JPH02270875A - 化合物ｔａｎ―１１６９およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は医薬、農薬、動物薬などの製造分野において有
用な、新規化合物ＴＡＮ−１，１，６９（以下ｒＴＡＮ
−１１６９Ｊと略称することもある）、およびその製造
法に関する。

従来の技術 神経伝達物質アセデルコリンは副交感神経、体性神経、
また成る種の中枢神経の興奮により神経終末から放出さ
れ、多様な生理的機能を発揮するが、アセチルコリンエ
ステラーゼ（ＡＣｈＥ）によって速かに加水分解され、
不活性化される。この酵素の阻害剤はアセチルコリンの
不活性化を妨げ、アセチルコリン濃度を高めることが出
来、その作用機作を通じて、緑内障、重症筋無力症の治
療剤あるいは殺虫剤などとして開発されている［イー。

・コックスワース（Ｅ、Ｃｏｘｗｏｒｔｈ）　、ジ・ア
ルカロイズ（Ｔｂｅ　Ａｌｋａｌｏｉｄｓ）、アール・
マンスケ（Ｒ、Ｍａｎｓｋｅ）編、３０巻、２７頁およ
びアン・シルバー（ＡｎｎＳｉ　Ｉｖｅｒ）著、コリン
エステラーゼの生物学、Ｎｏｒｔｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ　
　Ｐｕｂ、　Ｃｏｍｐ、、　Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、　　
１９７４］。

また、最近、老人性アルツハイマー型痴呆症において脳
内アセチルコリン量の減少が原因であるとする考えから
、該酵素阻害剤がこの疾病の治療薬として研究されてい
る［　Ｒ，Ｅ、　ＢｅｃｋｅｒおよびＥ、　Ｇｉａｃｏ
ｂｉｎｉ、　　ドラッグ・デベロップメント・リサーチ
（Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｒｅ５ｅａｒｃ
ｈ）　、　１２巻。

ｐ、１６３−１９５．１９８８）。

しかし、これまで見出されたＡＣｈＥ阻害剤は毒性の強
さなどの欠点を有しており、その利用が制限されている
。

発明が解決しようとする課題 本発明者らはかかる現状に鑑み、これまで知られている
化合物とは異なる多様なＡＣｈＥ阻害剤を見出すことは
非常に重要であると考え、微生物代謝産物中に該活性を
示す化合物を広範に検索した。その結果、土壌から分離
された多数の微生物中、成る種の微生物がＡＣｈＥ阻害
物質を培地中に蓄積しうろことを知り、この化合物を単
離し、２種の成分からなることを明らかにした。それら
の物理化学的および生物学的性質から当該化合物が新規
化合物であることを確かめ、これをＴＡＮ−１１６９Ａ
およびＢと称することにした。また、該微生物がストレ
プトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属するこ
とが判明した。本発明者らは、これらの知見に基づいて
さらに研究を重ね、本発明を完成するにいたった。

すなわち本発明は（１）下式（１） ％式％） ［式中、Ｒはメチルまたは水素を示す。］で表される化
合物またはその塩、および（２）ストレプトミセス属に
属し、化合物（１）を生産し得る能力を有する微生物を
培地に培養し、培養物中に該化合物を生成蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とする化合物（１）の製造法
を提供するものである。

本発明においては（１）式においてＲがメチルである化
合物をＴＡＮ−１１６９Ａ、Ｒが水素である化合物をＴ
ＡＮｉ１６９Ｂと称することもある。

本発明の製造法で使用されるＴＡＮ−１１６９を生産す
る微生物としてはストレプトミセス属に属し、ＴＡＮ−
１１６９Ａまたは／およびＢを産生する能力を有する微
生物であればいずれのものでもよい。その例としては兵
庫県の土壌中より分離されたｐ、　Ｉ　−２，０５２株
が挙げられ、本菌株の菌学的性質は下記のとおりである
。なお、各種培地上の性質はとくに指示しない限り、２
８°Ｃで１４日間培養し、常法に従って観察したもので
あり、色調はカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏｌ
ｏｒＨａｒｍｏｎｙ　　Ｍａｎｕａｌ　　）第４版［コ
ンテイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏ
ｎＬａ１ｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ａ
ｍｅｒｉｃａ）、１９５８年発行］によった。

１、形態 気菌糸および胞子の形成は、イースト・麦芽寒天、オー
トミール寒天、グルコース・アスパラギン寒天、グリセ
ロール・アスパラギン寒天、スターチ・無機塩寒天、栄
養寒天等の培地で豊富に認められる。気菌糸の分校は単
純分岐で、車軸分岐は認められず、その先端にはスパイ
ラル状に胞子一４＝ の連鎖が認められる。菌束糸、菌核、胞子のう等の特殊
な構造は認められない。電子顕微鏡による観察では、胞
子の表面はスパイ二一であり、胞子の形は卵形であり、
それらの大きさは０，５〜０゜８Ｘ０．８〜１．２ミク
ロンで、通常１０個以上連鎖する。また、これらの胞子
は運動性を示さない。

２、各種分類培地上の性質（２８°０，１４１Ｅ間培養
） １）蔗糖硝酸塩寒天培地 生　　　育：貧弱 気　菌　糸：貧弱、白色 裏面の色二バール（３ｂａ） 可溶性色素・なし ２）酵母エキス・麦芽エキス寒天培地 中　　　育：良好 気　菌　糸：良好、パール（２ｂａ）〜コバルト・グレ
イ（２ｉｈ） 裏面の色ニライト・ノイズ（２ｅａ） 可溶性色素：なし ３）オートミール寒天培地 生　　　育：良好 気　菌　糸：良好、アイポリ−・ティント（２ｃｂ）〜
ダーク・コバルト・ グレイ（２ｉｈ） 裏面の色：イエロー・ティント（１ｂａ）可溶性色素：
なし ４）澱粉無機塩寒天培地 生　　　育：良好 気　菌　糸：良好、ナチュラル（２ｄａ）〜ベージュ・
グレイ（３ｉｈ） 可溶性色素：なし ５）グリセロール・アスパラギン寒天培地生　　　育：
良好 気　菌　糸：良好、パール（２ｈａ）〜シルバー・グレ
イ（３ｆｅ） 裏面の色二パール・ピンク（３ｃａ） 可溶性色素：なし ６）グルコース・アスパラギン寒天培地生　　　育：良
好 気　菌　糸：良好、パール（２ｂａ）〜シルバー・グレ
イ（３ｆｅ） 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）〜ライト・メ
イズ（２ｅａ） 可溶性色素：なし ７）ペプトン・酵母エキス・鉄寒天培地生　　　育：良
好 気　菌　糸：良好、パール（２ｂａ） 裏面の色ニライト・ノイズ（２ｅａ） 可溶性色素：なし ８）チロシン寒天培地 生　　　育：中程度 気　菌　糸：良好、パール（２ｂａ）〜シルバー・グレ
イ（３ｆｅ） 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）可溶性色素：
なし ９）栄養寒天培地 生　　　育：良好 気　菌　糸：良好、パール（２ｂａ）〜アイポリー・テ
ィント（２ｃｂ） ＝８− 裏面の色ニライト・アイポリ−（２ｃａ）可溶性色素：
なし ３、生理的性質 １）生育温度＝１６°Ｃ〜３８°Ｃ 至適温度＝３０℃〜３５°Ｃ ２）ゼラチンの液化：陽性 ３）澱粉の加水分解：陽性 ４）　ミルクのペプトン化：陽性 ５）　ミルクの凝固：陰性 ６）硝酸塩の還元：陽性 ７）メラニン様色素の生成：陰性 ８）炭素源の利用性 Ｄ−グルコース　　　　　　　＋ Ｄ−キシロース　　　　　　± Ｌ−アラビノース　　　　　士 Ｌ−ラムノース　　　　　　士 Ｄ−フラクトース　　　　　＋ Ｄ−ガラクトース　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　± Ｄ−マンニトール　　　　　＋ １−イノシトール　　　　　士 サ　　リ　　シ　　ン　　　　　　　　　　　＋シュー
クロース　　　　　　＋ 無添加　　　　− 基礎培地二プリードハムとゴツトリーブ寒天培地 ４、全菌体の加水分解中のジアミノピメリン酸および糖
の分析 本菌は、全菌体の加水分解物中に、ＬＬ−ジアミノピメ
リン酸を含有し、アラビノースおよびマジュロースを含
まず、タイプＩに属する。

以上の分類的性質を要約すると、Ａｌ−２０５２株は■
気菌糸先端がスパイラル状を呈し、連鎖する胞子を形成
する。胞子表面はスバイニーである。■菌束糸を形成せ
ず、運動性胞子を生成しない。■発育色調は淡黄色ない
し、褐色を示し、気菌糸は灰色である。■メラニン様色
素生成が認められない。■菌体よりＬＬ−ジアミノピメ
リン酸が検出され、構成糖としてアラビノースやマジュ
ロースは検出されないことにより、本面は細胞壁タイプ
Ｉで、糖室はＣ型に属する。

以上の性質をもとにアール・イー・ブッファナン・アン
ド・エヌ・イー・ギポンス編、バーシーズ・マニュアル
・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒ
ｇｅｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏｆ　　Ｄｅｔｅｒｍ
ｉ−ｎａＬｉｖｅ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８
版、１９７４年に従って検索を行った結果、上記Ａｌ−
２０５２株はストレプトミセス属に属することが判明し
たので、本面をストレプトミセス　エスピー−（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏ　−ｍｙｃｅｓ　ｓｐ、）Ａ　Ｉ　　２０５２
と命名した。

Ａｌ−２０５２株は、昭和６４年２月１５目財団法人・
発酵研究所（ＩＦ○）に受託番号ＩＦＯ１４８３３とし
て、また本面は平成１年３月７日、通商産業省工業技術
院微生物工業技術研究所（ＦＲ１）にブタペスト条約に
基づいて受託番号ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２３２８として、
それぞれ寄託されている。

ストレプトマイセス属に属するＴＡＮ−１１６９の生産
菌は、他の放線菌の場合と同様に、たとえば紫外線、エ
ックス線、放射線などの照射、単胞子分離、種々の変異
処理、その他の手段で変異させることが出来、このよう
な変異株あるいは自然に得られる突然変異株であっても
、上記した分類学的性状との比較において実質的に別種
とするに足らず、しかも当該化合物を生産する性質を有
するものは、すべて本発明方法に利用し得る。

当該化合物生産菌の培養に用いられる培地は該菌が利用
し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状でもよいが
、大量に処理するときには液体培地を用いるのがより適
当である。培地には、当該イし金物生産菌が同化し得る
炭素源、窒素源、無機物質、微量栄養源が適宜配合され
る。炭素源としては、たとえばブドウ糖、乳糖、ショ糖
、麦芽糖、デキストリン、澱粉、グリセリン、マンニト
ール、ソルビトール、油脂類（例、大豆油、ラード油、
チキン油など）、ｎ−パラフィンその他が、窒素源とし
ては、たとえば肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆
粉、コーン・ステイープ・リカー、ペプトン、綿実粉、
廃糖蜜、尿素、アンモニウム塩類（例、硫酸アンモニウ
ム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモ
ニウムなど）その他が用いられる。さらにナトリウム、
カリウム、カルシウム、マグネシウムなどを含む塩類、
鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、ニッケルなどの金属塩
類、リン酸、ホウ酸などの塩類や酢酸、プロピオン酸な
どの有機酸の塩類が適宜用いられる。その他、アミノ酸
（例、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジ
ン、メチオニン、プロリンなど）、ペプチド（例、ジペ
プチド、トリペプチドなど）、ビタミン類（例、Ｂ、、
Ｂ２、ニコチン酸、Ｂ１□、Ｃなど）、核酸類（例、プ
リン、ピリミジン、その誘導体など）等を含有させても
よい。もちろん、培地のｐＨを調節する目的で無機また
は有機の酸またはアルカリ類、緩衝剤等を加え、あるい
は消泡の目的で油脂類、界面活性剤等の適量を添加して
差し支えない。液体培養に際しては、培地のｐＨは中性
付近、特にｐＨ５，５〜７が好ましい。

培養温度は約２４°Ｃ〜３０°Ｃ１培養時間は約４８時
間〜１６８時間が好ましい。

培養経過に伴って生産されるＴＡＮ−１１６９は、測定
条件下でアセチルコリンエステラーゼを５０％阻害する
に必要なサンプル量として定量し、その逆数をユニッ１
−（ｕｎｉｔ）として表わした。通常、約５〜６日間の
培養でＴＡＮ−１１６９の生産量は最高に達する。

培養物から目的とする化合物ＴＡＮ−１１６９を採取す
るには、ＴＡＮ−１１６９が塩基性で脂溶性を示す化合
物であるから、この性質を利用する一般的手段で採取す
ることができる。

培養物中ＴＡＮ−１１６９は主として濾液中に含まれる
ので、培養液をｐ）４５ないしＩＬ好ましくはｐＨ６な
いし１０に調整後、水と混和しない有機溶媒、たとえば
ジクロロメタン、酢酸エチル、メチルイソブチルケトン
あるいはイソブタノールなどを加え、活性物質を抽出す
る方法が用いられる。

またン戸液を吸着性樹脂たとえばアンバーライトＸＡＤ
−ＩＴ（ローム・アンド・ハース社製、米Ｉり、ダイア
イオンＨＰ−２０（三菱化成社製、日本）。

アンバーライト５ｐ−２０７（三菱化成社製、日本）ま
たは活性炭（武田薬品製、日本）などを用いたクロマト
グラフィー法に付す方法が有利に用いられる。なお、吸
着性樹脂を用いたカラムから目的の活性物質を溶出する
には、水または含水溶媒、たとえば含水メタノール、含
水アセトン、インブタノール水などが有利に用いられる
。かくして得られた抽出液あるいは溶出液を減圧下濃縮
すると、ＴＡＮ−１１６９を含有する粗物質が得られる
。

粗物質をさらに精製し、純粋なＴＡＮ−１１６９を得る
には種々のクロマトグラフィー法が有利に用いられる。

担体としてはシリカゲル、セルロース、セフアゾ・ンク
スＬＨ−２０（ファルマシア社製、スウェーデン）など
が用いられ、これらは通常カラムクロマトグラフィー法
で行われる。カラムから活性物質を溶出するには適当な
有機溶媒たとえばヘキサン、トルエン、酢酸エチル、ジ
クロロエタン、アセトン、メタノールなどの単独あるい
は混合溶媒が用いられる。溶出液を濃縮し、冷所で放置
するか、濃縮残渣を適当な結晶化溶媒たきえばジエチル
エーテル、酢酸エチル、メタノールあるいはこれらの混
合液で溶解し、冷所で放置すると、ＴＡＮｉ１６９の結
晶が得られる。

かくして、後記の実施例２で得られたＴＡＮ−１１６９
の物理化学的性質はつぎのとおりである。

ＴＡＮ−１１６９Ａ １）外観：無色結晶 ２）融点：１５３°〜１５８°Ｃ ３）比旋光度：［σ］翌−３７６゜ （ＣＯ，ｌ、メタノール中） ４）マス・スペクトル測定値：　ｍ／ｚ　３０３（Ｍ＋
、Ｅ■−ＭＳ法） ５）元素分析値：（％） 実測値、　　Ｃ，６３，１２；　Ｈ，６，９８；　Ｎ、
１３．８３゜計算値；　　ｃ、６３．３５；　Ｈ，６，
９８；　Ｎ、１３，８５０．１５．８２ ６）分子式’　Ｃｒ６Ｈｚ＋Ｎ３０３ ７）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中 λ□２５４±３　ｎｍ（Ｅ　７　ｃ’、＝４７３±５０
）および３１０±３ｎｍ（Ｅ　”　ｌ　０５±２０）ａ
ｍ ８）光外部吸収（ＩＲ）スペクトル： ＫＢｒ中（第１図）、主な吸収波数を示す（ｃｍ−’　
）３３３０、２９７０．２９００．１７４０．１６４０
．１５５０．１５００゜１４３０、１４１０．１３８０
．１２８０．１２５０．１２３０．１２１０゜１１８０
、１１２０．１，０５０．１０００．　９７０．　９５
０．　９２０゜８８０、　８６０．　８２０゜ ９）　　１３Ｇ−核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）ニア
５ＭＨｚ、重クロロフォルム中。

下記のシグナルを示す（δ３１、） １７０．４８（Ｑ）、　１５６．１７（Ｑ）、　１４８
．１３（Ｑ）。

１４３．０７（Ｑ）、　１３４．７６（Ｑ）、　１２１
．１０　（ＣＨ）。

１１６．００（ＣＨ）、　１０６．０５（ＣＨ）、　８
７．６１（ＣＨ）。

５］、、２１（Ｑ）、　４７．５５（ＣＨ２）、　３９
．０９（ＣＨ２）。

３４．０５（ｃ　Ｈ３）、　２７．７２（ｃ　Ｈ３）、
２４．３８（ＣＨ３）。

２２．８７（ＣＨ、） （ただし、Ｑ、四級炭素、ＣＨ：メチン、ＣＨ２：メチ
レン、ＣＨ３：メチルを示す） ＝１７− １０）　　薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体ニ
ジリカゲル６０　Ｆ　２５４（メルク社製、西独） 展開溶媒：酢酸エチル：メタノール （１９：　１） Ｒｆ＝０．４４ １１）　　高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：
担体：ＯＤＳカラム（ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　Ａ　３１２、
山村化学研究所製１日本） 移動相：２５％アセトニトリル１０．０１Ｍリン酸バッ
ファー（ｐＨ３） 流速：　’１ｍ（ｔ／ｍ１ｎ 検出：２５４ｎｍ Ｒｔ＝９．１（分） １２）　　呈色反応： 陽性：過マンガン酸カリウム 陰性：濃硫酸、ドラーゲンドルフ。

エールリッヒ反応 １３）溶解性： 易溶：クロロフォルム、酢酸エチル、アセトン 可溶；酸性水溶液 １４）構造式 ％式％ ： （ＣＯ、ｌ、メタノール中） ３）マス・スペクトル測定値：　ｍ／ｚ　２８９（Ｍ”
、Ｅ　Ｉ−ＭＳ法） ４）元素分析値＝（％） 実測値、　　Ｃ，６２，０３，Ｈ，６，５７；　Ｎ、１
４．４９゜計算値、　　Ｃ，６２，２７；　Ｈ，６，６
２，Ｎ、１４．５２０．１６．５９ ５）分子式：　Ｃ＋　ｉ　Ｈ＋　＊　Ｎ　ｓ　Ｏ５６）
ＵＶスペクトル：メタノール中 Ａ、、、、２４３±３　ｎｍ（Ｅ　ｊ　ニー３４５±５
０）および３００±３　ｎｍ（Ｅ　）〉９８±２０）７
）ＩＲスペクトル：ＫＢｒ中（第２図）。

主な吸収波数を示す（ｃｍ−’　） ３３７０、３２９０．２９７０．２８８０．１７４０．
１６１０．１５４０゜１４９０、１４５０．１３５０．
１２７０．１２５０．１２００．１１８０゜１１２０、
１０６０．１０２０．　９６０．　９２０．　８６０．
　８３０３）　　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル＋７５ＭＨ
ｚ。

重クロロフォルム中。

下記のシグナルを示す（δ１．） １７０．２２（Ｑ）、　１５６．０５（Ｑ）、　１４６
．１５（Ｑ）。

１４３．９６（Ｑ）、　１３３．９５（Ｑ）、　１２１
．２３　（ＣＨ）。

１１６．３４（ＣＨ）、　１０９．３６（ＣＨ）、　８
２．４８（ＣＨ）。

５２．４７（Ｑ）、　４７．３７（ＣＨ２）、　３７．
１３（ＣＨ２）。

２７．１１（ＣＨｓ）＋　２４．１１（ＣＨ３）、２２
．６１（ＣＨ、）。

９）ＴＬＣ： 条件はＴＡＮ１１６９Ａの場合と同じ Ｒｆ＝０．３０ １０）ＨＰＬＣ： 条件はＴＡＮ−１１６９Ａの場合と同じＲｔ＝４．６（
分） １１）呈色反応： ＴＡＮ−１１６９Ａと同様 １２）　　溶解性： ＴＡＮ−１１６９Ａと同様 ＋３）構造式： 次にＴＡＮ−１１６９ＡおよびＢの生物活性について述
べる。

ＴＡＩＩ−１１６９の酵素阻害活性は、牛脳から抽出し
たアセチルコリンエステラーゼとともに、市販（シグマ
社、Ｕ、Ｓ、Ａ、）の馬血清偽コリンエステラーゼ、ブ
タ肝臓エステラーゼ、および牛膵臓トリプシンについて
も測定した。

牛脳からのアセチルコリンエステラーゼ粗酵素の調製： 牛脳は京都中央畜産副生物知協同組合より購入した。全
層（約４００ｇ湿重量）を表面の血管・被膜を取り除き
、０．３２Ｍ蔗糖を含む緩衝液Ａ［２０ｍＭ　　Ｔｒｉ
ｓ−ＨＣＱ（ｐＨ，７，６）＋３ｍＭＭｇＣＱ２］で洗
浄し、同緩衝液中（脳１ｇに対し緩衝液３ｍＱ）で、ハ
サミで細切し、ポリトロンホモゲナイザー（Ｋｉｎｅｍ
ａｔｉｃａ　　Ｇｍｂ　Ｈ，５ＷＩＴ、　）を用いてホ
モゲナイズ（２０秒、１０回、氷水中で冷却）した。ガ
ーゼろ通抜、蔗糖濃度を０．２５Ｍになるように調整し
、７，０００Ｘｇで１０分間遠心、０゜２５Ｍ蔗糖を含
む緩衝液Ａで洗浄した。沈渣に２％トリトンＸ１００を
含む緩衝液Ａを加え、テフロンホモゲナイザーを用いて
懸濁、酵素を可溶化し、その遠心上清（１０，０００Ｘ
ｇ、２０分）をアセチルコリンエステラーゼ粗酵素液と
して用いた。この標品（０，０４−０，０８ｕｎｉｔ／
ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ。

１５−２０ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍ４）ノ偽＝：Ｉ　
ｖ　ンエステｙ−ゼ活性はアセチルコリンエステラーゼ
活性の１／１００以下であった。

酵素活性測定法ニジ−・エル・エルマフ（Ｇ、　Ｌ。

ＥＩ　Ｉｍａｎ）等のＤＴ　Ｎ　７３　（Ｄｉｔｈｉｏ
ｂｉｓｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏａｔｅ）法を改変して用い
た［Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、ヱ。

８８　　（］９６１）］。

反応液１ｍα中に、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ，７，０）、３．３ｍＭ　　ＤＴＮＢ、サンプルを含
み、アセチルコリンエステラーゼには基質として０　、
５　ｍＭアセチルチオコリンを、偽コリンエステラーゼ
には基質として０．５ｍＭブチルチオコリンを加え、３
０°Ｃで３０分反応後、０，２ＮＨＣＱ１ｍＱを加え反
応を停止し、５−１０分後、０．５Ｍリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ，７，０）Ｉ顧を加えて発色し、４１２ｎｍ
の吸光度を測定した。

エステラーゼは０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ、
７、０月顧中で１ｍＭ酢酸４−ニトロフェニルの、トリ
プシンは５０ｎ＋Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ，８，
０）中で１ｍＭベンゾイル−Ｌ−アルギニンエチルエス
テルの加水分解を測定することにより測定した。

ＴＡＮ−１１６９による酵素阻害活性は表１に示したよ
うに、アセチルコリンエステラーゼと偽コリンエステラ
ーゼに対して強い阻害活性を示した。トリプシンに対し
ても阻害活性を示したが、エステラーゼはほとんど阻害
されなかった。

スコポラミン誘発健忘に対する作用： 明暗箱を用いた受動的回避学習課題において、抗コリン
剤であるスコポラミンはマウスに回避反応の著しい障害
（健忘）を誘発する。このスコポラミン誘発健忘に対す
るＴＡＮ１１６９の作用を下記方法により調べた。

ＴＡＮ−１１６９Ａ　　　　１　　　　１１　　　７５
７受動的回避学習課題を用いて、マウスの学習行動に及
ぼす影響を検討した。明暗２室からなる装置の明室に入
れたマウスは暗い方を好む習性に従って、速やかに暗室
へ移動する。マウスが暗室へ移動したところで床から電
気ショック（０，４ｍＡ。

３秒間）を与えた（獲得試行）。翌口、再びマウスを暗
室へ入れると（保持テスト）、前日の電気ショックを受
けたことを覚えていて、なかなか暗室に入ろうとしない
。ところが獲得試行の１５分前にスコポラミン（１ｍｇ
／ｋｇ）を皮下投与されたマウスは、電気ショックを受
けたことを覚えることが出来ずに、保持テストにおいて
再び速やかに暗室へ移動する。つまり、保持テストにお
いて、マウスが明室にとどまった時間（回避時間）が学
習の指標となる。表２に示すようにＴＡＮ−１１６９Ａ
およびＢは、獲得試行の３０分前に、つまりスコポラミ
ン投与の１５分前、および保持テストの３０分前の２回
腹腔内投与することにより、スコポラミン処置マウスの
回避時間を有意に延長した。これはＴＡＮ−１１６９Ａ
およびＢがマウスのスコポラミン誘発健忘に対して改善
作用を有する可能性を示唆するものであり、中枢コリン
神経系の機能低下を主機とするアルツハイマー型痴呆症
への応用も期待される。

実施例 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
が、これによって本発明が限定されるものではない。な
お、培地におけるパーセント（％）は、特に断りのない
限り、重量／容量パーセントを表示する。

実施例１ ０．４％グルコース、０．４％酵母エキス、１％麦芽エ
キス、２％寒天を含むＴＳＰ−２（ディフコ社、Ｕ、Ｓ
、Ａ、）斜面培地に培養したストレプトミセス　エスピ
ー・Ａｌ−２０５２株（ＩＦＯ１４８３３、ＦＥＲＭ　
　ＢＰ−２３２８）を２００ｍＱ容三角フラスコ内の２
％グルコース、３％可溶性澱粉、１％生大豆粉、１％コ
ーン・ステイープ・リカー（Ｃ３Ｌ）、０．５％ペプト
ン、０．３％ＮａＣＱ、０．５％ＣａＣＯ３を含む４０
ｍＱの種培地（ｐＨ、７、０）に接種し、２８°Ｃ１４
８時間回転振盪機上で培養し、前培養を得た。得られた
前培養液の１０蔵を２０００威容坂ロフラスコ内の５０
０ｍｆｆの種培地に移植し、２８９０１４８時間往復振
盪機上で培養し、種培養液を得た。この種培養液５００
ｍＱを種培地（上記種培地と同一組成）３０Ｑを含む５
０ｆｆ容ステンレス・スチール・タンクに移植し、通気
・３０ａ／分、撹拌・２８０回転／分、内圧・１ｋｇ／
ｃｍ２の条件で培養した。

得られた培養液の６１１１を２００１２容ステンレス・
スチール・タンク内の０，５％グルコース、５％デキス
トリン、３．５％脱脂大豆粉、０．７％ＣａＣ０，を含
む１２０＋２の主培地（ｐＨ，６，０）に移植し、２８
°Ｃ１通気−１２０Ｍ分、撹拌・１５０回転／分、内圧
・１ｋｇ／ｃｍ２の条件で、１１４時間培養した（２５
０ユニツト／　ｍＱ　）。

実施例２ 培養液（２０ｏｐ）から濾過により菌体を除去し、炉液
をｐＨ７，５に調整後、酢酸エチル（８８ｆｆ）で抽出
した。得られた有機層を１Ｍ塩化ナトリウム水（６０１
２）で洗浄後、濃縮、粗油状物を得た。これをクロロホ
ルムに溶解し、シリカゲル（５００ｇ）に吸着させ、ヘ
キサン−酢酸エチル水（４：ｌ。

１．２０．）、酢酸エチル（４，０１２）　、酢酸エチ
ル−メタノール（９５：　５．２．０ｆｆ）の混合溶媒
で順次溶出、分画した。各画分をＴＬＣで分析し、ＴＡ
Ｎ−１１６９ＡおよびＢを含む画分を別々に集めて濃縮
乾固した。

ＴＡＮ−１１６９Ａを含む粗油状物（３，７９ｇ）をシ
リカゲル（１８０ｇ）に吸着させ、ヘキサン−酢酸エチ
ル（１：９．１．６０．）、酢酸エチル（３，０４）で
順次溶出、分画した。各画分を同様に処理し、粗油状物
（３，３１ｇ）を得た。この粗油状物をシリカゲル（１
５０ｇ）に吸着させ、クロロホルム（３，４１２）で溶
出１分画した。ＴＡＮｉ１６９Ａを含む画分を集め、減
圧下で濃縮、クロロホルム−アセトンより結晶化し、Ｔ
ＡＮ−１１６９Ａの白色結晶（１，１７ｇ）を得た。

ＴＡＮ−１１６９Ｂを含む粗油状物（５，２ｇ）をシリ
カゲル（２５０ｇ）に吸着させ、酢酸エチル−メタノー
ルの混合溶媒（９８：　２．４．０１２）で溶出、分画
した。各画分をＴＬＣにて分析し、目的物のスポットを
成分として含む両分を集め、減圧下で濃縮乾固させ粗油
状物（３，５４ｇ）を得た。この粗油状物を再度シリカ
ゲル（１５０ｇ）に吸着させ、クロロホルム（１１２）
、クロロホルム−メタノール（９９：　ｌ、４．９１２
）の混合溶媒で順次溶出、分画した。

ＴＡＮ−１１６９Ｂを含む画分を集め、濃縮乾固、粗油
状物（０，７６ｇ）を得た。この粗油状物をさらにシリ
カゲル（３５ｇ）に吸着させ、クロロホルム−メタノー
ル（９９：１，４５０−）で溶出、分画した。活性画分
を集め、濃縮、クロロホルムーメタノールー石油ベンジ
ンより粉末化、ＴＡＮ−１１６９Ｂの白色粉末（０，４
ｇ）を得Ｉこ。

発明の効果 化合物ＴＡＮ−１１６９は、アセチルコリンエステラー
ゼの阻害作用を有し、中枢コリン神経系の機能低下を主
機とするアルツハイマー型痴呆症などの治療用医薬とし
て利用可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図はＴＡＮ−１１６９ＡおよびＢの赤
外部吸収スペクトルをそれぞれ示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒはメチルまたは水素を示す。］で表される化
   合物またはその塩。
2. （２）ストレプトミセス属に属し、請求項（１）の化合
   物を生産し得る能力を有する微生物を培地に培養し、培
   養物中に該化合物を生成、蓄積せしめ、これを採取する
   ことを特徴とする該化合物の製造法。