JPH05139957A - ホスフアチジルセリンを構成成分とする脂肪乳剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ホスファチジルセリンを５〜１００重量％含
むリン脂質を用いて薬剤キャリアーとしての脂肪乳剤を
調製する。 【効果】 肺臓に集積しやすく、保存安定性に優れた脂
肪乳剤が得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、医薬分野で利用される
素材を提供するものであり、さらに詳しくは薬剤キャリ
アーとしての脂肪乳剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】薬剤を生体内に投与する方法としては、
従来、薬剤そのものを直接に摂取させあるいは投与する
方法のほかに、各種のコーティング剤や混合剤で薬剤を
包含し投与する方法が採用されてきた。殊に後者の場合
は、必要な患部へ薬剤を集中的に投与し、同時に他の健
常部位への副作用を軽減するねらいから、ドラッグ・デ
リバリー・システム（ＤＤＳ）として種々の素材および
剤型が開発され、ターゲティング療法として活用されて
きた。

【０００３】脂肪乳剤は、かかるＤＤＳのキャリアー剤
の形態のひとつであり、とくに脂溶性薬剤の効果的な投
与方法として開発され、静注用脂肪乳剤の脂肪微粒子で
あるリピッドマイクロスフェアを薬剤キャリアーとして
利用したリポ化製剤などとして利用されている。

【０００４】現在、一般的に使用されているリポ化製剤
は、大豆油に目的とする薬剤を溶解させ、これに乳化剤
としての卵黄レシチンを加えて乳化させたもので、水相
に脂肪微粒子が約２００nmの粒径で均一に分散している
水中油滴（ｏ／ｗ）型エマルションの乳化状態をとって
いる。ちなみに、卵黄レシチンは卵黄から精製されるリ
ン脂質であり、その一般組成はホスファチジルコリン６
８〜７３％、ホスファチジルエタノールアミン１３〜１
８％、リゾホスファチジルコリン３〜６％、リゾホスフ
ァチジルエタノールアミン２〜３％、ホスファチジルイ
ノシトール１％である（檜垣勇三、「フレグランスジャ
ーナル」第６０巻、第８１〜８４ページ、１９８３年、
フレグランスジャーナル社）。

【０００５】そして、かかるリポ化製剤の利用効果とし
ては、例えば平均粒子径が２００nmの脂肪微粒子をプロ
スタグランジンＥ１、ステロイド、非ステロイド性抗炎
症剤などの低分子薬剤のキャリヤーとして用いたリポ化
製剤が治療効果をあげているとの報告がある。また、こ
れらのリポ化製剤は、動脈硬化部、血管障害部、網内
系、骨髄、炎症部に集積する性質を持っていると言われ
る（五十嵐理慧、中川美弥子、水島裕、「炎症」第８巻
（３）、第２４３〜３４６ページ、１９８８年、日本炎
症学会）。

【０００６】しかしながら、かかるリポ化製剤ひいては
脂肪乳剤は、その本来の重要な機能である臓器組織ある
いは患部への集積性とその構成成分であるリン脂質の分
子種との相関性で検討された知見はほとんどなく、この
ため、現行のリポ化製剤をはじめとする脂肪乳剤では、
必要な臓器組織への薬剤投与効率が低い。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】かかる現状に鑑み、本
発明者らは、脂肪乳剤およびリポ化製剤を構成するリン
脂質の分子種すなわち成分のちがいによる生体臓器・組
織への集積性を検討し、とくに肺臓に集積しやすいリン
脂質の分子種からなる脂肪乳剤を提供することを目的に
鋭意研究した結果、本発明を完成するに至った。

【０００８】

【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、ホ
スファチジルセリンが全リン脂質の５〜１００重量％を
占めるリン脂質からなることを特徴とする、肺臓に集積
しやすい薬剤キャリアーとしての脂肪乳剤に関する。

【０００９】本発明でいうホスファチジルセリンとは、
アシルグリセロホスファチジルセリンと総称される範疇
に属するものをいい、分子中の極性基としてセリンをも
つリン脂質の１種であり、植物や動物等天然より得られ
るもの、酵素によりアシル基や塩基部分を交換させたも
の、さらに水素添加させたもの、化学合成により得られ
たものでも何ら制限を受けることなく使用できるが、天
然物由来のホスファチジルセリンやホスファチジルコリ
ン等にホスホリパーゼＤの塩基交換活性を利用してセリ
ンを導入したホスファジルセリンが入手しやすい。

【００１０】天然物由来のホスファチジルセリンは、通
常、主として動植物あるいは微生物等の細胞膜の構成成
分として存在するので、かかる細胞組織を常法によりホ
モジナイズして、分別、抽出等の方法で脂質成分を得、
さらにこれをアセトンなどの溶剤、シリカゲルなどの吸
着剤、超臨界条件下の液化ガス等で処理すれば混合リン
脂質の状態を経て、本発明で用いる程度の純度にまで濃
縮・精製することができる。また、ホスファチジルセリ
ンのアシル基部分は水素添加や、ホスホリパーゼを用い
た交換反応でアシル基の種類を変えることができる。ホ
スファチジルセリンは広く生物界に分布するが量的には
多くない。このため、ホスホリパーゼＤの塩基交換活性
を利用してセリンを導入したホファチジルセリンや、化
学合成によって調製されたホスファチジルセリンがむし
ろ入手しやすい。これらのホスファチジルセリンも同様
の手法で濃縮・精製することができる。天然物由来のホ
スファチジルセリンや合成材料としてのリン脂質は、大
豆、菜種、亜麻仁などの植物や卵黄、牛脳などの動物由
来または微生物から入手できる。

【００１１】本発明のホスファチジルセリンの純度は、
リン脂質のうち５〜１００重量％を占めることが必要で
ある。５重量％未満のホスファチジルセリンを含むリン
脂質で脂肪乳剤を調製すると、肺臓との親和性が減少
し、結果として本発明の目的とする肺臓への集積性が低
下する。

【００１２】本発明では、かかる純度のホスファチジル
セリンを含有するリン脂質を用いて、常法により脂肪乳
剤を調製すればよい。例えば、脂肪乳剤全体の約１０重
量％の大豆油、約１．２重量％のリン脂質を蒸留水とと
もにホモジナイザーで予備乳化させ、ついでフレンチプ
レス等で処理すると脂肪乳剤が得られる。必要に応じて
他の成分を添加してもよい。この脂肪乳剤の保存安定性
は４℃および４０℃に保存後、その粒子サイズを測定
し、また偏光顕微鏡下で観察することにより測定するこ
とができる。また、本発明の脂肪乳剤の臓器への分布、
癌細胞への取り込み状態は、例えば¹⁴Ｃをラベル化した
トリオレインを大豆油に混合し、これを上述の方法で脂
肪乳剤とし、これをin vitroの場合は癌細胞とともに培
養し、あるいはin vivo の場合は癌細胞を保有する実験
動物に対して静脈注射して経時的に臓器を摘出し、各臓
器に取り込まれた脂肪乳剤量をシンチレーションカウン
ター等で放射活性を測定することにより求めることがで
きる。

【００１３】

【実施例】

実施例１ 〔リン脂質の調製〕ホスホリパーゼＤにより卵黄レシチ
ンから塩基交換反応で得たホスファチジルセリンをシリ
カゲルカラムで精製し、溶出液を留去したところ、ホス
ファチジルセリン純度９６％純度の分画物が得られた。

【００１４】〔脂肪乳剤の調製〕大豆油１ｇとレシチン
１２０mgとをホモジナイザーで１２０００rpm.１５分間
攪拌したのち、グリセリン２５０mgと蒸留水９mlを加
え、さらにホモジナイザーで２００００rpm.２０分間攪
拌し予備乳化させる。予備乳化液をフレンチプレス（ア
ミンコ社製）で６３８psi.５回処理して脂肪乳剤を得
た。レシチン成分として卵黄レシチンを用いたものを対
照に、ホスファチジルセリン（卵黄由来９６％純度）を
用いたものをサンプルとして用いた。分布測定用の脂肪
乳剤は¹⁴Ｃをラベル化したトリオレイン（デュポン社
製）５０μCiを大豆油に混合して調製した。

【００１５】得られた脂肪乳剤の粒径をコールターＮ４
カウンター（日科機社製）で測定したところ対照の脂肪
乳剤が２０１±３３nm、ホスファチジルセリンによる脂
肪乳剤が１８８±３２nmであった。この脂肪乳剤を４℃
６カ月、室温６か月および４０℃１か月間以上保存後、
粒径測定と乳化状態を肉視ならびに偏光顕微鏡下で観察
したが変化は認められず、良好な乳化状態を保ってい
た。

【００１６】〔in vitroでの癌細胞への取り込み〕ホス
ファチジセリンを用いた脂肪乳剤、対照の脂肪乳剤およ
び¹⁴Ｃをラベル化したトリオレイン０．１μCiを癌細胞
１０⁶ 個／mlと混合、３７℃・４時間インキュベート後
洗浄し、ソルエン３５０（パッカード社製）で可溶化
し、ハイオニックフロー（パッカード社製）を加えて、
シンチレーションカウンターを用いて放射活性として癌
細胞に取り込まれた脂肪乳剤量を測定した。

【００１７】その結果、表１に示すようにホスファチジ
ルセリンを用いた脂肪乳剤は対照の脂肪乳剤より約１．
７倍量癌細胞に取り込まれていた。

【００１８】

【表１】

【００１９】実施例２ 〔in vivo での臓器分布の測定〕マウス尾静脈より実施
例１で調製した各脂肪乳剤を２００μl （１μCi）ずつ
投与したのち、正確に１５分、３０分、１時間、２時
間、４時間および２４時間後に頸部動静脈より脱血死さ
せ、直ちに腹部を開き、生理食塩水を心臓より灌流さ
せ、各臓器を摘出した。ソルエン３５０（パッカード社
製）で可溶化、過酸化水素水で脱色させたのち、ハイオ
ニックフロー（パッカード社製）を加えてシンチレーシ
ョンカウンターを用いて放射活性として各臓器に取り込
まれた脂肪乳剤量を測定した。

【００２０】その結果、図１に示すようにホスファチジ
ルセリンを用いた脂肪乳剤は対照の脂肪乳剤より約５倍
量肺臓に集積した。

【００２１】

【発明の効果】本発明によれば、肺臓に選択的により多
く集積する脂肪乳剤が提供できる。さらに本発明により
製造された脂肪乳剤は、冷所あるいは室温で保存可能で
あり、使用時に注射用蒸留水、注射用生理食塩水、ある
いは注射用輸液等で分散して用いることができる。ま
た、粒子径も静脈投与する注射剤として何ら問題のない
大きさであり、従って静脈内投与注射剤としての条件を
十分に満足している。

【００２２】本脂肪乳剤を用いれば、肺疾患の薬剤や肺
臓における抗悪性腫瘍剤、鎮咳去痰剤等の薬剤のリポ化
製剤としての作用を期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はマウスに本発明の組成物および対照組成
物を静脈内投与した場合の経時的な肺臓組織への組成物
の分布を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 辻 宏明 東京都世田谷区八幡山３丁目14番９号 (72)発明者 渡辺 洋一 神奈川県横浜市磯子区磯子６丁目35番22号

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ホスファチジルセリンが全リン脂質の５
   〜１００重量％を占めるリン脂質からなることを特徴と
   する、肺臓に集中しやすい薬剤キャリヤーとしての脂肪
   乳剤。
2. 【請求項２】 リン脂質が大豆、菜種又は亜麻仁等植物
   由来のリン脂質である請求項１記載の脂肪乳剤。
3. 【請求項３】 リン脂質が卵黄、牛脳等動物由来のリン
   脂質である請求項１記載の脂肪乳剤。
4. 【請求項４】 リン脂質が水素添加、酵素による交換反
   応または化学合成により調製されたリン脂質である請求
   項１、２及び３記載の脂肪乳剤。