JPH01168280A - Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はＬ−アラニンデヒドロゲナーゼに関するもので
ある。

〔従来の技術〕

Ｌ−７ラニンデヒドロゲナーゼは次の反応を触媒する酵
素である。

Ｌ−アラニン＋Ｈ２０＋酸化凰ニコチンアミドジヌクレ
オチド＃ピルビン酸十ＮＨ３＋還元型ニコチンアミドジ
ヌクレオチド従来、Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼとし
てはバチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌ　ｌｕｇ　ａｕ
ｂｔｉｌｉ８　）由来のもの（ＢｉｏｃｈｉｍｉｃＩＬ
ａｔ　１３１゜ｐｈｉｓｉａａ　Ａｃｔａ　　９６巻、
２４８頁、１９６５年）、ストレプトミセス・クラブリ
ジエラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｌａｖｕｌｉ
ｇｅｒｕｇ　）由来のもの（Ａｒｃｈ、　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌ、　１２５巻、１３７頁、１９８０年）、サーマ
ス・アラバス゛いる。

〔発明が解決しようとする問題点〕

Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼは、アラニンの生合成、
また、他の酵素と組合せて補酵素の再生糸とすることに
よりバイオリアクター、さらにＷｋＭのアンモニアやＬ
−アラニンの定量等に使用することが期待される。しか
しそれらの目的に使用するためには、従来から知られて
いるＬ−アラニンデヒドロゲナーゼでは、Ｌ−アラニン
に対するｉ値が高く（１〜１０１０１１Ｉ、微量のＬ−
アラニンとの反応速度が遅いという問題があった。また
比較的Ｌ−アラニンに対するｉ値の低い酵素が好熱菌か
ら見つかったが、その反応の至適ＰＨがＰＨＩＯ〜１１
．至適温度が６０〜７０℃と過激なため、エネルギー面
の問題、あるいは共役しつる酵素が非常に限られてしま
うという開−があった。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは上記のような従来の問題を解決すべく、温
度、ＰＨとも穏やかな条件の下で微量のＬ−アラニンと
反応し得るＬ−アラニンデヒドロゲナーゼを鋭意研究し
た。その結果、常温で生育する細菌であるストレプトミ
セス・アベラニクス（３ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ８＆Ｖ輪
１１覧ｎｅｕｓ　）に属する細菌から、Ｌ−アラニンに
対するｉ値が従来の酵素のｋｍ値のΔＯ程度であるＬ−
アラニンデヒドロゲナーゼを、見い出し本発明を完成す
るに至った。すなわち本発明は以下の理化学的性質を有
するし−アラニンデヒドロゲナーゼを提供するものであ
る。

■作用：次式のとおり酸化！ニコチンアミドジヌクレオ
チド（ＮＡＤ）の存在下でＬ −アラニンに作用しピルビン酸を生成 する脱アミノ化反応、また、還元型ニコチンアミドジヌ
クレオチド（ＮＡＤＨ）存在下でピルビン酸に作用して
Ｌ−アラニンを生成するアミノ化反応を触媒する。

ＣＨ３ＣＨＮＨ２ＣＯＯＨ＋Ｈ２０＋ＮＡＤｄＣＨ３Ｃ
ＯＣＯＯＨ十ＮＨ３＋ＮＡＤＨ■基質特異性：酸化型ニ
コチンアミドジヌクレオチドを補酵素としてＬ−アラ ニンに作用し、また、還元型ニ コチンアミドジヌクレオチドを 補酵素としてピルビン酸に作用 する。

■至１！ｉＰＨ：アミノ化反応においてＰＨ７，０〜９
０であり、脱アミノ化反応にお いてＰＨ８，０〜１０．０である。

（４）ＰＨ安定性：５℃以下にて２４時間保存した時、
Ｐ　Ｈ５，０〜１１０ニおいて８０％以上の残存活性を
有する。

■至適温度＝４０〜５５℃である。

■分子ｍ：　２６〜２８万 この値はゲル濾過法により測定した ものである。

また本発明のＬ−アラニンデヒドロゲナーゼが有するそ
の他の理化学的性質は以下の通りである。

■温度安定性：５０’Ｃまで安定である。また、６０℃
２０分の処理で３０％。

７０℃２０分の処理で１００％ 失活する。

■サブユニットの分子ｉ：　４５０００−ｔ−５０００
この値はドデシル硫 酸ナトリウムーポリ アクリルアミドゲル 電気泳動性により測 定したものである。

■サブユニットの数：６個 この値は分子量とサブユ ニットの分子量から導い たものである。

■ｋＩＩｌ値：６．ＯｍＭＮＡＤ′″を含ｔｒｏ、２Ｍ
）リス墳酸バッファー（Ｐ　Ｈ９５）中でＬ−アラニン
の濃度を変え、３０℃で活性を 測定したところＬ−アラニンに対する ｂ値は５．６Ｘ１０””ｍＭである。

■阻害：反応溶液中に、各金属イオンを２　ｍＭとなる
よう加え、活性を測定し無添加 の場合と比較した。本発明のＬ−アラ ニンデヒドロゲナーゼは亜鉛イオンや 鋼イオンによって強く阻害される。

■等電点：等電点亀気泳動により求めた等電点け４．６
〜５．０である。

上記理化学的性質を有する本発明のし一アラニンデヒド
ロゲナーゼと従来から知られているＬ−アラニンデヒド
ロゲナーゼとを比較した結果、本発明の酵素は従来のＬ
−アラニンデヒドロゲナーゼとは理化学的性質を異にす
る新規な酵素であることがわかった。

表１に本発明のＬ−アラニンデヒドロゲナーゼと従来か
ら知られているし一アラニンデヒドロゲーゼの理化学的
性質の比較を示す。

表１におけるバチルス・ズブチリス（Ｂａａｉｌｌｕａ
　５ｕｂｔｉｌｉｓ　）由来のＬ−アラニンデヒドロゲ
ナーゼの性質は、バイオヒミヵエト　バイオフイジカ　
アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｏａ　θｔＢｉｏｐｈｙｓｉ
ｃａ　Ａｃｔａ）の９６巻、２４８頁に１９６５年に掲
載されたものであり、ストレプトミセス・クラプリジェ
ラス（３ｔｒ＠ｐｔｏｍｙａｅａ　ｃｌａｖｕｌｉｇｅ
ｒｕａ　）由来のものの性質とはアーカイブ　オプ　ミ
クロバイオロジー（Ａｒｏｈ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）
の１２５巻、１３７頁に１９８０年に、サーマしてそれ
ぞれ掲載されたものである。表１かられかるように本発
明のし一アラニンデヒドロゲナーゼは、従来から知られ
ていたＬ−アラニンデヒドロゲナーゼとは、分子量、至
適ＰＨ，至適温度あるいはＬ−アラニンに対する廟値の
比較において性質を異にする酵素である。

このＬ−アラニンデヒドロゲナーゼは、Ｌ−アラニンに
ｉ値が５．６　Ｘ　１０−’　ｒａＭ　　ト低く、微量
のＬ−アラニンとも反応が速く進行する。

また常温で生育する菌から得られたにも関わらず、６０
℃、２０分の熱処理によっても３０％程度しか失活しな
いというかなりの耐熱性を持っている。また、ＰＨ５，
０〜１２０という広い範囲のＰＨで安定という優れた性
質を持っていることも判明した。本発明のＬ−アラニン
デヒドロゲナーゼが以上のような基質に対する親和性、
耐熱性、ＰＨ安定性に優れていることは、工業的にある
いは臨床的にこの酵素を用いる際に大変有用な性質であ
る。

本発明のＬ−アラニンデヒドロゲナーゼはストレプトミ
セス・アベラニウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｇ　ａｖ
ａｍｌｌＫｎｅｕａ　）に属する細菌を培養ことによっ
て得られる。ストレプトミセス・アベラニウス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅａ　ａｖａｌｌａｎｅｕｇ　）に属す
る細菌としては、例えばストレプトミセス・アベラニウ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓａｖｅｍｌｌ＆ｎｅｕｓ
　）　Ｒ−２０菌〔微工研菌寄第５４４３号〕が挙げら
れる。

使用する培地としてはぶどう糖等の炭素源。

ポリペプトン等の窒素源及び無機塩類を含有するもので
あれば特に限定されない。培養条件としては、培養温度
が１５〜４０℃の範囲、好ましくは２０〜３５℃の範囲
で培養する方法が好適である。培養時のＰＨ条件は、り
、０〜９゜０の範囲で、好ましくは６．０〜＆０の範囲
が適当である。

培養によって得られた培養物から菌体な分離する方法は
、遠心分離がよい。Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼは、
通常菌体内に含まれているため、該酵素を菌体内から抽
出する必要がある。抽出方法としては、超音波による菌
体破砕、ガラス・ビーズと共に回転させるダイノミル破
砕機による菌体破砕、または、リゾチーム等の酵素やト
ルエン等の有機溶媒による細胞膜の破壊等の方法があげ
られる。

これらの中から適当な方法を選択して菌体から酵素の抽
出を行うことにより、酵素の採取が出来る。

これらの方法で抽出された粗酵素液からＬ−アラニンデ
ヒドロゲナーゼをさらに精製する必要性がある場合は、
通常実施されている一般的な酵素の精製手段である硫酸
アンモニウム沈澱法、イオン交換カラムクロマトグラフ
ィー法、ゲル濾過法、アフィニティ力ラムクロマトグラ
フイ等の方法を適宜組み合わせるか、あるいは繰り返す
ことによって精製を行うことが出来る。

本発明におけるＬ−アラニンデヒドロゲナーゼの酵素活
性測定方法及び酸素活性の表示方法は以下のとおりであ
る。

アミノ化反応の酵素活性測定方法は、光路幅１ａのキュ
ベツト中に０．１Ｍの硫酸アンモニウム、１．０ｍＭ　
　のピルビン酸ナトリウム。

０．２ｍＭのＮＡＤＨを含む０．２Ｍ）リス（ヒドロ千
ジメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液（ＰＨ９，０）を
１ｄ分注し、３０℃で１０分間インキュベイジョンを行
った後、本発明のＬ−アラニンデヒドロゲナーゼを含有
する被検体ｌＯμｌを添加混和する。直ちに３０℃下に
て、ＮＡＤＨの酸化による３　４０　ｎｌ！ｌ　　の吸
光度の減少速度を測定する。アミノ化反応酵素活性値は
３０℃で１分間に１μｍｏｌのＮＡＤＨを消費する酵素
量な１ｕｚ＋ｔｔとして表示する。

また脱アミノ化反応の酵素活性測定方法は、光路幅１ｃ
ＩＬのキュベツト中に０．１ＭのＬ−アラニン、６．０
＋ｔＩＭのＮＡＤ＋を含む０２Ｍトリス（ヒドロキシメ
チル）アミノメタン−塩酸緩衝液（ＰＨ９０）を１ｄ分
注し、３０℃で１０分間インキュベイジョンを行った後
、本発明のし一アラニンデヒドロゲナーゼを含有する被
検体１０μｌを添加混和する。直ちに３０℃下にて、Ｎ
ＡＤ＋　の還元による３４０ｎｍの吸光度の増加速度を
測定する。脱アミノ化反応酵素活性値は３０℃で１分間
に１μｍｏｌのＮ　Ａ　Ｄ”を消費する酵素量をｌ　［
Ｊｎｉｔとして表示する。

〔効　果〕

本発明のＬ−アラニンデヒドロゲナーゼは、Ｌ−アラニ
ンに対するｋｊ値が低く、広い範囲のＰＨで安定であり
、温度安定性にも優れているという特長をもつ。これら
の性質は工業的ニ、また、臨床検査薬としてこの酵素を
使用するに当たって、大変有利なものである。

以下１本発明を実施例によってさらに具体的に説明する
が、本発明はこの実施例に限定されるものではない。

実施例 ０．５重量幅ぶどう糖、０．４重社襲ポリペプトン、０
．５１４１魚肉エキス、０．２重量％食壌、０．０２重
ｉｔ％消泡剤からなる培地（ＰＨ７２）１０００ｍを５
１の三角フラスコに入れ、１２０℃で２０分間オートク
レーブした後、２８℃下でこの培地にストレプトミセス
・アベラネウスＲ−２０菌〔微工研菌寄第５４４３号〕
を植菌する。２８℃で２４時間振とう培養を行った後、
この培養液を、予め上記と同じ組成を有する培地１５０
１を準備してオートクレーブにて滅菌しておいたジャー
・７アーメンターに加えて本培養を行った。

培養条件は２７℃、攪拌２９０　ｒｐｍ、通気１００／
／ｍで、培地のＰＨが８を越えたとき遠心分離機にかけ
て集菌した。こうして得られた菌体４ｋｇを５０％エタ
ノールを含むリン酸縁衝液（ＰＨ７，０）１６Ｊに懸濁
し、その懸濁液をダイノミル細胞破砕機に連続的に通過
させて菌体破砕を行った。破砕の条件は０．１〜α２ｍ
ガラスピース５４０１１７．羽根回転数３０００　ｒｐ
ｍ、送液速度１２０１１４７厘である。直ちにその流出
液中の破砕菌体を連続遠心分離機で除いて上清液を得た
。

この上清液を予め１０　ｍＭ　のリン・酸緩衝液で平衡
化したイオン交換樹脂ＤＥ−５２（商品名　Ｗｈａｔｍ
ａｎ　社製）４／に加え、１時間攪拌した後、２５　ｍ
Ｍ硫酸アンモニウムを含む１０　ｍＭ　　！Ｊン酸緩衝
液で洗浄した。次いで１２０　ｍＭ硫酸アンモニウムを
含む１０　ｍＭリン酸緩衝液で酵素成分を溶出させた。

この酵素液を限外濾過により鋭端し、予め１０　ｍＭ　
　！Ｊン酸緩衝液で平衡化しておいた５１のセファクリ
ルＳ−３００（商品名　ファルマシア社製）のカラムに
通し、ゲル濾過を行い、Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼ
活性画分を得た。

この活性画分Ｗ、１１１℃Ｍのエチレンジアミン四酢酸
ナトリウムを含む３０＋ａＭ）リス（ヒドロキシメチル
）アミノメタン−塩酸緩衝液（ＰＨａｇ）で予め平衡化
しておいたブルーセファロースＣＬ−６Ｂ（商品名　フ
ァルマシア社製）のカラムに通し、Ｌ−アラニンデヒド
ロゲナーゼを＠着させた後、同様の緩衝液で洗浄し、次
いで０．２５　ｍＭのＮＡ　ＤＨを含む同様の０衝液で
Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼを溶出させた。

こうして得られた酵素の純度をドデシル硫酸ナトリウム
存在下でのポリアクリルアミド・ゲル電気泳動によって
調べた結果、−本のバンドのみが観察され、純粋に精製
されたことが確認された。

また、本酵素の分子量を５ｈｏｄｅｘ　Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｗｓｓｏｏｐｃ商品名　昭和電工社製）のプレカラム１
本と、Ｗ８８０３ＦＣ商品名　昭和１１工社製）のカラ
ム２本によるゲル濾過ＨＰＬＣにより測定したところ、
約２６〜２８万であると推定された。さらに、サブユニ
ットの分子量をドデシル硫酸ナトリウム存在下のポリア
クリルアミド・ゲル電気泳動により測定したところ、約
４５０００と推定された。

該分子量及びサブユニットの分子量から、本発明の酵素
が６個のサブユニットから構成される酵素であることが
わかる。

等電点は電気泳動用支持体としてＰＨ３〜ＩＯ用のプレ
コート（商品名　セルパ社製）を用いて測定した結果、
４，８付近であることが推定された。

次にこうして得られた酵素を０．２Ｍ）リス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液（ＰＨ９，０）を
用いて希釈し、溶液１ｍ当りアミノ化反応で１００　ｕ
ｎｉｔ　、説アミン化反応で２　ｕｎｉｔの活性を有す
る精製酵素標品を調整した。

そして該酵素標品を用いて、本酵素の至適ＰＨ，ＰＨ安
定性、至適温度、温度安定性。

Ｌ−アラニンに対するｋａ＋値、阻害剤を調べた。

〔至ＪＰ■） 光路幅ｌ傷のキュベツト中に０．１　Ｍの硫酸アンモニ
ウム、１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウム、０．２ｍＭ
　のＮＡＤＨを含む０．２Ｍクエン酸ナトリワム緩衝液
（Ｐ　Ｈ４，０、５，０）または０．２Ｍリン酸緩衝液
（ＰＨ５，０，６，０，７０）またはトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液（ＰＨ７，０，７
，５，＆Ｏ，＆５゜９．０．９５）または炭酸ナトリウ
ム緩衝液（ＰＨ９，５，１Ｇ、０．１０．５　）　　ま
たはリン酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ１０，５，１１０，
ＩＬＯ）　　または塩化カリウム緩衝液（ＰＨ１２０，
１３，０）を１ｄ分注し、３０℃で１０分間インキュベ
イジョンを行った後、前記酵素標品１ｏμｌを添加混和
する。直ちに３０℃下で３４０　ｎｍの吸光度の減少速
度を測定し、それぞれのアミノ化反応酵素活性値を算出
した。以上の操作の後、最高の酵素活性値を１００％と
した相対活性を算出し、グラフ化して第１図を得た。

光路幅１αのキュベツト中に０．１ＭのＬ　−アラニン
、６．０ｍＭのＮＡＤ＋を含む０．２Ｍクエン酸ナトリ
ウム緩衝液（ＰＨ４，０，５，０）または０．２Ｍリン
酸緩衝液（Ｐ　Ｈ５，０，６，０゜７．０）またはトリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液（Ｐ
Ｈ７，０，７，５゜＆０．８．５．９．０．９５　）　
　または炭酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ９５，１０，０，
１０，５）またはリン酸ナトリウム緩衝液（Ｐ　Ｈ１０
，５，１１，０゜１２０）または塩化カリウム緩衝液（
ＰＨ１２０、１３，０）　ヲｌｄ分注し、３０　”Ｃで
１゜分間インキュベイジョンを行った後、前記酵素標品
１０μｌを添加混和する。直ちに３０℃下で３４０　ｎ
ｍ　の吸光度の増加速度を測定し、それぞれの脱アミノ
化反応酵素活性値を算出した。以上の操作の後、最高の
酵素活性値を１００％とした相対活性を算出し、グラフ
化して第２図を得た。

第１因より明らかなようにアミノ化反応における本酵素
の至適ＰＨは７．０〜９０の範囲にあり、また、第２図
より明らかなように脱アミノ化反応における本酵素の至
適ＰＨは８．０〜１００　の範囲にあることがわかる。

ＣＰＨ安定性〕 ０．２Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ４，０，５゜
０）またはα２Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ５，０，６，０，
７，０）またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン−塩酸緩衝液（ＰＨ７，０，＆０，９０）ｔたは炭酸
ナトリワムａ衝液（Ｐ　Ｈ９，０，１０，０，１１，０
）またはリン酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ１１，０，１１
０）または塩化カリウム緩衝液（Ｐ　Ｈ１１０，１１０
）を０．９１＋１１と前記酵素標品０．１１１ｊを混合
し、４℃で２４時間放置後、３０℃でそれぞれのアミノ
化反応酵素活性値を測定算出した。以上の操作の後、最
高の酵素活性値を１００％とした相対活性を算出し、グ
ラフ化して第３図を得た。第３図より明らかなように、
本酵素はＰＨ５，０〜１２０　の範囲において８０襲以
上の残存活性を有する。

〔至適温度〕

光路幅１ｃＩＬのキュベツト中に０．１　Ｍの硫酸アン
モニウム＋１．０ｍＭ　　のピルビン酸ナトリウム、０
．２ｍＭ　　のＮＡＤＨを含ｔｒＱ、２Ｍ）リス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液（ＰＨ９０）
を１ｄ分注し、前記酵素標品１０μｌを添加混和する。

この反応溶液を３０．４０．５０．６０，７０℃の各温
度で１０分間インキュベイジョンを行った後、直ちにそ
れぞれの温度下で３４０　ｎｍ　の吸光度の減少速度を
測定し、それぞれのアミノ化反応酵素活性値を算出した
。以上の操作の後、最高の酵素活性値を１００％とした
相対活性を算出し、グラフ化して第４図を得た。ｆｉｇ
Ａ図から明らかなように、本酵素の至適温度は４０〜５
５℃にあることがわかる。

〔温度安定性〕

０．２Ｍ）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩
酸緩衝液（Ｐ　Ｈ９，０）　０．９ｍｌと前記酵素標品
０．１ｄを混合し、２０．３０゜、４０．５０．６０．
７０℃の各温度で２０分間維持した後、それぞれの７ミ
ノ化反応酵素活性値を測定算出した。以上の操作後、こ
の温度処理を行わなかった酵素標品の活性値を１００％
として相対活性を算出し、グラフ化して第５図を得た。

第５図より明らかなように、本酵素は５０℃以下で９０
％以上の残存活性を有している。

〔ｉ値〕

光路幅１１のキュベツト中に６．０ｍＭのＮＡＤ＋　を
含み、また０、２５．０．５．０．７５．１．０゜１、
５　、　Ｌ　Ｏ、４，０ｍＭのそれぞれの濃度のし一ア
ラニンを含む０．２Ｍ）リス（ヒドロキシメチル）アミ
・ツメタン−地酸緩ｉｔ　（Ｐ　Ｈ９，０）を１ｄ分注
し、３０℃で１０分間インキュベイジョンを行った後、
前記酵素標品１０μｌを添加混和し、それぞれの脱アミ
ノ化反応酵素活性値を算出し、Ｌｉｎｅｗ＠ａｖｅｒ−
Ｂｕｒｋ逆数プロットよりｉ値を算出した。その結果、
Ｌ−アラニンに対する本酵素のｋｍ値は５．６ｘｌＣｒ
’ｍＭであった。

〔阻害剤〕

光路幅１ｃｍのキュベツト中に０．１Ｍの硫酸アンモニ
ウム１１．０！ＩＩＭのピルビン酸ナトリウム、０．２
ｍＭ０）ＮＡＤＨ，２ｍＭ　の各阻害剤を含む０．２Ｍ
）リス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−Ｊｆ！酸綬
衝液（ＰＨ９，０）を１ｄ分注し、３０℃で１０分間イ
ンキュベイジョンを行った後、前記酵素標品１０μｌを
添加混和し、それぞれのアミノ化反応酵素活性を測定、
算出した。阻害剤を含まない条件で測定した酵素活性を
１００％としてそれぞれの相対活性ｖｂ出して表３を得
た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のＬ−アラニンデヒドロゲナーゼのアミ
ノ化反応におけるＰＨ活性曲線、第２図は本発明のＬ−
アラニンデヒドロゲナ−ゼの脱アミノ化反応におけるＰ
Ｈ活性曲線を示し、第３図は同じ＜ＰＴ（安定性であり
、第４図は温度活性曲線を、第５図は温度安定性をそれ
ぞれ示すものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記の理化学的性質を有するＬ−アラニンデヒドロゲナ
   ーゼ。 （１）作用：酸化型ニコチンアミドジヌクレオチドの存
   在下でＬ−アラニンに作用してピルビン酸を生成する脱
   アミノ化反応、 また、還元型ニコチンアミドジヌクレオチド存在下でピ
   ルビン酸に作用してＬ−アラニンを生成するアミノ化反
   応を触媒する。 （２）基質特異性：酸化型ニコチンアミドジヌクレオチ
   ドを補酵素としてＬ−アラニンに作用し、また、還元型
   ニコチンアミドジヌクレオチドを補酵素としてピルビン
   酸に作用する。 （３）至適ＰＨ：アミノ化反応においてＰＨ７．０〜９
   ．０であり、脱アミノ化反応においてＰＨ８．０〜１０
   ．０である。 （４）ＰＨ安定性：５℃以下にて２４時間保存した時、
   ＰＨ５．０〜１２．０において８０％以上の残存活性を
   有する。 （５）至適温度：４０〜５５℃である。 （６）分子量：２６〜２８万である。