JP7611908B2

JP7611908B2 - 抗血球凝集素抗体およびその使用方法

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Publication number: JP7611908B2
Application number: JP2022523575A
Authority: JP
Inventors: アリーナバウム; クリストスカイラツォウス
Original assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2019-10-28
Filing date: 2020-10-28
Publication date: 2025-01-10
Anticipated expiration: 2040-10-28
Also published as: JP2022553703A; US20240083983A1; AU2020374878A1; CL2022001067A1; CO2022005281A2; BR112022007923A2; WO2021086899A1; IL292353A; CN114761428A; US20210171612A1; CA3153944A1; US11773156B2; PH12022550963A1; KR20220088446A; EP4051707A1

Description

政府のライセンス権
本発明は、米国保健福祉省が授与した、契約ＨＨＳＯ１００２０１７０００２０Ｃに基づく政府支援を受けて行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

配列表
配列表の正式な写しは、ファイル名「１０６２５ＷＯ０１＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」、作成日２０２０年１０月２８日、およびサイズ約３６ＫＢの、ＡＳＣＩＩフォーマットの配列表として、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に本明細書と同時に提出される。このＡＳＣＩＩフォーマット書面に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

背景
インフルエンザは伝染性の高い疾患であり、パンデミック、流行、再流行および大流行の波によって特徴付けられる長い歴史を有する。毎年のワクチン接種の取り組みにもかかわらず、インフルエンザ感染症はかなりの罹患率および死亡率をもたらす。

インフルエンザウイルスは、４つのタイプ：Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤで構成される。インフルエンザＢは、季節性インフルエンザ感染症のかなりの数を引き起こし、入院を必要とする重度のインフルエンザと関連する。

血球凝集素は、２つの構造ドメイン、受容体結合部位（すなわち、頻繁な抗原ドリフトの影響を受ける）からなる球状頭部ドメイン、およびステム領域（インフルエンザウイルスの様々な株の間でより保存される）を含む、三量体糖タンパク質である。ＨＡタンパク質は、前駆体（ＨＡ０）として合成され、タンパク質分解処理を受けて、２つのサブユニット（ＨＡ１およびＨＡ２）を生成し、これらは互いに関連付けられ、ステム／球状頭部構造を形成する。ＨＡ１ペプチドは、ウイルスの細胞表面への付着に関与し、（ノイラミニダーゼとともに）ウイルスの宿主細胞への付着および侵入に必要である。ＨＡ２ペプチドは、エンドソーム内でのウイルス膜と細胞膜との融合を媒介するステム様構造を形成し、リボ核タンパク質複合体の細胞質への放出を可能にする。

インフルエンザウイルスの新しい株は、抗原ドリフトと呼ばれる現象、または新しい異なるエピトープを生成する血球凝集素分子またはノイラミニダーゼ分子の変異の結果として生じ得る。この結果、発生すると予測されるウイルスに対して毎年新しいワクチンを製造しなければならず、このプロセスはコストがかかるばかりでなく、非常に非効率的である。技術の進歩により、ワクチン組成物のための改善されたインフルエンザ抗原を製造する能力が改善されたが、インフルエンザに対する追加的な保護源を提供する必要性が残っている。

概要
本開示は、インフルエンザＢＨＡに結合する抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本抗体は、特にインフルエンザＢＨＡの活性を阻害または中和するのに有用である。

第１の態様では、本開示は、インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する、単離された組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、インフルエンザＢＨＡに特異的に結合する、単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片を提供し、この場合において該抗体が、以下の特徴：
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；
（ｂ）約１０^－１０Ｍ未満のＥＣ_５０でインフルエンザＢＨＡに結合する；
（ｃ）インフルエンザ感染動物の生存における増加を示す；ならびに／または
（ｄ）
（ｉ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
（ｉｉ）配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３））
を含む
のうちの１つ以上を有する。

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、動物（例えば、哺乳動物）において、皮下または静脈内のいずれかに投与した場合かつ／またはインフルエンザＢウイルスの感染前もしくは感染後に投与した場合、インフルエンザＢウイルスからの保護の増加をもたらす。

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、インフルエンザＢウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）において、皮下もしくは静脈内のいずれかに投与した場合かつ／またはインフルエンザＢウイルスの感染前もしくは感染後に投与した場合、インフルエンザＢ感染症の重症度を緩和することができる。

ある特定の実施形態では、本開示の抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザＢウイルスに曝露された動物（例えば、哺乳動物）に、感染の１日、２日、３日、４日、５日、６日または７日前から開始する、当該哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量として投与された場合、例えば、バロキサビルマルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤の経口投与と比較して、インフルエンザＢウイルスからの保護の増加をもたらす。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、動物（例えば、哺乳動物）において、当該動物の体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇ～約１５ｍｇ、例えば当該哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１２ｍｇ／ｋｇの単回皮下もしくは静脈内用量として投与された場合、等価動物（例えば、哺乳動物）に投与されているアイソタイプ（ネガティブ）対照抗体と比較して、インフルエンザＢウイルスからの保護の増加をもたらす。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、当該哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与として動物（例えば、哺乳動物）に投与された場合、バロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤の経口投与と比較して、インフルエンザＢからの保護の増加をもたらす。例えば、抗ウイルス剤は、オセルタミビルを約２ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回、５日間投与することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザＢウイルスに曝露され、かつ感染した動物（例えば、哺乳動物）の集団において、インフルエンザＢ曝露および感染の２４時間前に、体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回用量として投与された場合、約１００％の生存率をもたらす。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）において、インフルエンザＢ曝露および／または感染の１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前または７日前に、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量として投与された場合、１００％の生存率をもたらす。

特定の実施形態において、抗体、またはその抗原結合性断片は、感染後１日目または２日目または３日目に開始する約５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与としてインフルエンザウイルス感染哺乳動物に投与された場合、例えば、バロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤の経口投与と比較して、保護の増加を示す。例えば、抗ウイルス剤は、オセルタミビルを感染後１日目または２日目または３日目に開始して約２ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回、５日間投与することができる。

関連する実施形態では、本明細書で提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）において、皮下または静脈内のいずれかに投与した場合、かつ／またはインフルエンザウイルスの感染前もしくは感染後に投与した場合、保護の増加をもたらす。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、感染した哺乳動物に０．５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ、例えば約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１２ｍｇ／ｋｇの単回皮下または静脈内用量として投与された場合、アイソタイプ（ネガティブ）対照抗体を投与された動物と比較して、保護の増加を示す。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与としてインフルエンザウイルス感染した哺乳動物に投与された場合、バロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤の経口投与と比較して、保護の増加を示す。例えば、抗ウイルス剤は、オセルタミビルを約２ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回、５日間投与することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）の集団において、感染後２４時間以上経過した時点で、該動物の体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回投与として投与される場合、約１００％の生存率を示す。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）の集団において、感染後２４、４８、７２、または９６時間で、該動物の体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量として投与される場合、１００％の生存率を示す。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば哺乳動物）の集団において、該動物の体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量として投与される場合、例えばバロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤を受けている同等の動物集団において観察された８０％の生存率と比較して、約１００％の生存率を示す。例えば、抗ウイルス剤は、オセルタミビルを約２ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回、５日間経口投与することができる。本明細書に記載される、生存は、本開示の抗体、またはその抗原結合性断片の投与後の固定点で測定することができる（例えば、投与後１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１３日目、１４日目、１５日目、１６日目、１７日目、１８日目、１９日目、２０日目、２１日目、２２日目、２３日目、２４日目、２５日目、２６日目、２７日目、２８日目、２９日目、３０日目、３１日目、１週間目、２週間目、３週間目、４週間目、５週間目、６週間目、７週間目、８週間目、またはそれ以上）。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体、またはその抗原結合性断片は、バロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤を投与されたときに、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）における相加的保護効果を提供する。例えば、抗ウイルス剤は、感染後４８時間超で投与されるオセルタミビルとすることができる。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体、またはその抗原結合性断片は、バロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤を投与されたときに、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）における相加的保護効果を提供する。例えば、抗ウイルス剤は、感染後７２時間で投与されるオセルタミビルとすることができる。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体、またはその抗原結合性断片は、抗ウイルス剤と組み合わせて使用した場合、インフルエンザウイルスに感染した動物（例えば、哺乳動物）に、抗体を該動物の体重１ｋｇ当たり約７ｍｇ～約１５ｍｇの範囲の単回静脈内用量として投与し、かつ例えばバロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤を該動物の体重１ｋｇ当たり約２ｍｇの用量で、１日２回、５日間経口投与する場合に、相加的な保護効果を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示の抗体、またはその抗原結合性断片は、インフルエンザウイルス感染後９６時間でバロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤と組み合わせて使用された場合、相加的保護効果を提供し、この際、抗体が該動物の体重１ｋｇ当たり約７ｍｇ～約１５ｍｇの範囲の単回静脈内用量として動物に投与され、かつ例えばオセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤が該動物の体重１ｋｇ当たり約２ｍｇの用量で、１日２回、５日間経口投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片は、静脈内、鼻腔内、皮下、皮内、または筋肉内に投与されてもよく、抗ウイルス剤は、経口的にまたは静脈内に投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤は、本明細書で提供される抗体の投与前に、投与と同時に、または投与後に投与される。

いくつかの実施形態では、抗体、またはその抗原結合性断片、および／またはバロキサビル、マルボキシル、オセルタミビル、ザナミビル、またはピモジビルなどの抗ウイルス剤は、単回用量として、または複数回用量として投与されてもよい。

例示的な抗インフルエンザＢＨＡ抗体が、本明細書の表１および表２に提供される。表１は、例示的な抗インフルエンザＢＨＡ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）、重鎖（ＨＣ）、および軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列識別子を記載している。表２は、例示的な抗インフルエンザＢＨＡ抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣ、およびＬＣの核酸配列識別子を記載している。

本明細書において、表１に記載のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％であり、少なくとも９０％、少なくとも９１％であり、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含むＨＣＶＲを含む抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

いくつかの実施形態では、インフルエンザＢＨＡを特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２のＨＣＶＲアミノ酸配列を含む。

本明細書において、表１に記載のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％であり、少なくとも９０％、少なくとも９１％であり、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含むＬＣＶＲを含む抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

いくつかの実施形態では、インフルエンザＢＨＡを特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０のＬＣＶＲアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、インフルエンザＢＨＡを特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０の、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。

いくつかの実施形態では、単離された抗体または抗原結合性断片は、以下を含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、
（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン、および
（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン。

いくつかの実施形態では、インフルエンザＢＨＡに特異的に結合する単離された抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号４のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８のＨＣＤＲ３、（ｄ）配列番号１２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１４のＬＣＤＲ２、および（ｆ）配列番号１６のＬＣＤＲ３、を含む。

いくつかの実施形態では、インフルエンザＢＨＡに特異的に結合する単離された抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号８のＨＣＤＲ３と、（ｂ）配列番号１６のＬＣＤＲ３とを含む。

本開示は、配列番号４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号８のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号１２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号１４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号１６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号８／１６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本発明はまた、表１に示される例示的な抗インフルエンザＢＨＡ抗体のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列内に含有される６個のＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、配列番号４－６－８－１２－１４－１６を含む。

ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法は当該技術分野で既知であり、本明細書に開示の特定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するために使用することができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用することができる例示的な慣習としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般的な条件では、Ｋａｂａｔ定義は配列変動性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義はＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａ手法との間の折衷物である。例えば、Ｋａｂａｔ，”ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，”ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７）、およびＭａｒｔｉｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：９２６８－９２７２（１９８９）を参照されたい。公開データベースもまた、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。

さらに本明細書において、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含み、抗体またはその抗原結合性断片と、インフルエンザＢＨＡへの特異的結合に関して競合する抗体およびその抗原結合性断片も提供され、この場合において該ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはそれぞれ、表１に列挙されるＨＣＶＲ配列およびＬＣＶＲ配列に従うアミノ酸配列を有する。

本発明はまた、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含み、参照抗体またはその抗原結合性断片と、インフルエンザＢＨＡヘの結合について交差競合する、またはインフルエンザＢＨＡ上の同じエピトープに結合する、抗体および抗原結合性断片も提供され、この場合において該ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはそれぞれ、表１に列挙されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列に従うアミノ酸配列を有する。

本発明はまた、インフルエンザＢＨＡの宿主細胞への付着および／または侵入を遮断する、単離された抗体およびその抗原結合性断片を提供する。

特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、インフルエンザＢＨＡにおける第１のエピトープに対する第１の結合特異性および別の抗原に対する第２の結合特異性を含む二重特異性である。

第２の態様では、抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその一部をコードする核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子）が、本明細書に提供される。例えば、ＨＣＶＲアミノ酸配列をコードする核酸分子が表２に列挙され、特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号１のＨＣＶＲポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。ＬＣＶＲアミノ酸配列をコードする核酸分子もまた、表２に列挙され、特定の実施形態では、核酸分子は、配列番号９のＬＣＶＲポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。

表１に列挙されたＨＣＤＲ１アミノ酸配列をコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ１核酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。

表１に列挙されたＨＣＤＲ２アミノ酸配列をコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ２核酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。

表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列をコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ３核酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。

表１に列挙されたＬＣＤＲ１アミノ酸配列をコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ１核酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。

表１に列挙されたＬＣＤＲ２アミノ酸配列をコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ２核酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。

表１に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列をコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ３核酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。

ＨＣＶＲをコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、この場合において該ＨＣＶＲは、３つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）のセットを含み、該ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、表１に列挙される例示的な抗インフルエンザＨＡ抗体により定義されるとおりである。

ＬＣＶＲをコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、この場合において該ＬＣＶＲは、３つのＣＤＲ（すなわち、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）のセットを含み、該ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、表１に列挙される例示的な抗インフルエンザＨＡ抗体により定義されるとおりである。

ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子もまた本明細書で提供され、この場合において該ＨＣＶＲは、配列番号２のアミノ酸配列を含み、該ＬＣＶＲは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＶＲまたはＬＣＶＲポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む。ある特定の実施形態では、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは両方とも、表１に列挙される同じ抗インフルエンザＢＨＡ抗体から誘導される。

また、表１に列挙される重鎖アミノ酸配列のいずれかおよび／または軽鎖アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供される。

関連する態様では、抗インフルエンザＢＨＡ抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現することのできる組換え発現ベクターが本明細書で提供される。例えば、ベクターは、上述の核酸分子、すなわち、表１に記載されるようなＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む、組換え発現ベクターを含むことができる。このようなベクターが導入された宿主細胞、ならびに抗体または抗体断片の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養することにより抗体またはその部分を産生する方法、およびそのように産生された抗体および抗体断片を回収する方法も、本開示の範囲内に含まれる。

第３の態様では、本発明は、インフルエンザＢＨＡおよび薬学的に許容可能な担体に特異的に結合する、少なくとも１つの組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を含む医薬組成物を提供する。関連する態様では、組成物は、抗インフルエンザＢＨＡ抗体と第２の治療剤との組み合わせである。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、抗インフルエンザＢＨＡ抗体と有利に組み合わされる任意の薬剤である。抗インフルエンザＢＨＡ抗体と有利に組み合わせることができる例示的な薬剤としては、インフルエンザＨＡに結合し、かつ／もしくはインフルエンザＨＡ活性を阻害する他の薬剤（インフルエンザＡＨＡなどに結合するかつ／もしくは阻害する抗体のような、他の抗体もしくはそれらの抗原結合性断片を含む）、および／またはインフルエンザＨＡには直接結合しないにもかかわらず、宿主細胞の感染性を含むウイルス活性を阻害する薬剤が挙げられるが、これらに限定しない。特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）第１の抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と、（ｂ）第２の抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と（ここで、第１の抗体はインフルエンザＢＨＡの第１のエピトープに結合し、第２の抗体はインフルエンザＢＨＡの第２のエピトープに結合し、第１および第２のエピトープは別個であり重複しない）、（ｃ）薬学的に許容可能な担体または希釈剤と、を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）第１の抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と、（ｂ）第２の抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と（ここで、第１の抗体は、インフルエンザＢＨＡ抗体への結合について、第２の抗体と交差競合しない）、（ｃ）薬学的に許容可能な担体または希釈剤と、を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）第１の抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と、（ｂ）異なるインフルエンザ抗原と相互作用する、第２の抗インフルエンザ抗体またはその抗原結合性断片と（ここで、第１の抗体は、インフルエンザＢＨＡのエピトープと結合し、第２の抗体は異なるインフルエンザ抗原のエピトープと結合する）、（ｃ）薬学的に許容可能な担体または希釈剤と、を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）第１の抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と、（ｂ）異なるウイルス（非インフルエンザ）抗原と相互作用する、第２の抗体またはその抗原結合性断片と（ここで、第１の抗体は、インフルエンザＢＨＡ抗体のエピトープと結合し、第２の抗体は異なるウイルス（非インフルエンザ）抗原のエピトープと結合する）、（ｃ）薬学的に許容可能な担体または希釈剤と、を含む。本明細書で提供される抗インフルエンザＢＨＡ抗体が関与する追加的な併用療法および合剤（ｃｏ－ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）は、本明細書の他の場所で開示されている。特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と、（ｂ）抗インフルエンザＡＨＡ抗体またはその抗原結合性断片と、を含む。

第４の態様では、本明細書では、インフルエンザＢＨＡに関連する疾患または障害（対象のウイルス感染症など）またはウイルス感染症に関連する少なくとも１つの症状を、本明細書で提供された抗インフルエンザＢＨＡ抗体または抗体の抗原結合性部分を使用して、治療するための治療方法であって、抗体または抗体の抗原結合性断片を含む医薬組成物の治療有効量を、治療を必要とする対象に投与することを含む、治療方法を提供する。治療される障害は、インフルエンザＨＡ活性の阻害によって、改善、回復、抑制、または予防される任意の疾患または容態である。特定の実施形態では、本開示は、インフルエンザＢ感染症の少なくとも１つの症状を予防、治療または改善するための方法を提供し、この方法は、治療有効量の抗インフルエンザＨＡ抗体またはその抗原結合性断片を、治療を必要とする対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状を、本明細書で提供される抗インフルエンザＢＨＡ抗体を投与することによって、重症度、期間、または発生の頻度を改善、緩和または低減させる方法であって、少なくとも１つの症状が、頭痛、発熱、痛み、鼻漏（鼻づまり）、悪寒、倦怠感、脱力感、咽喉痛、咳、息切れ、嘔吐、下痢、肺炎、気管支炎、および死亡からなる群から選択される方法を提供する。

特定の実施形態では、本明細書では、対象におけるウイルス量を減少させる方法であって、インフルエンザＢＨＡに結合し、インフルエンザウイルスの結合および／または宿主細胞への侵入を遮断する抗体またはその断片の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。

特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、インフルエンザ感染症を有する、またはそのリスクがある、またはインフルエンザ感染症を発症しやすい対象に予防的または治療的に投与されうる。リスクのある対象としては、免疫不全の人、例えば、自己免疫疾患による免疫不全の人、または免疫抑制療法を受けている人（例えば、臓器移植後）、またはヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ）もしくは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に罹患している人、白血球を枯渇もしくは破壊する特定の形態の貧血、放射線療法もしくは化学療法を受けている人、または炎症性障害に罹患している人が挙げられるが、これらに限定されない。インフルエンザ感染症のリスクがある他の対象には、高齢者（６５歳以上）、２歳未満の子ども、医療従事者、および肺感染症、心疾患、または糖尿病などの基礎疾患を有する人々が含まれる。また、感染した個人と物理的に接触または物理的に接近した人はだれでも、インフルエンザウイルス感染症を発症するリスクが高くなる。さらに、対象は、疾患の発生に接近しているため、例えば、人口密集都市に在住しているか、インフルエンザウイルスの感染が確認されているもしくは疑われている対象のすぐ近くに在住しているため、または職業の選択ため、例えば、病院従事者、医薬品研究者、感染地域への旅行者、もしくは飛行機を頻繁に利用する人のため、インフルエンザ感染症にかかるリスクがある。

ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合性断片は、それを必要とする対象へ、第２の治療剤との組み合わせで投与される。第２の治療剤は、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬など）、抗感染薬、インフルエンザＨＡに対する異なる抗体（インフルエンザＡＨＡに対する抗体）、異なるインフルエンザ抗原への抗体（例えば、ノイラミニダーゼ）、抗ウイルス薬、充血緩和剤、抗ヒスタミン剤、インフルエンザ用ワクチン、抗酸化剤などの栄養補助食品、およびインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状を改善するために、または患者のウイルス量の低減させるために有用な当技術分野で公知の任意の他の薬剤もしくは療法からなる群から選択され得る。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、本明細書に提供する抗体またはその抗原結合性断片に関連する任意の起こり得る副作用に対し、そのような副作用が発生した場合、この副作用に対処するか、またはこれを軽減するのを助ける薬剤であり得る。本抗体またはその断片は、皮下に、静脈内に、皮内に、腹腔内に、経口で、鼻腔内に、筋肉内に、または頭蓋内に投与することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、対象の血清中の抗体の最大濃度のために、単回静脈内注入として投与されてもよい。抗体またはその断片は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～対象の体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇの用量で投与され得る。特定の実施形態では、本明細書に開示された抗体は、５０ｍｇ～５０００ｍｇを含む１つ以上の用量で投与されてもよい。

第５の態様では、インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片が本明細書において提供され、抗体が、以下の特徴：
（ａ）約１０^－９Ｍ未満のＥＣ_５０でインフルエンザＢＨＡに結合する；
（ｂ）インフルエンザＢ感染動物への投与後に、当該投与なしの同等のインフルエンザＢ感染動物と比較して、当該インフルエンザＢ感染動物の生存における増加を示す；ならびに／または
（ｃ）
（ｉ）配列番号２に記載される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
（ｉｉ）配列番号１０に記載される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）
を含む
のうちの１つ以上を有する。

いくつかの実施形態では、哺乳動物に、哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約５ｍｇまたは約０．５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量として予防的に投与された場合、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、その後のインフルエンザＢウイルスへの曝露による感染から哺乳動物を保護する。いくつかの実施形態では、インフルエンザＢウイルスへの曝露前に哺乳動物に予防的に投与された場合、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、哺乳動物におけるインフルエンザ感染症のリスクを減少させる。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が哺乳動物に投与された場合、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、当該哺乳動物におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状の重症度、期間、または発生頻度を改善、緩和、または低減させる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの症状は、頭痛、発熱、痛み、鼻漏（鼻閉）、悪寒、倦怠感、脱力感、咽喉痛、咳、息切れ、嘔吐、下痢、肺炎、気管支炎、および死亡からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与される場合、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に少なくとも約８０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与される場合、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に少なくとも約９０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約８０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約９０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、生存率は、投与後１３日目で明らかである。

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、上記のような単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。

第６の態様では、本明細書で提供されるのは、単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと、を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片である。

いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約５ｍｇのまたは約０．５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与として哺乳動物に予防的に投与される場合、その後のインフルエンザＢウイルスへの曝露による感染から哺乳動物を保護する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、インフルエンザＢウイルスへの曝露前に哺乳動物に予防的に投与される場合、当該哺乳動物におけるインフルエンザ感染症のリスクは減少する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が哺乳動物に投与された場合、当該単離された抗体またはその抗原結合性断片は、当該哺乳動物におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状の重症度、期間、または発生頻度を改善、緩和、または低減させる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの症状は、頭痛、発熱、痛み、鼻漏（鼻閉）、悪寒、倦怠感、脱力感、咽喉痛、咳、息切れ、嘔吐、下痢、肺炎、気管支炎、および死亡からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に少なくとも約８０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与される場合、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に少なくとも約９０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約８０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約９０％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片が、約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与されるとき、当該複数の哺乳動物は、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する。いくつかの実施形態では、生存率は、投与後１３日目で明らかである。

いくつかの実施形態では、上記の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０の、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異的抗体である。

第７の態様では、本明細書で提供されるのは上記の単離された抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容可能な担体または希釈剤とを含む医薬組成物である。

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、第２の治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、抗ウイルス薬、抗炎症薬、インフルエンザＨＡに特異的に結合する異なる抗体、インフルエンザ用ワクチン、栄養補助食品、およびインフルエンザ感染症を治療するための別の緩和療法からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗炎症薬は、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、栄養補助食品は抗酸化剤である。いくつかの実施形態では、抗ウイルス薬はオセルタミビルである。いくつかの実施形態では、抗ウイルス薬は、抗インフルエンザＡ薬である。いくつかの実施形態では、抗インフルエンザＡ薬は抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はインフルエンザＡＨＡに特異的に結合する。

いくつかの実施形態では、本開示は、上述の抗体のＨＣＶＲまたはＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド分子を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、そのポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、そのベクターを含む細胞を提供する。

第８の態様では、インフルエンザに感染した対象においてインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状を予防、治療、または改善する方法が本明細書に提供され、本方法は、上述の抗体もしくは抗原結合性断片、または上述の医薬組成物を当該対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの症状が、熱、咳、体の痛み、鼻漏、息切れ、肺炎および気管支炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、当該対象に予防的に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、免疫不全の個人、６５歳以上の成人、医療従事者、および病歴または基礎疾患を有する人、からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、基礎疾患は、心臓の不具合および糖尿病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、第２の治療剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、抗ウイルス薬、抗炎症薬、インフルエンザＨＡに特異的に結合する異なる抗体、インフルエンザ用ワクチン、栄養補助食品、およびインフルエンザ感染症を治療するための他の任意の緩和療法からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗炎症薬は、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、栄養補助食品は抗酸化剤である。いくつかの実施形態では、当該抗体またはその抗原結合性断片のように、第２の治療剤が異なる投与経路を介して投与される。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、経口投与される。いくつかの実施形態では、抗ウイルス薬は、オセルタミビルである。いくつかの実施形態では、オセルタミビルは、当該抗体またはその抗原結合性断片の投与前に投与される。いくつかの実施形態では、オセルタミビルは、当該抗体またはその抗原結合性断片と同時に投与される。いくつかの実施形態では、オセルタミビルは、当該抗体またはその抗原結合性断片の投与後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ウイルス薬は、抗インフルエンザＡ薬である。いくつかの実施形態では、抗インフルエンザＡ薬は抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はインフルエンザＡＨＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下投与、静脈内投与、皮内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、または経口投与される。

本開示はまた、インフルエンザＨＡ結合および／または活性の遮断から利益を得るであろう疾患または障害を治療するための、抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片の使用を含む。本開示はまた、インフルエンザＨＡ結合および／または活性の遮断から利益を得るであろう疾患または障害の治療のための薬剤の製造における、抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片の使用を含む。

[本発明１００１]
インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する、単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片であって、
前記抗体が、以下の特徴：
（ａ）約１０ ^－９Ｍ未満のＥＣ _５０でインフルエンザＢＨＡに結合する；
（ｂ）インフルエンザＢ感染動物への投与後に、前記投与なしの同等のインフルエンザＢ感染動物と比較して、前記インフルエンザＢ感染動物の生存における増加を示す；ならびに／または
（ｃ）
（ｉ）配列番号２に記載される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ内に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および
（ｉｉ）配列番号１０に記載される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）
を含む
のうちの１つ以上を有する、単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００２]
哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約５ｍｇまたは約０．５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量として前記哺乳動物に予防的に投与された場合、その後のインフルエンザＢウイルスへの曝露による感染から前記哺乳動物を保護する、本発明１００１の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００３]
インフルエンザＢウイルスへの曝露前に哺乳動物に予防的に投与された場合、前記哺乳動物におけるインフルエンザ感染症のリスクを減少させる、本発明１００１または１００２の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００４]
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が哺乳動物に投与された場合、前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、前記哺乳動物におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状の重症度、期間、または発生頻度を、改善、緩和、または低減する、本発明１００１～１００３のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００５]
前記少なくとも１つの症状が、頭痛、発熱、痛み、鼻漏（鼻閉）、悪寒、倦怠感、脱力感、咽喉痛、咳、息切れ、嘔吐、下痢、肺炎、気管支炎、および死亡からなる群から選択される、本発明１００４の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００６]
約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも約８０％の生存率を有する、本発明１００１～１００５のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００７]
約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも約９０％の生存率を有する、本発明１００１～１００６のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００８]
約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する、本発明１００１～１００７のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１００９]
約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約８０％の生存率を有する、本発明１００１～１００５のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１０]
約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約９０％の生存率を有する、本発明１００１～１００５および１００９のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１１]
約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する、本発明１００１～１００５、１００９および１０１０のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１２]
前記生存率が、投与後１３日目に明らかである、本発明１００６～１０１１のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１３]
配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、本発明１００１～１０１２のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１４]
配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、本発明１００１～１０１３のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１５]
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１６]
インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する、本発明１０１５の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１７]
哺乳動物の体重１ｋｇ当たり約５ｍｇまたは約０．５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内用量として予防的に前記哺乳動物に投与された場合、その後のインフルエンザＢウイルスへの曝露による感染から前記哺乳動物を保護する、本発明１０１５または１０１６の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１８]
インフルエンザＢウイルスへの曝露前に哺乳動物に予防的に投与された場合、前記哺乳動物におけるインフルエンザ感染症のリスクを低減させる、本発明１０１５～１０１７のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０１９]
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が哺乳動物に投与された場合、前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、前記哺乳動物におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状の重症度、期間、または発生頻度を、改善、緩和、または低減する、本発明１０１５～１０１８のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２０]
前記少なくとも１つの症状が、頭痛、発熱、痛み、鼻漏（鼻閉）、悪寒、倦怠感、脱力感、咽喉痛、咳、息切れ、嘔吐、下痢、肺炎、気管支炎、および死亡からなる群から選択される、本発明１０１９の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２１]
約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも約８０％の生存率を有する、本発明１０１４～１０２０のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２２]
約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも約９０％の生存率を有する、本発明１０１４～１０２１のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２３]
約０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する、本発明１０１４～１０２２のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２４]
約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約８０％の生存率を有する、本発明１０１４～１０２０のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２５]
約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約９０％の生存率を有する、本発明１０１４～１０２０および１０２４のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２６]
約５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に約１００％の生存率を有する、本発明１０１４～１０２０、１０２４および１０２５のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２７]
前記生存率が、投与後１３日目に明らかである、本発明１０２１～１０２６のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２８]
配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、本発明１０１４～１０２７のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０２９]
配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、本発明１０１４～１０２８のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０３０]
配列番号２／１０の、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、本発明１００１～１０２９のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０３１]
ＩｇＧ１抗体である、本発明１００１～１０３０のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０３２]
ＩｇＧ４抗体である、本発明１００１～１０３０のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０３３]
二重特異性抗体である、本発明１００１～１０３０のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[本発明１０３４]
本発明１００１～１０３３のいずれかの単離された抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容可能な担体または希釈剤とを含む、医薬組成物。
[本発明１０３５]
第２の治療剤をさらに含む、本発明１０３４の医薬組成物。
[本発明１０３６]
前記第２の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬、インフルエンザＨＡに特異的に結合する異なる抗体、インフルエンザ用ワクチン、栄養補助食品、およびインフルエンザ感染症を治療するための別の緩和療法からなる群から選択される、本発明１０３５の医薬組成物。
[本発明１０３７]
前記抗炎症薬が、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、本発明１０３６の医薬組成物。
[本発明１０３８]
前記栄養補助食品が、抗酸化剤である、本発明１０３６の医薬組成物。
[本発明１０３９]
前記抗ウイルス薬が、オセルタミビルである、本発明１０３６の医薬組成物。
[本発明１０４０]
前記抗ウイルス薬が、抗インフルエンザＡ薬である、本発明１０３６の医薬組成物。
[本発明１０４１]
前記抗インフルエンザＡ薬が、抗体である、本発明１０４０の医薬組成物。
[本発明１０４２]
前記抗体が、インフルエンザＡＨＡに特異的に結合する、本発明１０４１の医薬組成物。
[本発明１０４３]
本発明１００１～１０３３のいずれかの抗体のＨＣＶＲまたはＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド分子。
[本発明１０４４]
本発明１０４３のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
[本発明１０４５]
本発明１０２８のベクターを含む、細胞。
[本発明１０４６]
インフルエンザに感染した対象におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状を予防、治療、または改善する方法であって、
前記対象に、本発明１００１～１０３３のいずれかの抗体もしくは抗原結合性断片、または本発明１０３４～１０４２のいずれかの医薬組成物を投与すること
を含む、方法。
[本発明１０４７]
前記少なくとも１つの症状が、熱、咳、体の痛み、鼻漏、息切れ、肺炎および気管支炎からなる群から選択される、本発明１０４６の方法。
[本発明１０４８]
前記医薬組成物が、前記対象に予防的に投与される、本発明１０４６または１０４７の方法。
[本発明１０４９]
前記対象が、免疫不全の個人、６５歳以上の成人、医療従事者、および病歴または基礎疾患を有する人からなる群から選択される、本発明１０４６～１０４８のいずれかの方法。
[本発明１０５０]
前記基礎疾患が、心臓の不具合および糖尿病からなる群から選択される、本発明１０４９の方法。
[本発明１０５１]
前記医薬組成物が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、本発明１０４６～１０５０のいずれかの方法。
[本発明１０５２]
前記第２の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬、インフルエンザＨＡに特異的に結合する異なる抗体、インフルエンザ用ワクチン、栄養補助食品、およびインフルエンザ感染症を治療するための別の緩和療法からなる群から選択される、本発明１０５１の方法。
[本発明１０５３]
前記抗炎症薬が、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、本発明１０５２の方法。
[本発明１０５４]
前記栄養補助食品が、抗酸化剤である、本発明１０５３の方法。
[本発明１０５５]
前記抗体またはその抗原結合性断片のように、前記第２の治療剤が異なる投与経路を介して投与される、本発明１０５１～１０５４のいずれかの方法。
[本発明１０５６]
前記第２の治療剤が、経口投与される、本発明１０５１～１０５５のいずれかの方法。
[本発明１０５７]
前記抗ウイルス薬が、オセルタミビルである、本発明１０５２の方法。
[本発明１０５８]
前記オセルタミビルが、前記抗体またはその抗原結合性断片の投与前に投与される、本発明１０５７の方法。
[本発明１０５９]
前記オセルタミビルが、前記抗体またはその抗原結合性断片と同時に投与される、本発明１０５７の方法。
[本発明１０６０]
前記オセルタミビルが、前記抗体またはその抗原結合性断片の投与後に投与される、本発明１０５７の方法。
[本発明１０６１]
前記抗ウイルス薬が、抗インフルエンザＡ薬である、本発明１０５２の方法。
[本発明１０６２]
前記抗インフルエンザＡ薬が、抗体である、本発明１０６１の方法。
[本発明１０６３]
前記抗体が、インフルエンザＡＨＡに特異的に結合する、本発明１０６２の方法。
[本発明１０６４]
前記医薬組成物が、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、鼻腔内、または経口投与される、本発明１０４６～１０６３のいずれかの方法。
他の実施形態は、後に続く発明を実施するための形態の検討から明らかになるであろう。

詳細な説明
本方法について記述する前に、本発明が本明細書に記述された特定の方法および実験条件に限定されず、それはこのような方法および条件が変化する場合があるからであることが理解されるべきである。本開示の範囲は添付の特許請求の範囲のみによって制限されるため、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的であり、制限することを意図しないことも理解されるべきである。

別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料が、本開示の実施または試験で使用され得るが、好ましい方法および材料をこれから記載する。本明細書に述べたすべての刊行物はその全体を参照することにより本明細書に組み込まれる。

本開示は、インフルエンザＢＨＡに結合する抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本発明の抗体は、特にインフルエンザＢＨＡの活性を阻害または中和するのに有用である。

本明細書において提供される抗体は、完全長（例えば、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４完全長抗体）であってもよく、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、またはｓｃＦｖ断片）のみを含んでもよく、および例えば、宿主における持続性を高めるため、またはエフェクター機能を増加させるためもしくは残存するエフェクター機能を排除するためなど、改変されていない抗体と比較して機能性に影響を与えるように改変されてもよい（Ｒｅｄｄｙｅｔａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５－１９３３）。特定の実施形態では、抗体は二重特異性であってもよい。

いくつかの実施形態では、抗体は、インフルエンザウイルスの宿主細胞への付着を遮断する、および／またはインフルエンザウイルスの宿主細胞への侵入を防止するのに有用である。いくつかの実施形態では、抗体は、ウイルスの細胞間の伝播を阻害することによって機能する。特定の実施形態では、抗体は、対象におけるインフルエンザウイルス感染症の少なくとも１つの症状の予防、治療、または改善に有用である。特定の実施形態では、抗体は、インフルエンザウイルス感染症を有するか、またはこれにかかるリスクがある対象に、予防的または治療的に投与することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供される少なくとも１つの抗体を含有する組成物は、ワクチンが禁忌である対象、または例えば高齢患者、非常に若い患者、ワクチンの１つ以上の成分に対してアレルギーの可能性がある患者、またはワクチンの免疫原に対して非反応性の免疫不全患者など、ワクチンの有効性が低い対象に投与することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供される少なくとも１つの抗体を含有する組成物は、インフルエンザ流行中に、医療スタッフ、入院患者または高齢者施設居住者、または他の高リスク患者に投与することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供される少なくとも１つの抗体を含有する組成物は、毎年のワクチンが無効であると予測される場合、または主要な抗原シフトを受けた菌株でのパンデミックの場合に、第一選択治療として患者に投与することができる。

定義
「インフルエンザ血球凝集素」という用語はまた「インフルエンザＨＡ」とも呼ばれ、ウイルスの宿主細胞への付着（α－２，３シアル酸またはα－２，６シアル酸へのＨＡ１結合を介して）および侵入（立体構造変化による）を媒介する、インフルエンザウイルス粒子表面に見られる三量体糖タンパク質である。ＨＡは、２つの構造ドメイン、受容体結合部位を含む球状頭部ドメイン（高頻度の抗原性変異の影響を受けやすい）およびステム領域（インフルエンザウイルスの様々な株の間でより保存される）からなる。インフルエンザＨＡは、前駆体（ＨＡ０）として合成され、タンパク質分解処理を受けて、２つのサブユニット（ＨＡ１およびＨＡ２）を生成し、これらは互いに会合して、ステム／球状頭部構造を形成する。ウイルスＨＡは、ウイルスで最も変化しやすい抗原であるが（１８のサブタイプは２つのグループに分類可能）、ステム（ＨＡ２）は各グループ内で高度に保存されている。完全長インフルエンザＢＨＡのアミノ酸配列は、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７、配列番号２１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ４３６９７．１）からのＨＡ、Ｂ／Ｎａｎｃｈａｎｇ／３４５１／９３、配列番号２２（部分配列、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＤ０２８０７．１）からのＨＡ、Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１１／１９９４、配列番号２３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＢＮ５０７１２．１）からのＨＡ、およびＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６、配列番号２４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＣＡ３３４９３．１）からのＨＡによって例示される。「インフルエンザ－ＨＡ」という用語はまた、他のインフルエンザＢ分離株ならびにインフルエンザＡ分離株から単離されたインフルエンザＨＡのタンパク質バリアントも含む。「インフルエンザ－ＨＡ」という用語はまた、組換えインフルエンザＨＡまたはその断片を含む。この用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃ、またはシグナル配列に結合された、インフルエンザＨＡまたはその断片を包含する。

「インフルエンザ感染症」という用語は、本明細書で使用される場合、「インフルエンザ（ｆｌｕ）」としても特徴付けられ、インフルエンザウイルスによって引き起こされる重度の急性呼吸器疾患を指す。この用語には、呼吸器感染症、ならびに高熱、頭痛、全身の痛みおよび疼痛、倦怠感および脱力感、場合によっては極度の疲労感、鼻づまり、くしゃみ、咽喉痛、胸部不快感、咳、息切れ、気管支炎、肺炎、および重度の場合は死亡を含む、症状が含まれる。

「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｓｅｎｓｏｒＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ，ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出によってリアルタイムでの生体分子相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。

バイオレイヤー干渉法は、生体分子の相互作用を測定するための無標識の技術である。これは、バイオセンサー先端上の固定化タンパク質レイヤーおよび内部参照レイヤーの２つの表面から反射される白色光の干渉パターンを分析する光学分析技術である。バイオセンサー先端に結合した分子数の変化により、リアルタイムで測定できる干渉パターンのシフトが生じる（Ａｂｄｉｃｈｅ，Ｙ．Ｎ．，ｅｔａｌ．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（２００８），３７７（２），２０９－２１７）。特定の実施形態では、「リアルタイムのバイオレイヤー干渉計に基づくバイオセンサー（ＯｃｔｅｔＨＴＸアッセイ」を使用して、特定の抗インフルエンザＨＡ抗体の結合特性を評価した。

「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２つより多くのエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合してもよく、異なる生物学的効果を有してもよい。「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。この用語は、抗体が結合する抗原の領域も指す。エピトープは、構造的なものまたは機能的なものとして定義されてもよい。機能的エピトープは、概して、構造エピトープのサブセットであり、相互作用のアフィニティに直接関与する残基を有する。エピトープは、立体配座的でもあり得、すなわち、非線形アミノ酸から構成され得る。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基のような分子の化学的に活性のある表面基である決定基を含んでもよく、ある特定の実施形態では、特異的三次元構造特徴、および／または特定の比電荷特徴を有してもよい。

本明細書で使用される場合、「交差競合する」という用語は、抗原に結合し、別の抗体またはその抗原結合性断片の結合を阻害または遮断する、抗体またはその抗原結合性断片を意味する。この用語はまた、２つの抗体間の両方向の競合、すなわち、第１の抗体が結合し、かつ第２の抗体の結合を遮断し、またその逆も含む。ある特定の実施形態では、第１の抗体および第２の抗体は、同じエピトープに結合してもよい。あるいは、第１および第２の抗体は、異なるが重複するエピトープに結合することができ、その結果、１つの結合が、例えば、立体障害を介して、第２の抗体の結合を阻害または遮断する。抗体間の交差競合は、当技術分野で既知の方法、例えば、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイによって測定され得る。試験抗体が、参照抗インフルエンザＢ抗体と交差競合するかどうかを判定するために、参照抗体は、飽和条件下で、インフルエンザウイルスＨＡまたはペプチドに結合させる。次にインフルエンザウイルスＨＡに結合する試験抗体の能力が評価される。試験抗体が、参照抗インフルエンザウイルスＨＡ抗体との飽和結合後に、インフルエンザウイルスＨＡに結合することができる場合、試験抗体は、参照抗インフルエンザウイルスＨＡ抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。一方で、試験抗体が、参照抗インフルエンザウイルスＨＡ抗体との飽和結合後に、インフルエンザウイルスＨＡに結合できない場合、試験抗体は、参照抗インフルエンザウイルスＨＡ抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。

「治療有効量」という句によって意味されるのは、それが投与されて所望の効果をもたらす量である。正確な量は、治療の目的に依存し、既知の技術を使用して当業者によって確認できるであろう（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）ＴｈｅＡｒｔ，ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。

本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、ウイルス感染症などの疾患または障害の改善、予防、および／または治療を必要とする動物、例えばヒトなどの哺乳動物を指す。対象はインフルエンザ感染症を有するか、またはインフルエンザウイルス感染症を発症しやすい可能性がある。「インフルエンザウイルス感染症を発症しやすい」対象、または「インフルエンザウイルス感染症にかかるリスクが高い可能性のある」対象とは、自己免疫疾患による免疫不全を有する対象、免疫抑制療法を受けている人（例えば、臓器移植後）、ヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ）または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に罹患している人、白血球を枯渇または破壊する特定の形態の貧血、放射線療法または化学療法を受けている人、または炎症性障害に罹患している人である。さらに、極めて若年または高齢の対象は、リスクが高まる。感染した個人と身体的に接触または身体的に接近した人はだれでも、インフルエンザウイルス感染症の発症のリスクが高くなる。さらに、対象は、疾患の発生に接近しているため、例えば、疾患の発生に接近しているため、例えば、人口密集都市に在住しているか、インフルエンザウイルスの感染が確認されているもしくは疑われている対象のすぐ近くに在住しているため、または職業の選択ため、例えば、病院従事者、医薬品研究者、感染地域への旅行者、もしくは飛行機を頻繁に利用する人であるため、インフルエンザ感染症にかかるリスクがある。

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、または「治療」という用語は、本明細書に開示される抗体などの治療剤を、治療を必要とする対象に投与することによる、インフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状または兆候の重症度の低減または改善を指す。この用語には、疾患の進行の阻害または感染の悪化の阻害が含まれる。この用語は、疾患の肯定的な予後も含み、すなわち、本明細書に開示される抗体などの治療剤の投与に際し、対象は感染していない可能性があるか、またはウイルス力価が低減しているか、もしくは全くない可能性がある。治療剤は、治療用量で対象に投与されてもよい。

「予防する」、「予防すること」または「予防」という用語は、本明細書に開示される抗体の投与に際し、インフルエンザ感染症の顕在化の阻害、またはインフルエンザ感染症の任意の症状もしくは兆候の阻害を指す。この用語は、ウイルスに曝された、またはインフルエンザ感染症のリスクのある対象における感染拡大の予防を含む。

本明細書で使用される場合、「保護効果」は、抗ウイルス剤などの薬剤、または本明細書に開示される抗インフルエンザ－ＨＡ抗体などの抗体が、例えば、（未治療で感染性病原体にも曝露された同等の対象集団と比較して）感染病原体への曝露後の生存率における増加、（治療前の対象と比較して）ウイルス量における減少、または（治療前の対象と比較して）感染病原体に関連する少なくとも１つの症状の改善、のうちの任意の１つ以上をもたらすことができるかどうかを決定するために、当技術分野で公知の任意の標準的手順によって実証されてもよい。

本明細書で使用される場合、「抗ウイルス薬」という用語は、対象のウイルス感染症を治療、予防、または改善するために使用される任意の抗感染薬または治療法を指す。「抗ウイルス薬」という用語には、ＴＡＭＩＦＬＵ（登録商標）（オセルタミビル）、ＲＥＬＥＮＺＡ（登録商標）（ザナミビル）、バロキサビル、マルボキシル、リバビリン、またはインターフェロンアルファ２ｂが含まれるが、これらに限定されない。「抗ウイルス薬」は、抗ウイルス抗体も含む。例えば、抗ウイルス薬は、インフルエンザ感染症（例えば、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、またはその両方）を治療、予防、または改善するために使用される抗体であってもよい。こうした抗体は、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、またはその両方からの血球凝集素を標的とすることができる。本開示では、治療される感染症はインフルエンザウイルスによって引き起こされる。

概説
インフルエンザは、オルトミクソウイルス（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）科のＲＮＡウイルス（インフルエンザウイルス）によって引き起こされる感染性疾患である。インフルエンザウイルスは、コアタンパク質に基づいてＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤの４つの属に分類され、ウイルスエンベロープ糖タンパク質である血球凝集素（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（ＮＡ）によって決定されるサブタイプにさらに分類される。インフルエンザＢウイルスは、均質な群を形成し、１９７０年代に２つの抗原学的に区別可能な系統、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７およびＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８に分かれ始め、現在ではＶｉｃｔｏｒｉａ系統およびＹａｍａｇａｔａ系統として知られている。インフルエンザＡウイルスは、哺乳動物および鳥類の様々な種に感染するが、Ｂ型およびＣ型の感染は主にヒトに限定されている。インフルエンザＤは、主にウシに感染するが、ヒトには感染しない。Ａ型およびＢ型のみが、懸念されるヒト疾患を引き起こす。

インフルエンザウイルスの高い突然変異率および頻繁な遺伝子再集合は、ＨＡおよびＮＡ抗原の大きな変動に寄与する。小さな変化を引き起こす小さな点突然変異（「抗原ドリフト」）は、比較的頻繁に起こる。抗原ドリフトは、ウイルスが免疫認識を回避することを可能にし、パンデミック期間中にインフルエンザの発生が繰り返される。ＨＡ抗原の主な変化（「抗原シフト」）は、様々なインフルエンザサブタイプからの遺伝物質の再集合によって引き起こされる。新しいパンデミック株をもたらす抗原シフトは、例えば、同時感染したブタなど、動物とヒトのサブタイプ間の再集合を通して発生する、稀な事象である。

ＨＡはホモ三量体前駆体ポリペプチドＨＡ０として合成される。各モノマーは、翻訳後に独立して切断され、単一のジスルフィド結合によって連結された２つのポリペプチド、ＨＡ１およびＨＡ２を形成することができる。より大きなＮ末端断片（ＨＡＬ３２０－３３０アミノ酸）は、受容体結合部位、およびウイルス中和抗体によって認識されるほとんどの決定因子を含有する、膜遠位球状ドメインを形成する。ＨＡのＨＡ１ポリペプチドは、細胞表面へのウイルスの付着に関与する。より小さなＣ末端部分（ＨＡ２、約１８０アミノ酸）は、球状ドメインを細胞膜またはウイルス膜に固定する、ステム様構造を形成する。ＨＡ２ポリペプチドは、ウイルスと細胞膜とのエンドソーム内での融合を媒介し、リボ核タンパク質複合体の細胞質への放出を可能にする。

数十年にわたる研究にもかかわらず、インフルエンザＢウイルス感染症を広く中和もしくは阻害する、またはインフルエンザＢウイルスによって引き起こされる疾患を軽減する市販の抗体はない。したがって、インフルエンザＢウイルスの複数のサブタイプを中和し、インフルエンザＢ感染症の予防または治療のための薬剤として使用することができる、新しい抗体を同定する必要性がある。

感染症の予防または治療のための受動的免疫療法は、通常は高力価の中和抗体を含有する回復期ヒト血清の形態で、一世紀以上にわたって使用されてきた（Ｇｏｏｄｅｔａｌ．１９９１；Ｃａｎｃｅｒ６８：１４１５－１４２１）。今日、複数の精製されたモノクローナル抗体が、抗微生物薬として使用するために、現在前臨床および臨床開発中である（Ｍａｒａｓｃｏｅｔａｌ．２００７；ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２５：１４２１－１４３４）。

発明者らは、本明細書において、インフルエンザ血球凝集素に特異的に結合し、インフルエンザウイルスと宿主細胞との相互作用を調節する、完全ヒト抗体およびその抗原結合性断片について記載した。抗インフルエンザＢＨＡ抗体は、インフルエンザＢウイルスＨＡに高親和性で結合し得る。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、遮断抗体であり、抗体がインフルエンザＨＡに結合し、かつウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入を遮断できる。いくつかの実施形態では、遮断抗体は、インフルエンザウイルスの細胞への結合を遮断することができ、そのため宿主細胞のウイルス感染症を阻害または中和することができる。いくつかの実施形態では、遮断抗体は、インフルエンザウイルス感染症に罹患している対象を治療するのに有用であり得る。抗体は、それを必要とする対象に投与された場合、対象におけるインフルエンザなどのウイルスによる感染を低減させ得る。これらは、未治療の対象と比較して、対象のウイルス量を減少させるために使用され得る。これらは単独で、またはウイルス感染症を治療するための当技術分野で公知の他の治療用部分またはモダリティとともに補助療法として使用することもできる。特定の実施形態では、これらの抗体は、ウイルスＨＡのステム領域のエピトープに結合し得る。さらに、同定された抗体は、感染から動物（例えば哺乳動物）を保護するために、（感染前に）予防的に使用されるか、または以前に確立された感染を改善するために、または感染と関連する少なくとも１つの症状を改善するために、（感染が確立された後に）治療的に使用することができる。

例示的なインフルエンザＢＨＡの完全長アミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋに、アクセッション番号ＡＡＡ４３６９７．１（Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７から、配列番号２１も参照）、アクセッション番号ＡＡＤ０２８０７．１（Ｂ／Ｎａｎｃｈａｎｇ／３４５１／９３からの部分配列、配列番号２２も参照）、アクセッション番号ＡＢＮ５０７１２．１（Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１１／１９９４から、配列番号２３も参照）およびアクセッション番号ＡＣＡ３３４９３．１（Ｂ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６から、配列番号２４も参照）として示される。

特定の実施形態では、抗体は、全長インフルエンザＢＨＡなどの一次免疫原を用いて、または組換え型のインフルエンザＢＨＡまたはその断片を用いて免疫し、その後、二次免疫原を用いて、またはインフルエンザＢＨＡの免疫原性活性断片を用いて免疫したマウスから得られる。特定の実施形態では、抗体は、インフルエンザワクチン組成物を用いて免疫し、その後、１つ以上の組換えによって生成されたＨＡペプチドを用いて追加免疫したマウスから得られる。例えば、抗体は、マウスをＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７で免疫し、続いてＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８でその後再びＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７で免疫することによって、またはマウスをＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８で免疫し、続いてＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７でその後再びＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８で免疫することによって得ることができる。一部の態様では、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ株は、Ｂ／Ｍａｒｙｌａｎｄ／０３／２００８、またはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６、またはＢ／Ｎａｎｃｈａｎｇ／３４５１／９３、またはＢ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１１／１９９４と置き換えることができる。マウスは、例えば、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８、Ｂ／Ｍａｒｙｌａｎｄ／０３／２００８、Ｂ／Ｎａｎｃｈａｎｇ／３４５１／９３、Ｂ／Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ／１１／１９９４、および／またはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６からのＨＡをコードするＤＮＡの混合物で、例えば、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７およびＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８からのＨＡをコードするＤＮＡの１：１混合物で追加免疫することができる。

免疫原は、インフルエンザＢＨＡの生物学的活性および／もしくは免疫原性断片、またはその活性断片をコードするＤＮＡであってもよい。断片は、ＨＡタンパク質のステム領域に由来するものであってもよい。

ペプチドは、タグ付けまたはＫＬＨなどの担体分子へのコンジュゲートのために、特定の残基の付加または置換を含むように修飾されてもよい。例えば、ペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかにシステインを付加するか、またはリンカー配列を付加して、免疫のために、例えばＫＬＨとコンジュゲートするためにペプチドを調製してもよい。

本明細書に開示される特定の抗インフルエンザＢＨＡ抗体は、インビトロアッセイまたはインビボアッセイによって決定されるとおり、インフルエンザＢＨＡに結合し、その活性を中和することができる。抗体のインフルエンザＢＨＡに結合し、その活性、したがってウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入、その後に続くウイルス感染症を中和する能力は、本明細書に記載される結合アッセイ、または活性アッセイを含む、当業者に公知の任意の標準方法を使用して測定することができる。

結合活性を測定するための非限定的で例示的なインビトロアッセイは、当業者に公知である。例えば、インフルエンザＢＨＡに対する抗インフルエンザＢＨＡ抗体の結合親和性および解離定数を、Ｂｉａｃｏｒｅ測定器を使用した表面プラズモン共鳴によって決定することができる。中和アッセイを使用して、インフルエンザＢウイルスの多様な株の感染性を決定することができる。インフルエンザＢＨＡに対する抗体は、インビトロで、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介するか、またはウイルス感染細胞の抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することができる。例示的な抗体は、インビボでインフルエンザＢ感染症を中和することができる。

インフルエンザＢＨＡに特異的な抗体は、追加の標識または部分を含有しないか、またはＮ末端もしくはＣ末端の標識または部分を含有してもよい。いくつかの実施形態では、標識または部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識（ある場合）の位置が、ペプチドが結合する表面に対するペプチドの配向を決定する場合がある。例えば、表面がアビジンで被覆される場合、Ｎ末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面から遠位になるように配向される。いくつかの実施形態では、標識は、放射性核種、蛍光色素またはＭＲＩ検出可能な標識であってもよい。特定の実施形態では、こうした標識抗体は、撮像アッセイを含む診断アッセイで使用され得る。

抗体および抗体の抗原結合性断片
抗体
本明細書で使用する「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖からなる免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）またはこれらの抗原結合性断片を指すことが意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「Ｖ_Ｈ」）および重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ１ドメイン、Ｃ_Ｈ２ドメインおよびＣ_Ｈ３ドメインからなる）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲまたは「Ｖ_Ｌ」）および軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）からなる。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へとさらに細分化することができる。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。

「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域および定常領域を有する抗体を含むことを意図する。ヒトモノクローナル抗体は、例えばＣＤＲにおいて、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでの無作為もしくは部位特異的な変異誘発により、またはインビボでの体細胞変異により変異が導入される）。しかしながら、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列由来のＣＤＲ配列が、ヒトＦＲ配列上に移植されているモノクローナル抗体を含むようには意図されていない。この用語は、非ヒト哺乳動物において、または非ヒト哺乳動物の細胞において組換え産生された抗体を含む。この用語は、ヒト対象から単離された、またはヒト対象において生成された抗体を含むよう意図されるものではない。

「組換え」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、ＤＮＡスプライシングおよびトランスジェニック発現を含む、組換えＤＮＡ技術として当分野で公知の技術または方法により作製、発現、単離、または取得される、抗体またはその抗原結合性断片を指す。この用語は、非ヒト哺乳動物（例えば、トランスジェニックマウスなどのトランスジェニック非ヒト哺乳動物を含む）または細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系で発現されるか、または組換え型コンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離された抗体を指す。

「～を特異的に結合する」という用語もしくは「～へ特異的に結合する」などの用語は、抗体またはその抗原結合性断片が、生理学的条件下で比較的安定である抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０^－８Ｍ以下の平衡解離定数を特徴とすることができる（例えば、より小さいＫ_Ｄはより緊密な結合を示す）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを判定するための方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。本明細書に記載されるように、抗体は、インフルエンザ－ＨＡに特異的に結合する、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサーでのリアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイで同定されている。さらに、インフルエンザ－ＨＡの１つのドメインおよび１つ以上のさらなる抗原に結合する多重特異性抗体、またはインフルエンザ－ＨＡの２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体は、それにもかかわらず、本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」抗体とみなされる。

「高親和性」抗体という用語は、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイ、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー、または表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、または溶液－親和性ＥＬＩＳＡによって測定される、少なくとも１０^－８Ｍ、少なくとも約１０^－９Ｍ、少なくとも約１０^－１０Ｍ、または少なくとも約１０^－１１ＭのＫ_Ｄとして表される、インフルエンザ－ＨＡに対する結合親和性を有するそれらのモノクローナル抗体を指す。

「スローオフレート」、「Ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」という用語は、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイ、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー、または表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって決定される場合、１ｘ１０^－３ｓ^－１以下、または１ｘ１０^－４ｓ^－１以下の速度定数で、インフルエンザ－ＨＡから解離する抗体を意味する。

「Ｋ_Ｄ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すよう意図される。

本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合性断片」などという用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合性断片」、または「抗体断片」という用語は、インフルエンザＨＡに結合する能力を保持する１つ以上の抗体の断片を指す。

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗体断片は、リガンドまたは治療用部分（「免疫コンジュゲート」）、例えば、インフルエンザウイルスによって生じる感染症の治療に有用な抗ウイルス薬、第２の抗インフルエンザ抗体、もしくはその他任意の治療用部分、などの部分にコンジュゲートされてもよい。

本明細書で使用する場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、インフルエンザ－ＨＡに特異的に結合する単離された抗体またはその断片は、インフルエンザ－ＨＡ以外の抗原を特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。

本明細書で使用される場合、「遮断抗体」または「中和抗体」（または「インフルエンザ－ＨＡ活性を中和する抗体」または「アンタゴニスト抗体」）は、インフルエンザ－ＨＡへの結合がインフルエンザ－ＨＡの少なくとも１つの生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すことを意図する。例えば、本明細書で提供される抗体は、インフルエンザの宿主細胞への付着または侵入を防止または遮断し得る。さらに、「中和抗体」は、病原体が宿主における感染を開始および／または永続させる能力を中和、すなわち、防止、阻害、低減、妨害または干渉することができるものである。「中和抗体」および「中和する抗体」という用語は、本明細書では互換的に使用される。これらの抗体は、単独でまたは適切な処方の際に、他の抗ウイルス剤と組み合わせて、予防剤もしくは治療剤として、または積極的なワクチン接種と関連して、または診断ツールとして使用することができる。

抗原結合性断片
別段の具体的な記載がない限り、本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）ならびにその抗原結合性断片を包含すると理解される。本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などという用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合性断片」または「抗体断片」という用語は、インフルエンザＢＨＡに特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含有する断片、または単離されたＣＤＲを含み得る。特定の実施形態では、「抗原結合性断片」という用語は、多重特異性抗原結合性分子のポリペプチド断片を指す。抗体の抗原結合性断片は、例えば、タンパク質消化技術または、抗体可変ドメインおよび（任意に）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子操作技術などの任意の適切な標準的技術を用いて、完全抗体分子から誘導することができる。そのようなＤＮＡは公知であり、かつ／または例えば、市販の供給源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、もしくは合成され得る。ＤＮＡを配列決定し、化学的にまたは分子生物学技法を使用することによって操作して、例えば、１つ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを好適な構成に配置するか、またはコドンを導入する、システイン残基を作成する、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失させるなどが可能である。

抗原結合性断片の非限定例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、または拘束された（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子もまた、本明細書で使用される場合、「抗原結合性断片」という表現に包含される。

抗体の抗原結合性断片は、典型的に、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、概して、１つ以上のフレームワーク配列に隣接しているか、またはインフレームである、少なくとも１つのＣＤＲを含む。Ｖ_Ｌドメインと結合したＶ_Ｈドメインを有する抗原結合性断片において、Ｖ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインは、任意の適切な配置で互いに対して置かれ得る。例えば、可変領域は、二量体であってもよく、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｌ二量体を含有してもよい。あるいは、抗体の抗原結合性断片は、単量体のＶ_ＨまたはＶ_Ｌドメインを含有してもよい。

ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合された少なくとも１つの可変ドメインを含有してもよい。本明細書に開示される抗体の抗原結合性断片内で見られ得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な構成には、（ｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１、（ｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ３、（ｉｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２、（ｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｖｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｖｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｌ、（ｖｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１、（ｉｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２、（ｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ３、（ｘｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２、（ｘｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｘｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、および（ｘｉｖ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌが挙げられる。上で列挙された例示的な構成のいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインのいずれかの構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接結合されてもよいか、または完全もしくは部分ヒンジまたはリンカー領域により結合されてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間に可動性または半可動性の結合をもたらす、少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれ以上）のアミノ酸からなってもよい。さらに、本明細書で開示される抗体の抗原結合性断片は、互いにおよび／または１つ以上の単量体Ｖ_ＨもしくはＶ_Ｌドメインと非共有会合で（例えば、ジスルフィド結合により）、上で列挙された可変ドメイン構成および定常ドメイン構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（もしくは他の多量体）を含んでもよい。

完全抗体分子と同様に、抗原結合性断片は単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各々の可変ドメインは、別個の抗原、または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される二重特異性抗体の形式の例をはじめとする、任意の多重特異性抗体の形式を、当分野で利用可能な通常の技術を使用して、本明細書で開示される抗体の抗原結合性断片に関連する使用に適合させてもよい。

抗体およびその抗原結合性断片に対する改変
ある特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合性断片）のフレームワーク領域は、ヒト生殖系列配列と同一、例えば、本明細書に提供される抗体の配列と同一であってもよいか、または天然にもしくは人工的に改変されていてもよい。所与のフレームワーク領域（または１つ以上のフレームワーク領域）内の１つ以上のアミノ酸は置換され得、置換は、保存的または非保存的であってもよい。１つ以上のＣＤＲ残基の置換または１つ以上のＣＤＲの省略も可能である。抗体は、１つまたは２つのＣＤＲが結合のために省かれることができると科学文献に記載されている。Ｐａｄｌａｎｅｔａｌ．（１９９５ＦＡＳＥＢＪ．９：１３３－１３９）は、公開されている結晶構造に基づいて、抗体とこれらの抗原との間の接触領域を分析し、ＣＤＲ残基の約１／５～１／３のみが実際に抗原と接触すると結論付けた。Ｐａｄｌａｎは、１つまたは２つのＣＤＲが抗原と接触しているアミノ酸を有さない多くの抗体も発見した（Ｖａｊｄｏｓｅｔａｌ．２００２ＪＭｏｌＢｉｏｌ３２０：４１５－４２８も参照されたい）。したがって、本明細書に提供される抗体は、当該改変抗体が１つ以上の望ましい特徴、例えば、抗体またはその抗原結合性断片が、約１０^－１０Ｍ未満のＥＣ_５０でインフルエンザＢＨＡに結合すること、および／または当該投与を行わなかった同等のインフルエンザ感染動物と比較して、当該インフルエンザ感染動物への投与後に、インフルエンザ感染動物の生存における増加を示すこと、を維持する限り、ＣＤＲ領域および／またはフレームワーク領域において効果的に改変され得る。

所与のＣＤＲに対する改変は、本明細書に提供される抗体からのＣＤＲ配列に対して行われてもよく、改変は、保存的または非保存的置換を含むことができる。望ましい置換は、分子モデリングによって、および／または経験的に決定され得る。例えば、１つ以上のＣＤＲ残基は、別のヒト抗体配列またはそのような配列のコンセンサスにおける対応する位置を占有するアミノ酸と置換され得る。

さらに、その抗原結合性断片は、本明細書に開示される抗体であってもよいが、改変抗体（別名、抗原結合性断片）がインフルエンザＢＨＡへの結合を維持する限り、１つ以上のＣＤＲおよび／または１つ以上のフレームワーク領域を省略するように改変される。

抗原と接触していないＣＤＲ残基は、先行研究に基づいて、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔのＣＤＲの領域から、分子モデリングによって、かつ／または経験的に同定することができる（例えば、ＨＣＤＲ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５はしばしば必要ではない）。本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片は、所与のＣＤＲ、特に抗原と接触しないＣＤＲを除去または置換するように改変され得る。軽鎖ＣＤＲは、例えば、ユニバーサル軽鎖ＣＤＲと置換され得る。

本明細書に提供される完全ヒト抗インフルエンザ－ＨＡモノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、または本明細書に提供される配列と比較して、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を含み得る。そのような改変または変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば、公開抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって、またはアミノ酸配列を、本明細書に提供される抗体、例えば、表１に提供される抗体配列のうちのいずれか１つと比較することによって、容易に確認され得る。

本開示は、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、およびその抗原結合性断片を含み、ここで、１つ以上のフレームワーク領域および／またはＣＤＲ内の１つ以上のアミノ酸は、改変抗体が１つ以上の望ましい特徴、例えば、抗体またはその抗原結合性断片が、約１０^－１０Ｍ未満のＥＣ_５０でインフルエンザＢＨＡに結合すること、および／または当該投与を行わなかった同等のインフルエンザ感染動物と比較して、当該インフルエンザ感染動物への投与後に、インフルエンザ感染動物の生存における増加を示すこと、を維持する限り、改変されている。いったん得られれば、フレームワーク領域および／またはＣＤＲ内の１つ以上の改変を含有する抗体および抗原結合性断片は、結合特異性の改善、結合親和性の増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または亢進（場合により得る）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。

本開示はまた、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、およびその抗原結合性断片を含み、ここで、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸が、抗体が由来する生殖系列配列の対応する残基に、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異している（そのような配列変化は、本明細書において集合的に「生殖細胞系変異」と称される）。当業者であれば、本明細書に開示される重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列から開始して、１つ以上の個々の生殖系列変異またはそれらの組み合わせを含む、多くの抗体および抗原結合性断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、Ｖ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のすべてが、抗体が由来する元の生殖系列配列に見られる残基に再び変異する。他の実施形態では、ある特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内、もしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に見られる変異残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内に見られる変異残基のみが、元の生殖系列配列に再び変異する。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のうちの１つ以上が、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々由来する生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基に変異する。さらに、本明細書に開示される抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基が、特別な生殖系列配列の対応する残基に変異する一方で、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基が維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合性断片は、結合特異性の改善、結合親和性の増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または亢進（場合により得る）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な様式で得られた抗体および抗原結合性断片は、本開示に包含される。

本開示は、ＣＤＲまたはフレームワーク領域において本明細書に提供される配列に対する「実質的な同一性」または「実質的な類似性」を有する抗体を提供する。例えば、表１または表２に提供される配列と、それに基づく改変配列との差異のような、配列の差異は、”実質的な同一性”または”実質的な類似性”によって示される。

「実質的な同一性」または「実質的に同一」という用語は、核酸またはその断片を指す場合、別の核酸（または他の核酸の相補鎖）と最適に整列化されたとき、以下に考察されるようなＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧＡＰなどの配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定される場合、ヌクレオチド塩基の少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％で、ヌクレオチド配列の％同一性が存在することを示す。参照核酸分子と実質的な同一性を有する核酸分子は、特定の場合では、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしてもよい。

ポリペプチドに適用されるように、「実質的な類似性」または「実質的に類似した」という用語は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップウェイトを使用したプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列化されたとき、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％の配列同一性を共有する。いくつかの態様では、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換だけ異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能性特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換だけ互いに異なる場合、相同性の百分率または程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸およびアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、Ｇｏｎｎｅｔｅｔａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１４４３４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負以外の値を有する何らかの変化である。

ポリペプチドについての配列同一性および／または類似性は、典型的には、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の改変へ割り当てられた類似性の測定値を使用して類似の配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を判定するための既定パラメータとともに使用することができるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ第６．１版を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧ第６．１版におけるプログラムである、既定パラメータまたは推奨パラメータを備えたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最良重複の領域の整列および配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上述）。配列はまた、ギャップオープンペナルティが１２、およびギャップエクステンションペナルティが２、ＢＬＯＳＵＭ行列が６２のアフィンギャップ検索を使用したＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを使用して比較することができる。本明細書に開示された配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０および（１９９７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－３４０２を参照されたく、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で提供されるのは、１つ以上の置換（例えば、保存的置換）を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む完全ヒト抗インフルエンザ－ＨＡモノクローナル抗体である。例えば本開示は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、またはＬＣＤＲ３）アミノ酸配列のいずれかに対して例えば、２０以下、１９以下、１８以下、１７以下、１６以下、１５以下、１４以下、１３以下、１２以下、１１以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下の、または１つのアミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗インフルエンザＢ－ＨＡ抗体を含む。例えば、抗インフルエンザＢ－ＨＡ抗体は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、またはＬＣＤＲ３）アミノ酸配列のいずれかに対して、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１アミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）を含み得る。

例示的には、配列番号２とは、少なくとも１個～最大５０個の保存的アミノ酸置換によって、例えば、少なくとも１０個～最大４０個の保存的アミノ酸置換、または少なくとも２０個～最大５０個の保存的アミノ酸置換、または少なくとも２０個～最大４０個の保存的アミノ酸置換によって、異なるＨＣＶＲアミノ酸配列を含むインフルエンザＢＨＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書において提供される。また、配列番号１０とは、少なくとも１個～最大５０個の保存的アミノ酸置換によって、例えば少なくとも１０個～最大４０個の保存的アミノ酸置換、または少なくとも２０個～最大５０個の保存的アミノ酸置換、または少なくとも２０個～最大４０個の保存的アミノ酸置換によって、異なるＬＣＶＲアミノ酸配列を含むインフルエンザＢＨＡに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書において提供される。こうした置換は、フレームワーク領域内またはＣＤＲ内であってもよく、インフルエンザＢＨＡに結合する抗体またはその抗原結合性断片の特異性を維持することができる。

また、配列番号４とは、１、または２、または３個のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）によって異なるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１を含む、抗体またはその抗原結合性断片も本明細書において提供される。配列番号６とは、１、または２、または３個のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）によって異なるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２を含む、抗体またはその抗原結合性断片が本明細書において提供される。配列番号８とは、１、または２、または３個のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）によって異なるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片が本明細書において提供される。配列番号１２とは、１、または２、または３個のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）によって異なるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１を含む、抗体またはその抗原結合性断片が本明細書において提供される。配列番号１４とは、１、または２、または３個のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）によって異なるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２を含む、抗体またはその抗原結合性断片が本明細書において提供される。配列番号１６とは、１、または２、または３個のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）によって異なるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片が本明細書において提供される。

本開示はまた、配列番号８／１６とは、少なくとも１、または少なくとも２、または少なくとも３、または少なくとも４、または少なくとも５、または少なくとも６個のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）によって異なるＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。

本発明はまた、表１に示される例示的な抗インフルエンザＢＨＡ抗体のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列内に含有される６個のＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。特定の実施形態では、前述のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号４－６－８－１２－１４－１６とは、最大で２０個の保存的アミノ酸置換、例えば、最大で１、または最大で２、または最大で３、または最大で３、または最大で４、または最大で５、または最大で６、または最大で７、または最大で８、または最大で９、または最大で１０、または最大で１１、または最大で１２、または最大で１３、または最大で１４、または最大で１５、または最大で１６、または最大で１７、または最大で１８、または最大で１９個のアミノ酸の保存的アミノ酸置換によって異なる。

本明細書において、表１に記載のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％であり、少なくとも９０％、少なくとも９１％であり、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含むＨＣＶＲを含む抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本明細書において、表１に記載のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％であり、少なくとも９０％、少なくとも９１％であり、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含むＬＣＶＲを含む抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本明細書において、配列番号２／１０の、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％であり、少なくとも９０％、少なくとも９１％であり、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有する、その実質的に類似の配列を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号８のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号１２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号１４のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号１６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

本開示は、配列番号８／１６のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。

ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法は、当該技術分野で知られている。インフルエンザＢＨＡに特異的に結合するヒト抗体を作製するために、本開示の状況下で任意のこのような既知の方法が使用され得る。以下のいずれか１つを含む免疫原を使用して、インフルエンザＢＨＡに対する抗体を生成することができる。特定の実施形態では、抗体は、全長の天然インフルエンザＢＨＡで（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ４３６９７．１またはＡＣＡ３３４９３．１を参照、または生きた弱毒化もしくは不活化ウイルスで、またはタンパク質もしくはその断片をコードするＤＮＡで免疫化されたマウスから取得される。あるいは、インフルエンザＢＨＡタンパク質またはその断片は、標準的な生化学的技術を使用して産生され、改変され、免疫原として使用され得る。いくつかの実施形態では、免疫原は、組換え的に産生されたインフルエンザＢＨＡタンパク質またはその断片であってもよい。特定の実施形態では、免疫原はインフルエンザウイルスワクチンであってもよい。特定の実施形態では、１回以上の追加免疫注射を投与してもよい。特定の実施形態では、追加免疫注射は、１つ以上のインフルエンザウイルス株、またはこれらの株に由来する血球凝集素、例えば、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７、に続いてＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８を、その後Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７で再び、またはＢ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８、に続いてＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７を、その後、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８で再び、を含んでもよい。いくつかの態様では、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ株は、Ｂ／Ｍａｒｙｌａｎｄ／０３／２００８またはＢ／Ｎａｎｃｈａｎｇ／３４５１／９３またはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６に置き換えられる。すべてのマウスは、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８、Ｂ／Ｍａｒｙｌａｎｄ／０３／２００８、および／またはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６由来のＨＡをコードするＤＮＡの混合物で追加免疫することができる。特定の実施形態では、追加免疫注射は、インフルエンザ株の混合物、または株に由来する血球凝集素の混合物、またはＨＡをコードするＤＮＡを含有してもよい。特定の実施形態では、免疫原は、Ｅ．ｃｏｌｉ、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはインフルエンザウイルス自体などの任意の他の真核細胞または哺乳動物細胞で発現される組換えインフルエンザＨＡペプチドであってもよい。

ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、ＲｅｇｅｎｅｒｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照）またはモノクローナル抗体を生成するための任意の他の公知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、インフルエンザＢＨＡに対する高アフィニティキメラ抗体が、最初に単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内在性マウス定常領域座に機能的に連結されたヒト重鎖可変領域およびヒト軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスを生成することを伴う。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに機能的に結合される。次に、完全ヒト抗体を発現することができる細胞においてＤＮＡが発現される。

概して、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに対象の抗原を負荷し、抗体を発現するマウスからリンパ細胞（Ｂ細胞など）が回収される。リンパ細胞を骨髄腫細胞株と融合させて不死化ハイブリドーマ細胞株を調製し得、対象の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定するためにそのようなハイブリドーマ細胞株が、スクリーニングおよび選択される。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが単離され、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ定常領域に結合されてもよい。そのような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞のような細胞において産生されてもよい。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接単離されてもよい。

まず、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高アフィニティキメラ抗体が、単離される。以下の実験セクションと同様に、抗体を、アフィニティ、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴について特徴付け、選択する。マウス定常領域は、所望のヒト定常領域で置換され、完全ヒト抗体、例えば、野生型もしくは改変されたＩｇＧ１またはＩｇＧ４が生成される。選択された定常領域は、特定の用途に応じ変動し得る一方、高アフィニティ抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に存在する。

生物学的等価物
本明細書に開示される抗インフルエンザＢＨＡ抗体および抗体断片は、記載される抗体のアミノ酸配列とは異なるがインフルエンザＨＡに結合する能力は保持しているアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このようなバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比較してアミノ酸の１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、記載された抗体の生物学的活性とは本質的に等価である生物学的活性を呈する。同様に、本明細書に開示する抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示される配列と比較してヌクレオチドの１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本明細書に開示する抗体または抗体断片と本質的に生物学的に等価である抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。

２つの抗原結合性タンパク質または抗体が、薬学的等価物または薬学的代替物であり、類似した実験条件下で、単回投与または複数回投与のいずれかで同モル投与量で投与されたときに、その吸収の速度および範囲が有意な差を示さない場合、それら２つの抗原結合性タンパク質または抗体は生物学的に等価であるとみなされる。いくつかの抗体で、吸収の範囲は同等であるが、吸収の速度は同等ではなく、しかし吸収速度における当該差異が意図的であり、ラベリングに反映されており、例えば慢性的使用での有効身体薬物濃度の獲得に必須ではなく、試験された特定の医薬品にとって医学的に重要ではないとみなされるために、それら抗体が生物学的に等価であるとみなされ得る場合、それら抗体は等価物、または薬学的代替物とみなされる。

いくつかの実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、その安全性、純度または有効性において臨床的に意義のある差異が無ければ、生物学的に等価である。

いくつかの実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、参照製品と生物学的製品の間での１回以上の切り替えを行わない持続的療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化を含む有害作用のリスクの予想される上昇または有効性の減退が生じずに、患者がそのような切り替えを行うことができる場合、生物学的に等価である。

いくつかの実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、使用条件に関して、当該機序で判明している程度まで共通の作用機序により両方ともが作用する場合、生物学的に等価である。

生物学的等価性は、インビボおよび／またはインビトロの方法により実証され得る。生物学的等価性の測定方法としては例えば、（ａ）時間の関数として血液、血漿、血清または他の生物学的液体中で抗体またはその代謝物の濃度が測定される、ヒトまたは他の哺乳動物におけるインビボ検査、（ｂ）ヒトのインビボ生体利用効率データと相関し、このデータを合理的に予測するインビトロ検査、（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的作用が時間関数として計測される、ヒトまたは他の哺乳動物におけるインビボ検査、および（ｄ）抗体の安全性、有効性または生体利用効率もしくは生物学的等価性を立証する、適切に管理された臨床試験が挙げられる。

抗体の生物学的に等価であるバリアントは、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を行うことによって、または生物活性に必要とされない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することによって構築され得る。例えば、生物活性に必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要な、または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために欠失されてもよく、または他のアミノ酸で置換されてもよい。他の状況では、生物学的に等価である抗体には、抗体のグリコシル化特性を改変するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を消滅または除去する変異を含む、抗体バリアントを含んでもよい。

Ｆｃバリアントを含む抗インフルエンザ－ＨＡ抗体
本明細書に開示される特定の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を強化する、または減少させる１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む、インフルエンザＢＨＡ抗体が提供される。例えば、本開示は、ＦｃドメインのＣ_Ｈ２またはＣ_Ｈ３領域に変異を含む抗インフルエンザ－ＨＡ抗体を含み、変異は、同じであるが改変されていない抗体と比較して、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲のエンドソームにおいて）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる。そのような変異は、同じであるが改変されていない抗体と比較して、動物に投与されたときに抗体の血清半減期の増加をもたらし得る。このようなＦｃ改変の非限定的な例としては例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）における改変、または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、またはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、またはＮ４３４Ｙ］）における改変、あるいは２５０位および／もしくは４２８位における改変、あるいは３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における改変が含まれる。いくつかの実施形態では、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）の改変、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の改変、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）の改変、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）の改変、２５０Ｑおよび４２８Ｌの改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、ならびに３０７および／または３０８の改変（例えば、３０８Ｆおよび／または３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、改変は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）の改変を含む。

例えば、本開示は、以下からなる群から選択される変異の１つ以上の対または群を含むＦｃドメインを含む抗インフルエンザＢＨＡ抗体を含む：２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）、２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）、４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）、２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）、２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）、３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）、３０７Ａ、３８０Ａおよび４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ）、ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）。前述のＦｃドメイン変異、および本明細書に開示される抗体可変ドメイン内の他の変異のすべての可能な組み合わせが、本明細書に開示される範囲内であることが企図される。

本明細書では、キメラ重鎖定常（Ｃ_Ｈ）領域を含む抗インフルエンザＢＨＡ抗体が提供され、このキメラＣ_Ｈ領域は、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプのＣ_Ｈ領域に由来するセグメントを含む。例えば、抗体は、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣ_Ｈ３ドメインの一部または全部と組み合わせて、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣ_Ｈ２ドメインの一部または全部を含むキメラＣ_Ｈ領域を含み得る。特定の実施形態によると、抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣ_Ｈ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けによる位置２２８～２３６のアミノ酸残基）と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けによる位置２１６～２２７のアミノ酸残基）を含んでもよい。特定の実施形態によると、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１上部ヒンジまたはヒトＩｇＧ４上部ヒンジに由来するアミノ酸残基およびヒトＩｇＧ２下部ヒンジに由来するアミノ酸残基を含む。本明細書において説明されるキメラＣ_Ｈ領域を含む抗体は、特定の実施形態では、抗体の治療特性または薬物動態学的特性に負に影響を与えることなく改変Ｆｃエフェクター機能を呈する。（例えば、２０１３年２月１日出願の米国仮出願第６１／７５９，５７８号を参照されたく、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

抗体の生物学的特徴
一般に、本明細書に開示される抗体は、インフルエンザＢＨＡに結合することによって機能する。例えば、本開示は、Ｂｉａｃｏｒｅ測定器での表面プラズモン共鳴、またはリアルタイムバイオレイヤー干渉計に基づくバイオセンサー（ＯｃｔｅｔＨＴＸアッセイ）によって測定される１０ｎＭ未満のＫ_Ｄで、インフルエンザＢＨＡに（例えば、２５℃または３７℃で）結合する抗体および抗原結合性断片を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、インフルエンザＢＨＡに、例えば、本明細書に記載のアッセイフォーマット、または実質的に類似したアッセイを使用して、表面プラズモン共鳴によって測定した、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、または１００ｐＭ未満のＫ_Ｄで結合する。

本開示はまた、例えば、本明細書で定義されるようなアッセイフォーマット、または実質的に類似のアッセイを使用して、３７℃で表面プラズモン共鳴により測定したときに、約７５分を超える解離半減期（ｔ１／２）で、インフルエンザＢＨＡに結合する、抗体およびその抗原結合性断片を含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗原結合性断片は、インフルエンザＨＡに、例えば本明細書に定義されるアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ捕捉形式または抗原捕捉形式）、または実質的に類似したアッセイを使用して、２５℃で表面プラズモン共鳴により測定された、約２００分超、約３００分超、約４００分超、約５００分超、約６００分超、約７００分超、約８００分超、約９００分超、または約１０００分超のｔ１／２で結合する。

本開示はまた、その宿主細胞に対するインフルエンザウイルスの感染性を中和する抗体またはその抗原結合性断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、様々な代表的なインフルエンザウイルス、例えばＢ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８、Ｂ／Ｍａｒｙｌａｎｄ／０３／２００８、Ｂ／Ｎａｎｃｈａｎｇ／３４５１／９３、および／またはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６に対して、マイクロ中和試験アッセイで、または実質的に類似したアッセイで、約１ｐＭ～約８００ｎＭの範囲のＩＣ_５０、例えば約１ｐＭ～約８００ｐＭの範囲のＩＣ_５０、約１ｐＭ～約１０ｐＭの範囲のＩＣ_５０、約１０ｐＭ～約５０ｐＭの範囲のＩＣ_５０、約１ｐＭ～約１００ｐＭの範囲のＩＣ_５０、約１０ｐＭ～約１００ｐＭの範囲のＩＣ_５０、約１００ｐＭ～約８００ｐＭの範囲のＩＣ_５０、もしくは約５００ｐＭ～約８００ｐＭの範囲のＩＣ_５０の、約１ｎＭ～約１０ｎＭの範囲のＩＣ_５０、約１０ｎＭ～約５０ｎＭの範囲のＩＣ_５０、約１ｎＭ～約１００ｎＭの範囲のＩＣ_５０、約１０ｎＭ～約１００ｎＭの範囲のＩＣ_５０、約１００ｎＭ～約８００ｎＭの範囲のＩＣ_５０、もしくは約５００ｎＭ～約８００ｎＭの範囲のＩＣ_５０の中和効力を示す。

本開示はまた、サブｎＭ濃度でインフルエンザＢ感染細胞に結合し、ＨＡへの特異的結合を示す、抗体またはその抗原結合性断片も含む（実施例３を参照）。

本開示はまた、インビボで、（未治療の対象と比較して）インフルエンザＢ感染症の保護の増加、または強力な中和を示す、抗インフルエンザＢＨＡ抗体を含む。特定の抗体は、予防的に投与された場合、保護を示す（感染前、実施例４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、感染の５日前に投与された５ｍｇ／ｋｇまたは０．５ｍｇ／ｋｇの抗ＨＡ抗体の１回用量は、予防的に投与された場合、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体で治療されたマウスと比較して、マウスの１００％の生存をもたらした。

抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片を用いた予防的治療は、例えば、インフルエンザウイルスへのその後の曝露による感染から哺乳動物を保護するか、またはインフルエンザウイルスへのその後の曝露による感染の可能性またはリスクを減少させることができる。当該保護は、インフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状の重症度、期間、または発生頻度の改善、緩和、または低減からなる群から選択される。いくつかの態様では、単離された抗体は、インフルエンザウイルスへの曝露前に動物（例えば、哺乳動物）に予防的に投与される場合（例えば、インフルエンザウイルスへの曝露の少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少なくとも５日前、または２～５日前）、インフルエンザ感染症のリスクを減少させる。少なくとも１つの症状は、頭痛、発熱、痛み、鼻漏（鼻閉）、悪寒、倦怠感、脱力感、咽喉痛、咳、息切れ、嘔吐、下痢、肺炎、気管支炎、および死亡からなる群から選択され得る。

一実施形態では、インフルエンザＢＨＡに特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片は、以下の特徴：
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；
（ｂ）約１０^－９未満、約１０^－１０Ｍ未満、約１０^－１１Ｍ未満、約１０^－１２Ｍ未満、または約１０^－１３Ｍ未満のＥＣ_５０でインフルエンザＢＨＡに結合する；
（ｃ）インフルエンザＢＨＡに特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片での治療なしの同等のインフルエンザ感染動物と比較して、インフルエンザ感染動物の生存における増加を示す；ならびに／または
（ｄ）
（ｉ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）に含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、および
（ｉｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）
を含む
のうちの１つ以上を有する。

本明細書に開示される抗体は、前述の生物学的特徴、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を保有し得る。本明細書に開示される抗体のその他の生物学的特徴は、本明細書の実施例を含む本開示の検討から当業者に明らかであろう。

エピトープマッピングおよび関連技術
本開示は、インフルエンザＢＨＡ分子の１つ以上のドメイン内に見られる１つ以上のアミノ酸と相互作用する、抗インフルエンザＢＨＡ抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、インフルエンザＨＡ分子内に位置する３つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上）のアミノ酸の単一の連続配列からなり得る（例えば、ドメイン内の直線状エピトープ）。あるいは、エピトープは、インフルエンザＢＨＡ分子内に位置する複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなり得る（例えば、立体構造エピトープ）。

当業者にとって既知の様々な技法を使用して、抗体が、ポリペプチドまたはタンパク質内の「１つ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定することができる。例示的な技法としては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＨａｒｌｏｗａｎｄＬａｎｅ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ）に記載されたものなどの常套的な交差遮断アッセイが挙げられる。他の方法としては、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：４４３－６３）、ペプチド切断解析結晶学的研究およびＮＭＲ分析が挙げられる。さらに、抗原のエピトープ切り出し、エピトープ抽出および化学修飾のような方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７～４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析により検出される水素／重水素交換である。一般的な用語において、水素／重水素交換方法は、対象タンパク質を重水素で標識すること、続いて重水素で標識したタンパク質に抗体を結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体は、水に移され、抗体複合体によって保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で、重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持し得るため、界面に含まれないアミノ酸と比較して、比較的高い質量を呈し得る。抗体の解離後、標的タンパク質はプロテアーゼ切断および質量分析解析を受け、それにより抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７：２５２－２５９、ＥｎｇｅｎａｎｄＳｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ－２６５Ａを参照されたい。

「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、連続的なアミノ酸、またはタンパク質の三次フォールディングによって並置された非連続的なアミノ酸のどちらからも形成されることができる。連続的なアミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒へ曝露されても保持されるのに対して、三次元フォールディングにより形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒を用いた処理によって失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間的構造において、少なくとも３個のアミノ酸、または少なくとも４個のアミノ酸、例えば、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０個のアミノ酸を含む。

抗原構造に基づく抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）としても既知の修飾補助プロファイリング（ＭＡＰ）は、化学的または酵素的に修飾された抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性に従って、同一抗原に対して方向付けられた多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分類する方法である（参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる、ＵＳ２００４／０１０１９２０を参照されたい）。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープと明瞭に異なるか、または部分的に重複する固有エピトープを反映し得る。本技術は、遺伝的に同一の抗体の迅速なフィルタリングを可能にし、その結果、特性評価は遺伝的に異なる抗体に焦点を当てることができる。ハイブリドーマスクリーニングに適用する場合、ＭＡＰは、所望の特性を有するモノクローナル抗体を産生する希少なハイブリドーマクローンの同定を容易にし得る。ＭＡＰを使用して、本明細書に記載される抗体を、異なるエピトープに結合する抗体のグループに分類することができる。

特定の実施形態では、インフルエンザウイルスＡＨＡ抗体またはその抗原結合性断片は、天然形態または組換えによって産生された、インフルエンザＨＡに例示される１つ以上の領域内のエピトープに、またはその断片に結合する。

本開示は、同じエピトープ、または当該エピトープの一部分に結合する、抗インフルエンザＢＨＡ抗体を含む。同様に、本開示はまた、インフルエンザＢＨＡまたはその断片への結合を、本明細書に記載される特定の例示的な抗体のいずれかと競合する、抗インフルエンザＢＨＡ抗体も含む。例えば、本発明は、インフルエンザＢＨＡへの結合について、表１に記載された抗体から得られた１つ以上の抗体と交差競合する、抗インフルエンザＢＨＡ抗体を含む。

公知の方法を使用することにより、抗体が、参照抗インフルエンザＢＨＡ抗体と同じエピトープに結合するか、または結合について競合するかを判断できる。例えば、試験抗体が、参照抗インフルエンザＢＨＡ抗体と同じエピトープに結合するかどうかを判定するために、参照抗体を、飽和条件下で、インフルエンザＢＨＡまたはペプチドに結合させることができる。次に、インフルエンザＢＨＡ分子に結合する試験抗体の能力が評価される。試験抗体が、参照抗インフルエンザＢＨＡ抗体との飽和結合後に、インフルエンザＢＨＡに結合することができる場合、試験抗体は、参照抗インフルエンザＢＨＡ抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。一方で、試験抗体が、参照抗インフルエンザＢＨＡ抗体との飽和結合後に、インフルエンザＢＨＡに結合できない場合、試験抗体は、参照抗インフルエンザＢＨＡ抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。

抗体が、参照抗インフルエンザＢＨＡ抗体との結合について競合するかどうかを判断するために、上述の結合方法論が２つの方向性で実施される：第１の方向性では、参照抗体を、飽和条件下でインフルエンザＢＨＡに結合させ、続いてインフルエンザＢＨＡ分子への試験抗体の結合を評価する。第２の方向性では、試験抗体を、飽和条件下でインフルエンザＢＨＡ分子に結合させ、続いてインフルエンザＢＨＡ分子への参照抗体の結合を評価する。両方の方向性で、第１の（飽和する）抗体のみがインフルエンザＢＨＡ分子に結合することができる場合、試験抗体および参照抗体はインフルエンザＢＨＡへの結合について競合すると結論付けられる。当業者によって理解されるように、参照抗体への結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同一のエピトープに結合しなくてよく、重複したエピトープまたは隣接するエピトープに結合することによって参照抗体の結合を立体的に遮断する場合もある。

２つの抗体は、それぞれが他方の抗原への結合を競合的に阻害（遮断）する場合、同じまたは重複したエピトープに結合する。すなわち、１、５、１０、２０、または１００倍の過剰な一方の抗体は、競合結合アッセイで測定する場合、他方の結合を、少なくとも５０％、例えば７５％、９０％またはさらに９９％阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１９９０５０：１４９５－１５０２を参照されたい）。あるいは、一方の抗体の結合を低減または除去する、抗原中の本質的にすべてのアミノ酸変異が、他方の抗体の結合を低減または除去する場合、２つの抗体は同一エピトープを有する。一方の抗体の結合を低減または除去するいくつかのアミノ酸変異が、他方の抗体の結合を低減または除去する場合、２つの抗体は重複するエピトープを有する。

追加の日常的な実験（例えば、ペプチド変異および結合分析）を実施して、観察された試験抗体の結合の欠落が実際に、参照抗体と同じエピトープに結合することが原因であるのか、または立体遮断（または別の現象）が、観察された結合の欠落の原因であるのかを確認することができる。この種類の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当該技術分野で利用可能な任意の他の定量的または定性的抗体結合アッセイを使用して実施することができる。

免疫コンジュゲート
本明細書で企図されるのは、インフルエンザウイルス感染症を治療するためのトキソイドまたは抗ウイルス薬などの治療用部分とコンジュゲートした（「免疫コンジュゲート」）、ヒト抗インフルエンザＢＨＡモノクローナル抗体を包含する。本明細書で使用される場合、「免疫コンジュゲート」という用語は、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、ペプチドもしくはタンパク質、または治療剤と化学的または生物学的に連結する抗体を指す。抗体は、その標的に結合できる限り、当該分子に沿った任意の場所で、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的またはレポーター部分、酵素、ペプチドまたは治療剤に連結されてもよい。免疫コンジュゲートの例には、抗体薬物コンジュゲートおよび抗体－毒素融合タンパク質が含まれる。一実施形態では、薬剤はインフルエンザ－ＨＡに対する第２の異なる抗体であってもよい。特定の実施形態では、抗体は、ウイルス感染細胞に特異的な薬剤とコンジュゲートされてもよい。抗インフルエンザ－ＨＡ抗体にコンジュゲートされうる治療用部分のタイプは、治療される状態および達成される望ましい治療効果を考慮に入れる。免疫コンジュゲートを形成するための好適な薬剤の例は、当該技術分野で公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。

多重特異性抗体
本明細書に開示される抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってもよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であってもよく、または２つ以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有してもよい。例えば、Ｔｕｔｔｅｔａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０－６９；Ｋｕｆｅｒｅｔａｌ．，２００４，ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８－２４４を参照されたい。

本明細書で提供される多重特異性抗原結合分子またはそのバリアントはいずれも、当業者に既知であろう、標準的な分子生物学的技法（例えば、組換えＤＮＡおよびタンパク質発現技術）を使用して構築することができる。

いくつかの実施形態では、インフルエンザＢＨＡ特異的抗体は、インフルエンザＢＨＡの別個のドメインに結合する可変領域が一緒に連結して、単一結合分子内に二重のドメイン特異性を与える、二重特異的フォーマット（「二重特異性」）で生成される。適切に設計された二重特異性体は、特異性および結合親和性の両方を増大させることにより、全体的なインフルエンザＢＨＡ－タンパク質阻害有効性を増強しうる。個別ドメイン（例えば、Ｎ末端ドメインのセグメント）に対する特異性を有する可変領域、または１つのドメイン内の異なる領域に結合できる可変領域を、各領域が別個のエピトープ、または１つのドメイン内の異なる領域に同時に結合することを可能にする、構造的足場上でペアリングされる。一例では、二重特異性のために、１つのドメインに対する特異性を有する結合由来の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を、第２のドメインに対する特異性を有する一連の結合由来の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）で組換えて、そのＶ_Ｈの元の特異性を妨げることなく元のＶ_Ｈとペアリングさせることが可能な非同族Ｖ_Ｌパートナーを特定する。このように、単一のＶ_Ｌセグメント（例えば、Ｖ_Ｌ１）を、２つの異なるＶ_Ｈドメイン（例えば、Ｖ_Ｈ１およびＶ_Ｈ２）と組み合わせて、２つの結合「アーム」（Ｖ_Ｈ１－Ｖ_Ｌ１およびＶ_Ｈ２－Ｖ_Ｌ１）からなる二重特異性体を生成することができる。単一のＶ_Ｌセグメントの使用は、二重特異性体を生成するために使用されるクローニング、発現、および精製プロセスにおいて、系の複雑さを低減し、それによって単純化し、効率を向上させる（例えば、ＵＳＳＮ１３／０２２７５９およびＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照されたい）。

あるいは、２つ以上のドメイン、および限定されないが、例えば、第２の異なる抗インフルエンザＢＨＡ抗体などの第２の標的に結合する抗体は、本明細書に記載される技術、または当業者に公知の他の技術を使用して、二重特異性フォーマットで調製されてもよい。別個の領域に結合する抗体可変領域は、例えば、インフルエンザウイルスの関連部位に結合する可変領域と連結して、単一結合分子内に二重抗原特異性を付与することができる。適切に設計された二重特異性のこの性質は、二重の機能を果たす。細胞外ドメインに対する特異性を有する可変領域は、細胞外ドメインの外部に対する特異性を有する可変領域と組み合わされ、各可変領域が別々の抗原に結合することを可能にする構造的足場上でペアリングされる。

本明細書に開示される状況下で使用され得る例示的な二重特異性抗体のフォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｃ_Ｈ３ドメインと第２のＩｇＣ_Ｈ３ドメインの使用を含み、この場合において当該第１および第２のＩｇＣ_Ｈ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸によって互いに異なり、そしてこの場合において、少なくとも１つのアミノ酸の差異は、アミノ酸の差異を欠く二重特異性抗体と比較して、二重特異性抗体のプロテインＡへの結合を低下させる。一実施形態では、第１のＩｇＣ_Ｈ３ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＩｇＣ_Ｈ３ドメインは、例えばＨ９５Ｒ（ＩＭＧＴエクソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングではＨ４３５Ｒ）改変などのプロテインＡ結合を低減または消失させる変異を含有する。第２のＣ_Ｈ３はさらに、Ｙ９６Ｆ改変（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＹ４３６Ｆ）を含んでもよい。第２のＣ_Ｈ３に見られ得るさらなる改変としては、以下が挙げられる：ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ、ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）、ならびにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる、ＥＵではＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）。上述の二重特異性抗体のフォーマットの変形も、本明細素に開示される範囲内で企図される。

本明細書に開示される状況下で使用され得る他の例示的な二重特異性のフォーマットとしては限定されないが、例えば、ｓｃＦｖベースまたはダイアボディの二重特異性フォーマット（ｄｉａｂｏｄｙｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｍａｔ）、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、クアドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ）、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブ・イントゥ・ホールを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、およびＭａｂ^２二重特異性フォーマット（前述のフォーマットのレビューに関しては、例えばＫｌｅｉｎｅｔａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ４：６，１－１１、および当該文献内に引用される参考文献を参照のこと）が挙げられる。二特異性抗体は、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築されてもよく、例えば直交的な化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して、部位特異的抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成し、次いでこれを規定の組成、結合価および構造を有する多量体性複合体へと自己アセンブリさせる。（例えば、Ｋａｚａｎｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：Ｄｅｃ．４，２０１２］を参照されたい）。

治療的投与および製剤
本明細書では、抗インフルエンザＢＨＡ抗体またはその抗原結合性断片を含む治療用組成物を提供する。本開示による治療用組成物は、移送、送達、忍容性などの改善をもたらすために製剤に組み込まれる、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、および他の剤とともに投与される。数多くの適切な製剤が、すべての薬剤師に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて見出され得る。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、小胞を含有する脂質（カチオン性またはアニオン性）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡ共役体、無水吸収ペースト、水中油および油中水乳剤、乳剤カルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌｅｔａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍｏｆｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓｆｏｒｐａｒｅｎｔｅｒａｌｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）ＪＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ５２：２３８－３１１も参照されたい。

抗体の用量は、投与されることになっている対象の年齢およびサイズ、標的疾患、容態、投与経路などによって変わり得る。本明細書に開示される抗体が、成人患者の疾患または障害を治療するために、またはこのような疾患を予防するために使用される場合、本明細書に開示される抗体を、通常、体重１ｋｇ当たり約０．１～約６０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり約５～約６０ｍｇ、約１０～約５０ｍｇ、または約２０～約５０ｍｇの単回投与で投与することが有利である。状態の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調整できる。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも約０．１ｍｇ～約５０００ｍｇ、約１～約２０００ｍｇ、約５～約１０００ｍｇ、または約１０～約５００ｍｇ、～約１００ｍｇ、または～約５０ｍｇの初回用量として投与され得る。ある特定の実施形態では、初回用量の後に、初回用量とおよそ同量か、または初回用量より少ない用量であり得る量の抗体またはその抗原結合性断片の第２または複数回のその後の用量の投与が続いてもよく、ここにおいて、その後の用量は、少なくとも１日～３日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、または少なくとも１４週間の間をあける。

様々な送達系が公知であり、医薬組成物の投与に使用することができ、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体介在性エンドサイトーシスなどが挙げられる（例えば、Ｗｕｅｔａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）。導入方法には、皮内経路、経皮経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路および経口経路が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入もしくはボーラス注射によって、上皮もしくは粘膜皮膚内層（ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介した吸収によって投与することができ、かつ他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身性または局所性であってもよい。医薬組成物は、ベシクル、特にリポソームで送達され得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７－１５３３を参照されたい）。

本明細書で開示される抗体を送達するためのナノ粒子の使用も本明細書において企図される。抗体とコンジュゲートしたナノ粒子は、治療用途および診断用途の両方で使用され得る。抗体とコンジュゲートしたナノ粒子、および調製方法および使用方法は、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｒｒｕｅｂｏ，Ｍ．，ｅｔａｌ．２００９（“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒｂｉｏｍｅｄｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”ｉｎＪ．Ｎａｎｏｍａｔ．Ｖｏｌｕｍｅ２００９，ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ４３９３８９，２４ｐａｇｅｓ，ｄｏｉ：１０．１１５５／２００９／４３９３８９）に詳細に記載されている。ウイルス感染細胞を標的にするために、ナノ粒子は開発され、医薬組成物中に含有される抗体にコンジュゲートされてもよい。薬物送達のためのナノ粒子はまた、例えば、ＵＳ８２５７７４０、またはＵＳ８２４６９９５に記載され、その全体がそれぞれ本明細書に組み込まれる。

ある特定の状況では、医薬組成物は、制御放出系で送達され得る。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近傍に配置することができ、したがって全身用量のほんの一部しか必要としない。

注入可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、腹腔内および筋肉内注射、点滴などの投与形態を含み得る。これらの注射可能な調製物は、公知の方法によって調製されてもよい。例えば、注入可能な調製物は、例えば、注入に従来使用される無菌水性媒体または油性媒体に、上述される抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることによって調製され得る。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコースを含有する等張液、および他の助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などの適切な可溶化剤と併用され得る。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが採用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と併用され得る。このようにして調製した注射液は、好ましくは、適切なアンプル中に充填される。

本明細書で開示される医薬組成物は、標準的な針およびシリンジで皮下または静脈内に送達され得る。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本明細書で開示される医薬組成物の送達において、用途を容易にする。そのようなペン型送達デバイスは、再利用可能であるか、または使い捨てであり得る。再利用可能なペン型送達デバイスは、概して、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内部の医薬組成物のすべてが投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは、容易に廃棄することができ、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換され得る。次に、ペン型送達デバイスは再利用することができる。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、医薬組成物がデバイス内部のリザーバ内に保持された事前に充填された状態で販売される。リザーバから医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。

多数の再利用可能なペン型および自動注入装置送達デバイスは、本明細書で開示される医薬組成物の皮下送達において用途を見出す。例としては、ほんの数例を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（ＯｗｅｎＭｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（ＤｉｓｅｔｒｏｎｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（ＥｌｉＬｉｌｌｙａｎｄＣｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮＪＵＮＩＯＲ（商標）（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＦｒａｎｋｌｉｎＬａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、決してこれらに限定されない。本明細書に開示される医薬組成物の皮下送達において用途を見出す使い捨てペン型送達デバイスの例としては、ほんの数例を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（ＥｌｉＬｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、ＴｈｏｕｓａｎｄＯａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（ＡｂｂｏｔｔＬａｂｓ、ＡｂｂｏｔｔＰａｒｋ，ＩＬ）が挙げられるが、決してこれらに限定されない。

有利に、上述の経口または非経口使用のための医薬組成物は、有効成分の用量を適合させるのに適した単位用量で剤形に調製される。単位用量におけるこのような剤形には、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤などが含まれる。含有される抗体の量は、一般的に単位用量で剤形当たり約５～約５０００ｍｇであり、特に注射の形態では、抗体は約５～約５００ｍｇに含有されることが好ましく、およびその他の剤形に対しては約１０～約２５０ｍｇに含有されることが好ましい。

抗体の治療用途
本明細書に開示される抗体は、インフルエンザＢウイルス感染に関連する疾患または障害または状態の治療、および／または予防、ならびに／またはかかる疾患、障害または状態に関連する少なくとも１つの症状を改善するために有用である。

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、インフルエンザＢウイルスに起因する重度および急性の呼吸器感染症を患う対象を治療するために有用である。いくつかの実施形態では、抗体は、宿主中のウイルス力価を減少させるまたはウイルス量を低減させるのに有用である。一実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、インフルエンザＢウイルス感染症の患者に対して治療用量で投与されてもよい。

例えば、本明細書に開示される１つ以上の抗体を投与して、未治療であるが同様の境遇の対象と比較して、疾患もしくは障害の１つ以上の症状または状態の重症度を軽減または防止または減少させることができる。抗体は、これらに限定されないが、発熱、咳、咽頭痛、頭痛、体の痛み、倦怠感、極度の疲労、息切れ、気管支炎、肺炎、および死亡を含む、インフルエンザウイルス感染症の少なくとも１つの症状の重症度を改善または低減するために使用され得る。

また、本明細書に開示される１つ以上抗体を、免疫不全の個人、高齢者（６５歳以上）、２歳未満の子ども、医療従事者、インフルエンザウイルス感染症を患う患者の極めて近くにいる家族、および病歴（例えば、肺感染症、心疾患または糖尿病のリスクの上昇）のある患者など、インフルエンザウイルス感染症の発症のリスクのある対象に予防的に使用することも意図されている。

さらなる実施形態では、本抗体は、インフルエンザウイルス感染症を患う患者を治療するための医薬組成物の調製に使用される。別の実施形態では、抗体は、インフルエンザウイルス感染症の治療または改善に有用な当業者に公知の任意の他の薬剤または任意の他の治療とともに、補助療法として使用される。

併用療法
併用療法は、抗インフルエンザＢＨＡ抗体、および抗体または抗体の生物学的に活性な断片と有利に組み合わせられ得る、任意の追加的治療剤を含み得る。本明細書に開示される抗体は、インフルエンザウイルスを治療するために使用される１つ以上の薬物または薬剤（例えば、抗ウイルス剤）と相乗的に組み合わせることができる。

例えば、例示的抗ウイルス剤には、例えば、ワクチン、ノイラミニダーゼ阻害剤またはヌクレオシド類似体が含まれる。本明細書で提供される抗体と組み合わせて使用されうる他の例示的抗ウイルス剤には、例えば、ジドブジン、ガンシクロビル（ｇａｎｇｃｙｃｌｏｖｉｒ）、ビダラビン、イドクスウリジン、トリフルリジン、ホスカルネット、アシクロビル、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン（ｒｅｍａｎｔｉｄｉｎｅ）、サキナビル、インジナビル、リトナビル、アルファ－インターフェロンおよび他のインターフェロン、ノイラミニダーゼ阻害剤（例えば、ザナミビル（ＲＥＬＥＮＺＡ（登録商標））、オセルタミビル（ＴＡＭＩＦＬＵ（登録商標））ラニナミビル、ペラミビル）、またはリマンタジンが含まれる。

他の例示的抗ウイルス薬には、ＨＡ阻害剤、シアル酸阻害剤およびＭ２イオンチャネル阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、Ｍ２イオンチャネル阻害剤はアマンタジンまたはリマンタジンである。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、インフルエンザウイルス感染症を有する患者のウイルス量を低減させるために、または感染症の１つ以上の症状を改善するために、第２の治療剤と組み合わされてもよい。

本明細書で提供される抗体は、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬）、充血緩和剤、抗ヒスタミン薬、抗感染薬、インフルエンザウイルスに対する異なる抗体、抗ウイルス薬、ＦＬＵＭＩＳＴ（登録商標）またはＦＬＵＶＩＲＩＮ（登録商標）などのインフルエンザウイルスに対するワクチン、抗酸化剤などの栄養補助食品、またはインフルエンザウイルス感染症を治療するための他の任意の緩和療法と組み合わせて使用されてもよい。緩和療法は、対象をより快適にし、および／またはインフルエンザＢの感染症の症状の重症度を緩和するために、対象の治療を含む。

特定の実施形態では、第２の治療剤はインフルエンザに対する別の抗体である。特定の実施形態では、第２の治療剤は、インフルエンザ血球凝集素に対する別の抗体である（例えば、インフルエンザＡ血球凝集素）。特定の実施形態では、第２の治療剤は、ノイラミニダーゼ、またはマトリクスタンパク質２の四量体外部ドメイン（Ｍ２ｅタンパク質）などの異なるインフルエンザタンパク質に対する別の抗体である。特定の実施形態では、第２の治療剤は、宿主膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）などの異なるタンパク質に対する抗体である。第２の抗体は、ウイルスの異なるサブタイプまたは株に由来する１つ以上の異なるインフルエンザウイルスタンパク質に対して特異的であってもよい。本明細書では、インフルエンザウイルスに対する広範な中和活性または阻害活性を有する抗体の組み合わせ（「カクテル」）を使用することが意図されている。いくつかの実施形態では、非競合抗体を組み合わせて、それを必要とする対象に投与し、選択圧力の結果としての急速な変異により、インフルエンザウイルスの逃げる能力を低下させることができる。いくつかの実施形態では、組み合わせを含む抗体は、ＨＡタンパク質上の別個の重複しないエピトープに結合する。組み合わせを含む抗体は、ウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入および／または宿主細胞との融合を遮断しうる。抗体は、インフルエンザＢ株の任意の１つ以上から選択される血球凝集素と相互作用してもよく、単独で使用される場合、または上述の任意の１つ以上の薬剤と組み合わせた場合、Ｂ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／２／８７、Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ／１６／８８、Ｂ／Ｍａｒｙｌａｎｄ／０３／２００８、Ｂ／Ｎａｎｃｈａｎｇ／３４５１／９３、および／またはＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６を含むインフルエンザＢ株のうちの任意の１つ以上を中和することができる。

本明細書では、本明細書に開示される抗インフルエンザＢＨＡ抗体に加えて抗インフルエンザＨＡ抗体の組み合わせを使用することも本明細書で意図されており、ここで組み合わせは、交差競合しない１つ以上の抗体を含み、いくつかの実施形態では、組み合わせは、広範な中和活性を有する第１の抗体と、狭いスペクトルの分離株に対する活性を有し、第１の抗体と交差競合しない第２の抗体とを含む。

本明細書で使用される場合、「と組み合わされる」という用語は、本発明の抗インフルエンザＢＨＡ抗体の投与前、同時に、または投与後に、投与されうる追加の治療上活性な成分を意味する。「と組み合わされる」という用語はまた、抗インフルエンザ－ＨＡ抗体および第２の治療剤の逐次投与または同時投与も含む。

追加の治療活性成分は、本明細書に開示される抗インフルエンザＢＨＡ抗体の投与前に対象に投与されてもよい。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分未満前に投与される場合に、第１の成分は、第２の成分の「前に」投与されるとみなされ得る。他の実施形態では、追加の治療活性成分は、本明細書に開示される抗インフルエンザＢＨＡ抗体の投与後に対象に投与され得る。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与される場合に、第１の成分は、第２の成分の「後に」投与されるとみなされ得る。さらに他の実施形態では、追加の治療活性成分は、本明細書に開示される抗インフルエンザＢＨＡ抗体の投与と同時に対象に投与され得る。本開示の目的に対し、「同時」投与とは、例えば、抗インフルエンザＢＨＡ抗体と追加の治療活性成分を、単一剤形で、または互いに約３０分以内に対象に投与される個別の剤形で対象に投与することを含む。個別の剤形で投与する場合、各剤形は同じ経路を介して投与することができ（例えば、抗インフルエンザＢＨＡ抗体と追加の治療活性成分の両方を静脈内に投与することができるなど）、別の方法として、各剤形は異なる経路を介して投与することができる（例えば、抗インフルエンザＢＨＡ抗体は静脈内に投与されてもよく、追加の治療活性成分は経口投与されてもよい）。いずれの場合でも、成分を、単一の剤形で、個別の剤形を同じ経路で、または個別の剤形を異なる経路で投与することはすべて、本開示の目的のための「同時投与」とみなされる。本開示の目的のために、追加の治療活性成分の投与の「前に」、「同時に」または「後に」（これらの用語は上記で定義されている）、抗インフルエンザＢＨＡ抗体投与することは、抗インフルエンザＢＨＡ抗体を、追加の治療上活性な成分と「組み合わせて」投与することとみなされる。

本開示は、本明細書に開示される抗インフルエンザＢＨＡ抗体が、本明細書の別段に記載される１つ以上の追加の治療活性成分と一緒に製剤化される医薬組成物を含む。

投与レジメン
特定の実施形態によると、本明細書で提供される抗インフルエンザＢＨＡ抗体もしくはその抗原結合性断片（または抗インフルエンザＨＡ抗体と本明細書で言及される追加の治療活性薬剤のいずれかとの組み合わせを含む医薬組成物）の単回用量を、それを必要とする対象に投与することができる。本明細書に開示される特定の実施形態によると、抗インフルエンザＢＨＡ抗体（または抗インフルエンザＢＨＡ抗体と本明細書で言及される追加の治療活性薬剤のいずれかとの組み合わせを含む医薬組成物）の複数回用量は、規定の時間経過にわたり対象に投与することができる。本開示の本態様による方法は、複数回用量の抗インフルエンザＢＨＡ抗体を対象に逐次的に投与することを含む。本明細書で使用される場合、「逐次的に投与する」とは、各用量の抗インフルエンザＢＨＡ抗体が、例えば所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）をあけた異なる日などの、異なる時点で対象に投与されることを意味する。本開示は、抗インフルエンザＢＨＡ抗体の単一の初回用量、次いで抗インフルエンザＢＨＡ抗体の１つ以上の二次用量、および次いで任意選択で抗インフルエンザＢＨＡの１つ以上の三次用量を逐次的に患者に投与することを含む方法を含む。

「初回用量」、「二次用量」、および「三次用量」という用語は、本発明の抗インフルエンザＢＨＡ抗体の投与の時間的な順序を指す。したがって、「初回用量」は、治療レジメンの開始時に投与される用量である（また「ベースライン用量」とも呼称される）、「二次用量」は初回用量の後に投与される用量であり、「三次用量」は二次用量の後に投与される用量である。初回用量および二次用量および三次用量はすべて、同じ量の抗インフルエンザ－ＨＡ抗体を含有し得るが、投与頻度に関しては一般的に互いに異なっていてもよい。しかしながら、特定の実施形態では、初回用量、二次用量および／または三次用量に含有される抗インフルエンザＢＨＡ抗体の量は、治療過程の間で互いに変化する（例えば、適宜調整して加減する）。特定の実施形態では、２つ以上（例えば、２、３、４、または５つ）の用量が、治療レジメンの開始時に負荷用量」として投与され、その後に続く用量は、より少ない頻度ベースで投与される（例えば、「維持用量」）。

特定の例示的な実施形態では、二次用量および／または三次用量の各々は、直前の用量の１～４８時間後（例えば、１時間後、１時間半後、２時間後、２時間半後、３時間後、３時間半後、４時間後、４時間半後、５時間後、５時間半後、６時間後、６時間半後、７時間後、７時間半後、８時間後、８時間半後、９時間後、９時間半後、１０時間後、１０時間半後、１１時間後、１１時間半後、１２時間後、１２時間半後、１３時間後、１３時間半後、１４時間後、１４時間半後、１５時間後、１５時間半後、１６時間後、１６時間半後、１７時間後、１７時間半後、１８時間後、１８時間半後、１９時間後、１９時間半後、２０時間後、２０時間半後、２１時間後、２１時間半後、２２時間後、２２時間半後、２３時間後、２３時間半後、２４時間後、２４時間半後、２５時間後、２５時間半後、２６時間後、２６時間半後、またはそれ以上）に投与される。「直前の用量」という句は、本明細書において使用される場合、複数回の投与の順序において、当該順序の次の用量の投与の前に介在する用量なく患者に投与される抗インフルエンザＢＨＡ抗体の用量を意味する。

本発明の本態様による方法は、抗インフルエンザＢＨＡ抗体の二次用量および／または三次用量の任意の数を患者に投与することを含み得る。例えば、ある特定の実施形態では、患者に単一の二次用量のみが投与される。他の実施形態では、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８つ、またはそれ以上）の二次用量を患者に投与する。同様に、ある特定の実施形態では、患者に単一の三次用量のみが投与される。他の実施形態では、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８つまたはそれ以上）の第三の投与量が患者に投与される。

特定の実施形態では、第二および／または第三の投与量が患者に投与される頻度は、治療レジメンの経過中に変化し得る。投与の頻度は、臨床検査後の個々の患者のニーズに応じて、医師による治療過程の間に、調節され得る。

抗体の診断上の使用
抗インフルエンザＢＨＡ抗体は、例えば、診断上の目的のために、試料中のインフルエンザＢＨＡを検出および／または測定するために使用され得る。いくつかの実施形態は、ウイルス感染症などの疾患または障害を検出するアッセイにおける、１つ以上の抗体の使用を企図している。インフルエンザＢＨＡの例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られた試料を、本発明の抗インフルエンザＢＨＡ抗体と接触させることを含み、抗インフルエンザＢＨＡ抗体は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識されるか、またはインフルエンザＢＨＡを患者試料から選択的に単離するための捕捉リガンドとして使用される。あるいは、標識されていない抗インフルエンザＢＨＡ抗体は、それ自体が検出可能に標識される二次抗体との組み合わせで、診断用途に使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、例えば^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、もしくは^１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネートもしくはローダミンなどの蛍光部分もしくは化学発光部分、またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であり得る。試料中のインフルエンザＢＨＡを検出または測定するために使用することのできる具体的な例示的アッセイには、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）が含まれる。

インフルエンザＢＨＡ診断アッセイで使用できる試料には、正常な状態または病理学的状態下で、検出可能な量のインフルエンザＢＨＡ、またはその断片のいずれかを含有する、患者から得ることができる任意の組織または流体試料が含まれる。一般的に、健康な患者（例えば、インフルエンザに関連する疾患に罹患していない患者）から得られた特定の試料中のインフルエンザＢＨＡのレベルが、ベースラインまたは標準のインフルエンザＢＨＡのレベルを最初に確立するために測定される。次に、インフルエンザＢＨＡのこのベースラインレベルを、インフルエンザＢＨＡ関連症状、またはこうした状態に関連する症状を有する疑いがある個体から得られた試料で測定されたインフルエンザＢＨＡのレベルと比較できる。

インフルエンザＢＨＡに特異的な抗体は、追加の標識または部分を含有しないか、またはＮ末端もしくはＣ末端の標識または部分を含有してもよい。一実施形態では、標識または部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識（ある場合）の位置が、ペプチドが結合する表面に対するペプチドの配向を決定する場合がある。例えば、表面がアビジンで被覆される場合、Ｎ末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面から遠位になるように配向される。

以下の実施例は、本明細書に開示される方法および組成物をどのように作製および使用するかの完全な開示および説明を当業者に提供するために提示され、本発明者らがその発明とみなすものの範囲を限定することを意図していない。使用した数字（例えば、量、温度など）に対する正確さを確保するために努力がなされているが、一部の実験誤差および偏差を考慮に入れるべきである。別途示さない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏であり、室温は約２５℃であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。

実施例１：インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に対するヒト抗体の生成
インフルエンザ血球凝集素に対するヒト抗体が、ヒトイムノグロブリン重鎖可変領域およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスで生成された。マウスは、インフルエンザＡおよびＢ血球凝集素を発現するベクターの組み合わせで免疫し、続いてインフルエンザＡおよびＢ株で感染および回復させ、続いて組換え血球凝集素タンパク質の混合物を含む追加免疫を行った。抗体の免疫応答を、インフルエンザＨＡ特異的免疫測定法によってモニタリングした。抗インフルエンザＢＨＡ抗体は、米国特許第７５８２２９８号に記載されるように、ミエローマ細胞との融合を行うことなく、抗原陽性マウスＢ細胞から直接単離された。当該文献は、参照によりその全体が本明細書に明確に組み込まれる。この方法を使用し、完全ヒト抗インフルエンザＨＡ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインとヒト定常ドメインを保有する抗体）が取得された。

本明細書に記載される例示的な抗体は、ｍＡｂ３５４９０と呼ばれる。本実施例の方法に従って作製された例示的な抗体の生物学的特性を、以下に記載される実施例において詳細に説明する。

実施例２：重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列
表１は、例示的な抗インフルエンザＢＨＡ抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域およびＣＤＲ、ならびに重鎖および軽鎖配列のアミノ酸配列識別子を記載する。対応する核酸配列識別子を表２に記載する。

（表１）アミノ酸配列識別子

（表２）核酸配列識別子

本明細書に開示される抗体は、完全ヒト可変領域を有するが、マウス定常領域（例えば、マウスＩｇＧ１ＦｃまたはマウスＩｇＧ２Ｆｃ（ａまたはｂアイソタイプ））またはヒト定常領域（例えば、ヒトＩｇＧ１ＦｃまたはヒトＩｇＧ４Ｆｃ）を有することができる。当業者によって理解されるように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換することができる、など）が、いずれの場合でも、表１および２に示される数値識別子によって示されている可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は変わらず、抗原に対する結合特性はＦｃドメインの性質に関わらず同一または実質的に類似していると予想される。

実施例３：インフルエンザに感染した細胞に結合する抗血球凝集素抗体
ＭＤＣＫＬｏｎｄｏｎ細胞を、９６ウェルプレート中の感染培地（１％ピルビン酸ナトリウム、０．２１％低ＩｇＧＢＳＡ溶液、および０．５％ゲンタマイシンを含有するＤＭＥＭ）５０μＬに４０，０００細胞／ウェルで播種した。細胞を、５％のＣＯ_２、３７℃で４時間インキュベートした。次いで、プレートを、１０Ｅ－２．５の希釈率で５０μＬのインフルエンザＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６ウイルス（Ｂ／Ｙａｍａｇａｔａ系統のワクチン株）に感染させ、軽くたたき、戻して３７℃、５％ＣＯ_２で２０時間置いた。次いで、プレートをＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳ中の４％のＰＦＡ５０μＬで固定し、室温で１５分間インキュベートした。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、３００μＬのＳｔａｒｔｉｎｇＢｌｏｃｋ（商標）（ＰＢＳ）ブロッキング緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で室温で１時間ブロッキングした。インフルエンザＢ抗ＨＡ抗体ｍＡｂ３５４９０Ｐ（ヒトＩｇＧ１Ｆｃでフォーマット）およびヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体を、ブロッキング緩衝液中、１００μｇ／ｍＬの開始濃度まで希釈し、１：４で、６．１Ｅ－３μｇ／ｍＬの最終濃度までタイトレーションした。インキュベーション後、ブロッキング緩衝液をプレートから除去し、希釈抗体を７５μＬ／ウェルで細胞上に添加した。プレートを、室温で１時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを、洗浄緩衝液（イミダゾール緩衝生理食塩水およびＴｗｅｅｎ（登録商標）２０をＭｉｌｌｉ－Ｑ水で１Ｘに希釈）で３回洗浄し、ブロッキング緩衝液で１：２０００に希釈した二次抗体（ペルオキシダーゼＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅロバ抗ヒトＩｇＧ、ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）の７５μＬ／ウェルでオーバーレイした。二次溶液を、プレート上で室温で１時間インキュベートした。続いて、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、７５μＬ／ウェルの顕色基質ＥＬＩＳＡＰｉｃｏ基質（１：１で調製）を添加した。プレートを、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓＳｐｅｃｔｒａｍａｘｉ３ｘプレートリーダーで発光について、直ちに読み取った。ＥＣ_５０データを表３に示す。

（表３）ＦｌｕＢ感染細胞抗ＨＡ結合ＥＬＩＳＡ

表３に見られるように、ｍＡｂ３５４９０は、サブｎＭ濃度でインフルエンザＢ感染細胞に結合し、ＨＡへの特異的結合を示す。

実施例４：予防的抗体投与によるインフルエンザＢ誘発性死亡率の防止
Ｂａｌｂ／ＣＥｌｉｔｅマウスを、感染の５日前に頸部擦過傷への皮下注射によりＰＢＳで希釈した５ｍｇ／ｋｇまたは０．５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ３５４９０（ヒトＩｇＧ１Ｆｃでフォーマット）または５ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体で処置した。感染当日、インフルエンザＢ／Ｆｌｏｒｉｄａ／４／２００６ウイルスストックを氷上で解凍し、２．０５Ｅ０８ｐｆｕ／ｍＬのストックからＰＢＳで希釈して、２０μＬのＰＢＳ（２．０Ｅ０５ｐｆｕ／ｍＬ）中に４０００ｐｆｕウイルスを含むようにした。ウイルスは常に氷上に置かれていた。各マウスに、２．４ｍｇ／ｋｇのケタミンおよび０．１ｍｇ／ｋｇのキシラジンのカクテルを注射し、完全に眠るまで約１０～１５分間休ませた。次いで、各マウスに、２０μＬのウイルス（４０００ｐｆｕ）を鼻腔内投与して、ウイルスを完全に吸入させた。次に、感染後２週間、マウスを体重減少および罹患率についてモニターした。感染時の初期体重から２５％以上の体重減少は、安楽死とした。結果を表４に示す。

（表４）ｍＡｂ３５４９０またはアイソタイプ対照投与後のマウス生存

ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体で処置されたすべての動物は、感染に屈し、感染後８日までに安楽死させる必要があった。５ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇの両方のｍＡｂ３５４９０で処置された動物はすべて、感染を生き延び、ＦｌｕＢ抗ＨＡ抗体ｍＡｂ３５４９０の有効性を実証した。

Claims

インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する、単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１ドメイン、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３ドメインを含む、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、ならびに
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３ドメインを含む、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含む、単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片。
ＨＣＶＲが、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＬＣＶＲが、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体またはその抗原結合性断片が、以下の特徴：
（ａ）１０^－９Ｍ未満のＥＣ_５０でインフルエンザＢＨＡに結合する；および／または
（ｂ）インフルエンザＢ感染の５日前に動物に予防的に投与された場合、同様にインフルエンザＢに曝露された未処置の動物と比較して、生存における増加を示す
のうち一方または両方を有する、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が哺乳動物に投与された場合、前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、前記哺乳動物におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状の重症度、期間、または発生頻度を、改善、緩和、または低減する、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
前記少なくとも１つの症状が、頭痛、発熱、痛み、鼻漏（鼻閉）、悪寒、倦怠感、脱力感、咽喉痛、咳、息切れ、嘔吐、下痢、肺炎、気管支炎、および死亡からなる群から選択される、請求項４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも８０％の生存率を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも９０％の生存率を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
０．５ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に１００％の生存率を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも８０％の生存率を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に少なくとも９０％の生存率を有する、請求項１～５および９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
５．０ｍｇ／ｋｇの単回予防用量として複数の哺乳動物の各々に投与された場合、前記複数の哺乳動物が、投与後１９日目に１００％の生存率を有する、請求項１～５、９および１０のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
配列番号２／１０の、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
前記抗体が、ＩｇＧ４抗体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
二重特異性抗体である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
請求項１～１７のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容可能な担体または希釈剤とを含む、医薬組成物。
第２の治療剤をさらに含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
前記第２の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬、インフルエンザＨＡに特異的に結合する異なる抗体、インフルエンザ用ワクチン、栄養補助食品、およびインフルエンザ感染症を治療するための別の緩和療法からなる群から選択される、請求項１９に記載の医薬組成物。
前記抗炎症薬が、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、請求項２０に記載の医薬組成物。
前記栄養補助食品が、抗酸化剤である、請求項２０に記載の医薬組成物。
前記抗ウイルス薬が、オセルタミビルである、請求項２０に記載の医薬組成物。
前記抗ウイルス薬が、抗インフルエンザＡ薬である、請求項２０に記載の医薬組成物。
前記抗インフルエンザＡ薬が、抗体である、請求項２４に記載の医薬組成物。
前記抗体が、インフルエンザＡＨＡに特異的に結合する、請求項２５に記載の医薬組成物。
請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド分子。
請求項２７に記載のポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
請求項２８に記載のベクターを含む、細胞。
インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法であって、前記抗体またはその抗原結合性断片の産生を可能にする条件下で、請求項２９に記載の細胞を培養する段階、および産生された抗体またはその抗原結合性断片を回収する段階を含む、方法。
請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド分子。
請求項３１に記載のポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
請求項３２に記載のベクターを含む、細胞。
請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、第１の核酸分子、および
前記抗体のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、第２の核酸分子
を含む、組成物。
請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、第１の核酸分子、および
前記抗体のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、第２の核酸分子
を含む、細胞。
インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法であって、前記抗体またはその抗原結合性断片の産生を可能にする条件下で、請求項３５に記載の細胞を培養する段階、および産生された抗体またはその抗原結合性断片を回収する段階を含む、方法。
請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片を含む医薬組成物、または請求項１８～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、インフルエンザに感染した対象におけるインフルエンザ感染症の少なくとも１つの症状を予防、治療、または改善する方法における使用のための医薬組成物。
前記少なくとも１つの症状が、熱、咳、体の痛み、鼻漏、息切れ、肺炎および気管支炎からなる群から選択される、請求項３７に記載の医薬組成物。
予防的な使用のために製剤化されている、請求項３７または３８に記載の医薬組成物。
前記対象が、免疫不全の個人、６５歳以上の成人、医療従事者、および病歴または基礎疾患を有する人からなる群から選択される、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記基礎疾患が、心臓の不具合および糖尿病からなる群から選択される、請求項４０に記載の医薬組成物。
第２の治療剤と組み合わされる、請求項３７～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記第２の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬、インフルエンザＨＡに特異的に結合する異なる抗体、インフルエンザ用ワクチン、栄養補助食品、およびインフルエンザ感染症を治療するための別の緩和療法からなる群から選択される、請求項４２に記載の医薬組成物。
前記抗炎症薬が、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬からなる群から選択される、請求項４３に記載の医薬組成物。
前記栄養補助食品が、抗酸化剤である、請求項４３に記載の医薬組成物。
前記第２の治療剤が、前記抗体またはその抗原結合性断片とは異なる投与経路用に製剤化されている、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記第２の治療剤が、経口使用のために製剤化されている、請求項４２～４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記抗ウイルス薬が、オセルタミビルである、請求項４３に記載の医薬組成物。
前記オセルタミビルが、前記抗体またはその抗原結合性断片の前に使用される、請求項４８に記載の医薬組成物。
前記オセルタミビルが、前記抗体またはその抗原結合性断片と同時に使用される、請求項４８に記載の医薬組成物。
前記オセルタミビルが、前記抗体またはその抗原結合性断片の後に使用される、請求項４８に記載の医薬組成物。
前記抗ウイルス薬が、抗インフルエンザＡ薬である、請求項４３に記載の医薬組成物。
前記抗インフルエンザＡ薬が、抗体である、請求項５２に記載の医薬組成物。
前記抗体が、インフルエンザＡＨＡに特異的に結合する、請求項５３に記載の医薬組成物。
皮下、静脈内、皮内、筋肉内、鼻腔内、または経口使用のために製剤化されている、請求項３７～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記抗体またはその抗原結合性断片が、後のインフルエンザＢウイルスへの曝露による感染から哺乳動物を保護する、請求項３７～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
インフルエンザＢ血球凝集素（ＨＡ）に特異的に結合する、単離された組換え抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物であって、
前記抗体またはその抗原結合性断片が、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３ドメインを含む、ＨＣＶＲ、ならびに
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３ドメインを含む、ＬＣＶＲ
を含み、
前記医薬組成物が、全身投与用に製剤化されている、
医薬組成物。