JPH02186998A - 繊維素溶解系の主要成分を測定する包括的試験 - Google Patents
繊維素溶解系の主要成分を測定する包括的試験Info
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- JPH02186998A JPH02186998A JP1292547A JP29254789A JPH02186998A JP H02186998 A JPH02186998 A JP H02186998A JP 1292547 A JP1292547 A JP 1292547A JP 29254789 A JP29254789 A JP 29254789A JP H02186998 A JPH02186998 A JP H02186998A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、サンプル中にプラスミノーゲン活性化因子を
添加するかまたはサンプル中に存在するプラスミノーゲ
ン活性化因子を活性化し、生成したプラスミン活性を測
定することからなる、血漿中または他の生物学的液体中
の繊維素溶解系成分の包括的測定方法に関する。
添加するかまたはサンプル中に存在するプラスミノーゲ
ン活性化因子を活性化し、生成したプラスミン活性を測
定することからなる、血漿中または他の生物学的液体中
の繊維素溶解系成分の包括的測定方法に関する。
ヒト生体は、形成した血餅を再溶解できる酵素系すなわ
ち繊維素溶解系を有する。血液凝固系の機能の検討は、
古くから部分トロンボプラスチン時間まＩ；は活性化部
分トロンボプラスチン時間のような包括的試験によって
行われる程度にすぎず、この系の繊維素溶解に係る決定
的因子の包括的様式での機能的測定値得る方法はこれま
でなかった。この系の主要な成分は、プラスミノーゲン
、α−２抗プラスミン（Ａ２−ＡＰ）およびプラスミノ
ーゲン活性化因子インヒビター（ＦＡＩ） 、この場合
とくに内皮細胞由来■型である。この３成分はすべて個
々に測定できる。
ち繊維素溶解系を有する。血液凝固系の機能の検討は、
古くから部分トロンボプラスチン時間まＩ；は活性化部
分トロンボプラスチン時間のような包括的試験によって
行われる程度にすぎず、この系の繊維素溶解に係る決定
的因子の包括的様式での機能的測定値得る方法はこれま
でなかった。この系の主要な成分は、プラスミノーゲン
、α−２抗プラスミン（Ａ２−ＡＰ）およびプラスミノ
ーゲン活性化因子インヒビター（ＦＡＩ） 、この場合
とくに内皮細胞由来■型である。この３成分はすべて個
々に測定できる。
しかしながら、この３成分の相互関係を反映する包括的
試験は従来技術にはなかつｔ；。
試験は従来技術にはなかつｔ；。
血漿サンプルをプラスミノーゲン活性化因子、ならびに
ω−アミノカルボン酸および／またはメチオニン特異的
酸化剤とともインキュベートすると数分以内で、驚くべ
きことに、プラスミノーゲン、α２−抗プラスミンおよ
びプラスミノーゲン活性化因子インヒビターの函数とし
てプラスミン活性を産生できることが明らかにされた。
ω−アミノカルボン酸および／またはメチオニン特異的
酸化剤とともインキュベートすると数分以内で、驚くべ
きことに、プラスミノーゲン、α２−抗プラスミンおよ
びプラスミノーゲン活性化因子インヒビターの函数とし
てプラスミン活性を産生できることが明らかにされた。
ついで生成したプラスミン活性を、たとえば色原性また
は蛍光原性プラスミン基質を介して測定することにより
、患者の繊維素溶解系を調べることができる。
は蛍光原性プラスミン基質を介して測定することにより
、患者の繊維素溶解系を調べることができる。
活性化因子としてｔ−ＰＡを用い、試験化合物中にＥＤ
ＴＡのようなキレート剤を０，５〜１０ｍＭの濃度で使
用すると、この試験により、繊維素溶解現象における別
の重要な因子であるフィブリンによるＬ−ＰＡの刺激も
検出される。
ＴＡのようなキレート剤を０，５〜１０ｍＭの濃度で使
用すると、この試験により、繊維素溶解現象における別
の重要な因子であるフィブリンによるＬ−ＰＡの刺激も
検出される。
プラスミノーゲン活性化因子の代わりに接触相活性化剤
たとえばエラグ酸（１−１００μｇ／混合物）またはス
ルファチドを使用すると、この試験により、血漿プロウ
ロキナーゼ、ｙＬａ因子およびカリクレインを介する固
有の経路が測定できる。しかし、係数５だけ長いインキ
ュベーション時間が必要になる。
たとえばエラグ酸（１−１００μｇ／混合物）またはス
ルファチドを使用すると、この試験により、血漿プロウ
ロキナーゼ、ｙＬａ因子およびカリクレインを介する固
有の経路が測定できる。しかし、係数５だけ長いインキ
ュベーション時間が必要になる。
したがって、本発明は、血漿または他の生物学的液体中
の繊維素溶解系の成分を包括的に測定する方法において
、試験サンプルにプラスミノーゲン活性化因子を添加す
るかまｌ；はサンプル中に存在するプラスミノーゲン活
性化因子を活性化し、生成したプラスミン活性を測定す
ることを特徴とする方法に関する。
の繊維素溶解系の成分を包括的に測定する方法において
、試験サンプルにプラスミノーゲン活性化因子を添加す
るかまｌ；はサンプル中に存在するプラスミノーゲン活
性化因子を活性化し、生成したプラスミン活性を測定す
ることを特徴とする方法に関する。
添加するプラスミノーゲン活性化因子の量は、ｔ−ＰＡ
の場合濃度２〜２００１ Ｕ ／ ｍ Ｑ 、ウロキナ
ーゼの場合濃度１〜１００ＩＵ／ｍ１２である。
の場合濃度２〜２００１ Ｕ ／ ｍ Ｑ 、ウロキナ
ーゼの場合濃度１〜１００ＩＵ／ｍ１２である。
本発明の方法の実施に際しては、２．５〜４０好ましく
は５〜２０１ Ｕ ／ ｍ ＋２のウロキナーゼまたは
１２．５〜１００ＩＵ／’ｍ１２の組織プラスミノーゲ
ン活性化因子、および所望により活性を改善するために
１００〜２，０００μｇ／ｍＱのｔ−ＰＡ活性刺激物質
を含むプラスミノーゲン活性化試薬２００μΩを、５０
〜２００μＱ（好ましくは１００μａ）の血漿、好まし
くは加クエン酸血漿に添加する。
は５〜２０１ Ｕ ／ ｍ ＋２のウロキナーゼまたは
１２．５〜１００ＩＵ／’ｍ１２の組織プラスミノーゲ
ン活性化因子、および所望により活性を改善するために
１００〜２，０００μｇ／ｍＱのｔ−ＰＡ活性刺激物質
を含むプラスミノーゲン活性化試薬２００μΩを、５０
〜２００μＱ（好ましくは１００μａ）の血漿、好まし
くは加クエン酸血漿に添加する。
この刺激物質はフィブリンから脱カルシウムイオン下に
プラスミンによる蛋白分解で製造されるフィブリノーゲ
ン分解生成物であってもよく、２０〜２００ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ、 ０〜２％ボリゲリン、０．０１％ＴｒｉＬ
ｏｎＧＥ’ Ｘ １００． ｐＨ７，５−９，５好まし
くは８．５中の溶液として使用される。プラスミノーゲ
ン活性化因子がウロキナーゼである場合には、それを含
む溶液にそれを刺激する物質、好ましくは３ｍＭ）ラネ
キサム酸あるいはその代わりに３０ｍＭε−アミノカプ
ロン酸もしくは１００ｍＭリジンまたは他のω−アミノ
カルボン酸を含有させる。ω−アミノカルボン酸は別個
に反応混合物に添加してもよい。
プラスミンによる蛋白分解で製造されるフィブリノーゲ
ン分解生成物であってもよく、２０〜２００ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ、 ０〜２％ボリゲリン、０．０１％ＴｒｉＬ
ｏｎＧＥ’ Ｘ １００． ｐＨ７，５−９，５好まし
くは８．５中の溶液として使用される。プラスミノーゲ
ン活性化因子がウロキナーゼである場合には、それを含
む溶液にそれを刺激する物質、好ましくは３ｍＭ）ラネ
キサム酸あるいはその代わりに３０ｍＭε−アミノカプ
ロン酸もしくは１００ｍＭリジンまたは他のω−アミノ
カルボン酸を含有させる。ω−アミノカルボン酸は別個
に反応混合物に添加してもよい。
メチオニン特異的酸化剤たとえばクロラミンＴ１クロラ
ミンＢまｊ；はＨＯＣＱを、好ましくはｔ−ＰＡでの測
定の場合にはω−アミノカルボン酸の代わりに、また好
ましくはｕ−ＰＡでの測定の場合にはω−アミノカルボ
ン酸とともに、抗プラスミンおよび他のセリンプロテア
ーゼインヒビターを破壊するため、反応混合物にさらに
添加することができる。試験混合物中の濃度は０．２〜
２０ｍＭとする。メチオニン特異的酸化剤とは、メチオ
ニンを好ましくはｐＨ７〜９、とくにｐＨ８〜８．８で
メチオニンスルホキシドに酸化する物質を意味する。
ミンＢまｊ；はＨＯＣＱを、好ましくはｔ−ＰＡでの測
定の場合にはω−アミノカルボン酸の代わりに、また好
ましくはｕ−ＰＡでの測定の場合にはω−アミノカルボ
ン酸とともに、抗プラスミンおよび他のセリンプロテア
ーゼインヒビターを破壊するため、反応混合物にさらに
添加することができる。試験混合物中の濃度は０．２〜
２０ｍＭとする。メチオニン特異的酸化剤とは、メチオ
ニンを好ましくはｐＨ７〜９、とくにｐＨ８〜８．８で
メチオニンスルホキシドに酸化する物質を意味する。
３７°Ｃで数分間、好ましくは１０分間インキュベート
したのち、色原性プラスミン基質を、好ましくは直線性
の反応動力学パラメーターを得るために食塩溶液（反応
混合物中１００〜８００ｍＭＮａＣ（２）および／また
はＣｓＣＩ２溶液（反応混合物中３０〜３００ｍＭ）と
ともに添加し、吸光の変化速度（△Ｅ／ｌ）を測定する
。
したのち、色原性プラスミン基質を、好ましくは直線性
の反応動力学パラメーターを得るために食塩溶液（反応
混合物中１００〜８００ｍＭＮａＣ（２）および／また
はＣｓＣＩ２溶液（反応混合物中３０〜３００ｍＭ）と
ともに添加し、吸光の変化速度（△Ｅ／ｌ）を測定する
。
別法として、同量の色原性プラスミン基質（ＮａＣｆｆ
および／またはＣｓＣＩ２は加えないで）を、最初のイ
ンキュベーション時に好ましくはプラスミノーゲン活性
化試薬とともに添加することもできるが、反応速度は双
曲線を呈するようになる。反応は約５分後に、酸たとえ
ば８．５Ｍ酢酸１００μＱを加えて停止させることが好
ましい。
および／またはＣｓＣＩ２は加えないで）を、最初のイ
ンキュベーション時に好ましくはプラスミノーゲン活性
化試薬とともに添加することもできるが、反応速度は双
曲線を呈するようになる。反応は約５分後に、酸たとえ
ば８．５Ｍ酢酸１００μＱを加えて停止させることが好
ましい。
本発明はさらに特許請求の範囲によって定義し、以下の
実施例によって例示する。
実施例によって例示する。
実施例 １
様々な病的血漿についての本発明の方法の実施
ヒトクエン酸添加血１ｉＷｌｏＯμＱ、 ａ）標準ヒト
血漿、ｂ）Ａ２−ＡＰ欠乏血漿（すなわち血漿中にＡ２
−ＡＰを含まない；免疫吸着によって調製） 、ｃ）５
０％濃度グラスミノーゲン欠乏血漿（すなわち血漿中プ
ラスミノーゲン含量は正常の５０％；免疫吸着によって
調製）、ｄ）４．２ｕ−ＰＡ阻害単位／ｍ（ｌの多ＰＡ
Ｉ血漿を、ｕ−ＰＡ試薬（１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、
３ ｍＭトラネキサム酸１１％ポリゲリン、 ０．０１
％ＴｒｉｔｏｎＸ１００、 ｐＨ８，４中５．７．５お
よびｌ０ＩＵ ｕ−ＰＡ／ ｍＱ）２０θμＱとともに
３７°０で１０分間インキュベートした。
血漿、ｂ）Ａ２−ＡＰ欠乏血漿（すなわち血漿中にＡ２
−ＡＰを含まない；免疫吸着によって調製） 、ｃ）５
０％濃度グラスミノーゲン欠乏血漿（すなわち血漿中プ
ラスミノーゲン含量は正常の５０％；免疫吸着によって
調製）、ｄ）４．２ｕ−ＰＡ阻害単位／ｍ（ｌの多ＰＡ
Ｉ血漿を、ｕ−ＰＡ試薬（１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、
３ ｍＭトラネキサム酸１１％ポリゲリン、 ０．０１
％ＴｒｉｔｏｎＸ１００、 ｐＨ８，４中５．７．５お
よびｌ０ＩＵ ｕ−ＰＡ／ ｍＱ）２０θμＱとともに
３７°０で１０分間インキュベートした。
ついで、色原性基質ＨＤ−ノルバリルシクロへキシルア
ラニル−リジルバラニトロアニリド（ＨＤ−Ｎｖａ−Ｃ
ＨＡ−Ｌｙｓ−ｐＮＡ）の４８０ｍＭ ＭａＣＬ １
００ｍＭ Ｃ５ＣＱ中０．６ｍ）Ｊ溶液５００μＱを加
え、基質反応は３分後（３７’Ｏ）３．４Ｍ酢酸２００
μａを加えて停止させ、生じた吸光を４０５ｎｍで測定
した。
ラニル−リジルバラニトロアニリド（ＨＤ−Ｎｖａ−Ｃ
ＨＡ−Ｌｙｓ−ｐＮＡ）の４８０ｍＭ ＭａＣＬ １
００ｍＭ Ｃ５ＣＱ中０．６ｍ）Ｊ溶液５００μＱを加
え、基質反応は３分後（３７’Ｏ）３．４Ｍ酢酸２００
μａを加えて停止させ、生じた吸光を４０５ｎｍで測定
した。
第１表
添加ｕ−ＰＡ
ａ）正常血漿 ２９０ ４０２ ５３６ｂ
）Ａ２−ＡＰ欠乏血漿 ６９６ ８６１ ９２９正
常血漿と比較して、抗プラスミンの欠乏は繊維素溶解の
増大を招き、ΔＥ値の上昇が起こること、また多ＰＡＩ
血漿およびプラスミノーゲン欠乏血漿では繊維素溶解現
象が低下し、△Ｅ値の低下となって表れることが明らか
である。
）Ａ２−ＡＰ欠乏血漿 ６９６ ８６１ ９２９正
常血漿と比較して、抗プラスミンの欠乏は繊維素溶解の
増大を招き、ΔＥ値の上昇が起こること、また多ＰＡＩ
血漿およびプラスミノーゲン欠乏血漿では繊維素溶解現
象が低下し、△Ｅ値の低下となって表れることが明らか
である。
したがって、本発明による試験は、鍵成分、すなわちＦ
ＡＩ、Ａ２−ＡＰおよびプラスミノーゲンの活性の変化
についての情報を提供する。繊維素溶解成分の血漿濃度
の変動と高感度に連動する最大吸光の生成はヒト血漿１
００μａに対して２Ｉυのｕ−ＰＡの添加によって得ら
れた。
ＡＩ、Ａ２−ＡＰおよびプラスミノーゲンの活性の変化
についての情報を提供する。繊維素溶解成分の血漿濃度
の変動と高感度に連動する最大吸光の生成はヒト血漿１
００μａに対して２Ｉυのｕ−ＰＡの添加によって得ら
れた。
実施例 ２
本発明の試験に対するｐＨの影響
サンプルとして正常血漿を用い、様々なｐｕにおいて例
１の試験を実施した。
１の試験を実施した。
第２表
至滴ｐＨは８．５であった。
実施例 ３
本発明の試験に対する異なるトラネキサム酸濃度の影響
例１を、サンプルとして正常血清を用い、異なるトラネ
キサム酸またはクロラミンＴ濃度において実施した。
キサム酸またはクロラミンＴ濃度において実施した。
第３表
試験容量３００μα中トラ
ネキサム酸濃度
Ｍ
０．７５
１．５
２．２５
６２７分
試験容量３００μα中クロ ０ ７４ラミンＴ
濃度 １．２５ １０３至適結果は、反応混
合物中トラネキサム酸約１．５ｍＭの使用で得られる。
濃度 １．２５ １０３至適結果は、反応混
合物中トラネキサム酸約１．５ｍＭの使用で得られる。
クロラミンＴの使用も試験混合物巾約５ｍＭの至適濃度
で改善された吸光の生成を生じる。
で改善された吸光の生成を生じる。
実施例 ４
内因性（固有）プラスミノーゲン活性化因子の接触相活
性化による繊維素溶解試験 ヒトクエン酸添加血漿１００μＱ、 ａ）標準血漿、ｂ
）Ａ２−ＡＰ−欠乏血漿、Ｃ）１０μ９／ ｒｎＱプロ
ウロキナーゼ（ｓｃ−ｕ−ＰＡ）補充血漿、ｄ）２０ｎ
ｇ／ ｒｔｒ（２プロウロキナーゼ補充血漿、ｅ）４０
１０／ｍ（２−末鎖組織プラスミノーゲン活性化因子（
ｓｃ−ｔ−ＰＡ）補充血漿、ｆ）８０１１１／ ｒａＱ
５ｃ−ｔ−ＰＡ補充血漿、ｇ）ｈ）ｉ）繊維素溶解九
進症（凝固障害のない出血）の病歴がある患者からの血
漿を試薬１１００μＱと混合した。試薬工は、３６ｍＱ
の１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、 ５０ｍＭ ＮａＣｆｆ、
０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ、 １％ポリゲリン、０．
０１％ナトリウムアジド、ｐＨ８、４に溶解したＮｅｏ
ｔｈｒｏｍｔ ｉｎ■（Ｂｅｈ−ｒｉｎｇｗｅｒｋｅ、
Ｍａｒｂｕｒｇ） ｌ容量部とトラネキサム酸（１
２ｍＭ） １容量部からなる。
性化による繊維素溶解試験 ヒトクエン酸添加血漿１００μＱ、 ａ）標準血漿、ｂ
）Ａ２−ＡＰ−欠乏血漿、Ｃ）１０μ９／ ｒｎＱプロ
ウロキナーゼ（ｓｃ−ｕ−ＰＡ）補充血漿、ｄ）２０ｎ
ｇ／ ｒｔｒ（２プロウロキナーゼ補充血漿、ｅ）４０
１０／ｍ（２−末鎖組織プラスミノーゲン活性化因子（
ｓｃ−ｔ−ＰＡ）補充血漿、ｆ）８０１１１／ ｒａＱ
５ｃ−ｔ−ＰＡ補充血漿、ｇ）ｈ）ｉ）繊維素溶解九
進症（凝固障害のない出血）の病歴がある患者からの血
漿を試薬１１００μＱと混合した。試薬工は、３６ｍＱ
の１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、 ５０ｍＭ ＮａＣｆｆ、
０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ、 １％ポリゲリン、０．
０１％ナトリウムアジド、ｐＨ８、４に溶解したＮｅｏ
ｔｈｒｏｍｔ ｉｎ■（Ｂｅｈ−ｒｉｎｇｗｅｒｋｅ、
Ｍａｒｂｕｒｇ） ｌ容量部とトラネキサム酸（１
２ｍＭ） １容量部からなる。
ゼ°ロ調整のためには、４００ＩＬａの停止溶液（４８
０ｍＭ ＮａＣＱ、 １００ｍＭ ＣｓＣＩ２． ３０
ｍＭアルギニン、 ５０ｍＭＴｒｉｓ、 ｐＨ８，４）
をサンプルに、試薬Ｉの添加前に加えた。
０ｍＭ ＮａＣＱ、 １００ｍＭ ＣｓＣＩ２． ３０
ｍＭアルギニン、 ５０ｍＭＴｒｉｓ、 ｐＨ８，４）
をサンプルに、試薬Ｉの添加前に加えた。
３７℃で１０分間インキュベートしたのち、蒸留水／停
止溶液ｌ：４の割合の混液中に溶解した０、６ｍＭ基質
溶液（ＨＤ−Ｎｖａ−ＣＨＡ−Ｌｙｓ−ｐＮＡ） ５０
（１１゜またはゼロ値用には蒸留水中３ｍＭ基質溶液１
００μｇを加え、３７℃で６０分間インキュベートし、
３．４ｍＭ酢酸２５０μｇを加えて反応を終結させ、生
じｔ；吸光を４０５ｎｍで測定した。
止溶液ｌ：４の割合の混液中に溶解した０、６ｍＭ基質
溶液（ＨＤ−Ｎｖａ−ＣＨＡ−Ｌｙｓ−ｐＮＡ） ５０
（１１゜またはゼロ値用には蒸留水中３ｍＭ基質溶液１
００μｇを加え、３７℃で６０分間インキュベートし、
３．４ｍＭ酢酸２５０μｇを加えて反応を終結させ、生
じｔ；吸光を４０５ｎｍで測定した。
第４表
ａ）標準ヒト血漿 ２８４± １ｂ）
Ａ２−ＡＰ−欠乏血漿 ４５３±０ｃ）ａ
）＋ １０ｎｇ／ｍｆｌ ５ｃ−ｕ−ＰＡ
３７６± １ｄ）ａ）＋ ２０ｎｇ／＋＋＋ｆ２
５ｃ−ｕ−ＰＡ ４４０± ５ｅ）ａ）＋
４０１Ｕ／ｍ（ｌ ５ｃ−ｔ−ＰＡ
３７４± ５ｆ）ａ）＋８０１Ｕ／ ｒｎＱ ５ｃ−ｔ
−ＰＡ ４３７± ３ｇ）患者１２０５±１
０ ｈ）患者２５５１±１７ １）患者３５０２± ６ 本発明による試験混合物は、５ｑ−ｕ−ＰＡおよび５ｃ
−ｔ−ＰＡ酸成分含めた繊維素溶解系を測定することが
明らかである。すなわち、５ｃ−ｕ−ＰＡまたは遊離の
５ｃ−ｔ−ＰＡの血漿レベルの上昇は繊維素溶解活性の
上昇を伴う。繊維素溶解試験の結果は出血傾向の病歴を
もつ３例の患者中２例で病的な上昇を示した。
Ａ２−ＡＰ−欠乏血漿 ４５３±０ｃ）ａ
）＋ １０ｎｇ／ｍｆｌ ５ｃ−ｕ−ＰＡ
３７６± １ｄ）ａ）＋ ２０ｎｇ／＋＋＋ｆ２
５ｃ−ｕ−ＰＡ ４４０± ５ｅ）ａ）＋
４０１Ｕ／ｍ（ｌ ５ｃ−ｔ−ＰＡ
３７４± ５ｆ）ａ）＋８０１Ｕ／ ｒｎＱ ５ｃ−ｔ
−ＰＡ ４３７± ３ｇ）患者１２０５±１
０ ｈ）患者２５５１±１７ １）患者３５０２± ６ 本発明による試験混合物は、５ｑ−ｕ−ＰＡおよび５ｃ
−ｔ−ＰＡ酸成分含めた繊維素溶解系を測定することが
明らかである。すなわち、５ｃ−ｕ−ＰＡまたは遊離の
５ｃ−ｔ−ＰＡの血漿レベルの上昇は繊維素溶解活性の
上昇を伴う。繊維素溶解試験の結果は出血傾向の病歴を
もつ３例の患者中２例で病的な上昇を示した。
実施例 ５
外因性プラスミノーゲン活性化因子（組織型に富む）の
測定のためのキレート剤およびクロラミンの使用による
繊維素溶解試験 ヒトクエン酸添加血漿ａ）〜８）（例４参照）ｌＯＯμ
ｕを、試薬工の代わりに２５ｍＭ ＥＤＴＡ、 １０ｍ
１ＪクロラミンＴＳ１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（Ｔｒｉｓ緩
衝液は旧ＣＩＮ緩衝液で置換することもできた）、５０
ｍＭ ＮａＣＱ、 ０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ（！Ｅ’
Ｘ ＩＯＬ ｐＨ８，４を用いｔ；ほかは実施例４の場
合と同様にしてインキュベートした。
測定のためのキレート剤およびクロラミンの使用による
繊維素溶解試験 ヒトクエン酸添加血漿ａ）〜８）（例４参照）ｌＯＯμ
ｕを、試薬工の代わりに２５ｍＭ ＥＤＴＡ、 １０ｍ
１ＪクロラミンＴＳ１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（Ｔｒｉｓ緩
衝液は旧ＣＩＮ緩衝液で置換することもできた）、５０
ｍＭ ＮａＣＱ、 ０．０２％Ｔｒｉｔｏｎ（！Ｅ’
Ｘ ＩＯＬ ｐＨ８，４を用いｔ；ほかは実施例４の場
合と同様にしてインキュベートした。
第５表
ａ）標準血漿 １３４±６ｂ）Ａ２
−ＡＰ−欠乏血漿 ５２３±２ｃ）ａ）＋
ｌＯｎｇ／ ｍＱ ５ｃ−ｕ−ＰＡ １１
８±１ｄ）ａ）＋ ２Ｏｎ９／ ｍＱ ５ｃ−ｕ−ＰＡ
１１４±１６）ａ）＋４０１Ｕ／ ｍＱ
５ｃ−ｔ−ｐＡ１６７±４ｆ）ａ）＋ ８０１０／ ｍ
Ｑ ５ｃ−ｔ−ＰＡ ２２７±５結果は、繊
維素溶解試験のこの変法が ５ｃ−ｕ−ＰＡ含量（固有の繊維素溶解系）に影響され
ないが、（外因性）組織プラスミノーゲン活性化因子の
量の変動にはよく応答することを示している。
−ＡＰ−欠乏血漿 ５２３±２ｃ）ａ）＋
ｌＯｎｇ／ ｍＱ ５ｃ−ｕ−ＰＡ １１
８±１ｄ）ａ）＋ ２Ｏｎ９／ ｍＱ ５ｃ−ｕ−ＰＡ
１１４±１６）ａ）＋４０１Ｕ／ ｍＱ
５ｃ−ｔ−ｐＡ１６７±４ｆ）ａ）＋ ８０１０／ ｍ
Ｑ ５ｃ−ｔ−ＰＡ ２２７±５結果は、繊
維素溶解試験のこの変法が ５ｃ−ｕ−ＰＡ含量（固有の繊維素溶解系）に影響され
ないが、（外因性）組織プラスミノーゲン活性化因子の
量の変動にはよく応答することを示している。
特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名
シャフト 外２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）血漿または他の生物学的液体にプラスミノーゲン活
性化因子を添加し、生成したプラスミン活性を測定する
ことを特徴とする血漿または他の生物学的液体中の繊維
素溶解系成分の包括的測定方法。 ２）プラスミノーゲン活性化因子としてウロキナーゼを
使用する請求項１記載の方法。 ３）プラスミノーゲン活性化因子として組織プラスミノ
ーゲン活性化因子を使用する請求項１記載の方法。 ４）試験混合物中でプラスミノーゲン活性化因子を産生
させる請求項１記載の方法。 ５）プラスミノーゲン活性化因子−活性化物質として界
面活性剤好ましくはエラグ酸またはスルフアチドを使用
する請求項４記載の方 法。 ６）メチオニンをメチオニンスルホキシドに酸化させる
試薬を添加する請求項１記載の方 法。 ７）Ｎ−クロラミンまたは他の一重積酸素放出物質を添
加する請求項１記載の方法。 ８）ω−アミノカルボン酸を添加する請求項１記載の方
法。 ９）トラネキサム酸を好ましくは０．５〜５ｍＭの濃度
に添加する請求項１記載の方法。 １０）測定はｔ−ＰＡ刺激物質の存在下に行う請求項３
記載の方法。 １１）測定はキレート剤好ましくはＥＤＴＡの存在下に
行う請求項３記載の方法。 １２）測定は一工程法で行う請求項３記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3838529A DE3838529A1 (de) | 1988-11-14 | 1988-11-14 | Globaltest zur erfassung der hauptkomponenten des fibrinolysesystems |
| DE3838529.5 | 1988-11-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02186998A true JPH02186998A (ja) | 1990-07-23 |
| JP2818673B2 JP2818673B2 (ja) | 1998-10-30 |
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ID=6367121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1292547A Expired - Lifetime JP2818673B2 (ja) | 1988-11-14 | 1989-11-13 | 繊維素溶解系の主要成分を測定する包括的試験 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0369333B1 (ja) |
| JP (1) | JP2818673B2 (ja) |
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| AU (1) | AU634182B2 (ja) |
| CA (1) | CA2002772C (ja) |
| DE (2) | DE3838529A1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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-
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