JP7617656B2 - 特定成分含有組成物 - Google Patents

Description

本発明は、特定の成分を含有し、かつ、ＵＣＰ１発現促進作用及び／又は褐色脂肪細胞分化促進作用を有する組成物に関する。

脱共役タンパク質（Ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ；ＵＣＰｓ）はミトコンドリア内膜での酸化的リン酸化反応を脱共役させ、エネルギーを熱として散逸する機能を有する（非特許文献１を参照）。特に、ＵＣＰ１は、熱産生部位である褐色脂肪細胞に特異的に発現し、電子伝達系におけるＡＴＰ合成を経ずに、中性脂質を熱へと変換し、直接的にエネルギーを消費させる役割を担う。また、前駆細胞からの褐色脂肪細胞への分化を促進することができれば、ＵＣＰ１の発現量を増大することができ、中性脂質を熱へと変換することが可能になる。したがって、ＵＣＰ１発現量又は褐色脂肪細胞分化を促進することができれば、中性脂質の消費を経て、肥満を解消できる可能性がある。このような、褐色脂肪細胞分化促進剤やＵＣＰ１発現促進剤について、カテキン類を有効成分とするものが特許文献１に記載がある。

特開２０１４－６５６７２号公報

第１２４回 日本医学会シンポジウム記録集、ｐ．６２－７０

特許文献１に記載のＵＣＰ１の発現量及び活性化を促進できるものは、天然物から単離及び精製した特定物質を有効成分として含有する。しかし、このような特定物質は、薬理作用が強いことから、摂取するに際して注意が必要であり、過剰な摂取により副作用がもたらされる危険性がある。

本発明は、このような事情に鑑みてなされたもので、副作用の問題がなく、長期的かつ持続的な摂取が可能である、ＵＣＰ１発現促進作用及び／又は褐色脂肪細胞分化促進作用を示す組成物を提供することを、発明が解決しようとする課題とする。

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討したところ、驚くべきことに、特定の成分を含有することによって、格別顕著なＵＣＰ１発現促進効果及び／又は褐色脂肪細胞分化促進効果が得られることを見出した。そして、ＵＣＰ１発現促進用組成物、代謝促進用組成物、抗肥満用組成物、体脂肪減少用組成物及び熱産生促進用組成物として、特定の成分を含有する組成物の創作に成功した。本発明は、かかる知見や成功例に基づいて完成された発明である。

したがって、本発明によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有する化粧用組成物が提供される。

本発明の別の側面によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有するＵＣＰ１発現促進用組成物が提供される。

本発明の別の側面によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有する褐色脂肪細胞活性化用組成物が提供される。

本発明の別の側面によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有する代謝促進用組成物が提供される。

本発明の別の側面によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有する抗肥満用組成物が提供される。

本発明の別の側面によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有する体脂肪減少用組成物が提供される。

本発明の別の側面によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有する熱産生促進用組成物が提供される。

本発明の別の側面によれば、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントからなる群から選ばれる少なくとも１種類の成分を含有する組成物が提供される。

本発明の組成物は、ＵＣＰ１発現促進作用及び／又は褐色脂肪細胞分化促進作用を有し、さらにこれらの作用に関連して、褐色脂肪細胞活性化作用、代謝促進作用、抗肥満作用、体脂肪減少作用、熱産生促進作用、ＵＣＰ１発現促進作用、エネルギー産生促進作用、中性脂質低下作用、皮脂抑制作用、脂肪代謝促進作用などを示すことが期待できる。

本発明の組成物で用いられる特定の成分は、それぞれ医薬品や化粧品などでの使用実績のあるものであることから、本発明の組成物は安全性が高いものである。そこで、本発明の組成物は、上記作用を有することにより、ＵＣＰ１発現促進用組成物、代謝促進用組成物、抗肥満用組成物、体脂肪減少用組成物及び熱産生促進用組成物として有用であり、非経口的又は経口的な形態で提供することが期待できる。

以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の組成物は、ＵＣＰ１発現促進作用及び／又は褐色脂肪細胞分化促進作用を有し、かつ、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントのいずれかの成分（以下、特定成分とよぶ。）を少なくとも含有する。

本発明の組成物は、ＵＣＰ１発現促進作用及び褐色脂肪細胞分化促進作用のうち、いずれか１種の作用を有するものであってもよいし、これら２種全ての作用を有するものであってもよい。また、特定成分は、特定成分のうちのいずれか１種の成分であってもよいし、２種以上の成分であってもよい。

本発明の組成物は、ＵＣＰ１発現促進作用及び褐色脂肪細胞分化促進作用の他に、褐色脂肪細胞活性化作用、代謝促進作用、抗肥満作用、体脂肪減少作用、熱産生促進作用、エネルギー産生促進作用、中性脂質低下作用、皮脂抑制作用及び脂肪代謝促進作用を示し得る。

本発明の組成物は、上記した作用を有することにより、ＵＣＰ１発現促進用組成物、代謝促進用組成物、抗肥満用組成物、体脂肪減少用組成物及び熱産生促進用組成物という態様を採り得る。

ホップはセイヨウカラハナソウ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ）として知られているものであれば特に限定されず、例えば、その花（毬花、球果）、種子、果実、葉、茎、根などの部位を用いることができるが、ホップの球果を用いることが好ましい。

ミントはセイヨウハッカ（Ｍｅｎｔｈａ ｐｉｐｅｒｉｔａ）として知られているものであれば特に限定されず、例えば、その花、種子、果実、葉、茎、根などの部位を用いることができるが、ミントの葉を用いることが好ましい。

大麦はオオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）として知られているものであれば特に限定されず、例えば、その花、種子、果実、葉、茎、根などの部位を用いることができるが、大麦の葉や茎を用いることが好ましい。

プラセンタは通常知られているとおりのプラセンタであれば特に限定されず、例えば、ブタ、ヒト、ウシ、ウマ、ヒツジなどの胎盤由来の抽出物又はその成分である動物性プラセンタ、魚類の卵巣膜などに由来する抽出物又はその成分である海洋性プラセンタ、植物の胚芽などに由来する抽出物又はその成分である植物性プラセンタなどが挙げられるが、動物性プラセンタが好ましくは、ブタ由来の動物性プラセンタがより好ましい。

セラミドはスフィンゴシンと脂肪酸とがアミド結合した化合物であれば特に限定されず、例えば、天然物に由来するセラミドや合成して得られるセラミドが挙げられるが、天然物に由来するセラミドが好ましく、イネ、トウモロコシ、コンニャク、マイタケ、タモギタケ、ダイズ、コムギ、ビートなどに由来するセラミドがより好ましく、イネ由来のセラミド（グルコシルセラミド）がさらに好ましい。

トレハロースは通常知られているとおりのトレハロースであれば特に限定されないが、例えば、トレハロースそのものやその水和物や光学異性体などのトレハロース誘導体が挙げられるが、好ましくはＤ－（＋）－トレハロースである。

アスパルテームは通常知られているとおりのアスパルテームであれば特に限定されないが、例えば、アスパルテームそのものやその光学異性体などのアスパルテーム誘導体が挙げられるが、好ましくはＣＡＳ登録番号が２２８３９－４７－０であるアスパルテームである。

アラニンは通常知られているとおりのアラニンであれば特に限定されないが、例えば、アラニンそのものやその光学異性体などの誘導体が挙げられるが、好ましくはＣＡＳ登録番号が３３８－６９-２であるアラニンである。

特定成分のうち、天然物についてはその加工物であってもよい。加工物としては、例えば、乾燥粉末、細片化物及びその乾燥粉末、搾汁及びその乾燥粉末、抽出物及びその乾燥粉末などが挙げられるが、これらに限定されない。ただし、加工、貯蔵、運搬などの容易性や使用形態の汎用性といった観点から、乾燥粉末であることが好ましい。

天然物の乾燥物を得る方法は特に限定されないが、例えば、大麦の茎葉の粉末については特許第３２７７１８１号公報に開示されるような方法で製造できる。すなわち、大麦の茎葉を収穫後、水で洗浄し、泥などを洗い落とし、水気を切った後、適当な長さに切断する。次いで必要に応じて、熱水処理や蒸熱処理などのブランチング処理が行われる。このときの処理の温度及び時間は、処理する大麦茎葉の量及び熱水のｐＨに応じて適宜決定すればよい。ブランチング処理された大麦茎葉を直ちに冷却し、遠心分離などで脱水を行う。次いで、水分含量が５ｗｔ％以下になるように乾燥を行う。さらに粗粉砕工程、加熱工程、微粉砕工程などを経て、大麦茎葉粉末を得ることができる。

特定成分は、長期にわたりヒトに摂取されてきた実績のある天然物やその由来物及び合成物であって安全性が高いことから、本発明の組成物は、実用性が高く、そのままで、又は加工することにより、非経口的又は経口的な形態で種々の用途に適用可能である。

特定成分は、当業者により通常知られている方法によって製造したものでもよいし、市場に流通しているものであってもよい。

特定成分は、ＵＣＰ１発現促進作用又は褐色脂肪細胞分化促進作用を示す。本明細書における「発現促進作用」とは、例えば、ＵＣＰ１発現促進作用の場合、被験体におけるＵＣＰ１遺伝子の発現量を促進すること、ＵＣＰ１タンパク質の翻訳量を増大すること及びＵＣＰ１を活性化することのうち少なくともいずれか１つの作用をいう。また、褐色脂肪細胞活性化作用とは、褐色脂肪細胞を活性化すること及び褐色脂肪細胞数を増加させることのうち少なくともいずれか１つの作用をいう。

ＵＣＰ１発現促進作用について、非特許文献１に記載されているとおり、肥満動物ではＵＣＰ１の機能が低下していること、多食しても肥満しない動物はＵＣＰ１が増加していること、人為的にＵＣＰ１の発現を低下させたマウスは肥満し高発現マウスは痩せることが知られている。したがって、ＵＣＰ１発現促進作用により、抗肥満効果が期待でき、実際にＵＰＣ１発現促進作用を有する物質は、白色脂肪細胞での脂肪分解を促すと同時にＵＣＰ１を活性化して、遊離した脂肪酸を熱に変え、最終的に体脂肪を減少させることができる。

熱産生促進作用とは、例えば、褐色脂肪細胞による中性脂質からの熱産生を促進する作用をいう。中性脂質低下作用とは、例えば、中性脂質を分解して生体内における中性脂質の全量を低下させる作用をいう。皮脂抑制作用とは、例えば、皮脂の発生を抑制する作用をいう。脂肪代謝促進作用とは、例えば、肥満状態を形成する脂肪細胞や脂肪組織を小型の正常な脂肪細胞に質的変換する作用をいう。体脂肪減少作用とは、例えば、遊離した脂肪酸を熱に変えることにより体脂肪を減少させる作用をいう。代謝促進作用及び抗肥満作用とは、例えば、体脂肪を減少するように代謝を促進する作用及び該作用により肥満になることを抑制する作用をいう。エネルギー産生促進作用とは、例えば、褐色脂肪細胞による中性脂質からの熱産生を通じてエネルギーを産生する作用をいう。本段落における各作用はそれぞれ記載した意味の作用を含むが、その他の作用機序により実現されるものも包含する。

本発明の抗肥満用組成物などの抗疾患組成物が奏する抗疾患効果とは、例えば、抗肥満用組成物が奏する抗肥満効果の場合、被験体における現在又は将来の肥満若しくは肥満症であるとされる状態になることを抑制若しくは遅滞又はその状態を改善することをいう。また、インスリン抵抗性とは、肝臓、脂肪細胞、骨格筋などで、インスリンの主な作用である糖の吸収促進作用が弱っている状態をいう。抗インスリン抵抗性効果とは、被験体におけるＳＳＰＧ（Ｓｔｅａｄｙ－ｓｔａｔｅ ｐｌａｓｍａ ｇｌｕｃｏｓｅ）法などによる現在又は将来のインスリン抵抗性の指標となる値がより悪化することを抑制若しくは遅滞又はその値を改善することをいう。

肥満は様々な疾病の原因となることが知られており、そのような疾病としては２型糖尿病、高血圧症、高脂血症などが挙げられる。さらにこれらの疾病を通じ、脳卒中や虚血性心疾患などがもたらされる場合もある。肥満状態になると、脂肪細胞の肥大が認められ、ＴＮＦ－α及び遊離脂肪酸（ＦＦＡ）が分泌され、これらが筋肉細胞や肝臓細胞などのインスリンの標的細胞での糖の取り込みを阻害するとともに、インスリンの働きを促進するアディポネクチンの分泌が抑制され、細胞レベルでインスリン感受性の低下を引き起こし、インスリン抵抗性が生じる。上記の肥満によってもたらされる疾病は、インスリン抵抗性に基づく、一連の代謝異常状態とみられている。そこで、本発明の組成物を用いることにより、肥満や肥満症と関連付けられる２型糖尿病、高血圧症、高脂血症などの疾病を予防又は改善することが可能である。

ここで、２型糖尿病の予防及び改善とは、糖尿病の状態又は境界域の状態になることを抑制若しくは遅滞又はそれらの状態から正常域といわれる状態に近づけることをいう。高血圧症の予防及び改善とは、高血圧とされる状態又は境界域の状態になることを抑制若しくは遅滞又はその状態から正常域といわれる状態に近づけることをいう。高脂血症の予防及び改善とは、高脂血症の状態又は境界域の状態になることを抑制若しくは遅滞又はその状態から正常域といわれる状態に近づけることをいう。

本発明の組成物の製造方法は特に限定されず、例えば、室温や加温下で、特定成分を含有せしめることにより、固形状組成物とすることができる。または、この固形状組成物を、水などの溶媒に溶解させて液状組成物とすることができる。さらに、特定成分の液状物に、他の固形状成分を加えて混合することにより液状組成物とすることができる。なお、得られた液状組成物は、乾燥処理を経て、粉末化しても良い。この場合の乾燥処理の方法としては、噴霧乾燥、凍結乾燥などが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の組成物は、用途に応じて、そのままで、又は他の成分と混合して使用することができる。このように、本発明の組成物は、特定成分の他に、本発明の目的を達成し得る限り、種々のものを配合できる。

例えば、本発明の組成物には、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、香油などの通常の加工に使用される添加物をさらに含有することができる。添加物の使用量は、本発明の課題の解決を妨げない限り特に限定されず、適宜調整される。

本発明の組成物は、通常用いられる形態であれば特に制限されず、例えば、液状、ローション状、ムース状、ゲル状、乳液状、懸濁液状、クリーム状、軟膏状、シート状、エアゾール状、スプレー状、スティック状、粉状、粒状、顆粒状、錠状、棒状、板状、ブロック状、固形状、ペースト状、カプセル状、カプレット状などの各形態を採り得る。

本発明の組成物は、非経口用組成物として、例えば、化粧品に適した形態として使用することができる。すなわち、本発明の組成物の一態様は、化粧用組成物である。例えば、本発明の組成物は、そのままで、又は通常化粧品の加工に使用される添加物と混合して、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤などの種々の形態に加工され得る。具体的には、化粧水、化粧クリーム、乳液、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリーム、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、洗顔剤、ファンデーション、育毛剤、水性軟膏、スプレーなどとして利用できる。

本発明の組成物に含有される特定成分の含有量は、ＵＣＰ１発現促進作用及び／又は褐色脂肪細胞分化促進作用が認められる量であれば特に限定されないが、経口用組成物としては、例えば、組成物全体に対して、０．０００１ｗｔ％以上、好ましくは０．００１ｗｔ％以上であり、化粧品などの非経口用組成物としては、例えば、０．００００１ｗｔ％以上、好ましくは０．０００１ｗｔ％以上である。

本発明の組成物の具体的な態様として、例えば、組成物全体に対して、特定成分のいずれか１種の成分を０．００１～１００ｗｔ％で含有する組成物が挙げられる。このうち、特定成分を０．０１～８０ｗｔ％で含有する組成物がより好ましい。

本発明の組成物の別の具体的な態様として、組成物全体に対して、特定成分のいずれか２種の成分を合計で１０～１００ｗｔ％の割合で含有する組成物が挙げられる。このうち、該２種の成分のうち一方の成分を１０～９０ｗｔ％、他方の成分を９０～１０ｗｔ％の割合で含有する組成物が挙げられる。

本発明の組成物の別の具体的な態様として、組成物全体に対して、特定成分のいずれか３種の成分を合計で１０～１００ｗｔ％の割合で含有する組成物が挙げられる。このうち、該３種の成分のうち１種目の成分を１０～５０ｗｔ％、２種目の成分を３０～４０ｗｔ％、３種目の成分を６０～１０ｗｔ％の割合で含有する組成物が挙げられる。

以下、本発明の組成物の具体的態様に係る配合例を示すが、本発明はこれら配合例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。

（配合例１：化粧水）
全体を１００質量部として、トレハロース ０．０１質量部、生姜抽出物 ０．０１質量部、ケツメイシ ０．０１質量部、グリセリン １０質量部、ジグリセリン ３質量部、１，３－ブチレングリコール １２質量部、ペンチレングリコール ３質量部、ヒアルロン酸ナトリウム ０．１質量部、クエン酸 ０．０１質量部、クエン酸ナトリウム ０．０２質量部、キサンタンガム ０．１質量部、メチルパラベン ０．１５質量部、カルボマー ０．２質量部、水酸化ナトリウム ０．０３質量部及び水 残部を混合して、化粧水の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例２：シャンプー）
全体を１００質量部として、ホップ抽出物 ０．０２質量部、カフェイン ０．０１重量部、ラウレス硫酸ナトリウム ７．５質量部、コカミドプロピルベタイン ４．２質量部、コカミドＤＥＡ ３質量部、１，３－ブチレングリコール ０．１質量部、ポリクオタニウム－１０ ０．２２５質量部、クエン酸 ０．１５質量部、クエン酸ナトリウム ０．０５質量部、フェノキシエタノール ０．９質量部及び水 残部を混合して、シャンプーの態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例３：石鹸）
全体を１００質量部として、アスパルテーム ０．５質量部、メリロート抽出物 ０．２質量部、エラスチン ０．１重量部、グリセリン ２質量部、オリーブ油 １質量部、ＥＤＴＡ－４ナトリウム ０．１質量部、エチドロン酸４ナトリウム ０．２質量部及び石ケン素地 残部を混合及び固化することにより、石鹸の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例４：乳液）
全体を１００質量部として、セラミド ０．１質量部、アラニン ０．１質量部、アルギニン ０．１質量部、ショ糖脂肪酸エステル ３質量部、グリセリン １２質量部、スクワラン ６質量部、ジメチルシリコーンオイル ２４質量部、ポリプロピレングリコール １質量部、増粘剤 ０．０６質量部、フェノキシエタノール ０．２質量部、エタノール ５質量部、水酸化ナトリウム ０．０１質量部及び精製水 残部を混合して、乳液の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例５：化粧用クリーム）
全体を１００質量部として、アラニン ０．１質量部、フラクトオリゴ糖 ０．１重量部、スクワラン １５．０質量部、ミリスチン酸オクチルドデシル ４．０質量部、水素添加大豆リン脂質 ０．２質量部、ブチルアルコール ２．４質量部、硬化油 １．５質量部、ステアリン酸 １．５質量部、親油型モノステアリン酸グリセリン １．５質量部、モノステアリン酸ポリグリセリル ０．５質量部、ベヘニルアルコール ０．８質量部、モノミリスチン酸ポリグリセリル ０．７質量部、サラシミツロウ ０．３質量部、ｄ－δ－トコフェロール ０．１質量部、メチルパラベン ０．３質量部、Ｃ１０～３０アルキル変性カルボキシビニルポリマー ０．２質量部、カルボキシビニルポリマー ０．１質量部、１，３－ブタンジオール １８．０質量部、水酸化ナトリウム ０．１質量部及び精製水 残部を混合して、化粧用クリームの態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例６：パック剤）
全体を１００質量部として、プラセンタ ０．１質量部、没食子酸 ０．０１質量部、ポリビニルアルコール ２０．０質量部、グリセリン ５．０質量部、エタノール ２０．０質量部、カオリン ６．０質量部、防腐剤 ０．２質量部、香料 ０．１質量部及び精製水 残部を混合して、パック剤の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例７：錠剤）
全体を１００質量部として、大麦若葉末 １０質量部、ショウガ抽出物 ８質量部、カフェイン５重量部、メリロート ５質量部、結晶性セルロース ２０質量部、乳糖 ５０質量部、ステアリン酸マグネシウム ４質量部及びコーンスターチ 残部を混合及び打錠することにより、錠剤の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例８：錠剤）
全体を１００質量部として、アラニン ０．５質量部、ケツメイシ末 ８質量部、メリロート ５質量部、フラクトオリゴ糖 ０．５質量部、結晶性セルロース ２０質量部、乳糖 ５０質量部、ステアリン酸マグネシウム ４質量部及びコーンスターチ 残部を混合及び打錠することにより、錠剤の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例９：顆粒剤）
全体を１００質量部として、ホップ末 １５質量部、ケツメイシ抽出物 ５質量部、乳糖 １０質量部、ステアリン酸カルシウム １質量部及び結晶性セルロース 残部を混合及び顆粒化することにより、顆粒剤の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例１０：カプセル剤）
全体を１００質量部として、ミント抽出物 １０質量部、生姜抽出物 ２０質量部、エラスチン５質量部、レシチン ８質量部及びオリーブ油 残部を混合して調製したものを内容液として、これをカプセル殻に内包することにより、カプセル剤の態様で本発明の組成物を調製した。

（配合例１１：液剤）
全体を１００質量部として、大麦若葉抽出物 ０．８４質量部、アルギニン １質量部、アラニン １質量部、果糖ブドウ糖液糖 １０質量部、クエン酸 １質量部、安息香酸ナトリウム ０．０２質量部、香料製剤 ２質量部、スクラロース ０．０５質量部、アセスルファムカリウム ０．０３質量部、及び精製水 残部を混合して、液剤の態様で本発明の組成物を調製した。

以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではなく、本発明の課題を解決し得る限り、本発明は種々の態様をとることができる。

特定成分であるトレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン、ミント及びホップが格別顕著なＵＣＰ１発現促進作用を有することを以下のとおりに実証した。

（１）被験物質
特定成分のうち、トレハロース、アスパルテーム、セラミド、プラセンタ、アラニン、ミント及びホップは市販のものを使用した。

大麦は次のとおりに調製した大麦の茎葉の乾燥粉末を用いた。すなわち、背丈が約３０ｃｍで刈り取った大麦の茎葉を水洗いし、付着した泥などを除去し、５～１０ｃｍ程度の大きさに切断する前処理を行った。前処理した茎葉を、９０～１００℃の熱湯で９０秒間～１２０秒間、１回のみブランチング処理し、その後、冷水で冷却した。続いて、得られた茎葉を、水分含量が５質量％以下となるまで、乾燥機中で、２０分間～１８０分間、８０℃～１３０℃の温風にて乾燥させた。乾燥した茎葉を、ミキサーを用いて、約１ｍｍの大きさに粗粉砕処理した。得られた大麦の茎葉を、粉砕機を用いて、２００メッシュ区分を９０％以上が通過するように微粉砕処理し、大麦の茎葉の乾燥粉末を得た。

（２）コラゲナーゼ溶液の調製
コラゲナーゼが０．２％（Ｗ／Ｖ）、ＢＳＡが１％（Ｗ／Ｖ）となるように調製したＤＭＥＭ培地を、室温で１時間振盪することによって、コラゲナーゼ溶液を調製した。

（３）褐色脂肪細胞液の調製
ＩＣＲマウス（九動）をジエチルエーテルで安楽殺した後、背部から褐色脂肪組織を摘出した。得られた褐色脂肪組織から、ピンセットを用いて、褐色脂肪の周辺に付着している脂肪組織、血管、筋肉などを取り除いた後、褐色脂肪をＤＭＥＭ中で３回洗浄した。次いで、コラゲナーゼ溶液に褐色脂肪を浸し、溶液中で褐色脂肪をハサミで細かく切り刻む細断処理に供した。細断処理した褐色脂肪をコラゲナーゼ溶液中で、３７℃で１時間インキュベートすることにより細胞分散液を得た。得られた細胞分散液を、１００μｍの孔径のセルストレイナーでろ過し、次いで遠心処理（８００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、２０℃）に供した。次いで、沈殿した細胞をＤＭＥＭで懸濁して、細胞懸濁液を得た。次いで、オートクレーブで滅菌処理した２５μｍフィルターを用いて、得られた細胞懸濁液をろ過した。ろ過上清を遠心（８００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、２０℃）した後、沈殿した細胞を１０ｖｏｌ％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで懸濁し、褐色脂肪細胞液とした。

（４）培地の調製
増殖培地として、１０ｖｏｌ％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いた。

分化誘導培地として、増殖培地に２．５μＭ デキサメタゾン、１０μｇ／ｍｌ インスリン及び０．５ｍＭ ＩＢＭＸを含有するものを調製した。

維持培地として、上記インスリン溶液を用いて、増殖培地に１０μｇ／ｍｌ インスリンを含有するものを調製した。

被験物質含有培地は以下のとおりに調製した。すなわち、各被験物質をＤＭＳＯに溶解後、維持培地で希釈して、ＤＭＳＯ終濃度が０．５ｖｏｌ％となるように調製し、フィルター滅菌した。滅菌後、０．５ｖｏｌ％ＤＭＳＯ含有維持培地を用いて所定濃度、すなわち、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントを２０μｇ／ｍｌとなるように希釈した。

（５）細胞培養
７５ｃｍ^２フラスコにコラーゲンコート溶液を５ｍｌ入れ、室温で約１時間静置後、コラーゲンコート溶液を吸引除去し、５ｍｌのＰＢＳで２回洗浄を行うことによって、コラーゲンコートフラスコを得た。

褐色脂肪細胞液をコラーゲンコートフラスコに加え、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター内で、褐色脂肪細胞を２４時間培養した。次いで、培養後の褐色脂肪細胞を、増殖培地を用いて１回洗浄した後、新しい増殖培地に交換し、サブコンフルエントになるまで培養を行った。

培養後の褐色脂肪細胞をトリプシン処理に供し浮遊させた。得られた浮遊細胞を、コラーゲンコート（コラーゲンコート溶液 ３５０μＬ／ウェル、ＰＢＳ洗浄 ３５０μＬ／ウェル×２回）した２４ウェルプレートの各ウェルに播種した。

増殖培地を用いてコンフルエントになるまで、褐色脂肪細胞を培養した。各ウェルより培地を除去後、各ウェルに分化誘導培地を５００μｌ添加し、４８時間培養した。

分化誘導培地を除去後、２０μｇ／ｍｌ被験物質含有培地の５００μｌを添加し、６日間培養した。培地は１日おきに交換した。コントロールとして被験物質を含有しない培地の５００μｌを添加し、６日間培養した。培地は１日おきに交換した。

８日間の培養後、上清を回収し、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（キアゲン社）を用いてＲＮＡを回収し、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（キアゲン社）を用いてｃＤＮＡを合成した。

得られたｃＤＮＡを鋳型として、ＵＣＰ１遺伝子に対するプライマー（キアゲン社）を用いて、Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｋｉｔ（キアゲン社）により定量リアルタイムＰＣＲを行い、ＵＣＰ１のｍＲＮＡ発現量を測定した。内在性コントロールとして、ＧＡＰＤＨプライマー（キアゲン社）を用いて、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現量を測定した。

（６）評価
ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントの各被験物質のそれぞれを供した場合における、ＵＣＰ１のｍＲＮＡ発現量の測定結果（コントロールのｍＲＮＡ発現量を１．００とした際の相対発現量）を表１に示す。

表１が示すように、ホップ、トレハロース、アスパルテーム、大麦、セラミド、プラセンタ、アラニン及びミントを被験物質とした場合は、ＵＣＰ１発現量は大きかった。

本発明の組成物は、非経口的及び経口的のいずれの態様においても適用可能な特定の成分を含むものであり、特にセルライト、肥満やそれらに伴う疾病を被る被験体にとって有用なものであり、このような被験体の健康及び福祉に資するものである。

Claims (2)

1. 大麦茎葉の粉砕末を有効成分とすることを特徴とするエネルギー消費促進用組成物（ただし、こうじかび、胚芽及び大麦の若葉を含有する漢方薬、を除く）。
2. 大麦茎葉の粉砕末を有効成分とすることを特徴とする熱産生促進用組成物（ただし、こうじかび、胚芽及び大麦の若葉を含有する漢方薬、を除く）。