JPH04500526A - ザ・ソーク・インスチュート・フォー・バイオロジカル・スタディーズ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＧＲＦ類似体　ＶＩ　ＩＡ 本発明はヒトや他の動物の下垂体の機能に影響を及ぼすペプチドに関する。特に 、本発明は下垂体からの成長ホルモン（ＧＨ）の分泌を促進するペプチドに関す る。

長い間、生理学者らは視床下部で産生される特殊な物質が下垂体ホルモンの分泌 を刺激または抑制して下垂体線部の分泌機能を調節していることを認めてきた。

視床下部の抑制性因子は１９７２年にＧＨの分泌を抑制するソマトスタチン（ｓ ｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ　）として同定された。１９８２年には、ヒト膵臓（腫 瘍）ＧＨ放出因子（ｈｐＧＲＦ）がヒトの膵臓腫瘍の抽出物から単離さオζ精製 、同定、合成および試験が行われ、下垂体からのＧＨの分泌を促進することが判 明した。

これらの下垂体因子はともに全合成により再生産され、天然構造の類似体が合成 されていた。ヒト視床下部ＧＨ放出因子は完全に同一の構造を有しているため、 以下これをｈＧＲＦという。

発明の概要 培養下垂体細胞からＧＨを分泌させる合成ペプチドが現在合成され試験されてい るが、これは生体内での酵素による分解を受けにくく実質的効力が極めて高いも のである。このような長所を有しているのは、ペプチドが安定性の高いα−らせ ん形をしているためであると考えられる。これらのペプチドは、その５．１７． ２３．２６および２７位の残基の少な（とも１つのα−炭素原子上にメチル基が 置換されている（ＣａＭｅ）のが好ましい。より好ましいのは、これらの残基の 複数がメチル基で置換されているペプチドである。α炭素がメチル基で置換され ているＡｌａは、ＣＭＡまたはＡｉｂ　（アミノ−インブチル酸つと表記する。

また、α炭素がメチル基で置換されているＬｅｕは、ＣＭＬと表記する。

さらにペプチドは、天然ホルモンに見られるような上記以外のさまざまな残基の 置換基を有していてもよい。例えば、２位がＤ−Ａｌａ、ＮａＣＮａＣ１−１３ −Ｄ−Ａｌａ（Ｄ−ＮまたはＮＭＡで置換されていてもよい。また、２７位のＭ ｅｔの代わりにＣａＭｅＬｅｕ（ＣＭＬ　）またはＮＩｅを有しているのが好ま しい。しかし、Ｄ−ＭｅｔまたはＮｖａまたはその他の残基を存在させてもよい 。ペプチドは、さらに１位の次の残基を有していてもよい：　Ｔｙ　ｒ、　Ｄ− Ｔｙ　ｒ、　Ｍｅ　ｔ、Ｐｂｅ。

Ｄ−Ｐｈｅ、ｐｃｌ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、ＨｉｓおよびＤＨｉｓ　これらの残基は 、αアミノ基上またはαアミノ基中にメチル基を有して℃・てもよいｔ５、ある いは、αアミノ基がなくてもよい（ｄｅｓアミノ）。また、この残基のαアミノ 基はアシル化、好ましくはアセチル（Ａｃ　）またはホルミル（Ｆｏｒ）化され ていてもよい。このペプチドは、当業者に知られている置換基を有していてもよ い。例えば、３位にＤ−Ａｓｐおよび、／または１２位にＡｒｇおよび／または １０位にＰｈｅまたは■）−Ｔｙｒおよび／または１５位にＡｌａおよび／また は２８位にＡｓｎを有していてもよい。

本発明による医薬組成物は、薬学的にまたは獣医学的に受容される液体または固 体のキャリアーに分散された、長さ約２９から４４残基の上記の類似体またはそ れらのいずれかの無毒性塩を含有する。これらの医薬組成物はヒトおよび動物の 臨床医学の分野において使用され、治療または診断目的のために投与される。

さらにまたこれらの医薬組成物は鳥禽を含む温血動物の成長を促進するのに用い ペプチドを定義するために用いる命名法はシュレーダー（５ｃｈｒｏｄｅｒ　） 　およびリュブケ（Ｌｕｂｋｅ）の６ザ・ペプチドアカデミツクプレス（１９６ ５）に明記されるものであり、その際慣用的懺示に従ってＮ末端のアミノ基は左 に、セしてＣ末端のカルボキシル基は右に表わされる。天然アミノ酸とは、ＧＩ ｙ、Ａｌａ、ＶａＩ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓ ｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ。

Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、ＰｈｅＳＴｙｒ、Ｐｒｏ、ＴｒｐおよびＨｉｓからな るタンパク質中に見出される普通の自然界に存在するアミノ酸のうちの１種を意 味する。

Ｎｌｅはノルロイシンを意味し、Ｎｖａはノルバリンを意味する。アミノ酸残基 が異性体を有する場合は、特に指定しなし・限り、表示されるアミノ酸のＬ体を 意味する。Ｄ−ＮＭＡはα−アミノ基がメチル置換されたアラニンｆ７）Ｄ−異 性体を意味する。

本発明は概して次のアミノ酸配列（Ｉ）を有する合成ペプチドを提供する。

（Ｂ）　ＲＩ−Ｒ４−Ｒ４−ｋ　Ｉ　ａ　−（Ｑｌ　）　Ｒ５−Ｐ　ｈ　ｅ−Ｔ ｈ　ｒ　−ＲＨ−Ｓ　ｅ　ｒ　−（Ｑｔ　）Ｒｌｔ−Ａｒ　ｇ−Ｒｌｔ−（Ｑｓ ）　Ｒ４ＯＬｅ　ｕ　−ＲＨ−Ｇ　Ｉ　ｎ　−（Ｇ４　）　−Ｌｅ　ｕ−ＲＩｇ −（ＱＢ）Ａ　Ｉ　ａＡｒ　ｇ−Ｒ，、−（Ｑｓ　）　Ｒｎ−（Ｑｔ　）　Ｌｅ 　ｕ　−Ｒｂ　−Ｒｔｓ−（Ｑｉ）Ｒｍ−（Ｑｔ）Ｒｘｔ−ＲＨ−Ａｒ　ｇ−Ｇ ｌ　ｎ　−Ｇｌ　ｎ　−Ｇｌ　ｙ　−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ｒ３４−Ａｓ　ｎ−Ｇ１　ｎ −Ｇ１　ｕ　−ＲＢ１−Ｒ２Ｏ−Ｒ４，−Ａｒ　ｇ−Ｒ４！−Ｒ４＄−Ｒ４４（ 上式において、Ｒ８はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、ＰｈｅＳＤ−Ｐｈｅ、ｐＣ ｌ−Ｐｈｅ％Ｌｅｕ、ＨｉｓまたはＤ−Ｈｉｓ；ＢはＨｌＣａＭｅ、Ｎ”Ｍｅ、 ｄｅｓａｍｉｎｏ、ＡｅまたはＦｏｒ；Ｒ２はＡｌａ、Ｄ−Ａｌ　ａ。

ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡ；Ｒ，はＡｓｐまたはＤ−Ａｓｐ　；　Ｒ１はＩｌｅま たはＬｅｕ；ＲｓはＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ％Ａｒｇ１ＡｓｐまたはＧ　ｌ　ｕ 　：　ＲｌｔはＴｙｒ。

Ｄ−ＴｙｒまたはＰ　ｈ　ｅ　：　ＲＩｔはＡｒｇまたはＬｙｓ；Ｒ，、はＩ　 Ｉ　ｅ、　Ｖａ　Ｉ、　ＬｅｕまたはＡｌａ；Ｒ，、はＧｉｙまたはＡ　Ｉ　ａ 　：　ＲｌｔはＳｅｒまたは’Ｊ”ｙｒ；Ｒ，、はＬｙｓｌＤ−Ｌｙｓ、Ａｒｇ またはＤ　−Ａ　ｒ　ｇ　：　ＲｎはＬｅｕ、　Ｉ　ｌ　ｅ、　Ａｌ　ａまたは Ｖａｌ；ＲｓｇはＧｌｎまたはＨｉ　Ｓ　；　Ｒ４ＯはＡｓｐまたはＱ　１　ｕ 　；　Ｒ４ＯはＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ，、はＭｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎ ｌｅ、ＩＩｅ％Ｌｅｕ、ＮｖａまたはＶａ　１　；ＲｔａはＡｓｎまたはＳｅｒ ；Ｒ３４はＳｅｒまたはＡ　ｒ　ｇ　＋　ＲｓａはＡｒｇまたはＱｌｎ；Ｒｎは ＧｕｙまたはＡ　ｒ　ｇ　：　ＲａｏはＡｌａまたはＳｅｒ；ＲｕはＰｈｅ。

ＡｌａまたはＶａ　ｌ　：　Ｒ４３はＡｓｎまたはＡｒｇ；Ｒ４４は天然アミノ 酸：　Ｑｌ　−Ｑ−はそれぞれＩ］またはＣ”Ｍｅである；ただし、Ｒ，−Ｒ４ ４の残基のすべて、またはその一部の配列はＣ末端で始まる配列から削除され工 いてもよい；また、ＱｌｓＱ４、Ｇ６、Ｇ８およびＱ、の５ち１以上はＣａＭｅ である。）好ましい実施態様の１つでは、Ｒ，はｉ　ｌ　ｅ、　ＲｌｔはＳｅｒ 、Ｒｈ４はＧｌ　ｎ、　Ｒ，ｔｓはＡｓｐ、Ｒ４６はＩｌｅ。

Ｒ，は５ｅｒ、ＲＢはＡｒｇ、ｌ（、、はｅ＋ｙおよびＲ４ＯはＡｌａである。

ペプチドが４４位までのびているときは、Ｒ，はＬｅｕまたはＶａｌであるのが 好ましい。

他の好適な実施態様では、ペプチドは下記の配列を有する：（Ｂ）　Ｒ１−Ｒ１ −ＲＨ−Ａｌ　ａ　−（ＱＨ）　Ｉ　Ｉ　ｅ　−Ｐ　ｈ　ｅ−Ｔｈ　ｒ−Ｒ４− ８ｅ　ｒ　−（Ｑり　Ｒｈ。

−Ａｒ　ｇ−４’ＬＩ！−（Ｑｓ）ＲＩ５−Ｌｅ　ｕ　−ＲＩ５−Ｇｌ　ｎ　− （Ｇ４　）Ｌｅ　ｕ　−Ｓｅ　ｒ　−（Ｑｔ　）Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｒ，、−（Ｑ ｅ）Ｒｕ−（Ｑｔ）Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−（Ｑａ）Ｉｌｅ−（ＱＪＲｔｔ− Ｒ，−Ａｒｇ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇ ｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｒ４Ｏ−Ｒ４Ｏ−Ｒ４４（上式におい て、Ｒ３はＴｙｒ、　Ｄ−Ｔｙｒ。

Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、ｐＣｌ−Ｐｈｅ、ＬｅｕｌＨｉｓまたはＤ　−Ｈ ｒ　ｓ　：　ＢはＨ１Ｃ３Ｍｅ、ＮａＭｅ、ｄｅｓアミノ、ＡｃまたはＦｏｒ； Ｒ，はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡ；Ｒ，はＡ、ｓｐまたはＤ −Ａｓｐ　：　ＲｓはＳｅｒ、Ａｓｎ。

Ｌｙ　ｓ、　Ａｒ　ｇ、　Ａｓ　ｐまたはＱｌ　ｎ　；　ＲｌｔはＴｙｒ、Ｄ− ＴｙｒまたはＰｈｅ；ＲｕはＡｒｇまたはＬｙｓ；Ｒ，、はＩ　Ｉ　ｅ、　Ｖａ 　Ｉ、　ＬｅｕまたはＡ　Ｉ　ａ　；　ＲｌｔはＧｌｙ　またはＡ　Ｉ　ａ　： 　Ｒ２１はＬｙ　ｓ、　Ｄ−Ｌｙ　ｓ、　Ａｒ　ｇまたはＤ　−Ａ　ｒ　ｇ　； 　Ｒ２ＯはＬｅｕ、Ｉｌｅ。

ＡｌａまたはＶａｔ；Ｒ，７はＭｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、１１ｅ、 Ｌｅｕ、ＮｖａまたはＶａｔ；Ｒ，、はＡｓｎまたはＳｅｒ：Ｒ１２はＰｈｅ、 ＡｌａまたはＶａｌ：Ｒ４゜はＡｓｎまたはＡ　ｒ　ｇ　；Ｒ４４は天然アミノ Ｍ　：　Ｑ＋〜Ｑ、はそれぞれＨまたはＣａＭｅである；ただし、Ｒ２Ｏ−Ｒ４ ４の残基のすべて、またはその一部の配列はＣ末端で始まる配列から削除されて いてもよ℃・；また、Ｑ、、Ｑ、、Ｑ、、ＱｓおよびＱ、のうち１以上はＣ”Ｍ ｅである。）　これらのペプチドのいずれにおいても、Ｃ末端のアミノ酸残基の カルボキシル部分は次の原子団になっていてもよいニーＣ０ＯＲ。

−ＣＲＯｌ−ＣＯＮＨＮＩ−ＩＲｌ−ＣＯＮ（Ｒ）（Ｒ’）または−ＣＨ，ＯＲ （ここで、ＲおよびＲ′は低級アルキル、フッ化低級アルキルまたは水素である 。）低級アルキルとして好ましいのはメチル、エチルおよびプロピルである。− ＣＯＮＨＲ（ＲはＨまたは低級アルキルである。ンのが好ましい。

本発明のさらに他の好適な実施態様では、ペプチドは下記の配列を有する。

（Ｂ）　Ｒ１−Ｒ１−Ａｓり−Ａｌ　ａ　−（Ｑｌ　）Ｉ　１　ｅ−Ｐｈｅ−Ｔ ｈ　ｒ−Ｒｓ−Ｂｅ　ｒ　−（Ｑｔ）Ｒ１６−Ａｒ　ｇ−Ｒｌｔ−（Ｑｓ）ＲＩ ５−Ｌｅ　ｕ　−Ｒ＋！ｌ−Ｇ　ｌ　ｎ　−（Ｇ４）Ｌｅ　ＬＸ−Ｒｌｔ−（Ｑ ｓ　）Ａ　Ｉ　ａ　−Ａｔ　ｇ−Ｒ２１−（Ｑａ　）Ｒｈ−（Ｑｙ　）　Ｌｅ　 ｕ−Ｒｕ−Ｒｔｓ−（Ｑａ）　Ｒｓ−（Ｑｅ）　ＲＨ−ＲＨ−Ａｒｇ−Ｇｉｎ− Ｇｕｎ−Ｇｌ　ｙ−Ｙ　ｗｈｅｒｅｉｎ　Ｒ，はＴｙ　ｒ、　Ｉ）−Ｔｙ　ｒ。

Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｈｉ　ｓまたはＤ−Ｈｉｓ；ＢはＨ，ＣａＭｅまたはＮａ Ｍｅ；Ｒ。

はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＲ；Ｒ，はＳ　ｅ　ｒ、　Ａｓ　 ｎ、　Ｌｙ　ｓ。

ＡｒｇｌＡｓｐまたはＧ　ｌ　ｕ　：　ＲｌｔはＴｙｒ、Ｄ−ＴｙｒまたはＰｈ ｅ；ＲｌｔはＡｒｇまたはＬｙ　ｓ　＋　ＲｒｓはＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕまた はＡ　Ｉ　ａ　：　ＲｌｔはＧｌｙまたはＡｌａ　；Ｒ４はＳｅｒまたはＴｙ　 ｒ　；　Ｒ２１はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙ５％　ＡｒｇまたはＤ−Ａｒｇ；ＲｕはＬｅ ｕ、　Ｉ　！ｅ、　Ａｌ　ａまたはＶ　ａ　Ｉ　：　Ｒ４はＧｌｎまたはＨｉ　 Ｓ　＋　ＲｔｉはＡｓｐまたはＧ　ｌ　ｕ　；　ＲＡＴはＭｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌ ｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＮｖａまたはＶａｌ；Ｒ２１ｌｉ！Ａ　ｓ　ｎまたｌヨｓ 　ｅ　ｒ　；ＹはＮ　ｉ（Ｒ（ここでＲはＨまたは低級アルキル）；Ｑ、〜Ｑ、 は七れぞｉ、、Ｈ！プ１、げ（−’、”Ｍｃで、）〉す：　Ｇｌ）Ｔ、Ｇｌｎ− ＧｌｙまたはＧｉｎ−Ｇｌｎ　（Ｎｙは、（−゛末端で削除１１て、い゛〔もよ ＜　：　Ｑｌ−Ｑ４、Ｑ７、Ｑ、およびＱ。

の５ち１以−Ｌは（、’　ａＭ　ｅでｔｌろ。）」で述−゛・た、Ｊ′：うに、 Ｎ末端から２ｑ位の残基までのフラグメントは下垂体に、よる（？、、ｘ　Ｈ３ ）割、（（ダ１ψ、を及ぼす゛生物活性を・イイ１．２ており２長さ２９または ３２残基のＣ東端がアミドか置換アミド管あ７．）生物ｉ′ｌ！ｉ性フラグメン トであるのが最も好まし、い。

このペプチドが４０またはイ丈以りの残基を有する場合は、Ｃ末端部分に対する 明確な好適性はない。

該ペプチドは、完全な固相法、部分的な固相法フラグメントカツノ゛リングある いは液相カップリングのような適当な方法により合成される。例えば、完全な固 相合成の技術は教科書［−固相べ−７°ブード合成（Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ　 Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙ−ｎｔｈｅｓｉｓ　）Ｊ、スチュワード（Ｓｌｅｗａｒｔ ）およびヤング（Ｙｏｕｎｇ）、Ｆｒｅｅ−■市ｎ＆Ｃｏ、、’Ｊンフランシス ｊ（１９６９）において述べられ、ヴエール（ｙａｌｅ）らによる１９７８年８ 月８日付米１特許第４，１０５，６０３号に例示されている。基本的な液相合成 法は論文１−Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｖ　ＯｒｇａｎｉｓｃｈｅｎＣｈｅｒｎｉ ｅ　（Ｈｏｒｂｅｎ″′Ｗｅｙｌ　）　：ペプチド合成（Ｓｙｎｔｈｃｓｅ　ｖ ｏｎ　Ｐｅｐｔｉ−ｄｅｒｉ月、Ｅ、ブンシュ（Ｗｕｎｓｅｈ）編集、ゲメルグ ・テイーム出版、シュトウットガルト、西独（１９７４）において詳述される。

合成のフラグメントｍ合法は、１９７６／４８月３日付米１ｆｆｉｌ特￥ｆ第３ ．９７　′２．８５９号に例示される。他の適用可能な合成は１９７４年１０月 １５日付米国特許第３．８４２，０６７号および１９７５年１月２８目付米国特 ３′（−第３，８６２．９２５号に例示される。

種六のｒミノ酸成分の不安定な側＠本を適当な保護基（その基が最終的に除去さ れるまで、その部位で化学反応か起、−るのを“防ぐ）で保護する・二どは、こ の種の合成にお（・て一般的である。また、アミノ酸や断片がカルボキシル基の 部位で反応する間その物質のα−アミノ基を・保護することも一般的であり、そ の後α−アミン保護基を選択的に除去してその位置で次の反応を行わせる。従っ て、合成の一段階として、ペプチド鎖中に意しｊする配タリで位置するアミ７） 酸残基な含み且つ適当なアミ７′酸残基に側鎖保護基を結合し７た中間体化合物 が生成することば普通のことである。

この点から、本発明は次式（ＩＩ）の中間体を与える。

Ｘ’−（Ｂ）Ｒｎ（ＸまたはＸ”）Ｒｙ−Ｒｓ（Ｘｌ）−Ａｌａ−（Ｑｌ）Ｒｓ −Ｐｈｅ　Ｔｈｒ（Ｘ’）−Ｒｓ（Ｘ’）　−３ｅ　ｒ　（Ｘ’）　−（Ｑｔ） Ｒｎｏ（Ｘ”）−Ａｒ　ｇ（Ｘ６）−Ｒ，！（Ｘ’またはＸ”　）　−（Ｑｓ　 ）Ｒ４＋＋−Ｌｅ　ｕ−ＲＩ５−Ｇ　Ｉ　ｎ　（Ｘ’　−（Ｑ４　）　Ｌｅ　ｕ −ＲｌＭ（Ｘ”またばＸ’）　−（Ｑ５）Ａｌ　ａ−Ａｒｇ（Ｘ’）−Ｒ４，（ Ｘ’　まブこはＸ’）−（Ｑｓ）Ｒｔｔ−（Ｑ−）Ｌｅｕ−Ｒ２４（Ｘ’または ｘ）−Ｒｔｓ（Ｘ’）−（Ｑｓ）Ｒｔａ−（Ｑａ）Ｒｎ−Ｒｚｇ（Ｘ’またはＸ ’）−Ａｒｇ（Ｘ’、）−Ｇｌｎ（Ｘ’）−Ｇｌｎ（Ｘ’）−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ（ Ｘ’）−Ｒｓ４（ＸｌまたはＸ’）−Ａｓｎ（Ｘ’）−Ｇｉｎ（Ｘ’）−Ｇｌｕ （Ｘ’）−Ｒｓａ（：Ｘ’またはＸ’）−Ｒｓｏ（Ｘ’）−Ｒ４０（Ｘ”）Ａｒ ｇ（Ｘ’）−Ｒｕ　Ｒｕ（Ｘ’またはＸ’　）　−Ｒ４４（ＸＩ）　Ｘｌ 式中、ＸＩは水素またはα−アミノ保護基である。ＸＩに包含されるα−アミノ 保護基は、ポリペプチドの逐次合成の分野において有用であると知られているも のである。ＸＩ　として使用し５るα−アミン保護基の種類には（１）芳香族ウ レタン型保護基、例えばフルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、ベ ンジルオキシカルボニル（Ｚ）、およびｐ−クロルベンジルオキシカルボニル、 ｐ−ニトロベンジルオギシ力ルボニル、ｐ−ブロムベンジルオキシカルボニル、 ｐ−メトキシベンジルオキシ力ルボニルのような置換ｚ　；　（２）脂肪族ウレ タン型保護基、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、ジイソプロピル メチルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル 、およびアリルオキシカルボニル；および（３）ジクロアルキルウ１／タン型保 護基、例えばシクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル 、おヨヒシクロヘキシルオキシカルボニル；が含まれる。好適なα−アミノ保護 基は、たとえＮａＭｅ−置換アミノ酸残基が１位に存在するときでも、ＢＯＣで ある。もちろんＢがｄ　ｅ　ｓ　Ｎ　ＴＩｔのときＸｌはＩｌである。

Ｘは水素原子またはＨｉｓのイミダゾール窒素のための保護基（例えばＴｏｓ） である。

Ｘ２Ｈ，Ｔｙｒのフェノ−、ル性ヒドロキシル基のための適当な保護基であり、 例えばテトラヒドロピラニル、ｔ−ブチル、トリチル、Ｂｚｌ、ＣＢＺ、４Ｂｒ −ＣＨＺま６よび２．に−ジ・クロルベンジル（ＤＣＢ）である。また、Ｘ２は 水素原子であってもよ（、この場合はその位置のアミノ酸残基に側鎖保護基が存 在Ｌ７ないことを意味する。

Ｘｓは水素原子、もしくはＡｓｐまたはＧｌｕのカルボキシル基のための適当な エステル形成保持基、例えばペン、′ル（ＯＢｚｌ）、２．６−ジクロルベンジ ル、メチルおよびエチルである。

ＸｌはＴｈｒまたはＳ　ｅ　ｒのビドロキ・、ル基のための過当な保護基であり 、例えばアセチル、ベンゾイル、ｔ−グ千四、トリチル、テトラヒドロピラニル 、Ｂｚｌ。

２．６−ジクロ、ルベンジＡ−およびＣＢＺである。好適な保護基はＢｚｌ　で ある。

Ｘｌはまた水素原子であってもよく、この場合はヒ１几壽ンル基に保護基が存在 しないことを意味する。

ＸＩは水素原子、もしくはＡｓｎまたは６１口の側鎖アミド基のための適当な保 護基である。女子ましくはそれはキ丈ユ′チル（Ｘａｎ）である。

Ｘ″はＡｒｇのグアごジノ基のための過当な保護基、例えばニトロ、Ｔｏｓ、Ｃ ＢＺ、アダマンチルオキシカルボニルおよびＢ　ＯＣであり、またＸ６は水素涼 ｆでありうる。

Ｘ７は水素原子、もしくはＬ　ｙ　ｓの側鎖アミ、ノ基のための適当な保護基で ある。

過当す側鎖アミン保護基の例は２−クロルベンジルオキシカルボニル＜２：ＣＺ −２）、Ｔｏｓ、ｔ−アミルオキシカルボニルおよび１３０Ｃである。

Ｘａは水素原子、もしくは一般的に先に示した適当な側鎖保護基である。

Ｎｅｔは任意に酸素原子で保徊しつるが、保護しない方が好ましい。

側鎖”ｒミノ保護基の選択は、一般に合成中のα−アミン保護基の除去の間に除 去されないものな選ぶということを除いて限定的でない。しがしながら、いくつ かのアねノ酸例えばＨｉｐの場合はカップリング児了後に一般に保護を必要どせ ず、従ってα−アミ２１保護基と側鎖アミ２ノ保膿基は同じものでありうる。

Ｘｌはエステル形成基Ｘ３のようなＣ−末端カルボキシル基に対する）適当な保 護基あるいは固相合成において使用される、固体樹脂支持体への連結のためのア ンカー結合あるいはｄｅｓ−Ｘ”　（この場合、残基はＣ−末端にお（・て先に 定義したカルボキシル部分Ｚを有する）である。固体樹脂支持体が使用される場 合、それは−０−ＣＨ２−樹脂支持体、−ＮＨ−ベンズヒドラミン（ＢＨＡ）樹 脂支持体または−ＮＨＮバーメチルベンズヒドリラミン（ＭＢｉ（Ａ）樹脂支持 体のように当業者に既知の担体のいずれかでありうる。非置換アミドが望ましい 場合にＢＨＡあるいはＭＴ３ＨＡ樹脂の使用が好適なのは、切断で直接該アミド を与えるからである。Ｎ−メチルアミドが望ましい場合はＮ−メチルＢＨＡから 得られ５る。他の置換アミドが望ましい場合は米国特許第４，５６９，９６７号 の方法を用いることができる。また、Ｃ末端として遊離酸以外のなお他の基が望 ましい場合はホウベン−ウニイル（Ｈｏｕりｅｎ　−Ｗｅｙ　ｌ　）の教科書に ある基本的な方法を用いてペプチドを合成するのが好ましい。

中間体に対する式においてＸ−基の少なくとも１つは保護基でありＸｌは樹脂支 持体を含む。このように本発明はまた以下のような対象となるペプチド製造の方 法を提供する。

（ａｔ　少なくとも１つの保り基と式（ｎ）を有するペプチドを形成し〔ここで Ｘ。

Ｘｌ、Ｘ２、Ｘｌ、Ｘｌ、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８は各々水素あるいは保護 基であり、Ｘｌは保護基または樹脂支持体へのアンカー結合であるか、ｄｅｓ− Ｘ”（この場合、（＋１）式（Ｉｌ）のペプチドから保護基またはアンカー結合 を除去し；そして（ｃｌ　望ましい場合には、結果とし℃できる配列（Ｉ）のペ プチドをその無毒性塩に転化する。

ペプチド合成において使用する個々の側鎖保護基を選択する場合、次の一般規則 に従う。

（ａｌ　保護基はカップリング条件下でその保護特性を保持（２て切断されない 。

（ｂｌ　保護基は試薬に対して安定であるべきであり、合成の各段階でα−アミ ン保護基の除去のために選ばｔまた反応条件下でＸａｎを除いて、安定であるの が好ましい。

（ｃｌ　側鎖保護基は、意図するアミノ酸配列を含む合成の完了時点に、ペプチ ド鎖を変性させな（・反応条件Ｆで除去できなければならない。

ペプチドが組換えＤＮＡ技法を用いないで製造される場合、それらは好ましく２ １４９（１９６３）に一般的に記述されるような固相合成法を用いて製造される 。しか１２、先に述べたように当分野で知られた他の同様の化学合成法も使用し うる。同相合成法は保護したα−アミノ酸を適当な樹脂にカップリングすること によって、ペプチドのＣ末端から開始される。このような出発物質はα−アミン 保護アミノ酸をクロルメチル化樹脂またはヒドロキシメチル樹脂へエステル結合 によって結合するか、ある（・はＢＩＩＡ樹脂またはＭＢＨＡ樹脂ヘアミド結合 することによって製造しつる。ヒドロキシメチル樹脂の製法はポダンスキ−（Ｂ ｏｄ−ａｏｓｋｙ　）らのＣｈｅｍ、　Ｉｎｄ、（ｏンドン）３８．１５９７〜 １５９８（１９６６）に開示されている。クロルメチル化樹脂はカリフォルニア 州すッチモノドのバイオランド研究所（Ｂｉｏ　Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ ｅｓ　）およびラブシステム社（Ｌａｂ。

Ｓｙｓｔｅｍｓ、　Ｉｎｃ、）から市販されている。この種の樹脂の製法はスブ ユワート（Ｓｔｅｗａｒ（）らの［固相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ 　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈ−ｅｓｉｓ　）　Ｊ　（Ｆｒｅｅｒｎａｎ　＆　 Ｃｏ、、ザンフランシスコ、１９６９）第１章１〜６頁に開示されている。ＢＨ ＡおよびＭＢＨＡ樹脂支持体は市販され℃おり、一般に合成し２ようとする目的 ポリペプチドがそのＣ末端に未置換アミド基をもつときにだけ使用される。

Ｃ末端アミノ酸、例えばＢＯＣおよびＸａｎで保護されたＡｓｎは先ずに、ホリ キらのＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　１６５〜１６８　（１９７８） の方法に従ってクロルメチル化樹脂へカップリングされる。即ち、例えばラツ） ＧＲＦ（ｒＧＲＦ）の４３−残基遊離酸類似体を合成するときには、約６０℃で ＤＭＦ中ＫＦを用いて２４時間攪拌する。樹脂支持体へのＢＯＣ保論アミノ酸の カップリングに続いて、塩化メチレン中トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）またはＴＦ Ａ単独を用いてα−保護基が除去される。この脱保諌は約Ｏ℃から呈温の間の温 度で行われる。ジオキサン中Ｉ（ＣＪのような他の標準的な切断試薬や特定のα −アミン保護基の除去条件は、シュローダ−（Ｓｃｈｒｏｄｅｒ　）とりューブ ク（Ｌｕｂｋｅ）の「ザ・ペプチド」第１巻７２〜７５頁（アカデミツクプレス １９６５年）に記述されているように選んでもよい。

α−アミノ保護基の除去後、残りのα−アミノ−および側鎖−保護アミ７ノ酸を 意図する順序で段階的にカップリングさせて、先に定義した中間体化合物を得る 。

あるいは各アミノ酸を別個に反応器−＼加える代わりに、若干のアミノ酸を互い にカップリングさせてから固相反応器へ添加してもよい。適当なカップリング試 薬の選択は当分野の技術の範囲内である。カップリング試薬として特に適してい るものはＮ　、　Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣＩ　）である 。

ペプチド固相合成に用いられる活性化試薬はペプチドの分野においてよく知られ ている。適当な活性化試薬の例はカルボジイミド類、例えばＮ　、　Ｎ’−ジイ ソプロピルカルボジイミドおよびＮ＝エチル−Ｎ’−（３’−ジメチＡ・アミノ プロピル）カルボジイミドである。その他の活性化試薬ならびにペプチドカップ リングにおけるそれらの使用はシュレーダー＆リュプケの上記文献第■章および カブール（Ｋａｐｏｏｒ　）のＪ、　Ｐｈａｒ、　Ｓｃｉ、、　５９．１−２７ （１９７０）に開示されている。

それぞれの保護アミノ酸またはアミノ酸配列は大体４倍以上の過剰菫で固相反応 器へ導入さ汰　カップリング反応はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）：ＣＬＣ４ （１：１　）の混合媒体中で、あるいはＤＭＦまたはＣＨ２Ｃ１ｚ単独中で行わ れる。不完全なカップリングが起った場合は、α−゛アミン保護基を除去する前 にそのカップリング反応を繰り返し、その後送のアミノ酸なカップリングさせる 。合成の各段階でのカップリング反応の成就は、もしその合成が手動で行われる なら、カイザー（Ｅ、Ｋａｉｓｅｒ）らのＡｎａｌ、Ｂｉｏｅｈｃｍ、３４．５ ９５（１９７０）に記載されるようなニンヒドリン反応で監視するのが好ましい 。カップリング反応は自動的に、例えばペックマン９９０自動合成機で、リビｘ −／ｌ／（Ｒｉｖｉｅｒ　）らのＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、１９７８．１７．１ ９２７−１９３８頁に報告されるようなプログラムを用いて行うことができる。

意図するアミノ酸配列が完了ｌ−だ後、液状フン化水素のような試薬で処理１〜 て中間体ペプチドを樹Ｊｉｂ支持体から切り離す。その際液状フッ化水素はペプ チドを樹脂から切り離すばかりでな（、残っている全ての側鎖保護基ｘ、ｘ’、 ｘ”、ｘ’、ＸＳ、Ｘ’、Ｘ７、Ｘ’、アンカー結合Ｘ９およびもし使用するな らα−アミノ保護基Ｘ１　￥も切断して遊離酸の形でペプチドを得る。配列中に Ｍｅｔが存在する場合、ＢＯＣ保護基は潜在的Ｓ−アルキル化を避けるためＫＨ Ｆを用いる樹脂からのペプチド切断の前にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／エタン ジチオールを使用して好適にまず除去される。切断のためにフッ化水素を使用す る場合、アニソールおよびメチルエチルスルフィドが反応容器中にスキャベンジ ャ−として含有される。

次の実施例１は固相法によるペプチド合成の好適な方法を示すものである。これ と同じ方法でＣ末端に必要な数のアミノ酸をつなげさえすれば対応する長いペプ チドを合成し５ることは容易に理解されるであろう。Ｎ末端へ残基をつなげるの は有益とは考えられておらず、現在のところ生物活性７ラグメントのＮ末端は庚 定の配列を有するべきであると感じられる。

実施例１゜ 次式： ％式％ −ＮＨ，を、ベール（Ｖａｌｅ）らの米国特許第４．２９２，３１３号に概要が 記載されるよ５にベックマン９９０ペプチド合成機を使って市販のＭＢＨＡ樹脂 上で段階的方法により合成した。この樹脂へのＢＯＣ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）のカ ップリングは、樹脂１ｖあたりＡｒｇ約０．３５ｒｎｍｏｌ！の置換をもたらし た。

保護基を除去して中和した後、ペプチド鎖を樹脂上に一段づつ付加していった。

保護基の除去、中和および各アミノ酸の付加は一般をこりビニール（Ｊ、　Ｒｉ ｖｉｅｒ）れる方法に従って行った。使用する全ての浴剤は不活性ガス（例えば ヘリウムや窒素）を散布することによって注意してガス抜きしＭｅｔ残基の硫黄 を酸化するおそれのある酸素を確実に除いた。

保護基の除去はスケジュールＡに従って行った：スケジュールＡ 試　薬　混合時間（分） １、　６０％Ｔ　Ｆ　Ａ／　２％エタンジチオール１０２６０％ＴＦＡ′２％エ タンシナオール　１５３、ＩＰＡ／１％　、ｘ　タンジ、オ／’　０．５４、Ｃ Ｈ，Ｃ１ｚ中（’）　Ｅ　ｔ３Ｎ　（Ｉ　Ｏ”ｉｏ）　０．５５、ＭｅＯＨ０， ５ ６、ＣＨ，ＣＪｔ中のＥｔ、Ｎ（１０％）ｏ、５７’、　ＭｅＯＨ（２回）０． ５ ８、ＣＨ，Ｃｌｔ　（２Ｎ）　０．５ カツプリングは好ましくはスケジュールＢＶｒ、記載されるように行った：スケ ジュールＢ 試　薬　混合時間（分） １０、Ｂｏｃ−アミノ酸　５０〜９０ １１、　ＭｅＯＨ（２回）ｏ、５ １２、　ＣＨ２（Ｊ！！　（２回）ｏ、５ｉ３．　ＣＨ，Ｃ１ｔ中ｋｃｔｏ　（ ３Ｍ）　１５．０１４、　ＣＨ，Ｃ１，０，５ １５、Ｍｅｏ）ｉ　０．５ １６、　ＣＨｓＣ６ｔ　（２回）　Ｏ，Ｓ簡単に述べれば、樹脂１２あたり塩化 メチレン中のＢＯＣ−保護アミノ酸１〜２　ｍ　ｍｏｌを使用し、塩化メチレン 中の１．０ｍｏｌＤＣＣＩ　１当量加えて２時間実施した。ＢＯＣ−Ａｒｇ（Ｔ ｏｓ）がカップリングされつつあるとき、５ｏ％ＤＭＦと塩化メチレンの混合物 を使用した。ＳｅｒおよびＴｈｒのヒドロキフル側鎖保護基と１−てＢｙ：Ｉエ ーテルを使用ｌ、５た。ＡｓｎやＧｌｎのアミド基は、有利であるよｒ）ｉｃ　 Ｄ　Ｃ（’、、’カノア°リングな使用！ｆ躯場ｒ＞　ｓ　Ｘ　ａ　１１で保護 し、た。ｐ・−ニトロフェニ）ｖ　、Ｔ’、　、Ｘテ”　（ＯＮ　Ｆ）　）はＡ ｓｎやにＩｎのノフル寸、゛キ：’、’、’Ｌ末端η′活性化するブこめに使用 し７、例えばＢ（−Ｎ（’、、、’、、−Ａ！１ｎ（ＯＮｐ）ｉ；ＩＤＭＦと塩 化）　ｆ　ｌｚ　７　＋７）　５１）　ｑ、、、））混合物■■ Ｈ（）ｆ（ｉ　１当敞’；ｃ：　＃ｉ　Ｊイ’Ｃ−１９，カニ：／　’、’、、 −７’し、・グさ＋：６Ｃとが−Ｑ：き、この場合はＤ（′iコ を加女−なかった。２．　、ｊ　ｏ　、Ａ−−−＜　７７”　Ａオキシ、む、ル ボー：ル（２ＣＪ−ｚ　）はＬｙｓＩＩｌｉＩ鎖Ｌ′り保護基とし′ξ使用した ０ＴＯＳはＡｒｇのグアニド基およびＴｌ１ｓのイミダ：／’、、、、−，−Ａ ９素を保護−！”ｆｗｆ−め（二使用ｒ：き、Ｇ　Ｉ　ｕまたｉｔ、ｋｓＨ■側 鎖カルボキシル基は０Ｉ）ｚｌで保：’！ｉ　Ｌ、−た。Ｔｙ［の７ｊニハ一ル 性ヒト１′ＪＡ゛ンａ４％は２．６−ジク０　ルー・ニン、′ル（１）ｅ　ｌ− ＜　）で保護した。合成終了時に次の組成の中間体が得られた二ＢＯＣ−ＮａＭ ｅ’、Ｉ”ｙ　ｒ　（Ｘ’　）−Ａｌ　ａ　−Ａｓ　ｐ　（Ｘ３）　−Ａ　Ｉ　 ａ−Ｉ　１　ｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（Ｘ’　）−Ａ、ｓｎ　（Ｘ’）−８ｅ　ｔ　 （Ｘ’　）−Ｔｙ　ｒ　（ＸＴ）−Ａｒ　ｇ　（Ｘ’）−Ｌｙ　ｓ　（Ｘ））− ＶａＩ　−Ｌｅｕ−Ａｌ　ａ−Ｇｌ　ｎ（Ｘ’）−Ｌｅｕ−８ｅｒ（Ｘ’）−Ａ ｌ　ａ−Ａｒｇ（Ｘ＠）−Ｌｙｓ（Ｘ’、）−Ｌｅｕ−ｉｙｅｕ−Ｇｌｎ（Ｘ’ ）−Ａｓｐ（Ｘ’）−Ｉｌｅ−ＣＭＬ−Ａｓｎ（Ｘ’）−Ａｒｇ（Ｘ’）−Ｘ’ 　（ここでＳＸ２はＤＣＢ、Ｘ３はＯＢｚ　Ｉ％Ｘ’はＢｚｌ、Ｘ５はＸａｎ、 　Ｘ’はＴｏｓ、Ｘ’は２　Ｃｉ　−ｚそしてＸｌｌはＮＨ−ＭＢＨＡ−樹脂支 持体でｔ）る。Ｘａｎけ、α−アミン保り基を除去するために用いたＴＦＡ処理 によって部分的にまたは完全に除去でさた。

保護ペプチド−樹脂を切り離し、て保護基を除去するために、ペプチド−樹脂１ ２あたりアニソ−Ａ・ｌ５ｙｎｌ、メチＶＬエチルスルノイド０．５ｙｎｌおよ びフッ化水素（ＨＦ　）　１５＋ｎ／を用いて−２０００で３（）分および０℃ で３０分処理した。高真空下でｉ（Ｆを除去し、た後、樹脂−ペプチド残留物を 乾燥ジエチルエーテルおよびクロロホルムで交〃に洗い、次いでペプチドをガス 抜きした２Ｎ水性酢酸で抽出し、ｐ過により樹脂から分離した。

その後、得られたペプチドを０−５％酢酸に浴解し、七）−アデックスＧ−５０ 微細ゲル濾過を含めた精製工程如何した。

１０３．３１７８（１９８１）［示されるような調製用まタハ＃調製用ＨＰＬＣ で精製した。カー　トリソジを備えたウォーターズ・アソシエーツ・ブｌ／ブＬ Ｃ−５００（Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ　ｐｒｅｐ　ＬＣ−５００） はバイダック（ｖｙｄ−ａｃ）３０ＯＡかｌ−）σ）１５〜２０μのＣ□シリカ を装填した。リビエールのＪ、Ｌｉｑ、（’ｈｒｏ＋ｎａｔｏｇｒａＩ）ｂｙ　 １．３４３−３６７（１９７８）に記載されるように、低圧エルデツクス（Ｅｌ ｄｅｘ　）勾配製造機を使って、ＴＥＡＰ中の（３（、ＣＮの勾配をつくった。

りｒ］７トグラフ画分は注意して１１　Ｐ　Ｌ　Ｃで監視し、実質的純度を示す 両分のみを拒めた１、それぞれ別個に純度を調〆たＭ製画分の脱塩は０．１％Ｔ Ｆ−Ａ中のＣＩ、ＣＮの勾配を用いて行った。その後センターカッ）　（ｃｅｎ ｔｅｒｃｕｔ）を凍結乾燥Ｉ２て目的とするペプチド（純度９８％以上でありう る）を得た。

精製ペプチドの比旋光度を、パーキンエルマー旋光計を用いて測定１−だところ ［α］Ｄ＝＝−５２，０°±１　（ｃ−１、１％酢酸）であった。

実施例２゜ 次式： ％式％ で表わされる４０アＳノ残基のペプチド［ＣａＭｅＨｉｓ’、Ｄ−ＮＭＡ’、Ｃ ＭＬ”Ｅ−ｈＧＲＦ（１−４０）−ＮＨ，を、ベールらの米国特許第４，２９２ ．３１３号に概要が記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使っ てＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはＴ　Ｌ　Ｃおよび ＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例３ 次式： ％式％ で表わされるペプチド［Ｄ　−ＨＭＡ”、ＣＭ　Ｌ　２丁：］−ｒＧＲＦ（１− ４３）−ＯＨを、上述のＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓに記載されるよ５ に、ベック？　ン９９０ペプチド合成機でクロルメチル化樹脂を用いて最初のカ ップリングをした後、実施例１と同じように段階的方法により合成した。本ペプ チドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋で多）ること力洋」明１７た 。

実施例４゜ 次式： ％式％ で表わさｈるｈ　Ｇ　ＲＦ類似体フラグメント［Ｎ”ＭｅＴｙ　ｒ’　、　Ｌｙ 　ｓ’、　Ａ　Ｉ　ａ１５、ＣＭＩ、′７、Ａｓｎ”１３−ｈＧＲＦ（１−２９ ）−ＮＨ，を実施例１に記載されるように、ベックマン９９（）ペブブド合成機 を使つ−ＣＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した１３本本ペプチドＴ　Ｉ 、　ＣおよびＩ（Ｐ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明１−だ。

Ｎ末端残基なかえて合成ｖｈり返し、（：　ＮａＭｅＩ−１ｉ　ｓ’、　Ｌｙ　 ｓ’、Ａ　Ｉ　ａ　１５、ＣＭＬ”、Ａｓｎ”、）−ｈＧＲＦ（１−２９）−Ｎ Ｕ−１，を得た。

実施例５ 次式： ％式％ で表わされるｈＧＲＦ類似体フラグメント［ＮａＭｅＴｙｒ’、Ｄ　−Ｌ　ｙ　 ｓ”　、　ＣＭＬ”）−ｈ　ＧＲＦ　（１２９）　−ＮＨｚＹ実施例１に記載さ れるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的 方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＩ（Ｐ　Ｌ　Ｃを用（・て実質 的に純粋であることが判明した。

次式： ％式％ ＧＲＦ　（１２９）−ＮＨ２を、実施例１に記載されるように、　べ７クラン９ ９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペ プチドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した。

次式： ％式％ ｈＧＲＦ（１〜２９）−ＮＨ，を、実施例１に記載されるように、ベックマン９ ９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペ プチドはＴＬＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明した 。

実施例８ 次式： ％式％ −ＮＨ，を、実施例１に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を 使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよび ＨＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例９゜ 次式： ％式％ Ｇ　１　ｙ　−Ｎ　Ｈｚ で表される［Ｄ−Ｐｈｅ’、Ｄ−ＮＭＡ’、Ｇｌｕ’、ＣａＭｅＴｙｒ”、ｌｌ ｅ”、ＣＭＬ”）−ｈＧＲＦ（］、−３２）−ＮＨ，を、ベールらの米国特許第 ４２９２３１３号に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使っ てＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ ＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例１０゜ 次式： ％式％ （１−２９）−ＮＨ２を、ベールらの米国特許第４．２９２，３１３号に記載さ れるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的 方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋 であることが判明した。

実施例１１゜ 次式： ％式％ で表されるｈＧＲＦ類似体フラグメント［Ｆｏｒ−Ｔｙｒ’、Ｄ−ＮＩＩＪＡ’ 、ＣａＭｅＴｙｒ”、ＣＭＡ”、ＣＭＬｆｆｉ？、Ａｓｎ”］−ｈＧＲＦ（１３ ２）−ＮＨｔを、実施例１に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成 機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣお よびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例１２ 次式： ％式％ ｒＧＲＦ（１２９）　ＮＨ２を、実施例１に記載されるように、ベックマフ９９ ０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方法により合成した。本ペプ チドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例１３ 次式： ％式％ で表されるｈＧＲＦ類似体フラグメント［Ｄ−ＮＭＡ”、Ａ　ｒ　ｇ１２、ＣＭ 　Ｌ　”、１１ｅ”）−ｈＧＲＦ（１−２９）−ＮＨｌを、実施例１に記載され るように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方 法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純 粋であることが判明した。

実施例１４゜ 次式： ％式％ Ｍｅ　ｔ”）　−ｈ　（３１Ｆ　（１２９）−ＮＨｔを、実施例１に記載される よ５に、ペックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方法 により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋 であることが判明した。

実施例１５ 次式： ％式％ 実施例１に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨ Ａ樹脂上樹脂路的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを用 いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例１６゜ 次式： ％式％ ：］ｒ ＧＲＦ　（１２９）−ＮＨｘを、実施例１に記載されるように、ベックマン９９ ０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方法により合成した。本ペプ チドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例１７゜ 次式： ％式％ ＣＭＬ”）−ｒＧＲＦ（１２９）−ＮＨｔを、実施例１に記載されるよ５に、ベ ックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方法により合成 １−た。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であるこ とが判明した。

実施例１８゜ 次式： ％式％ （ＪｉＬ”１−ｈＧｌｔＦ（１−３２）−ＮＨ，を、実施例１に記載されるよう に、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上樹脂路的方法によ り合成した。本ペプチドはＴＬＣおよび■ｌ　Ｐ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋 であることが判明した。

実施例１９ 次式： ％式％ Ａ　ｌ　ａＩ５、Ｄ−Ｎｅ　ｔ”）　ｈ　ＧＲＦ　（１２９−ＮＨｚを、実施例 １に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢ）ＩＡ樹 脂指上段階的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰＬＣを用い℃ 実質的に純粋であることが判明した。

実施例２０゜ 次式： ％式％ ｒＧＲＦ（１３２）−ＮＨｔを、実施例１に記載されるように、ベックマフ　９ ９　Ｑペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ４！（指上で段階的方法により合成した 。本ペプチ実施例２１゜ 次式： ％式％ で表されるｒＧＲＦ類似体フラグメント［ｄｅｓａｍｉｎｏＴｙｒ’、ＣＭＬ２ ３］−ｒＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ，を、実施例１に記載されるように、ベック マン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した 。本ペプチドはＴ　Ｉ、　ＣおよびＨＰ　Ｔ、　Ｃを用いて実質的に純粋である ことが判明した。

実施例２２ 次式： ％式％ 特許第４２９２３１３号に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機 を使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよ びＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例２３ 次式： ％式％ ＧＲＰＣＩ−２９）−ＮＨｌを、実施例１に記載されるよ５に、ペックマン９９ ０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプ チドはＴ　、Ｔ、　ＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判 明した。

実施例２４ 次式： ％式％ ＣＭＬ’、Ａｓｎ”〕−ｈＧＲＦ（１２９）−ＮＨｚを、ベールらの米国特許第 ４．２９２．３１３号に記載されるように、ペックマン９９０ペプチド合成機を 使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはＴ　Ｌ　Ｃお よび１−ＩＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例２５゜ 次式： ％式％ を、ベールらの米［Ｂ％許第４．２９２．３１３号に記載されるように、ベック マ二／９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹崩上樹膜上的方法により合成し た。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが 判明した。

このペプチドを水に溶解し、ＩＮ酢酸を加えた溶液を凍結乾燥することによって 酢酸塩を調製した。

実施例２６ 次式： ％式％ で表されるｈＧＲＦ類似体フラグメントＣＤ−ＮＭＡ”、Ａｒｇ’、ＣＭＡＩ９ 、ＣＭＬ”！、Ｎ１ｅ２７１−ｈＧＴ（Ｆ（１−３２）−ＮＨ２’ａ’、実施例 １に記載されるように、ベックマン９９０ベプヂド合成機を使ってＭ　１３　） （Ａ樹脂上で段階的方法により合成した。

本ペプチドはＴ　Ｌ　Ｃおよびｌ−（Ｐ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であるこ とが判明した。

実施例２７゜ 次式： ％式％ で表されるしＣＭＬｌｌ、Ａｒｇ”、Ｎｌｅ”Ｊ−ｒＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ Ｉを、実施例１に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使って ＭＢＨｌｔ（脂にで段階的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ 　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例２８ 次式： ％式％ で表されるｂＧＲＦ類似体フラグメントＣＤ−ＮＭＡ２、Ｃ”ＭｅＶａＪ”、Ｃ ＭＡＩ９、ＣＭＬ”、Ｎ　ｌ　ｅ”、Ａｓ　ｎ”　〕−ｈＧＲＦ　（１−２９） −ＮＩ−（、を、実施例１に記載されるよ５に、ベックマン９９０ペプチド合成 機を便ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはＴ　Ｌ　 ＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例２９ 次式： ％式％ （１−２９）　−ＮＨ２ｈａｖｉｒ＋ｇ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍｕｌａ　：を、実施 例１に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹 脂上で段階的方法により合成した。本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用 いて実質的に純粋であることが判明した。〔α）、＝−４３，５°±１（ｃ＝１ ．１％酢酸）実施例３０゜ 次式： ％式％ を、実施例１に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使つ゛〔 ＭＢＩＩＡｆｆ＋脂上で段階的方指上より合成した。本ペプチドは’Ｉ”　Ｌ　 ＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例３１ 次式： ％式％ ＣＭＬ’）：）　−ｒＧＲＦ　（１−４３）−０Ｈ’ａ？、実施例３に記載され るように、ベックマン９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で段階的方 法により合成した。

本ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明 した。

実施例３２゜ 次式： ％式％ で表さ才するｈＧＲ［”Ｕ似体フラグメ：ｌ）　［Ｎ”ＭｅＴｙｒ’、Ａｌ　ａ ”、Ｃ’ＭＬ”、Ｎｌｃ”、Ａｓ　ｎ”］−ｈＵＲＦ　（１−２９，）　−１Ｎ Ｉ−１，’；＜、実施例トベールらの米国特許１Ｊｉ４，２９２；う１３情盲； 「１軟、さえ１．３百５Ｖこ、ベラ外マン９９（）ペプチド合成機りで使つ（Ｍ ＢＨＡｍ（脂）−で段階的、５法により合成した。本ペプチドはｒｒ、ｅ＊；よ びＨｉ）　Ｌ　Ｃ欠相いて実質的に絣、粋Ｃ１、ト）イ）ことが１１」明した。

精製１−た“くブイドの比旋尤ルーを・光電旋ｔｉｆｆ↑で測定し、ｆ−とにｌ ）（］α］、、＝−−４４，０°土１（ｃ・−・１．１０．。酢！！！！りで、 ＄）つた。

実施例３３ 次式： ％式％ で衣さｔ已ｈ　Ｇ　ＲＦ類似体フラグメ゛／）　［Ｎ”ＭｅＴｙｒ’、ＣｈＩＬ ”、Ａｌａ”。

ＣＭＬ”、Ａｓｎ”）−ｈＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ，を、実施例トベー　ルら の米国特許第４２９２３１３号に記載されるように、ベックマン９９０ペプチド 合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂１で段階的方法により合成１〜た。本ペプチドＴ　 Ｉ、　ＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用いて実質的に純粋で麦〕ることが判明した。

実施例３４ 次式： ％式％ （１−２９）−Ｎｌ２を、爽り例１に記載されるように、ベックマン９９０ペプ チド合成機ケ使つ′″ＣＭＢ）−ＩＡ樹脂指上段ｈ′的方法により合成した。本 ペプチドはＴＬＣおよびＨＰ　１．　Ｃ”を用も・て実質的に純粋であることが 判明した。精製１−たペプチドの比旋光度を光電比旋ｔｉｔで測定［ゴニところ Ｃ（１］　、＝−４５，５°±１（ｃ−・１．１％酢酸）であった。

次式： ％式％ （１−２９）　−ＮＨ２？、実施例１に記載されろ、ｊ　５に、ペソ、クマ゛７ ９９（ｌベグブード自成機な使ってＭ　Ｉ３１１　Ａ樹月旨士で段階的方法によ り合成した。本ペプチドはＴ　Ｌ　ｅ寸、；よびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋 であることが判明ｊゴニ。ｔｆ４製したベプブードの比旋光度を光電旋尤計で油 ｊ定したとこう、［α：］、−４９．０°±１（Ｃ−１，１％酢酸）であった。

次式： ％式％ （１−２９）−ＮＨ２を、実施例ＩＫ記載されるように、ベックマン９９０ペプ チド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で指上的方法により合成した。本ペプチドは Ｔ　Ｌ　ＣおよびＨＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明りまた。

実施例３７ 次式： ％式％ （１２９）　−１’ＨＩｔを、実施例１に記載されるように、ベックマン９９０ ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で指上的方法により合成１−た。本ペプ チドはＴ　Ｌ　ＣおよびＩ■ＰＬＣを用いて実質的に純粋であることが判明した 。精製１〜たペプチドの比旋光度を光電旋光計を用（・て測定したところ、〔α 〕い＝−４５，０゜±１（ｃ＝１．１％酢酸）であった。

次式： ％式％ ｈ　ＧＲＦ　（１２９）−ＮＨ２を、実施例１に記載されるように、ベックマン ９９０ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂−トで段階的方法により合成した。

本ペプチドはＴ　Ｌ　ＣおよびＩｆ　Ｐ　Ｌ　Ｃを用（・て実質的に純粋である ことが判明した。

実施例３９ 次式： ％式％ −ＮＩＩｔ’ａ：、実施例１に記載さオｌるよ５に、ベックマン９９０ペプチド 合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で指上的方法により合成した。本ペプチドはＴＬ ＣおよびＨＰ　Ｉ、　Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明した。

実施例４０゜ 次式： ％式％ ｈ ＧＲＦ（１２９）−ＮＨ２を、実施例１に記載されるように、ベックマン９９０ ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で指上的方法により合成した。本ペプチ ドはＴ　Ｉ、　ＣおよびＨＰ　Ｌ　Ｃを用（・て実質的に粋粋であることが判明 した。

次式： ％式％ （ｉ−２９）−Ｎｉ（２’ｒ、実施例１に記載されるように、ペックマン９９０ ペプチド合成機を使ってＭＢＨＡ樹脂上で指上的方法により合成した１、本ペプ チドはＴＬＣおよびＨＰ　ｌ、Ｃを用いて実質的に純粋であることが判明しまた 。

実施例４２ 次式： ％式％ で表される４０残基からなるペプチド［：Ｃ”ＭｅＨｉｓ’、Ｉ）−ＮＭＡ”、 ＣＭ　Ｌ　２７　］−ｈＧＲＦ　（ｉ　−４４）　−Ｎｌ−ｉｚ　を、ベールら の米国特許第４，２９２，３１３号に記載されるように、ペックマン９９０ペプ チド合成機を使ってＭ、　Ｂ　ＨＡ樹脂上で段階的方法により合成した。本ペプ チドはＴ　Ｌ　ＣおよびｎＰｉ、ｃｗ用いて実質的に純粋であることが判明した 。

実施例でｍＶした合成ペプチドは、インビトロ検定によって、合成ｈｐＧＲＦ（ １−４０）−ｏＨに比べて一般にＧＨの分泌に対する１智が大きく本質的な活性 は似て（・ることか判明し、た。これらの合成ペプチドは全て生物学的に活性で あり、下垂体によるＧＨの分泌を幼果的に刺激する有用な化合物であると考えら れる。

成長ホルモンの分泌を便通する代表的な合成ペプチドの相対効力を決定するため に、標品として合成ｈｐＧＲＦ（１−４０）−ＯＨを用いて等モル凍度の代表的 な合成類似体と並行比較することによりインビトロ検定を行った。ここでは、試 験の３から５日前に摘出したラット下垂体細胞を含む培養物を使用した。比較試 験のために成長ホルモンの分泌が最適であると考えられる培養物を、ベールらの Ｅｎｄｏｅｒｉｎｏｌｏｇｙ、　９１．５６２−５７２（１９７２）　に記載さ れ、またベー・八記載さオ（る一般的方法により使用した。試験する物質とのイ ンキュベーションは３から４時間行な（・、培地アリコートをとり出して、それ らの免疫反応性ＧＨ（ｉ　ｒ　ＧＨ）の含有値を周知のラジオイムノアッセイで 測定するために処理し九等七ル礎度の比較試験の結果を表１に示す。

第　１　表 ｈＧＲＦ（１−４０）−ＯＨ （標準）１．。

（、Ｎ　ａＭ　ｅ　Ｔ　ｙ　ｒ　’　＋　Ａ　Ｉ　ａ　１５ｒ　ＣＭ　Ｌ”　＋ 　１０，００　（５，２２０−１）Ａ、、ｓ＋戸１）　ｈＧＲ，Ｆ（１２９）　 ＮＨｔ・ＣＮａＭｅＴｙｒ’、ＡＩａ”、ＣＭＬ”、　６．４４（４，０−１０ ，３）ＩＬＩｅ″、Ａｓｎ”’）−ｈＧＲＦ（１２９）−Ｎｌ２・［：ＮａＭｅ Ｔｙｒ’、Ａｌａ＋５　、ＣＭＬ’）　、　５．４　１　（３，５−８，３）Ｎ ｌｅ２フ、Ａｓｎ”）−ｈＧＲＦ（１２９）−Ｎｌ２・［Ｎ”ＭｅＴｙｒ’、Ｃ ＭＩ、’　、　Ａ　Ｉ　ａ”　、　３．５９　（２，３−５，５）Ｎｌｅ”、Ａ ｓｎ”：］−ｈＧＲＦ（１−２９）−Ｎ１１２・成長ホルモン分泌のインビトロ 試験の他に、合成ペプチドをウレタンで麻酔した雄ラットに静脈注射してインビ ボ試験を（−だところ、外因のＧＲＦに対する反応は継続しながら自発的なＧＨ 分泌は抑えられることが判明した。血液サンプルは注射前、注射後１０分、３０ 分、６０分後直ちに採取し、血液中のＧＨレベルをラジオイムノアッセイで測定 しだ。かかるインビボ試験によって、各々の合成ペプチドはｈｐ（３ＲＦ（１− ４０）−ＯＨに比べて生物学的効力が大きいことが判明した。これらの合成ペプ チドは、静脈注射から３０分および６０分後の血液中の下垂体ＧＨのレベルによ って示されるように、実質的な効果がより長く持続する。ＧＩ−（分泌を検出す るのに効果的なものとして知られる他のＧＲインビボ試験を、以上の結果を確紹 するために行った。ＧＨ分淋を促すのに効果的な上記ペプチドの投与量は体重１ 貯あたり約５００ナノグラムから約５０ナノグラムであると考えられる。

この種の合成ｈＧＲＦ類世体およびおそう（ｒＧＲＦ類似体は医師が０１４産土 を高めることを望むヒトへ適用するのに有用であろう。この種の類似体によるＧ Ｈ分泌の刺激は、内因性ＧＲＦの産生低下に起因する完全または相対的ＧＨ欠乏 症を有する患者を対象としている。さらに、増大したＧＨ分泌およびそれに伴う 成長増加は正常のＧＩ−ルベルを有するヒトまたは動物に現われるであろう。ま た、投与は身体の脂肪含蓄を変化させ、その他のＧＨ依存性の代謝、免疫および 発生過程を変更させるであろう。例えば、これらの類似体は火傷を負ったような 情況下にあるヒトの同化過程を刺激する手段と１７て有用でありうる。他の例と してこれらの類似体は鶏、七面鳥、豚、ヤギ、牛および羊のような商業用温面動 物に、または魚や例えばウミガメやウナギのよ５な冷血動物および両生類の養殖 に、有効蓋の本ペプチドを与えることにより成長をはやめ且つタンパク質対脂肪 の比を高めるために使用し５る。

ヒトに投与する場合、これらの合成ペプチドは少なくとも約９３％、好ま（−＜ は少なくとも９８％の純度をもつべきである。本明細書において純度とは意図す るペプチドが存在する全てのペプチドおよびペプチドフラグメントの表示ｌ菫％ を′占めることを意味する。この種の合成ペプチド￥商業用または他の動物に成 長促進および脂肪含量低下の目的で投与する場合は、低い純度も許容しうるかも 知れなし・。

これらの合成ペプチドまたはその無毒性塩は、医薬組成物をつくるために薬学的 または獣医学的に受容さオ′【るキャリアーど混合されて、ヒトを含めた動物へ 動脈内、皮下、筋肉内、経皮的（例えば鼻控内）、または経口的にさえ投与する ことができる。投与は治癒しようとする受容者がこのような治療上の処置を必要 とする場合にＧＨの放出を刺激すべく医師により行われる。必要な投与量は治癒 しようとするそれぞれの症状、その症状の程度、および治療の持続時間により変 化するであろ５゜ この種のペプチドは無毒性塩、例えば酸付加塩または亜鉛や鉄などとの金属錯体 （本明細書においては金槁錯体も塩として考える）の形でしばしば投与される。

酸付加塩の例は塩酸塩、懺酸塩、リン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩 、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、アヌコルビン酸塩、酒石酸塩などであ る。

活性成分を錠剤の形で経口的に投与する場合、錠剤はトンガカント、トウモロコ シでんぷんまたはゼラチンのような結合剤；アルギン酸のような崩壊剤：および ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤を含み５る。液体での投与が望まれる 場合は甘味料および／または風味料を使用することができ、また等張塩水やリン 酸緩衝液での静脈内投与を行うこともできる。

本ペプチドは医師の指導のもとでヒトに投与されるべきであり、医薬組成物は通 常薬学的に受容される慣用の固体または液体キャリー１−と共にペプチドを含む だろう。・一般に、非経口投与蓋は受容者の体重１人ｌあたりペプチド約ｏ、ｏ ｉ〜約１μｍであるだろう。

かかるペプチドを長時間（例えば単回投与で１週間から１年）提供するのも好ま しい。徐放性′￥有するデボ−製剤や埋込み製剤とすることができる。例えば、 投与製剤は、例えば高分子塩基酸の酸付加塩、多価金槁カチオンの塩またはこれ らの塩を組み合わせたものなどの体液における安定性が低い化合物の薬学的に受 容し得る塩を含有することができる。比較的不含性の塩はゲル（例えばステアリ ン酸アシミニウムゲル）中で製剤してもよい。投与用として適切な徐放性デポ− 製剤は、例えば米国特許第３，７７３，９１９号に記載されるようなポリ酢酸／ ′ポリグリコール酸のような分解速度が遅い非責性または非抗原性のポリマー内 に分散またはカプセル化したペプチドを言有していてもよい。これらの化合物は また、シラスティック埋込み製剤中に入れてもよい。

流を使用してヒトに経皮的にペプチドを投与することも可能である。例えば、９ ボルトのバッテリーを使用して０．２ミリアンペア−の電流をヒトの皮膚に流し 、それＫよって表皮から血液中にペプチドを効果的に入れるようにした経皮投与 用器具を使用してもよい。

本発明を本発明者が認める最もよい方法である好適な実施態様で説明してきたが 、当分野での通常の知脈を有する者に明らがないろいろな変更および修飾が特許 請求の範囲に記載する本発明の範囲から逸脱することなくされ５ることを理解す べきである。例えば、ペプチド鎖の修飾、とりわけペプチドのカルボキシル末端 から始まり大体２９位までの欠失は今までに知られた実験慣習に従って行われ、 それによりペプチドの生物学的効力の全てがまさに本質的部分を保持するペプチ ドやペプチドフラグメントがつくり出され、この種のペプチドも本発明の範囲内 に含まれると考えられる。さらに、両末端あるいはそのいずれかでの付加も行わ 才１、かつ／またペプチド化学の分野でよく知られるように自然界に存在する残 基の代わりにほぼ均等の残基な用いて、タンパク質の加水分解に対して増強され た抵抗性を有し、また本発明の範囲を逸脱しない請求されたポリペプチドの効力 の少なくとも本質的部分を有する他の類似体を製造することができる。さらに現 在の技術によってＣ末端の好まし７いＮｌ２基に対する修飾を行ってもよい。例 えば、Ｃ末端のアミノ酸残基のカルボキシル部分は−ＣＯＯＲ１，ＣＲＯ１−Ｃ ＯＮ）ＩＮＨＲ１口低級アルキルまたは水素である）とすることができる。この ような修飾を行っても合成ペプチドの効力は変わらないことから、かがる修飾も 本発明の範囲を逸脱するものではない。

本発明の様々な特徴は上述の特許請求の範囲において強調される。

■続補正書く方式） １．事件の表示 ＰＣＴ、”ＵＳ９（Ｌ・’０２２２４ 平成　２年特誇願第５０７１−０２号 ２、発明の名称 ＧＲＦ類似体　ＶＩＳＡ １う４補■−をする考 事件との関係　特語出願人 バイオロジカル・スタディーズ ５、補正命令のｌ付　１’成　′３年１（）月　８Ｅ］（発送日）６、補１１１ の対象 （１）出願人の代表名名を記載した国内書面膚ＰＦＡｉ＋ｉ＋査報告 ｍｌｍｖｌ−ｅｓｌｌ＾−””’−”’−ＰＣＴ／ＵＳ　９０１０２２２４国際 詞青報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下式で表わされる合成ペプチド。 【配列があります】； 【配列があります】； 【配列があります】；または 【配列があります】 ２．次のアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたはその無毒性塩。 【配列があります】 （上式においてＲ１はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、ｐＣ ｌ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、ＨｉｓまたはＤ−Ｈｉｓ；ＢはＨ、ＣａＭｅ、ＮａＭｅ、 デスアミノ（ｄｅｓａｍｉｎｏ）、ＡｃまたはＦｏｒ；Ｒ２はＡｌａ、Ｄ−Ａｌ ａ、ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡ；Ｒ３はＡｓｐまたはＤ−Ａｓｐ；Ｒ５はＩｌｅま たはＬｅｕ；Ｒ８はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ＡｓｐまたはＧｌｕ；Ｒ １０はＴｙｒ、Ｄ−ＴｙｒまたはＰｈｅ；Ｒ１２はＡｒｇまたはＬｙｓ；Ｒ１３ はＩｌｅ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＡｌａ；Ｒ１５はＧｌｙまたはＡｌａ；Ｒ１８ はＳｅｒまたはＴｙｒ；Ｒ２１はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、ＡｒｇまたはＤ−Ａｒｇ ；Ｒ２２はＬｅｕ、Ｉｌｅ、ＡｌａまたはＶａｌ；Ｒ２４はＧｌｎまたはＨｉｓ ；Ｒ２５はＡｓｐまたはＧｌｕ；Ｒ２６はＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ２７はＭｅｔ 、Ｄ−Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＮｖａまたはＶａｌ；Ｒ２８ はＡｓｎまたはＳｅｒ；Ｒ３４はＳｅｒまたはＡｒｇ；Ｒ３８はＡｒｇまたはＧ ｌｎ；Ｒ３０はＧｌｙまたはＡｒｇ；Ｒ４０はＡｌａまたはＳｅｒ；Ｒ４２はＰ ｈｅ、ＡｌａまたはＶａｌ；Ｒ４５はＡｓｎまたはＡｒｇ；Ｒ４４は天然アミノ 酸；Ｑ１〜Ｑ９はそれぞれＨまたはＣａＭｅ；但し、Ｒ３０からＲ４４までの残 基のいずれかあるいは全てはＣ末端から始まる配列中で削除されていてもよく、 また、Ｑ１、Ｑ４、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９のうち少なくとも１つはＣａＭｅであ る。）３．Ｒ２７がＮｌｅであり、Ｒ３０〜Ｒ４４の残基が削除されている請求 項２のペプチド。 ４．Ｒ１５がＡｌａであり、Ｒ２８がＡｓｎである請求項２のペプチド。 ５．Ｑ１がＣａＭｅである請求項２のペプチド。 ６．Ｑ４がＣａＭｅである請求項２のペプチド。 ７．Ｑ７がＣａＭｅである請求項２のペプチド。 ８．Ｑ８がＣａＭｅである請求項２のペプチド。 ９．Ｑ９がＣａＭｅである請求項２のペプチド。 １０．次のアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたはその無毒性塩。 【配列があります】 （上式において、Ｒ１はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｈｉｓまた はＤ−Ｈｉｓ；ＢはＨ、ＣａＭｅまたはＮａＭｅ；Ｒ２はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、 ＮＭＡまたはＤ−ＮＭＡ；Ｒ８はＳｅｒ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐまた はＧｌｕ；Ｒ１０はＴｙｒ、Ｄ−ＴｙｒまたはＰｈｅ；Ｒ１２はＡｒｇまたはＬ ｙｓ；Ｒ１３はＩｌｅ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＡｌａ；Ｒ１５はＧｌｙまたはＡ ｌａ；Ｒ１８はＳｅｒまたはＴｙｒ；Ｒ２１はＬｙｓ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ａｒｇまた はＤ−Ａｒｇ；Ｒ２２はＬｅｕ、Ｉｌｅ、ＡｌａまたはＶａｌ；Ｒ２４はＧｌｎ またはＨｉｓ；Ｒ２５はＡｓｐまたはＧｌｕ；Ｒ２７はＭｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ 、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＮｖａまたはＶａｌ；Ｒ２８はＡｓｎまたはＳｅｒ；ＹはＮ ＨＲ（ＲはＨまたは低級アルキル）；Ｑ１〜Ｑ９はそれぞれＨまたはＣａＭｅ； 但し、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−ＧｌｙまたはＧｌｎ−Ｇｌｎ−ＧＩｙががＣ末端で削除 されていてもよく；また、Ｑ１、Ｑ４、Ｑ７、Ｑ８およびＱ９のうち少なくとも １つはＣａＭｅである。）発明の詳細な説明