JPH02256620A - 魚ワクチンの効力を増強する組成物および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は魚ワクチンの効力を増強する方法および魚の免
疫系を刺激する方法並びにこれらの方法に有用な組ｅ、
物に関する。

従来技術の説明 養魚場における魚養殖がますます盛んである。

野生水産資源の漁労法に比べた水産養殖の利点は野生動
物の狩猟に比べた家畜の飼育と同様に明らかである。し
かし、問題がある。魚は非常に高い密度に保たれねばな
らず、これは魚が病気にかかり、殊に養魚場中に病気が
速やかに蔓延しやすいことを意味する。水産養殖技術は
常に改善され、通常餌中で投与される抗生物質の使用は
病気の低減における大きな利点であった。しかしこの方
法における抗生物質の使用は魚病原体の耐性株の発生を
生じさせることができる。また人間により消費される家
畜類および魚における抗生物質、成長ホルモンなどの使
用に反対する普及した意見が存在する。

とりわけビブリオ病およびレッドマウス病のような病気
に対するワクチンの使用において若干の成功があった。

しかしなおワクチンが有効でなく、または効力が不十分
な病気が存在する。

一定のワクチンの効力を、ワクチンに加えて化合物を投
与することにより改善できることが医学において知られ
ている。

一定のグルカンが、明らかな免疫修飾効果によりヒト癌
の治療に有用であることができることが知られている。

グルカンはグルコース誘導体の無水物、例えばセルロー
ス、デンプン、デキストリンおよびグリコーゲンである
。

出願人に知られたグルカンに関する関連特許には１９７
８年７月４日に発行された米国特許第４、０９８．６６
１号、１９６３年１０月２３日付の英国特許第１．０６
１．０４３号および１９７５年５月２７日に発行された
カナダ国特許第９６８．２８６号が包含される。

発明の概要 今回一定のグルカンが魚病の治療に対するワクチンの使
用において著しい、有利な効果を示すことが認められた
。殊に重要なものはβ−１，３−グルカン類、殊にシゾ
フィラン（ＳＰＧ）およびスクレログルカンである。こ
れらの水溶性β−１゜３−グルカン類は三重ラセジ構造
°を有すると報告されている。シゾフィランは真菌シゾ
フィラム・コムーネ（Ｓｃｈｉｚｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｃ
ｏｍｍｕｎｅ）の培養濾液中の、アセトン、エタノール
または他の水混和性溶媒を沈殿剤として用いる沈殿によ
り製造される。

スクレログルカンはスクレロチウム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉ
ｕｍ）の選択種の培養濾液から同様な方法で得られる。

上記化合物は次の構造式により表わされるニジシフイラ
ンおよびスクレログルカンの構造。

レンチナンの構造 従って、本発明はβ−１，３−グルカン類の免疫促進お
よびワクチン増強効果に向けられ、これらの化合物が魚
の治療および魚中のワクチン予防に有効であることの意
外な観察に基づく。

従って第１の観点において本発明は、β−１゜６−結合
シングルグルコース側ｉｌｌ　ヲモつβ−１゜３−結合
主鎖を有するβ−１，３−グルカンをワクチン処置魚に
投与することを含む魚ワクチンの効力を刺激する方法で
ある。

他の観点において本発明は上記β−１，３−グルカンを
魚に投与することを含む魚の免疫系を刺激する方法であ
る。

なお他の観点において本発明は魚ワクチンの効力を増強
することができ、β−１，６−結合シングルグルコース
側鎖をもっβ−１，３−結合主鎖を有するβ−１，３−
グルカンを魚に許容できる担体と組合せて含む組成物で
ある。

担体は、典型的には注射可能な組成物のための食塩水お
よび経口投与される組成物のための餌である。餌と混合
する前にα−セルロースをグルカンと混合することが望
ましい。

特に好ましい態様において、本発明は抗原源およびβ−
１，６−結合シングルグルコース側鎖をもつβ−１，３
−結合主鎖を存するβ−１，３−グルカンを含む魚ワク
チンの効力を増強する組成物を提供する。好ましくは抗
原源はワクチンである。

実験研究 実験操作は一定β−１，３−グルカンの、ホルマリン殺
バクテリンの性能を増強し、サケ利点の非特異免疫系を
刺激してそれらが病原体の悪性な攻！１（ｖｉｒｕｌｅ
ｎｔ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）の間、高い生存を示すこと
ができる能力を決定するために開発された。

攻撃のために選んだモデル系は、フルンケル症（ｆ　ｒ
ｕｎｃｕ　ｌｏｓ　ｉｓ）の病原体であり、この病気に
おける細胞媒介免疫の連座が報告されているのでエロモ
ナス・サルモニシダ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｓａｌｍｏ
ｎｉｃｉｄａ）であった。細胞媒介免疫は細菌性腎臓病
（ＢＫＤ）、水産養殖魚を悩ませる他の病気、に対する
免疫保護において主要な役割を演するが、しかし感染の
過程が長く、フルンケル症モデル系の使用を必要にする
。

２系の攻撃を用いた。第１は液浸で、第２は共棲である
。次に死亡率数を２攻撃群間で比較できるように相対力
価の計算により調整した。相対力価は水槽間で良好な再
現性を示し、レンチナンおよびシゾフィラン増強ワクチ
ンはともに水槽内および水槽間で類似水準の力価ををす
ると認められた。相対力価は表１により決定した。相対
力価は予防接種におけるパーセント死亡率で割った対照
におけるパーセント死亡率と規定される。

結果は表１中に示される。

＊相対力価は次のように規定される： 構造機能における類似性のため、以後の実験研究は１化
合物、シゾフィラン、で行なった。この化合物はレンチ
ナンより製造コストがかからない。

それはバッチ発酵により製造できるが、しかししンチナ
ンハきのこ、しいたけ化ｅｎｔｉｎｕｓ　ｅｄｏｄｅｓ
）の子実体から抽出しなければならず、それは日本ほか
における普及した食品であり、化合物レンチナンを高価
にする。

次段階の実験においてＳＰＧを３つの異なる形態で得た
。第１は精製し、広範に解重合した形態（ＳＰＧ−Ｐ）
であり、第２は単にわずかに解重合した粗抽出物（ＳＰ
Ｇ−Ｃ）であり、第３は微粉菌糸体を含む培養ブロス中
の自生ＳＰＧ粗調製物（ＳＰＧ−Ｍ）である。

これらの形態のＳＰＧをＡ、サルモニシダ（Ａ。

ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ）バクテリン右よび３異形態の
ＳＰＧのいずれか１つを含む混合物で腹腔内（ｉ、　ｐ
、　）注射により魚に投与した。

次いで魚をビルレントＡ、サルモニシダ中の液浸により
攻撃させ、生ずる死亡率をモニターした。

結果は表２中に示した。

表２０種々の分子簀形態の ＳＰＧの効力の差異 １：ｓＰＧ−ｍは最も粗形態のＳＰＧを示す。これは最
高分子量のＳＰＧを含むコロイド状微粉菌系体の調製物
である。

２：５ＰＧ−ｃは多少精製され、多少解重合された粗形
態のＳＰＧである。

３：５ＰＧ−ｐは精製され、解重合された形態のＳＰＧ
である。

上記から最粗形態のＳＰＧ　（ＳＰＧ−Ｍ）が最も有効
であったことが認められる。分子量の低下と共にワクチ
ンに対する増強の水準の減退があった。

非特異的化学的予防剤としてのＳＰＧの効力を評価する
ために、さらに一連の実験を行なった。

攻撃の２０日前に２０■／ｋｇの割合でｉ、ｐ、注射し
たときに、魚は注射後生くとも４０日間、抗原単独から
なるワクチンを１．ｐ、供給した魚と同程度に保護され
たことが認められた。これらの結果は、累積パーセント
死亡率対時間に関するグラフである第１図中に要約され
る。曲線は食塩水注射魚を、ＳＰＧ単独および抗原単独
を注射した魚と比較して示す死亡率曲線である。ＳＰＧ
単独を注射した魚は抗原単独で予防接種したものと同水
準の保護を示す。この保護は攻撃後約２０日間続くと思
われる。魚はＳＰＧおよび抗原を第１図の曲線の０日の
２０日前に注射された。

従ってそれらの結果はβ−１，３−グルカン類が魚の免
疫系を刺激する手段としておよびワクチンの効力を改善
する手段として、ともに有効であそれらの結果は公表さ
れた予防接種の試みが不十分な結果を生じたフルンケル
症における原因物質のＡ、サルモニシダに対する効果を
示す。しかし、同様の結果が、またサケ利点の病原体で
ある微生物、レニバクテリウム・サルモニナルム（Ｒｅ
ｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓａｌｍｏｎｉｎａｒｕｍ）
により起こされる細菌性腎臓病（ＢＫＤ）に対して達成
できると思われる。

前記実験結果はサケ科に属する魚に向けられている。し
かし、それらの実験結果は他の種、例えば観賞魚、観賞
趣味魚、コイ、タイ（ｓｅａ　ｂｒｅａｍ）などに同様
に適用できる。殊に、組成物がすべての魚に有効でない
と当業者に思わせるものが存在せず、本発明は水産養殖
魚の治療に殊に重要である。すべての魚種の免疫系中に
実質的な等質性が存在する。

【図面の簡単な説明】

第１図は実験研究中に記載される一定比較実験における
累積死亡率対時間に関する。

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. （１）β−１，６−結合シングルグルコース側鎖をもつ
   β−１，３−結合主鎖を有するβ−１，３−グルカンを
   ワクチン処置魚に投与することからなる魚ワクチンの効
   力を増強する方法。
2. （２）ワクチンがエロモナス・サルモニシダ（Ａｅｒｏ
   ｍｏｎａｓ　ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ）に対し有効なも
   のである、請求項（１）記載の方法。
3. （３）魚がサケ科に属する種である、請求項（１）記載
   の方法。
4. （４）グルカンがスクレログルカンである、請求項（１
   ）記載の方法。
5. （５）グルカンがシゾフィラン（ＳＰＧ）である、請求
   項（１）記載の方法。
6. （６）シゾフィランが非精製抽出物の形態で使用される
   、請求項（５）記載の方法。
7. （７）抽出物が微粉菌糸体を含む培養ブロス中のネイテ
   ィブシゾフィランである、請求項（６）記載の方法。
8. （８）β−１，３−グルカンが経口的に投与される、請
   求項（１）記載の方法。
9. （９）β−１，３−グルカンの用量が１５〜２０ｍｇ毎
   キログラム体重の範囲内にある、請求項（１）記載の方
   法。
10. （１０）β−１，６−結合シングルグルコース側鎖をも
    つβ−１，３−結合主鎖を有するβ−１，３−グルカン
    を魚に投与することを含む魚の免疫系を刺激する方法。
11. （１１）魚がサケ科に属する種である、請求項（１０）
    記載の方法。
12. （１２）グルカンがスクレログルカンである、請求項（
    １０）記載の方法。
13. （１３）グルカンがシゾフィラン（ＳＰＧ）である、請
    求項（１０）記載の方法。
14. （１４）抗原源およびβ−１，６−結合シングルグルコ
    ース側鎖をもつβ−１，３−結合主鎖を有するβ−１，
    ３−グルカンからなる魚ワクチンの効力を増強する組成
    物。
15. （１５）抗原源がワクチンである、請求項（１４）記載
    の組成物。
16. （１６）グルカンがシゾフィラン（ＳＰＧ）およびスク
    レログルカンからなる群から選ばれる、請求項（１４）
    記載の方法。
17. （１７）魚の免疫系を刺激するために魚に投与する組成
    物であって、β−１，６−結合シングルグルコース側鎖
    をもつβ−１，３−結合主鎖を有するβ−１，３−グル
    カンおよび魚に許容できる担体からなる組成物。
18. （１８）担体が食塩水であり、組成物が注射可能な組成
    物である、請求項（１７）記載の組成物。
19. （１９）担体が魚餌である、経口投与のための請求項（
    １７）記載の組成物。
20. （２０）餌がα−セルロースと混合される、請求項（１
    ９）記載の組成物。