JPH01170854A - 生理活性物質固定化用担体粒子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、生理活性物質固定化用担体粒子としての重合
体粒子の製造方法に関し、詳しくは、その製造時には重
合安定性にすぐれると共に、酵素、抗体等のような生理
活性物質を例えば共有結合にて固定化し、これを緩衝液
、生理食塩水、血清、尿、その他高分子溶質を含む水溶
液等に分散させた場合にも、分散安定性にすぐれるアク
リル酸誘導体−アクリル酸フルオロアルキルエステル誘
導体共重合体粒子からなる生理活性物質固定化用担体粒
子の製造方法に関する。

従来の技術 生理活性物質、例えば、酵素を水不溶性のラテックス粒
子に固定化してなる固定化酵素は、その回収が容易であ
ると共に、酵素の変性や失活が起こり難いために、近年
、工業的な酵素反応に広く用いられている。また、生理
活性物質としてレクチンをラテックス粒子に固定化した
ものは、レクチンの糖類との結合能力を利用して、糖類
の分離や精製に用いられる。更に、生理活性物質として
抗原若しくはハプテン、又は抗体をラテックス粒子に結
合したものは、対応する抗体、又は抗原若しくはハプテ
ンをラテックス凝集反応として検出するための免疫学的
診断試薬として広く実用化されている。

このような生理活性物質固定化用担体粒子は、従来、種
々の単量体を用い、これを乳化共重合させることによっ
て製造されている。

例えば、従来の代表的なラテックスは、乳化剤及び水溶
性ラジカル重合開始剤の存在下に、例えばスチレンのよ
うな水難溶性ラジカル重合性単量体を乳化共重合させて
製造されている。ここに、上記乳化剤は、水難溶性の単
量体をミセル状態にすることによって水に可溶化せしめ
、ミセル内にて単量体をラジカル重合させるものであり
、また、得られる重合体粒子の表面に付着することによ
って、それを水性媒体中で沈降させず、安定に分散させ
ることができるという効果を有するものである。

このような重合体粒子の分散安定化作用については、必
ずしも明らかではないが、一般には、乳化剤の一部が重
合体粒子に吸着されており、残余はラテックス中に遊離
の状態で存在し、このようにラテックス中において、こ
れら重合体粒子に吸着された乳化剤と遊離の乳化剤との
間に吸着脱着平衡が存在し、かかる平衡の結果として、
ラテックスの安定化が達成されるとされている。従って
、このように乳化剤を含むラテックスは、これを緩衝液
や生理食塩水中に分散させたとき、ラテツク　−ス中の
乳化剤の前記したような吸着脱着平衡がくずれる結果、
ラテックスの安定性が損なわれて、重合体粒子間での融
着、凝集が起こり、沈降しやすくなる。また、融着によ
る上記粒子の凝集を防止するために、多官能性の単量体
を乳化剤の存在下に共重合させて、内部凝集力を高める
方法も行なわれているが、若干の改善はみられるものの
、安定性を前記乳化剤の吸着肌着平衡によっているため
に、上記緩衝液等に分散させた場合、粒子の凝集、沈降
を生じることがある。

そこで、近年、上記のような悪影響を示す乳化剤も用い
ずに、乳化剤の不存在下に乳化重合を行なう所謂無乳化
剤重合が注目されているが、乳化剤が存在しないために
、安定に重合反応が進行せずに、重合体粒子の製造時に
凝集を起こすことが多く、重合体粒子を再現性よく安定
に製造することが困難である。

また、このような無乳化剤重合によるラテックスとして
も、ポリスチレンラテックスが最もよく知られているが
、生理食塩水、血清、尿等中でタンパク質等の生体高分
子のラテックスへの非特異吸着が起こり、非特異凝集が
生じて、分散安定性に劣る。特に、この分散の不安定性
は、粒子表面にスベーザ基を結合したり、粒子に生理活
性物質を固定化したとき等に著しい。

更に、マイクロタイター法を用いる免疫学的診断薬にお
いては、抗体若しくは抗原を付けたラテックスの凝集沈
降反応像の大きさを観測することによって、診断がなさ
れる。従って、僅かな自然凝集によっても、その沈降像
が著しく崩れる。

発明が解決しようとする問題点 本発明は上記した問題を解決するためになされたもので
あって、その製造において、乳化剤を用いずとも、乳化
重合時の重合安定性にすぐれると共に、酵素、抗体等の
ような生理活性物質を例えば共有結合にて固定化し、こ
れを緩衝液、生理食塩水、血清、尿、その他高分子溶質
を含む水溶液等に分散させた場合にも、非特異凝集が少
なく、分散安定性にすぐれるアクリル酸誘導体−アクリ
ル酸フルオロアルキルエステル誘導体共重合体粒子から
なり、所要の粒径を有せしめることができる生理活性物
質固定化用担体粒子の製造方法を提供することを目的と
する。

ュ、占をｐンするための 本発明による生理活性物質固定化用担体粒子の製造方法
は、 （ａ）一般式 ％式％ （但し、Ｒ１は水素、低級アルキル基又はカルボキシル
基を示し、Ｒ２は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ１
が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ２はカルボ低級
アルコキシ基であってもよい。）で表わされるアクリル
酸誘導体０．１〜２０重量％と、 （ｂｌ一般式 ％式％ （但し、Ｒ３は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ４は −（ＣＨｚ）□−又は−（ＣＨ２）ＸＣＨ（ＣＨ□）ｙ
−ＯＲ’ （但し、ｍば０〜１２の整数を示し、Ｘ　＋　ｙ　−ｍ
−１であり、Ｒ５は水素又はアセチル基を示す。）を示
し、Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ３を示し
、ｎは０〜１２の整数を示す。）で表わされるアクリル
酸フルオロアルキルエステル誘導体９９．１〜８０重量
％とを水性媒体中で乳化共重合させて、生理活性物質固
定化用担体粒子を製造する方法において、 第１段として、アクリル酸誘導体とアクリル酸フルオロ
アルキルエステル誘導体との単量体混合物の合計量にお
いて、アクリル酸誘導体を０〜１０重量％の範囲として
共重合させ、後続段においては、前段よりも単量体混合
物の合計量におけるアクリル酸誘導体の量を少なくとも
０．５重量％増加させて、最終的に平均粒径０．２〜２
μｍ、表面にカルボキシル基を０．５〜２０μモル／ｒ
ｒｌの密度にて有する水分散型高分子重合体粒子を得る
ことを特徴とする。

本発明において、生理活性物質とは、前述した酵素、補
酵素や、抗体若しくはハプテン、抗原、ホルモン等のよ
うに、生物学的又は生化学的な反応活性を有する有機物
質、通常、高分子量タンパク質を意味する。

本発明においては、水分散型高分子重合体粒子を構成す
る単量体成分の一つであるアクリル酸誘導体は、一般式 ％式％ （但し、Ｒ１は水素、低級アルキル基又はカルボキシル
基を示し、Ｒ２は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ１
が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ２はカルボ低級
アルコキシ基であってもよい。）で表わされる。

上記アクリル酸誘導体としては、例えば、アクリル酸、
メタクリル酸、イタコン酸、クロトン酸、マレイン酸、
フマル酸、モノアルキルマレイン酸、モノアルキルフマ
ル酸、モノアルキルイタコン酸等を好ましい例として挙
げることができるが、特に、アクリル酸、メタクリル酸
及びイタコン酸の１種又は２種以上の混合物が好ましく
用いられる。

これらアクリル酸誘導体は、乳化共重合時の重合安定性
にすぐれ、また、水性媒体中での分散安定性にすぐれる
水分散型高分子重合体粒子を得るために必要な単量体成
分であり、更に、例えば、カルボジイミドやＮ−ヒドロ
キシスクシンイミドにて活性化し、或いはスペーサ基を
結合するためのカルボキシル基を担体粒子に付与するた
めに必要な単量体成分である。

そのために、本発明においては、アクリル酸誘導体は、
反応に用いる全単量体のうち、少なくとも０．１重量％
を必要とする。しかし、過多に共重合単量体成分として
用いるときは、却って重合安定性と、得られる重合体粒
子の分散安定性を損なうので、反応に用いる全単量体に
おいて、２０重量％以下の範囲で用いられる。特に好ま
しい範囲は、０．５〜１０重量％である。

また、水分散型高分子重合体粒子を構成する単量体成分
の他の一つであるアクリル酸フルオロアルキルエステル
誘導体は、一般式 ％式％ （但し、Ｒ３は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ４は
、 −（ＣＨ２）。−又は−（ＣＨ２）　ＸＣＨ（ＣＨ２）
　ｙ＝Ｒ５ （但し、ｍは０〜１２の整数を示し、Ｘ　＋　ｙ　＝　
ｍ−１であり、Ｒ５は水素又はアセチル基を示す。）を
示し、Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ３を示
し、ｎは０〜１２の整数を示す。）で表わされる。

かかるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体は、
好ましくは、一般式 ％式％（１） （但し、Ｒ３、Ｒ５、ｍ及びｎは前記と同じである。）
で表わされ、従って、特に、好ましく用いることができ
るアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体の具体例
として、例えば、 ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ３）Ｃ００ＣＨ２ＣＦ３　　　　　　
　　　　（５１ＣＨ□＝Ｃ（ＣＩ＋３）ＣＯＯＣＨ２（
ＣＦＺ）　２Ｈ（６１ＣＨｚ＝Ｃ（ＣＬ）ＣＯＯＣＨｚ
（ＣＦｚ）Ｊ　　　　　　　　（７）ＣＨｚ＝Ｃ（ＣＨ
３）　Ｃｏｏ　（Ｃ１ｌｚ）　ｚ　（ＣＦ、）　ｅＦ　
　　　　　　（８）等を例示することができる。

これらアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体は、
本発明による生理活性物質固定化用担体粒子において、
長期間にわたる保存安定性や、水性媒体中ですぐれた分
散性を有するために必要であるのみならす、その活性化
時や、或いは活性化担体粒子への生理活性物質の固定化
時の水性分散系において、粒子に安定な分散性を保たし
める効果を有する。

このような効果を有効に得るためには、アクリル酸フル
オロアルキルエステル誘導体は、用いる全単量体におい
て９９．９〜８０重量％、好ましくは９９．５〜９０重
量％の範囲で用いられる。

本発明の方法においては、アクリル酸誘導体とアクリル
酸フルオロアルキルエステル誘導体との共重合体からな
る担体粒子を製造するに際して、アクリル酸誘導体とア
クリル酸フルオロアルキルエステル誘導体とのそれぞれ
の仕込み量を変化させつつ、乳化剤の不存在下で段階的
に水性媒体中で乳化共重合させる。

１’１ 第１段の共重合においては、アクリル酸誘導体とアクリ
ル酸フルオロアルキルエステル誘導体との単量体混合物
の合計量において、アクリル酸誘導体は０〜１０重量％
の範囲で仕込み、第２段以降の後続段においては、前段
よりも単量体混合物の合計量におけるアクリル酸誘導体
量を少なくとも０．５重量％増加し、このようにして、
複数段にて段階的に共重合を行なって、最終的には、粒
子径ｏ、２〜２μｍ、表面にカルボキシル基を０．５〜
２０μモル／イの密度にて有する水分散型高分子重合体
粒子を得る。それぞれの段階で仕込む単量体の比率及び
量を調整することによって、最終的に得られる水分散型
高分子重合体粒子の平均粒径及び粒子表面のカルボキシ
ル基量を所要の範囲にすることができる。

特に、本発明の方法においては、アクリル酸誘導体とア
クリル酸フルオロアルキルエステル誘導体の単量体混合
物は、第１段の重合においては、アクリル酸誘導体を０
〜１０重量％の範囲で含む単量体混合物を用い、第２段
の重合では、アクリル酸誘導体を１〜２０重量％の範囲
で含む単量体混合物を用い、第３段の重合では、アクリ
ル酸誘導体を２重量％以上含む単量体混合物を用い、且
つ、後続段では、前段よりもアクリル酸誘導体量の比率
の多い単量体混合物を用いるのが有利である。最終段で
は、単量体混合物におけるアクリル酸量を５０〜１００
重量％とすることもできる。

本発明の方法においては、各段階にて、単量体混合物は
、−括して反応容器内に加えて、所定時間反応させた後
、後続段の重合を行なってもよく、また、単量体混合物
をある時間にわたって反応容器内に滴下し、滴下終了後
、適宜時間反応混合物を攪拌して熟成し、この後、後続
段の重合のために、単量体混合物を反応容器内に滴下、
共重合させてもよい。

また、本発明においては、予め調製したシード・ラテッ
クスの存在下に上記したような段階的な共重合を行なう
ことによって、重合安定性を一層高めることができると
共に、得られる粒子の最終的な粒径を、より正確に制御
することができる。

上記シード・ラテックスは、通常、アクリル酸誘導体１
〜１０重量％とアクリル酸フルオロアルキルエステル９
９〜９０重量％からなる単量体混合物を乳化共重合させ
ることによって得ることができる。

各段階及びシード・ラテックスの調製のためのアクリル
酸誘導体とアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体
との共重合は、乳化剤の不存在下に重合開始剤を用いて
行なわれる。重合開始剤としては、水溶性ラジカル重合
開始剤が用いられる。

通常、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、過硫酸アン
モニウム等の過硫酸塩や、これら過硫酸塩とチオ硫酸ナ
トリウム、チオ硫酸カリウム、千オ硫酸水素ナトリウム
等のようなチオ硫酸塩、又は亜硫酸ナトリウム、亜硫酸
カリウム、亜硫酸水素ナトリウム等のような亜硫酸塩と
のレドックス系重合開始剤が好ましく用いられるが、こ
れらに限定されるものではない。これら重合開始剤の使
用量は、単量体混合物に対して０．０１〜１重量％の範
囲が好適である。重合の雰囲気も、特に制限されないが
、好ましくは酸素を除いた不活性ガス雰囲気が用いられ
る。また、重合温度は、特に制限されないが、通常、２
０〜１００°Ｃ１好ましくは４０〜９０°Ｃの範囲であ
る。

本発明において、最終的に得られる水分散型高分子重合
体粒子は、その平均粒径が０．２〜２μｍの範囲にある
と共に、その比重は０．９〜１．５の範囲にあることが
好ましい。。

更に、重合体粒子は、水性媒体中で安定した分散状態を
確保し得るように、その表面に０．５〜２０μモル／イ
の密度にてカルボキシル基を有する。

重合体粒子の有するカルボキシル基数が余りに少ないと
きは、粒子が水性媒体中での分散性に劣り、凝集を起こ
しやすいと共に、例えばその活性化に際して、十分な量
のカルボジイミドやＮ−ヒドロキシスクシンイミドを結
合させることができず、延いては、得られる活性化担体
粒子に十分な量の生理活性物質を固定化することができ
ない。他方、重合体粒子の有するカルボキシル基数が余
りに多いときも、水性媒体中にて凝集することがあり、
或いは生理活性物質を固定化したときに、その生化学的
反応を阻害するおそれがある。

両所■四果 以上のように、本発明の方法によれば、アクリル酸誘導
体のアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体に対す
る割合を増やしながら、複数段にわたって段階的に乳化
共重合を行なって、共重合体粒子を得るので、例えば、
診断用ラテックスとして、粒子径が均一であり、更に、
タンパク質の非特異吸着が少なく、且つ、抗体等の固定
化後も、分散安定性にすぐれるラテックス粒子を高い重
合安定性の下で製造することができる。

実施例 以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこ
れら実施例によって何ら制限されるものではない。

実施例１ （シード・ラテックスの調製） アクリル酸５重量％及びメタクリル酸トリフルオロエチ
ル９５重量％からなる単量体混合物１２０ｇを蒸留水３
４０ｇに加え、窒素気流下に６５°Ｃに昇温した後、６
０分間攪拌した。

硫酸銅５水和物１２■を水５ｍｌに溶解させた水溶液と
チオ硫酸ナトリウム５水和物６０■を水５ｍｌに溶解さ
せた水溶液を上記単量体混合物に加え、これに直ちに重
合開始剤として、過硫酸カリウム０．６ｇを蒸留水１０
ｍ１に溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、２０
Ｏｒｐｍにて攪拌しつつ、４時間重合させて、重合率９
９％にて平均粒子径０、２４．０μｍのラテックスを得
た。重合反応後の凝集物は皆無であった。

このラテックスを遠心分離し、蒸留水にて洗浄した後、
再度、蒸留水に固形分濃度５重量％に分散させて、シー
ド・ラテックスとした。

（第１段の重合） 上記ラテックス４３．９　ｇを蒸留水３００ｇに加えた
後、メタクリル酸トリフルオロエチル３７．８ｇ（１０
，０重量％）を加え、７０”Ｃに昇温し、窒素気流下に
４０分間、２２Ｏｒｐｍにて攪拌した。

次いで、過硫酸アンモニウム０．２ｇを蒸留水１Ｏｒｎ
ｌに溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、２２０
　ｒｐｍにて攪拌しつつ、６時間重合させて、重合率９
９％にて平均粒子径０．６５μｍのラテックスを得た。

重合反応後の凝集物は、固形分に対して０．０８重量％
であった。

このラテックスを遠心分離し、蒸留水にて洗浄した後、
再度、蒸留水に固形分濃度５重量％に分散させた。

比較例１ （第１段の重合） 実施例１にて得たシード・ラテックス２８．５　ｇを蒸
留水３４２ｇに加えた後、これにアクリル酸７．１ｇ（
１２，０重量％）とメタクリル酸トリフルオロエチル５
２．１ｇ（８８，０重量％）とを加え、７０°Ｃに昇温
し、窒素気流下に６０分間、２２０ｒｐｍにて攪拌した
。

次いで、過硫酸アンモニウム０．３０　ｇを蒸留水１０
ｍ１に溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、２２
Ｏｒｐｍにて攪拌しつつ、８時間重合させて、重合率９
２％にて平均粒子径０．８８μｍ、表面カルボキシル基
量１２．０μモル／、（のラテックスを得た。しかし、
このラテックスにおいて、は、粒子の粒径分布が広く、
１．１〜１．５μｍの粒径を有する粒子が個数にて５．
０％、０．３８〜０．５６μｍの粒径を有する粒子が３
．２％生成していることが確認された。

比較例２ （第２段の重合） 実施例１にて第１段で得たラテックス１８７ｇを蒸留水
１２０ｇに加えた後、これにアクリル酸０．０４７　ｇ
　　（０，３０重量％）とメタクリル酸トリフルオロエ
チル１５．８ｇ（９９，７重量％）とを加え、７０℃に
昇温し、窒素気流下に６０分間、２２０ｒｐｍにて攪拌
した。

次いで、過硫酸アンモニウム０．０８　ｇを蒸留水１０
ｍ】に溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、２２
０ｒｐｍにて攪拌しつつ、５時間重合させて、重合率９
５％にて粒径分布が０．６０〜２．８μｍにわたるラテ
ックスを得た。重合反応後の凝集物は約４６％であった
。また、ラテックス粒子の表面カルボキシル基量は０．
３８ｇモル／Ｍであった。

実施例− （第２段の重合） 前記実施例の第１段で得たラテックス１８７ｇを蒸留水
１２０ｇに加えた後、これにアクリル酸０．５２ｇ（３
，３重量％）とメタクリル酸トリフルオロエチル１５．
３ｇ（９６，７重量％）とを加え、７０℃に昇温し、窒
素気流下に６０分間、２２０ｒｐｍにて攪拌した。

次いで、過硫酸アンモニウム０．０８　ｇを蒸留水１０
ｍ１に溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、２２
０ｒｐｍにて攪拌しつつ、５時間重合させて、重合率９
６％にて平均粒子径０．８９μｍ、表面カルボキシル基
量５．８μモル／Ｍの粒径の均一なラテックスを得た。

重合反応後の凝集物は、固形分に対して０．９８重量％
であった。

このラテックスを遠心分離し、蒸留水にて洗浄した後、
再度、蒸留水に固形分濃度５重量％に分散させた。

実施例３ 実施例２において得たラテックス２４０ｇを蒸留水６２
．０　ｇに加え、これに更にアクリル酸５．０ｇ（３８
，２重量％）とメタクリル酸トリフルオロエチル８．１
ｇ（６１，８重量％）とを加え、７０℃に昇温し、窒素
気流下に６０分間、２２Ｏｒｐｍにて攪拌した。

次いで、過硫酸アンモニウム０．０６５　ｇを蒸留水１
０ｍ１に溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、２
２０ｒｐｍにて攪拌しつつ、６時間重合させて、重合率
９７％にて平均粒子径１．２０μｍ、表面カルボキシル
基量１８．５μモル／Ｍの粒径の均一なラテックスを得
た。

比較例３ 実施例２にて得たラテックス２４０ｇを蒸留水６２、０
　ｇ、アクリル酸０．３３ｇ（２，５重量％）及びメタ
クリル酸トリフルオロエチル１２．８ｇ（９７，５重量
％）と混合し、６０°Ｃに昇温し、窒素気流下に７０分
間、２２０ｒｐｍにて攪拌した。

次いで、過硫酸アンモニウム０．０６５　ｇを蒸留水１
０ｍ１に溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、２
２０ｒｐｍにて攪拌しつつ、６時間重合させて、重合率
８８％にてラテックスを得た。このラテックスにおいて
は、粒径分布は０．２〜２．１μｍにわたり、また、凝
集物も、固形分に対して３゜２％であった。表面カルボ
キシル基量２７μモル／Ｍであった。

実施例４ （シード・ラテックスの調製） アクリル酸２重量％及びメタクリル酸トリフルオロエチ
ル９８重量％からなる単量体混合物１２６ｇを蒸留水２
９４ｇに加え、７０°Ｃに昇温した後、４５分間攪拌し
た。この後、過硫酸アンモニウム０．６１　ｇを蒸留水
１０ｍ１に薄解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、
２００ｒｐｍにて攪拌しつつ、６時間重合させて、重合
率９９．８％にて平均粒子径０．３７４μｍのラテック
スを得た。重合反応後の凝集物は皆無であった。

このラテックスにその３０ｍ１当りについてＩＮ水酸化
ナトリウム水溶液０．５ｍｌを加え、十分に攪拌した後
、蒸留水にて３回洗浄した。これを蒸留水に固形分濃度
１６．１重量％に分散させて、シード・ラテックスとし
た。

（第１段の重合） 上記シード・ラテックス１８．３　ｇを蒸留水３３５ｇ
に加えた後、７０°Ｃに昇温した。過硫酸アンモニウム
０．４４　ｇを蒸留水１０ｍ１に溶解させた水溶液を窒
素気流下に加え、２２Ｏｒｐｍにて攪拌しつつ、直ちに
アクリル酸０．８７ｇ（１，３重量％）とメタクリル酸
トリフルオロエチル６４．４ｇ（９８，７重量％）との
混合物を滴下速度１８ｇ／時にて加え、滴下終了後、２
０分間攪拌熟成した。

（第２段の重合） 次いで、上記反応混合物にアクリル酸３．５ｇ（１６，
１重量％）とメタクリル酸トリフルオロエチル１８．３
ｇ（８３，９重量％）との混合物を１８ｇ／時にて滴下
し、滴下終了後、直ちに８０°Ｃに昇温しで、２時間熟
成した。

その結果、重合率９８％にて平均粒子径１．２１μｍ、
表面カルボキシル基量１６．９μモル／Ｍの均一なラテ
ックスを得た。重合反応後の凝集物は、固形分に対して
０．４６重量％であった。

このラテックス粒子の内部をＴＥＭにて観察した結果、
粒子表面から表層部は、均一な構造をもたず、ミクロド
メイン構造といわれる相分離構造を有していた。

比較例４ 実施例４において得たシード・ラテックス２１゜３ｇを
蒸留水３３４ｇに加えた後、７０°Ｃに昇温し、窒素気
流下に７０分間、２２０ｒｐｍにて攪拌した。

次いで、過硫酸アンモニウム０．４３　ｇを蒸留水１０
ｍ１に溶解させた水溶液を窒素気流下に加えた後、直ち
にアクリル酸９．８ｇ（１１，３重量％）とメタクリル
酸トリフルオロエチル７６．８ｇ（８８゜７重量％）と
の混合物を滴下速度１８ｇ／時にて加えた。滴下終了後
、直ちに８０℃に昇温し、２時間熟成した。

この結果、重合率９７％にて平均粒子径１．２０７１　
ｍ　、表面カルボキシル基量１６．９　ｔｔモル／♂の
ラテックスを得た。重合反応後の凝集物は、固形分に対
して０．５４重量％であった。

このラテックス粒子の内部をＴＥＭにて観察した結果、
実施例４で得たラテックス粒子のような相分離構造は認
められなかった。

参考例 上記実施例及び比較例で得た固形分濃度５重量％ラテッ
クスのそれぞれ３．０ｍｌ、５■／ｍｌ濃度の水溶性カ
ルボジイミド水溶液０．３ｍｌ、４■／　ｍ　Ｉ　ｔａ
度のウサギＩｇＧ　１．　Ｏｍｌ及びホウ酸ナトリウム
緩衝液（０，０１Ｍ、　ｐＨ８，２）　１．８ｍｌを混
合し、攪拌しながら、１０℃で１７時間反応させた後、
１０％リジン水溶液２．５ｔｎｌを加えて、１０℃で１
時間攪拌して、反応を停止させた。次いで、遠心洗浄を
３回繰り返して、それぞれのラテックス粒子にウサギＩ
ｇＧを固定化した。

それぞれのラテックスを固形分濃度０．２５％に調整し
、その２０μβをホウ酸ナトリウム緩衝液（０，０１Ｍ
、ｐＨ８，２）　　１００μβに加え、撹拌した後、１
０分間静置して、光学顕微鏡にてラテックス粒子の凝集
を調べたところ、比較例２を除いて、いずれのラテック
スも非特異凝集反応は認められなかった。比較例２にお
いては、多数の凝集塊の生成が認められた。

次に、それぞれのラテックスを固形分濃度０．２５％に
調整し、その２０μβをホウ酸ナトリウム緩衝液（０，
ＯＩ　Ｍ、　ｐＨ８，２）にて所定の倍率で希釈したヒ
ト血清１００μρに加え、攪拌した後、１０分間静置し
て、光学顕微鏡にてラテックス粒子の凝集を調べた。結
果を第１表に示す。

尚、本参考例においては、相互に凝集している粒子の割
合が個数にて１０％を越えるとき、有意な非特異凝集反
応が生じたとし、表中には十で表示し、相互に凝集して
いる粒子の割合が個数にて１０％以下のとき、非特異凝
集が生じないとして、−で表示した。

更に、それぞれのラテックスをマイクロタイター板のウ
ェル中でその沈降凝集像を肉眼で観察したところ、本発
明の実施例１〜４によるラテックスでは、いずれも非特
異な沈降凝集像は、ヒト血清希釈倍数１０以下であった
のに対して、比較例１〜４によるラテックス粒子では、
いずれも４０倍以上まで認められた。

特許出願人　日東電気工業株式会社 代理人　弁理士　　牧　野　逸　部

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）（ａ）一般式 Ｒ＾１ＣＨ＝ＣＲ＾２ＣＯＯＨ （但し、Ｒ＾１は水素、低級アルキル基又はカルボキシ
   ル基を示し、Ｒ＾２は水素又は低級アルキル基を示し、
   Ｒ＾１が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ＾２はカ
   ルボ低級アルコキシ基であつてもよい。） で表わされるアクリル酸誘導体０．１〜２０重量％と、 （ｂ）一般式 ＣＨ＿２＝ＣＲ＾３ＣＯＯＲ＾４（ＣＦ＿２）＿ｎＣＦ
   Ａ＿２（但し、Ｒ＾３は水素又は低級アルキル基を示し
   、Ｒ＾４は ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、ｍは０〜１２の整数を示し、ｘ＋ｙ＝ｍ−１で
   あり、Ｒ＾５は水素又はアセチル基を示す。）を示し、
   Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ＿３を示し、
   ｎは０〜１２の整数を示す。） で表わされるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
   体９９．１〜８０重量％とを水性媒体中で乳化剤の不存
   在下に乳化共重合させて、生理活性物質固定化用担体粒
   子を製造する方法において、 第１段として、アクリル酸誘導体とアクリル酸フルオロ
   アルキルエステル誘導体との単量体混合物の合計量にお
   いて、アクリル酸誘導体を０〜１０重量％の範囲として
   共重合させ、後続段においては、前段よりも単量体混合
   物の合計量におけるアクリル酸誘導体の量を少なくとも
   ０．５重量％増加させて、最終的に平均粒径０．２〜２
   μｍ、表面にカルボキシル基を０．５〜２０μモル／ｍ
   ＾２の密度にて有する水分散型高分子重合体粒子を得る
   ことを特徴とする生理活性物質固定化用担体粒子の製造
   方法。
2. （２）アクリル酸誘導体１〜１０重量％とアクリル酸フ
   ルオロアルキルエステル誘導体９９〜９０重量％からな
   る単量体混合物を水性媒体中で乳化共重合させてなるシ
   ード・ラテックスの存在下に、第１段の重合を行なうこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の生理活性物
   質固定化用担体粒子の製造方法。