JPH02231085A - ｒ―グルタミルトランスペプチダーゼをコードする遺伝子 - Google Patents
ｒ―グルタミルトランスペプチダーゼをコードする遺伝子Info
- Publication number
- JPH02231085A JPH02231085A JP5069989A JP5069989A JPH02231085A JP H02231085 A JPH02231085 A JP H02231085A JP 5069989 A JP5069989 A JP 5069989A JP 5069989 A JP5069989 A JP 5069989A JP H02231085 A JPH02231085 A JP H02231085A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ggt
- gene
- amino acids
- gene coding
- glutamyltranspeptidase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 101710107035 Gamma-glutamyltranspeptidase Proteins 0.000 title claims abstract description 5
- 101710173228 Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 title claims abstract description 5
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 title claims abstract description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims abstract 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 6
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 abstract description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- -1 BamH I Proteins 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- KEKSCSDLHBLBDJ-IUCAKERBSA-N (2s)-2-amino-5-[[(1s)-1-carboxy-2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 KEKSCSDLHBLBDJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 125000002642 gamma-glutamyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
この発明は遺伝子組換え法によるγ−グルタミルトラン
スベプチダーゼ（ＧＧＴ）の製造法に関するものである
。
スベプチダーゼ（ＧＧＴ）の製造法に関するものである
。
（従来技術）
細菌のＧＯＴに関しては多《の報告があり、生産を目的
としたものとしては本発明者らにより見いだされたＰｒ
ｏ ｔｅｕｓ属細菌を用いる方法（蛋白質核酸酵素、３
３巻、１５４５、１９８Ｂ）がある。しかしながら、従
来より知られている方法は工業的な製造法としては未だ
生産性が低かった。
としたものとしては本発明者らにより見いだされたＰｒ
ｏ ｔｅｕｓ属細菌を用いる方法（蛋白質核酸酵素、３
３巻、１５４５、１９８Ｂ）がある。しかしながら、従
来より知られている方法は工業的な製造法としては未だ
生産性が低かった。
（本発明が解決しようとする問題点）
本発明が解決しようとする課題は遺伝子工学の手法を用
い、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｔａ属に属する微生物により経
済的なＧＧＴの製造法を提供することにある。
い、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｔａ属に属する微生物により経
済的なＧＧＴの製造法を提供することにある。
Ｅ． ｃｏｌｔ組換え体を用いるＧＧＴの大量生産に関
しては、本発明者らが種々検討してきた（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，１５０．３３．１９８８ ）が、本発明で初めて
、本酵素に関連するポリペプチドをコードする遺伝子の
塩基配列を明かにした。
しては、本発明者らが種々検討してきた（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕ
ｎ．，１５０．３３．１９８８ ）が、本発明で初めて
、本酵素に関連するポリペプチドをコードする遺伝子の
塩基配列を明かにした。
（課題を解決するための手段）
上述の課題を解決する為に、本発明者らは以下の検討を
行った。まずＥ． ｃｏｌｉ Ｋ−１２のＧＧＴが低温
（２０℃）培養で高生産されるとともに、本酵素がｐｅ
ｒｉｐｌａｓｍｉｃ部位に局在することを見いだし（Ｊ
．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．． １６８． １３３２＋ １
９８６）、これを結晶状に単離しその性質を明かにした
（Ｊ ． Ｂａｃ ｔｅｒ−ｉｏ１．， １６８， １
３２５． １９８６）。更に、ＧＧＴ欠損変異株を誘導
し、ＧＧＴをコードする遺伝子（ＩＬ±）の染色体上で
の座位（染色体上７６分の一邦僅一と＝（ｎ伊一の間）
を明らかにした（Ｊ．Ｂａｃｔ− ｅｒｉｏｌ．，１６
９， ３９２６． １９８７）。次に目的とするＣＧＴ
をコードする遺伝子の近傍の遺伝子をのせているブラス
ミドを含む菌株をＣｌａｒｋｅ−Ｃａｒｂｏｎのコロニ
ーバンクから検索し、これらの中よりＧＧＴ活性の増強
した組換え体を選択した。さらに、本プラスミドをサブ
クローン化することにより、ＧＧＴ活性が更に増強され
た組換え体を得た（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎ．，１５０，３３．
１９８８ ） ．次に、本プラスミド上に存在するｇｇ
ｔ挿入部の塩基配列をＭ−１３ファージを用いたジデオ
キシヌクレオシド鎖終結法により決定した。
行った。まずＥ． ｃｏｌｉ Ｋ−１２のＧＧＴが低温
（２０℃）培養で高生産されるとともに、本酵素がｐｅ
ｒｉｐｌａｓｍｉｃ部位に局在することを見いだし（Ｊ
．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．． １６８． １３３２＋ １
９８６）、これを結晶状に単離しその性質を明かにした
（Ｊ ． Ｂａｃ ｔｅｒ−ｉｏ１．， １６８， １
３２５． １９８６）。更に、ＧＧＴ欠損変異株を誘導
し、ＧＧＴをコードする遺伝子（ＩＬ±）の染色体上で
の座位（染色体上７６分の一邦僅一と＝（ｎ伊一の間）
を明らかにした（Ｊ．Ｂａｃｔ− ｅｒｉｏｌ．，１６
９， ３９２６． １９８７）。次に目的とするＣＧＴ
をコードする遺伝子の近傍の遺伝子をのせているブラス
ミドを含む菌株をＣｌａｒｋｅ−Ｃａｒｂｏｎのコロニ
ーバンクから検索し、これらの中よりＧＧＴ活性の増強
した組換え体を選択した。さらに、本プラスミドをサブ
クローン化することにより、ＧＧＴ活性が更に増強され
た組換え体を得た（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎ．，１５０，３３．
１９８８ ） ．次に、本プラスミド上に存在するｇｇ
ｔ挿入部の塩基配列をＭ−１３ファージを用いたジデオ
キシヌクレオシド鎖終結法により決定した。
本発明の微生物を用いることによって、従来の天然株を
用いる方法に比べて極めて高い収率でＧＧＴを生産でき
ることを見いだした。すなわち、ＧＧＴを有する微生物
は種々知られており（蛋白質 核酸 酵素、３３巻、１
５４５、１９８８） 、これより染色体ＤＮＡを常法に
より抽出することにより（Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ． Ａｃｔａ，７２， ６１９． １９６３）、
あるいは本酵素をコードする遺伝子を含むプラスミドよ
り常法により制限酵素で処理すればよい。我々の実験で
は、制限酵素ＢｇｌｌＩを用いることによりＧＧＴ生成
に関与する遺伝情報を担うＤＮＡフラグメントを得たが
、他の制限酵素、例えばＢａｍＨ Ｉ ，Ｐｓｔ Ｉ，
Ｓａｔ Ｉ， Ｈｉｎｄｌ［， ＥｃｏＲ１等を用
いてもＢｇＩ ｎと同様の結果が得られる可能性がある
。
用いる方法に比べて極めて高い収率でＧＧＴを生産でき
ることを見いだした。すなわち、ＧＧＴを有する微生物
は種々知られており（蛋白質 核酸 酵素、３３巻、１
５４５、１９８８） 、これより染色体ＤＮＡを常法に
より抽出することにより（Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ． Ａｃｔａ，７２， ６１９． １９６３）、
あるいは本酵素をコードする遺伝子を含むプラスミドよ
り常法により制限酵素で処理すればよい。我々の実験で
は、制限酵素ＢｇｌｌＩを用いることによりＧＧＴ生成
に関与する遺伝情報を担うＤＮＡフラグメントを得たが
、他の制限酵素、例えばＢａｍＨ Ｉ ，Ｐｓｔ Ｉ，
Ｓａｔ Ｉ， Ｈｉｎｄｌ［， ＥｃｏＲ１等を用
いてもＢｇＩ ｎと同様の結果が得られる可能性がある
。
ベクターＤＮＡとしてはｐＵｃ １Ｂ． ｐＵＣ １９
， ｐＢＲ３２２等の他、発現可能であるならばいずれ
のプラスミドより得られたものでも構わない。このベク
ターにＧＧＴ生成に関与する遺伝情報を担うＤＮＡフラ
グメントを組み込む方法は特定の方法を要しない。かく
して得られたＧＧＴ生成に関与する遺伝情報を担うＤＮ
Ａフラグメントを組み込んだブラスミドをエシエリヒア
属の微生物に含有せしめる方法も、また従来知られてい
る全ての形質転換方法が可能である。
， ｐＢＲ３２２等の他、発現可能であるならばいずれ
のプラスミドより得られたものでも構わない。このベク
ターにＧＧＴ生成に関与する遺伝情報を担うＤＮＡフラ
グメントを組み込む方法は特定の方法を要しない。かく
して得られたＧＧＴ生成に関与する遺伝情報を担うＤＮ
Ａフラグメントを組み込んだブラスミドをエシエリヒア
属の微生物に含有せしめる方法も、また従来知られてい
る全ての形質転換方法が可能である。
組替えプラスミドの受容菌としては、エシエリヒア属の
中でＧＧＴ活性を持たないもの、あるいは弱いものを用
いる方が、ＧＧＴ生成に関与する遺伝情報を担うＤＮＡ
フラグメントを組み込んだプラスミドを保有する形質転
換株を選別あるいは分離するのに都合よい。
中でＧＧＴ活性を持たないもの、あるいは弱いものを用
いる方が、ＧＧＴ生成に関与する遺伝情報を担うＤＮＡ
フラグメントを組み込んだプラスミドを保有する形質転
換株を選別あるいは分離するのに都合よい。
かくして得られたＧＧＴ生産菌を培養する方法は、従来
のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属によるＧＧＴ生産のための
培養と特に変わらない。すなわち、培地としては炭素源
、窒素源、無機イオン、更に必要に応じてアミノ酸、ビ
タミンの有機微量元素源等を含有する通常のものである
。
のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属によるＧＧＴ生産のための
培養と特に変わらない。すなわち、培地としては炭素源
、窒素源、無機イオン、更に必要に応じてアミノ酸、ビ
タミンの有機微量元素源等を含有する通常のものである
。
炭素源としては、グルコース、シュークロース、糖蜜、
澱粉加水分解物、・澱粉等のＩｌ！質、フマール酸、ク
エン酸等の有機酸等が用いられる。窒素源としては、ア
ンモニアガス、アンモニア水、硫安等のアンモニウム塩
、硝安等の硝酸塩等の他、ペブトン、トリプトン、酵母
エキス、肉エキス等の有機窒素源が使われる。無機イオ
ンとしては通常Ｐ源としての燐酸塩、Ｓ源としての硫酸
塩、微量元素としての鉄イオン、マンガンイオン等を含
む塩等が使われる。
澱粉加水分解物、・澱粉等のＩｌ！質、フマール酸、ク
エン酸等の有機酸等が用いられる。窒素源としては、ア
ンモニアガス、アンモニア水、硫安等のアンモニウム塩
、硝安等の硝酸塩等の他、ペブトン、トリプトン、酵母
エキス、肉エキス等の有機窒素源が使われる。無機イオ
ンとしては通常Ｐ源としての燐酸塩、Ｓ源としての硫酸
塩、微量元素としての鉄イオン、マンガンイオン等を含
む塩等が使われる。
培養は好気的条件下で培地のｐｏおよび温度を適，宜調
節しつつ、実質的にＧＧＴの生成が最高になるところま
で行われる。培養菌体よりＧＧＴを採取する方法は通常
の方法を用いれば良い。
節しつつ、実質的にＧＧＴの生成が最高になるところま
で行われる。培養菌体よりＧＧＴを採取する方法は通常
の方法を用いれば良い。
以上、本発明微生物を用いることにより、従来知られて
いるＧＧＴ生産菌を用いる場合に比べ、単位あたりの生
産量が極めて高い。
いるＧＧＴ生産菌を用いる場合に比べ、単位あたりの生
産量が極めて高い。
また、ＧＧＴの用途としては、医薬として有用なγ−グ
ルタミルドーパ等のγ−グルタミル化合物の生産に利用
される。
ルタミルドーパ等のγ−グルタミル化合物の生産に利用
される。
実験例１
以下のようにして、著量の一〇〇Ｔを生産する菌株を造
成した。（Ｃ，ＧＴをコードする遺伝子ののったブラス
ミドを含む菌株の選出） Ｅ．ｃｏ−Ｉｔ Ｋ１２の染
色体ＤＮＡの断片をＣｏｌＥ１プラスミドにクローニン
グしたｐＬＣプラスミドを保有するＣｌａｒｋｅ−Ｃａ
ｒｂｏｎのコロニーバンクの菌株の中より、ｐＬＣプラ
スミド上に７６分付近の遺伝子をのせていることが知ら
れている８つの菌株についてＧＧＴ活性を調べ、１がプ
ラスミド上にのっている株としてＳＨ ２０９株（プラ
スミドｐＬＣ９−１２）を選出した（親株のＧＧＴ活性
を１００とすると選出株は１４４０の活性を有していた
） （Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｙｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎ．， １５０， ３３． １９
８８ ） ．本菌はＦＥＲＭ−Ｐとして寄託されている
。
成した。（Ｃ，ＧＴをコードする遺伝子ののったブラス
ミドを含む菌株の選出） Ｅ．ｃｏ−Ｉｔ Ｋ１２の染
色体ＤＮＡの断片をＣｏｌＥ１プラスミドにクローニン
グしたｐＬＣプラスミドを保有するＣｌａｒｋｅ−Ｃａ
ｒｂｏｎのコロニーバンクの菌株の中より、ｐＬＣプラ
スミド上に７６分付近の遺伝子をのせていることが知ら
れている８つの菌株についてＧＧＴ活性を調べ、１がプ
ラスミド上にのっている株としてＳＨ ２０９株（プラ
スミドｐＬＣ９−１２）を選出した（親株のＧＧＴ活性
を１００とすると選出株は１４４０の活性を有していた
） （Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｙｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓｅ
ａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎ．， １５０， ３３． １９
８８ ） ．本菌はＦＥＲＭ−Ｐとして寄託されている
。
（サブクローニング株の取得）
ＳＨ ２０９は大量のＧＧＴを生産したが、更にこの菌
株よりρＬＣ９−１２を抽出し、』ＬＩＩで切断するこ
とによりＧＧＴをコードする遺伝子を含むフラグメント
を得、ｐｕｃ １８のＢａｍＨＩ部位で連結することに
よりｐＳＨ １０１を取得した（第１図）。更にこのｐ
ｓｌ＋ １０１をＪＭ−１０９にトランスホームし、Ｇ
ＧＴ活性の高い株としてＳＨ−６２７を取得した（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｃｅａｒｃｈ Ｃ
ｏｍｍｕｎ．＋ １５（Ｌ３３＋ １９８９）。
株よりρＬＣ９−１２を抽出し、』ＬＩＩで切断するこ
とによりＧＧＴをコードする遺伝子を含むフラグメント
を得、ｐｕｃ １８のＢａｍＨＩ部位で連結することに
よりｐＳＨ １０１を取得した（第１図）。更にこのｐ
ｓｌ＋ １０１をＪＭ−１０９にトランスホームし、Ｇ
ＧＴ活性の高い株としてＳＨ−６２７を取得した（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｃｅａｒｃｈ Ｃ
ｏｍｍｕｎ．＋ １５（Ｌ３３＋ １９８９）。
実施例１
ｐｉ，ｃ ９−１２のエエエ挿入部の塩基配列を決定し
た．塩基配列はＭ−１３ファージ（Ｊ． Ｍｅｓｓｉ゛
ｎｇ ｅｔａｌ．， Ｇｅｎｅ． １９， ２６９．
１９８２）を使ったジデオキシヌクレオチド鎖終結法（
Ｆ． Ｓａｎｇｅｒ ｅｔ ａ＋．， Ｐｒｏｃ，Ｎａ
ｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， Ｕ．Ｓ．Ａ．， ７
４， ５４６３． １９７７）により決定した。決定さ
れた塩基配列およびアミノ酸配列を第１図に示した。こ
こに決定された大小各サブユニットのＮ末端対応部位は
、精製各サブユニットのＮ末端分析より（ｉ１！認した
。
た．塩基配列はＭ−１３ファージ（Ｊ． Ｍｅｓｓｉ゛
ｎｇ ｅｔａｌ．， Ｇｅｎｅ． １９， ２６９．
１９８２）を使ったジデオキシヌクレオチド鎖終結法（
Ｆ． Ｓａｎｇｅｒ ｅｔ ａ＋．， Ｐｒｏｃ，Ｎａ
ｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， Ｕ．Ｓ．Ａ．， ７
４， ５４６３． １９７７）により決定した。決定さ
れた塩基配列およびアミノ酸配列を第１図に示した。こ
こに決定された大小各サブユニットのＮ末端対応部位は
、精製各サブユニットのＮ末端分析より（ｉ１！認した
。
手続補正書
第ｌ図は、ｒ−グルタミルトランスベプチダーゼをコー
ドする遺伝子の塩基配列及び対応するアミノ酸配列を図
示したものである．
ドする遺伝子の塩基配列及び対応するアミノ酸配列を図
示したものである．
Claims (6)
- （１）γ−グルタミルトランスペプチダーゼをコードす
る遺伝子（￥ｇｇｔ￥）に関与する、２５アミノ酸より
なるリーダーペプチドおよび３６５アミノ酸よりなる大
サブユニット、および１９０アミノ酸よりなる小サブユ
ニットのポリペプチドをコードする遺伝子。 - （２）￥ｇｇｔ￥の２５アミノ酸よりなるリーダーペプ
チドをコードする第１請求項記載の遺伝子。 - （３）￥ｇｇｔ￥の３６５アミノ酸よりなる大サブユニ
ットのペプチドをコードする第１請求項記載の遺伝子。 - （４）￥ｇｇｔ￥の１９０アミノ酸よりなる小サブユニ
ットのペプチドをコードする第１請求項記載の遺伝子。 - （５）遺伝子が下記の塩基配列を有するものである特許
請求の範囲第１項の遺伝子。 - （６）遺伝子が下記のアミノ酸配列に対応する塩基配列
を有するものである第１請求項記載の遺伝子。 【遺伝子配列があります。】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5069989A JPH02231085A (ja) | 1989-03-01 | 1989-03-01 | ｒ―グルタミルトランスペプチダーゼをコードする遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5069989A JPH02231085A (ja) | 1989-03-01 | 1989-03-01 | ｒ―グルタミルトランスペプチダーゼをコードする遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02231085A true JPH02231085A (ja) | 1990-09-13 |
Family
ID=12866153
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5069989A Pending JPH02231085A (ja) | 1989-03-01 | 1989-03-01 | ｒ―グルタミルトランスペプチダーゼをコードする遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02231085A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013051685A1 (ja) | 2011-10-07 | 2013-04-11 | 味の素株式会社 | 変異型γ－グルタミルトランスフェラーゼ、及び、γ-グルタミルバリルグリシン又はその塩の製造法 |
| WO2014025023A1 (ja) | 2012-08-10 | 2014-02-13 | 味の素株式会社 | γ－グルタミルバリルグリシン結晶の製造方法 |
-
1989
- 1989-03-01 JP JP5069989A patent/JPH02231085A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013051685A1 (ja) | 2011-10-07 | 2013-04-11 | 味の素株式会社 | 変異型γ－グルタミルトランスフェラーゼ、及び、γ-グルタミルバリルグリシン又はその塩の製造法 |
| US9580696B2 (en) | 2011-10-07 | 2017-02-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing γ-glutamylvalylglycine or a salt thereof |
| US9677106B2 (en) | 2011-10-07 | 2017-06-13 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing gamma-glutamylvalylglycine or a salt thereof |
| WO2014025023A1 (ja) | 2012-08-10 | 2014-02-13 | 味の素株式会社 | γ－グルタミルバリルグリシン結晶の製造方法 |
| US9512177B2 (en) | 2012-08-10 | 2016-12-06 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing γ-glutamyl-valyl-glycine crystal |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU624353B2 (en) | Process for integration of a chosen gene on the chromosome of a bacterium and bacterium obtained by the said process | |
| EP0143195B1 (en) | Recombinant dna having a phosphoenol pyruvate carboxylase gene inserted therein, bacteria carrying said recombinant dna and a process for producing amino acids using said bacteria | |
| Roof et al. | The organization and regulation of the pyrBI operon in E. coli includes a rho-independent attenuator sequence | |
| EP0637630A2 (en) | Method for the biological synthesis of peptides | |
| CN113528476B (zh) | 一种葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和高效重组表达 | |
| JPH09173078A (ja) | 分子シャペロンを用いる蛋白質の製造方法 | |
| KR20150115009A (ko) | 아코니트산수화 효소 유전자와(또는) 그 조절요소를 개조한 세균 발효를 통한 l-리신 생산방법 | |
| Heider et al. | Occurrence and functional compatibility within Enterobacteriaceae of a tRNA species which inserts selenocysteine into protein | |
| GB1588572A (en) | Process for the production of filamentous hybrid phages | |
| EP0877084B1 (en) | Thermostable diaphorase gene | |
| US4477571A (en) | Chimeric plasmids that replicate in bacteria and yeast and microorganisms transformed therewith | |
| JPH02231085A (ja) | ｒ―グルタミルトランスペプチダーゼをコードする遺伝子 | |
| CN116925990A (zh) | 一种蛋白酶表达水平提高的底盘细胞 | |
| US11760988B2 (en) | L-aspartate alpha-decarboxylase mutant and application thereof | |
| Isono et al. | A new ribosomal proteinlocus in Escherichia coli: The gene for protein S6 maps at 97 min | |
| Goosen et al. | Genes involved in the biosynthesis of PQQ from Acinetobacter calcoaceticus | |
| CN114181288A (zh) | 制备l-缬氨酸的方法及其所用的基因与该基因编码的蛋白质 | |
| FR2785291B1 (fr) | Procede de production in vivo de proteines chimiquement diversifiees par incorporation d'acides amines non conventionnels | |
| EP0293207A2 (en) | Eschericia coli carrying recombinant plasmid for the production of tryptophan | |
| CN115820575B (zh) | 组氨酸连接酶突变体及其应用 | |
| CN117264034B (zh) | Bbd29_09715基因突变体及其在制备l-谷氨酸中的应用 | |
| AU2021100409A4 (en) | Recombinant low-temperature catalase, recombinant vector and engineered strain thereof | |
| JPH02265480A (ja) | アミノペプチダーゼｎをコードする遺伝子を有する組換えｄｎａ及び該組換えｄｎａを有する細胞を用いるアミノペプチダーゼｎの製造法 | |
| JPH07203975A (ja) | 抗菌活性ペプチドをコードする遺伝子及び抗菌活性ペプチドの製造方法 | |
| CA1205027A (en) | Chimeric plasmids that replicate in bacteria and yeast and microorganisms transformed therewith |