JPH02142486A - 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法 - Google Patents
不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法Info
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- JPH02142486A JPH02142486A JP63297283A JP29728388A JPH02142486A JP H02142486 A JPH02142486 A JP H02142486A JP 63297283 A JP63297283 A JP 63297283A JP 29728388 A JP29728388 A JP 29728388A JP H02142486 A JPH02142486 A JP H02142486A
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- Japan
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- culture
- unsaturated fatty
- mortierella
- physical stress
- fatty acid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は菌体内において目的とする不飽和脂肪酸の生産
性を向上すると共にパルプ状に増殖する糸状菌を粒状に
制御して培養し、培養中または後処理工程において生産
物の取扱いを容易にする不飽和脂肪酸含有脂質の製造方
法に関するものである。
性を向上すると共にパルプ状に増殖する糸状菌を粒状に
制御して培養し、培養中または後処理工程において生産
物の取扱いを容易にする不飽和脂肪酸含有脂質の製造方
法に関するものである。
パルプ状に増殖する糸状菌は、培養の進行につれて発酵
槽内の器壁、センサー周囲等に付着したり、培養槽上部
に固りを形成したりする。その結果、培養液粘度が高ま
り撹拌不可能となったり、酸素供給が不十分となったり
して、糸状菌の生産する目的物質の収率が上がらないと
いう問題がある。
槽内の器壁、センサー周囲等に付着したり、培養槽上部
に固りを形成したりする。その結果、培養液粘度が高ま
り撹拌不可能となったり、酸素供給が不十分となったり
して、糸状菌の生産する目的物質の収率が上がらないと
いう問題がある。
上記問題を改善するため、ウレタンフオームにペニシリ
ン生産菌を植え付け、流動層タイプのタンクの中で培養
する方法が提案されているが、流動層タンクは、その体
積に比して目的物の生産性が低いという問題がある。（
昭和６２年１月３０日理研シンポジウム“分離型反応器
”講演要旨集ｐ、 １〜４：遠藤勲著、生物反応プロ
セスシステムハンドブック （１９８５）サイエンスフ
ォーラム社）。
ン生産菌を植え付け、流動層タイプのタンクの中で培養
する方法が提案されているが、流動層タンクは、その体
積に比して目的物の生産性が低いという問題がある。（
昭和６２年１月３０日理研シンポジウム“分離型反応器
”講演要旨集ｐ、 １〜４：遠藤勲著、生物反応プロ
セスシステムハンドブック （１９８５）サイエンスフ
ォーラム社）。
また、糸状菌の固体培養法の欠点である培地温度や水分
の均一な制御を改善するため、小麦越を用いた流動層培
養法も提案されているが、装置が巨大になり、汎用性が
低いという問題がある（化学工学４９．３４９−３５１
（１９８５）。
の均一な制御を改善するため、小麦越を用いた流動層培
養法も提案されているが、装置が巨大になり、汎用性が
低いという問題がある（化学工学４９．３４９−３５１
（１９８５）。
一方、糸状菌の形態制御には胞子接種量、界面活性剤添
加、粘度が関与する場合があるとの報告があるが、必ず
しも顕著な効果は認められない（総合技術資料集ｐ２４
９〜２５８、カビ応用開発研究会企画、テクノアイ出版
部出版、１９８５年７月２０日発行）。
加、粘度が関与する場合があるとの報告があるが、必ず
しも顕著な効果は認められない（総合技術資料集ｐ２４
９〜２５８、カビ応用開発研究会企画、テクノアイ出版
部出版、１９８５年７月２０日発行）。
したがって本発明の目的は、糸状菌を培養するにあたり
、菌体を粒状にし、結着性を低下させて、撹拌を均一に
行い、酸素供給を容易にすることによって、目的物質の
収率を向上させることができる方法を提供することであ
る。
、菌体を粒状にし、結着性を低下させて、撹拌を均一に
行い、酸素供給を容易にすることによって、目的物質の
収率を向上させることができる方法を提供することであ
る。
本発明者は、上記目的を達成するために鋭意研究を行っ
た結果、不飽和脂肪酸を産生ずる糸状菌の液体培養時に
培地中での炭素源を一定の範囲の低い濃度で連続的に維
持する、あるいは、液体培養時に糸状菌に対して物理的
ストレスを与えること、もしくは、それらの組合せによ
り目的物である不飽和脂肪酸の含有率が向上し、同時に
菌体がパルプ状から粒状、頚粒状へと、その形態を変え
て増殖することを見い出し、本発明を完成するに至った
。すなわち、本発明は、モルティエレラ属に属し、不飽
和脂肪酸を産生ずる微生物を、物理的ストレスを与え４
ながら液体培地中で培養して不飽和脂肪酸含有脂質を製
造する方法において、（１）炭素源を制限基質として培
養する、及び／又は （２）物理的ストレスが５Ｋｇ／ｍ２・ｓｅｃ以上であ
る 事を特徴とする不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法である
。
た結果、不飽和脂肪酸を産生ずる糸状菌の液体培養時に
培地中での炭素源を一定の範囲の低い濃度で連続的に維
持する、あるいは、液体培養時に糸状菌に対して物理的
ストレスを与えること、もしくは、それらの組合せによ
り目的物である不飽和脂肪酸の含有率が向上し、同時に
菌体がパルプ状から粒状、頚粒状へと、その形態を変え
て増殖することを見い出し、本発明を完成するに至った
。すなわち、本発明は、モルティエレラ属に属し、不飽
和脂肪酸を産生ずる微生物を、物理的ストレスを与え４
ながら液体培地中で培養して不飽和脂肪酸含有脂質を製
造する方法において、（１）炭素源を制限基質として培
養する、及び／又は （２）物理的ストレスが５Ｋｇ／ｍ２・ｓｅｃ以上であ
る 事を特徴とする不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法である
。
本発明の培養方法は、穏やかな液体培養条件下ではパル
プ状に増殖する糸状菌の培養に最も好適に利用される。
プ状に増殖する糸状菌の培養に最も好適に利用される。
このような糸状菌としては、例えば不飽和脂肪酸生産性
の下記の菌が挙げられる。
の下記の菌が挙げられる。
モルティ２エレラ・アルビナ（ゝ、Ｉｏｒｔｉｅｒｅｌ
ｌａ ａｌｐｉｎａ）ＩＦＯ８５６８，ＡＴＣＣ１６２
６６、ＡＴＣＣ３２２２１，へＴＣＣ４２４３０モルテ
ィエレラ・バイニエリ （！、（ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｂａｉｎｉｅｒｉ）
ＩＦＯ８５６９モルティエレラ・エロンガタ （！、１ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｅｌｏｎｇａｔａ）
ＩＦＯ８５７０モルティエレラ・エクシグア （！、Ｉｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｅｘｉｇｕａ）
ＩＦＯ８５７１モルティエレラ・ミ゛ヌティッシマ （！、Ｉｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍ
ａ） ＩＦＯ８５７３モルティエレラ・つ゛アーティ
シラタ （１，（ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌａ
ｔａ） ＩＦＯ８５７５モルティエレラーハイグロフィ
ラ （！、１ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｈｙｇｒｏｐｈｉｌａ
） ＩＦＯ５９４１モルティエレラ・ポリセフアラ （！Ｊｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌａ
） ＩＦＯ６３３５これらの菌は、いずれも財団法人醗
酵研究所（ＩＦＯ）、若しくは米国のアメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔ
ｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、 ＡＴ
ＣＣ）の菌株目録に記載されている糸状菌であり、当業
者が容易に人手しうるちのである。
ｌａ ａｌｐｉｎａ）ＩＦＯ８５６８，ＡＴＣＣ１６２
６６、ＡＴＣＣ３２２２１，へＴＣＣ４２４３０モルテ
ィエレラ・バイニエリ （！、（ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｂａｉｎｉｅｒｉ）
ＩＦＯ８５６９モルティエレラ・エロンガタ （！、１ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｅｌｏｎｇａｔａ）
ＩＦＯ８５７０モルティエレラ・エクシグア （！、Ｉｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｅｘｉｇｕａ）
ＩＦＯ８５７１モルティエレラ・ミ゛ヌティッシマ （！、Ｉｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍ
ａ） ＩＦＯ８５７３モルティエレラ・つ゛アーティ
シラタ （１，（ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌａ
ｔａ） ＩＦＯ８５７５モルティエレラーハイグロフィ
ラ （！、１ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｈｙｇｒｏｐｈｉｌａ
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） ＩＦＯ６３３５これらの菌は、いずれも財団法人醗
酵研究所（ＩＦＯ）、若しくは米国のアメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔ
ｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、 ＡＴ
ＣＣ）の菌株目録に記載されている糸状菌であり、当業
者が容易に人手しうるちのである。
本発明では、これらの糸状菌を通常の液体培地に接種す
る。液体培地の成分としては、単糖類、多糖類などの炭
素源、例えばグルコース、フルクトース、サッカロース
、糖蜜、木材糖化液、デンプン氷解物などが使用される
。このほか窒素源、無機塩など、通常微生物の培養に使
用されるものを添加してもよい。例えば、培地中の窒素
源としてはアンモニア、アンモニウム塩、グルタミン酸
、アスパラギン酸、原票、動植物由来のペプトン頌等を
挙げることができ、これらを適宜組み合わせ、さらに必
要に応じてカリウム、ナトリウム、鉄、マグネシウム、
亜鉛、銅、マンガン等の無機塩、ビタミン等を添加して
使用することができる。好ましい培地としては、ジャガ
イモ、麦芽、ペプトン、酵母エキス、コーン・ステイー
プ・リカー、カザミノ酸、藺等を単独に、又はそれらを
組み合わせ、必要に応じてさらに糖類を添加して調製し
た培地を挙げることができ、特に好ましい培地としては
、鋸、ジャガイモ、若しくはそれらの浸出液とペプトン
、炭水化物の混合物、又は麦芽エキスを挙げることがで
きる。一般に窒素源は０．０１〜５重量％、好ましくは
０．１〜３重量％の濃度とするのが良く、培地の初発ｐ
Ｈは４．０〜７．０が適当である。また、これらの培地
を用いる場合には、通常１０〜３３℃で、好ましくは、
２０〜３０℃において、２〜３０日培養を行うが培養方
法としては、通気撹拌培養又は振盪培養等の通常の培養
方法を挙げることができる。
る。液体培地の成分としては、単糖類、多糖類などの炭
素源、例えばグルコース、フルクトース、サッカロース
、糖蜜、木材糖化液、デンプン氷解物などが使用される
。このほか窒素源、無機塩など、通常微生物の培養に使
用されるものを添加してもよい。例えば、培地中の窒素
源としてはアンモニア、アンモニウム塩、グルタミン酸
、アスパラギン酸、原票、動植物由来のペプトン頌等を
挙げることができ、これらを適宜組み合わせ、さらに必
要に応じてカリウム、ナトリウム、鉄、マグネシウム、
亜鉛、銅、マンガン等の無機塩、ビタミン等を添加して
使用することができる。好ましい培地としては、ジャガ
イモ、麦芽、ペプトン、酵母エキス、コーン・ステイー
プ・リカー、カザミノ酸、藺等を単独に、又はそれらを
組み合わせ、必要に応じてさらに糖類を添加して調製し
た培地を挙げることができ、特に好ましい培地としては
、鋸、ジャガイモ、若しくはそれらの浸出液とペプトン
、炭水化物の混合物、又は麦芽エキスを挙げることがで
きる。一般に窒素源は０．０１〜５重量％、好ましくは
０．１〜３重量％の濃度とするのが良く、培地の初発ｐ
Ｈは４．０〜７．０が適当である。また、これらの培地
を用いる場合には、通常１０〜３３℃で、好ましくは、
２０〜３０℃において、２〜３０日培養を行うが培養方
法としては、通気撹拌培養又は振盪培養等の通常の培養
方法を挙げることができる。
これらの培養液中で不飽和脂肪酸の含有率と収率を向上
させ糸状菌菌株の形態をパルプ状から（頚）粒状に制御
するための炭素源濃度は、用いる糸状菌及び他の培地成
分からの影響もあるため、−概には特定しえないが、例
えば、５０ｇ／ｆ以下の範囲を培養中期又は終了時付近
まで維持し、不飽和脂肪酸の生産量を高める。
させ糸状菌菌株の形態をパルプ状から（頚）粒状に制御
するための炭素源濃度は、用いる糸状菌及び他の培地成
分からの影響もあるため、−概には特定しえないが、例
えば、５０ｇ／ｆ以下の範囲を培養中期又は終了時付近
まで維持し、不飽和脂肪酸の生産量を高める。
また物理的ストレス強度を上げるために、培地中に不溶
固形物を含む組成、好ましくは、成長促進因子をも含む
爺を０．５〜４％、好ましくは、１〜２％用いることが
できる。
固形物を含む組成、好ましくは、成長促進因子をも含む
爺を０．５〜４％、好ましくは、１〜２％用いることが
できる。
物理的ストレス強度は、通気撹拌培養を考える時、単位
体積当りの所要動力を用いて表せる。糸状菌培養におい
ては、培養液が非ニユートン流体であり、均一な粘度を
もっておらず、また使用する菌株、培養時間（菌齢）に
より培養液の状態が種々変化するが、５． ＯＸ １０
°Ｋｇ／ｍ２・ｓｅｃ以上、好ましくは５．０ｘｌＯ’
〜１．ＯＸ １０’ Ｋｇ／ｍ２・ｓｅｃとすることに
よって、モルテイエレラ属の糸状菌を粒状ないし顆粒状
に形態を制御することが出来る。
体積当りの所要動力を用いて表せる。糸状菌培養におい
ては、培養液が非ニユートン流体であり、均一な粘度を
もっておらず、また使用する菌株、培養時間（菌齢）に
より培養液の状態が種々変化するが、５． ＯＸ １０
°Ｋｇ／ｍ２・ｓｅｃ以上、好ましくは５．０ｘｌＯ’
〜１．ＯＸ １０’ Ｋｇ／ｍ２・ｓｅｃとすることに
よって、モルテイエレラ属の糸状菌を粒状ないし顆粒状
に形態を制御することが出来る。
単位体積当りの所要動力が菌体の受ける物理的ストレス
を決定し、菌体にとって、そのストレスが上昇するとパ
ルプ状の形態での生育は困難となり、より環境に適合し
た粒形態の菌体が優先して生育してくる。よって充分に
物理的ストレスを与える他の０手段、例えば、ガラスピ
ーズ、小麦麺等の培養液中に障害となる物体が存在すれ
ば、菌体は物理的ストレスを受けて粒状となる。
を決定し、菌体にとって、そのストレスが上昇するとパ
ルプ状の形態での生育は困難となり、より環境に適合し
た粒形態の菌体が優先して生育してくる。よって充分に
物理的ストレスを与える他の０手段、例えば、ガラスピ
ーズ、小麦麺等の培養液中に障害となる物体が存在すれ
ば、菌体は物理的ストレスを受けて粒状となる。
本発明に従うと、糸状菌脂肪酸中の不飽和脂肪酸の含有
率及び含有量が著しく上昇し、また菌体形状は粒状乃至
顆粒状となり、結着性が小さ（なるため、培養槽内壁に
付着しない上に均一な撹拌と酸素供給が容易となる。こ
のため、集菌、洗浄、脱水、破砕等の後処理工程も容易
に行うことができ、目的物の最終的な収率も向上するの
で工業的な不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法として好適
である。
率及び含有量が著しく上昇し、また菌体形状は粒状乃至
顆粒状となり、結着性が小さ（なるため、培養槽内壁に
付着しない上に均一な撹拌と酸素供給が容易となる。こ
のため、集菌、洗浄、脱水、破砕等の後処理工程も容易
に行うことができ、目的物の最終的な収率も向上するの
で工業的な不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法として好適
である。
実施例１ （物理的ストレスが小さい場合）小麦鶴１％
、ポリペプトン（大五栄養化学Ｑｌ製）０．３３％、Ｃ
ａＣ１２・２Ｈ２０７５０ｍｇ／ｌの組成にデキストロ
ースを５％、１０％、１５％、２０％、２５％の各濃度
となるように添加した培地２００ｍＩ！を５００ｍβ坂
ロフラメロフラスコ中た。一方、モルティエレラ・アル
ビナ（ＡＴＣＣ３２２２１）をブドウ糖ペプトン培地（
白水製薬社製）を用いた培地４＋ｙ＋１！中で６日間前
培養し、それを上記各培地に植菌し、培養温度２０℃、
１２０ｒｌ）ｍで往復振盪培養を２０日間行った。同時
に５％濃度の系で培養初期の１０日間５％濃度を維持す
るよう、デキストロースを追加し、全２０日間の培養を
行ったバッチも検討した。
、ポリペプトン（大五栄養化学Ｑｌ製）０．３３％、Ｃ
ａＣ１２・２Ｈ２０７５０ｍｇ／ｌの組成にデキストロ
ースを５％、１０％、１５％、２０％、２５％の各濃度
となるように添加した培地２００ｍＩ！を５００ｍβ坂
ロフラメロフラスコ中た。一方、モルティエレラ・アル
ビナ（ＡＴＣＣ３２２２１）をブドウ糖ペプトン培地（
白水製薬社製）を用いた培地４＋ｙ＋１！中で６日間前
培養し、それを上記各培地に植菌し、培養温度２０℃、
１２０ｒｌ）ｍで往復振盪培養を２０日間行った。同時
に５％濃度の系で培養初期の１０日間５％濃度を維持す
るよう、デキストロースを追加し、全２０日間の培養を
行ったバッチも検討した。
菌体は２５％デキストロース濃度では殆んど増殖せず、
１０〜２０％デキストロース濃度では、パルプ状に増殖
したが、５％デキストロース濃度では、粒状に増殖した
。各菌体をガーゼにより集菌後、脱水・洗浄操作を２回
ずつ繰り返し、小麦鰯不溶部分を含む湿菌体を得た。こ
の湿菌体をデシケータ中で減圧乾燥し、得られた乾燥菌
体を実験室用粉砕ミル（シバタ科学社製）で粉砕し、ク
ロロホルム／メタノーノペ２ ： １ （Ｖ／Ｖ）に
より脂質を抽出した。次いで金属ナトリウムを用いたア
ルコリシスにより脂質をメチルエステル化し、脂質中の
脂肪酸組成をガスクロマトグラフィーで分析して全脂肪
酸中のアラキドン酸含有率を求めた。結果を表１に示す
。初発デキストロース濃度の低いほど、全脂肪酸中のア
ラキドン酸含有率は上昇１．５％デキストロースを用い
た時の値は、２０％デキストロースを用いた時のほぼ２
倍であった。即ち、物理的ストレスが小さく菌体増殖が
緩慢な場合でも、糖濃度が低いとアラキドン酸の脂肪酸
中の含有率は向上する傾向を示している。
１０〜２０％デキストロース濃度では、パルプ状に増殖
したが、５％デキストロース濃度では、粒状に増殖した
。各菌体をガーゼにより集菌後、脱水・洗浄操作を２回
ずつ繰り返し、小麦鰯不溶部分を含む湿菌体を得た。こ
の湿菌体をデシケータ中で減圧乾燥し、得られた乾燥菌
体を実験室用粉砕ミル（シバタ科学社製）で粉砕し、ク
ロロホルム／メタノーノペ２ ： １ （Ｖ／Ｖ）に
より脂質を抽出した。次いで金属ナトリウムを用いたア
ルコリシスにより脂質をメチルエステル化し、脂質中の
脂肪酸組成をガスクロマトグラフィーで分析して全脂肪
酸中のアラキドン酸含有率を求めた。結果を表１に示す
。初発デキストロース濃度の低いほど、全脂肪酸中のア
ラキドン酸含有率は上昇１．５％デキストロースを用い
た時の値は、２０％デキストロースを用いた時のほぼ２
倍であった。即ち、物理的ストレスが小さく菌体増殖が
緩慢な場合でも、糖濃度が低いとアラキドン酸の脂肪酸
中の含有率は向上する傾向を示している。
又、低い糖濃度を保ちながらデキストロースを追加する
と収率も向上することがわかる。
と収率も向上することがわかる。
実施例２ （初発デキストロース濃度が高い場合）小
麦ｊ２％、デキストロース１０％、ポリペプトン（大工
栄養化学（１局製）１％、ＣａＣ１２・２Ｈ２ｆ］７５
０ＩＴ１ｇ／ｌからなる培養液を三速７１シマーファー
メンタ−（丸菱エンジニアリング社ＩＭＪ−Ｎ７×３型
）に各４１ずつ調製した。同一組成の培養液１００ｍＡ
を坂ロフラスコに用意し、モルティエレラ・アルビナ（
ＡＴＣＣ３２２２１）を４日間前培養したものを上記７
Ｉ！のジャーの各々に植菌し、培養温度２０℃、通気量
Ｑ、５ｖｖｍ、単位体債当りの所要動力１．７５．７８
．４０２ｋｇ ／ ｍ’・ｓｅｃで培養した。１６日後
に集菌、洗浄し、実施例１と同様の模作により脂質分析
を行った。得られた結果を表２に示す。所要動力の増加
に伴い菌体形状は粒状から顆粒状となり、脂質分析値は
、各項目とも著しく向上した。即ち、初発デキストロー
ス濃度が高くとも物理的ストレスが高く、菌体増殖を活
発に保つと急速にデキストロースが消費され、脂肪酸中
のアラキドン酸の含有率が向上し、アラキドン酸の生産
性も高くなった。
麦ｊ２％、デキストロース１０％、ポリペプトン（大工
栄養化学（１局製）１％、ＣａＣ１２・２Ｈ２ｆ］７５
０ＩＴ１ｇ／ｌからなる培養液を三速７１シマーファー
メンタ−（丸菱エンジニアリング社ＩＭＪ−Ｎ７×３型
）に各４１ずつ調製した。同一組成の培養液１００ｍＡ
を坂ロフラスコに用意し、モルティエレラ・アルビナ（
ＡＴＣＣ３２２２１）を４日間前培養したものを上記７
Ｉ！のジャーの各々に植菌し、培養温度２０℃、通気量
Ｑ、５ｖｖｍ、単位体債当りの所要動力１．７５．７８
．４０２ｋｇ ／ ｍ’・ｓｅｃで培養した。１６日後
に集菌、洗浄し、実施例１と同様の模作により脂質分析
を行った。得られた結果を表２に示す。所要動力の増加
に伴い菌体形状は粒状から顆粒状となり、脂質分析値は
、各項目とも著しく向上した。即ち、初発デキストロー
ス濃度が高くとも物理的ストレスが高く、菌体増殖を活
発に保つと急速にデキストロースが消費され、脂肪酸中
のアラキドン酸の含有率が向上し、アラキドン酸の生産
性も高くなった。
実施例３ （残糖量とアラキドン酸生成量の関係）実
施例２と同様の培養液２０βを３０１タンク（小松用化
工機社製マグネット撹拌型）に調製した。一方モルティ
エレラ・アルビナ（ＡＴＣＣ３２２２１）を上記と同様
の組成の培地１．５１に６日間培養し、それを３０Ｊタ
ンクに誘導し、通気量０．５ｖｖｍ、単位体積当りの所
要動力３．０×１０ ’ ｋｇ／ｍ’ ・ｓｅｃ 、培
養温度２０℃にて１５日間培養を行い、内容物をサンプ
リング孔から経時的にサンプリングし、実施例１と同様
の方法で脂質分析を行うと共に、培養液中のデキストロ
ース濃度をグルコースＢテスト（和光純薬社製）を用い
て測定した。結果を表３に示す。
施例２と同様の培養液２０βを３０１タンク（小松用化
工機社製マグネット撹拌型）に調製した。一方モルティ
エレラ・アルビナ（ＡＴＣＣ３２２２１）を上記と同様
の組成の培地１．５１に６日間培養し、それを３０Ｊタ
ンクに誘導し、通気量０．５ｖｖｍ、単位体積当りの所
要動力３．０×１０ ’ ｋｇ／ｍ’ ・ｓｅｃ 、培
養温度２０℃にて１５日間培養を行い、内容物をサンプ
リング孔から経時的にサンプリングし、実施例１と同様
の方法で脂質分析を行うと共に、培養液中のデキストロ
ース濃度をグルコースＢテスト（和光純薬社製）を用い
て測定した。結果を表３に示す。
菌体形状は、培養６日目から長さ約３印の（頚）粒、状
となった。残糖量は、培養開始直後から減少しはじめ、
１３日目で０となった。それに反比例し、菌体重量、総
メチルエステル量は増加したが増殖非連動のアラキドン
酸はや５遅れて増加しはじめ、デキストロース濃度が５
％以下になった７日日頃から急激に収率が向上した。
となった。残糖量は、培養開始直後から減少しはじめ、
１３日目で０となった。それに反比例し、菌体重量、総
メチルエステル量は増加したが増殖非連動のアラキドン
酸はや５遅れて増加しはじめ、デキストロース濃度が５
％以下になった７日日頃から急激に収率が向上した。
実施例４ （初発デキストロース濃度が高く、物理的
ストレスが大きい場合） 実施例２と同様の培養液３００Ｉ！を５００１！タンク
（小松用化工機社製）に調製した。一方モルティエレラ
・アルビナ（ＡＴＣＣ３２２２１）を上記と同様の組成
の培地２０１に４日間前培養し、それを５００１タンク
に誘導して植菌し、通気量０．５ｖｖｍ、培養温度２０
℃、単位体積当りの所要動力り、 Ｉ Ｘ １０ ’
ｋｇ／ｍ’ ・ｓｅｃで通気撹拌培養を１６日間継続し
た。増殖した菌体は長さ約３ｕの顆粒状で菌体相互の結
着性は全くなく、培養槽内壁にも殆ど付着しなかった。
ストレスが大きい場合） 実施例２と同様の培養液３００Ｉ！を５００１！タンク
（小松用化工機社製）に調製した。一方モルティエレラ
・アルビナ（ＡＴＣＣ３２２２１）を上記と同様の組成
の培地２０１に４日間前培養し、それを５００１タンク
に誘導して植菌し、通気量０．５ｖｖｍ、培養温度２０
℃、単位体積当りの所要動力り、 Ｉ Ｘ １０ ’
ｋｇ／ｍ’ ・ｓｅｃで通気撹拌培養を１６日間継続し
た。増殖した菌体は長さ約３ｕの顆粒状で菌体相互の結
着性は全くなく、培養槽内壁にも殆ど付着しなかった。
直径５５ｃｍの遠心濾過機により集菌後水洗と遠心濾過
（脱水）を各２回ずつ繰り返し、小麦毎不溶部分を含む
湿菌体３８、２ ｋｇを得た。この湿菌体をコロイドミ
ル（増幸産業製ＭＫＺＡ−１０−１５型）で破砕後、ヘ
キサン−エタノールにより脂質を抽出した。次いで金属
ナトリウムを用いたアルコリシスにより脂質をメチルエ
ステル化し、脂質中の脂肪酸組成をガスクロマトグラフ
ィーで分析して、全脂肪酸中のアラキドン酸含有率を求
めた。また同組成の培地５１を７ｊ２ジヤー（丸菱エン
ジニアリング社製型式Ｍ Ｊ −Ｎ ７ Ｘ ３ ）に
調製し、モルティエレラ・アルビナ（ＡＴＣＣ３２２２
１）を通気量０．６ｖｖｍ ＠養温度２０℃、単位体積
当りの所要動力２．２ｋｇ／ｍ″・ｓｅｃで１６日間培
養したものを比較例３として行い、パルプ状の菌体を得
た。種母は５００＋ＴＩＡ’坂口７ラスコに１００ｍｌ
の同一培地を仕込んで４日間培養したものを用いた。
（脱水）を各２回ずつ繰り返し、小麦毎不溶部分を含む
湿菌体３８、２ ｋｇを得た。この湿菌体をコロイドミ
ル（増幸産業製ＭＫＺＡ−１０−１５型）で破砕後、ヘ
キサン−エタノールにより脂質を抽出した。次いで金属
ナトリウムを用いたアルコリシスにより脂質をメチルエ
ステル化し、脂質中の脂肪酸組成をガスクロマトグラフ
ィーで分析して、全脂肪酸中のアラキドン酸含有率を求
めた。また同組成の培地５１を７ｊ２ジヤー（丸菱エン
ジニアリング社製型式Ｍ Ｊ −Ｎ ７ Ｘ ３ ）に
調製し、モルティエレラ・アルビナ（ＡＴＣＣ３２２２
１）を通気量０．６ｖｖｍ ＠養温度２０℃、単位体積
当りの所要動力２．２ｋｇ／ｍ″・ｓｅｃで１６日間培
養したものを比較例３として行い、パルプ状の菌体を得
た。種母は５００＋ＴＩＡ’坂口７ラスコに１００ｍｌ
の同一培地を仕込んで４日間培養したものを用いた。
菌体形態が顆粒状の場合には均一な撹拌を容易に行うこ
とができ、また脱水、破砕も濾布やコロイドミルの目づ
まりがなく非常に効果的に行うことができた。しかも、
アラキドン酸の収率及び生産性もパルプ状形態の場合と
比較して約３倍の好成績を示した。結果を表４にまとめ
て示す。
とができ、また脱水、破砕も濾布やコロイドミルの目づ
まりがなく非常に効果的に行うことができた。しかも、
アラキドン酸の収率及び生産性もパルプ状形態の場合と
比較して約３倍の好成績を示した。結果を表４にまとめ
て示す。
実施例５ （初発デキストロース濃度が高く、高い物
理的ストレスを与えた場合） 実施例２と同様の組成の培地を調製し、その２００ｍ１
を５００ｍｊ２の坂ロフラスコに入れ、下記８菌株を個
々に植菌して２０℃、１２０ｒｌ）ｍで振盪培養を６日
間ｍ続したところ、増殖した菌体は全てバルブ状であっ
た。一方、実施例２と同様の条件下（単位体積当りの所
要動力４０２ ｋｇ／ｍ２・５ｅｃ）でジャー培養を６
日間行ったところ、全て粒状に増殖した。
理的ストレスを与えた場合） 実施例２と同様の組成の培地を調製し、その２００ｍ１
を５００ｍｊ２の坂ロフラスコに入れ、下記８菌株を個
々に植菌して２０℃、１２０ｒｌ）ｍで振盪培養を６日
間ｍ続したところ、増殖した菌体は全てバルブ状であっ
た。一方、実施例２と同様の条件下（単位体積当りの所
要動力４０２ ｋｇ／ｍ２・５ｅｃ）でジャー培養を６
日間行ったところ、全て粒状に増殖した。
モルティエレラ・アルビナ ＩＦｏ ８５６８
モルティエレラ・バイニエ’） ＩＦｏ ８５
６９モルティエレラ・エロンガタ ＩＦｏ ８５
７０モルティエレラ・エクシグア ＩＰｏ ８５
７１モルティエレラ・ハイグロフィラ ＩＦｏ ５９４
１モルティエレラ・ミヌティッシマ ＩＦｏ ８５７３
モルティエレラ・ポリセフアラ ＩＰｏ ６３３５モ
ルティエレラ・ヴアーティシラタＩＦＯ８５７５比較例
４ 実施例５と同様の実験を下記の糸状菌５菌株について行
ったところ、坂ロフラスコでもジャーでも粒状に成長し
、物理的ストレスは菌形態に、相関しなかった。
モルティエレラ・バイニエ’） ＩＦｏ ８５
６９モルティエレラ・エロンガタ ＩＦｏ ８５
７０モルティエレラ・エクシグア ＩＰｏ ８５
７１モルティエレラ・ハイグロフィラ ＩＦｏ ５９４
１モルティエレラ・ミヌティッシマ ＩＦｏ ８５７３
モルティエレラ・ポリセフアラ ＩＰｏ ６３３５モ
ルティエレラ・ヴアーティシラタＩＦＯ８５７５比較例
４ 実施例５と同様の実験を下記の糸状菌５菌株について行
ったところ、坂ロフラスコでもジャーでも粒状に成長し
、物理的ストレスは菌形態に、相関しなかった。
５００ｔｎｌの坂ロフラスコに入れ、オートクレーブで
１５分間１２０℃で滅菌し、放冷後、モルティエレラ・
エクシグア（ＩＦＯ８５７１）を白金耳量接種し、１２
０℃、１１００ｒｐで、往復振盪培養した。８日後に粒
状の菌体を集め、洗浄、ガラスピーズの回収をし、実施
例１と同様の操作により、脂質分析を行った。比較とし
てガラスピーズを用いない場合も同時に検討した。その
結果、全脂肪酸中のジホモ−Ｔ−リルン酸の含有率が１
１．２％から、ガラスピーズ添加により１８．８％へと
向上した。
１５分間１２０℃で滅菌し、放冷後、モルティエレラ・
エクシグア（ＩＦＯ８５７１）を白金耳量接種し、１２
０℃、１１００ｒｐで、往復振盪培養した。８日後に粒
状の菌体を集め、洗浄、ガラスピーズの回収をし、実施
例１と同様の操作により、脂質分析を行った。比較とし
てガラスピーズを用いない場合も同時に検討した。その
結果、全脂肪酸中のジホモ−Ｔ−リルン酸の含有率が１
１．２％から、ガラスピーズ添加により１８．８％へと
向上した。
実施例６ （デキスロース濃度が低く、物理的ストレス
が障害物体による場合）
が障害物体による場合）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 モルティエレラ属に属し、不飽和脂肪酸を産生する微生
物を、物理的ストレスを与えながら液体培地中で培養し
て不飽和脂肪酸含有脂質を製造する方法において、 （１）炭素源を制限基質として培養する、及び／又は （２）物理的ストレスが５Ｋｇ／ｍ＾２・ｓｅｃ以上で
ある 事を特徴とする不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63297283A JPH02142486A (ja) | 1988-11-25 | 1988-11-25 | 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63297283A JPH02142486A (ja) | 1988-11-25 | 1988-11-25 | 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02142486A true JPH02142486A (ja) | 1990-05-31 |
Family
ID=17844512
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63297283A Pending JPH02142486A (ja) | 1988-11-25 | 1988-11-25 | 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02142486A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999040215A1 (en) * | 1998-02-07 | 1999-08-12 | Avecia Limited | Mortierella |
| WO2000012744A1 (fr) * | 1998-08-28 | 2000-03-09 | Suntory Limited | PROCEDE DE PRODUCTION DE LIPIDE CONTENANT DE L'ACIDE ARACHIDONIQUE ET DE LIPIDE CONTENANT DE L'ACIDE DIHOMO-η-LINOLENIQUE |
| WO2004009827A2 (en) | 2002-06-19 | 2004-01-29 | Dsm Ip Assets B.V. | Preparation of microbial oil containing polyunsaturated fatty acids |
| EP1513941A2 (en) | 2002-06-19 | 2005-03-16 | DSM IP Assets B.V. | Preparation of microbial oil containing polyunsaturated fatty acids |
| JP2011050337A (ja) * | 2009-09-03 | 2011-03-17 | National Institute Of Advanced Industrial Science & Technology | 好塩菌による木材糖化液を用いたポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡｓ）等の産生方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6344891A (ja) * | 1986-03-31 | 1988-02-25 | Suntory Ltd | アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
| JPS63133994A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-06 | Lion Corp | γ−リノレン酸を含有する脂質の製造方法 |
-
1988
- 1988-11-25 JP JP63297283A patent/JPH02142486A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6344891A (ja) * | 1986-03-31 | 1988-02-25 | Suntory Ltd | アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 |
| JPS63133994A (ja) * | 1986-11-21 | 1988-06-06 | Lion Corp | γ−リノレン酸を含有する脂質の製造方法 |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999040215A1 (en) * | 1998-02-07 | 1999-08-12 | Avecia Limited | Mortierella |
| WO2000012744A1 (fr) * | 1998-08-28 | 2000-03-09 | Suntory Limited | PROCEDE DE PRODUCTION DE LIPIDE CONTENANT DE L'ACIDE ARACHIDONIQUE ET DE LIPIDE CONTENANT DE L'ACIDE DIHOMO-η-LINOLENIQUE |
| US7585651B2 (en) | 1998-08-28 | 2009-09-08 | Suntory Holdings Limited | Process for producing arachidonic acid-containing lipids |
| WO2004009827A2 (en) | 2002-06-19 | 2004-01-29 | Dsm Ip Assets B.V. | Preparation of microbial oil containing polyunsaturated fatty acids |
| EP1513941A2 (en) | 2002-06-19 | 2005-03-16 | DSM IP Assets B.V. | Preparation of microbial oil containing polyunsaturated fatty acids |
| JP2005530519A (ja) * | 2002-06-19 | 2005-10-13 | デーエスエム イーペー アセッツ ベスローテン フェンノートシャップ | 微生物油の調製 |
| JP2009261397A (ja) * | 2002-06-19 | 2009-11-12 | Dsm Ip Assets Bv | 微生物油の調製 |
| JP2014039540A (ja) * | 2002-06-19 | 2014-03-06 | Dsm Ip Assets Bv | 微生物油の調製 |
| JP2016127837A (ja) * | 2002-06-19 | 2016-07-14 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | 微生物油の調製 |
| US10633678B2 (en) | 2002-06-19 | 2020-04-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Preparation of microbial oil |
| JP2011050337A (ja) * | 2009-09-03 | 2011-03-17 | National Institute Of Advanced Industrial Science & Technology | 好塩菌による木材糖化液を用いたポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡｓ）等の産生方法 |
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