JPH04235144A - 新生物病の処置用のジフルオログルタミン酸とフォ−レ−ト類及びアンチフォ−レ−ト類とのコンジュゲ−ト類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【産業上の利用分野】本発明は、フォ−レ−ト類（ｆｏ
ｌａｔｅｓ＝葉酸類）及びアンチフォ−レ−ト類（ａｎ
ｔｉｆｏｌａｔｅｓ）とジフルオログルタミン酸との新
規なコンジュゲ−ト類、これらのコンジュゲ−ト類の新
生物病の処置への用途、及びコンジュゲ−トの調製に使
用される中間体類に関する。

【従来の技術】フォ−レ−ト類とＭＴＸ１のような古典
的なアンチフォ−レ−ト類は、酵素フォリルポリグルタ
メートシンセターゼによって、ポリ（γ−グルタミル）
代謝物に細胞内で転化される。ＰｔｅＧｌｕｎ　＋　Ａ
ＴＰ　＋　Ｌ−Ｇｌｕ　→　ＰｔｅＧｌｕｎ＋１　＋　
ＡＤＰ　＋　Ｐｉフォリルポリグルタメートがフォ−レ
−ト代謝の適切な機能に必須であることが現在知られて
おり、また抗フォリルポリグルタメートがＭＴＸのよう
な古典的なアンチフォ−レ−トの細胞毒性作用に密接に
結びついているから、フォリルポリグルタメート合成酵
素はフォ−レ−トの生化学や生化学的薬理学の研究にと
って重要な酵素となった。この点で、プテロイル及びＬ
−グルタメート基質に対するこの酵素の特異性が広範囲
に検討された。プテロイル基質にとって、複素環成分の
構造はかなりの範囲に及んでいるが、末端Ｌ−グルタメ
ート残基は、現在までの全報告中で、基質活性に絶対的
に必要であることが示された。入ってくるアミノ酸に対
する特異性は厳密ではあるが、絶対的ではない。Ｌ−ホ
モシステイン酸とＤ，Ｌ−エリスロ−又はＤ，Ｌ−スレ
オ−４−フルオログルタメートは、いずれも効率的な代
わりの基質として役立つが、各場合とも取り入れによっ
て連鎖の停止が起こる。４−フルオログルタメートジア
ステレオマー類による連鎖停止は、γ−グルタミル受容
体部位でＬ−グルタメートに対するきびしい特異性を例
証している。Ｆ２Ｇｌｕは、基質として［３Ｈ］Ｇｌｕ
とメトトレキセート（４−ＮＨ２−１０−ＣＨ３Ｐｔｅ
Ｇｌｕ）又はテトラヒドロフォレートを使用する、ポリ
（γ−グルタミル化）の濃度依存的な効力のある抑制剤
である。出願人らは、Ｆ２Ｇｌｕが代わりの基質として
作用することを決定したが、すでに特性化された代わり
の基質である４−フルオログルタメート［マクガイア（
ＭｃＧｕｉｒｅ）及びコワード（Ｃｏｗａｒｄ）、Ｊ．
　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．　２６０巻６７４７頁（１９
８５年）とは対照的に、これはポリグルタメートの連鎖
伸長を停止させない。代わりに、Ｆ２Ｇｌｕは連鎖伸長
を促進する。このため、１個及び２個の追加アミノ酸残
基を含有する［３Ｈ］メトトレキセートからの生成物の
合成は、Ｇｌｕの存在下における同一反応に比べて、Ｆ
２Ｇｌｕの存在下では実質的により速い速度で起こる。 すなわち、２個の追加残基を含有する生成物に対して、
より顕著である。増大する付加速度は、単に内部Ｇｌｕ
へ、又は事前に取り入れられたＦ２ＧｌｕへＦ２Ｇｌｕ
を結合させることの関数ではない。というのは、Ｇｌｕ
の４−ＮＨ２−１０−ＣＨ３ＰｔＧｌｕ−γ−（３，３
−ジフルオログルタメート）への結合も強化されるから
である。これらの結果は、入ってくるアミノ酸（グルタ
メート類似体）又はγ−グルタミル受容体種の水準でポ
リ（γ−グルタメート）代謝物の合成を強化するＦ２Ｇ
ｌｕと一致している。このように、Ｆ２Ｇｌｕはフォリ
ルポリグルタメート合成酵素によって触媒される連鎖伸
長を強化する第一のグルタメート類似体である。

【発明が解決しようとする課題】化合物３，３−ジフル
オログルタメート（Ｆ２Ｇｌｕ）は、式１

【化４】 ［式中Ｒ１は−ＮＨ２、Ｈ、又は−ＣＨ３であり；Ｒ２
は−ＮＨ２又は−ＯＨであり；Ｒ３はＨ、（Ｃ１−Ｃ４
）アルキル、アリル、又はプロパルギルであり；　また
Ｘ、Ｙ及びＺは各々独立に、窒素原子又はＣＨ基である
］のあるフォ−レ−ト類及びアンチフォ−レ−ト類との
コンジュゲ−ト、又は製薬上受け入れられるその塩類の
調製に使用される。構造１のコンジュゲ−トは腫瘍と乾
せんの処置に有用である。更に、化合物Ｆ２Ｇｌｕ及び
あるＰＡＢＡ−Ｆ２Ｇｌｕ化合物類は、式１化合物の調
製に使用される中間体である。

【課題を解決する手段】本発明化合物類のジフルオログ
ルタメート部分は非キラル中心をもっており、従って本
発明化合物類は立体化学的異性体の対として存在する。 Ｌ−グルタミン酸の天然立体配置に対応するエナンチオ
マーが好ましいが、出願人らは個々の異性体類と、ラセ
ミ混合物を含めた個々の異性体類の混合物が、本発明の
範囲内にあることを意図している。他に指示がなければ
、本出願の化合物類は２異性体類の混合物である。更に
、ＺがＣＨ基で、Ｒ３が水素以外の場合の式１化合物類
は、第二の非キラル部位をもっている。この第二の非キ
ラル部位についての立体化学配置は決定的ではなく、出
願人らはここでも、別個の異性体と混合物が本発明の範
囲内に包含されることを意図している。この第二の非キ
ラル部位に関する異性体のラセミ混合物が好ましい。式
１化合物類は２個のカルボン酸部分を含有し、一塩基性
又は二塩基性の塩類を形成できる。例として、これらの
塩類はアルカリ金属、例えばナトリウムとカリウム；カ
ルシウムとマグネシウムのようなアルカリ土類金属；ア
ルミニウムを包含する第ＩＩＩＡ族の軽金属；及び第一
級、第二級及び第三級有機アミン類、例えばトリエチル
アミンを含めたトリアルキルアミン、プロカイン、ジベ
ンジルアミン、１−エテナミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジル
エチレンジアミン、ジヒドロアビエチルアミン、Ｎ−（
低級）アルキルピペリジン、及びその他任意適当なアミ
ンの塩類を包含する。ナトリウム塩が好ましい。式１化
合物類は無毒性の有機又は無機酸との製薬上受け入れら
れる酸付加塩類も形成できる。適当な塩類を形成する例
示的な無機酸類は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、及
びオルト燐酸一水素ナトリウムと硫酸水素カリウムのよ
うな酸金属塩類を包含する。適当な塩類を形成する例示
的な有機酸類は、モノ、ジ、及びトリカルボン酸類を包
含する。このような酸類の例は、例えば酢酸、グリコー
ル酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタ
ール酸、フマール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ア
スコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安
息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸、
サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、及びメタンスル
ホン酸と２−ヒドロキシエタンスルホン酸のようなスル
ホン酸類である。塩酸塩が好ましい。式１化合物類は、
式２

【化５】 ［式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、Ｙ、及びＺは式１化合物
類について上に定義されたとおり］のフォ−レ−ト又は
アンチフォ−レ−トと、式３

【化６】 のｔ−ブチルエステル誘導体、すなわちＦ２Ｇｌｕ（Ｏ
ｔＢｕ）２のような適当に保護されたＦ２Ｇｌｕの誘導
体との反応の生成物から保護基を除去することによって
調製できる。式２化合物と式３の保護されたＦ２Ｇｌｕ
誘導体とのカップリングは、アミンとカルボン酸とから
アミドをつくるための任意適当な方法で達成できる。出
願人らは、ジエチルホスホロシアニデート（（ＥｔＯ２
）２Ｐ（＝Ｏ）ＣＮ）を使用して、式２及び３化合物類
をカップリングした。この反応は、適当な式２化合物の
溶液を（（ＥｔＯ）２Ｐ（＝Ｏ）ＣＮ）とピリジン又は
好ましくはトリエチルアミンのような酸除去剤の溶液に
添加（徐々に滴加）することによって実施される。生ず
る混合物を、約０℃〜約６０℃、好ましくは周囲温度で
、約１時間ないし約１０時間、好ましくは約２〜約５時
間、式２化合物が実質的にホスホロシアニデートと反応
するまで反応せしめる。次に、この混合物にＦ２Ｇｌｕ
（ＯｔＢｕ）２の溶液に加え、生ずる反応を約２４時間
ないし約１００時間、一般的には約０℃ないし約６０℃
、好ましくは周囲温度で約７２時間進める。粗生成物を
、例えば溶媒蒸発によって単離し、水洗、乾燥する。次
に、ｔ−ブチルエステル保護基を除くために、粗生成物
をトリフルオロ酢酸（混ぜ物のないもの）で処理する。 所望の式１化合物を単離し、例えばカラムクロマトグラ
フィで精製する。上記のカップリング反応に適した溶媒
は、種々の反応体が可溶で、反応に干渉しない任意の溶
媒、好ましくは例えばジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
を包含する。Ｚが窒素原子である場合の式１化合物類を
代わりの方法によって調製できる。その場合、式４

【化７】 ［式中Ｒ３は式１について上に定義されたとおり］のｐ
−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）誘導体を式３化合物のＦ
２Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）２と反応させると、式５

【化８】 ［式中Ｒ３は式１について上に定義されたとおり］の中
間体化合物を生ずる。このカップリングは、マクガイア
ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ１９８９年、４９
巻４５１７−４５２５頁；ガリカン（Ｇａｌｉｃａｎ）
ら、Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．，
ＵＳＡ，　１９８９年、８２巻２５９８−２６０２頁；
パイパー（Ｐｉｐｅｒ）及びモンゴメリー（Ｍｏｎｔｇ
ｏｍｅｒｙ）、Ｊ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．　４２巻（
２号）２０８−２１１頁（１９７７年）；テーラー（Ｔ
ａｙｌｏｒ）ら、Ｊ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　２８巻
９１３−９２１頁（１９８５年）；テーラーら、Ｊ．　
Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．２８巻１５１７−１５２２頁（１
９８５年）；ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら、Ｊ．　Ｍｅ
ｄ．　Ｃｈｅｍ．　３２巻８４７−８５２頁（１９８９
年）に記述された手順など、任意適当な方法で達成でき
る。次に式５中間体を、式６

【化９】 ［式中Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、及びＹは上の式１について定義
されたとおり］のブロモエチル誘導体と縮合させると、
ｔ−ブトキシ保護化合物類がつくられ、ｔ−ブトキシ保
護基を除くために、トリフルオロ酢酸等で加水分解する
と、式１の所望の化合物類が得られる。この反応は、式
５及び６化合物類とジメチルアセトアミド（Ｍｅ２ＮＡ
ｃ）との混合物を約２５℃ないし約８０℃、好ましくは
約５０−５５℃で約２ないし１２時間、好ましくは約４
時間反応させ、次に反応混合物を周囲温度で約６時間な
いし約２４時間、好ましくは約１２時間放置することに
よって達成できる。次に、Ｍｅ２ＮＡｃを減圧下に除去
し、粗製材料を氷浴中に置いて、トリフルオロ酢酸で処
理し、添加が終了してから混合物を室温まで暖める。約
１〜６時間、典型的には約４時間放置後、ＴＦＡを減圧
下に除去すると、式１の所望の粗生成物を生ずる。この
生成物を、例えばクロマトグラフィ（ＮＨ４ＨＣＯ３勾
配によるＤＥＡＥ−セルロース）で精製できる。この縮
合反応は前節に言及された参考文献に、更に完全に記述
されている。特定の封鎖基の選択と利用は、当業者に周
知である。一般に、その後の合成段階中に問題のアミノ
基又はヒドロキシ基を妥当に保護し、所望生成物の分解
を起こさない条件下に容易に除去できるような封鎖基を
選択すべきである。適当なヒドロキシ保護基の例は、Ｃ
１−Ｃ６アルキル、テトラヒドロピラニル、メトキシメ
チル、メトキシエトキシ−メチル、ｔ−ブチル、ベンゾ
イル、及びトリフェニルメチルである。用語Ｃ１−Ｃ６
アルキルとは、直状、分枝状、又は環式配置の１−６個
の炭素原子の飽和ヒドロカルビル基のことである。ベン
ゾイル化誘導体は、ピリジンの存在下に未封鎖化合物を
塩化ベンゾイルと反応させると生成できる。適当なアミ
ノ保護基の例は、ベンゾイル、ホルミル、アセチル、ト
リフルオロアセチル、フタリル、トシル、ベンゼンスル
ホニル、ベンジロキシカルボニル、置換ベンジロキシカ
ルボニル（例えばｐ−クロロ、ｐ−ブロモ、ｐ−ニトロ
、ｐ−メトキシ、ｏ−クロロ、２，４−ジクロロ、及び
２，６−ジクロロ誘導体類）、ｔ−ブチロキシカルボニ
ル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミロキシカルボニル、イソプロピ
ロキシカルボニル、２−（ｐ−ビフェニル）−イソプロ
ピロキシカルボニル、アリロキシカルボニル、シクロペ
ンチロキシカルボニル、シクロヘキシロキシカルボニル
、アダマンチロキシカルボニル、フェニルチオカルボニ
ル、及びトリフェニルメチルである。 好ましいアミノ保護化合物類は、未封鎖化合物を塩化ベ
ンゾイルと反応させてつくられるベンゾイル誘導体、及
び未封鎖化合物を無水酢酸と反応させてつくられるアセ
チル誘導体を包含する。

【発明の効果】本発明は、新生物病にかかった患者の処
置法を提供しており、この方法は式１化合物の抗新生物
有効量を患者に投与することを含めてなる。新生物病に
かかった患者に式１化合物の抗新生物治療有効量を投与
することにより、抗新生物効果が提供される。用語「患
者」とは、ヒトを含めた霊長類、羊、馬、牛、豚、犬、
猫、ラット、及びハツカネズミのような温血動物のこと
である。本明細書で使用される用語「新生物病」とは、
急速増殖する細胞成長ないし新生物を特徴とする異常な
状態又は症状のことである。当業者に周知かつ認められ
た標準的な研究実験的手法及び手順に基づき、また既知
の有用性をもつ化合物類との比較から、式１化合物類は
、一般にメトトレキセート、アミノプテリン、５，１０
−ジデアザフォレート、及びロイコヴォリンのようなフ
ォ−レ−ト及びアンチフォ−レ−トで処置され、ないし
は処置可能であるような新生物病にかかった患者の処置
に有用である。このような新生物病は、急性リンパ芽球
性、慢性リンパ球性、急性骨髄芽球性、及び慢性骨髄球
性を包含するが、これらに限定されない白血病；頸部、
食道、胃、小腸、結腸、及び肺のがんを包含するが、こ
れらに限定されないがん；骨腫、骨肉腫、脂肪腫、脂肪
肉腫、血管腫、及び血管肉腫を包含するが、これらに限
定されない肉腫；無メラニン性及びメラニン性を包含す
るメラノーマ；及び例えばがん肉腫、リンパ様組織型、
小胞細網、細胞肉腫、及びホジキン病のような混合型の
腫瘍形成を包含する。当然ながら、すべての式１化合物
が新生物病状に対して有効であるわけではなく、最も適
した化合物の選択が当業者の能力の範囲内にあり、標準
動物腫瘍モデルで得られた結果の評価を含めて、種々の
因子に依存していることを、当業者は認識しよう。概し
て、式１化合物はフォ−レ−ト及びアンチフォ−レ−ト
で現在処理されている新生物病の処置に有用である。本
発明化合物類は、非共役フォ−レ−ト及びアンチフォ−
レ−ト類より効力が強く、より選択的である。本発明化
合物類の付加的な効力は、グルタミル連鎖伸長を促進す
ることで、有毒なフォ−レ−ト及びアンチフォ−レ−ト
の細胞内蓄積をもたらす化合物類の傾向から生ずるもの
と考えられる。用語「抗新生物効果」及び用語「新生物
病を処置する」とは、新生物の成長ないし増殖を制御し
、またこのような処置の不在下に予想されるより、患者
の生存率を延長させる効果を指す。新生物の成長又は増
殖は、その成長、増殖、又はその転移を鈍化、中断、阻
止、又は停止させることによって制御される。従って、
用語「新生物病を処置する」とは、必ずしも新生物病の
全面的排除を指してはいない。有意の有利な効果である
以上に患者の生存率を延長することは、新生物病の成長
が制御されたことを意味するものと考えられる。上記の
新生物病にかかった患者の処置を行なうには、経口及び
非経口経路を含めて、化合物を生物利用可能とする任意
の形式又は方式で、抗新生物治療有効量の式１化合物を
投与できる。例えば、式１化合物を経口、局所、皮下、
筋肉内、静脈内、皮膚経由、鼻内、直腸から等で投与で
きる。経口投与が一般に好ましい。当業者は選択される
化合物の特定の性状、処置すべき病状、病気の段階、そ
の他の関連する状況に応じて、適切な投与形式及び方式
を容易に選択できる。本明細書で使用される用語「治療
有効量」とは、抗新生物効果を提供するのに有効な、式
１化合物の量を指す。抗新生物治療有効量は、既知手法
を用いて、また類似状況下に得られる結果を観察するこ
とによって、当業者として担当診断医に容易に決定でき
る。抗新生物治療有効量を決定するには、幾つかの要因
が担当診断医に考慮される。これらは哺乳類の種、その
体格、年齢、及び全般的健康；関与している特定的疾病
；病気の程度又は関与；個々の患者の応答；投与される
特定化合物；投与方式；投与製剤の生物学的利用効率特
性；選択される最適投薬計画；同時的薬剤使用；及びそ
の他関連の状況を包含するが、これらに限定はされない
。式１化合物の抗新生物治療有効量は、１日当たり体重
キログラム当たり約０．１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ／日）ない
し約５００　ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にわたると予想され
る。好ましい量は約１〜約２０　ｍｇ／ｋｇ／日の範囲
にあると予想される。 これらの範囲は経口投与での有効量を特に反映している
が、非経口投与での操作可能な範囲をも反映している。 典型的には投与量当たり活性化合物５　ｍｇないし１０
０　ｍｇで、１日に１−４回投与するのが好ましい。メ
トトレキセートその他のフォ−レ−ト及びアンチフォ−
レ−ト薬剤が、急速度の皮膚細胞増殖を特徴とする病気
である乾せんの処置に使用された。式１化合物も同じ根
底の機構によって機能するため、乾せんの処置に価値あ
る新薬剤であると予想される。抗新生物の適量は抗乾せ
んの適量と同じであるが、但し式１化合物を乾せんの処
置に使用する時は、局所塗布が好ましい。化合物は単独
で、又は製薬上受け入れられる担体又は付形剤と組み合
わせた薬学組成物の形で投与でき、その割合と性質は選
択化合物の溶解度及び化学性状、選ばれる投与経路、及
び標準的製薬慣行によって決定される。式１化合物類は
それ自体で有効であるが、安定性、結晶化の便宜、溶解
度の増大等のために製薬上受け入れられる酸付加塩類の
形で処方、投与できる。式１化合物類は、一つ以上の不
活性担体と混和した式１化合物の検定可能な量を含めて
なる組成物で提供できる。これらの組成物は、例えば検
定標準として、ばら荷輸送の都合のよい手段として、又
は薬学組成物として有用である。式１化合物の検定可能
量は、当業者に周知の認められた標準検定手順及び手法
によって容易に測定できる量である。式１化合物の検定
可能量は、一般に組成物の約０．００１ないし約７５重
量％の範囲にあろう。不活性担体は、式１化合物を分解
しないか、そうでない場合はこれと共有的に反応しない
任意の材料でありうる。適当な不活性担体の例は水；高
性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）分析で一般的に
使用できるものなどの水性緩衝液；アセトニトリル、酢
酸エチル、ヘキサン等のような有機溶媒；及び製薬上受
け入れられる担体又は付形剤である。これらの組成物は
、この技術で周知の認められた手法及び方法を利用して
、式１化合物を不活性担体と混合することによって調製
される。更に詳しくは、式１化合物は一つ以上の製薬上
受け入れられる担体又は付形剤と混和した、もしくは組
み合わせた式１化合物の抗新生物治療有効量を含めてな
る薬学組成物で提供できる。薬学組成物類は、製薬技術
で周知の方法で調製される。担体又は付形剤は固体、半
固体、又は液体材料であって、活性成分のビヒクルない
し媒体としての働きをする。適当な担体又は付形剤はこ
の技術で周知である。薬学組成物は経口又は非経口用に
適合され、錠剤、カプセル剤、座薬、溶液、懸濁液等の
形で患者に投与できる。式１化合物類は、例えば不活性
増量剤又は食用の担体と一緒に経口投与できる。これら
をゼラチンカプセルに封入するか、或いは錠剤に圧縮で
きる。経口の治療投与のためには、化合物類を付形剤と
混和し、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤
、懸濁液、シロップ剤、ウエハース、チューインガム等
の形で使用できる。これらの製剤は活性成分の本発明化
合物を少なくとも４％含有すべきであるが、特定の型に
応じて多様に変わりうるもので、単位重量の４％から約
７０％までが好都合である。組成物中に存在する化合物
の量は、適当な投薬量が得られるような量である。本発
明による好ましい組成物及び製剤は、経口適量形式が本
発明化合物５．０−３００　ｍｇを含有するように調製
される。錠剤、丸薬、カプセル剤、トローチ剤等は一つ
以上の次の助剤も含有できる。微結晶セルロース、トラ
ガカントゴム、又はゼラチンのような結合剤；澱粉又は
乳糖のような付形剤；アルギニン酸、プリモゲル、コー
ンスターチ等のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウ
ムやステロテックスのような潤滑剤；コロイド状二酸化
珪素のような滑り剤；及び庶糖やサッカリンのような甘
み剤、またペパミント、サリチル酸メチル又はオレンジ
風味剤のような風味剤も添加できる。適量単位形式がカ
プセルの時には、これは上記の型の材料のほか、ポリエ
チレングリコール又は脂肪油のような液体担体を含有で
きる。その他の適量単位形式は、適量単位の物理的形式
を変更するようなその他種々の材料を、例えば被覆剤と
して含有できる。従って、錠剤又は丸薬は砂糖、シェラ
ック、又はその他の腸内被覆剤で被覆できる。シロップ
剤は、本化合物類のほか、甘み剤として庶糖、及びある
防腐剤、染料、着色剤、及び風味剤を含有できる。これ
らの種々の組成物の調製に使用できる材料は、製薬上純
粋で、使用量において無毒性でなければならない。非経
口の治療的投与のためには、式１化合物類を溶液又は懸
濁液に取り入れることができる。これらの製剤はその重
量の少なくとも０．１％の式１化合物を含有すべきであ
るが、０．１〜約５０％の間で変わりうる。このような
組成物中に存在する化合物の量は、適当な投薬量が得ら
れる量である。本発明による好ましい組成物及び製剤は
、非経口適量単位が本発明化合物の５．０〜１００　ｍ
ｇを含有するように調製される。溶液又は懸濁液は一つ
以上の次の助剤も包含しうる。注射用水、食塩水溶液、
不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プ
ロピレングリコール、又はその他の合成溶媒のような無
菌増量剤；ベンジルアルコールやメチルパラベンのよう
な抗菌剤；アスコルビン酸や重亜硫酸ナトリウムのよう
な酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレー
ト剤；酢酸塩、クエン酸塩、又は燐酸塩のような緩衝液
；及び塩化ナトリウムやデキストロースのような等張性
調整剤。非経口製剤はアンプル、使い捨て注射器、又は
ガラスやプラスチック製の複数投与量バイアルに封入で
きる。特定の一般的有用性をもった構造的に関連する化
合物類の任意の群について言えるように、式１化合物類
にとっても、最終用途への応用において、ある群及び形
態が好ましい。出願人らは、Ｒ１及びＲ２が各々−ＮＨ
２基で、Ｘ、Ｙ及びＺが窒素原子、及びＲ３がメチル基
である場合の化合物類を好ましいと考える。また、Ｒ１
が−ＮＨ２基、Ｒ２がＯＨ基、Ｒ３が水素、ＸとＹが各
々−ＣＨ基で、Ｙが窒素原子である場合の化合物類を、
出願人らは好ましいと考える。 実施例１　　Ｎ−［４−（［（２，４−ジアミノ−６−
プテリジニル）メチル］メチルアミノ）ベンゾイル］−
４，４−Ｄ−フルオログルタミン酸 Ｍｅ２ＮＡｃ（２．５　ｍｌ）中のＮ−ＣＨ３ＰＡＢＡ
−Ｆ２Ｇｌｕ（ＯＢｕ）２（０．２０１　ｍｍｏｌ）と
２，４−ジアミノプテリジン−６−ブロモメチル臭化水
素酸塩（７５　ｍｇ，　０．２２３　ｍｍｏｌ）の混合
物を、５０−５５℃で４時間かきまぜてから、周囲温度
で一夜放置する。Ｍｅ２ＮＡｃを減圧下に除去する。こ
の粗製材料を氷浴中に置き、トリフルオロ酢酸２　ｍｌ
をかきまぜながら添加する。１０分後、反応混合物を周
囲温度に暖め、４時間かきまぜる。 トリフルオロ酢酸を減圧下に除去すると、粗生成物を生
ずる。粗生成物をＮＨ４ＨＣＯ３勾配（１５−６００　
ｍＭ）により、ＤＥＡＥ−セルロース上のクロマトグラ
フィによって精製する。所望の生成物を含有するカラム
流出液を凍結乾燥すると、所望の純粋な生成物を生ずる
。 実施例２　　４−アミノ−４−デオキシ−１０−メチル
プテロイル［Ｄ，Ｌ−エリスロ、スレオ−４，４−（ジ
フルオロ）グルタミン酸］（１，　Ｒ１，Ｒ２＝ＮＨ２
；　Ｘ，　Ｙ，Ｚ＝Ｎ；　Ｒ３＝ＣＨ３）乾燥管を取り
付けた１５　ｍｌ丸底フラスコに、ＤＭＦ（２．５　ｍ
ｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２３μｌ，　０．１６　ｍｍｏｌ）及
びジエチルホスホロシアニデート（２５μｌ，　０．１
６　ｍｍｏｌ）を入れる。次に、ジアミノプテロエート
（１，　Ｒ１，Ｒ２＝ＮＨ２；　Ｘ，Ｙ，Ｚ＝Ｎ；　Ｒ
３＝ＣＨ３）（０．１６ｍｍｏｌ）を添加し、反応溶液
を周囲温度でかきまぜる。３時間後、ジエチルホスホロ
シアニデートの追加５μｌ（０．０４　ｍｍｏｌ）を加
える。Ｆ２Ｇｌｕ（０．１６　ｍｍｏｌ）をＤＭＦ　１
ｍｌに溶解し、反応フラスコに加えて、かきまぜを周囲
温度で７２時間続ける。溶媒のＤＭＦを真空中で除去し
、残留物をＣＨＣｌ３（３５　ｍｌ）に溶解し、未反応
出発材料を除くために、１％ＮＨ４ＯＨ（２　ｘ　２０
　ｍｌ）で洗う。有機層を水２０　ｍｌで洗い、Ｎａ２
ＳＯ４で乾燥し、真空中で蒸発させると粗製封鎖生成物
が提供される。このカップリングされた材料を混ぜ物の
ないＴＦＡ（３　ｍｌ）に溶解し、脱エステル化反応の
進行をＴＬＣで監視する。２４時間後、溶媒ＴＦＡを回
転蒸発によって除去し、残留物を真空中で乾燥する。粗
生成物水２０　ｍｌに溶解し、希ＮＨ４ＯＨでｐＨを８
に調整し、十分に低いコンダクタンスを得るために、試
料容量を１６０　ｍｌにもっていってから、ＤＥＡＥ−
セルロース（ホワットマンＤＥ−５２）カラム（３０　
ｘ１　ｃｍ）に充填する。カラムを水１００　ｍｌで洗
い、所望の式１化合物を１５　ｍＭ　ＮＨ４ＨＣＯ３（
１７５　ｍｌ）と５００ｍＭ　ＮＨ４ＨＣＯ３（１７５
　ｍｌ）から形成される線状勾配でカラムから溶離する
。 実施例３　　β，β−ジフルオログルタミン酸ビス−Ｌ
−ブチルエステル３ａ：　　２，２−ジフルオロペント
−４−エンアミド 還流冷却器とＮ２入口を備えた三つ首フラスコ内のヘキ
サン（２００ｍｌ）中の２，２−ジフルオロペント−４
−エン酸（２７．２　ｇ，　０．２モル）のかきまぜた
溶液に、ＤＭＦ（２０滴、触媒量）と塩化オキサリル（
２０　ｍｌ、０．２３モル）を添加する。混合物を室温
で２時間、それ以上のガス発生が見られなくなるまでか
きまぜる。溶液を氷／塩水浴で冷却し、Ｎ２入口を空の
ＣａＣｌ２管と取り替え（フラスコから吹きでる固体材
料を捕獲するため）、ＮＨ３ガス流をフラスコに通す。 初期の激しい反応がやんだ後、ガス流を３０分維持する
。次に、混合物を水（１　Ｌ）とＥｔ２Ｏ（０．５　Ｌ
）に注ぐ。ガラス器をＨ２ＯとＥｔ２Ｏで洗い、洗浄液
をこの混合物に添加する。セライトを加え、不溶性材料
を濾過によって除去する。相を分離する。Ｅｔ２Ｏ相を
塩水で１回洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮する。水
相をＣＨ２Ｃｌ２で２回抽出する。一緒にした抽出液を
塩水で１回洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、エーテル相の
残留物と一緒にし、濃縮する。残留物を蒸留すると、や
や黄色の油を生じ、これは冷却によって固化する。融点
３３−３５℃。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．０−
６．０（２Ｈ，　ｂｒ．ｄ），　５．７５（１Ｈ，　ｄ
ｄｔ，　Ｊ＝１８，　９，　６Ｈｚ），５．３（２Ｈ，
　ｍ），　２．８７（２Ｈ，　ｄｔ，　Ｊ＝６，　１７
　Ｈｚ）．　　１９Ｆ　ＮＭＲ（δＣ６Ｆ６＝Ｏ）δ　
−　５６．０（ｔ，　Ｊ＝１７　Ｈｚ）．分析：　　Ｃ
５Ｈ７Ｆ２ＮＯの計算値：　Ｃ，　４４．４５；Ｈ，　
５．２２；　Ｎ，　１０．３７．　測定値：　Ｃ，　４
２．０３；　Ｈ，　４．７４；　Ｎ，　９．３３．３ｂ
：　　　２，２−ジフルオロペント−４−エノニトリル
Ｎ２下に氷／塩水浴中で冷却された乾燥ピリジン（２５
　ｍｌ，　０．３１モル）中の上のアミド（３ａ）（２
０．６　ｇ，　０．１５２モル）の溶液に、無水トリフ
ルオロ酢酸（ＴＦＡＡ，　２３．５　ｍｌ，　０．１６
６モル）を１．５時間にわたって滴加する。反応混合物
は固体となり、これを室温で４時間放置する。次に、フ
ラスコをＮ２下に蒸留装置をほどこし、油浴（最終１３
０℃）中で加熱する。留出物を集めると、空気中で煙霧
を発する無色の油　１７．７　ｇを生ずる。沸点７０−
８０℃／７６０トル。ＮＭＲによる分析は、留出物の組
成がニトリル：ＴＦＡＡ：ピリジン（８０：１２：８）
であることを示す。従って、ニトリルの収量は０．１１
６モル（７６％）である。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）
６．０−５．５（１Ｈ，　ｍ），　５．４（２Ｈ，　ｍ
），　２．９３（２Ｈ，ｄｔ，　Ｊ＝６，　１５　Ｈｚ
）．　１９Ｆ　ＮＭＲ（δＣ６Ｆ６＝Ｏ）δ　−　７１
．７（ｔ，　Ｊ＝１５　Ｈｚ）．３ｃ：　　４，４−ジ
フルオロオクタ−１，６−ジエン−５−イルアミン塩酸
塩 臭化プロペニルマグネシウムは、ＴＨＦ（２２５　ｍｌ
）中の臭化１−プロペニル（２７．２ｇ，　０．２２５
モル）をマグネシウム削り屑（５．４７　ｇ，　０．２
２５　ｍｍｏｌ）へ、混合物を温和に保持しながら沸騰
させないような率で加えることによって調製される。添
加が終了したら、混合物を２０分かきまぜ、次いでＴＨ
Ｆ（３００　ｍｌ）で希釈し、−１５℃に冷却する。こ
の混合物に、ＴＨＦ（８０　ｍｌ）中の実施例３ｂで調
製されたニトリル（０．１１６　ｍｍｏｌ）の溶液を、
反応混合物温度が−１５＜Ｔ＜−１０℃の範囲内にとど
まるような率で添加する。混合物をこの温度範囲で更に
１時間かきまぜ、次いで−４０℃に冷却する。ＭｅＯＨ
（６５０　ｍｌ）と水（３０　ｍｌ）中のＮａＢＨ４（
６．４　ｇ，　０．１６９モル）の冷却（−４０℃）溶
液を一度に加える。冷却浴から取りだし、混合物を２時
間かきまぜてから、６Ｎ　ＨＣｌ（８００　ｍｌ）中に
注ぐ。有機溶媒を回転蒸発によって除去し、水溶液をＣ
Ｈ２Ｃｌ２で２回洗う。次に溶液をＮａＯＨペレット（
氷冷が必要）でｐＨ　１０に塩基性化し、ＮａＣｌで飽
和させる。セライトを加え、沈殿したＭｇ（ＯＨ）２を
濾過によって除く。固体残留物をＣＨ２Ｃｌ２で洗う。 濾液をＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出し、一緒にした抽出液と
残留物洗浄液をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、Ｅｔ２
Ｏ／ＨＣｌで酸性化し、蒸発させると、表題のアミン塩
を薄い黄色の固体（３　ｇ）として生ずる。この材料は
この段階で精製されない。 ３ｄ：　　Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニル）−４，４
−ジフルオロオクタ−１，６−ジエン−５−イルアミン
上の実施例３ｃの粗製塩（３５　ｇ）を水（２００　ｍ
ｌ）とジオキサン（２００　ｍｌ）に溶解する。固体Ｋ
ＨＣＯ３を加えると、ｐＨ紙に対して中性な混合物を生
じ、これに更にＫＨＣＯ３（１２　ｇ，　０．１２モル
）とジ−ｔ−ブチルジカーボネート（３４　ｇ，　０．
１５６モル）を添加する。混合物を室温で一夜かきまぜ
、ＮａＣｌで飽和させる。相を分離する。水相をヘキサ
ン（ｘ　３）で抽出する。抽出液を有機相と一緒にし、
水（ｘ　３）で洗う。一緒にした洗浄水をヘキサンで１
回洗う。 この抽出液を有機相と一緒にし、これを塩水で洗い、Ｎ
ａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮する。残留物をフラッシュ・
クロマトグラフィ（溶離剤ＣＨ２Ｃｌ２／ペンタン１／
１）で精製すると、表題のカルバメート（１９　ｇ，　
６５％）を生ずる。Ｒｆ　０．２９（放置後固化する油
として）。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ６．０−５．
５（２Ｈ，　ｍ），　５．５−４．５（５Ｈ，　ｍ），
　２．６７（２Ｈ，　ｄｔ，　Ｊ＝７，　１６　Ｈｚ）
，　１．７３（３Ｈ，　ｄｄ＊，　Ｊ＝７，　１Ｈｚ）
，　１．４７（９Ｈ，　ｓ）．　１９Ｆ　ＮＭＲ（δＣ
６Ｆ６＝Ｏ）δ　−　５３．２（ｍ）．３ｅ：　　β，
β−ジフルオログルタミン酸塩酸塩Ｈ２Ｏ（１．２　Ｌ
）中のＫＭｎＯ４（５２．５６　ｇ，　０．３３モル）
の氷冷溶液に、実施例３ｄで調製されたカルバメート（
１０．９５　ｇ，　０．０４２モル）のＡｃＯＨ（１６
０　ｍｌ）中の溶液を添加する。混合物を室温で一夜か
きまぜ、この間に茶色の固体が沈殿する。固体重亜硫酸
ナトリウムを加えて混合物を脱色し、続いて濃ＨＣｌを
加えるとｐＨ　２の溶液を生ずる。この溶液をＥｔ２Ｏ
（３　ｘ　５００　ｍｌ）で抽出し、次いでＮａＣｌで
飽和させ、更にＥｔ２Ｏで２回抽出する。一緒にした有
機フラクションを塩水で１回洗い、濃縮する。残留物を
１Ｎ　ＨＣｌ（５００　ｍｌ）中に取り上げ、濃縮する
。残留物を再び１Ｎ　ＨＣｌ中に取り上げ、混合物を温
め、活性炭を添加する。混合物を１０分かきまぜ、濾過
し、濾液を乾固まで蒸発させる。残留物を熱いイソプロ
パノールで抽出すると、粗製アミノ酸（２．２２　ｇ）
を生ずる。イソプロパノールに不溶性の材料をＥｔＯＨ
で更に抽出しても、有用な材料を生じない。１９Ｆ　Ｎ
ＭＲ（Ｄ２Ｏ：　δ　ＣＦ３ＣＯ２Ｈ　＝　Ｏ）δ　＋
２３（ｄｄｔ，　Ｊ＝２８０，　５，　２１　Ｈｚ），
　＋２７（ｄｄｔ，　Ｊ＝２８０，　２２，　９　Ｈｚ
），　＋２８（ｔ）；　相対的整数５：５：３）。 ３ｆ：　　β，β−ジフルオログルタミン酸ビス−ｔ−
ブチルエステル 実施例３ｅの粗製の酸（２．２２　ｇ）を酢酸ｔ−ブチ
ル（５００　ｍｌ）に懸濁し、ＨＣｌＯ４（７０％水溶
液２．１６　ｍｌ，２５　ｍｍｏｌ）を混合物に添加す
る。混合物を室温で４８時間かきまぜてから、Ｈ２Ｏ（
２　ｘ　２００　ｍｌ）で抽出する。一緒にした抽出液
をＣＨ２Ｃｌ２（２　ｘ１００　ｍｌ）で洗い、ｐＨ　
１０に塩基性化する（４Ｎ　ＮａＯＨ）。溶液をＣＨ２
Ｃｌ２（３　ｘ　１００ｍｌ）で抽出する。 一緒にした抽出液を塩水で洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し
、容量の１／３に濃縮する。この溶液を、それ以上処理
せずに次段階に使用できる。より完全に蒸発させた試料
は、以下のＮＭＲ値をを示す。　１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ３）δ４．１０（１Ｈ，　ｔ，　Ｊ＝１４Ｈｚ），　
３．１０（１Ｈ，　ｔ，　Ｊ＝１５　Ｈｚ），　３．０
０（１Ｈ，　ｔ，　Ｊ＝１５　Ｈｚ），　１．５（１８
Ｈ，　２ｓ）；　１９Ｆ　ＮＭＲ（δＣ６Ｆ６＝Ｏ）δ
　−　５８．７（ｄｔ，　Ｊ＝１４，　１５　Ｈｚ）． 実施例４　　β，β−ジフルオログルタミン酸塩酸塩乾
燥Ｅｔ２Ｏ（１０　ｍｌ）中の実施例３のＢＯＣ−ビス
−エステル（３００　ｍｇ，　０．７６　ｍｍｏｌ）の
溶液に、飽和Ｅｔ２Ｏ／ＨＣｌ（３　ｍｌ）を添加する
。混合物を室温で６日間かきまぜる（ＣａＣｌ２管保護
）。沈殿する白色固体を集め、Ｅｔ２Ｏで洗う。ＴＬＣ
及びＮＭＲでの分析は、エステル開裂が完了しないこと
を示している。材料を１Ｎ　ＨＣｌ（５　ｍｌ）中に取
り上げ、室温で一夜かきまぜる。反応はまだ完了してい
ない。数滴の濃ＨＣｌを加え、混合物を３日間かきまぜ
る。水を真空中で除去し、残留物をＣＣｌ４との共沸蒸
発によって乾燥する。ジイソプロピルエーテル（ｘ　２
）ですり砕くと、やや緑色の粉末を生じ、これを集めて
Ｐ２Ｏ５で乾燥すると、表題のアミノ酸（１７５　ｍｇ
，　１００％）を生ずる。１Ｈ　ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）信号
は溶媒のため不明瞭。１９Ｆ　ＮＭＲ（δＣＦ３ＣＯ２
Ｈ＝Ｏ）δ　＋２３（ｄｄｔ，　Ｊ＝２８０，　５，　
２１　Ｈｚ），　＋２７（ｄｄｔ，　Ｊ＝２８０，　２
２，　９　Ｈｚ）．　ＭＳ（ＣＩ，　ＮＨ３）ｍ／ｅ　
１８４（ＭＨ＋，　１００％），　１４０（７５％），
　１２０（４０％），　１０２（４０％）．　Ｒｆ　０
．１９（ＨＯＡｃ／Ｈ２Ｏ／ＢｕＯＨ　１／１／３）．

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　式 【化１】 の化合物又はその塩。
2. 【請求項２】　　式 【化２】 の化合物又はその塩。
3. 【請求項３】　　式 【化３】 の化合物又はその塩。