintegrating agent)、粘稠剤(viscosi
ty-increasing agent)等を用いることが可能である。よ
り具体的には、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミ
ン（ＨＳＡ）、グロブリン、免疫グロブリン、ヘモシア
ニン、フィブリノーゲン、デキストラン、ポリアミノ
酸、スターチ、ゼラチン等の天然物；無水マレイン酸−
ジビニルエーテル共重合体、スチレン−無水マレイン酸
共重合体、ポリリジン、ポリアスパラギン酸等の合成物
が挙げられる。

【００１６】（複合体）本発明において、上記制がん剤
とキャリアとは公知の結合方法で結合して複合体とする
ことが可能であり、その結合方法は特に制限されない
が、本発明においては一般にハプテンとキャリアとの結
合に用いられる方法が使用可能である。制がん剤とキャ
リアとの間に公知のスペーサーを入れてもよいが、この
場合は（スペーサー＋キャリア）の分子量として、上記
したキャリアに関する分子量の条件を満たしていること
が好ましい。また、上記した複合体は、必要に応じてＧ
ＰＣ等で精製して用いることができる。

【００１７】より具体的には、本発明においては、アシ
ル化剤（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨ
Ｓ）、Ｓ−アセチルメルカプトコハク酸無水物、等）、
マレイミド類（Ｎ−エチルマレイミド等）、アリルハロ
ゲン化物（２，４−ジニトロ−１−フルオロベンゼンの
ジハロニトロベンゼン等）、トリイソシアネート化合物
（トリレン−２，４−ジイソシアネート等）、カルボジ
イミド類（ＥＤＣ、ＤＣＣ、ＣＭＣ等）、アルキルクロ
ロホルメート、イソオキサゾリウム塩、グルタルアルデ
ヒド、ジアゾニウム塩等が挙げられる。

【００１８】本発明の複合体を構成する制がん剤とキャ
リアとのモル比は特に制限されないが、（制がん剤）／
（キャリア）＝１／１〜１００／１程度（更には３／１
〜５０／１程度）が好ましい。本発明において、複合体
の形成は（薬剤によっても異なるが）、例えば、以下の
条件のＧＰＣ（ゲルパーミューション・クロマトグラフ
ィー）により、上記量比を持つ複合体として、目的とす
る分子量の位置に溶出されることで確認できる。

【００１９】ＧＰＣ条件 カラム：セファデックスＧ−１００（スウェーデン、フ
ァルマシア社） 移動相：１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．
０） 流量：１５ｍＬ／ｈｒ 温度：４℃

【００２０】上記したように、制がん剤とキャリアとか
らなる本発明の制がん剤複合体は、以下に述べるＡＨ６
６ＤＲ細胞を用いた感受性試験（増殖阻害抑制試験）に
おいて、（複合体のＩＣ₅₀）／（制がん剤自体のＩ
Ｃ₅₀）が１／１．５以下、更には１／１０以下（特に１
／５０以下）であることが好ましい。

【００２１】（ＡＨ６６ＤＲ細胞）本発明の複合体のス
クリーニングに好適に用いられるＡＨ６６ＤＲ細胞はＤ
ＮＲ（ダウノルビシン（ダウノマイシン化学名））耐性
の細胞であり、アゾ色素により誘起樹立されたラット腹
水肝癌細胞ＡＨ６６（Ｇａｎｎ、４７、６１２−６１
５，１９５６）から以下のようにして得られる。上記Ａ
Ｈ６６細胞（１０⁵個）を２ヶ月以上連続してＤＮＲ
（２μｇ／ｍｌ）にさらし、得られた２ないし３倍のＤ
ＮＲ耐性を有するＡＨ６６細胞を更にin vitroで徐々に
ＤＮＲの濃度を上昇させつつ（２μｇ／ｍｌから３週間
ごとに上昇させる）最終ＤＮＲ濃度が７５μｇ／ｍｌに
なるまで続ける。得られた細胞を更に３ケ月６０μｇ／
ｍｌのＤＮＲの存在下に培養して、ＡＨ６６ＤＲ細胞を
得る。上記ＡＨ６６細胞およびこのＡＨ６６ＤＲ細胞
は、例えばＲＰＭＩ１６４０培地（日水製薬製）中で維
持することが可能である。

【００２２】（ＡＨ６６ＤＲ細胞を用いた複合体スクリ
ーニング）ＡＨ６６ＤＲを用いた制がん剤複合体スクリ
ーニングは、例えば以下のようにして好適に実施可能で
ある。ＡＨ６６ＤＲの生細胞（２×１０⁴ 個）を、２４
穴の培養プレート（米国ニューヨーク州、コーニング社
製）中で所定の培地（例えば、１０％ＦＢＳを含むＲＰ
ＭＩ１６４０）を用い、種々の濃度（例えば０．０００
１〜１００μｍｏｌ／Ｌ程度）のテストすべき制がん剤
又は制がん剤複合体とともに、それぞれ３７℃で９６時
間インキュベートする。その後、生細胞数をトリパンブ
ルー色素排除法でカウントし、細胞の増殖の程度を細胞
の酸不溶性分画への〔³Ｈ〕−サイミジン(thymidine)
取り込みによって算定する。

【００２３】本発明の制がん剤複合体は、必要に応じ、
その使用量を、該複合体を構成する制がん剤そのものの
使用量（投与量）に換算して用いる以外は、上記制がん
剤そのものの投与法及び投与量と同様にして用いること
が可能である。したがって、本発明の制がん剤複合体を
投与する際は、基本的には、その基礎となる制がん剤の
投与法及び投与量に準じて人間又は動物に投与される。
投与量は投与対象、症状、投与方法などにより異なる
が、一般には、人または動物に対して例えば０．２〜
０．６ｍｇ／ｋｇ／日（制がん剤に換算して）の範囲内
で投与すればよい。

【００２４】なお、本発明者らの知見によれば、本発明
の複合体は、その徐放性の性状等に起因する制がん剤の
毒性（ＬＤ₅₀）低下に基づき、フリーのものと比べ、少
なくとも２倍以上、１０倍以下程度（好ましくは５倍以
下程度）の大量投与が可能である。

【００２５】

【実施例】以下、実施例により本発明を更に具体的に説
明する。以下において統計処理はすべてStudent's t 検
定を用いて行った。

【００２６】実施例１ （ＤＸＲとタンパク質の複合体の調製）ＤＸＲ（doxoru
bicin（アドリアマイシン化学名）、東京Farmitalia−C
arlo Erba社）とキャリアたるタンパク質との結合は、H
urwitz らの方法（Cancer Res.,35,1175-1181(1975)）
に準じて行った。

【００２７】すなわち、３ｍｇの市販ＢＳＡ（ウシ血清
アルブミン、米国 Sigma社）又は市販ヤギ・イムノグロ
ブリンＧ（ＩｇＧ 米国 Sigma社）および０．５ｍｇの
ＤＸＲ（未標識のもの／および¹⁴Ｃ標識のもの）を、１
ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水中で、グルタルアルデヒド
溶液（濃度０．１％）で架橋させた。フリーおよび結合
のＤＸＲは、セファデックスＧ−１００（スウェーデ
ン、ファルマシア社）を用いたゲル濾過により分離し
た。

【００２８】置換の程度は、ＤＸＲの吸収（２８０ｎｍ
及び４９５ｎｍ）を用いて評価した。また、タンパク質
濃度は、市販のタンパク質アッセイ・キット（米国 Bio
-Rad社）を用いて測定した。比較のため、ＤＸＲを用い
なかった以外は上記と同様にして、ＢＳＡ−グルタルア
ルデヒドの結合体をも調製した。

【００２９】実施例２ （薬剤感受性）ＡＨ６６細胞およびＡＨ６６ＤＲ細胞
（２×１０⁴ 個）それぞれを、種々の濃度（０．０１〜
２００μｍｏｌ／Ｌ）のＤＸＲ存在下で培地（１０％Ｆ
ＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０）中で３７℃、９６時間培
養した。培養終了後、生細胞数は生細胞には取り込まれ
ずに死細胞のみ染色されるトリパン・ブルー色素排除法
を用いて測定した。

【００３０】実施例３ （細胞増殖）ＡＨ６６ＤＲの生細胞（２×１０⁴ 個）を
２４穴の培養プレート（米国ニューヨーク州、コーニン
グ社製）中、所定の培地（例えば１０％ＦＢＳを含むＲ
ＰＭＩ１６４０）とともに、種々の濃度（例えば０．０
１〜２μｍｏｌ／Ｌ程度）のテストすべき制がん剤とと
もに３７℃で９６時間インキュベートした。その後、生
細胞数をトリパン・ブルー色素排除法でカウントし、細
胞の増殖の程度を、細胞の酸不溶性分画（ＤＮＡ分画）
への〔³Ｈ〕−サイミジン（thymidine、比活性２０Ｃｉ
／ｍｏｌ、アメルシャム・ジャパン社）取り込みの方法
によって算定した。

【００３１】実施例４ （ＤＸＲおよびＤＸＲ複合体の取り込み）２４穴のマイ
クロプレート上で、ＡＨ６６ＤＲ細胞（１×１０⁵ 個）
を１μｍｏｌ／Ｌの〔¹⁴Ｃ〕−ＤＸＲ（比活性３５ｍＣ
ｉ／ｍｍｏｌ、アメルシャム・ジャパン社）又は実施例
１で得た〔¹⁴Ｃ〕−ＤＸＲ−ＢＳＡ複合体とともに、３
７℃でインキュベートした。種々の時間のインキュベー
ションの後に、上記マイクロプレートを氷冷した０．１
５ｍｏｌ／Ｌの生理食塩水でよく洗浄してインキュベー
ションを終了させた後、細胞内に取り込まれた薬物の量
（放射性）を、液体シンチレーションカウンタ（ＬＳ６
０００ＩＣ、米国ベックマン社製）を用いて測定した。

【００３２】実施例５ （ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタン・ブロッティン
グ）細胞抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動）試料用の緩衝液で希釈した後、ＳＤＳ
−ＰＡＧＥ（７．５％分離ゲル）を用いて分画し、Towb
inらの方法（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,76,4350-
4354(1979)）に従ってニトロセルロース紙上に electro
transferした。得られたニトロセルロースを、抗Ｐｇｐ
（Ｐ糖タンパク）モノクローナル抗体（Ｃ２１９，米国
Centocor社）と４℃で１７時間インキュベートした
後、西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ
（Bio-Rad 社) と反応させた。３，３’−ジアミノベン
チジン（Bio-Rad 社) とインキュベートすることによ
り、着色させ酵素活性を検出した。

【００３３】結果 （ＡＨ６６ＤＲのＤＸＲ感受性）ＤＸＲに９６時間連続
接触させた培養系においては、ＤＸＲのＡＨ６６ＤＲ細
胞に対するＩＣ₅₀（５０％阻害濃度）は１６μｍｏｌ／
Ｌであった。一方、親細胞たるＡＨ６６細胞において該
ＩＣ₅₀は０．０８μｍｏｌ／Ｌであった（図１参照）。

【００３４】また、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後のウエスタン・
ブロッティング（図２）において、Ｐｇｐは、ＡＨ６６
ＤＲ細胞からの抽出物中にのみ検出された。

【００３５】（タンパク質と制がん剤との複合体）種々
に濃度を変化させた結果、ＢＳＡ又はＩｇＧ１モルに対
して、制がん剤が３〜５モル結合したものが得られた。
上記実施例中ではこの複合体を用いた。

【００３６】（ＡＨ６６ＤＲ細胞に対するＤＸＲ−タン
パク質複合体の細胞毒性効果）上記したＢＳＡ又はＩｇ
ＧとＤＸＲとの複合体の抗がん性細胞毒効果は、図３に
示した。

【００３７】図３においては、ＤＸＲ自体又は、ＢＳＡ
−グルタルアルデヒド結合体との比較により、本発明の
ＢＳＡ−ＤＸＲ複合体およびＩｇＧ−ＤＸＲ複合体の見
かけ及び潜在的な増殖阻害効果をドーズ（横軸）に対し
て示してある。図３から明らかなように、ＡＨ６６ＤＲ
細胞に対する本発明のＢＳＡ−ＤＸＲ又はＩｇＧ−ＤＸ
Ｒ複合体のＩＣ₅₀は、それぞれ、（ＤＸＲ濃度に換算し
て）０．０５μｍｏｌ／Ｌおよび０．０７μｍｏｌ／Ｌ
であった。

【００３８】これらの複合体の多剤耐性ＡＨ６６ＤＲに
対する増殖阻害効果（ＩＣ₅₀）は、ＤＸＲ自体の（多剤
耐性を有しない）ＡＨ６６に対するＩＣ₅₀（０．０８μ
ｍｏｌ／Ｌ）にほぼ等しかった。また、サイミジン取り
込みにより算定した増殖阻害効果も、ほぼ上記した生細
胞数カウントによるアッセイの結果に対応するものであ
った。

【００３９】（薬物の細胞内への取り込みおよび蓄積）
ＡＨ６６およびＡＨ６６ＤＲにおける時間の関数として
の薬物濃度を、１μｍｏｌ／Ｌの〔¹⁴Ｃ〕−ＤＸＲと、
ＤＸＲ濃度に換算して１μｍｏｌ／ＬのＢＳＡ〔¹⁴Ｃ〕
−ＤＸＲ複合体について評価した。結果を図４に示す。
１時間以内のＤＸＲ処理では、細胞内薬物濃度は、ＡＨ
６６（感受性細胞）においては、ＡＨ６６ＤＲ（耐性細
胞）に比べてほぼ２倍（有意差Ｐ＜０．０５）であり、
この有意差はそれ以後も続いた。

【００４０】これに対して、耐性のＡＨ６６ＤＲを上記
ＤＸＲと等価となるような投与量で、本発明のＢＳＡ−
ＤＸＲ複合体によって処理したところ、１時間の処理後
では、薬物の蓄積は比較的小さかった。しかしながら、
図４に示すように、この後ＡＨ６６ＤＲへのＢＳＡ−Ｄ
ＸＲ取り込みは徐々に増大し、処理２４時間後では感受
性のＡＨ６６に対するＤＸＲ（等価濃度）とほぼ同等の
レベルに達した。

【００４１】上述したように、本発明の制がん剤複合体
（ＢＳＡ−ＤＸＲ又はＩｇＧ−ＤＸＲ）はＤＸＲに耐性
のＡＨ６６ＤＲ細胞に対して極めて効果的に作用し、し
かも長時間（２４時間以降）では、感受性のＡＨ６６細
胞に対するＤＸＲ自体とほぼ同様に取り込まれることが
判明した。

【００４２】すなわち、本発明の制がん剤−キャリア複
合体は、Ｐｇｐ（Ｐ−糖タンパク質）を実質的に有しな
いがん細胞（感受性細胞）に対する制がん剤自体の場合
と同様に、Ｐｇｐを有する多剤耐性がん細胞に対して制
がん効果を発揮することが確認された。

【００４３】

【発明の効果】上述したように本発明によれば、薬理活
性が実質的にないキャリアと制がん剤とからなり、多剤
耐性がん細胞に対しても効果的に作用する制がん剤複合
体が提供される。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＤＸＲに９６時間連続接触させた後の感受性の
ＡＨ６６細胞（親株）と、耐性株のＡＨ６６ＤＲ細胞に
おける生細胞数を示すグラフである。

【図２】ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後のＰｇｐのウエスタンブロ
ッティング結果を示す写真である。

【図３】耐性株のＡＨ６６ＤＲ細胞において、フリーの
ＤＸＲと、ＤＸＲ−ＢＳＡ又はＤＸＲ−ＩｇＧ複合体と
の制がん効果の比較を示すグラフである。

【図４】ＡＨ６６細胞（親株）及びＡＨ６６ＤＲ細胞
（耐性株）におけるフリーのＤＸＲの経時的な取り込み
量の比較、及びＡＨ６６ＤＲ細胞におけるＢＳＡ−ＤＸ
Ｒの取り込み量の経時的変化を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 日比 望 東京都八王子市小宮町51 エスアールエル 八王子ラボラトリー内

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 制がん剤と薬理学的に不活性なキャリア
   との複合体からなることを特徴とする多剤耐性がんの治
   療用制がん剤複合体。
2. 【請求項２】 制がん剤と分子量１万未満のキャリアと
   からなることを特徴とする制がん剤複合体。
3. 【請求項３】 制がん剤とキャリアとからなる複合体で
   あって、ＡＨ６６ＤＲ細胞を用いた感受性試験における
   該複合体と前記制がん剤自体とのＩＣ₅₀の比が１／１．
   ５以下であることを特徴とする制がん剤複合体。
4. 【請求項４】 前記キャリアがヒト血清アルブミン（Ｈ
   ＳＡ）である請求項１又は３記載の複合体。
5. 【請求項５】 ＡＨ６６ＤＲ細胞を制がん剤複合体の存
   在下にインキュベーションして、細胞成長に対する阻害
   を測定することを特徴とする制がん剤複合体のスクリー
   ニング方法。