JPH0411896A - 細胞毒性因子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、突起を有する寡突起神経膠細胞の数を減少さ
せることができる新規の寡突起神経膠細胞阻害／細胞毒
性因子に関する。この新しい因子は哺乳動物の中枢神経
系の傷害を受けた神経の再生を促進するのに有用である
。

発明の背景 哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）においては、ニューロ
ンは切断された細筆（ａｔｏｍ）を自然に再生すること
はないが、魚や両生類のニューロンは切断された細筆を
直ちに再生する。哺乳動物のニューロンは生体内（ｉｎ
　ｖｉｖｏ）では細筆を抹消神経ブリッジにかなり再成
長させるため、前記の再生能力の欠如は哺乳動物の中枢
神経系に本質的なものではなさそうである。試験管内（
ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）では傷害を受けた哺乳動物の中枢神
経系の細筆は哺乳動物の視神経の断片上又はその中では
成長せず、魚の視神経又は哺乳動物の抹消神経上又はそ
の中で成長する。従ってこの違いは環境の差異によると
考えられる；哺乳動物の中枢神経系の環境では成長する
ことができず、抹消神経や魚の神経の環境では成長する
ことができる。

視神経はニューロンの細胞体がなく神経が病変に達する
ため、細筆再生における神経膠細胞の役割の研究に好適
なモデルである。ラットの視神経の細胞成分には小神経
膠細胞（ｍｉｃｒｏｇｌｉａ）　　（星状細胞と寡突起
神経膠細胞）と大神経膠細胞（ｍ＊ｃｒＢｌｉａ）　　
（アメーバ状及び分岐した小神経膠細胞）がある。星状
細胞は２つの型に分類され、これらは抗原マーカーによ
り区別される。細胞質性即ち１型星状細胞Ｒａｎ２”、
ＧＦＡＰ＋及びＡ２Ｂ５−であり、繊維質即ち２型星状
細胞細胞はＲａｎ２−１ＧＦＡＰ＋及びＡ２Ｂ５＋であ
る（ミラーとう７　（Ｍｉｌｌｅｒ　ａｎｄ　Ｒａｆｔ
）　、１９８４年；ラフとミラー（Ｒａｆｔ　ａｎｄ　
Ｍｉｌｌｅｒ）、１９８４年）。

２型星状細胞と寡突起神経膠細胞は共通の前駆細胞（０
−２Ａ前駆細胞）を有し、その表現型はＲａｎ２−１Ｇ
ＦＡＰ−及びＡ２　Ｂｓ　”ある。寡突起神経膠細胞／
２型星状細胞系（０−２Ａ前駆細胞に由来）はミニリン
化専用である：寡突起神経膠細胞はミニリンを産生じ、
２型星状細胞はランビニ（Ｒａｎｖｉｅｒ）節の構造に
寄与している。〇−２人前駆細胞は培養基により試験管
内（ｉｎマ１ｔτ０）で寡突起神経膠細胞又は２型星状
細胞に分化させることができる。１型星状細胞は異なる
前駆細胞を有する。

非ニューロン性細胞は中枢神経系環境に関係し、これら
は哺乳動物において中枢神経系再生能の欠如に関与して
いることが示唆されている。これらの細胞は、病変に応
答して肥厚して繊維状の傷を形成する星状細胞と、細筆
の成長に阻害的な寡突起神経膠細胞を有する。星状細胞
性の傷は主に１型星状細胞でできており、物理的障壁を
形成して成長を防ぐと考えられている。しかしながら、
傷の形成の時間経過は長く、傷により形成された傷壁が
傷害直後の細筆の再生成長を阻止するとは考えにくい。

ラットの視神経中の１型星状細胞は、胎児期の視神経の
成長時にラミニン（細筆の成長を支持することが示唆さ
れている）を発現することが証明されている。成長した
哺乳動物の脳の１型星状細胞は、脳の傷害後に一時的に
ラミニンを発現する以外は、普通ラミニンを発現しない
。これに対して再生している魚の視神経中ではラミニン
は絶えず発現されている。試験管内（ｉｎｖｉｔｒｏで
は、細筆は１型星状細胞と接触して成長する。

成熟寡突起神経膠細胞は細筆の成長にノンパーミツシブ
（ｎｏｎｐｅｔ＋ｕｇｓｉｖｅ）であると考えられてい
る。成長している細筆は試験管内（ｉｎ　ｙｉＤｏ）で
成熟寡突起神経膠細胞に接触するのを避ける。成長時に
は、視神経中のほとんどの細筆の成長は、出産前に寡突
起神経膠細胞が分化する前に起きる。

従って魚の視神経に対して、哺乳動物の細筆の再生は成
熟寡突起神経膠細胞（細筆成長に対してノンパーミツシ
ブ（ｎｏｎｐｅｒｍｉｓｓｉｖｅ）である）の存在と、
１型の反応性星状細胞（支持性要素を欠く）により阻害
されるようである。

本発明者らの以前の仕事で、下等脊椎動物の中枢神経系
（具体的には再生している魚の視神経）は、成長した哺
乳動物の傷害を受けた視神経に、適当な時に適当な量適
用された時、再生している細筆の成長を支持できる因子
の供給源であることが証明されている（シュワルツ（Ｓ
ｃｈｗａｒｚｌ　　ら、１９８５年；ハダ＝（Ｈａｄａ
ｎｉ）ら、１９８４年；ラビエ（Ｌａｖｉｅ）　　ら、
１９８７年；コーエン（ＣｏｈｅｎＪ　　ら、１９８９
年）。

ロビング（Ｒｏｂｂｉｎｓ）　ら（１９８７年）は試験
管内（ｉｎ　ｖｉｔｔｏ）でラットの星状細胞を刺激す
ると、機能的に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）に類似の細胞毒
性因子が生成することを報告している。彼らはまたヒト
組換え腫瘍壊死因子はラットの寡突起神経膠細胞に対し
て細胞毒性活性を有することを報告している。セルマジ
（Ｓｅｌｍａｊ）ら（１９８８年）は組換えヒト腫瘍壊
死因子（ｒｈＴＮＦ）の、マウスのを髄組織の軸組を有
する培養物に対する効果について報告している。彼らは
ｒｈＴＮＦは開始の遅れた（ｄｅｌａ７ｅｄ　ｏｎｓｅ
ｔ３寡突起神経膠細胞壊死と１種のミニリン拡張を誘導
することを見つけた。

世界的に充分な研究努力がなされているにもかかわらず
、哺乳動物（特にヒト）の中枢神経系再生を引き起こす
安全で有効な手段はまだ開発されていない。このような
手段、そして特に好適な再生部位に注射される薬剤は、
傷害後の両側痺癒、又は四肢痺癒、盲目、難聴、手術に
関連した細筆切断などを軽減するのに非常に好ましい。

発明の要約 本発明は、寡突起神経膠細胞系に対して選択的に細胞毒
性作用を示し、他の細胞（例えば１型星状細胞や繊維芽
細胞）には細胞毒性作用を示さない、寡突起神経膠細胞
細胞毒性因子（以後ＯＣＦと呼ぶ）に関する。本発明は
またＯＣＦの塩、前駆体、切断及び／又は同族体、モし
てＯＣＦ又はその断片及び／又は同族体の官能基誘導体
に関する。

本発明はまた異なる供給源（例えば再生中の魚の視神経
マクロファージそして他の細胞）からのＯＣＦの単離方
法と、その精製に関する。

別の態様において、本発明はＯＣＦのポリクローナル抗
体及びモノクローナル抗体に関する。

さらに別の態様において本発明は、遺伝子工学技術によ
るＯＣＦの製造方法を与える。

本発明はまた、哺乳動物の中枢神経系の神経の再生に有
効な薬剤組成物の調製に使用される、ＯＣＦ、その塩、
前駆体、断片及び／又は同族体、そしてＯＣＦ又はその
断片及び／又は同族体の官能基誘導体の使用と、こうし
て得られた薬剤組成物に関する。

図面の説明 第１図は成熟ラットの傷害を受けた視神経の培養物中で
の成熟０４陽性細胞への魚ＣＭ−Ｈの効果を示す。細胞
は、成熟ラットの視神経を切除３日前に押しつぶし、規
定培地中でポリーＬ−リジンで被覆したオーバースリッ
プ（０マＣロ１１ｐ）上に接種したものから調製した。

培養物は試験管内（ｉｎｖｉｔｒｏで９６時時間上間接
蛍光抗体法で、０４免疫反応性について染色した。その
実験法は以下の通りである。まず細胞をマウスの抗−０
４抗体で３０分間インキュベートした後、フルオレセイ
ン結合ヤギ抗−マウスＩｇＭでインキュベートした。

２回目のインキュベートの後、細胞を洗浄し、冷メタノ
ール（−２０℃）で１０分間固定した。パネル（１〉　
と＜ｂ＞はそれぞれ、規定培地中の未処理の対照細胞の
蛍光顕微鏡写真と移相差顕微鏡写真である。パネル＜ｃ
＞　、（ｅ）　、（ｆ）そして＜ｇ）は、染色前に４８
時時間Ｍ−Ｒ（１２ｕ　ｇ蛋白／ｍ１）で処理した培養
物中の０４陽性細胞を示す。パネル＜ｃ）と（ｄ＞は同
じ細胞の蛍光顕微鏡写真と移相差顕微鏡写真を示す。写
真は１つの実験から撮ったが、その結果はさらに２回の
実験により再現した。

第２図は、出産１日後のラットの脳のＧａ１ｃ陽性細胞
の試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）成長への、ＣＭ−Ｒの
効果を示す。新生児ラットの脳を解剖して取り出し、マ
カーシーとデベリス（ＭｃＣ＊ｔｔｂ７　ｓｎｄ　Ｄｅ
ｖｅ　ｌ　１目）の方法に従い分解した。試験管内（ｉ
ｎｖｉｊｒｏ）で８日後寡突起神経膠細胞を振り落とし
てポリーＬ−リジンで被覆したオーバースリップ（ｏｖ
ｅｒｓｌｉｐ）上に接種した（マイクロタイタープレー
ト中１０４細胞／穴）。培養物は試験管内（ｉｎマｉｔ
＋ｏ）で２４．４８．７２時時間軸、フルオレセイン結
合ヤギ抗−マウスＩｇＭを用いて間接蛍光抗体法により
Ｇａ１ｃ免疫反応性について染色した。実験培養物では
、ＣＭ−Ｒ（１，２と１２μｇ蛋白／ｍｌ）を接種後の
表示した時間に添加した（矢印で示しである）。それぞ
れの場合にＧａ１ｃ陽性細胞の具体的な数を数えた（毎
日のグラフ上に数を示しである）。対照培養物では、Ｇ
ａ１ｃ陽性細胞の数は実験の間中（２４−７２時間）比
較的一定であり、約７００−８５０細胞であった。培養
の全ての期間中、接種の時に培養基に１．２μｇ蛋白／
ｍｌの濃度のＣＭ−Ｒを添加した時、成熟寡突起神経膠
細胞の成長に阻害効果を示さないことに注目して下さい
。接種時に１２μｇ蛋白／ｍｌのＣＭ−Ｒを添加した時
、顕著な阻害効果（５０％以上）が観察された。接種後
試験管内（ｉｎ　ｖＮｒｏ）で２４時間後にＣＭ−Ｒを
添加した時、さらに試験管内（ｉｎ　ｖＨｒｏ）で２４
時間後に寡突起神経膠細胞の成熟のほとんど５０％の阻
害が観察されたが、この効果は一時的であった。この実
験はさらに２回繰り返したが、定性的に同じ結果が得ら
れた（Ｎ、Ｄ、−実施しなかった）。

第２図はまた、Ｇａ１ｃ陽性細胞の数を免疫蛍光法でな
く、ＥＬ　Ｉ　ＳＡで追跡した場合も阻害効果が再現で
きたことを示している。第２図にはまた、適用したＣＭ
−Ｈの量の関数としての阻害効果の用量応答°曲線が示
されている。

第３図は新生児ラットの脳の寡突起神経膠細胞の培養物
中のＧａ１ｃ陽性細胞の成長に対するＣＭ−ＲとＣＭ−
Ｎの効果の比較を示している。

寡突起神経膠細胞の培養物は前記したように調製し、マ
ルチウェル中に接種した（１０３細胞／マイクロタイタ
ープレート）。試験管内（ｉｎｖＨ＋ｏ）で２４時間後
に表示した濃度でＣＭ−Ｒ又はＣＭ−Ｎを添加した。４
８時間後にまず細胞を３７℃で３０分間Ｇａ１ｃ抗体で
インキユベートシ、次に西洋ワサビペルオキシダーゼ結
合ヤギ抗−マウス抗体（ＨＲＰ−ＧαＭ１バイオメーカ
ー（Ｂｉｏ−Ｍａｋｏｒ）、イスラエル）でさらに３７
℃で３０分間インキニベートして調べた。細胞を洗浄し
１００μｌの基質（２，２−アジノージ（３−エチルベ
ンズチアゾリンサルフェート）（シグマ）を各ウェルに
加えて、結合抗体の量を求めた。タイターチックマルチ
スキャン（Ｔｉｊｅｒ＋ｅｃｈ　Ｍｏ１ｊｉｓｋａ＋＋
）を用いて対照波長を６３０　ｎｍ、測定波長４０５ｎ
ｍで吸光度を測定した。各横棒は３ウエルの平均（±標
準偏差）を示す。比較用の挿入図は、試験管内（ｉｎｖ
日ｒｏ）で２４時間後にＣＭ−Ｒ（１２ｕ　ｇ／ｍｌ）
又はＣＭ　　Ｎ　（１２ｐ　ｇ／Ｈ１）を添加して処理
した培養物中の各オーバースリップ当りのＧａ１ｃ陽性
細胞の数を示す。

第４図は、新生児ラットの脳の寡突起神経膠細胞に対す
るＰＤＧＦとＣＭ−Ｈの効果を比較したものである新生
児ラットの脳の寡突起神経膠細胞は第２図のようにして
得た。全ての培養物で同じ数の細胞を使用した。試験管
内（ｉｎ　ｖＨｒｏ）で４８時間後、培養物をＧａ１ｃ
陽性細胞又はＡ２Ｂ５陽性細胞で染色した。処理した培
養物ではＰＤＧＦ　（５Ｂ／ｍｌ、シグマ）又はＣＭ−
Ｒ（１２μｇ蛋白／ｍｌ）を接種時に添加した。対照と
して、処理しなかった規定培地に維持した培養物を使用
した。蛍光顕微鏡写真は、対照培養物中でマウス　Ａ２
Ｂ５モノクロ一ナル抗体で染色した細胞（ｂ）、ＰＤＧ
Ｆで処理した細胞（り、又はＣＭ−Ｒで処理した細胞（
ｄ）を示している。（ｅ）中の棒グラフは各処理中のオ
ーバースリップのＡ２Ｂ５細胞又はＧａ１ｃ陽性細胞の
具体的に数えた数を示している（スペース棒＝１０μｍ
）。

第５図は、ＣＭ−ＲとＰＤＧＦを組み合わせて適用した
場合のＧａ１ｃ陽性細胞に対する効果を示している。脳
の寡突起神経膠細胞の培養物は第２図と第３図に示した
ように調製した。ＰＤＧＦ（５ｎｇ／ｍｌ）又はＣＭ−
Ｒ（５ｎｇ／ｍｌと１２ｕｇ／ｍｌ）をそれぞれ、接種
後２４時間目に新生児ラットの脳の寡突起神経膠細胞に
添加した。引き続いて表示した時間（２４，４８，９６
時間）に培養物をＧａ１ｃ陽性細胞について染色した。

数字はオーバースリップ当りのＧａ１ｃ陽性細胞の絶対
数を示す。ＰＤＧＦとＣＭ−Ｒを組合せたもので処理し
た時、Ｇａ１ｃ陽性細胞の数が減少していることに注目
して下さい。

第６図は、新生児ラットのＣＭ−Ｒは星状細胞と寡突起
神経膠細胞の混合培養物中の寡突起神経膠細胞に選択的
に影響することを示している。第２図に記載したように
混合神経膠細胞を、新生児ラットの脳から分離し、直ち
にポリーＬ−リジンで被覆したオーバースリップ上に接
種した（１０４細胞／オーバースリツプ）。これらの細
胞は５％ＦＣ８を補足したＤＭＥＭ中で試験管内（ｉｎ
　ｖＨｒｏ）で６日間維持し、これは２日毎に交換した
。６日目に培地を規定培地に交換し、ＣＭ−Ｒ（１０ｐ
　ｇ／ｍｌ）又はＣＭ−Ｎ　（１０ｕ　ｇ／ｍｌ）を補
足した。試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で７２時間と９
６時間目に細胞をＧａ１ｅとウサギ抗−ＧＦＡＰに対す
るマウスモノクローナル抗体で、次にローダミン結合ヤ
ギ抗−マウスＩｇＧとフルオレセイン結合ヤギ抗−ウサ
ギで２重標識した。蛍光顕微鏡写真ｈ）は抗−ＧＦＡＰ
で染色し、試験管内（ｉｎ　ｙｉｔｒｏ）で７２時間後
にＣＭ−Ｒ処理で影響を受けなかった細胞を示している
。顕微鏡写真（ｂ）は各処理（試験管内（ｉｎ　ｖＮｒ
ｏ）で７２時間と９６時間目）のオーバースリップ中の
Ｇａ１ｅ陽性細胞の数を示している。結果は２個のオー
バースリップの平均±標準偏差を示す。顕微鏡写真（ｅ
）と（＋１）は、未処理培養物（ｄ）とＣＭ−Ｒ処理培
養物（ｃ）の典型的な組合せ神経膠細胞の移相差顕微鏡
写真である。ＣＭ−Ｒ非感受性細胞（ｃ）により形成さ
れるモルレーヤー（ＩＩｌｏｎｏｌａ７ｅｔ）が染色さ
れていることに注目して下さい。対照中のＣＭ−Ｒ感受
細胞は集落を形成しており（ｄ、矢印で示しである）、
Ａ２Ｂ５で染色されている（データは示されていない）
。これらの細胞は、おそらくモルレーヤー形成１型星状
細胞に刺激されて増殖した０−２Ａ前駆細胞を示してい
る。

第７図は、魚の神経培養物中の血液由来マクロファージ
を示す。これらのマクロファージは、切断前数日間傷害
を受けた神経の培養物中に最も多く含まれていた。ここ
に示した細胞は１０％ＦＣ８を補足したし一１５培地で
増殖させた。

（＾）はマクロファージを培養７日後にギムザ染色し、
移相差顕微鏡で見たものである。（Ｂ）　と（Ｃ）は培
養５日後の細胞であり、（Ｂ）は移相差顕微鏡写真であ
り、（Ｃ）は固定後に６Ｄ２標識したものである。（Ｃ
）はマクロファージのミニリンに満ちた液胞を示してい
ることに注目して下さい。これらの液胞はまた非特異的
エステラーゼで陽性に染まった（第８図）。顕微鏡写真
はすべて５００×である。

第８図は非特異的エステラーゼで陽性のマクロファージ
を示す。金魚の視神経細胞を前記したように増殖させた
。（Ａ）　、（Ｂ）　、（Ｃ）はおそらく血液由来のマ
クロファージを示している。これらは分離前に臓器培養
した（ｏｒｇａｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ）魚の視神経の培
養物中では少なく、切除の数日前に破砕した魚の視神経
中では多量に存在していた。これらのマクロファージは
典型的には円形をしており、液胞もまた典型的には円形
であった。これらの液胞は６Ｄ２−陽性であり（第７図
のＢ、Ｃ）　、これらの細胞にミニリン食作用活性があ
ることを示唆していた。内在する（ｒｅｓｉｄｅｎｔ）
マクロファージは（Ｄ）　と（Ｇ）に見られた。いろい
ろな形のものが観察され、外観が長い繊維状のもの（Ｆ
）から、もう少し丸いもの（ＤとＧ）まであった。これ
らの細胞の液胞は細胞質の中に均等に分離しており、こ
れらも６Ｄ２−陽性であった。

第９図は分離前に臓器培養した（ｏｒｇａｎｃｕｌｔｕ
ｔｅｄ）魚の視神経の培養物中の内在するマクロファー
ジを示している。図はより丸いもの−（Ａ）から（ＤＪ
から長い繊維状の外観のもの−（Ｅ）までを示している
。（Ｆ）と（Ｇ）に見られるように内在するマクロファ
ージと血液由来のマクロファージの間に接触が観察され
る。（Ｈ）　と（＋）に見られるように、寡突起神経膠
細胞と両タイプのマクロファージの間にも接触が見られ
る。この接触の本質は細胞取り込みであろう（（旧　と
（１））。

（Ａ）、（Ｃ）、（Ｂ）、（Ｆ）そして（Ｈ）は移相差
顕微鏡写真であり、他の顕微鏡写真はすべて６Ｄ２陽性
である。全ての顕微鏡写真５００×である。

発明の詳細な説明 本発明の新規な寡突起神経膠細胞細胞毒性因子は、下等
脊椎動物（例えば魚）の再生中の傷害を受けた神経から
得られる。これは再生中の魚の視神経の調整培地中に存
在し、そこから単離、精製できる。これはまたより入手
しやすいマクロファージや、他の適当な細胞成分から得
ることもできる。これはまた上記細胞源の調整培地から
単離し、精製することもできる。

本発明で使用する［調整培地Ｊ　　（ＣＭ）とは、魚の
視神経の断片を破砕後８日目に取り出し、無血清培地で
室温で１．５−３時間インキュベートし、集めて濾過し
た。得られたＣＭには組織は含まれていなかった。使用
される無血清培地の例としては、ダルベツコ−改変イー
グル培地（ＤＭＥＭ、培地３００μｌ−に対して４個の
視神経）、Ｌ−１５ライボウイツツ（ＬｅｉｂｏｗＮｔ
）培地などがある。再生中の神経と無傷の神経培地の間
で比較をするとき、再生神経のＣＭにはＣＭ−Ｒを使用
し、無傷の神経のＣＭにはＣＭ−Ｎを使用した。

ＯＣＦの細胞毒性は、ラットの脳の培養物中の成熟寡突
起神経膠細胞の数を減小させるの能力ににより測定した
。寡突起神経膠細胞の数は、成熟寡突起神経膠細胞を標
識する、ガラクトセレブロサイド（Ｇａｌｅ）に対する
抗体を使用して求めた。Ｇａ１ｃ陽性細胞の数の減少は
成熟寡突起神経膠細胞の数の減少を示している。測定法
は本明細書の実験法と実施例に記載されている。

ＯＣＦの細胞毒性は寡突起神経膠細胞系細胞に特異的で
ある。従ってＯＣＦは、寡突起神経膠細胞系細胞の前駆
細胞が成熟寡突起神経膠細胞や２型星状細胞に分化する
のを阻害する。これは他の細胞（例えば１型星状細胞又
は繊維芽細胞）にはまったく細胞毒性を示さない。

ＯＣＦは再生中の傷害を受けた魚の視神経のＣＭ中に存
在し、傷害をうけていない魚の視神経のＣＭには存在し
ないことがわかった。ＯＣＦはまた傷害を受けた哺乳動
物の視神経のＣＭにも存在しなかった。再生中の傷害を
受けた魚の視神経からのＯＣＦは、哺乳動物の神経の培
養物（例えばラット神経の培養物）中の成熟寡突起神経
膠細胞の数を減少させる。

ＯＣＦは水溶性であり、熱感受性であり５６℃３０分間
でその活性を失う。１００℃ではＯＣＦは１０分間でそ
の活性を失う。

ＯＣＦはプロテアーゼに対して感受性であり、トリプシ
ンによる消化により活性を失う。

本発明は、それらが少なくともＯＣＦ生物活性の実質的
な部分（即ち成熟寡突起神経膠細胞の数を減少させる能
力）を有する限り、ＯＣＦ、その塩、前駆体、断片及び
／又は同族体、そしてＯＣＦ又はその断片及び／又は同
族体の官能基誘導体を含む。

「同族体」とは、ＯＣＦ、ＯＣＦ分子中のアミノ酸残基
の欠失、追加又は置換により得られる断片又は前駆体に
実質的に類似の分子である。最終的な分子が目的の活性
を有している限り、欠失、追加又は置換のいかなる組合
せも可能である。例えばＯＣＦ配列が公知となりこれを
コードする遺伝子がＤＮＡライブラリーから単離される
と、公知の組換えＤＮＡ技術を用いてこれらの変更が可
能となる。

本発明またＯＣＦ及び／又は前駆体、断片及び同族体に
関連する分子又は凝集した分子又は残基（例えば糖又は
リン酸残基）が結合している場合も、これらを含有する
。

本明細書で使用する「塩」という用語は、カルボキシル
基の塩と、ポリペプチド分子のアミノ基の酸付加塩の両
方を含む。カルボキシル基の塩は当業者に公知の方法で
作成され、無機塩（例えばナトリウム塩、カルシウム塩
、アンモニウム塩、第二鉄塩、又は亜鉛塩など）や有機
塩基（例えばトリエタノールアミンなどのアミン、アル
ギニン又はリジン、ピペリジン、プロカイン）と形成さ
れる塩を含む。酸付加塩としては例えば、無機酸（例え
ば塩酸又は硫酸）との塩、有機酸（例えば酢酸又はオキ
ザル酸）との塩がある。

本明細書で使用する「官能基誘導体」という用語は、Ｎ
−末端又はＣ−末端の残基上の側鎖上に存在する官能基
から当業者に公知の方法で調製される誘導体を含み、薬
剤として許容される限り（即ちポリペプチドの活性を破
壊せず、それを含む組成物に有害な性質を与えず、その
抗原性に悪影響を与えない限り）本発明の中に含まれる
。

これらの誘導体には例えば、カルボキシル基の脂肪族エ
ステル、アンモニア又は１級又は２級アミンとの反応に
よるカルボキシル基のアミド、アシル残基（例えばアル
カノイル又はカルボサイクリックアロイル基）と形成さ
れるアミノ酸残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体、
又はアシル残基と形成される遊離水酸基（例えばセリン
又はスレオニンの水酸基）のＯ−アシル誘導体がある。

「前駆体」とは動物又はヒトの体内でＯＣＦの前の、又
はＯＣＦに変換される化合物である。

本発明の因子は再生中の傷害を受けた魚の視神経のＣＭ
から、又はマクロファージのＣＭ又は他の適当な供給源
からのＣＭから単離され、従来の生化学的方法（例えば
イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラ
フィー、ＨＰＬＣなど）により精製できる。

魚の視神経からの中枢神経系細筆の再生は、これらの傷
害を受けた神経の環境から得られる因子であるＯＣＦの
存在下で起きる。ＯＣＦは前駆細胞からの寡突起神経膠
細胞の成熟を阻害し哺乳動物の系に加えられた時、突起
を有する成熟寡突起神経膠細胞の数を減少させる。ＯＣ
Ｆはラット培養物中で活性があることがわかった。従っ
てこの因子は成熟哺乳動物の中枢神経系の再生への成熟
寡突起神経膠細胞の抑制性又はノンパーミツシブ効果を
避ける方法を与える。成長中は成長している細筆は充分
分化したミニリン酸性寡突起神経膠細胞（これは細筆成
長にノンパーミツシブ効果を及ぼすことが知られている
）に出会うことはないため、ＯＣＦのような因子は必要
ない。

再生中の魚の視神経から得られる物質の、培養した哺乳
動物の寡突起神経膠細胞の数への観察された効果は、再
生中の魚の視神経のＣＭで処理した傷害を受けたウサギ
の視神経中の細筆成長（ラビエ（Ｌａｖｉｅ）　ら、１
９８７年）は、星状細胞の性質への効果（コーエンとシ
ュワルツ（Ｃｏｈｅｎ　ｘｎｄＳｃｈｗａｔｊｘ）　、
１９８９年）以外に、寡突起神経膠細胞の集団を変化さ
せるこれらの成分の正体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）の効果が
あるかも知れないことを示している。ＯＣＦの観察され
た阻害効果は、成熟寡突起神経膠細胞の数を間接的に減
少させるＰＤＧＦ又はＣＮＴＦに媒介されてはいない（
ノープル（Ｎｏｂｌｅ）　　ら、１９８８年；リリエン
（Ｌｉｌｌｉｅｎ）　　ら、１９８８年）。最近の報告
では活性化星状細胞は寡突起神経膠細胞の成熟（ローゼ
ン（Ｒｏｓｅｎ）　　ら、１９８８年）またはＴＮＦを
阻害する反応物質の供給源である可能性、そしてＴＮＦ
はマウスのを髄組織の軸箱化臓器培養物（ｏｒｇａｎ　
ｃｕＨｕ＋ｅｓ）に対して細胞毒性を有している（セル
マジとラミエ（Ｓｅｌｎ＋＋ｊ　ａｎｄ　Ｒａｍ１ｅ）
、１９８８年）ことを示している。従って観察された活
性は、機能的にＴＮＦに類似の因子により媒介されてい
る可能性が考えられた。本発明のＯＣＦとＴＮＦを比較
するために、ヒト組換えＴＮＦに対する抗体を使用した
結果、これはＣＭ−Ｈの観察された作用を中和しないこ
とが証明された。

魚の視神経の再生は傷害後自然に起きる。正常な魚の視
神経は試験管内（ｉｎｖＨｒｏ）で、哺乳動物の中枢神
経系ニューロンが神経突起を送り出すパーミツシブな環
境を与える。正常な魚の視神経は、哺乳動物で観察され
るミニリン関連ニューロン成長阻害物質を含まないか、
又は含んではいるが低レベルである可能性がある。魚が
細筆成長阻害物をまったく持っていないか又は低レベル
で持っているなら、魚と哺乳動物はその寡突起神経膠細
胞が異なっているか、又は阻害／細胞毒性因子がこれら
のミニリン関連軸策成長阻害物の発現を制御しているこ
とを示唆しているのであろう。この可能性は、無傷の魚
の視神経では観察される阻害／細胞毒性因子が低レベル
であることと一致する。

魚の視神経は一生の間細胞が絶えず付加されること、従
って視神経はいつも成長する視神経細筆を有するという
点で、魚の視覚系は変わっている。

従って傷害を受けていない魚の視神経中には成体環境中
で成長する機構が存在するが、その程度が低いという可
能性がある。哺乳動物は適当な時期にこのような因子に
傷害後直ちにアクセスすることができないか、又はこの
ような因子を全く有していないことを示唆している。

再生中の魚の視神経で見られる細胞毒性は、直接又は間
接的にマクロファージ、活性化された内在する小神経膠
細胞、又は活性化星状細胞に依存するかも知れない。哺
乳動物の再生中の末梢神経に侵入するように、傷害を受
けた魚の視神経にマクロファージが急速に侵入する場合
、マクロファージは、ＣＭ−Ｈに比較してＣＭ−Ｒで観
察された活性の上昇、及びノンパーミツシブ成熟寡突起
神経膠細胞の排除に関与しているかも知れない。

こうしてニューロンがまだ傷害に誘導された成長モード
にある時、成長にパーミツシブな環境が形成されるので
あろう。

切除の２日前に傷害を受けた神経の培養物では、多くの
マクロファージが存在しているが、寡突起神経膠細胞は
きわめて少ないことが観察された。

これに対して分離２日前に臓器培養（ｏｒｇａｎｃｕｌ
ｔｕｒｅｄ）　　した傷害を受けていない視神経の培養
物では、マクロファージはほとんど観察されず比較的多
数の寡突起神経膠細胞が観察された。寡突起神経膠細胞
とマクロファージの数のこの逆相関は、傷害後の寡突起
神経膠細胞の数の調節におけるマクロファージの役割を
示唆している。

本発明はさらに本発明の因子に対する抗体よりなる。ポ
リクロナール抗体は本発明の濃縮した又は精製したＯＣ
Ｆを含有する抗原調製物で免疫した動物の血清から得ら
れる。

モノクローナル抗体は当業者に公知の方法で調製される
。動物をＯＣＦの粗調製物又は濃縮又は精製調製物で免
疫し、免疫した動物の肺臓及び／又はリンパ節細胞を適
当なミエローマ細胞と融合させる。本明細書に記載する
ＯＣＦのバイオアッセイにより陽性のハイブリドーマ上
清をスクリーニングする。

公知の方法によりＯＣＦに対するモノクローナル抗体を
使用してＯＣＦを精製する。

ＯＣＦに対する抗体（ポリクローナル抗体及びモノクロ
ーナル抗体）は、さらにＯＣＦをコードするＤＮＡ分子
のｃＤＮＡライブラリーのスクリニングに使用され、次
にこれを発現ベクターに挿入し宿主細胞にトランスフェ
クションする。これらのトランスフェクションされた宿
主細胞の培養物は組換えＯＣＦを大量に生産する。

哺乳動物における中枢神経系の傷害を受けた神経の再生
を誘導する本発明の因子を使用する１つの方法は、標的
臓器に因子の調製物を移植することである。例えば適用
した物質に対する近付きやすさを増加させるために（因
子の連続供給のためのミニポンプ）、神経全体に活性可
能性因子の縦の移植を利用する。

本明細書の開示を完全にするために必要と考えられる程
度に、本明細書に参照又は引用されているすべての文献
は参考のため完全に本明細書に引用されている。

ここで本発明を以下の非限定的な実験と実施例により例
示する。

実験方法 ａ、魚の視神経の破砕傷害とＣＭ（調整培地）の調製 ３００μｌのＣＭを調製するために、４匹の鯉（シプリ
ヌスカルピオ（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ　ｃａ＋ｐｉｏ）　、
８ＱＯ−１２００ｇ）を、０．０５％のトリ力インメタ
ンサルフエート（シグマ）で充分麻酔した。視神経を眼
窩内で破砕し、鯉をタンクに戻した。８日後に鯉を再び
麻酔にかけ、破砕した再生中の神経を解剖して取り出し
、３００μｍの無血清培地（ＤＭＥＭ、ギブニア　（Ｇ
ｉｂｃｏ）　）　ｉ：＝移して室温で１．５時間インキ
ュベートした。次に培地を集め、濾過して一８０℃で保
存した。培地の蛋白含量をブラッドフォード法（Ｂ＋ａ
ｄｆｏｒｄ　Ｍ、、　　１９７６年）で求めた。以下の
ようにトリプシンによる酵素消化を行った：アガロース
に結合したトリプシンをＰＢＳ　（リン酸塩緩衝化生理
食塩水）で平衡化させ、ＣＭで３７℃で４時間インキュ
ベートした。

インキュベートの最後に溶液を遠心分離した（１００Ｘ
ｇ、５分間）；回収した上清を以下に記載する培養物で
試験管内（ｉｎ　ｖｉＨｏ）で試験した。

ＣＭを１００℃で１０分間加熱処理した。

ｂ、ラット視神経の破砕傷害 ラット（２５０−３５０ｇ）をロンプム（Ｒｏｍｐｕｍ
）　（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）とベクタラ−（Ｖ
ｅｃｊａｌａｒ）　（５０ｍｇ／　ｋｇ−腹腔内投与）
で麻酔にかけた。双眼鏡付き手術用顕微鏡下で横の外眼
角切開術（ｌａｆｅｒａｌ　ｃｎｉｈｏｆｏｍ７）を行
い、眼球後引筋を分離した後、結膜を横に角膜まで切込
みを入れた。視神経を同定し、直接解剖により眼球の近
くに露出させた。硬膜はそのままにした。較正した公差
メス（ｅｒｏｇｓｘｃｊｉｏｎ　Ｉｏｒｃｅｐｓ）を使
用して目からＩＭ離れたところまで３０秒間神経を破砕
した。外眼角切開を縫合し、鯉を再び回復させた。

適当な時間に鯉を再び麻酔にかけ、視神経を切開した。

Ｃ９傷害された成体ラットめ視神経からの培養物の調製 神経膠細胞の培養物を調製するために、各実験で５匹の
成体ラットの視神経を使用した。上記したように視神経
を破砕し、３日後に切開し、細切れにして５００　Ｕ　
／　ｍｌのコラゲナーゼ（シグマ）を含有するレイボウ
ィッツ（ＬｅｉｂｏｖＨり　　Ｌ　−１５培地（ギブコ
）中でインキュベートした。３７℃で６０分後、さらに
１５分間当量のトリプシン（３００００Ｕ／ｍｌ）を加
えた。懸濁液を遠心分離しく５００Ｘｇ、５分間）、上
清を取り、除いた後、組織を再懸濁し、Ｃａ２＋とＭＧ
２＋を含まないＤＭＥＭ中にＥＤＴＡ　　０．２５ｍＭ
を含有する溶液中で、トリプシン（１５０００Ｕ／ｍｌ
）でさらに１５分間処理した。当量の大豆トリプシンイ
ンヒビター（５０００Ｕ／ｍｌ、シグマ）、牛膵臓ＤＮ
Ａ５　ｅ　１　（７４Ｕ／ｍｌ、シグマ）、牛血清アル
ブミン（ＢＳＡ、画分Ｖ％　３ｍｇ／ｍｌ、シグマ）を
加えて反応を停止させた後、遠心分離した。上澄液をボ
ッティンスタインとサトウ（ＢｏＮｅｎＮｅｉｎａｎｄ
　５ａｊｏ）の規定培地のラフ（ＲａＨ）の改変培地（
ラフ（Ｒａｆりら、１９８３年）で置き換えた後、組織
を摩砕した。得られた細胞懸濁液の５０μｌを各ポリー
Ｌ−リジン（ＰＬＬ、２０μｇ／ｍｌ）で被覆したオー
バースリップ上に広げた（視神経の細胞を３つのオーバ
ースリップに接種した）。

３７℃で３０分間後、吸着している細胞を洗い流し、規
定培地５００μｌを加えた。４８時間後、再生中の魚の
視神経のＣＭ（１２μｍ／ｍｌ）を実験試料に加えた。

間接免疫蛍光標識で細胞をさらに４８時間観察した。

ｄ、新生児ラットの脳の細胞培養物 新生児スプレーグードーレー（Ｓｐｒａｇｕｅ−ｄａｖ
ｌｅ７）ラットから神経膠細胞を調製した（マカーシー
とデベリス（ＭｃＣｘｒｔｈ７　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｌ
ｉｓ、　１９８０年）。混合神経膠細胞培養物の分析の
ため、細胞をＰＬＬ−被覆フラスコ（８５ｍ２、タンク
（Ｎｕｎｃ））又はＰＬＬ−被覆オーバースリップ（１
０５細胞／オーバースリツプ）上に広げた。

細胞を５％牛脂児血清（Ｆ　Ｂ　Ｓ、シグマ）を補足し
たＤＭＥＭ中で増殖させ、これは２日毎に交換した。

ｅ、濃縮寡突起神経膠細胞培養物の調製試験管内（ｉｎ
　ｖｅｔｏ）で８日後に、新生児ラットの脳の神経膠細
胞の混合集団を含有するフラスコを一晩撹拌し、非吸着
性細胞を、特に明記していない場合は約１０’細胞／オ
ーバースリツプでＰＬＬ−被覆オーバースリップ上に広
げた。３０分間細胞を吸着させた後、寡突起神経膠細胞
の成長を促進するために、ボッティンスタインとサトウ
の規定培地のラフの改変培地を加えた。接種後翼なる期
間に細胞を処理し、特に明記していない場合は普通４８
時間後に間接免疫蛍光染色又はＥＬ　Ｉ　ＳＡを行った
。

１０間接免疫蛍光標識 培養した細胞を以下の抗体を用いて免疫標識した：Ａ２
Ｂ５マウスＩｇＭモノクローナル抗体（ハイブリドーマ
上澄液、１；１稀釈）、これは成熟２型星状細胞と、寡
突起神経膠細胞と２型星状細胞の周産期の前駆細胞（０
−２Ａ前駆細胞）を標識する（アイゼンバース（Ｅｉｓ
ｅｎｂａＮｈ）ら、１９７９年；ラフ（Ｒ＋１りら、１
９８３年）；０４マウスＩｇＭモノクローナル抗体（濃
縮ハイブリドーマ上澄液、１　：　１００稀釈）、これ
は未成熟の寡突起神経膠細胞（ツマ−とシャフナ−（Ｓ
ｏｍｍｅｒａｎｄ　５ｈａｃｈｎｅ＋）　、１９８１年
）と０−２Ａ成体前駆細胞（フレンチコンスタントとラ
フ（Ｉｌ＋ｅｎｃｈ−Ｃｏｎｓｔａｎｊ　ａｎｄ　Ｒａ
ｆｔ）、１９８６年ａ）を標識する；マウス抗ガラクト
セレブロサイド（Ｇａｌｅ）モノクローナル抗体（ハイ
ブリドーマ上澄液、１：１０稀釈）、これは成熟寡突起
神経膠細胞を標識する（ラフ（Ｒａｆｔｌら、１９７８
年）：ウサギ抗クリア繊維状酸性蛋白（ＧＦＡＰ　、全
血、１　：　１０００稀釈）、これは成熟１型星状細胞
と２型星状細胞を標識する（ビグナミ（Ｂｉｇｎｘｍｉ
）　　ら、１９７２年）；マウスモノクローナル抗体６
Ｄ２、これは急募突起神経膠細胞を標識する（ジエセリ
ッチとローメ：／　（Ｊｅｓｅｒｉｃｂ　ａｎｄ　Ｒｏ
ｍａｎ）、１９８９年）。ローダン又はフルオレセイン
結合第二抗体は異なる供給源より得た：ヤギ抗マウスＩ
ｇＭ（稀釈１：５０、ジャクソンイムノリサーチラボラ
トリーズ（Ｉａｃｋｓ＋＋ｎ　Ｉｍｍｕｎｏ＋ｅｓｅａ
ｔｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　）　；ヤギ抗マ
ウスＩｇＧ（稀釈１：５０、セロチック（Ｓｅｒｏｊｅ
ｃ）　）　　；豚抗ウサギＩｇＧ（稀釈、１：５０１ダ
コパツツ（Ｄａｋｏｐａｔｔｓ）　）。

表面抗原（Ａ２Ｂ５．０４そしてＧａ１ｃ）の免疫標識
はまず、必要な各抗体を細胞５０μｌと３７℃で３０分
間インキュベートして行った。次に細胞を、２％熱不活
性化ＦＢＳを含有するノ＼ンクスバランスト塩溶液（Ｈ
ａｎｋ’　ｇ　ｂａｌａｎｃｅｄ　５ａｌｔｓｏｌｕｔ
ｉｏｎ）で数回洗浄し、さらにＤＭＥＭで稀釈した適当
なローダミン又はフルオレセイン結、合第二抗体中でイ
ンキュベートした。細胞を洗浄し、メタノール中で一２
０℃で１０分間固定した。細胞内抗原（Ｇ　Ｆ　Ａ　Ｐ
）については、まず細胞を固定した後、免疫標識した。

いくつかの実験では、培養物をＡ２Ｂ５とＧａ１ｃ抗体
で同時に標識し、次に抗マウスＩｇＭ（ローダミン）と
抗マウスＩｇＧ（フルオレセイン）で２重標識した。免
疫標識後、オーバースリップを洗浄し、退色を防ぐため
２２ｍＭの１．４−ジアゾビシクロ（２，２）オクタイ
ン（シグマ）を含有するグリセロール滴中にマウントし
、封入して、移相差装置、エビ蛍光装置光学系（ローダ
ミンとフルオレセイン検出用）とカメラの備わったツァ
イス（Ｚｅｉｓｓ）ユニバーサル顕微鏡で観察した。す
べてのオーバースリップで免疫標識した細胞の具体的な
数を数えた。

ｇ、生きている細胞のＥＬＩＳＡ 寡突起神経膠細胞用に濃縮した培養物は前記したように
調製した。細胞をマルチウェルマイクロタイタープレー
トに接種した（５Ｘ１０２細胞／穴、ヌンク）。試験管
内（ｉｎ　ｖＮｒｏ）で２４時間後、再生中の神経又は
無傷の神経から得られたＣＭをを表示した濃度で加えた
。４８時間後、細胞を３７℃で３０分間Ｇａ１ｃ抗体と
インキュベートし、次に西洋ワサビペルオキシダーゼ結
合ヤギ抗マウス抗体（バイオメーカー（ＢｉｏＭａｋｏ
＋）、イスラエル）でさらに３７℃で３０分間インキュ
ベートした。

細胞を洗浄し０．００３％のＨ２Ｏ２を補足した１００
μｌの基質［２，２−アジノージ（３−エチルベンズチ
アゾリン）サルフェート］を各ウェルに加えて、結合し
た抗体の量を求めた。タイターチックマルチスキャン（
ＴＨｅ＋ｊｅｃｈ　Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ）ＭＭＣを用い
て対照波長を６３０ｎｍとし、４０５ｎｍで吸光度を記
録した。

ｈ、非特異的エステラーゼ染色 シグマキットを使用するフッ化物阻害法とともに、α−
ナフチルアセテートエステラーゼ法を用いて細胞を染色
した。硝酸ナトリウム（５０μ！；０、ＬＭ）を５０μ
ｌのファーストブルーに加えた（０．４Ｍ　　ＨＣＩ中
１５■／ｍｌ）。混合物を室温に２−３分間放置した。

ここに３７℃で２ｍｌの脱イオン水を加え、次に２５０
μｌのトリズマール（Ｔｒｉ！ｍａｌ）　　７．　６緩
衝液濃縮液、５０μｌのα−ナフチルアセテート溶液を
加えた。フッ化物阻害法にはさらに５０μｌのフッ化ナ
トリウム（０，２ｇ／ｍｌ）を加えた。次に細胞をクエ
ン酸アセトン−ホルムアルデヒド固定剤（クエン酸溶液
２５ｍ１＋アセトン６５ｍ１＋３７％ホルムアルデヒド
８ｍ１）中で室温で３０秒間固定した。次に細胞を水で
完全に洗浄し、α−ナフチルアセテート溶液で３７℃で
３０分間インキュベートした。

完全に洗浄した後、細胞をヘマトキシリン溶液で２分間
カウンター染色した。次にオーバースリップを洗浄し、
観察のため顕微鏡スライド上にグリセロールでマウント
した。

ｉ、統計解析 フリートマンランク（Ｆｔｉｅｄｍａｎ　Ｒａｎｋ）検
定を用いて結果の統計解析を行った。この統計検定では
各実験を別のブロックとして扱い、ブロックの数に従い
結果の有意差（対照対ＣＭ−処理）を求めた。

実施例 実施例１ 本例はＯＣＦを含有する再生中の魚の視神経により調整
された培地は、分離された傷害を受けた成体ラットの視
神経の培養物における突起を有する寡突起神経膠細胞の
減少を引き起こすことを示している。

第１図ａ、　ｂは、除去３日前に障害を受けた成体ラッ
トの視神経から得られた培養物中の突起を有する０４陽
性細胞を示す。接種語４８時間目にこれらの培養物に加
えられた再生中の魚の視神経から得られた調整培地（Ｃ
Ｍ）の存在下で、試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｔｏ）で９６
時間目に出現した０４陽性細胞の数（ＣＭ−Ｒ；　１２
μｇ蛋白／ｍｌ）は、体調培地中に維持した未処理の培
養物中の数（第１図ｃ−ｇ）よりはるかに少なかった。

ＣＭ−Ｒ処理培養物中にあった０４陽性細胞はほとんど
突起を有しておらず、従って未成熟寡突起神経膠細胞と
同定された（第１図ｃ−ｇ）。成熟寡突起神経膠細胞に
対する抗体（例えば０４陽性細胞ではなく抗ガラクトセ
レブロサイド（Ｇａｌｃ））を使用して同じ実験を繰り
返した時、同じ結果が得られた。従って魚の再生中の視
神経のＣＭで処理した培養物（ＣＭ−Ｒ）では、規定培
地中の全Ｇａ１ｃ陽性細胞のうちわずかに４２％の細胞
のみが成熟Ｇａ１ｃ陽性細胞に成長した。これらの結果
は、再生中の魚の視神経から調整された培地中に、前駆
細胞から寡突起神経膠細胞の成熟に細胞毒性であるか及
び／又は阻害するかもしれない可溶性因子の存在を示唆
している。

実施例２ 本例は、ＯＣＦを含有する再生中の魚の視神経から調整
された培地は、寡突起神経膠細胞の新生児ラットの培養
物中のＧａ１ｃ陽性細胞の成熟に影響することを示して
いる。

このインヒビター／細胞毒性因子の性質とその再生への
関与の可能性をさらに検討するために、寡突起神経膠細
胞がより多く得られる供給源を捜し、新生児ラットの脳
は寡突起神経膠細胞のより豊富な供給源であり寡突起神
経膠細胞のより均一な集団を与えるため、傷害を受けた
成体ラットの視神経のかわりに新生児ラットの脳の培養
物を使用する可能性を検討した。

新生児ラットの脳の寡突起神経膠細胞と周産期のその前
駆細胞は、マカーシーとデベリス（ＭｃＣａｔｔｈ７　
ａｎｄ　ＤｅｖｅｌｌｉＳ）　　（１９８０年）の方法
により以下のセットの実験により得た。寡突起神経膠細
胞はポリーＬ−リジンで被覆したオーバースリップ上に
接種した。再生中の魚の視神経のＣＭ　（ＣＭ−Ｒ）は
、接種時、又は２４時間目又は４８時間目に、新生児ラ
ットの脳の寡突起神経膠細胞で濃厚にしてこれらの培養
物に加えた。すべての場合に対照の未処理の培養物と同
じ数の寡突起神経膠細胞を接種した。第２図に示すよう
に、ＣＭ添加の２４時間後にすべてのＣＭ−処理培養物
では、多数の突起を有するＧａ１ｃ陽性細胞は、対応す
る未処理培養物中のものより少なかった（約５０％）。

もじＣＭが前駆細胞からの寡突起神経膠細胞の成熟に影
響を与えるなら、少なくとも接種後の２４時間目又は４
８時間目の培養物中のＧａ１ｃ陽性細胞の数の少なさは
、前駆細胞からの細胞の再生が阻害されている条件下で
の自然の細胞の死滅の結果かも知れない。又は再生中の
魚の視神経のＣＭは、前駆細胞への影響以外に成熟寡突
起神経膠細胞に影響を与えるかも知れない。

また第２図は阻害効果は添加したＣＭの量に依存してい
ることを示している。即ち１２μｇ蛋白／ｍｌは有効で
あったが、１．２μｇ蛋白／ｍｌは無効であった。表１
に示すように、ＣＭ−Ｒ添加後２４時間口に、突起を有
するＧａ１ｃ陽性細胞の数は未処理の対照培地に比較し
て、すでに４０，３±６．４だけ少なかった（表１）。

ＣＭ−Ｒを沸騰させるか又はトリプシンで処理すると、
その阻害／細胞毒性効果が減少したことは（表２）この
因子が蛋白性であることを示している。

表１．ＣＭ−Ｒはラットの脳の寡突起神経膠細胞の数を
減少させる 細胞の型１ ＊＊傘 処理　　対照の％ 後の　（平均士 時間０　標準偏差） 実験 の数 （ｎ） 寡突起神経膠細胞　２４　　４０Ｊ±６，４３寡突起神
経膠細胞　４８　　１４．４±１０．４　　１２混合神
経膠細胞　　４８　　２５．７±４．７４表２．寡突起
神経膠細胞に対するＣＭ−Ｈの阻害／細胞毒性効果は熱
及びトリプシン感受性である 処理 Ｇａ１ｃ陽性細胞の数 （平均上標準誤差） 対照　　　　　１４２７±２４７ ＣＭ−Ｒ３６１±　１７＊ ＣＭ−Ｒ（沸騰）　　　　　　　１４７４±　７０＊＊
ＣＭ−Ｒ（）リプシン処理）　　１０８７±　１０＊＊
ネ　これらの実験では、数えた対照培養物中のオーバー
スリップ当りの寡突起神経膠細胞（Ｇａｌｃ陽性細胞）
の数は３５０−１７００細胞であった。

傘本　１２μｇ蛋白／ｍｌのＣＭ−Ｒを加えた。

本＊傘対照、未処理の培養物中の数えた細胞の数を１０
０％として各実験で阻害％を計算した。

この実験では、ラットの脳の寡突起神経膠細胞は図２の
ように培養した。接種後２４時時間和ＣＭ−Ｒ（沸騰又
はトリプシン処理、２０μｇ　／　ｍｌ　）を加えた。

ＣＭ−Ｈの添加後４８時時間軸、間接蛍光細胞を数えて
Ｇａ１ｃ陽性細胞突起を有する細胞を測定した。３重実
験のうちの１つの実験の結果を示す。これらの結果は別
の２つの実験で再現された。

＊　Ｐ値＝０．０２５ ＊＊　対照培養物と沸騰処理又はトリプシン処理したＣ
Ｍ−Ｈの培養物の間には有意差は見られなかった。

実施例３ 本実験はＯＣＦの阻害／細胞毒性は魚の視神経中の再生
に関連していることを示している。

阻害／細胞毒性因子のレベル又は活性は魚の視神経の再
生に関連しているか否かを調べるため、ＣＭ−Ｈの効果
を傷害を受けていない正常魚の視神経から調整された培
地（ＣＭ−Ｎ）の効果と比較した。ＣＭ−ＲとＣＭ−Ｎ
を同じ蛋白濃度で、接種後２４時時間和新生児ラットの
脳の寡突起神経膠細胞に加えた。得られた結果を、間接
免疫蛍光法により標識されたＧａ１ｃ陽性細胞の数を使
用して、抗Ｇａ１ｃ抗体で追跡した。第３図はＣＭ−Ｎ
処理培養物中のＧａ１ｃ陽性細胞の数をＣＭ−Ｒ処理培
養物中の数と比較している。ＣＭ−Ｎの効果は小さく、
即ち傷害を受けていない神経は寡突起神経膠細胞の成熟
に対して阻害作用がなかった。

実施例４ 本実験はＣＭ−Ｒ中のＯＣＦはＰＤＧＦと同じ作用を有
するのではないことを示す。

寡突起神経膠細胞の分化は血小板由来増殖因子（ＰＤＧ
Ｆ）により調節されることが最近証明された（ノープル
（Ｎｏｂｌｅ　）ら、１９８８年、ラフ（Ｒａｆｔ）ら
、１９８８年そしてリチャードソン（Ｒｉｃｈａｔｄｓ
ｏｎ）ら、１９８８年）。寡突起神経膠細胞の前駆細胞
の培養物にＰＤＧＦを添加すると、細胞分裂促進（マイ
トゲン）活性のために一時的に分化が遅延する。

観察された阻害効果（少なくともその前駆細胞から寡突
起神経膠細胞への成熟に関連した阻害効果）の背後にあ
る作用機構を探るため、再生中の魚の視神経のＣＭ　（
ＣＭ−Ｒ）の活性をＰＤＧＦと比較した。接種時に脳の
培養物にＰＤＧＦを添加すると、試験管内（ｉｎマＨｒ
ｏ）で４８時間間口Ｇａ１ｃ陽性細胞の数が減少した。

しかしこの効果はＣＭ−Ｈの効果（第４図）と比較する
と著しく小さかった。対照未処理細胞に比較してＰＤＧ
Ｆ処理培養物ではＧａ１ｃ陽性細胞の数が見かけ上少な
かったことは、Ａ２Ｂ５抗体で染色される前駆細胞の増
殖を反映している。これはＰＤＧＦ処理培養物ではＡ　
２　Ｂ　ｓ陽性細胞が増加していることから明らかであ
った。第４図に見られるように、ＰＤＧＦ処理培養物で
は予想されたように、Ａ２Ｂ５抗体で染色される０−２
ａ前駆細胞の数は増加していた。これらの結果は、ＣＭ
−Ｒは成熟寡突起神経膠細胞のみでなくその前駆細胞に
も影響を与えることを示している。これらの観察鎗果は
、前駆細胞からＧａ１ｃ陽性細胞への成長へのＣＭ−Ｈ
の観察された作用は、ＰＤＧＦ又は蛋白の細胞分裂促進
物質により媒介されるのではないことを示唆している。

これは第５図でも支持されており、そこではＣＭ−Ｒの
みの添加から予想されるように、ＰＤＧＦとともにＣＭ
−Ｒを添加するとＧａ１ｃ陽性細胞が減少することを示
している。

毛様体神経親和性因子（Ｃｉｌｉａｒ７　ｎｅｕｒｏｊ
ｔｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ　ＣＮＴＦ　）は２型星状細
胞の分化を誘導することにより、間接的に成熟Ｇａ１ｅ
寡突起神経膠細胞の数を減少させる、０−２Ａ細胞系に
有効である別の因子であることが、最近証明された（リ
リエ”、ｔ　（Ｌｉｌｌｉｅｎ　）　　ら、１９８８年
’）　。ＣＭ−ＲはＡ２Ｂ５抗体で染色された細胞の数
を増加させなかったため、従って前駆細胞又は２型星状
細胞を増加させなかったため、ＣＭ−Ｈの作用がＣＮＴ
Ｆにより媒介されているとは考えにくい。

実施例５ 本実験は、再生中の魚の視神経で調整された培地による
、寡突起神経膠細胞に対するＯＣＦの阻害／細胞毒性作
用の特異性を示している。

ＣＭの観察された阻害／細胞毒性作用が寡突起神経膠細
胞に特異的であるか否かを調べるため、ＣＭ−Ｒを星状
細胞と寡突起神経膠細胞の混合集団に加えた。

第６図は観察された阻害作用は非特異的毒性作用による
ものではなく、寡突起神経膠細胞に選択的であることを
示している。新生児ラットの脳から分離した神経膠細胞
の混合集団の培養物を、再生している神経又は無傷の神
経のＣＭで処理した（それぞれＣＭ−ＲとＣＭ−Ｎ）。

この条件は、星状細胞により形成されたモルレーヤー上
に接種された寡突起神経膠細胞の分化に最も有効であっ
た。このような条件下でも試験管内（ｉｎ　ｖｉｆｒｏ
）で７２時時間表９６時間間口ＣＭ−Ｈの阻害作用は顕
著であり、ＣＭ−Ｎの効果はわずかであった（第６図ｂ
）。再生性ＣＭの寡突起神経膠細胞に対する阻害作用に
比較して、混合培養物中に存在しグリアル繊維状酸性蛋
白で染色された（星状細胞のマーカー）非寡突起神経膠
細胞の生存と分化は、ＣＭ−Ｒにより影響を受けなかっ
た（第６図ａ）。処理及び未処理培養物中に形成された
星状細胞のモルレーヤーの見かけの密度は同じであった
（第６図Ｃ対第６図ｄ）。従って観察されたＣＭ−Ｈの
阻害作用は非特異的毒性作用ではなく、どちらかといえ
ば寡突起神経膠細胞系細胞に選択的であった（図６）。

実施例６ 本実験は寡突起神経膠細胞の数とマクロファージの数の
間に逆相関があることを示している。

最初の実験では共通の金魚を使用した。調整培地はダル
ベツコ−改変イーグル培地で調製した（ＤＭＥＭ、３０
０μｌ／培地当り４つの視神経）。

臓器培養（ｏｒｇａｎ　ｃｕＮｕｒｅ　）で維持した神
経の分離後得られた細胞集団と、−様に破砕した神経（
即ちラットで０Ｃ−３とＰＣ−３で、魚で０Ｃ−２とＰ
Ｃ−２）のそれとの比較は、これらの細胞の傷害後の挙
動は視神経に本質的であるか、又は何か外来因子（例え
ば血液の単球）に影響されるのかも知れないことを示し
ている。視神経は傷害の時に取り出されるため、臓器培
養物ではこのような外因性因子は欠如しているであろう
。

分離の前２日間臓器培養した、分離した魚の視神経の培
養物では、比較的多数（オーバースリップ当り６５細胞
）の寡突起神経膠細胞（６Ｄ　２）が観察されたが、マ
クロファージはほとんど見られなかった。これに対して
傷害に２日後に切開した視神経を分離したものの培養物
（ＰＣ−２培養物）では、多くのマクロファージが成長
し、寡突起神経膠細胞はほとんど見られなかった。破砕
した神経の培養物（ＰＣ−２）に見られた少ない寡突起
神経膠細胞は、０Ｃ−２培養物中の寡突起神経膠細胞よ
りはるかに小さく、突起は短かった。

これらの結果を表３に要約しである。

臓器培養したしんっけいの分離した最中の寡突起神経膠
細胞の出現に平行して、これらの培養物中ではマクロフ
ァージ又はマクロファージ様細胞が完全に欠如していた
。培養の７日後でもこれらの細胞は観察されなかった（
この時までにＰＣ−２培養物ではこれらの細胞は巨大に
大きくなる）。

表３　切除と分離の前２日目に破砕した魚の視神経の分
離した培養物（ＰＣ−２）中と、分離の前２日間臓器培
養した魚の視神経の培養物（ＯＣ−２）中の寡突起神経
膠細胞の数１ 寡突起神経膠細胞の数 培養物　実験１　　実験２　　実験３　平均上標準偏差 ＱＣ−２６５（±３’ｌ　　９３（±２５）　　４０（
±１２）　　６６（±２６）ＰＣ−２３（±１）２（±
　１）　　１５（±　５）７（±　６）１各実験内でＰ
Ｃ−２とＱＣ−２培養物からほぼ同じ大きさの同じ数の
魚を取った。また細胞を最後に同数のオーバースリップ
に接種した。こうして実験法による変動を最小になるよ
うにした。各実験は３重の繰り返しで行った。オーバー
スリップ上の寡突起神経膠細胞（６Ｄ２陽性細胞）の総
数を数えた。表の数は３つの測定の平均である。

魚の場合と異なり、ラットでは傷害を受けた神経の培養
物と臓器培養した培養物の成熟寡突起神経膠細胞の数は
同じであった。３日間臓器培養したラットの視神経の培
養物（ＯＣ−３倍葉物）では、３種類の主要の細胞の集
団が観察された。

破砕したラットの視神経の培養物と同様に（第３図）、
これらの培養物の大部分は培養９６時間間口Ｇａ１ｃで
標識される突起を有する寡突起神経膠細胞であり細胞総
数のほとんど４０％を占めていた。別の細胞の大きな集
団（約４０％）は形態的にマクロファージに類似してい
た。

以下の実験では、金魚の視神経細胞を１−２％ＦＣ３を
補足したし一１５ライボウィッツ培地、又はボッティン
スタインとサトウの規定培地のラフの改変培地中で使用
されたものと同じ添加物プラス１−２％ＦＣ８を補足し
たし一１５培地中で増殖させた。魚の視神経の臓器培養
は、ボッティンスタインとサトウの規定培地のラフの改
変培地中で使用されたものと同じ添加物プラス１−２％
ＦＣ３を補足したし一１５培地中で行った。

再生中の金魚の視神経で調整した培地（ＣＭ）を、破砕
後８日目に除去した金魚の視神経の断片をＬ−１５培地
中でインキュベート（培地５００／Ｚ　ｌ当り金魚の視
神経１０個、室温で３時間）することにより、上記で測
定したＣＭ−Ｒと同様に調製した。

魚培養物中のマクロファージは血液由来のものと内在の
ものが含まれていた。この２種類のマクロファージは形
態的基準により区別できた：血液由来のマクロファージ
は典型的には円形であり、その液胞もまた円形に並んで
いる；一方内在のマクロファージは形が不規則で液胞も
細胞質中にランダムに並んでいた。さらに血液由来と思
われる細胞は、破砕傷害後数日に切除した視神経の培養
物中には豊富に存在し、切開後臓器培養した視神経の培
養物には少なかった。あらかじめ固定した細胞上の６Ｄ
２標識液胞で証明されるように、いずれの型のマクロフ
ァージも活発にミニリン破片を貧食していた（液胞は使
用した他のどの抗体によっても標識されず、第２抗体自
身によっても標識されなかった）。培地を１０％ＦＣ８
で補足した時、血液由来と思われるマクロファージは最
も増殖し、培養１週後に培養物中の他の細胞に比較して
非常に大きくなった（第７図Ａ）。第７図Ｃは液胞が６
Ｄ２抗体により強く標識されているマクロファージを示
す。これらのマクロファージはまた非特異的エステラー
ゼで陽性に染まった（第８図Ａ−Ｃ）。

内在マクロファージと思われる細胞は多くの形で出現し
たが、大きく２つの群に分けられた：まっすぐな繊維芽
細胞様の外観のもの（第８図Ｆと第９図Ｅ）と、より丸
くて濃く、時に突起を有するもの（第９図Ａ−Ｄ）。血
液由来のマクロファージと内在マクロファージの間（第
９図Ｆ−Ｇ）、そして両方の型のマクロファージの寡突
起神経膠細胞の間（第９図Ｈ−Ｉ）に接触が観察された
。

この接触の本質は細胞の取り込みのようであり、寡突起
神経膠細胞が両方のマクロファージに取り込まれている
ようである。これらの内在マクロファージはまた非特異
的エステラーゼ陽性であった（第８図Ｄ−Ｇ）。

寡突起神経膠細胞の数とマクロファージの数の逆相関と
ＣＭのラットの寡突起神経膠細胞への影響を考えて、再
生中の魚の視神経由来の可溶性物質（即ち−ＣＭ）が傷
害後の寡突起神経膠細胞の調節に関与しているか否かを
調べた。２−３日間臓器培養した視神経を分離したもの
の培養物にＣＭを加えた時、寡突起神経膠細胞の数は減
少した。オーバースリップ当りの寡突起神経膠細胞の数
は少ないため、実験を数回繰り返した。統計学的検定に
より、寡突起神経膠細胞の数へのＣＭの作用は有意であ
ることが証明された。これらの結果を表４に示す。

結果を解析するために使用したフリートマンブロックラ
ンク検定では、対照（未処理）とＣＭ処理オーバースリ
ップの間の有意差は０．０１％（Ｐ＝０．０００１）で
あった。非再生中（正常）の金魚の視神経で調整した培
地（ＣＭＮ）を同様に培養物に添加しても、寡突起神経
膠細胞の数への影響は全く見られなかった（表５）。

表５　正常の金魚の視神経で調整した培地（ＣＭＮ）の
魚の寡突起神経膠細胞の数への影響の、再生中の魚の視
神経で調整した培地との比較実験は表１に記載した方法
で行った。

３重測定の標準偏差。

各実験は３重繰り返しで行い、その平均を示した。

実験は２重測定で行った。従って標準偏差は示していな
い。

ＣＭとＣＭＮは最終濃度が４０．ｃｚｇ／ｍｌになるよ
うに加えた。

実施例７ 本実験は５６℃の処理に対する本発明のＯＣＦの感受性
を示している。

寡突起神経膠細胞を濃厚にした新生児ラットの脳の培養
物中のＧａ１ｃ陽性細胞の測定は、実験方法に記載した
ＥＬＩ　ＳＡで行った。表６がら明らかなように、５６
℃では光学密度の測定値が減少していることがらＧａ１
ｃ陽性細胞の数が減少している。

実施例８ 本実験は魚の血液のマクロファージの寡突起神経膠細胞
への影響を示す。

マクロファージに富む培養物を以下のように調製した。

魚の血液をヘパリンを含むＰＢＳ中に集めた後、７０．
６ｍｌの１２重量％のファイコール（Ｆｉｃｏｌｌ）　
　（シグマ）に２９．４ｍｌの３２．８Ｗ／Ｖのソジウ
ムジアトリオゼート（ｓｏｄｉｕｍｄｉａｊｒｉｏｚａ
ｊｅ　）　　（シグマ）を混合して作ったハイベーク−
ファイコール（ＨＹｐａｑｕｅ−Ｆｉｃｏｌｌ）グラジ
ェント上に重層した。１５ｍ１のポリスチレン試験管中
で５ｍｌのハイベーク−ファイコール上に１０ｍ１の血
液を重層した。試験管を１０℃で１０００ｇで２５分間
遠心分離した。リンパ球と単球を含むバッフィコートを
取ってＰＢＳで１回洗浄した。

細胞を集め、２０×１０６細胞／ｍｌに調製した。

１６℃で１時間後細胞をＰＢＳで３回洗浄して、弱く吸
着しているか吸着していない細胞を除去した。Ｌ−１５
培地を細胞を加えた。

無血清培地又はリポポリサッカライドを含有する培地中
で８時間インキュベートして、マクロファージに富む培
養物で調整した培地を調製した。

この調製培地を寡突起神経膠細胞培養物に加え、実験方
法に記載したように免疫蛍光Ｇａ１ｃ陽性細胞を数えて
寡突起神経膠細胞の数を求めた。この最初の実験では対
照中のＧａ１ｅ陽性細胞の数が８３９であったのに対し
、マクロファージに富む培養物の調整培地の存在下での
Ｇａ１ｃ陽性細胞の数は４２０であった。２回目の実験
では、対照のＧａ１ｃ陽性細胞が６２であったのに対し
、マクロファージに富む培養物の調整培地の存在下での
Ｇａ１ｃ陽性細胞の数は２４であった。

実施例９ 薬剤組成物 本発明の寡突起神経膠細胞細胞毒性因子ＯＣＦは、中枢
神経系の神経の再生に使用される薬剤組成物の活性成分
として有用である。好ましくはこれは標的臓器に局所投
与される。その塩、前駆体、断片及び／又は同族体、モ
してＯＣＦ又はその断片又は同族体の官能基誘導体、又
はこれらの混合物は、ＯＣＦ活性を有する限り同じ目的
に使用することができる。

ＯＣＦは、哺乳動物特にヒトの中枢神経系細筆の再生を
促進するのに充分な量と純度で使用される。ＯＣＦは再
生すべき傷害を受けた細筆の近くに移行すると考えられ
る任意の方法で投与される。

好ましくはＯＣＦは薬剤として許容される液状担体中で
該部位へ注射される。又はＯＣＦを含有する移植物を外
科的に挿入することもできる。このような移植物は、Ｏ
ＣＦをスポンジのように吸収しそれを移植の部位でゆっ
くり放出するような任意の物質（例えばニトロセルロー
ス）からなる。

他の投与方法は当業者に公知であり、それらも本発明に
含まれると考えられる。

ある患者に投与されるＯＣＦの量は、種々の因子（例え
ば治療すべき傷害、再生すべきであると考えられる傷害
された細筆の部位及び患者の状態）に依存する。しかし
典型的にはＯＣＦは、傷害された部位の回りに１回の注
射で又は多数回の注射で約１００単位の量で投与される
か、又はＯＣＦをニトロセルロースか又は別の吸収性の
担体にしみこませる。正確な投与量は経験的に決定され
る。

ＯＣＦは傷害を受けたらできるだけ早く投与することが
好ましい。即ちＯＣＦは慢性傷害よりも急性傷害への使
用に好ましい。本発明では再生の期間が長いと再生を促
進することが難しくなるであうろ。

ＯＣＦ単独の投与でもよい結果が得られるが、その効果
を増強するであろう任意の療法を同時に組合せることも
できる。例えば傷害部位に低エネルギーのレーザー（好
ましくはＨｅ−Ｎｅレーザー（５分間／日、３５ｍＷ）
）を照射すると、傷害後の悪化過程を遅らすことができ
、傷の形成を遅らすことができる（アジア（Ａｉｓｉｘ
　）ら、プレインレサーチ（Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、）第
４７６巻、２０５−２１５頁、１９８８年）。

本発明で治療される疾患は多岐にわたり、これらは当業
者には明らかであろう。これらにはを髄の傷害、視神経
への傷害又は聴覚神経じぇの傷害などがあるが、これら
に限定されるものではない。

神経手術又は腫瘍により引き起こされる中枢神経系ニュ
ーロンへの傷害もまた本発明の方法により治療すること
ができる。

本発明の目的のためにＯＣＦは任意の薬剤としは許容さ
れる担体又は賦形剤とともに製剤化できる。ＯＣＦは水
溶液（例えば無菌の水溶液）とすることもできる。ＯＣ
Ｆを含有する溶液又は粉末は安定剤を用いて安定化する
ことができる。該組成物は傷害を受けた細筆の再生の促
進のために有効な量で、 傷害部位に投与される。

文献 ■、　　ニー・ビグナミ、エル・エフ・エング、デイー
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　ｏｆｒｅｇｅｎｅｒａ＋＋ｎｇ　ｆｉｃｈ　ｏｐｔｉ
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ｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｇｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　）　、　
　ジャーナルオブニュロサイエンスリサーチ（Ｊ、　Ｎ
ｅｕ＋ｏｓｃＲｅｓ、）　、第２２巻（１９８９）２６
９−２７３頁５、　　ジー・ニス・アイゼンバース、エ
フ＠ニス・ウオルシュ、エム、ニーレンバーグ （Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｂ、　Ｇ、　Ｓ、　Ｗａｌｓｈ、
　Ｆ、　Ｓ　ａｎｄ　ＮｉｒｅｎｂｅｒｇＭ、）、ニュ
ーロンの原形質膜抗原に対するモノクローナル抗体（Ｍ
ｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄ７　ｔｏ　ａｐｌ
ａｓｍａ　ｍｅｍｂｒｚｎｅ　ｘｎｊｉｇｅｎ　ｏｆ　
ｎｅｕｒｏｎｓ）　、プロシーディングズオブナショナ
ルアカデミーオブサイエンシーズ・米国（Ｐｒｏｃ、　
Ｎａｐ、＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）。

第７６巻（１９７９）４９１３−４９１７頁６、　　シ
ーΦフェンチーコンスタント、エム・シー・ラフ（ｆｆ
ｅｎｃｈ−Ｃｏｎｓｔａｎｔ、　Ｃ，ａｎｄ　Ｒａｆｆ
、　Ｍ、　Ｃ，）　。

成体ラットの視神経中の増殖しているパイポテンシャル
ダリア前駆細胞（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｊｉｎｇｂｉｐｏ
ｔｅ＋ｕｉｉｌ　ｇｌｉ！ｌ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　
ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ａｄｕｌｔｒａ＋　ｏｐｔｉｃ　ｎ
ｃｒｖｅ　）　、　　ネーチャー（ロンドン）（Ｎａｔ
ｕｒｅ　（Ｌｏｎｄ、））　、第３１９巻（１９８９ａ
）４９９−５０２頁 ７、　　　エム昏ハダニ、ニー・バレル、ニー・ソロモ
ン、エム・ベルキン、ブイ・ラビエ、エム・シュワルツ
（Ｈａｄａｎｉ、　Ｍ、　、　Ｈａｒｅｌ、　Ａ、　、
　Ｓｏｌｏｍｏｎ＾Ｂｅ１ｋｉｎ、Ｍ、、Ｌａｖｉｅ、
Ｖ、ａｎｄ　５ｃｈｔａｒｌｚ、Ｍ、　）　、新生児ウ
サギの視神経由来の物質は成体ウサギの傷害を受けた神
経中の再生−関連応答を誘発する（Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
ｓ　ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｏｐｔｉｃ　
ｎｅｒｖｅｓｏｌ　ｎｅｏｎａｔａｌ　ｒａｂｂｉｔ　
１ｎｄｕｃｅ　ｒｅｇｅ＋ａｌｉｏｎａｓｓｏｃｉａｔ
ｅｄ　Ｉｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　１ｎｊｕｒｅｄ　ｎｅ
「ｖｅｓ　ｏｆａｄｕｌｔ　ｒａｂｉｔ　）　、プロシ
ーディングズオブナショナルアカデミーオブサイエンシ
ーズ・米国（Ｐｒｏｃ、　Ｎａ口、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ
、　ＵＳＡ　、　）　、第８１巻（１９８４）７９６５
−７９６９頁 ８、−　　ジー・ジェゼリッチ、ティー・ローメン（Ｊ
ｅｓｅｒｉｃｈ、Ｇ、ａｎｄ　Ｒｏｍｅｎ、Ｔ、　）　
、ダリア（Ｇｌｉａ）第３巻（１）（１９８９）６５−
７４頁９、　　ブイ・ラビエ、ブイ・バレル、ニー・ド
ロン、ニー・ソロモン、デイ−・ロベル、エム・ベルキ
ン、ニス・ベンーバサート、ニス・シャーマ、エム−シ
ュ’）ル”７　（Ｌａｖｉｅ、　Ｖ、　、　Ｈａｔｅｌ
、　Ａ、　、　ＤｏｒｏｎＡ、　、　Ｓｏｌｏｍｏｎ、
　Ａ、　、　Ｌｏｂｅｌ、　Ｄｌ、　Ｂｅ１ｋｉｎ、　
Ｍ、　、　Ｂｅｎ−Ｂａ５ｓｘｔ。

Ｓ、、　Ｓｈａｒｍａ、　Ｓ、　ａｎｄ　５ｃｈｖａｒ
ｊｒ、　Ｍ、）　、増殖中の視神経から調整された培地
を含む移植物に対する成体ウサギの傷害を受けた視神経
の形態学的応答（Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｓ
ｐｏｎｓｅ　ｏｆ　１ｎｊｕｔｅｄ　ａｄｕＨｒａｂｂ
Ｎ　ｏｐｔｉｃ　ｎｅｒｖｅｓ　ｔｏ　ｉｍｐｌａｎｔ
ｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍｅ＋Ｉｉａ　ｃｏｎｄｉｔ
ｉｏｎｅｄ　ｂ７　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｏｐｔｉｃ　ｎｅ
ｒｖｅｓ　）、プレインリサーチ（Ｂｒａｉｎ　Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ）　、第４１９巻（１９８７）１６６−１７
２頁 １Ｇ、　　　エルｅイー・リリエン、エムーセントナー
エイチ・ローラー、ニス・エム・ヒユーズ、エム・シー
・ラフ（Ｌｉｌｌｉｅｎ、Ｌ、Ｅ、５ｅｎｄｔｎｅｒ、
Ｍ、。

Ｒｏｈｔｅｒ、　Ｈ，、Ｈｕｇｅｓ、　Ｓ、　Ｍ、　ａ
ｎｄ　Ｂａ目、Ｍ、Ｃ，）、　ラットの脳の培養物中の
２型星状細胞の成長は、１かた星状細胞により産生され
るＣＮＴＦ様淡白により開始される（Ｔ７ｐｅ−２ａｓ
ｔｒｏｃ７ｔｅ　ｄｅｖｅｌｏｐａ＋ｅｌ　ｉｎ　ｒａ
ｔｂｒｘｉｎ　　ｃａｌｆｕｒｅｓ　　ｉｔ　　１ｎｔ
ｊｉｓｊｅｄ　　ｂ７　　ｓ　　ＣＮ丁Ｆ−１ｉｋｅｐ
ｔｏｊｅｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂ７　ｊ７ｐｃ−１
１ｓｔｏｔｃ７ｊｅｓ　）　、　＝ニーロン（Ｎｅｕｒ
ｏｎ）　、第１巻（１９８８）４８５−４９４頁 １１、　　　ケー・デイ−・マカーシー、ジェイ・デベ
リス（ＭｃＣａｒｆｈｙ、　Ｋ、　Ｄ、　ａｎｄ　Ｄｅ
Ｖｅｌｌｉｓ、　１．　）　、ラットの脳組織からの星
状細胞と寡突起神経膠細胞の異なる培養物の調製（Ｐｒ
ｅｐａｒａｊｉａｎ　ｏｆ　ｓｅｐａｔａｔｅａｓＨｏ
ｇｌｉａｌ　ａｎｄ　ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｇｌｉａ
ｌ　ｃｅｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔａｊ　ｃｅｒ
ｅｂｒ＠ｌ　ｔｉｓｓｕｅ　）　、　　ジャーナルオブ
セルバイオロジー（Ｊ、Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　）第
８５１巻（１９８０）８９０−９０２頁 １２、　　　アール・エイチ・ミラー、エム・シー・う
７　（Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｒ，Ｈ，ａｎｄ　Ｒａ１ｆ、　
Ｍ、　Ｃ，）　、　　ジャーナルオブニュロサイエンス
（１，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　　）第４巻（１９８４）５
８５−５９２頁 １３、　　　エム・ノープル、エル・ムレイ、ピー・ス
トロ−バント、エム・デイーφウォーターフィールド、
ピー・リトル（Ｎｏｂｌｅ、　Ｍ、　Ｍｕｔｔａ７．　
Ｌ。

５ｔｔｏｏｂａｌ、　Ｐ　、　、　Ｗｘｔｅｒｆｉｅｌ
ｄ、　Ｍ、　Ｄ、　ａｎｄ　Ｒｉｄｄｌｅ、　Ｐ、　）
　。

血小板由来増殖因子は寡突起神経膠細胞と星状細胞の前
駆細胞の分裂と運動性を促進し早期の分化を阻害する（
Ｐｌａｊｅｌｅｊ−ｄｅｒｉｙｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆ
ａｃｊｏｔＰｒｏＩＩｌｏｔｅｓ　ｄｉｙｉｓｉｏｎ　
ａｎｄ　ｍｏｊｉｌＨ７ａｎｄ　ｉｎｈｉｂＮｓｐｒｅ
ｍａｔｕｒｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ
　ｔｈｅｏ１ｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃ７ｊｅ／１７ｅ　２
　ａｓｊｏ＋ｏｅ７ｊｅ　ｐｒｏｇｅｎＨｏｒｃｅｌｌ
）　、ネーチャー（ロンドン）　　（Ｎａｔｕｒｅ（Ｌ
ｏｎｄ、　）　）第３３３巻（１９８８）５６０−５５
６２頁 １４、　　　エム・シー・ラフ、エル・イー・リリエン
、ダブりニー・デイ−・リチャードソン、ジエイ・エフ
・バーン、エム・デイーφノープル（ｂｆｆＭ、　Ｃ，
、Ｌｉ１ｌｉｅｎ、　Ｌ、　Ｅ、、　Ｒｉｃｈｘｒｄｓ
ｏｎ、　Ｗ、　Ｄ、、　Ｂｕｒｎｅｊ、Ｆ、　ａｎｄ　
Ｎｏｂｌｅ、　Ｍ、　Ｄ、　）　、星状細胞からの血小
板由来増殖因子は、培養物中の寡突起神経膠細胞の成長
の時間を決める時計を動かす （Ｐｌａｊｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　
ｆａｃｊｏｔ　ｆｔｏｍｇｓｔｒｏｃ７ｊｅｓ　ｄｒｉ
ｖｅｓ　ｔｈｅ　ｃｌｏｃｋ　ｔｈａｔ　ｌｉｍｅｓｏ
ｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃ７ｔｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ
ｔ　ｉｎ　ｃｏｏｎｒｅ）　、　ネーチャー（ロンドン
）　　（Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌａｎｄ、　）　）第３３３
巻（１９８８）５６２−５６５頁 １５、　　　エム・シー・ラフ、アール・エイチ・ミラ
ー　（Ｒａｌｆ、　Ｍ、　Ｃ，ａｎｄ　Ｍｉ　ｌｌｅ＋
、　Ｒ，Ｈ，）　、ティー・アイ・エフ・ニス（Ｔ、　
１．　Ｎ、　Ｓ、　）第７巻（１９８４）４６９−４７
２頁 １６、　　　エム・シー・ラフ、アール・エイチ・ミラ
ー、エム・ノープル（Ｒａｆｆ、　Ｍ、　Ｃ，、Ｍｉｌ
ｌｅｒ、　ＲｏＨ，ａｎｄＮｏｂｌｅ、Ｍ、　）　、培
地に依存して星状細胞または寡突起神経膠細胞に成長す
るダリア前駆細胞（＾ｇｌａｉｌ　ｐ＋ｏｇｅｎＨｏｒ
　ｃｅｌｌ　ｊｈｒｔ　ｄｅｗｅｌｏｐｓ　ｉｎ　ｗ自
ｒ。

１ｎｔｏ　　ａｎ　　ａｓｌｏｒｃ７ｊｅ　　Ｏｔ　　
ａｎ　　ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃ７１ｅｄｅｐｅｎｄ
ｉｇｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ
　）　、ネーチャー（ロンドン）　　（Ｎａｔｕｒｅ　
（Ｌｏｎｄ、　　）　）　、　第３０３巻（１９８３）
３９０−３９６頁 １７、　　　エム・シー・ラフ、アール、マースシーケ
ー・エル・フィールズ、アール−ピー・リサク、ニス・
エイチ・フォーフマン、デイ−・エイチｅシルバーバー
グ、エフ・ニー・グレンソン、ニス・ライボウィッッ、
エム・シー・ケネディー（Ｒａｆｆ、Ｍ、Ｃ，、Ｍｉｒ
ｓｋ７．Ｒｏ、Ｆｉｅｌｄｓ、に、　　Ｌ、、Ｌｉ５ａ
ｋＲ，Ｐ、Ｆｏｒｆｍｘｎ、　Ｓ、　Ｈ，、Ｓｉｌｂｅ
ｒｂｅｇ、　Ｄ　、　Ｈ，、ＧｔｅｎｓｏｎＮ　Ａ、　
Ｌｅｉｂｏｖ山、　Ｓ、　ａｎｄ　Ｋｅｎｎｅｄ７．　
Ｍ　、　Ｃ，）　、ガラクトセレブロサイドは培養物中
の寡突起神経膠細胞の特異的な細胞表面抗原マーカーで
ある（Ｇａｌａｃｌｏｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ　ｉｓ　
ａ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｅｌｌｓｕｒｆａｃｅ　ａｎ
ｔｉｇｅｎｉｃ　ｍａｔｋｅｒ　ｆｏｒｏｌｉｇｏｄｅ
ｎｄｒｏｃ７ｊｅｓ　ｉｎ　ｅｎｄｕｒｅ　）　、　Ｎ
ａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ　）　、第２７２巻（１９７
８）８１３−８１６頁 １８、デイ−・ニス・ロビンス、ワイ・シラン、ピー・
ドライスプール、ニー・ライノく一マン、エイチ・ニス
・シン、エム・エル・シン、（ＲｏｂｂｉｎｓＤＳ　　
５ｈｉｒａｘｉ、Ｙ、、Ｄｒ７ｓｄａｌｅ、Ｂ、、Ｌｉ
ｂｅｔｍａｎ、＾。

５ｈｉｎ　Ｈ，Ｓ、　ａｎｄ　５ｈｉｎ、Ｍ、　Ｌ、）
　、刺激した星状細胞番コよる寡突起神経膠細胞の細胞
毒性因子の産生（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｌ
ｏｊｏｘｉｃ　ｆａｃｔｏｒ　ｆｏｒｏｌｉｇｏｄｅｎ
ｄｒｏｃｙｔｅｓ　ｂ７　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ａｓ
ｔｏｔｃｙＨｓ　）　。

ジャーナルオブイムノロジー（］、　Ｉｍｍｎｎｏｌ、
）、第１３９巻（１９８７）２５９３−２５９７頁１９
、　　シー・エル・ローゼン、アール・ピー・ブンゲ、
エム・デイ−・アート、ピー・エム・ウッド（Ｒｏｓｅ
ｎ、　Ｃ，Ｌ、、　Ｂｕｎｇｅ、　Ｒ，Ｐ、、　Ａｒｄ
、　Ｍ、　Ｄ　、　ａｎｄ　Ｗｏｏｄ、Ｐ。

Ｍ、）、１型星状細胞は試験管内（夏ｎｖＨｏｒ）で成
体ラットの寡突起神経膠細胞によるミニリン化を阻害す
る（Ｔｙｐｅ　１　ｇｓｊｒｏｃｙ＋ｅｓ　ｉｎｈｉｂ
ｉｔｍ７ｅｌｉｎａｔｉｏｎ　ｂ７１ｄｕＨｒａｔ　ｏ
ｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃ７＋ｅｓ　ｉｎマｕｏｒ　）　
＋　　ジャーナルオブニュロサイエンス（ＪＮｅｕｒｏ
ｓｃｉ、　）　、第９巻（１９８８）３３７１−１１７
９頁 ２Ｇ、　　　ダブリュー・デイ−・リチャードソン、エ
フφプリンゲル、エム働ジエイ・マスレイ、ビー拳ウェ
スターマーク、エム・デュボアーダルク（Ｒｉｃｈｘｒ
ｄｓｏｎ、Ｗ、　Ｄ、、　Ｐｒｉｎｇｌｇ、　Ｎ、、　
Ｍｏ５ｌｅ７．　Ｍ、Ｊ。

Ｗｅｓｔｅｒｍｇｔｋ　Ｂ、ａｎｄ　Ｄｕｂｏ目−Ｄａ
ｌｃｑ、Ｍ、）　、中枢神経系の正常な神経膠形成にお
ける血小板由来増殖因子の役割（Ａ　ｒｏｌｅ　ｆｏｔ
　ｐｌａｊｅｌｒｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈｆ
ａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｌｉｏｇｅｎｅｎ
ｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｅｎｔｒａｎｅｒｗｏｕｓ　
ｓ７ｓｌｅｍ）　、セル（Ｃｅｌｌ）　、第５３巻（１
９８８）３０９−３１９頁 ２１、　　　エム・シュワルツ、エム・ベルキン、ニー
ｅバレル、ニー・ソロモン、ブイ・ラビエ、エム・ハダ
ニ、アイ・ラチャイロピッチ、シー・スタイン−アイザ
ック（ＳｃｂｖａＮｘ、　Ｍ、　、　Ｂｅ１ｋｉｎ、　
ＭＨａｒｅｌ、＾　、、Ｓｏｌｏｍｏｎ、＾、、Ｌａｖ
ｉｅ、Ｖ、、Ｈａｄａｎｉ、　　ＭＲａｃｈａｉｌｏｖ
ｉｃｈ、　１．　ａｎｄ　５ｔｅｉｎ−１ｚｓａｋ、　
Ｃ，）　、成体ウサギの傷害を受けた視神経中の再生し
ている視神経と再生様応答（Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ
　ｆｉｃｈ　ｏｐｔｉｃｎｅｒｖｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｇ
ｅｎｅｒａ目ｏｎ−ｌｉｋｅ　ｔｅｓｐｏｎｓｅ　１ｎ
ｉｎｊｕｒｅｄ　ｏｐｔｉｃ　ｎｅｒｖｅ　ｏｆ　ａｄ
ｊｌｔ　ｒａｂｂｉｔ、　、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ　）　、第２２８巻（１９８５）６００−６０３頁 ２２、　　　ケー・ダブリュー・セルマジ、シー・イオ
ウ・ラミエ（Ｓｅｌａ＋ａｉ、に、Ｗ、ｉｎｄ　Ｒａｍ
ｔｅ、Ｃ，Ｓ、　）　、腫瘍壊死因子は試験管内（ｉｎ
ｖ日ｒｏ）でミニリンと寡突起神経膠細胞の傷害を媒介
する（ＴａｍＯｒｒｅｃｒｏｓｉｓ　ＩａＣＩＯｒ　ｍ
ｅｄｉａｔｅｓ　ｍ７ｅｌｉｎ　ｘｎｄｏ１ｉｇｏｄｅ
ｎｄ＋ｏｃｙＨｓ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　ｗＮｒｏ、ア
ン・ニュウロル（＾ｎｎ、Ｎｅｕｒｏ１．　）　、第２
３巻（１９８８）３３９−３４６頁 ２３、　　　フィー　’／７−、エム・シャフナ−（Ｓ
ｏｍｍｅｒ、　１．　ａｎｄ　５ｃｈｘｃｈｎｅｒ、Ｍ
、　）　、寡突起神経膠細胞の細胞表面に対するモノク
ローナル抗体（０１から０４）：中枢神経計の免疫組織
学的研究（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ（０１ｔｏ　０４）　ｔ。

ｏ１ｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃ７ｊｅ　ｃｅｌｌ　５ｕｔｌ
ａｃｅｓ　：＾ｎｉｍｍｕｎｏｃｙ＋ｏ１０ｇｉｃａｌ
　Ｎｕｄ７　ｉｎ　ｔｉｅ　ｃｅｎｔｒａｌｎｅｔｖｏ
ｕｓ　ｓ７Ｎｅｍ）　、ダブ・ビオル（Ｄｅｖ、　Ｂｉ
ｏｌ、　）。

第８３巻（１９８１）３１１−３２７頁４、図面の簡単
な説明　　　　　亭 第１図は、生物の形態を示す写真であり、成熟ラットの
傷害を受けた視神経の培養物中での成熟０４陽性細胞へ
の魚ＣＭ−Ｈの効果を示す。

第２図は、出産１日後のラットの脳のＧａ１ｅ陽性細胞
の試験管内（ｉｎ　ｖｉＨｏ）成長への、ＣＭ−Ｒの効
果を示す。

第３図は新生児ラットの脳の寡突起神経膠細胞の培養物
中のＧａ１ｃ陽性細胞の成長に対するＣＭ−ＲとＣＭ−
Ｎの効果の比較を示す。

第４図は、生物の形態を示す写真であり、新生児ラット
の脳の寡突起神経膠細胞に対するＰＤＧＦとＣＭ−Ｈの
効果を比較したものである。

第５図は、ＣＭ−ＲとＰＤＧＦを組み合わせて適用した
場合のＧａ１ｃ陽性細胞に対する効果を示している。

第６図は、生物の形態を示す写真であり、新生児ラット
のＣＭ−Ｒは星状細胞と寡突起神経膠細胞の混合培養物
中の寡突起神経膠細胞に選択的に影響することを示して
いる。

第７図は、生物の形態を示す写真であり、魚の神経培養
物中の血液由来マクロファージを示す。

第８図は、生物の形態を示す写真であり、非特異的エス
テラーゼで陽性のマクロファージを示す。

第９図は、生物の形態を示す写真であり、分離前に臓器
培養した（ｏｒｇａｎ　ｃｏｌｏｒｅｄ）魚の視神経の
培養物中の内在するマクロファージを示している。

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. （１）寡突起神経膠細胞系細胞（ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒ
   ｏｃｙｔｅＩｉｎｅａｇｅ）に対して選択的に毒性であ
   る、寡突起神経膠細胞細胞毒性因子（ＯＣＦ）、その塩
   、前駆体、断片及び／又は同族体、そしてＯＦＣ又はそ
   の断片及び／又は同族体の官能基誘導体。
2. （２）寡突起神経膠細胞系細胞に対して選択的に毒性で
   あり、その毒性は傷害を受けた神経の培養物中の成熟寡
   突起神経膠細胞の数を低下させる能力により測定される
   、寡突起神経膠細胞細胞毒性因子（ＯＣＦ）、その塩、
   前駆体、断片及び／又は同族体、そしてＯＣＦ又、はそ
   の断片及び／又は同族体の官能基誘導体。
3. （３）寡突起神経膠細胞系細胞の前駆細胞の成熟寡突起
   神経膠細胞及び２型星状細胞への分化を阻害する、特許
   請求の範囲第１項又は第２項に記載の因子。
4. （４）水溶性でありかつ熱感受性である、５６℃での加
   熱により活性を失う、特許請求の範囲第１項から第３項
   までのいずれか１項に記載の因子。
5. （５）プロテアーゼ感受性であり、トリプシンによる消
   化によりその活性を失う、特許請求の範囲第１項から第
   ４項までのいずれか１項に記載の因子。
6. （６）下等を脊椎動物の再生中の傷害を受けた神経（例
   えば傷害を受けた魚の視神経）から得られ、上記再生中
   の神経の調整培地から精製できる、特許請求の範囲第１
   項から第５項までのいずれか１項に記載の因子。
7. （７）マクロファージから得られ、マクロファージの調
   整培地から精製できる、特許請求の範囲第１項から第６
   項までのいずれか１項に記載の因子。
8. （８）下等脊椎動物の再生中の傷害を受けた神経（例え
   ば傷害を受けた魚の視神経）から得られ、哺乳動物の神
   経の培養物中の成熟寡突起神経膠細胞の数を低下させる
   、特許請求の範囲第１項から第７項までのいずれか１項
   に記載の因子。
9. （９）以下の特徴を有する寡突起神経膠細胞細胞毒性因
   子： １、寡突起神経膠細胞系細胞に対して選択的に毒性であ
   るが、他の細胞（例えば１型星状細胞や繊維芽細胞）に
   対しては毒性はない； ２、下等脊椎動物や哺乳動物の傷害を受けた神経の培養
   物中の成熟寡突起神経膠細胞の数を低下させる； ３、寡突起神経膠細胞系細胞の前駆細胞の、成熟寡突起
   神経膠細胞及び２型星状細胞への分化を阻害する； ４、水溶性である； ５、熱感受性であり、５６℃での加熱により活性を失う
   ； ６、プロテアーゼ感受性であり、トリプシン消化により
   その活性を失う； ７、下等脊椎動物の再生中の傷害を受けた神経（例えば
   傷害を受けた魚の視神経）の調整された培地中に存在し
   、下等脊椎動物の傷害を受けていない神経の調整された
   培地や哺乳動物の傷害を受けたか又は受けていない神経
   の調整された培地には存在しない； ８、マクロファージの調整された培地中に存在する；そ
   して ９、下等脊椎動物の再生中の傷害を受けた神経又はマク
   ロファージの調整された培地から精製できる。
10. （１０）特許請求の範囲第１項から第９項までのいずれ
    か１項に記載の寡突起神経膠細胞細胞毒性因子に対する
    抗体。
11. （１１）ポリクローナル抗体である特許請求の範囲第１
    ０項に記載の抗体。
12. （１２）モノクローナル抗体である特許請求の範囲第１
    ０項に記載の抗体。
13. （１３）哺乳動物の神経の再生を誘導するための薬剤と
    して活性のある物質として使用される、特許請求の範囲
    第１項から第９項までのいずれか１項に記載の因子、そ
    の塩、前駆体、断片及び／又は同族体、そして上記因子
    又はその断片及び／又は同族体の官能基誘導体。
14. （１４）哺乳動物の中枢神経系の傷害を受けた神経の再
    生を誘導するのに使用される、特許請求の範囲第１項か
    ら第９項までのいずれか１項に記載の因子、その塩、前
    駆体、断片及び／又は同族体、そして上記因子又はその
    断片及び／又は同族体の官能基誘導体。
15. （１５）哺乳動物の中枢神経系の再生のための薬剤組成
    物の調製に使用される、特許請求の範囲第１項から第９
    項までのいずれか１項に記載の因子、その塩、前駆体、
    断片及び／又は同族体、そして上記因子又はその断片及
    び／又は同族体の官能基誘導体。
16. （１６）薬剤として許容される担体とともに、活性成分
    として特許請求の範囲第１項から第９項までのいずれか
    １項に記載の寡突起神経膠細胞細胞毒性因子、又はその
    塩、前駆体、断片及び／又は同族体、又は上記因子又は
    その断片又は同族体の官能基誘導体、又はこれらの混合
    物よりなる、薬剤組成物。
17. （１７）中枢神経系の神経の再生のための標的臓器への
    局所投与用の、特許請求の範囲第１６項に記記載の薬剤
    組成物。
18. （１８）傷害の部位へ投与した時、傷害された軸策の再
    生を促進するのに有効な量の、単位服用量の寡突起神経
    膠細胞細胞毒性因子と、薬剤として許容される担体又は
    賦形剤よりなる薬剤組成物。
19. （１９）下等脊椎動物又はマクロファージの再生中の神
    経の再調整した培地を分離手段（例えばクロマトグラフ
    ィー）に供することよりなる、特許請求の範囲第１項か
    ら第９項までのいずれか１項に記載の因子の製造方法。