JPH0339679B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0339679B2 JPH0339679B2 JP56097310A JP9731081A JPH0339679B2 JP H0339679 B2 JPH0339679 B2 JP H0339679B2 JP 56097310 A JP56097310 A JP 56097310A JP 9731081 A JP9731081 A JP 9731081A JP H0339679 B2 JPH0339679 B2 JP H0339679B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- guanosine
- inosine
- carbohydrates
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 claims 8
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims 6
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 claims 4
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 4
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 claims 4
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 claims 3
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims 3
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 claims 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/813—Continuous fermentation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/84—Brevibacterium
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/843—Corynebacterium
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、イノシンおよびグアノシンの製造法
に関する。 イノシンおよびグアノシンは、医薬品や呈味性
5′−リボヌクレオチドなどの合成原料として重要
な物質であり、これを安価かつ大量に製造するこ
とは、工業上きわめて意義深いことである。 従来、イノシンまたは／およびグアノシンの製
造法としては、天然物中から抽出単離する方法、
あるいは、微生物による発酵法などが知られてい
るが、いずれの方法も、製造工程が煩雑であつた
り、原料が高価であつたり、あるいは発酵収率が
低かつたりなどの欠点を有し、工業的見地からは
必ずしも満足できるものではない。 本発明者らは、微生物によるイノシンまたは／
およびグアノシンの発酵生産において、発酵収率
の高いイノシンまたは／およびグアノシンの製造
法を確立するために、種々検討を重ねた結果、発
酵培地の主原料として用いられる糖質を、従来の
初発培地に一括して添加する方法を改め、微生物
の糖消費速度を勘案しつつ、培養の進行中に少量
ずつ間歇的あるいは連続的に添加することによつ
て、イノシンまたは／およびグアノシンの生成収
率が、飛躍的に増大するという新事実を見出し、
この知見に基いて鋭意研究を重ねた結果、本発明
を完成した。 本発明は、イノシンまたは／およびグアノシン
生産能を有するバチルス属に属する微生物を炭素
源として糖質を含む培地に培養しイノシンまた
は／およびグアノシンを培養物中に生成蓄積せし
め培養物からイノシンまたは／およびグアノシン
を採取する方法において、該培地中の炭素源とし
ての糖質の濃度が約１％以下にある状態で糖質を
間歇的あるいは連続的に添加し、培地中の糖質の
濃度を約１％を越えないように維持して培養する
ことを特微とするイノシンまたは／およびグアノ
シンの製造法である。 本発明方法において、培地に添加される炭素源
としての糖質としては、たとえば糖類〔例、グル
コース，フラクトース，マンノース，シユークロ
ース，マルトース，糖蜜，澱粉，澱粉の加水分解
物（例，コーンスターチの糖化液など）など〕，
糖アルコール（例，ソルビトールなど）などが挙
げられる。 本発明方法においては、培養中に炭素源として
の糖質の濃度が約１％以下にある状態で、炭素源
として糖質を間歇的あるいは連続的に添加し、培
地中の糖質の濃度を約１％を越えないように維持
して培養を行なう。培養の初発培地中の炭素源と
しての糖質濃度は約１％以下でも約１％以上であ
つてもよいが、後者の場合には培養を開始して該
糖質濃度が約１％以下になつた後に糖質を添加し
始めればよい。また、上記初発培地中の炭素源と
しての糖質の仕込濃度は、約４％以下である場合
が好ましい。 本発明方法においては、培養液中の糖質濃度は
上記したように約１％以下の範囲から選ばれた所
定の値に制御されるが、そのように培養液中の糖
質濃度を制御する期間は、培養開始から培養終了
までの培養の全期間であつてもよいが、その中の
特定の期間、たとえばイノシンまたは／およびグ
アノシン生成の旺盛な培養12時間目頃から培養終
了までの期間であつてもよい。 また、培養液中の糖質濃度を所定の値に制御す
るためには、培養液中の残存糖量を常に把握して
おく必要があるが、そのような方法としては、た
とえば、通常の糖測定試薬を用いて、培養液中の
糖質濃度を直接知る方法のほかに、各種センサー
類を用いて、培養液や培養排気ガス中の酸素ガス
濃度や炭酸ガス濃度を測定することによつて、培
養液中の糖質濃度を間接的に知る方法などがあげ
られる。なかでも、後者の方法、すなわち各種セ
ンサー類を用いて培養液中の糖質濃度を知る方法
においては、それらの測定機器と糖質フイード装
置とを連動させることによつて、培養液中の糖質
濃度を、所定の値に自動的に制御することが可能
であり、便宜である。 本発明で使用される微生物は、イノシンまた
は／およびグアノシン生産能を有するバチルス属
に属する微生物であればいずれでもよい。該バチ
ルス属菌としては、たとえばバチルス・プミルス
（Bacillus pumilus），バチルス・ズブチリス
（Bacillus subtilis）などの種が挙げられ、具体
的には、バチルス・プミルスNo.158−Ａ−17
（FERM BP−７，IFO 12477），バチルス・ズブ
チリスATCC 13956（IFO 14124）などが挙げら
れる。上記FERM BP番号は、ブダペスト条約
による工業技術院微生物工業技術研究所の寄託番
号を、ATCC番号はジ・アメリカン・タイプ・カ
ルチヤー・コレクシヨン（The American Type
Culture Collection）（米国）の寄託番号を、IFO
番号は財団法人発酵研究所の寄託番号をそれぞれ
表わす。なお、上記IFO 12477株は特公昭51−
46839号公報に記載されている。また、上記
ATCC 13956株は、ジ・アメリカン・タイプ・カ
ルチヤー・コレクシヨン（ATCC）発行のカタロ
グ・オブ・ストレインズ第14版1980年（The
American Type Culture Collection Catalogue
of Strains Ｉ Fourteenth Edition 1980）に収
載されている。 該培地には炭素源以外には、窒素源等が、通常
の培養におけると同様の方法で添加される。窒素
源としては、コーン・スチープ・リカー，綿実
粕，酵母エキス，乾燥酵母，フイツシユミール，
肉エキス，ペプトン，カザアミノ酸などの有機物
質やアンモニアガス，アンモニア水，硫酸アンモ
ニウム，塩化アンモニウム，炭酸アンモニウム，
硝酸アンモニウム，リン酸アンモニウムなどの無
機窒素化合物のほかに、尿素，アミノ酸など有機
窒素化合物が使用される。また培地には、上記の
炭素源や窒素源のほかに、用いる微生物の生育や
イノシンまたは／およびグアノシンの蓄積に必要
な種々の金属，ビタミン，アミノ酸類が適宜添加
される。 培養は、振盪あるいは通気撹拌深部培養などの
好気的条件下に実施される。培養温度は通常約20
ないし45℃の範囲から、用いる微生物の生育およ
びイノシンまたは／およびグアノシンの蓄積に好
適な温度が選択される。また培養液のPHは約５な
いし９程度が好適で、培養中のPHをこのような至
適PH域に保つために、硫酸，塩酸，アンモニアガ
ス，アンモニア水，水酸化ナトリウム水溶液，水
酸化カリウム水溶液，炭酸カルシウム，生石灰な
どを適宜添加してもよい。このような条件下に、
通常約48ないし120時間培養すれば培地中に著量
のイノシンまたは／およびグアノシンが生成され
る。 このようにして培養液中に蓄積されたイノシン
または／およびグアノシンは、通常の精製手段、
たとえばイオン交換樹脂や活性炭によるクロマト
グラフイー，沈澱法，あるいは溶媒抽出法などに
よつて容易に採取することができる。 従来、微生物を利用するイノシンまたは／およ
びグアノシンの発酵生産については、すでにいく
つかの報告がなされているが、それらの報告にお
いては、主炭素源である糖質を、培養開始時に一
括して初発培地に添加する方法がとられている
（例えば、野上ら；アミノ酸核酸，17巻，66頁，
1967年。城ら；アミノ酸核酸，16巻，100頁1967
年。）。また、すでに一部の核酸関連物質の発酵生
産においては、培養の途中で糖質を追補添加する
ことによつて、糖質の使用量を増大させる試みも
なされている（例えば、小谷ら；Agric.Biol.
Chem.、42巻，399頁，1978年。）が、このような
場合も、培養液中の糖質濃度が通常の常識的な濃
度域を逸脱し、微生物の生育が著しく阻害される
などの事態を回避するためのものであつて、培養
液中の糖質濃度をあらかじめ定められた値に制御
しようとするものではない。 これに対して、本発明の方法は、イノシンまた
は／およびグアノシン生成能を有するバチルス属
に属する微生物を、培養液中の糖質濃度を，イノ
シンまたは／およびグアノシンの生産期におい
て，約１％以下のあらかじめ定められた値に制御
しつつ、培養を行うもので、上記の方法とは明ら
かに異なる新規な方法であり、イノシンまたは／
およびグアノシンの対消費糖収率を向上させるこ
とができる。 したがつて、本発明の方法においては、対消費
糖収率を向上させることができるので、原材料で
ある糖質の使用量を減らすことができ、本発明は
工業上有利な方法である。 以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体的
に説明する。なお、以下においてパーセント
（％）はとくにことわりのないかぎり、重量／容
量パーセント（ｗ／ｖ，％）を表わす。 実施例 １ 栄養寒天培地上に生育したパチルス・プミルス
No.158−Ａ−17（FERM BP−７；IFO12477）を
ソルビトール２％，KH2PO4 0.1％，K2HPO4
0.3％，乾燥酵母２％からなる滅菌されたシード
培地に接種し、37℃で18時間振盪培養した。５
容ジヤーフアーメンターにグルコース0.8％，
（NH4）2SO40.4％，グルタミン酸ソーダ0.5％
KH2PO4 0.05％，KCl 0.1％，CaCl2・2H2O 0.2
％，MnSO4・4H2O 0.003％，ヒスチジン0.03％，
ビオチン200μｇ／，MgSO4・7H2O 0.2％，リ
ボ核酸（純度70.3％）0.25％，コーンステイープ
リカー１％からなる滅菌主培地２を入れ、上記
シード培養物200mlを移殖した。温度38℃，回転
数1000rpm，通気量1.2／minにて培養を開始
し、培養中は25％（ｖ／ｖ）アンモニア水を自動
的に添加してPHを6.4に保持した。なお、炭素源
であるグルコース溶液の添加は以下に示す方法で
行なつた。 方法Ａ：培養開始後、培養液中のグルコース濃
度が0.1％以下になつた９時間目から培養液中の
グルコース濃度が0.005％ないし0.1％の範囲に保
持されるように、培養液中のグルコース濃度を、
２時間毎にグルコース・オキシダーゼを用いる酵
素法で測定しながら、別途滅菌した80％グルコー
ス溶液を連続的に添加しつつ、56時間培養を続け
た。この間に消費されたグルコースの量は160ｇ
であつた。 方法Ｂ：培養開始直後より培養液中のグルコー
ス濃度が１％以下に保持されるように、Ａと同様
にしてグルコースを連続的に添加しつつ、48時間
培養を続けた。この間に消費されたグルコースの
量は150ｇであつた。 方法Ｃ：培養開始直後より培養液中のグルコー
ス濃度が1.8％ないし2.2％の範囲に保持されるよ
うに、方法Ａと同様にしてグルコースを連続的に
添加し、40時間培養を継続した。この間のグルコ
ース消費量は140ｇであつた。 方法Ｄ：培養開始時に140ｇのグルコースを添
加し、培地中のグルコースが消費されてしまう42
時間目まで培養を継続した。 上記のそれぞれの方法で培養を行なつた各培養
物中のイノシンおよびグアノシン量を高速液体ク
ロマトグラフイーを用いて測定し、第１表に示す
結果を得た。
に関する。 イノシンおよびグアノシンは、医薬品や呈味性
5′−リボヌクレオチドなどの合成原料として重要
な物質であり、これを安価かつ大量に製造するこ
とは、工業上きわめて意義深いことである。 従来、イノシンまたは／およびグアノシンの製
造法としては、天然物中から抽出単離する方法、
あるいは、微生物による発酵法などが知られてい
るが、いずれの方法も、製造工程が煩雑であつた
り、原料が高価であつたり、あるいは発酵収率が
低かつたりなどの欠点を有し、工業的見地からは
必ずしも満足できるものではない。 本発明者らは、微生物によるイノシンまたは／
およびグアノシンの発酵生産において、発酵収率
の高いイノシンまたは／およびグアノシンの製造
法を確立するために、種々検討を重ねた結果、発
酵培地の主原料として用いられる糖質を、従来の
初発培地に一括して添加する方法を改め、微生物
の糖消費速度を勘案しつつ、培養の進行中に少量
ずつ間歇的あるいは連続的に添加することによつ
て、イノシンまたは／およびグアノシンの生成収
率が、飛躍的に増大するという新事実を見出し、
この知見に基いて鋭意研究を重ねた結果、本発明
を完成した。 本発明は、イノシンまたは／およびグアノシン
生産能を有するバチルス属に属する微生物を炭素
源として糖質を含む培地に培養しイノシンまた
は／およびグアノシンを培養物中に生成蓄積せし
め培養物からイノシンまたは／およびグアノシン
を採取する方法において、該培地中の炭素源とし
ての糖質の濃度が約１％以下にある状態で糖質を
間歇的あるいは連続的に添加し、培地中の糖質の
濃度を約１％を越えないように維持して培養する
ことを特微とするイノシンまたは／およびグアノ
シンの製造法である。 本発明方法において、培地に添加される炭素源
としての糖質としては、たとえば糖類〔例、グル
コース，フラクトース，マンノース，シユークロ
ース，マルトース，糖蜜，澱粉，澱粉の加水分解
物（例，コーンスターチの糖化液など）など〕，
糖アルコール（例，ソルビトールなど）などが挙
げられる。 本発明方法においては、培養中に炭素源として
の糖質の濃度が約１％以下にある状態で、炭素源
として糖質を間歇的あるいは連続的に添加し、培
地中の糖質の濃度を約１％を越えないように維持
して培養を行なう。培養の初発培地中の炭素源と
しての糖質濃度は約１％以下でも約１％以上であ
つてもよいが、後者の場合には培養を開始して該
糖質濃度が約１％以下になつた後に糖質を添加し
始めればよい。また、上記初発培地中の炭素源と
しての糖質の仕込濃度は、約４％以下である場合
が好ましい。 本発明方法においては、培養液中の糖質濃度は
上記したように約１％以下の範囲から選ばれた所
定の値に制御されるが、そのように培養液中の糖
質濃度を制御する期間は、培養開始から培養終了
までの培養の全期間であつてもよいが、その中の
特定の期間、たとえばイノシンまたは／およびグ
アノシン生成の旺盛な培養12時間目頃から培養終
了までの期間であつてもよい。 また、培養液中の糖質濃度を所定の値に制御す
るためには、培養液中の残存糖量を常に把握して
おく必要があるが、そのような方法としては、た
とえば、通常の糖測定試薬を用いて、培養液中の
糖質濃度を直接知る方法のほかに、各種センサー
類を用いて、培養液や培養排気ガス中の酸素ガス
濃度や炭酸ガス濃度を測定することによつて、培
養液中の糖質濃度を間接的に知る方法などがあげ
られる。なかでも、後者の方法、すなわち各種セ
ンサー類を用いて培養液中の糖質濃度を知る方法
においては、それらの測定機器と糖質フイード装
置とを連動させることによつて、培養液中の糖質
濃度を、所定の値に自動的に制御することが可能
であり、便宜である。 本発明で使用される微生物は、イノシンまた
は／およびグアノシン生産能を有するバチルス属
に属する微生物であればいずれでもよい。該バチ
ルス属菌としては、たとえばバチルス・プミルス
（Bacillus pumilus），バチルス・ズブチリス
（Bacillus subtilis）などの種が挙げられ、具体
的には、バチルス・プミルスNo.158−Ａ−17
（FERM BP−７，IFO 12477），バチルス・ズブ
チリスATCC 13956（IFO 14124）などが挙げら
れる。上記FERM BP番号は、ブダペスト条約
による工業技術院微生物工業技術研究所の寄託番
号を、ATCC番号はジ・アメリカン・タイプ・カ
ルチヤー・コレクシヨン（The American Type
Culture Collection）（米国）の寄託番号を、IFO
番号は財団法人発酵研究所の寄託番号をそれぞれ
表わす。なお、上記IFO 12477株は特公昭51−
46839号公報に記載されている。また、上記
ATCC 13956株は、ジ・アメリカン・タイプ・カ
ルチヤー・コレクシヨン（ATCC）発行のカタロ
グ・オブ・ストレインズ第14版1980年（The
American Type Culture Collection Catalogue
of Strains Ｉ Fourteenth Edition 1980）に収
載されている。 該培地には炭素源以外には、窒素源等が、通常
の培養におけると同様の方法で添加される。窒素
源としては、コーン・スチープ・リカー，綿実
粕，酵母エキス，乾燥酵母，フイツシユミール，
肉エキス，ペプトン，カザアミノ酸などの有機物
質やアンモニアガス，アンモニア水，硫酸アンモ
ニウム，塩化アンモニウム，炭酸アンモニウム，
硝酸アンモニウム，リン酸アンモニウムなどの無
機窒素化合物のほかに、尿素，アミノ酸など有機
窒素化合物が使用される。また培地には、上記の
炭素源や窒素源のほかに、用いる微生物の生育や
イノシンまたは／およびグアノシンの蓄積に必要
な種々の金属，ビタミン，アミノ酸類が適宜添加
される。 培養は、振盪あるいは通気撹拌深部培養などの
好気的条件下に実施される。培養温度は通常約20
ないし45℃の範囲から、用いる微生物の生育およ
びイノシンまたは／およびグアノシンの蓄積に好
適な温度が選択される。また培養液のPHは約５な
いし９程度が好適で、培養中のPHをこのような至
適PH域に保つために、硫酸，塩酸，アンモニアガ
ス，アンモニア水，水酸化ナトリウム水溶液，水
酸化カリウム水溶液，炭酸カルシウム，生石灰な
どを適宜添加してもよい。このような条件下に、
通常約48ないし120時間培養すれば培地中に著量
のイノシンまたは／およびグアノシンが生成され
る。 このようにして培養液中に蓄積されたイノシン
または／およびグアノシンは、通常の精製手段、
たとえばイオン交換樹脂や活性炭によるクロマト
グラフイー，沈澱法，あるいは溶媒抽出法などに
よつて容易に採取することができる。 従来、微生物を利用するイノシンまたは／およ
びグアノシンの発酵生産については、すでにいく
つかの報告がなされているが、それらの報告にお
いては、主炭素源である糖質を、培養開始時に一
括して初発培地に添加する方法がとられている
（例えば、野上ら；アミノ酸核酸，17巻，66頁，
1967年。城ら；アミノ酸核酸，16巻，100頁1967
年。）。また、すでに一部の核酸関連物質の発酵生
産においては、培養の途中で糖質を追補添加する
ことによつて、糖質の使用量を増大させる試みも
なされている（例えば、小谷ら；Agric.Biol.
Chem.、42巻，399頁，1978年。）が、このような
場合も、培養液中の糖質濃度が通常の常識的な濃
度域を逸脱し、微生物の生育が著しく阻害される
などの事態を回避するためのものであつて、培養
液中の糖質濃度をあらかじめ定められた値に制御
しようとするものではない。 これに対して、本発明の方法は、イノシンまた
は／およびグアノシン生成能を有するバチルス属
に属する微生物を、培養液中の糖質濃度を，イノ
シンまたは／およびグアノシンの生産期におい
て，約１％以下のあらかじめ定められた値に制御
しつつ、培養を行うもので、上記の方法とは明ら
かに異なる新規な方法であり、イノシンまたは／
およびグアノシンの対消費糖収率を向上させるこ
とができる。 したがつて、本発明の方法においては、対消費
糖収率を向上させることができるので、原材料で
ある糖質の使用量を減らすことができ、本発明は
工業上有利な方法である。 以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体的
に説明する。なお、以下においてパーセント
（％）はとくにことわりのないかぎり、重量／容
量パーセント（ｗ／ｖ，％）を表わす。 実施例 １ 栄養寒天培地上に生育したパチルス・プミルス
No.158−Ａ−17（FERM BP−７；IFO12477）を
ソルビトール２％，KH2PO4 0.1％，K2HPO4
0.3％，乾燥酵母２％からなる滅菌されたシード
培地に接種し、37℃で18時間振盪培養した。５
容ジヤーフアーメンターにグルコース0.8％，
（NH4）2SO40.4％，グルタミン酸ソーダ0.5％
KH2PO4 0.05％，KCl 0.1％，CaCl2・2H2O 0.2
％，MnSO4・4H2O 0.003％，ヒスチジン0.03％，
ビオチン200μｇ／，MgSO4・7H2O 0.2％，リ
ボ核酸（純度70.3％）0.25％，コーンステイープ
リカー１％からなる滅菌主培地２を入れ、上記
シード培養物200mlを移殖した。温度38℃，回転
数1000rpm，通気量1.2／minにて培養を開始
し、培養中は25％（ｖ／ｖ）アンモニア水を自動
的に添加してPHを6.4に保持した。なお、炭素源
であるグルコース溶液の添加は以下に示す方法で
行なつた。 方法Ａ：培養開始後、培養液中のグルコース濃
度が0.1％以下になつた９時間目から培養液中の
グルコース濃度が0.005％ないし0.1％の範囲に保
持されるように、培養液中のグルコース濃度を、
２時間毎にグルコース・オキシダーゼを用いる酵
素法で測定しながら、別途滅菌した80％グルコー
ス溶液を連続的に添加しつつ、56時間培養を続け
た。この間に消費されたグルコースの量は160ｇ
であつた。 方法Ｂ：培養開始直後より培養液中のグルコー
ス濃度が１％以下に保持されるように、Ａと同様
にしてグルコースを連続的に添加しつつ、48時間
培養を続けた。この間に消費されたグルコースの
量は150ｇであつた。 方法Ｃ：培養開始直後より培養液中のグルコー
ス濃度が1.8％ないし2.2％の範囲に保持されるよ
うに、方法Ａと同様にしてグルコースを連続的に
添加し、40時間培養を継続した。この間のグルコ
ース消費量は140ｇであつた。 方法Ｄ：培養開始時に140ｇのグルコースを添
加し、培地中のグルコースが消費されてしまう42
時間目まで培養を継続した。 上記のそれぞれの方法で培養を行なつた各培養
物中のイノシンおよびグアノシン量を高速液体ク
ロマトグラフイーを用いて測定し、第１表に示す
結果を得た。
【表】
実施例 ２
実施例１と同組成のシード培地に、第２表に示
す菌株をそれぞれ接種し、38℃，18時間振盪培養
後、実施例１と同組成の主培地に移殖して、実施
例１と同様の方法で培養した。このとき、グルコ
ースの添加方法は実施例１の「方法Ａ」および
「方法Ｄ」の方法で行なつた。培養終了後、実施
例１に記載の方法に従つて培養物中のイノシンお
よびグアノシンを定量し、対糖収率を計算して、
第２表に示す結果を得た。
す菌株をそれぞれ接種し、38℃，18時間振盪培養
後、実施例１と同組成の主培地に移殖して、実施
例１と同様の方法で培養した。このとき、グルコ
ースの添加方法は実施例１の「方法Ａ」および
「方法Ｄ」の方法で行なつた。培養終了後、実施
例１に記載の方法に従つて培養物中のイノシンお
よびグアノシンを定量し、対糖収率を計算して、
第２表に示す結果を得た。
【表】
実施例 ３
実施例１と同組成のシード培地100を200容
シード培養槽に仕込み、常法に従つて滅菌，冷却
した。これに坂口フラスコで培養したバチルス・
プミルスNo.158−Ａ−17（FERM BP−７，
IFO12477）を接種し、温度37℃，撹拌回転数
180rpm，通気量50／minの条件で18時間培養
した。別に、実施例１のグルコース0.8％をコー
ンスターチ糖化液４％にかえた主発酵培地900
を、2000容発酵槽に仕込み、常法に従つて滅菌
冷却した後、これに前記シード培養物100を移
植して、38℃，240rpm，800／minの条件で培
養を開始した。培養開始後、20時間目から、培養
液中のグルコース濃度が0.001％ないし0.1％の範
囲に保持されるように、培養液中のグルコース濃
度をグルコスタツト法で１時間毎に測定しなが
ら、コーンスターチの糖化液を10分おきに間歇的
に添加して71時間まで培養を継続した。この間、
初発液に対しグルコースに換算して20％の糖化液
が消費された。なお培養液のPHは培養の全期間を
通じて25％アンモニア水で6.3ないし6.5に自動的
に調節した。培養終了後、培養液中のイノシンお
よびグアノシンを高速液体クロマトグラフイーで
定量した所，それぞれ29.6ｇ／，および4.2
ｇ／であつた。なお、この場合の対糖収率は両
者の合計で21.3％であつた。 上記培養液の1000をとり、苛性ソータでPHを
10に調節して過し、この液900を1000の
アニオン交換樹脂アンバーライトIRA−402（Cl−
型）（ローム・アンド・ハース社製，米国）のカ
ラムにかけた後、0.2NHClでSV＝１の速度で溶
出を行い、イノシンおよびグアノシンの含有区分
4000を得た。次に、これを850の活性炭のカ
ラムに吸着させたのち、5v／ｖ，％のブタノー
ル・水を用いて溶出し、えられたイノシンおよび
グアノシンの面分（5100）を苛性ソーダで中和
後、減圧下で濃縮した（140）。この濃縮液を５
℃に冷却して、イノシン（22.0Kg）とグアノシン
（2.9Kg）の混合結晶を得た。
シード培養槽に仕込み、常法に従つて滅菌，冷却
した。これに坂口フラスコで培養したバチルス・
プミルスNo.158−Ａ−17（FERM BP−７，
IFO12477）を接種し、温度37℃，撹拌回転数
180rpm，通気量50／minの条件で18時間培養
した。別に、実施例１のグルコース0.8％をコー
ンスターチ糖化液４％にかえた主発酵培地900
を、2000容発酵槽に仕込み、常法に従つて滅菌
冷却した後、これに前記シード培養物100を移
植して、38℃，240rpm，800／minの条件で培
養を開始した。培養開始後、20時間目から、培養
液中のグルコース濃度が0.001％ないし0.1％の範
囲に保持されるように、培養液中のグルコース濃
度をグルコスタツト法で１時間毎に測定しなが
ら、コーンスターチの糖化液を10分おきに間歇的
に添加して71時間まで培養を継続した。この間、
初発液に対しグルコースに換算して20％の糖化液
が消費された。なお培養液のPHは培養の全期間を
通じて25％アンモニア水で6.3ないし6.5に自動的
に調節した。培養終了後、培養液中のイノシンお
よびグアノシンを高速液体クロマトグラフイーで
定量した所，それぞれ29.6ｇ／，および4.2
ｇ／であつた。なお、この場合の対糖収率は両
者の合計で21.3％であつた。 上記培養液の1000をとり、苛性ソータでPHを
10に調節して過し、この液900を1000の
アニオン交換樹脂アンバーライトIRA−402（Cl−
型）（ローム・アンド・ハース社製，米国）のカ
ラムにかけた後、0.2NHClでSV＝１の速度で溶
出を行い、イノシンおよびグアノシンの含有区分
4000を得た。次に、これを850の活性炭のカ
ラムに吸着させたのち、5v／ｖ，％のブタノー
ル・水を用いて溶出し、えられたイノシンおよび
グアノシンの面分（5100）を苛性ソーダで中和
後、減圧下で濃縮した（140）。この濃縮液を５
℃に冷却して、イノシン（22.0Kg）とグアノシン
（2.9Kg）の混合結晶を得た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ イノシンまたは／およびグアノシン生産能を
有するバチルス属に属する微生物を炭素源として
糖質を含む培地に培養しイノシンまたは／および
グアノシンを培養物中に生成蓄積せしめ培養物か
らイノシンまたは／およびグアノシンを採取する
方法において、該培地中の炭素源としての糖質の
濃度が約１％以下にある状態で糖質を間歇的ある
いは連続的に添加し、培地中の糖質の濃度を約１
％を越えないように維持して培養することを特微
とするイノシンまたは／およびグアノシンの製造
法。 ２ 培地中の炭素源としての糖質が消費されてそ
の濃度が約１％以下になつた後に糖質を添加し始
める特許請求の範囲第１項記載の製造法。 ３ 培地中の炭素源としての糖質の仕込濃度が約
４％以下である特許請求の範囲第１項または第２
項記載の製造法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097310A JPS58897A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
| US06/389,459 US4452889A (en) | 1981-06-22 | 1982-06-17 | Method of producing inosine and/or guanosine |
| GB08217564A GB2100731B (en) | 1981-06-22 | 1982-06-17 | Method of producing inosine and/or guanosine by fermentation with addition of a carbohydrate |
| FR8210828A FR2508061A1 (fr) | 1981-06-22 | 1982-06-21 | Procede de production d'inosine et/ou de guanosine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56097310A JPS58897A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58897A JPS58897A (ja) | 1983-01-06 |
| JPH0339679B2 true JPH0339679B2 (ja) | 1991-06-14 |
Family
ID=14188910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56097310A Granted JPS58897A (ja) | 1981-06-22 | 1981-06-22 | イノシンおよびグアノシンの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4452889A (ja) |
| JP (1) | JPS58897A (ja) |
| FR (1) | FR2508061A1 (ja) |
| GB (1) | GB2100731B (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0211241A3 (de) * | 1985-07-06 | 1989-06-28 | Forschungszentrum Jülich Gmbh | Verfahren zur Exoenzymgewinnung durch Bakterienkultur |
| US5204245A (en) * | 1991-05-15 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Extraction of thymidine and other nucleosides |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1001452B (it) * | 1965-06-11 | 1976-04-20 | Ajinomoto Kk | Metodo per produrre inosina mediante fermentazione |
| JPS5545198B2 (ja) * | 1973-09-22 | 1980-11-17 | ||
| JPS533580A (en) * | 1976-06-29 | 1978-01-13 | Mitsubishi Oil Co Ltd | Preparation of yeast cells |
-
1981
- 1981-06-22 JP JP56097310A patent/JPS58897A/ja active Granted
-
1982
- 1982-06-17 US US06/389,459 patent/US4452889A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-06-17 GB GB08217564A patent/GB2100731B/en not_active Expired
- 1982-06-21 FR FR8210828A patent/FR2508061A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58897A (ja) | 1983-01-06 |
| FR2508061B1 (ja) | 1984-12-21 |
| GB2100731B (en) | 1985-07-17 |
| GB2100731A (en) | 1983-01-06 |
| FR2508061A1 (fr) | 1982-12-24 |
| US4452889A (en) | 1984-06-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS5937951B2 (ja) | アミドの生物学的製造法 | |
| US4245049A (en) | Preparation of 2-keto-L-gulonic acid | |
| US3575809A (en) | Method of producing guanosine by fermentation | |
| IE62149B1 (en) | Biocatalytic process for the production of L-(-)-carnitine from crotonobetaine and strains of proteeae for use in said process | |
| DE3247703C2 (de) | Verfahren zur Gewinnung von L-Threonin | |
| JPH0339679B2 (ja) | ||
| US4904587A (en) | Production of D-ribose | |
| JPS5922516B2 (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 | |
| KR880002418B1 (ko) | 이노신 및 구아노신의 제조법 | |
| US3296088A (en) | Process for the production of uridylic acid by fermentation | |
| US4596775A (en) | Microorganism and its use for the preparation of glutathione | |
| JPH05123178A (ja) | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 | |
| US3056729A (en) | Process for preparing l-lysine by fermentation of the corresponding dllactam | |
| US3787288A (en) | Method for preparing alpha-aminobenzylpenicillin | |
| US2921002A (en) | Preparation of glutamic acid by aspergillus terreus | |
| JPH09154589A (ja) | エリスリトールの製造方法 | |
| US2797187A (en) | Production of puromycin | |
| US3725201A (en) | Manufacture of uridine-5-diphosphoglucuronic acid | |
| JP3029868B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| US2538942A (en) | Process for the production of streptomycin using soybean meal-distillers solubles medium | |
| US2985564A (en) | Production of puromycin | |
| JP3006907B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| JP3065172B2 (ja) | 発酵法によるアデノシンの製造法 | |
| NO802863L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av 2,5-diketoglukonsyre | |
| JPH0157959B2 (ja) |