JP7657727B2 - 抗原性多量体呼吸器合胞体ウイルスポリペプチド - Google Patents

Description

本出願では、２０１９年４月２日申請の米国特許仮出願第６２／８２８，３０２号の優先権の利益を主張し、この全体を参照によって組み入れる。

本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットにより電子的に提出された配列表を含み、この全体を参照によって本明細書に組み入れる。２０２０年３月３０日に作成された、このＡＳＣＩＩコピーは、２０２０－０４－０１＿０１１２１－００４２－００ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと名付けられ、５５．９ＫＢのサイズである。

ワクチン学の分野における多くの功績にもかかわらず、生命を脅かす多くの感染性疾患からヒトを防御するための新たな突破口が必要とされている。現在の多くの認可されたワクチンは、弱毒化した生病原体または不活化死滅病原体を生成する１０年以上前の技術に依存しており、これは、固有の安全性への懸念を有し、多くの場合、短期間で弱い免疫応答のみを刺激するため、複数回用量の投与を必要とする。遺伝子および生物化学工学の進歩により、困難な疾患標的に対する治療薬の開発が可能となったが、ワクチン学の分野へのこのような適用は、完全には実現されていない。組換えポリペプチド技術により、現在、最適な抗原のデザインが可能となっている。加えて、ナノ粒子により、最適な抗原提示および標的薬物送達の可能性がますます実証されてきている。複数の抗原が結合したナノ粒子は、分子カーゴの多価ディスプレイによりもたらされる結合親和力、およびナノスケールサイズにより関門をさらに効率的に通過する能力が向上していることが示されている。インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（ＨＡ）ポリペプチドに融合させたヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ／Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）フェリチンナノ粒子により、抗原安定性の向上および免疫原性の増大がマウスインフルエンザモデルにおいて可能となっている（（非特許文献１）を参照）。この融合ポリペプチドは、種々の前臨床モデルにおいて、アジュバントとともに使用した場合、八面体対称性ナノ粒子に自己集合し、三量体ＨＡスパイク８つを提示して頑強な免疫応答をもたらした。

呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、乳児における重篤な呼吸器疾患の主因であり、高齢者における呼吸器疾患の主原因である。数十年にわたる研究にもかかわらず、ワクチンの必要性は、満たされていないままである。ワクチンの必要性は明白であるが、ホルマリン不活化ＲＳＶウイルスを使用する臨床試験により、ＲＳＶ感染後、乳児において疾患がさらに重篤となった１９６０年代に、ＲＳＶワクチンの開発は、行き詰った。（非特許文献２）を参照されたい。さらに最近では、融合後の立体構造内にＲＳＶ Ｆ抗原を使用する臨床プログラムにおいて、成人における十分な有効性を導き出すことができなかった。（非特許文献３）を参照されたい。

ＲＳＶ Ｇは、いくつかのＯ－グリコシル化部位を含む１番目および最後から３番目の分子を有する、ほとんど構造不定のポリペプチドである。ＲＳＶ Ｇの外部ドメインは、哺乳類細胞において発現する場合、質量ではアミノ酸よりもグリカンが多い。また、これらの隣接領域は、保存が不十分であることから、Ｇ高頻度可変領域と名付けられている。対照的に、Ｇの中央領域は、２つの主要なＲＳＶ株であるＡおよびＢ株の間でかなり良好に保存されている。したがって、このドメインは、ＲＳＶ Ｇ中央保存領域（Ｇｃｃ）と呼ばれている。

Ｇｃｃ領域は、疎水性および高プロリン配列により安定化されるループ構造である近位領域、ならびに２つのジスルフィド結合により結びついて、いわゆる「シスチン縄」を形成する２つのらせんからなる遠位領域にさらに細分される。この遠位システイン縄は、ＨＡＥ細胞上のＣＸ３Ｃ受容体に対するウイルスの結合モチーフであると実証されているＣＸ３Ｃモチーフを含む。近位領域は、十分に特性決定された、ＲＳＶ Ｇの中和エピトープである１３１－２Ｇエピトープのみを内部に有する。完全なＲＳＶ Ｇｃｃの構造は存在しないが、２つの構造領域によって、遠位領域のすぐ近くに近位領域を配置する高三次構造が形成されることがデータにより示唆され、したがって、ＮＡｂ１３１－２ＧがＣＸ３Ｃ部位を立体的に遮断することにより、ウイルスのＣＸ３ＣＲ受容体への結合が阻害可能であるという理由が説明される。

Ｇｃｃ単独は、アミノ酸およそ３０個のドメインの小さいサイズを考慮すると、不十分な免疫原である。発明者らは、このドメインをペプチドとして合成し、フェリチンナノ粒子に化学的にコンジュゲートして、バイオコンジュゲートＧｃｃ－ＮＰを形成可能であることをこれまでに実証した。この主要な抗原は、ＨＡＥ中和アッセイにおいて観察されるように、強力な中和応答を誘発する。その上、抗原は、免疫を潜在的に撹乱する高頻度可変領域を欠き、これによりＧ外部ドメインは、不十分なワクチン候補となっている。

ここで、ＲＳＶ Ｇポリペプチドに関与する、一連の新たなポリペプチド、ナノ粒子、組成物、方法および使用を提示する。Ｇｃｃペプチドを多量体抗原として提示するポリペプチドを含む、新規のＲＳＶ Ｇポリペプチドを生成した。ＲＳＶ Ａ株（Ａ２実験室株）およびＲＳＶ Ｂ株（Ｂ１実験室株）の両方由来のＧｃｃポリペプチドを利用して、広範な防御範囲をもたらした。

Ｋａｎｅｋｉｙｏら、Ｎａｔｕｒｅ４９９：１０２～１０６（２０１３） Ｈｕｒｗｉｔｚ（２０１１）ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ１０（１０）：１４１５～１４３３ Ｆａｌｏｏｎら（２０１７）ＪＩＤ２１６：１３６２～１３７０

本開示の目的は、上に考察する利点の１つもしくはそれ以上をもたらすか、または有用な選択肢を公に少なくとももたらすことが可能な組成物、キット、方法および使用を提供することである。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドであって、フェリチンを含まない、ポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、一本鎖である。

一部の実施形態では、Ｇポリペプチドが、粒子（例えば、多量体）として提示されるＧｃｃポリペプチドである、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、ＧｃｃＡ株１つおよびＧｃｃＢ株１つを含む二量体は、ＮまたはＣ末端のｆｏｌｄｏｎタグと遺伝的に融合させる。それが発現する細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）によるリフォールディング時に、ｆｏｌｄｏｎタグが三量体形成して、生じる粒子がＧｃｃポリペプチドの６つのコピー（Ａ株３つおよびＢ株３つ）を提示する。これは本明細書において「ＧｃｃＢ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎ」または「Ｇｃｃ六量体」とも呼ぶ。一部の実施形態では、４つのＧｃｃペプチド（任意の順で、ＮからＣ末端にＢ１、Ａ２、Ｂ１およびＡ２を含む）は、高グルタミン酸リンカーと遺伝的に融合させてＧｃｃペプチドの可溶性四量体（本明細書において「Ｇｃｃ四量体」とも呼ぶ）を生成する。Ｇｃｃ四量体は、多量体形成ドメインを欠き、このため粒子を形成しない。

さらなる実施形態を、次のように本明細書において開示する。
実施形態０１．ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドであって、フェリチンを含まない、ポリペプチド。
実施形態０２．一本鎖である、実施形態１に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態０３．ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む、抗原性ＲＳＶ Ｇ一本鎖ポリペプチド。
実施形態０４．Ｇｃｃ単量体を３、４、５、６、７、８、９または１０個含む、実施形態１～３のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態０５．ａ）Ａ株のＧｃｃ単量体のみ；ｂ）Ｂ株のＧｃｃ単量体のみ；またはｃ）Ａ株およびＢ株のＧｃｃ単量体を含む、実施形態１～４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態０６．Ａ株のＧｃｃ単量体を３つ以上含む、実施形態１～５のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態０７．Ｂ株のＧｃｃ単量体を３つ以上含む、実施形態１～６のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態０８．Ａ株のＧｃｃ単量体を少なくとも１つおよびＢ株のＧｃｃ単量体を少なくとも１つ含む、実施形態１～７のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態０９．三量体、四量体または六量体である、実施形態１～８のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１０．Ａ株のＧｃｃ単量体３つを含む、実施形態１～９のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１１．Ｂ株のＧｃｃ単量体３つを含む、実施形態１～１０のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１２．Ａ株のＧｃｃ単量体３つおよびＢ株のＧｃｃ単量体３つを含む、実施形態１～１１のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１３．多量体形成ドメインを含む、実施形態１～１２のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１４．多量体形成ドメインを１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個含む、実施形態１～１３のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１５．多量体形成ドメインがｆｏｌｄｏｎである、実施形態１３または１４に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１６．多量体形成ドメインが、配列番号９を含む、実施形態１３または１４に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１６．１．多量体形成ドメインが、配列番号１３を含む、実施形態１３または１４に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１７．Ａ株のＧｃｃ単量体２つおよびＢ株のＧｃｃ単量体２つを含む、実施形態１～１６．１のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１８．Ａ株およびＢ株の単量体が、一本鎖において交互に入れ替わる、実施形態１７に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態１９．配列番号４～８のいずれか１つに対する８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～１８のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２０．ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を少なくとも２つおよび多量体形成ドメインを少なくとも１つ；またはＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を少なくとも３つコードするポリヌクレオチドによりコードされる、実施形態１～１９のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２１．ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を少なくとも２つおよび多量体形成ドメインを少なくとも１つコードするポリヌクレオチドによりコードされる、実施形態２０に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２２．Ｇｃｃ単量体の少なくとも１つがＡ株由来であり、Ｇｃｃ単量体の少なくとも１つがＢ株由来である、実施形態２１に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２３．Ａ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃをコードするポリヌクレオチドが：
ａ．配列番号３と同一のアミノ酸配列；または
ｂ．Ｃ末端のＫを有しない配列番号３と同一のアミノ酸配列；または
ｃ．配列番号４のアミノ酸２～４２と同一のアミノ酸配列
をコードする、実施形態２０～２２のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２４．Ｂ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃをコードするポリヌクレオチドが：
ａ．配列番号１０と同一のアミノ酸配列；または
ｂ．配列番号８のアミノ酸１０～５１と同一のアミノ酸配列
をコードする、実施形態２０～２２のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２５．多量体形成ドメインをコードするポリヌクレオチドが：
ａ．配列番号１１；または
ｂ．配列番号７のアミノ酸１３２～１７５
と同一のアミノ酸配列をコードする、実施形態２０～２４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２５．１．配列番号１４に対する８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３、１５、１６．１、１９または２２のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２６．宿主細胞におけるポリヌクレオチドの発現時にＧｃｃ粒子を形成することが可能な、実施形態２０～２５．１のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２７．ポリペプチドが粒子であり、粒子が六量体である、実施形態２６に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２８．六量体が、ＲＳＶ ＧｃｃＡ株単量体３つおよびＲＳＶ ＧｃｃＢ株単量体３つを含む、実施形態２６に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態２９．ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を少なくとも３つコードするポリヌクレオチドによりコードされる、実施形態２０に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態３０．ポリヌクレオチドが、ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体４つをコードする、実施形態２９に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態３１．ポリヌクレオチドが、Ａ株のＧｃｃ単量体２つおよびＢ株のＧｃｃ単量体２つをコードする、実施形態３０に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態３２．ポリヌクレオチドが、Ａ株のＧｃｃ単量体２つおよびＢ株のＧｃｃ単量体２つを交互にコードする、実施形態３１に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態３３．ＲＳＶに対する免疫応答を誘発し、および／またはＲＳＶ感染症から対象を防御することが可能な、実施形態１～３２のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
実施形態３４．薬学的に許容される担体をさらに含む、実施形態１～３３のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドを含む組成物。
実施形態３５．ＲＳＶに対する免疫応答を誘発するか、またはＲＳＶ感染症から対象を防御する方法における使用のための、実施形態１～３４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドまたは組成物。
実施形態３６．実施形態１～３４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドまたは組成物を対象に投与する工程を含む、ＲＳＶに対する免疫応答を誘発するか、またはＲＳＶ感染症から対象を防御する方法。
実施形態３７．対象がヒトである、実施形態３４に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドもしくは組成物、または実施形態３６に記載の方法。
実施形態３８．場合により、ｍＲＮＡである、実施形態１～３３のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドをコードする核酸。

追加の目的および利点は、以下の説明において部分的に記載され、この説明から部分的に明らかとなるか、または実行により知ることができる。目的および利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘する要素および組合せにより、実現および達成される。

前述の概要および以下の発明を実施するための形態の両方は、単なる例示および説明であり、特許請求の範囲の制限ではないことが理解される。

本明細書に組み入れ、本明細書の一部を構成する添付の図面は、いくつかの実施形態を例示し、この説明とともに、本明細書に記載の原理を説明するのに役立つ。

図１Ａ～Ｂは、フェリチンナノ粒子にコンジュゲートするＲＳＶ Ｇ中央ドメインペプチド（Ｇｃｃ）の特性決定を示す図である。（図１Ａ）ＲＳＶ Ｇ中央ドメイン（配列番号１２）をフェリチンナノ粒子へクリックコンジュゲートしてＧｃｃ－ＮＰ抗原が形成されることを示すクーマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。（図１Ｂ）Ｇｃｃ－ＮＰの構造モデルである。 図２Ａ～Ｃは、例となるＲＳＶキメラ抗原を示す図である。（図２Ａ）１つのＢ１株Ｇｃｃペプチド配列をＡ２株Ｇｃｃペプチド配列と融合させた後、三量体形成ｆｏｌｄｏｎタグと融合させた。タンデムＧｃｃペプチドは、ｆｏｌｄｏｎタグにより三量体形成し、これによりＧｃｃペプチドの６つのコピーを提示する、仮説的フォールド構築物のモデル構造を提示する。「Ｂ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎ」とも呼ぶ。（図２Ｂ）それぞれＡおよびＢ株由来のＧｃｃペプチド配列の２つのコピーを四量体キメラポリペプチドの形成において（場合によりＡ２－Ｂ１－Ａ２－Ｂ１の順で）融合させる。Ｂ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎとは異なり、この構築物は、高三次構造へのフォールディングを必要としない。（図２Ｃ）Ａ２株Ｇｃｃペプチドの１つのコピーをＮ末端のα粒子プロトマーに融合させ、一方、Ｂ１株Ｇｃｃペプチドの１つのコピーをＣ末端に融合させる。αプロトマーが、表面上に提示されるＧｃｃペプチドの多数のコピーと粒子核を形成する、仮説的フォールド構造のモデル構造を示す。 図３Ａ～Ｃは、低用量（０．５μｇ）のＲＳＶ Ｇ抗原により誘発された中和抗体力価を示す図である。（図３Ａ）第２の免疫化から２週間後（２ｗｐ２）に採取した血清からＡＦ０３を用いて構築したＧ抗原による免疫化によって誘発されたＲＳＶ Ａ株ＨＡＥ中和力価である。ナイーブ血清および過免疫血清による中和応答を陰性および陽性対照としてそれぞれ示す。各グラフでは、免疫化において使用した免疫原をｘ軸の下に示す。（図３Ｂ）第３の免疫化から２週間後に採取した血清からＡＦ０３を用いて構築したＧ抗原による免疫化によって誘発されたＲＳＶ Ａ株ＨＡＥ中和力価である。対照血清および免疫原を表示する。（図３Ｃ）第３の免疫化から２週間後に採取した血清からＡＦ０３を用いて構築したＧ抗原による免疫化によって誘発されたＲＳＶ Ｂ株ＨＡＥ中和力価である。対照血清および免疫原を表示する。 図３－１の続き。 図４Ａ～Ｂは、ＲＳＶ Ｇ抗原により誘発されたＲＳＶ Ａ２株抗原結合抗体応答を示す図である。（図４Ａ）高用量（５μｇ）のＲＳＶ Ｇキメラ抗原により誘発され、第２の注射から２週間後（淡灰色の箱形）および第３の注射から２週間後（濃灰色の箱形）に測定した、ＧｃｃＡ２株に対して誘発されたＧｃｃ結合抗体応答である。ナイーブマウス血清応答を陰性対照として示す。免疫原は、ｘ軸の下に表示する。（図４Ｂ）低用量（０．５μｇ）のＲＳＶ Ｇキメラ抗原により誘発され、第２の注射から２週間後（淡灰色の箱形）および第３の注射から２週間後（濃灰色の箱形）に測定した、ＧｃｃＡ２株に対して誘発されたＧｃｃ結合抗体応答である。ナイーブマウス血清および免疫原を上記のように表示する。 図５Ａ～Ｂは、ＲＳＶ Ｇ抗原により誘発されたＲＳＶ Ｂ１株抗原結合抗体応答を示す図である。（図５Ａ）高用量（５μｇ）のＲＳＶ Ｇキメラ抗原により誘発され、第２の注射から２週間後（淡灰色の箱形）および第３の注射から２週間後（濃灰色の箱形）に測定した、ＧｃｃＢ１株に対して誘発されたＧｃｃ結合抗体応答である。ナイーブマウス血清応答を陰性対照として示す。免疫原をｘ軸の下に表示する。（図５Ｂ）低用量（０．５μｇ）のＲＳＶ Ｇキメラ抗原により誘発され、第２の注射から２週間後（淡灰色の箱形）および第３の注射から２週間後（濃灰色の箱形）に測定した、ＧｃｃＢ１株に対して誘発されたＧｃｃ結合抗体応答である。ナイーブマウス血清および免疫原を上記のように表示する。 図６Ａは、実施例５に記載する抗体結合実験の略図である。図６Ｂは、参照抗原（円）および配列番号１４の構築物（四角）による実施例５に記載する抗体結合実験の結果を示す図である。破線は、ブランクの基線シグナルを示す。縦軸および横軸の単位は、それぞれＬｏｇＯＤ単位（ＵＤＯ）およびＬｏｇＡＵ／ｍＬである（ＡＵ：任意単位）。

単独で、またはアジュバントとともに別々の分子として投与する場合に抗原性である、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、フェリチンを含まない。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、一本鎖である。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、多量体形成ドメインを含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、粒子／多量体、例えば、三量体、四量体または六量体である。

Ａ．定義
「Ｆポリペプチド」または「ＲＳＶ Ｆポリペプチド」は、ウイルス侵入の間にウイルスエンベロープの宿主細胞膜との融合の駆動を司るＲＳＶのポリペプチドを指す。

「Ｇポリペプチド」または「ＲＳＶ Ｇポリペプチド」は、本明細書において使用する場合、ＲＳＶのヒト気道上皮細胞との会合を司る結合ポリペプチドを指す。例となる野生型ＲＳＶ Ｇアミノ酸配列を配列番号１として提供する。ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、細胞外に存在する外部ドメイン（ＲＳＶ Ｇのアミノ酸およそ６６～２９７（配列番号２））を含む。ＲＳＶ Ｇの外部ドメイン内は、中央保存領域（ＧｃｃまたはＣＣＲ、配列番号１のアミノ酸およそ１５１～１９３）である。ＲＳＶ ＧのＣＣＲは、ＣＸ３Ｃモチーフを含む。ＣＸ３Ｃモチーフは、ＧポリペプチドのＣＸ３ＣＲ１受容体への結合を媒介する。

「プロトマー」は、本明細書において使用する場合、オリゴマーポリペプチドの構造単位を指す。

「フェリチン」または「フェリチンポリペプチド」は、本明細書において使用する場合、ヘリコバクター・ピロリフェリチン（配列番号２０８または２０９）またはパイロコッカス・フリオサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ／Ｐ．ｆｕｒｉｏｓｕｓ）フェリチン、イラクサキンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ／Ｔ．ｎｉ）フェリチンもしくはヒトフェリチンのような別のフェリチンに対する検出可能な配列同一性を有するポリペプチドを指し、これは、例えば、細胞内もしくは組織内に、鉄を貯蔵するか、または血流中に鉄を輸送するのに役立つ。このような例となるフェリチンとしては、重および軽鎖として知られる２つのポリペプチド鎖として生じるものが挙げられる（例えば、イラクサキンウワバおよびヒトフェリチン）。フェリチンは、完全長の天然に存在する配列の断片であり得る。

本明細書において使用する場合、「単量体」は、他の分子と集合していない単一分子を指す。

本明細書において使用する場合、「粒子」または「多量体」は、自己集合した球状形態を指す。例となる「粒子」としては、多量体形成ドメインを含む構築物（例えば、ｆｏｌｄｏｎ）が挙げられる。多量体形成ドメインは、分子の複数のコピーをまとめるように機能し得る。「粒子」および「多量体」は、区別する場合を除いて、本明細書において互換的に使用する。例となる粒子は、「ＧｃｃＢ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎ」であり、これは、六量体を形成する（ＧｃｃＢ１の３つのコピーおよびＧｃｃＡ２の３つのコピー）。本明細書に記載する「Ｇｃｃ四量体」は、自己集合した球状形態ではないため、「粒子／多量体」ではない。

「ＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチド」は、ＲＳＶ Ｇｃｃの単量体および粒子／多量体形態を含む。

「免疫応答」は、本明細書において使用する場合、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージまたは多形核球のような免疫系の細胞の、抗原またはワクチンのような刺激に対する応答を指す。免疫応答は、宿主防御応答に関与する体の任意の細胞を含んでもよく、例えば、インターフェロンまたはサイトカインを分泌する上皮細胞を含む。免疫応答は、先天性および／または適応性免疫応答を含むが、これらに限定されない。本明細書において使用する場合、「防御免疫応答」は、感染症から対象を防御する（例えば、感染症を予防するか、または感染症と関連する疾患の発症を予防する）免疫応答を指す。免疫応答を測定する方法は、当技術分野において周知であり、例えば、リンパ球（例えば、ＢまたはＴ細胞）の増殖および／または活性、サイトカインまたはケモカインの分泌、炎症、抗体産生等の測定による方法を含む。「抗体応答」は、抗体が産生される免疫応答である。

本明細書において使用する場合、「抗原」は、免疫応答を誘発する物質、および／または（例えば、ＭＨＣ分子により提示される場合）Ｔ細胞受容体により、もしくは生物に曝露もしくは投与する場合、抗体（例えば、Ｂ細胞により産生される）に、結合する物質を指す。一部の実施形態では、抗原は、生物において液性応答（例えば、抗原特異的抗体の産生を含む）を誘発する。あるいは、または加えて、一部の実施形態では、抗原は、生物において細胞性応答（例えば、受容体が抗原と特異的に相互作用するＴ細胞に関与する）を誘発する。特定の抗原は、標的生物（例えば、マウス、ウサギ、霊長類、ヒト）の１つまたはいくつかのメンバーにおいて免疫応答を誘発し得るが、標的生物種のすべてのメンバーにおいてではない。一部の実施形態では、抗原は、標的生物種の少なくとも約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のメンバーにおいて免疫応答を誘発する。一部の実施形態では、抗原は、抗体および／またはＴ細胞受容体に結合し、生物において特定の生理学的応答を誘発する場合もあれば、しない場合もある。一部の実施形態では、例えば、抗原は、このような相互作用がｉｎ ｖｉｖｏで生じるか否かにかかわらず、抗体および／またはＴ細胞受容体にｉｎ ｖｉｔｒｏで結合する。一部の実施形態では、抗原は、異種免疫原により誘導されるものを含む、特異的な液性または細胞性免疫の産物と反応する。

「アジュバント」は、本明細書において使用する場合、抗原に対する免疫応答を非特異的に増強する物質または溶媒を指す。アジュバントは、抗原が吸着する鉱物（例えば、ミョウバン、水酸化アルミニウムまたはリン酸塩）の懸濁液；抗原溶液を鉱物油または水中に乳化する油中水または水中油乳濁液（例えば、フロイント不完全アジュバント）を含み得るが、これらに限定されない。抗原性をさらに増強させるために、死滅させたマイコバクテリアを含むこともある（例えば、フロイント完全アジュバント）。また、免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧモチーフ）をアジュバントとして使用することができる（例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；第６，２０７，６４６号；第６，２１４，８０６号；第６，２１８，３７１号；第６，２３９，１１６号；第６，３３９，０６８号；第６，４０６，７０５号；および第６，４２９，１９９号を参照）。また、アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストのような生体分子および共刺激分子を含み得る。アジュバントは、組成物中に別々の分子として投与するか、または粒子に共有結合（コンジュゲート）させ得る。

「抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド」は、ＲＳＶについて分子が抗原性である、十分な長さのＲＳＶ Ｇアミノ酸配列の全部または一部を含む、ポリペプチドを指すために本明細書において使用する。抗原性は、α配列のような異種配列をさらに含む構築物の一部である、ＲＳＶ配列の特徴であり得る。つまり、ＲＳＶ配列が、異種配列をさらに含む構築物の一部である場合、構築物は、異種配列を有しないＲＳＶ配列がそのように役立ち得るかどうかにかかわらず、抗ＲＳＶ抗体を産生させる抗原として役立つことができれば十分である。

「α配列」は、配列番号９の配列である。

一部の実施形態では、「抗原性ＲＳＶ Ｇαポリペプチド」は、配列番号６に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の同一性を有するポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇαポリペプチドは、ＲＳＶ Ｇｃｃおよび配列番号９、またはＲＳＶ Ｇｃｃの多量体形成が可能な配列番号９の断片を含む、一本鎖ポリペプチドを含む。抗原性ＲＳＶ Ｇαポリペプチドは、免疫刺激部分をさらに含み得る。抗原性は、より大きな構築物の一部である、ＲＳＶ Ｇ配列の特徴であり得る。つまり、構築物は、α（および該当する場合、免疫刺激部分）を有しないＲＳＶ Ｇポリペプチドがそのように役立ち得るかどうかにかかわらず、ＲＳＶ Ｇポリペプチドに対する抗原として役立つことができれば十分である。しかし、明確化のために言えば、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、α配列を含む必要はない。「抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド」は、抗原性ＲＳＶ Ｇαポリペプチドまたはα配列を含まない抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドのいずれかであり得るポリペプチドを指すために本明細書において使用する。

本明細書において使用する場合、「対象」は、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「対象」は、ヒトを指す。一部の実施形態では、「対象」は、非ヒト動物を指す。一部の実施形態では、対象は、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫および／または蠕虫を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態では、非ヒト対象は、哺乳類（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類および／またはブタ）である。一部の実施形態では、対象は、遺伝子導入動物、遺伝子改変動物、および／またはクローンであり得る。本発明の特定の実施形態では、対象は、成人、青少年または乳児である。一部の実施形態では、「個人」または「患者」の用語を使用し、「対象」と互換的であることを意図する。

本明細書において使用する場合、「ワクチン接種」または「ワクチン接種する」の用語は、例えば、疾患を引き起こす物質に対する免疫応答の発生を意図する組成物の投与を指す。ワクチン接種では、疾患を引き起こす物質への曝露および／または１つもしくはそれ以上の症候の発生の前、間および／または後に、一部の実施形態では、物質への曝露の前、間および／または直後に、投与することができる。一部の実施形態では、ワクチン接種は、ワクチン接種組成物の、適切に時間間隔をあけた複数回の投与を含む。

本開示では、所与の核酸配列またはアミノ酸配列のそれぞれ（参照配列）に対する、ある程度の同一性を有する配列を記載する。

２つの核酸配列間の「配列同一性」は、配列間で同一のヌクレオチドの百分率を示す。２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、配列間で同一のアミノ酸の百分率を示す。

「％同一」、「％同一性」の用語または類似の用語は、特に、比較する配列間の最適アラインメントにおいて同一のヌクレオチドまたはアミノ酸の百分率を指すことを意図する。この百分率は、純粋に統計学的であり、２つの配列間の差は、必ずしもそうではないが、比較する配列の全長にわたってランダムに分布し得る。２つの配列の比較は、最適アラインメント後、セグメントまたは「比較ウインドウ」について、対応する配列の局所領域を同定するために、この配列を比較することにより通常行う。比較のための最適アラインメントは、手動で、またはＳｍｉｔｈ ａｎｄＷａｔｅｒｍａｎ，１９８１，ＡｄｓＡｐｐ．Ｍａｔｈ．２，４８２による局所相同性アルゴリズムを用いて、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄＷｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３による局所相同性アルゴリズムを用いて、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄＬｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．ＮａｔｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８，２４４４による類似性検索アルゴリズムを用いて、もしくはこれらのアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ社、５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．によるＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ ＮおよびＴＦＡＳＴＡ）を用いて実行し得る。

同一性の百分率は、比較する配列が対応する同一位置の数を決定し、この数を比較する位置の数（例えば、参照配列における位置の数）で割り、この結果に１００を掛けることにより得る。

一部の実施形態では、同一性の程度は、参照配列の全長の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または約１００％の領域について示す。例えば、参照核酸配列が２００ヌクレオチドからなる場合、同一性の程度は、少なくとも約１００、少なくとも約１２０、少なくとも約１４０、少なくとも約１６０、少なくとも約１８０または約２００ヌクレオチドについて、一部の実施形態では、連続するヌクレオチドにおいて、示す。一部の実施形態では、同一性の程度は、参照配列の全長について示す。

所与の核酸配列またはアミノ酸配列のそれぞれに対する特定の程度の同一性を有する核酸配列またはアミノ酸配列は、これらの所与の配列の少なくとも１つの機能特性を有し、例えば、および一部の場合では、これらの所与の配列と機能的に等価であり得る。１つの重要な特性は、特に、対象に投与する場合、サイトカインとして作用する能力を含む。一部の実施形態では、所与の核酸配列またはアミノ酸配列に対する特定の程度の同一性を有する核酸配列またはアミノ酸配列は、これらの所与の配列と機能的に等価である。

本明細書において使用する場合、「キット」の用語は、１つまたはそれ以上の化合物または組成物のような関連化合物、および溶剤、溶液、緩衝液、説明書または乾燥剤のような１つまたはそれ以上の関連物質のパッケージングされたセットを指す。

Ｂ．抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド
ＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドを３つ以上含むＲＳＶ Ｇポリペプチドを本明細書において提供する。一部の実施形態では、Ｇｃｃポリペプチドは、Ｇｃｃ単量体である。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含むＲＳＶ Ｇポリペプチドであって、フェリチンを含まない、ポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、一本鎖として提供し、この場合、一本鎖は、ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む。ＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチド／単量体は、ＲＳＶ Ｇｃｃの全配列またはＲＳＶ Ｇｃｃの一部を含み得る。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃは、最後のアミノ酸１つ、２つまたは３つを欠いている。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃは、最後のアミノ酸（例えば、配列番号３のＮ末端のＫ）を欠いている。ＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、例えば、配列番号３のアミノ酸番号７におけるＮからＳへの置換のように、野生型配列（配列番号３）と比較して修飾を含み得る。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、ＲＳＶ Ａ株（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ２７０２２．１；配列番号１）に由来する。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、ＲＳＶ Ｂ株（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｏ３６６３３．１；配列番号２２６）に由来する。一部の実施形態では、Ａ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、Ａ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸を含み、この場合、配列番号３の末端Ｋは、存在しない。一部の実施形態では、Ａ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸２～４２を含む。一部の実施形態では、Ｂ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、Ｂ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸１０～５１を含む。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃポリペプチドは、Ｇｃｃ領域（ＲＳＶ Ｇ（配列番号１）のアミノ酸１５１～１９３）の全部または一部を含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、ＣＸ３Ｃモチーフを含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、ＣＸ３ＣＲ１受容体に結合する。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、グリコシル化されない。例えば、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、ＮまたはＳ／Ｔ残基の切断または変異（例えば、それぞれＱまたはＡへ）のいずれか、またはこれらの組合せのため、ＮＸＳ／ＴＸグリコシル化部位を欠き得る。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ単量体を３、４、５、６、７、８、９または１０個含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ単量体を１～２、１～５、１～１０、１～２０、１～２５、１～３０、１～４０、１～５０、１～６０、１～７０、１～８０、１～９０、１～１００または１～１２０個含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ単量体３つを含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ単量体６つを含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ単量体１２０個を含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株のＧｃｃ単量体のみを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｂ株のＧｃｃ単量体のみを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株およびＢ株のＧｃｃ単量体を含む。

一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株のＧｃｃ単量体を３つ以上含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｂ株のＧｃｃ単量体を３つ以上含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株のＧｃｃ単量体を少なくとも１つおよびＢ株のＧｃｃ単量体を少なくとも１つ含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株のＧｃｃ単量体１つおよびＢ株のＧｃｃ単量体１つを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、ともにＡ株由来のＧｃｃ単量体２つを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、ともにＢ株由来のＧｃｃ単量体２つを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、一本鎖である。

一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株のＧｃｃ単量体３つを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｂ株のＧｃｃ単量体３つを含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株のＧｃｃ単量体３つおよびＢ株のＧｃｃ単量体３つを含む。

一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、三量体、四量体または六量体である。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、四量体である。一部の実施形態では、三量体、四量体または六量体は、一本鎖ポリペプチドである。一部の実施形態では、三量体、四量体または六量体は、粒子を形成しない一本鎖ポリペプチドである。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ単量体４つを含む四量体である。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株の単量体２つおよびＢ株の単量体２つのＧｃｃ単量体４つを含む四量体である。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株の単量体２つおよびＢ株の単量体２つのＧｃｃ単量体４つを含む四量体であり、この場合、ポリペプチドは、一本鎖であり、粒子を形成しない。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸を含む四量体である。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列と８５％、９０％、９５％または９９％同一のアミノ酸配列を含む四量体である。

１．ＲＳＶ Ｇ粒子
一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチド粒子または多量体を提供する。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチド粒子または多量体を提供し、この場合、粒子は、フェリチンを含まない。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチド一本鎖粒子または多量体を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＳＶ Ｇポリペプチドのいずれか、および多量体形成ドメインを含む、ＲＳＶ Ｇポリペプチド粒子または多量体を提供する。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇ粒子は、多量体形成ドメインを１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、多量体形成ドメインを１～２、１～５、１～１０、１～２０、１～２５、１～３０、１～４０、１～５０、１～６０、１～７０、１～８０、１～９０、１～１００または１～１２０個含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ多量体形成ドメイン３つを含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ多量体形成ドメイン６つを含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ｇｃｃ多量体形成ドメイン１２０個を含む。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇ粒子は、多量体形成ドメイン１つを含む。一部の実施形態では、多量体形成ドメインは、自己集合する、当技術分野において公知の任意のドメインである。一部の実施形態では、多量体形成ドメインは、ｆｏｌｄｏｎドメインである。一部の実施形態では、配列番号１１または配列番号１１の一部を含むｆｏｌｄｏｎドメインは、自己集合可能である。一部の実施形態では、ｆｏｌｄｏｎドメインは、配列番号１１と８０％、９０％、９５％または９９％同一の配列を含み、この場合、ｆｏｌｄｏｎは、自己集合可能である。配列番号１１の例となる一部は、配列番号１３として提供する。一部の実施形態では、ｆｏｌｄｏｎドメインは、配列番号１３と８０％、９０％、９５％または９９％同一の配列を含み、この場合、ｆｏｌｄｏｎは、自己集合可能である。一部の実施形態では、ｆｏｌｄｏｎドメインは、配列番号１３の配列を含むか、またはこれからなる。

一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸（配列番号１１のｆｏｌｄｏｎを有するＢ１－Ａ２ｆｏｌｄｏｎ）に対する少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号４の配列を含む。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号１４のアミノ酸（配列番号１３のｆｏｌｄｏｎを有するＢ１－Ａ２ｆｏｌｄｏｎ）に対する少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号１４の配列を含む。

一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号７のアミノ酸（Ａ２－Ａ２ｆｏｌｄｏｎ）に対する少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号７の配列を含む。

一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸（Ｂ１－Ｂ１ｆｏｌｄｏｎ）に対する少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号８の配列を含む。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇ粒子は、抗原性ＲＳＶ Ｇα粒子である。例えば、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、Ａ株、Ｂ株またはＡおよびＢの両株由来のＲＳＶ Ｇｃｃを含む本明細書に記載の一本鎖ポリペプチド、ならびに完全または部分的α配列を含み得る。一部の実施形態では、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号６（α粒子）に対する少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇポリペプチドは、配列番号６の配列を含む。一部の実施形態では、抗原性α粒子は、自己集合可能である。一部の実施形態では、抗原性α粒子は、ＲＳＶ Ｇｃｃ、および配列番号９と８０％、９０％、９５％または９９％同一の配列を含み、この場合、粒子は、自己集合可能である。一部の実施形態では、抗原性α粒子は、１粒子あたり６０コピーの粒子プロトマーを提示し、この場合、２つのＧｃｃ（場合により、Ａ株１つおよびＢ株１つ）は、多量体形成することによりＧｃｃおよそ１２０個が提示され、免疫認識のために利用可能となる。

一部の実施形態では、ＲＳＶポリペプチドは、一本鎖構築物であり、例えば、単一ポリペプチドとして表す。

一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃは、野生型配列と比較して単一アミノ酸の置換を含む。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｇｃｃは、野生型配列と比較して２つ以上の単一アミノ酸の置換、例えば、２、３、４、５または６個の置換を含む。例となる野生型配列は、配列番号３である。

Ｃ．リンカー
一部の実施形態では、存在する場合、リンカーは、ＲＳＶ単量体および／または多量体形成ドメインのアミノ酸配列を分離する。任意のリンカーを使用し得る。一部の実施形態では、リンカーは、抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドの発現を融合ポリペプチドとして促進し得る（例えば、単一オープンリーディングフレームから）ペプチドリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン－セリンリンカーである。一部の実施形態では、グリシン－セリンリンカーは、ＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号１５）、２ＸＧＧＧＳ（すなわち、ＧＧＧＳＧＧＧＳ）（配列番号１６）または５ＸＧＧＧＳ（配列番号１７）である。

一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸約２～４、２～６、２～８、２～１０、２～１２または２～１４個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、少なくともアミノ酸１５個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、少なくともアミノ酸２５個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、少なくともアミノ酸３０個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、少なくともアミノ酸３５個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、少なくともアミノ酸４０個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸６０個以下の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸５０個以下の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、アミノ酸約１６、２８、４０、４６または４７個の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、可動性である。

一部の実施形態では、リンカーは、グリシン（Ｇ）および／またはセリン（Ｓ）のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、アスパラギン（Ｎ）および／またはアラニン（Ａ）のアミノ酸、ならびに場合により、上に考察するようにシステインを含むか、またはこれらからなる。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２２２に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧ（配列番号２２０）、ＧＧＳＧＳＧＳＮＳＳＡＳＳＧＡＳＳＧＧＡＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号２２１）、ＧＧＳＧＳＡＳＳＧＡＳＡＳＧＳＳＮＧＳＧＳＧＳＧＳＮＳＳＡＳＳＧＡＳＳＧＧＡＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号２２２）またはＧＳを含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＦＲ１（配列番号２２３）またはＦＲ２（配列番号２２４）を含む。

一部の実施形態では、構築物は、リンカーを含まない。一部の実施形態では、構築物は、リンカー１つを含む。一部の実施形態では、構築物は、リンカーを２つまたは３つ以上含む。一部の実施形態では、構築物は、存在する場合、リンカーを各単量体間ならびに単量体および多量体形成ドメインの間に含む。

Ｄ．組成物；ワクチン接種のための使用および方法
一部の実施形態では、本発明では、ＲＳＶによる感染症に対して対象を免疫する方法を提供する。本発明では、対象においてＲＳＶに対する免疫応答を誘発する方法をさらに提供する。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載の抗原性ＲＳＶポリペプチド、抗原性ＲＳＶ Ｇ粒子または抗原性ＲＳＶα粒子を対象に投与する工程を含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドまたは粒子のいずれか１つまたはそれ以上、および薬学的に許容される溶媒、アジュバントまたは賦形剤を含む組成物を提供する。

一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、粒子または組成物は、ヒトのような対象に投与して、ＲＳＶにより生じる感染症に対して免疫する。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、ナノ粒子または組成物は、ヒトのような対象に投与して、ＲＳＶによる将来の感染症に対する防御免疫応答を発生させる。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、ナノ粒子または組成物のいずれか１つまたはそれ以上は、ＲＳＶにより生じる感染症に対する免疫における使用のために提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド、ナノ粒子または組成物のいずれか１つまたはそれ以上は、ＲＳＶによる将来の感染症に対する防御免疫応答の発生における使用のために提供する。一部の実施形態では、防御免疫応答により、ＲＳＶによる感染症、肺炎、細気管支炎または喘息の罹患率が低下する。

一部の実施形態では、組成物は、本明細書に記載のＲＳＶ Ｇポリペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、本明細書に記載のＲＳＶ Ｇ粒子を含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＳＶ Ｇポリペプチドを含む組成物は、後融合ＲＳＶ ＦポリペプチドまたはＧｃｃ－ＮＰによる免疫化と比較して、ＲＳＶに対する優れた中和応答を誘発する。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＳＶ Ｇポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＲＳＶ Ｇポリペプチドを含むポリペプチドまたは粒子）による免疫化により、Ｇｃｃ－ＮＰによる免疫化と比較して、ＲＳＶ Ｇに対する高力価の抗体が誘発される。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＳＶ Ｇポリペプチドによる免疫化により、ＧｃｃまたはＧｃｃ－ＮＰの単量体１つまたは２つによる免疫化と比較して、ＲＳＶ Ｇに対する総抗体が高い割合で誘発される。本明細書に記載のＲＳＶ抗原による免疫化によって、後融合ＲＳＶ Ｆによる免疫化と比較して、ＲＳＶに対するより良い防御がもたらされ得る。

一部の実施形態では、Ｇｃｃ単量体を３つ以上含むＲＳＶ Ｇポリペプチド、および本明細書に記載のＧｃｃ粒子を含む組成物は、ＲＳＶに対する中和応答を誘発する。

一部の実施形態では、Ｇｃｃ単量体を３つ以上含むＲＳＶ Ｇポリペプチド、および本明細書に記載のＧｃｃ粒子を含む組成物は、ＲＳＶに対する防御の向上、例えば、Ｇｃｃ単量体を３つ以上含まない組成物よりも高い中和力価をもたらす。

１．対象
一部の実施形態では、対象は、哺乳類である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。

一部の実施形態では、対象は、成人（１８歳以上）である。一部の実施形態では、対象は、小児または青少年（１８歳未満）である。一部の実施形態では、対象は、高齢者（６１歳以上）である。一部の実施形態では、対象は、非高齢の成人（１８歳以上および６０歳以下）である。

一部の実施形態では、２回以上の投与により組成物を対象に投与する。一部の実施形態では、ブースター投与により、免疫応答が向上する。

一部の実施形態では、抗原性ポリペプチドのいずれか１つもしくはそれ以上、または本明細書に記載の組成物は、霊長類（例えば、サル（例えば、アカゲザルまたはカニクイザルのようなマカク）または類人猿のような非ヒト霊長類）のような哺乳類、げっ歯類（例えば、マウスまたはラット）または家畜哺乳類（例えば、イヌ、ウサギ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ウシ、ヤギ、ラクダまたはロバ）における使用のためのものである。一部の実施形態では、抗原性ポリペプチドのいずれか１つもしくはそれ以上、または本明細書に記載の組成物は、家禽（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ、ホロホロチョウまたはハクチョウ）のような鳥類における使用のためのものである。

２．アジュバント
本明細書に記載するように、アジュバントはまた、本明細書に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドおよび粒子とともに対象に投与し得る。一部の実施形態では、ポリペプチドおよび粒子とのアジュバントの投与により、アジュバントを用いないポリペプチドまたは粒子の単独投与と比較して、対象においてＲＳＶポリペプチドに対する高力価の抗体がもたらされる。アジュバントは、抗原性ポリペプチドに対する免疫応答をより早期に、より強力に、またはより持続的に促進し得る。

一部の実施形態では、組成物は、アジュバントを１つ含む。一部の実施形態では、組成物は、アジュバントを２つ以上含む。一部の実施形態では、組成物は、アジュバントを含まない。

一部の実施形態では、アジュバントは、アルミニウムを含む。一部の実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウムである。一部の実施形態では、アジュバントは、ミョウバン（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ’８５ ２％；Ｂｒｅｎｎｔａｇ社－Ｃａｔ＃２１６４５－５１－２）である。

一部の実施形態では、アジュバントは、有機アジュバントである。一部の実施形態では、アジュバントは、油性アジュバントである。一部の実施形態では、アジュバントは、水中油ナノ乳濁液を含む。

一部の実施形態では、アジュバントは、スクアレンを含む。一部の実施形態では、スクアレンを含むアジュバントは、Ｒｉｂｉ（Ｓｉｇｍａ ａｄｊｕｖａｎｔ ｓｙｓｔｅｍ社Ｃａｔ＃Ｓ６３２２－１ｖｌ）、Ａｄｄａｖａｘ（商標）ＭＦ５９、ＡＳ０３またはＡＦ０３である（米国特許第９７０３０９５号を参照）。一部の実施形態では、スクアレンを含むアジュバントは、ナノ乳濁液である。

一部の実施形態では、アジュバントは、ポリアクリル酸ポリマー（ＰＡＡ）を含む。一部の実施形態では、ＰＡＡを含むアジュバントは、ＳＰＡ０９である（ＷＯ第２０１７２１８８１９号を参照）。

一部の実施形態では、アジュバントは、非代謝型油を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）である。

一部の実施形態では、アジュバントは、非代謝型油および死滅させた結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）である。

一部の実施形態では、アジュバントは、リポ多糖である。一部の実施形態では、アジュバントは、モノホスホリルＡ（ＭＰＬまたはＭＰＬＡ）である。

３．医薬組成物
種々の実施形態では、本明細書に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドを含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、医薬組成物は、病原体に対する防御免疫応答のような免疫応答を誘発することが可能な免疫原性組成物（例えば、ワクチン）である。

例えば、一部の実施形態では、医薬組成物は、次：（１）ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド；（２）抗原性αポリペプチド；（３）抗原性ＲＳＶ Ｇ粒子；または（４）抗原性ＲＳＶ粒子もしくは非粒子三量体、四量体もしくは六量体の１つまたはそれ以上を含み得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドを含む。

一部の実施形態では、本発明において、本明細書に記載の抗原性ポリペプチドと関連する抗体または他の物質を含む医薬組成物を提供する。実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗原性ポリペプチドに結合および／または競合する抗体を含む。あるいは、抗体は、本明細書に記載の抗原性ポリペプチドのＲＳＶポリペプチド成分を含むウイルス粒子を認識し得る。

一部の実施形態では、本明細書に記載する医薬組成物は、単独で、または免疫応答を増強する物質の１つまたはそれ以上、例えば、上記のアジュバントと組み合わせて投与する。一部の実施形態では、医薬組成物は、上記のアジュバントをさらに含む。

一部の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含む。本明細書において使用する場合、「担体」の用語は、希釈剤、アジュバント、賦形剤または医薬組成物をともに投与する溶媒を指す。例となる実施形態では、担体は、例えば、水および油のような滅菌液を含んでもよく、例えば、ピーナツ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油等のような石油、動物、植物または合成起源の油を含む。一部の実施形態では、担体は、１つまたはそれ以上の固体成分であるか、またはこれを含む。また、薬学的に許容される担体は、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、グリセリン、エタノールおよびこれらの組合せを含むが、これらに限定されない。本明細書において使用する場合、賦形剤は、例えば、所望の粘稠性または安定化作用をもたらすか、またはこれに寄与するために、医薬組成物に含み得る任意の非治療薬である。適する医薬賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥粉ミルク、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノール等を含むが、これらに限定されない。種々の実施形態では、医薬組成物は、無菌である。

一部の実施形態では、医薬組成物は、少量の湿潤剤もしくは乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、安定化剤、緩衝液または保存剤のような多様な添加剤のいずれかを含み得る。加えて、補助剤、安定化剤、増粘剤、平滑剤および着色剤を含み得る。

種々の実施形態では、医薬組成物は、所望の任意の投与方法に適するように製剤化し得る。例えば、医薬組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、液滴、錠剤、丸剤、小丸剤、カプセル、液体を含むカプセル、ゼラチンカプセル、粉剤、持続放出製剤、坐剤、乳濁液、エアロゾル、スプレー、懸濁液、凍結乾燥粉末、凍結懸濁液、乾燥粉末の形態、または使用に適する他の任意の形態をとり得る。医薬品の製剤化および製造における概論は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ ｅｄ．，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９５に見出すことができ；参照によって本明細書に組み入れる。

医薬組成物は、任意の投与経路を介して投与することができる。投与経路は、例えば、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、粘膜、硬膜外、舌下、鼻腔内、脳内、膣内、経皮、直腸、気管内注入、気管支注入、吸入によるか、または局所的投与経路を含む。投与は、局所的または全身的であり得る。一部の実施形態では、投与は、経口的に行う。別の実施形態では、投与は、非経口注射による。投与方法は、医師の判断に委ねられ得る。

一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内および皮下）に適する。このような組成物は、例えば、溶液、懸濁液、分散液、乳濁液等として製剤化することができる。また、これらは、滅菌固体組成物（例えば、凍結乾燥組成物）の形態で製造してもよく、使用直前に滅菌注射用媒体中に溶解または懸濁することができる。例えば、非経口投与は、注射により達成することができる。このような実施形態では、注射液は、従来の形態、すなわち、液体の溶液もしくは懸濁液、注射前の液体中の溶液もしくは懸濁液に適する固体形態として、または乳濁液のいずれかとして調製する。一部の実施形態では、注射用溶液および懸濁液は、滅菌粉末、凍結乾燥粉末または顆粒から調製する。

さらなる実施形態では、医薬組成物は、吸入による送達のために（例えば、肺および呼吸器系への直接送達のために）製剤化する。例えば、組成物は、点鼻薬または他の公知の任意のエアロゾル製剤の形態をとり得る。一部の実施形態では、吸入またはエアロゾル送達のための製剤は、複数の粒子を含む。一部の実施形態では、このような製剤は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２または約１３ミクロンの平均粒子径を有し得る。一部の実施形態では、吸入またはエアロゾル送達のための製剤は、乾燥粉末として製剤化する。一部の実施形態では、吸入またはエアロゾル送達のための製剤は、例えば、湿潤剤を含有させることにより湿潤粉末として製剤化する。一部の実施形態では、湿潤剤は、水、食塩水または生理学的ｐＨの他の液体からなる群から選択される。

一部の実施形態では、本発明による医薬組成物は、液滴として鼻腔または頬側口腔に投与する。一部の実施形態では、用量は、複数の滴下（例えば、１～１００、１～５０、１～２０、１～１０、１～５滴等）を含み得る。

この医薬組成物は、所望のアウトカムを達成するのに適切な任意の用量で投与し得る。一部の実施形態では、所望のアウトカムは、組成物中に存在する抗原性粒子中に存在するＲＳＶポリペプチドのソースに対する持続性の適応性免疫応答の誘導である。一部の実施形態では、所望のアウトカムは、１つまたはそれ以上の感染症候の発生の強度、重症度、頻度の低下および／または遅延である。一部の実施形態では、所望のアウトカムは、感染症の阻害または予防である。必要とされる用量は、対象の種、年齢、体重および全身状態、予防または治療する感染症の重症度、使用する特定の組成物、ならびにこの投与方法に応じて対象により異なる。

一部の実施形態では、本発明による医薬組成物は、単回または複数回用量で投与する。一部の実施形態では、医薬組成物は、異なる日に投与する複数回用量で投与する（例えば、プライム・ブーストワクチン接種戦略）。一部の実施形態では、医薬組成物は、ブースター投与計画の一部として投与する。

種々の実施形態では、医薬組成物は、１つまたはそれ以上の追加の治療薬と同時投与する。同時投与では、これらの投与のタイミングが、医薬組成物中の追加の治療薬および活性成分（複数可）の薬理学的活性が時間的に重複するようなタイミングであり、このため複合的治療作用を発揮する場合、同時に投与する治療薬を必要としない。一般には、各薬剤は、その薬剤のために決定した用量およびタイムスケジュールで投与する。

４．核酸／ｍＲＮＡ
また、本明細書に記載の抗原性ポリペプチドまたは粒子をコードする核酸を提供する。一部の実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。翻訳を経てポリペプチドを生じることが可能な任意の核酸は、本開示の目的のためのｍＲＮＡであると考えられる。

５．キット
また、本明細書に記載の抗原性ポリペプチド、核酸、抗原性粒子、組成物または医薬組成物を１つまたはそれ以上含むキットを本明細書において提供する。一部の実施形態では、キットは、溶剤、溶液、緩衝液、説明書または乾燥剤の１つまたはそれ以上をさらに含む。

本記載および例となる実施形態は、制限として解釈されるべきではない。本明細書および添付の特許請求の範囲の目的では、他に指示しない限り、量、百分率または比率／割合を表すすべての数、および本明細書および特許請求の範囲において使用する他の数値は、すべての場合において「約」の用語により、これらがまだそのように修飾されていない範囲で修飾されるものとして理解されるべきである。「約」は、記載する対象の特性に実質的には影響しない、例えば、１０％、５％、２％または１％以内の変動の程度を示す。したがって、これに反して指示しない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲に記載する数的パラメータは、得ようとする所望の特性に応じて変動し得る近似値である。少なくとも、また本特許請求の範囲の等価物の学説の出願を制限しようとするためでもなく、各数的パラメータは、報告する有効桁の数を踏まえて通常の丸め手法を適用することにより、少なくとも解釈されるべきである。

本明細書および添付の特許請求の範囲において使用する場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」ならびに任意の単語の単数形の任意の使用は、一参照対象に明示的かつ明解に制限しない限り、複数の参照対象を含むことに留意されたい。本明細書において使用する場合、「含む」の用語およびこの文法的変形は、非制限であることを意図しており、リストにおける項目の列挙は、リストの項目に置換または追加可能な他の類似の項目を排除することを意図しない。

以下の実施例は、開示する特定の実施形態を例示するために提供するものであり、本開示の範囲の制限として決して解釈されるべきではない。

１．キメラＲＳＶ Ｇ抗原の調製
ＲＳＶ Ｇキメラポリペプチド（すなわち、Ｂ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎ（配列番号４）、Ｇｃｃ四量体Ａ２－Ｂ１－Ａ２－Ｂ１（配列番号５）およびＡ２－α－Ｂ１粒子（配列番号６））をコードするベクターは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ社によって、ＩＰＴＧ誘導発現プロモーターを内部に有するｐＥＴ２８大腸菌発現ベクターを使用して合成した。抗原のモデル構造は、図２Ａ－Ｃに示す。Ａ２－α－Ｂ１粒子は、プロトマー６０種を含み、それぞれが、Ｇｃｃエピトープ提示の場合約１２０例についてＡ２ＧｃｃおよびＢ１Ｇｃｃを含むと予想される。キメラポリペプチドは、当技術分野における標準的方法を使用して、大腸菌において発現させた。簡潔には、ＢＬ２１ＤＥ３大腸菌細胞を、適切なベクターにより形質転換し、０．１％のカナマイシンを有するＬＢブロス中３７℃で増殖させ（典型的には、発現量１リットル）、細胞密度が約０．５～０．８の吸光度単位（ＵＶ６００）となると０．１％のＩＰＴＧにより誘導した。培養物は、一晩（およそ１６時間）１８℃で放置してポリペプチドを発現させた。細胞を遠心分離により回収し、細胞ペレットをＰＢＳ３０ｍＬ中に再懸濁して超音波処理した。試料を３０分４，０００ｒｐｍで遠心分離し、上清を廃棄して封入体を保持し、４Ｍの尿素３０ｍＬ中に再懸濁した後、超音波処理した。試料をもう一度遠心分離し、ＲＳＶ Ｇ構築物を含む上清を、ＰＢＳ４リットルに対して一晩透析した。次いで、可溶性の試料を０．２２μｍのＭｉｌｌｅｘ－ＧＰフィルターを使用して濾過し、透明な上清を得てポリペプチドを精製した。

ＨＩＳタグ化構築物（すなわち、Ｂ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎ（配列番号４））は、Ｎｉキレーションによって、ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅＨＩＳＴＲＡＰカラムを使用し、イミダゾールの勾配により溶出して最初に精製した。非ＨＩＳタグ化構築物（すなわち、Ｇｃｃ四量体Ａ２－Ｂ１－Ａ２－Ｂ１（配列番号５）およびＡ２－α－Ｂ１粒子（配列番号６））は、イオン交換ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅＨｉＴｒａｐＱカラムを使用して、ＮａＣｌ溶出により最初に精製した。ＲＳＶ Ｇ構築物を含む画分を、逆相ＨＰＬＣによりＫｉｎｅｔｅｘ５ｕＣ１８ １００Ａカラムを使用してさらに精製し、構築物をさらに精製してエンドトキシンを減少させた。最終的に、ＲＳＶ Ｇ構築物は、サイズ排除精製によって、ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅＳｕｐｅｒｄｅｘＰ２００カラムを使用し、Ｔｒｉｓ緩衝食塩水移動相により精製した。当技術分野において典型であるように、純度は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにより判断し、濃度は、ＵＶ２８０の吸収により判断した。

フェリチンナノ粒子が、ＲＳＶ Ｇ中央ドメイン抗原の免疫原性の向上に使用可能であることを実証するために、発明者らは、Ｇｃｃペプチド（配列番号１２）をフェリチンナノ粒子に化学的にコンジュゲートする方法を開発した。Ｓ１１１Ｃ変異を内部に有する本明細書に記載のフェリチン（配列番号２０６）は、ＮＨＳ基を介してＮ末端に結合するＰＥＧ４リンカー上のマレイミド基により合成したＧｃｃペプチド（配列番号１２）とコンジュゲートさせることができる。Ｎ末端のマレイミドを有するＧｃｃペプチドを合成し、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ，ＵＳＡ）によってＨＰＬＣ精製した。マレイミド－Ｇｃｃ抗原をフェリチンＳ１１１Ｃ粒子に加えると、マレイミドは、遊離のシステインにコンジュゲートしてＧｃｃ－ＮＰを形成し、これは、クーマシー染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにより観察することができる。コンジュゲーションは、典型的に５０％～９０％効率的であるが（図１Ａを参照）、Ｇｃｃペプチドフェリチンナノ粒子のモデル（１００％コンジュゲート）を図１Ｂに示す。

２．ＲＳＶ Ｇ抗原に対する中和抗体応答のｉｎ ｖｉｖｏでの特性決定
マウスにおけるＲＳＶ Ｇ抗原に対するｉｎ ｖｉｖｏでの応答を評価するために、０、３および６週目に特定用量のＲＳＶ抗原で、高用量（５μｇ）または低用量（０．５μｇ）のいずれかの抗原を用いて、雌のＢＡＬＢｃマウスを筋肉内投与により免疫した。他に注記しない限り、ＲＳＶ抗原は、ベッドサイド混合戦略により、ＡＦ０３を用いて補強した。つまり、５０μｌを各後肢へ注射する直前に、適切なポリペプチド溶液５０μｌをＳａｎｏｆｉアジュバントＡＦ０３（スクアレンをベースとする乳濁液；Ｋｌｕｃｋｅｒら、Ｊ ＰｈａｒｍＳｃｉ．２０１２Ｄｅｃ；１０１（１２）：４４９０～５００を参照）５０μｌと混合した。免疫化による有害作用は、観察されなかった。第１の免疫化の１日前および各注射から少なくとも２週間後（すなわち、２、５および８週目）に血液を採取した。他に特定しない限り、指示するデータは、第３の注射から２週間後（８週目、２ｗｐ３としても表す）のものであった。典型的には、免疫前動物（ナイーブとして表す）由来の血清を、第２の注射から２週間後（ｐｏｓｔ－２または２ｗｐ２）または第３の注射から２週間後（ｐｏｓｔ－３^ｒｄまたは２ｗｐ３）に解析した。

ＨＡＥ中和アッセイでは、血清を３０分間５６℃で熱不活化した。４倍段階希釈による一連の不活化血清を、ＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ（商標）－ＡＬＩ １０Ｘ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社；０５００３）および１％の抗菌／抗真菌剤（ｈｅｎｃｅ ｍｅｄｉａ社）を添加したＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ（商標）－ＡＬＩ基礎培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社；０５００２）により作製した。ＲＳＶウイルスストックを血清希釈物と１：１で混合し、１．５時間３７℃でインキュベートした。次いで、ウイルス－血清混合物を、完全分化ＨＡＥ細胞を１ウェルあたり５０μＬ含む２４ウェルプレートに加え、１時間３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。インキュベーション後、接種材料を除去し、ウェルを２回、培養液で洗浄して非結合ウイルスを除去し、さらに２０時間３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。ｍＫａｔｅ（ＴａｇＦＰ６３５）レポーターを発現するＲＳＶを感染させた培養物における感染事象を蛍光顕微鏡上で計数した。

ｍＫａｔｅレポーターを発現しないＲＳＶによる感染（ＲＳＶ Ｂ株の中和）を検出するために、偽重層上皮を培養液で広範に洗浄して粘液を除去し、次いで、４％のパラホルムアルデヒドにより３０分間室温で固定し、０．２５％のＴｒｉｔｏｎＸ－１００で３０分間透過処理し、２％のＦＢＳを添加したＤＭＥＭにより１時間３７℃でブロッキングした。ブロッキング溶液は、２％のＦＢＳを添加したＤＭＥＭにより１：２００で希釈したマウス抗ＲＳＶモノクローナルＡｂ混合物（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社；ＭＡＢ８５８－４）１ウェルあたり１００μＬと交換し、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。次いで、プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を添加したＰＢＳにより３回洗浄した。２％のＦＢＳを添加したＤＭＥＭにより１：２００で希釈したヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社；Ａ１１００１）１００μＬを１ウェル毎に加え、プレートを一晩４℃でインキュベートした。翌朝、プレートを０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を添加したＰＢＳで３回洗浄し、蛍光シグナルをＰｒｏＬｏｎｇＧｏｌｄＡｎｔｉＦａｄｅ ｗｉｔｈＤＡＰＩ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社；Ｐ３６９３５）により安定化して蛍光顕微鏡上で計数した。中和抗体力価は、６０％低下するエンドポイントにおいて判定した。

３．ＲＳＶ Ｇ抗原に対する結合抗体応答のｉｎ ｖｉｖｏでの特性決定
抗Ｇｃｃ結合では、Ｃ末端のＨＩＳタグを有するＧｃｃペプチドの三量体形成二量体を、上記と同様にＯｃｔｅｔの先端に使用した。Ｈｉｓ_６タグ化Ｇｃｃ（Ａ２株）六量体（配列番号７）またはＨｉｓ_６タグ化Ｇｃｃ（Ｂ１株）六量体（配列番号８）を、抗ペンタＨＩＳ（ＨＩＳ１Ｋ）センサーの先端（ＦｏｒｔｅＢｉｏ＃１８－５１２２）に４００秒間、事前にロードし、捕捉してほぼ飽和に到達させた。次いで、バイオセンサーの先端を９０秒間Ｏｃｔｅｔ洗浄緩衝液中で平衡化した後、希釈した血清を３００秒間、会合させた。会合曲線の最終応答を、ＯｃｔｅｔＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓＨＴ１０．０ソフトウェアを使用して測定し、応答に希釈係数（１００または３００）を掛けて最終応答の報告を得た。

ＲＳＶ Ｇ抗原がＧｃｃ結合免疫応答を誘発するかどうかを判定するために、上記のとおり免疫化した血清を、ＧｃｃＡ２六量体（配列番号７）またはＧｃｃＢ１六量体（配列番号８）に結合するこれらの能力について試験した。高用量（図４Ａおよび図５Ａ）および低用量（図４Ｂおよび図５Ｂ）におけるＧｃｃ結合応答を、第２の免疫化から２週間後および第３の免疫化から２週間後に試験した。Ａ２株（図４Ａ～Ｂ）およびＢ１株（図５Ａ～Ｂ）の両方では、すべての抗原は、ナイーブマウスの血清と比較して結合応答を誘発した。すべての時点および用量において、Ｂ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎは、Ｇｃｃ四量体またはＧｃｃ－ＮＰと比較してＧｃｃＡ株に対する優れた結合応答を誘発した。各時点において、高用量のＡ２－α－Ｂ１は、高用量のＢ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎと類似の結合応答を誘発したが、低用量のＡ２－α－Ｂ１は、低用量のＢ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎと比較してＧｃｃＡ株の結合応答の低下を誘発した（図４Ａ～Ｂ）。

すべての時点における高用量のＢ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎ、Ａ１Ｂ２Ａ１Ｂ２四量体およびＡ２－α－Ｂ１は、高用量のＧｃｃ－ＮＰと比較してＧｃｃＢ株に対する優れた結合応答を誘発した（図５Ａ）。各時点において、低用量のＡ２－α－Ｂ１およびＢ１－Ａ２－ｆｏｌｄｏｎは、低用量のＧｃｃ－ＮＰおよびＡ１Ｂ２Ａ１Ｂ２四量体よりも優れたＧｃｃＢ１結合を誘発した（図５Ｂ）。

４．ヒト細胞における応答
ヒト細胞における応答を誘発するＰｒｅ－Ｆ－ＮＰ抗原およびＧｃｃ－ＮＰ抗原の能力を実証するために、ＭＩＭＩＣプラットフォームによる実験を実施した。ＭＩＭＩＣプラットフォームは、曝露時に抗原特異的先天性および適応性応答を迅速かつ再現可能に生成可能なヒト自己免疫細胞単独からなる。これまでの研究では、ＨＢＶ、破傷風トキソイド、モノクローナル抗体、ＹＦ－ＶＡＸおよびＢ型インフルエンザ細胞応答のような多種多様な標的に対するｉｎ ｖｉｖｏでの免疫プロファイルを再現するＭＩＭＩＣ系の能力を実証している。ヒトＢ細胞において、Ｇｃｃ－ＮＰがＧｃｃペプチド単独よりも優れたＧ抗体応答を誘発することを実証するために、ヒト細胞をＧｃｃペプチド単独またはナノ粒子にコンジュゲートしたＧｃｃペプチド（Ｇｃｃ－ＮＰ）で処理した。Ｇｃｃ－ＮＰは、優れたＧ結合抗体応答を誘発した。したがって、Ｇｃｃエピトープを含む粒子が、ヒト免疫化において免疫応答を誘発することが予想される。

５．Ｇｃｃ抗原に対する抗体結合の特性決定
配列番号１４の配列を有するキメラＧｃｃ－ｆｏｌｄｏｎポリペプチドへの抗体結合を、二重サンドイッチＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）を使用して評価した。

アッセイでは、ＲＳＶ Ｇ糖タンパク質を捕捉抗体および検出抗体の間で捕捉した。このＥＬＩＳＡでは、検出抗体は、ビオチンで標識し、サンドイッチは、酵素コンジュゲートストレプトアビジンを使用して検出した（図６Ａ）。

Ｇｃｃポリペプチドが適切な立体構造を有するかどうかを調査するために、Ｇｃｃの立体構造エピトープを認識する０２１－２Ｇ Ｍａｂ抗体（ヒト化精製抗プロテインＧモノクローナル抗体、クローン［０２１－２Ｇ］、供給元ＲＤ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。したがって、０２１－２Ｇ Ｍａｂの結合は、Ｇｃｃポリペプチドがミスフォールドまたは分解されていないことを示す。検出抗体は、Ｌｙｎｘ ｒａｐｉｄ ｐｌｕｓ ｂｉｏｔｉｎ（ｔｙｐｅ１）ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｋｉｔビオチン（１型）（Ｂｉｏｒａｄ社ｒｅｆＬＮＫ２６３Ｂ、ＬＮＫ２６２ＢまたはＬＮＫ２６１Ｂ）またはビオチンＥＺｌｉｎｋ ｓｕｌｆｏＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社ｒｅｆ２１３２７）のようなビオチン化キットを使用してビオチン化した精製抗プロテインＧモノクローナル抗体（マウスＩｇＧ１、カッパ）、クローン［１３１－２Ｇ］、供給元：Ｓｉｇｍａ社、ｒｅｆ：ＭＡＢ８５８－２－５であった。

結果は、図６Ｂに示し、配列番号１４の配列を有するキメラＧｃｃ－ｆｏｌｄｏｎポリペプチドが、クローン［０２１－２Ｇ］を含む、Ｇｃｃの立体構造エピトープを認識する使用した抗プロテインＧ抗体の両方により認識されたことを示す。この証拠は、キメラＧｃｃ－ｆｏｌｄｏｎポリペプチドが、天然ＲＳＶを認識する抗体を誘発するのに適切な立体構造を有するという結論と一致する。

方法
アッセイを実施するために、次の工程を実施した。

１μｇ／ｍｌの０２１－２Ｇコーティング抗体溶液を１×ＰＢＳにより調製した。９６ウェルプレートにわたって１ウェルあたり１００μＬを分配した。プレートシーラーで覆った。

密封したプレートを１６時間～２０時間、＋５℃±３℃でインキュベートした。最大３か月間、≦－７０℃で保存してもよい。プレートを解凍する場合：排水し、次いで、飽和を直接進めた。

プレートを解凍して空にした。プレートにわたって飽和緩衝液（０．０５％のポリソルベート２０および１％の乳を有する１×ＰＢＳ）２００μＬ／ウェルを分配した。プレートシーラーで覆った。プレートをプレートインキュベータ内に置いた。少なくとも１時間、およそ＋３７℃でインキュベートした。

プレートの３回の洗浄を洗浄緩衝液（０．０５％のポリソルベート２０を有する１×ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ社Ｐ１３７９））により実施した。

すべての希釈は、希釈緩衝液（０．０５％のポリソルベート２０および０．１％の乳を有する１×ＰＢＳ）を用いて行った。

ｆｏｌｄｏｎＧｃｃ－Ｈｉｓタグ（非可溶性画分）、供給元：ＢＴＬ社を参照抗原および内部対照として使用した。参照抗原および内部対照の希釈は、同一アリコートからの独立的な二つ組により行った。参照抗原および内部対照のために調製した希釈物は、ガラス製「溶血」型試験管または４．５ｍＬのプラスチック製ＮＵＮＣクライオチューブ内に作製した。

２倍希釈による一連の参照、内部対照および試料を、９６ウェルプレートに各１００μＬ容量で調製した。また、希釈緩衝液のみを含むブランクウェル２つを調製した。プレートをプレートシーラーで密封した。プレートをプレートインキュベータ内に置いた。およそ１時間、およそ＋３７℃でインキュベートした。３回の洗浄を洗浄緩衝液により実施した。

適切な濃度の検出抗体溶液を希釈緩衝液により調製した。プレートにわたって検出抗体溶液１００μＬ／ウェルを分配した。プレートをプレートシーラーで密封した。プレートをプレートインキュベータ内に置いた。およそ１時間、およそ＋３７℃でインキュベートした。３回の洗浄を洗浄緩衝液により実施した。

適切な希釈緩衝液濃度のペルオキシダーゼと共役するウサギポリクローナル抗ヒトＩｇＧ抗体の溶液を調製した。プレートにわたってコンジュゲート溶液１００μＬ／ウェルを分配した。プレートをプレートシーラーで密封した。プレートをプレートインキュベータ内に置いた。およそ１時間、およそ＋３７℃でインキュベートした。３回の洗浄を洗浄緩衝液により実施した。

プレートにわたってＴＭＢ（すぐに使用可能な３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンペルオキシダーゼ基質溶液）１００μＬ／ウェルを分配した。およそ１０分間、室温の暗所で（例えば、ホイルで包んで）インキュベートした。１ＮのＨＣｌ溶液１００μＬ／ウェルを加えることにより反応を停止させた。プレートをプレートリーダーにより４５０および６２０ｎｍで読み取った。２つの測定値間の差として表される光学濃度（ＯＤ）を測定して、９６ウェルプレートのプラスチックの吸収を考慮した。

相対活性の算出は、ＥｕｒｏｐｅａｎＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａの式（５．３．３項：平行線アッセイ）に関する適用における平行線法により行い、ＡＲＤ ＥＵ：ＰＬＡ２．０（平行線アッセイ）またはＳＴＥＧＭＡＮＮ社により販売される等価物によるものを適格とする。Ｌｏｇ／Ｌｏｇモデルを使用して、用量反応法則モデリングによる相対活性を算出する。

Claims (35)

1. ３つ以上のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体と少なくとも１つの多量体形成ドメインを含む抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドであって、
   ここで、前記ポリペプチドはフェリチンを含まず、および／または前記ポリペプチドは一本鎖ポリペプチドであり、
   ここで、前記ポリペプチドは、ａ）Ａ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体のみ；ｂ）Ｂ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体のみ；またはｃ）Ａ株およびＢ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を含み、
   ａ．ここで、Ａ株由来のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体は、
   ｉ．配列番号３と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、または
   ｉｉ．Ｃ末端のリジン（Ｋ）を有しない配列番号３と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
   ｂ．ここで、Ｂ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体は、配列番号１０と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
   ここで、前記ポリペプチドは配列番号４、６および１４のいずれか１つのアミノ酸配列に対する少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記ポリペプチド。
2. Ａ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体が、配列番号３のアミノ酸配列、またはＣ末端のリジン（Ｋ）を有しない配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
3. Ｂ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
4. ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３、４、５、６、７、８、９または１０個含む、請求項１に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
5. Ａ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
6. Ｂ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を３つ以上含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
7. Ａ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を少なくとも１つおよびＢ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を少なくとも１つ含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
8. ポリペプチドは、三量体、四量体または六量体に集合している、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
9. Ａ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体３つを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
10. Ｂ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体３つを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
11. Ａ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体３つおよびＢ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体３つを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
12. 配列番号４、６および１４のいずれか１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの多量体形成ドメインを含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
13. 多量体形成ドメインを１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
14. 多量体形成ドメインがｆｏｌｄｏｎドメインである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
15. 多量体形成ドメインが、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
16. 多量体形成ドメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
17. Ａ株のＧｃｃ単量体２つおよびＢ株のＧｃｃ単量体２つを含む、請求項７に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
18. Ａ株およびＢ株の単量体が、一本鎖において交互に入れ替わる、請求項１７に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
19. 配列番号４、６および１４のいずれか１つのアミノ酸配列に対する９５％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
20. １つの多量体形成ドメイン、１つのＡ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体、および１つのＢ株のＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
21. 多量体形成ドメインが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれ
    か１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
22. 配列番号１４に対する９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１１、１３、１５、または１９のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
23. 宿主細胞におけるＲＳＶ Ｇポリペプチドの発現時にＧｃｃ粒子を形成することが可能な、請求項１～２２のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
24. 粒子であり、該粒子が六量体である、請求項２３に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
25. ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体を少なくとも３つコードするポリヌクレオチドによりコードされる、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
26. ポリヌクレオチドが、ＲＳＶ Ｇｃｃ単量体３つまたは４つをコードする、請求項２５に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
27. ポリヌクレオチドが、Ａ株のＧｃｃ単量体２つおよびＢ株のＧｃｃ単量体２つをコードする、請求項２５または２６に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
28. ポリヌクレオチドが、Ａ株のＧｃｃ単量体２つおよびＢ株のＧｃｃ単量体２つを交互にコードする、請求項２７に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
29. ＲＳＶに対する免疫応答を誘発し、および／またはＲＳＶ感染症から対象を防御することが可能な、請求項１～２８のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチド。
30. 請求項１～２９のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドを含む医薬組成物であって、薬学的に許容される担体をさらに含む、前記医薬組成物。
31. ＲＳＶに対する免疫応答を誘発するか、またはＲＳＶ感染症から対象を防御する方法における使用のための、請求項３０に記載の医薬組成物。
32. 対象がヒトである、請求項３０または３１に記載の医薬組成物。
33. 請求項１～２９のいずれか１項に記載の抗原性ＲＳＶ Ｇポリペプチドをコードする核酸。
34. 核酸がｍＲＮＡである、請求項３３に記載の核酸。
35. 請求項３３または３４に記載の核酸を含む、キット。

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