JPH0346564A - 免疫測定方法および免疫センサー - Google Patents
免疫測定方法および免疫センサーInfo
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- JPH0346564A JPH0346564A JP18291889A JP18291889A JPH0346564A JP H0346564 A JPH0346564 A JP H0346564A JP 18291889 A JP18291889 A JP 18291889A JP 18291889 A JP18291889 A JP 18291889A JP H0346564 A JPH0346564 A JP H0346564A
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- Japan
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- immunoassay method
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明（よ 主として臨床検査における病原体あるいは
疾病マーカーなどの検蟲 さらには広〈産業上の極微量
の物質を簡便にかつ迅速に測定する免疫測定方法および
免疫センサーに関する。
疾病マーカーなどの検蟲 さらには広〈産業上の極微量
の物質を簡便にかつ迅速に測定する免疫測定方法および
免疫センサーに関する。
従来の技術
従来 極微量の物質の迅速かつ高感度な免疫的測定法に
（よ 被検出物質あるいは蛍光プローブで標識された被
検出物質（蛍光プローブ標識被検出物質）の結合による
抗体および蛍光プローブの蛍光強度の変化を蛍光測定装
置内で測定する方法が用いられて来た この方法は あ
らかじめ蛍光測定装置内のミクロセルに抗体溶液、また
は蛍光プローブを用いる場合は抗体溶液と蛍光プローブ
標識被検出物質を注入しておき、次に被検出物質を加え
て抗体に結合させ、一定時間経過後の蛍光強度を測定す
ることによって被検出物質の量を測定するものである。
（よ 被検出物質あるいは蛍光プローブで標識された被
検出物質（蛍光プローブ標識被検出物質）の結合による
抗体および蛍光プローブの蛍光強度の変化を蛍光測定装
置内で測定する方法が用いられて来た この方法は あ
らかじめ蛍光測定装置内のミクロセルに抗体溶液、また
は蛍光プローブを用いる場合は抗体溶液と蛍光プローブ
標識被検出物質を注入しておき、次に被検出物質を加え
て抗体に結合させ、一定時間経過後の蛍光強度を測定す
ることによって被検出物質の量を測定するものである。
発明が解決しようとする課題
前項で記載したように従来の免疫的検出方法では被検出
溶液を蛍光測定装置内のミクロセルに注入し 一定時間
後に蛍光強度を測定しなければならず、被検出溶液の運
搬が困難なものや被検出溶液の数が多い時にはミクロセ
ルへの被検出溶液の注入に時間と手間がかかり、これを
改善する方法が望まれていた 本発明は このような従来技術の課題を解決することを
目的とすも 課題を解決するための手段 本発明は 従来蛍光測定装置内に備えられていた反応相
を蛍光測定装置外に出し 光ファイバーで蛍光測定装置
と反応相を結び励起光と出力光を伝達する方法によって
被検出物質の検出を行なう。
溶液を蛍光測定装置内のミクロセルに注入し 一定時間
後に蛍光強度を測定しなければならず、被検出溶液の運
搬が困難なものや被検出溶液の数が多い時にはミクロセ
ルへの被検出溶液の注入に時間と手間がかかり、これを
改善する方法が望まれていた 本発明は このような従来技術の課題を解決することを
目的とすも 課題を解決するための手段 本発明は 従来蛍光測定装置内に備えられていた反応相
を蛍光測定装置外に出し 光ファイバーで蛍光測定装置
と反応相を結び励起光と出力光を伝達する方法によって
被検出物質の検出を行なう。
この反応相は検出物質は透過するが抗体は透過しない半
透膜に覆われており、反応相を検出溶液に直接浸すと、
被検出溶液中の被検出物質が半透膜を通過して反応相に
入り、これが反応相内の抗体と結合する事により蛍光強
度が変化して被検出溶液中の被検出物質の濃度が測定さ
れる。
透膜に覆われており、反応相を検出溶液に直接浸すと、
被検出溶液中の被検出物質が半透膜を通過して反応相に
入り、これが反応相内の抗体と結合する事により蛍光強
度が変化して被検出溶液中の被検出物質の濃度が測定さ
れる。
作用
本発明ｔ−１上記の手段により、被検出溶液の運搬が困
難なものや被検出溶液の数が多いものでも簡便に極微量
の物質の迅速かつ高感度な測定が可能となる。
難なものや被検出溶液の数が多いものでも簡便に極微量
の物質の迅速かつ高感度な測定が可能となる。
実施例
以下に 本発明の実施例について図面を参照しながら説
明する。
明する。
実施例１
トリニトロトルエンの免疫的測定方法；抗トリニトロト
ルエン抗体は２８０ ｎｍの励起光による３４０ｎｍの
蛍光がトリニトロトルエンと結合することにより減少す
る性質（蛍光消光性）を持１ この抗体を光ファイバー
の先端に備えられた反応相に加入 反応相を直接被検出
溶液に浸し 蛍光の伝達を光ファイバーで行うことによ
って被検出物質を検出した （Ａ）バッファー（ｐＨ７のリン酸バッファーを０．４
５μｍのフィルターでろ過したもの）で抗トリニトロト
ルエン抗体を溶解して２Ｘ１０−’Ｍの濃度としｆＱ、
この溶液３８０μｌを反応相（２０℃に設定）に加
え１． この反応相に２８０ｎｍの蛍光を光ファイバ
ーにより伝達し３４０ ｎｍの蛍光を光ファイバーによ
り取り出して強度を測定すると蛍光強度は約４５であっ
１゜ （Ｂ）上記（Ａ）のセンサーの反応相を種々の濃度のト
リニトロトルエン溶液に浸し２８０ｎｍ励起の３４０
ｎｍの蛍光強度を測定するとトリニトロトルエンの濃度
に依存して３４０ ｎｍの蛍光強度は減少しｔも 減
少率■ （％）を、次式を用いて算出した ここで、Ｆはトリニトロトルエン溶液に反応相を浸す前
の蛍光強度 またＦ ｏｂｓは反応相をトリニトロトル
エン溶液に浸したときの蛍光強度を示す。
ルエン抗体は２８０ ｎｍの励起光による３４０ｎｍの
蛍光がトリニトロトルエンと結合することにより減少す
る性質（蛍光消光性）を持１ この抗体を光ファイバー
の先端に備えられた反応相に加入 反応相を直接被検出
溶液に浸し 蛍光の伝達を光ファイバーで行うことによ
って被検出物質を検出した （Ａ）バッファー（ｐＨ７のリン酸バッファーを０．４
５μｍのフィルターでろ過したもの）で抗トリニトロト
ルエン抗体を溶解して２Ｘ１０−’Ｍの濃度としｆＱ、
この溶液３８０μｌを反応相（２０℃に設定）に加
え１． この反応相に２８０ｎｍの蛍光を光ファイバ
ーにより伝達し３４０ ｎｍの蛍光を光ファイバーによ
り取り出して強度を測定すると蛍光強度は約４５であっ
１゜ （Ｂ）上記（Ａ）のセンサーの反応相を種々の濃度のト
リニトロトルエン溶液に浸し２８０ｎｍ励起の３４０
ｎｍの蛍光強度を測定するとトリニトロトルエンの濃度
に依存して３４０ ｎｍの蛍光強度は減少しｔも 減
少率■ （％）を、次式を用いて算出した ここで、Ｆはトリニトロトルエン溶液に反応相を浸す前
の蛍光強度 またＦ ｏｂｓは反応相をトリニトロトル
エン溶液に浸したときの蛍光強度を示す。
トリニトロトルエンの濃度に対する蛍光強度の減少率を
第１図に示す。第１図の結果から、約１０−７６Ｍの濃
度のトリニトロトルエンが本発明により検出できたこと
が証明され丸 な抵 本実施例では被検出物質と結合時に蛍光強度が消
光する性質を持つ抗体として抗トリニトロトルエン抗体
を用いた力丈 一般にこのような蛍光消光についての性
質を持つ抗体を用いれば上記の方法での極微量の物質の
検出が可能である。
第１図に示す。第１図の結果から、約１０−７６Ｍの濃
度のトリニトロトルエンが本発明により検出できたこと
が証明され丸 な抵 本実施例では被検出物質と結合時に蛍光強度が消
光する性質を持つ抗体として抗トリニトロトルエン抗体
を用いた力丈 一般にこのような蛍光消光についての性
質を持つ抗体を用いれば上記の方法での極微量の物質の
検出が可能である。
実施例２
メタンフェタミンの免疫的測定方法；
抗メタンフエタミン抗体は蛍光消光性は持っていない力
丈 ダンシル基で標識したメタンフェタミン（ダンシル
標識メタンフェタミン）と結合した時、 ２８０ｎｍの
波長で励起すると５３０ ｎｍの波長の蛍光強度が増強
する性質を持１ この抗体とダンシル標識メタンフェタ
ミンを光ファイバーの先端に備えられた反応相に角丸
反応相を直接被検出溶液に浸し 蛍光の伝達を光ファイ
バーで行うことによって被検出物質を検出し１゜（Ａ）
バッファー（ｐＨ７のリン酸バッファーを０．４５μｍ
のフィルターでろ過したもの）で抗メタンフエタミン抗
体を溶解して２Ｘ１０−’Ｍの濃度とした この溶液３
６０μｍを反応相（２０℃に設定）に入れ さらに１０
”’Ｍのダンシル標識メタンフェタミンを２０μｌ加え
１． この反応相に２８０ ｎｍの蛍光を光ファイバ
ーにより伝達し５３０ｎｍの蛍光を光ファイバーにより
取り出してその強度を測定すると蛍光強度は約６０であ
った （Ｂ）上記（Ａ）のセンサーの反応相を種々の濃度のメ
タンフェタミン溶液に浸し２８０ ｎｍ励起の５３０ｎ
ｍの蛍光強度を測定するとメタンフェタミンの濃度に依
存して５３０ｎｍの蛍光強度は減少した 減少率■ （
％）を、次式を用いて算出しｔも ここで、Ｆは反応相をメタンフェタミン溶液に浸す前の
蛍光強度、またＦ ｏｂｓは反応相をメタンフェタミン
溶液に浸したときの蛍光強度を示す。メタンフェタミン
の濃度に対する蛍光強度の減少率を第２図に示す。第２
図の結果から約１０−ＬＳＭの濃度のメタンフェタミン
が本発明により検出できたことが証明された また ダンシル基で標識したメタンフェタミンの代わり
にダンシル基で標識したアンフェタミンを用いても同様
の結果を得ることができた以上 主としてメタンフェタ
ミンの検出を例にＱ− とって本発明の説明を行なった力交 もちろんその他の
化学物質すべてに応用可能な一般的方法である。
丈 ダンシル基で標識したメタンフェタミン（ダンシル
標識メタンフェタミン）と結合した時、 ２８０ｎｍの
波長で励起すると５３０ ｎｍの波長の蛍光強度が増強
する性質を持１ この抗体とダンシル標識メタンフェタ
ミンを光ファイバーの先端に備えられた反応相に角丸
反応相を直接被検出溶液に浸し 蛍光の伝達を光ファイ
バーで行うことによって被検出物質を検出し１゜（Ａ）
バッファー（ｐＨ７のリン酸バッファーを０．４５μｍ
のフィルターでろ過したもの）で抗メタンフエタミン抗
体を溶解して２Ｘ１０−’Ｍの濃度とした この溶液３
６０μｍを反応相（２０℃に設定）に入れ さらに１０
”’Ｍのダンシル標識メタンフェタミンを２０μｌ加え
１． この反応相に２８０ ｎｍの蛍光を光ファイバ
ーにより伝達し５３０ｎｍの蛍光を光ファイバーにより
取り出してその強度を測定すると蛍光強度は約６０であ
った （Ｂ）上記（Ａ）のセンサーの反応相を種々の濃度のメ
タンフェタミン溶液に浸し２８０ ｎｍ励起の５３０ｎ
ｍの蛍光強度を測定するとメタンフェタミンの濃度に依
存して５３０ｎｍの蛍光強度は減少した 減少率■ （
％）を、次式を用いて算出しｔも ここで、Ｆは反応相をメタンフェタミン溶液に浸す前の
蛍光強度、またＦ ｏｂｓは反応相をメタンフェタミン
溶液に浸したときの蛍光強度を示す。メタンフェタミン
の濃度に対する蛍光強度の減少率を第２図に示す。第２
図の結果から約１０−ＬＳＭの濃度のメタンフェタミン
が本発明により検出できたことが証明された また ダンシル基で標識したメタンフェタミンの代わり
にダンシル基で標識したアンフェタミンを用いても同様
の結果を得ることができた以上 主としてメタンフェタ
ミンの検出を例にＱ− とって本発明の説明を行なった力交 もちろんその他の
化学物質すべてに応用可能な一般的方法である。
実施例３
免疫センサー；
実施例１および２で説明した反応相を光ファイバーを介
して蛍光測定装置に結合させ、免疫センサーを作製した
第３図（ａ）に示すように 測定機構（よ 蛍光測定
装置ｌで調整した波長の光を光ファイバー２によって反
応相３に伝達し 反応相３内の抗体を励起し 反応相３
より出力された蛍光を光ファイバー２によって蛍光測定
装置ｌに伝達しここで蛍光強度を測定するものである。
して蛍光測定装置に結合させ、免疫センサーを作製した
第３図（ａ）に示すように 測定機構（よ 蛍光測定
装置ｌで調整した波長の光を光ファイバー２によって反
応相３に伝達し 反応相３内の抗体を励起し 反応相３
より出力された蛍光を光ファイバー２によって蛍光測定
装置ｌに伝達しここで蛍光強度を測定するものである。
第３図（ｂ）４ｉ その反応相３を中心とする暗示断
面図である。半透膜５がＯリング４を介して、光ファイ
バー２の先端に取り付けられている。
面図である。半透膜５がＯリング４を介して、光ファイ
バー２の先端に取り付けられている。
な抵 実施例１および実施例２は本免疫センサーを用い
て行なったものである。
て行なったものである。
また 光ファイバー２の末端に備えられた反応相３が光
ファイバー２と脱着が可能であってもよＩＯ− 発明の効果 本発明により、水溶液中の極微量物質を迅速にかつ簡便
に測定することが可能になった
ファイバー２と脱着が可能であってもよＩＯ− 発明の効果 本発明により、水溶液中の極微量物質を迅速にかつ簡便
に測定することが可能になった
第１図（ま本発明の実施例１の免疫的測定方法によって
測定した各トリニトロトルエン濃度における蛍光減少率
を示したグラフ、第２図は本発明の実施例２の免疫的測
定方法によって測定した各メタンフェタミン濃度におけ
る蛍光減少率を示したグラフ、第３図は本発明における
免疫センサーの暗示断面図であり、 （ａ）は免疫セン
サーの全体暗示は （ｂ）は反応相付近の拡大図を示す
ものである。 １・・・蛍光測定装置 ２・・・光ファイバー、３・・
・反応祖 ４・・・Ｏリング、 ５・・・半透風
測定した各トリニトロトルエン濃度における蛍光減少率
を示したグラフ、第２図は本発明の実施例２の免疫的測
定方法によって測定した各メタンフェタミン濃度におけ
る蛍光減少率を示したグラフ、第３図は本発明における
免疫センサーの暗示断面図であり、 （ａ）は免疫セン
サーの全体暗示は （ｂ）は反応相付近の拡大図を示す
ものである。 １・・・蛍光測定装置 ２・・・光ファイバー、３・・
・反応祖 ４・・・Ｏリング、 ５・・・半透風
Claims (13)
- （１）光ファイバーの末端に半透膜で覆われた反応相を
備え、この反応相の中に被検出物質と結合する前後で蛍
光特性が変化する特徴を持つ抗体を含有させ、この反応
相を被検出溶液中に浸して蛍光特性の変化を測定する場
合に、光ファイバーを通して励起光および出力光の伝達
を行なうことを特徴とする免疫的測定方法。 - （２）光ファイバーの末端に半透膜で覆われた反応相を
備え、この反応相の中に、被検出物質と結合する抗体お
よび蛍光プローブで標識した被検出物質を含有させ、こ
の反応相を被検出溶液中に浸した際、半透膜を通過して
反応相内に入った被検出物質と蛍光プローブで標識した
被検出物質との抗体結合の競合反応に伴う蛍光特性の変
化を測定する場合に光ファイバーを通して励起光および
出力光の伝達を行なうことを特徴とする免疫的測定方法
。 - （３）光ファイバーの末端の半透膜で覆われた反応相が
ｐＨ６〜９の緩衝溶液で満たされていることを特徴とす
る請求項１又は２記載の免役的測定方法。 - （４）蛍光強度が被検出物質との結合により減少する抗
体を用いることを特徴とする請求項１記載の免疫的測定
方法。 - （５）蛍光プローブで標識した被検出物質の蛍光強度が
抗体と結合することによって増強することを特徴とする
請求項２記載の免疫的測定方法。 - （６）被検出物質に標識する蛍光プローブがダンシル基
であることを特徴とする請求項２記載の免疫的測定方法
。 - （７）被検出物質および蛍光プローブで標識した被検出
物質と結合する抗体がポリクローナル抗体であることを
特徴とする請求項１又は２記載の免疫的測定方法。 - （８）被検出物質および蛍光プローブで標識した被検出
物質と結合する抗体がモノクローナル抗体であることを
特徴とする請求項１又は２記載の免疫的測定方法。 - （９）被検出物質がトリニトロトルエンであることを特
徴とする請求項１記載の免疫的測定方法。 - （１０）被検出物質がメタンフェタミン、アンフェタミ
ン又はエフェドリンであることを特徴とする請求項２記
載の免疫的測定方法。 - （１１）請求項１記載の免疫的測定方法を用いることを
特徴とする免疫センサー。 - （１２）請求項２記載の免疫的測定方法を用いることを
特徴とする免疫センサー。 - （１３）光ファイバーの末端に備えられた反応相が光フ
ァイバー部と脱着が可能であることを特徴とする請求項
１１又は１２項記載の免疫センサ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1182918A JPH07113638B2 (ja) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | 免疫測定方法および免疫センサー |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1182918A JPH07113638B2 (ja) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | 免疫測定方法および免疫センサー |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0346564A true JPH0346564A (ja) | 1991-02-27 |
| JPH07113638B2 JPH07113638B2 (ja) | 1995-12-06 |
Family
ID=16126660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1182918A Expired - Fee Related JPH07113638B2 (ja) | 1989-07-14 | 1989-07-14 | 免疫測定方法および免疫センサー |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07113638B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993013418A1 (en) * | 1991-12-20 | 1993-07-08 | Ibiden Co., Ltd. | Fluorescent immunity measuring instrument |
| US5523845A (en) * | 1994-02-04 | 1996-06-04 | Biosensor Laboratories Co., Ltd. | A fiber optic device for measuring liquids which are drawn into an end of the device to a predetermined distance from the end of the optical fibers |
-
1989
- 1989-07-14 JP JP1182918A patent/JPH07113638B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993013418A1 (en) * | 1991-12-20 | 1993-07-08 | Ibiden Co., Ltd. | Fluorescent immunity measuring instrument |
| US5449625A (en) * | 1991-12-20 | 1995-09-12 | Ibiden Co., Ltd. | Optical fiber based fluorescent immunoassay apparatus |
| US5523845A (en) * | 1994-02-04 | 1996-06-04 | Biosensor Laboratories Co., Ltd. | A fiber optic device for measuring liquids which are drawn into an end of the device to a predetermined distance from the end of the optical fibers |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07113638B2 (ja) | 1995-12-06 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |