JPH01291164A - 標準瀘紙用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、新生児を対象とした先天性代謝異常検査用試
薬構成品の標準濾紙用組成物に水溶性粘性多ＩＪ！Ｉ又
はポリビニルピロリドンを用いる標準濾紙の改良に関す
る。

（従来の技術） 新生児を対象とした先天性代謝異常検査のスクリーニン
グが実施され、血中Ｔ　Ｓ　Ｈ（ｔｈｙｒｏｉｄｓｔｉ
ｍｕｌａｔｉｎｇ　ｈｏｒｍｏｎｅ）＋　　１７α−０
ＨＰ（１７α−ｈｙｄｒｏｘｙ　ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏ
ｎｅ）又はアミノ酸代謝異常症におけるアミノ酸（アミ
ノ酸）等が測定され、各々関連疾患の検出、早期治療の
指針となっている。新生児を対象とするため採血が困難
であり、測定系に工夫が必要である。そこで、血漿中に
存在する物質の検出に全血液を濾紙に滴下し、乾燥させ
た採血乾燥濾紙を作製し、そこから目的物質を抽出する
方法が採用されている。

採血乾燥濾紙中の検出しようとする目的物質の濃度は、
既知濃度の標準物質を含む標準濾紙から求めた標準曲線
との比較により求められている。

従来の標準濾紙は標準物質の他に新生児と同様な赤血球
容Ｎ（ヘマトクリット値）である５５ｖ／ｖ％に調整さ
れたヒト血液が標準濾紙用組成物として含まれていた。

従来の標準濾紙の作製過程は■汚染ヒト血液の分別■ヒ
ト血液の内因性標準物質濃度の測定■ヒト血液へマドク
リット値の調整■標準物質の調整■ヒト調整血液と標準
物質の混合■混合物の濾紙上への滴下■濾紙の風乾及び
真空乾燥■冷蔵等から成っていた。その後標準濾紙を用
いて標準曲線を作製する際の測定過程では、濾紙上の円
（直径１０１０−１ｌからディスク（直径３龍）を打ち
抜いて検体として使用していた。従って、標準物質の濃
度は、作製過程では単位容量で設定し、結果的に測定過
程では、単位面積で求めることになる。本標準濾紙の作
製過程及び測定過程で得られる検体の測定値に打ち抜き
箇所による差異は認められず、単位面積に影響を及ぼす
濾紙上の拡散状態にも問題点はみあたらない。

しかしながら、標準濾紙の組成物にヒト血液を用いるこ
とは、特にその細胞成分が加熱殺菌処理が不可能であり
、検査可能な病原体については、検査排除後のヒト血液
を使用しているものの、検査方法のない病原体の混入も
予想される。そこで、感染防止のために作製及び使用上
、直接の接触を避ける等の注意が必要であった。

また、標準物質の濃度調整に際しては、ヒト血液由来の
内因性の濃度を知る必要があり、調製ロフト毎に測定す
る必要があった。

また、従来の標準濾紙から得られる標準曲線は作製−午
後の変動が２０％程度に留まっているものの、それ−以
降の長期安定性には問題がある結果が得られている。

さらに、近年増々とト血液の産業上の入手は困難となり
、ヒト血液を用いた工業生産上の大問題となっている。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明は、従来の標準濾紙用組成物にヒト血液を用いた
場合の標準濾紙の作製及び使用上の諸問題を解決するも
のであり、その目的とするところは、ヒト血液の代替品
を使用した標準濾紙を作製することである。

そこで、標準濾紙用組成物となるべき物質を種々選択し
、比較検討を重ねた。その結果、標準濾紙用組成物に特
定の水溶性粘性多糖類又はポリビニルピロリドンを用い
た場合に、ヒト血液を用いた場合の諸問題が解決でき、
さらに長期安定性を示す結果が得られることを見出し、
本発明を完成するに到った。

（問題点を解決するための手段） 標準物質の他に標準濾紙用組成物として、水溶性粘性多
糖類又はポリビニルピロリドンを含む標準濾紙は下記の
過程により作製することができる。

この際、標準物質としてはＴＳＩ［，１７α−ＯＨＰ又
はアミノ酸等の既に実施されているものの他、血中濃度
測定が新生児先天性代謝異常検査に有用と判定される物
質を好適に用いることができる。

標準物質の調整：標準物質がＴ　Ｓ　Ｈの場合は、０．
５，１０，２０．４０及び８０μＩＵ／ｍＡを含むよう
に市販の標準液を適切な希釈液で調整するだけでよい。

１７α−０ＨＰ又はアミノ酸の場合は少くとも正常値±
２３Ｄを含むようにする。

希釈液はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を低濃度含んだ
緩衝液（ｐＨ７，０±０．２）が好適に用いられる。

また、標準濾紙用組成物としては、水溶性で粘性を有す
る物質のうち特定の多ｔＪ［又はポリビニルピロリドン
を好適に用いることができる。

すなわち、標準濾紙用組成物としては、濾紙上に滴下−
た場合、保水性を保持しながら、水と分離することなく
、標準物質を均一に拡散させるものである必要がある。

この場合、粘性水溶液であると拡散に都合がよい。また
、調製に際しては、室温で水に容易に溶解し、粘性を呈
する水溶液の調整が容易であり、標準物質調整液とも容
易に均一な混合液となるものがよい。この際、標準濾紙
用組成物の濃度と粘性の関連では、調整の際に粘度が高
（なりすぎると撹拌等の操作も困難であり、標準物質調
整液との混合も困難になる。さらに濾紙上への滴下にも
時間がかかる。そこで、特定の水溶性粘性多糖類には、
水溶液とした場合、濃度を比較的高くしても粘度が操作
困難を引きおこさないものが上記の問題点が回避できる
。さらに、保存に際しては標準物質の長期安定性に貢献
するものが好ましい。

そこで、水溶性粘性多糖類としては、アラビアゴム、コ
ーンスターチ分解物、アラビノガラクタ′ン及びフラク
トースポリサッカライド等を好適に使用することができ
る。アラビアゴムを組成物として使用する場合は、３〜
３０ｗ／ｖ％の範囲の水溶液を調整したものが実施可能
で、１５〜２５ｗ／ｖ％で良好な結果が得られる。同様
にコーンスターチ分解物では１０〜３５ｗ／ｖ％の範囲
で実施可能で１５〜３０ｗ／ｖ％で良好な結果が得られ
る。

アラビノガラクタン及びフラクトースポリサッカライド
では５〜３０−／ν％の範囲で実施可能で１０〜２０ｗ
／ｖ％で良好な結果が得られる。

また、ポリビニルピロリドンは、２〜１５ｗ／ｖχの範
囲で実施可能で５〜１０　ｗ／ｖ％で良好な結果が得ら
れる。

標準濾紙用組成物の調整：水溶性粘性多糖類及びポリビ
ニルピロリドンの場合も、水溶液の調整に際しては、秤
量し、室温で蒸留水又は精製水に溶解する。場合によっ
ては着色してもよい。

標準物質と標準濾紙用組成物の混合：調整された標準物
質と標準濾紙用組成物の混合比率は標準物質添加による
容量の増大を５％以下に留めておくのが望ましい。

標準濾紙の作製：上記混合物を用いて従来と同様な方法
で標準濾紙を作製する。濾紙は、従来の白色採血濾紙を
裁断し、検体採取部位を明示する円が描いであるものが
よい。

かかる水溶性粘性多糖類の中でアラビアゴムを標準濾紙
用組成物として使用した場合に下記に示す物性を具えて
いる。

溶液の粘度：アラビアゴム溶液はヒト血液に比較すると
濃度に対しての粘度は高いが、天然粘性多糖類の中にあ
っては、高濃度の場合でも粘度が低い。従って、溶液の
調整、標準物質との混合、さらに混合物を濾紙上に滴下
する場合も容易に実施できる。アラビアゴム溶液０〜３
０ｗ／ｖ％の粘度を示す（第１表）。

第１表　アラビアゴム溶液の粘度 （２５，５±０．５℃） 濾紙上の拡散：アラビアゴム２０ル２５溶液に標準物質
調整液を５　ｖ／ｖ％に相当する液量を添加した場合に
、滴下量が５０μｇである場合にヒト血液を用いた場合
とほぼ同様に拡散し、単位面積当りの標準物質の濃度も
同様な値が得られる。また、５〜２０ｗ／ｖ％溶液の場
合は、濃度に反比例して滴下量を適宜減量し、２５〜３
０ｗ／ｖχ溶液の場合は、適宜増量する。これらの場合
についても、測定値に打ち抜き箇所による差異は認めら
れない。

測定過程：標準物質濃度の測定にあたっては、採取量及
びその他測定操作も従来通りで従来と同様な結果が得ら
れる。

長期安定性：作製１年後では作製時との動作が１０％以
下の安定した標準曲線が得られる。さらに、長期安定性
を示す結果が得られる。

また、水溶性粘性多糖類の中でコーンスターチ分解物を
使用した場合には、溶液は濃度に対する粘度が比較的ア
ラビアゴムの場合に類似している。

標準物質調整液を５　ｖ／ｖ％に相当する量をコーンス
ターチ分解物２５ｗ／ｖ％溶液と混合し、本混合液を５
０μｌ濾紙上に滴下して作製した標準濾紙は従来の標準
濾紙を用いた場合と同様な結果が得られる。また、長期
安定性を示す結果が得られる。

ポリビニルピロリドンを使用した場合には、標準物質調
整液を５　ｖ／ν％に相当する量をポリビニルピロリド
ン５〜１０−／ν％溶液と混合し、本混合液を５０μｌ
濾紙上に滴下して作製した標準濾紙は従来の標準濾紙を
用いた場合と同様な結果が得られる。また、長期安定性
を示す結果が得られる。

（実施例） 以下に本発明の実施例につき説明する。

実施例１　標準濾紙用組成物にアラビアゴムを用いたＴ
ＳＨ標準曲線 アラビアゴム粉末（和光純薬工業株式会社）５゜１０．
１５．２０．２５及び３０ｇを秤量し、蒸留水で溶解し
１００ｍ１にした。各々をアラビアゴム５．１０．１５
，２０．２５及び３０ｗ／ｖ％溶液とした。１０　ｉ＋
／ｖ％色素濃液（食用赤色１０２号、東京化成工業）を
１　ｍｌ採取したアラビアゴム溶液１００＋ｊ！に添加
し、撹拌後静置した。

標準物質としてＴ　Ｓ　Ｈ標準液（ヘキスト社）を用い
、０．５．１０．２０．４０及び８０μＩＵ／ｍ１の２
０倍液を５　ｍ１作製した。希釈液にはＢＳＡｏ、１ｗ
／ｖ％含有０．１Ｍ塩化ナトリウム−リン酸緩衝液（ｐ
）！７．０±０．２）を用いた。

アラビアゴム０，５．１０，１５，２０．２５及び３０
ｗ／ｖ％溶液の各々にＴＳＨＯ，５゜１０．２０．４０
及び８０μｒＵ／ｍｌの２０倍液の各々を混合比、アラ
ビアゴム溶液：ＴＳＨ？ｌ液−１９＝１になるように総
量１０ｍ１作製した。

混合後よく撹拌した。

コントロールにはヒト調製血液（ヘマトクリット値５５
％）にＴ　Ｓ　Ｈを同様な混合比で作製したものを用い
た。

濾紙（東洋濾紙アトバンチツク、採血濾紙）に描かれた
円−（１０１ｍ直径）内の中心部にＴＳＨを含むアラビ
アゴム溶液又はヒト調整血液５０μｒを滴下した。その
後、２時間自然乾燥し、乾燥が確認された標準濾紙をさ
らに真空乾燥した。その後、乾燥剤とともに包装し用事
に備え冷蔵（２〜１０℃）した。

経時変化は作製直後から２ケ月毎に１年間観察した。測
定用試薬には、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）のサンド
インチ法による測定用キット、フレライザスクリーニン
グＴＳＨ（富士レビオ株式会社）を用いた。

その結果、従来のヒト調整血液を標準濾紙用組成物とし
て含む標準濾紙と同様な混合比及び濾紙上への滴下量で
アラビアゴム２０ル２５液で従来と同様な標準曲線が得
られた。作製１年後のＴＳＨ標準曲線を示す（第１図）
。

実施例２　標準濾紙用組成物にコーンスターチ分解物又
はポリビニルピロリドンを用い たＴＳＨ標準曲線 コーンスターチ分解物（商品名パインデックス松谷化学
工業株式会社）を１５．２０及び２５ｇ秤量し、蒸留水
で溶解し１００ｍ１にした。各々をコーンスターチ分解
物１５．２０及び２５ｗ／ｖ％溶液とした。また、ポリ
ビニルピロリドン（和光純薬工業株式会社）を２．５．
５及び１０ｇ秤量し、蒸留水で溶解し　１００ｎｊ！に
した。各々をポリビニルピロリドン　２．５．５及び１
　０　ｗ／ｖ％溶液とした。その後実施例１と同様に着
色し、ＴＳＨ標準液と混和し、標準濾紙を作製し保存し
た。作製１年後にＥＬＩＳＡにより測定した結果を示す
（第２図）。

（発明の効果） 本発明を用いた標準濾紙によれば、ヒト血液を使用しな
いで、従来と同様な標準曲線を得ることができる。病原
体の混入の心配もなく、内因性の標準物質を測定する必
要もなく、さらに長期安定性の高い標準濾紙を作製する
ことができ、工業的大量生産を可能にするものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１に示す方法で作製した標準濾紙をＩ
ＥＬＩ≦八により測定した結果を示す。また、第２図は
、実施例２に示す方法で作製した標準濾紙をＥＬＩＳＡ
により測定した結果を示す。図中、ｃｏｎｔｒｏｌ　は
従来法による標準濾紙、ＰＶＰはポリビニルピロリドン
及びＰｉｎｅはコーンスターチ分解物（商品名パインデ
ックス）を表す。 特許出願人　冨士レビオ株式会社 第１図 第２図

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）先天性代謝異常検査用試薬構成品の標準濾紙用組
   成物に水溶性粘性多糖類又はポリビニルピロリドンを含
   むことを特徴とする血液不使用型の標準濾紙用組成物。
2. （２）水溶性粘性多糖類がアラビアゴム、コーンスター
   チ分解物、アラビノガラクタン及びフラクトースポリサ
   ッカライドの中から選ばれる特許請求の範囲第１項記載
   の標準濾紙用組成物。