JP7555739B2 - 4-Aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent containing a stabilizer, glycated protein measurement reagent, method for measuring glycated protein, method for stabilizing 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, and method for storing 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent - Google Patents
4-Aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent containing a stabilizer, glycated protein measurement reagent, method for measuring glycated protein, method for stabilizing 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, and method for storing 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent Download PDFInfo
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Description
本発明は検査薬に関し、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物、糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法、及び糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法に関する。 The present invention relates to a test agent, a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, a glycated protein measurement reagent, a method for measuring glycated proteins, a method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, and a method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent.
糖尿病の診断及び管理を行う上で、糖化タンパク質の測定は重要であり、過去約１から２ヶ月の平均血糖値を反映する糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ等）、過去約２週間の平均血糖値を反映する糖化アルブミン（ＧＡ）、及び血清中の糖化タンパク質の総称であるフルクトサミン（ＦＲＡ）等が日常的に測定されている。 Measuring glycated proteins is important in diagnosing and managing diabetes, and glycated hemoglobin (HbA1c, etc.), which reflects the average blood glucose level over the past one to two months, glycated albumin (GA), which reflects the average blood glucose level over the past two weeks, and fructosamine (FRA), a general term for glycated proteins in serum, are routinely measured.
精度が高く、安価で、簡便に糖化タンパク質を測定する方法として、酵素法が挙げられる。例えば特許文献１、２は、糖化タンパク質にプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いて過酸化水素を発生させ、さらにペルオキシダーゼ、トリンダー試薬、４－アミノアンチピリンを用いて比色定量することで血清中の糖化タンパク質を測定できることを記載している。特許文献３は、糖化タンパク質にプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いた際の酸素の消費量を発色反応又は酸素電極で測定することで血清中の糖化タンパク質を測定できることを記載している。特許文献４、５は、具体的に、糖化ヘモグロビンや糖化アルブミンにプロテアーゼを作用させ、生じた糖化アミノ酸又は糖化ペプチドに作用するケトアミンオキシダーゼを用いて過酸化水素を発生させ、さらにペルオキシダーゼ、トリンダー試薬、及び４－アミノアンチピリンを用いて比色定量することで糖化ヘモグロビンや糖化アルブミンを測定できることを記載している。 Enzyme methods are one example of a highly accurate, inexpensive, and simple method for measuring glycated proteins. For example, Patent Documents 1 and 2 describe that glycated proteins in serum can be measured by acting a protease on glycated proteins, generating hydrogen peroxide using ketoamine oxidase that acts on the resulting glycated amino acids or glycated peptides, and then performing colorimetric quantification using peroxidase, Trinder's reagent, and 4-aminoantipyrine. Patent Document 3 describes that glycated proteins in serum can be measured by acting a protease on glycated proteins, and measuring the amount of oxygen consumed using ketoamine oxidase that acts on the resulting glycated amino acids or glycated peptides, using a color reaction or an oxygen electrode. Patent Documents 4 and 5 specifically describe how glycated hemoglobin and glycated albumin can be measured by reacting a protease with glycated hemoglobin or glycated albumin, generating hydrogen peroxide using ketoamine oxidase that acts on the resulting glycated amino acid or glycated peptide, and then performing colorimetric quantification using peroxidase, Trinder's reagent, and 4-aminoantipyrine.
現在、酵素法の測定試薬としては液状品が主流となっており、さらに、保存安定性を考慮して、試薬成分を２つの液状保存用部分組成物に分けた２試薬系が主流となっている。２つの液状保存用部分組成物は、それぞれ、第１試薬、第２試薬と呼ばれることがある。糖化タンパク質測定試薬においては、プロテアーゼによるケトアミンオキシダーゼの分解を防ぐためにケトアミンオキシダーゼとプロテアーゼを別々の液状保存用部分組成物に含有させ、保存中の自然発色を防ぐためにトリンダー試薬と４－アミノアンチピリンを別々の液状保存用部分組成物に含有させるのが好ましい。しかしながら２試薬系でもなお保存安定性が不十分であることから、保存安定性を向上させるための種々の技術が提供されている。 Currently, liquid products are the mainstream of measurement reagents for the enzymatic method, and furthermore, two-reagent systems in which the reagent components are divided into two liquid storage partial compositions are mainstream in consideration of storage stability. The two liquid storage partial compositions are sometimes called the first and second reagents, respectively. In a glycated protein measurement reagent, it is preferable to contain ketoamine oxidase and protease in separate liquid storage partial compositions to prevent decomposition of ketoamine oxidase by protease, and to contain Trinder's reagent and 4-aminoantipyrine in separate liquid storage partial compositions to prevent natural color development during storage. However, since the storage stability is still insufficient even with the two-reagent system, various techniques have been provided to improve storage stability.
例えば、特許文献５は、糖アルコール、スクロース、水溶性マグネシウム塩、水溶性カルシウム塩、硫安、アミノ酸、又はザルコシンを測定試薬に含有させることでケトアミンオキシダーゼの安定性を向上させ、測定試薬の保存安定性を改善できることを記載している。また、特許文献５は、ジメチルスルホキシド、アルコール、水溶性カルシウム塩、食塩、第四級アンモニウム塩、又は第四級アンモニウム塩型陽イオン界面活性剤を測定試薬に含有させることでプロテアーゼの安定性を向上させ、測定試薬の安定性を改善できることを記載している。特許文献６は、ポリアミノカルボン酸系のキレート試薬と、アンモニウム塩、オキシカルボン酸系のキレート試薬、糖アルコール類、アミノ酸類より選ばれる１種以上の試薬と、を共存させることで、フルクトシルペプチドオキシダーゼを含む液状の測定試薬の保存安定性を改善できることを記載している。特許文献７は、キレート剤を測定試薬に含有させることでケトアミンオキシダーゼ及びアスコルビン酸オキシダーゼの安定性を向上させ、測定試薬の保存安定性を改善できることを記載している。特許文献８は、緩衝剤や４－アミノアンチピリンの濃度を上げることで、測定試薬の保存安定性を改善できることを記載している。 For example, Patent Document 5 describes that the stability of ketoamine oxidase can be improved by adding sugar alcohol, sucrose, water-soluble magnesium salt, water-soluble calcium salt, ammonium sulfate, amino acid, or sarcosine to the measurement reagent, and the storage stability of the measurement reagent can be improved. Patent Document 5 also describes that the stability of protease can be improved by adding dimethyl sulfoxide, alcohol, water-soluble calcium salt, table salt, quaternary ammonium salt, or quaternary ammonium salt-type cationic surfactant to the measurement reagent, and the stability of the measurement reagent can be improved. Patent Document 6 describes that the storage stability of a liquid measurement reagent containing fructosyl peptide oxidase can be improved by coexisting a polyaminocarboxylic acid-based chelating reagent with one or more reagents selected from ammonium salts, oxycarboxylic acid-based chelating reagents, sugar alcohols, and amino acids. Patent Document 7 describes that the stability of ketoamine oxidase and ascorbic acid oxidase can be improved by adding a chelating agent to the measurement reagent, and the storage stability of the measurement reagent can be improved. Patent Document 8 describes that the storage stability of the measurement reagent can be improved by increasing the concentration of the buffer or 4-aminoantipyrine.
また、測定試薬に関する言及はないものの、特許文献９は、プロテアーゼ阻害剤としてホウ酸、ボロン酸、フェニルボロン酸を含有することで液体洗剤中のプロテアーゼの貯蔵安定性を改善できると記載している。特許文献１０は、油中水エマルジョン中の酵素としてのプロテアーゼを安定化させるために、ポリオールが有効であることを記載している。特許文献１１、１２は、液体洗剤組成物中のペプチドアルデヒド、カルシウムイオン、ホウ素組成物、ポリオール、及び塩酸ベンズアミジンが、プロテアーゼの安定化剤として用いられることができると記載している。 Although there is no mention of a measurement reagent, Patent Document 9 describes that the storage stability of proteases in liquid detergents can be improved by including boric acid, boronic acid, and phenylboronic acid as protease inhibitors. Patent Document 10 describes that polyols are effective for stabilizing proteases as enzymes in water-in-oil emulsions. Patent Documents 11 and 12 describe that peptide aldehydes, calcium ions, boron compositions, polyols, and benzamidine hydrochloride in liquid detergent compositions can be used as protease stabilizers.
上述したように、従来、測定試薬やプロテアーゼの様々な安定化方法が提案されているが、４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含む試薬を十分に安定化させる方法はない。そこで、本発明は、４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含みながら安定な糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物、糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法、及び糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法を提供することを課題の一部とする。 As described above, various methods for stabilizing measurement reagents and proteases have been proposed in the past, but there is no method for sufficiently stabilizing a reagent containing 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and protease. Therefore, one of the objectives of the present invention is to provide a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent that is stable while containing 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and protease, a glycosylated protein measurement reagent, a method for measuring glycosylated proteins, a method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent, and a method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent.
上記課題を解決するために本発明者は鋭意研究を行った結果、４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含む試薬に、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つを添加すると、試薬が安定することを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明としては以下のものが挙げられる。 As a result of intensive research conducted by the present inventors to solve the above problems, the present inventors discovered that adding at least one selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid to a reagent containing 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and protease stabilizes the reagent, leading to the completion of the present invention. In other words, the present invention includes the following:
［１］糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物であって、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、（２）プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含む、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [1] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent comprising (1) 4-aminoantipyrine, a ferrocyanide, and a protease, and further comprising (2) at least one stabilizer selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid.
［２］液状である、［１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [2] A liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in the glycosylated protein measurement reagent described in [1].
［３］（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼと、（２）プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤と、が、予め混合されている、［１］又は［２］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [3] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [1] or [2], in which (1) 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and protease, and (2) at least one stabilizer selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid, are premixed.
［４］包装されている、［１］から［３］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [4] A packaged 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent according to any one of [1] to [3].
［５］安定化剤がプロピレングリコールである、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [5] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is propylene glycol.
［６］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [6] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], wherein the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid.
［７］プロピレングリコールの濃度をａ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、トリメチレングリコールの濃度をｂ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｃ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｄ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度をｅ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度をｆ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アミノフェニルボロン酸の濃度をｇ（ｗｔ／ｖｏｌ％）として、ａからｇが下記（１）式を満たす、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (1)
[7] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], wherein a (wt/vol%) is the concentration of propylene glycol, b (wt/vol%) is the concentration of trimethylene glycol, c (wt/vol%) is the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid, d (wt/vol%) is the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid, e (wt/vol%) is the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid, f (wt/vol%) is the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid, and g (wt/vol%) is the concentration of 3-aminophenylboronic acid, and a to g satisfy the following formula (1):
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (1)
［８］安定化剤がプロピレングリコールであり、当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [8] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is propylene glycol and the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［９］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [9] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [8], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more.
［１０］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [10] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [8], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 35 wt/vol% or more.
［１１］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [11] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [8], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol% or less.
［１２］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [12] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [8], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 60 wt/vol% or less.
［１３］安定化剤がトリメチレングリコールであり、当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [13] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is trimethylene glycol and the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［１４］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [14] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [13], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more.
［１５］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [15] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [13], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 45 wt/vol% or more.
［１６］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [16] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [13], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol% or less.
［１７］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [17] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [13], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 70 wt/vol% or less.
［１８］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [18] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［１９］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [19] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [18], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［２０］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [20] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [18], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［２１］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [21] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [18], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［２２］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [22] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [18], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［２３］安定化剤が３－カルボキシフェニルボロン酸であり、当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [23] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is 3-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［２４］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [24] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [23], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more.
［２５］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [25] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [23], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.5 wt/vol% or more.
［２６］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [26] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [23], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［２７］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [27] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [23], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［２８］安定化剤が３－カルバモイルフェニルボロン酸であり、当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [28] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is 3-carbamoylphenylboronic acid, and the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more and 5 wt/vol% or less.
［２９］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [29] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [28], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more.
［３０］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [30] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [28], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［３１］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [31] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [28], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［３２］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が２ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [32] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [28], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 2 wt/vol% or less.
［３３］安定化剤が３－アセトアミドフェニルボロン酸であり、当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [33] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is 3-acetamidophenylboronic acid, and the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［３４］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［３３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [34] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [33], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［３５］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［３３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [35] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [33], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［３６］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [36] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [33], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［３７］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [37] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [33], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［３８］安定化剤が３－アミノフェニルボロン酸であり、当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１］から［４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [38] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [4], in which the stabilizer is 3-aminophenylboronic acid, and the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［３９］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［３８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [39] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [38], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［４０］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［３８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [40] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [38], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［４１］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [41] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [38], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［４２］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［３８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [42] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [38], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［４３］キレート剤をさらに含む、［１］から［４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [43] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [42], further comprising a chelating agent.
［４４］キレート剤が、クエン酸及びその塩、リンゴ酸及びその塩、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）及びその塩、シュウ酸及びその塩、ニトリロ三酢酸及びその塩、並びにＮ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸及びその塩からなる群より選択される少なくとも１種である、［４３］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [44] The 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [43], wherein the chelating agent is at least one selected from the group consisting of citric acid and its salts, malic acid and its salts, nitrilotris(methylphosphonic acid) and its salts, oxalic acid and its salts, nitrilotriacetic acid and its salts, and N-(2-hydroxyethyl)iminodiacetic acid and its salts.
［４５］キレート剤が、クエン酸又はその塩である、［４３］又は［４４］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [45] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [43] or [44], in which the chelating agent is citric acid or a salt thereof.
［４６］キレート剤が、ナトリウム塩である、［４３］から［４５］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [46] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [43] to [45], in which the chelating agent is a sodium salt.
［４７］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤がプロピレングリコールである、［４３］から［４６］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [47] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [43] to [46], in which the chelating agent is sodium citrate and the stabilizer is propylene glycol.
［４８］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［４３］から［４６］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [48] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [43] to [46], in which the chelating agent is sodium citrate and the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid.
［４９］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［４３］から［４８］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [49] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [43] to [48], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more and 1000 mmol/L or less.
［５０］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上である、［４９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [50] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [49], in which the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more.
［５１］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［４９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [51] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [49], in which the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 μmol/L or more.
［５２］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［４９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [52] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [49], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 1000 mmol/L or less.
［５３］当該４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［４９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [53] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [49], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 100 mmol/L or less.
［５４］フェロシアン化物が、フェロシアン化カリウムである、［１］から［５３］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [54] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [53], wherein the ferrocyanide is potassium ferrocyanide.
［５５］プロテアーゼがエンドペプチダーゼである、［１］から［５４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [55] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [54], wherein the protease is an endopeptidase.
［５６］プロテアーゼがセリンエンドペプチダーゼである、［１］から［５４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [56] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [54], wherein the protease is serine endopeptidase.
［５７］プロテアーゼがＢａｃｉｌｌｕｓ由来又はＴｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ由来である、［１］から［５４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [57] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [54], wherein the protease is derived from Bacillus or Tritirachium.
［５８］糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含まない、［１］から［５７］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [58] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [57], which does not contain glycated amino acid oxidase, peroxidase, or Trinder's reagent.
［５９］２℃以上１０℃以下で保存される、［１］から［５８］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [59] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [58], which is stored at 2°C or higher and 10°C or lower.
［６０］２℃以上１０℃以下で少なくとも１か月間保存可能である、［１］から［５９］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [60] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [59], which can be stored at 2°C or higher and 10°C or lower for at least one month.
［６１］糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［１］から［６０］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物。 [61] A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [1] to [60], wherein the glycated protein is glycated albumin.
［６２］［１］から［６１］のいずれかに記載の４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物と、を備える糖化タンパク質測定試薬。 [62] A reagent for measuring glycated proteins comprising a 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to any one of [1] to [61] and a Trinder reagent-containing partial composition containing glycated amino acid oxidase, peroxidase, and Trinder reagent.
［６３］４－アミノアンチピリンとトリンダー試薬とが組み合わされることにより、糖化タンパク質が存在する際に発色反応が生じ、発色反応に対応する吸光度から算出される濃度が０．１ｇ／ｄＬ以上７．５ｇ／ｄＬ以下の糖化タンパク質の検出に使用可能である、［６２］に記載の糖化タンパク質測定試薬。 [63] The glycated protein measurement reagent according to [62], which is a combination of 4-aminoantipyrine and Trinder's reagent, and which produces a color reaction in the presence of glycated proteins, and can be used to detect glycated proteins whose concentration calculated from the absorbance corresponding to the color reaction is 0.1 g/dL or more and 7.5 g/dL or less.
［６４］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で６か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して９２％以上１００％以下である、［６２］又は［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。 [64] The glycated protein measurement reagent according to [62] or [63], in which the residual measurement sensitivity of glycated proteins when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is used in combination with the Trinder reagent-containing partial composition after storage at 2°C for 6 months is 92% or more and 100% or less compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［６５］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１２か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して８８％以上１００％以下である、［６２］又は［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。 [65] The glycated protein measurement reagent according to [62] or [63], in which the residual measurement sensitivity of glycated proteins when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is used in combination with the Trinder reagent-containing partial composition after storage at 2°C for 12 months is 88% or more and 100% or less compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［６６］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を１０℃で６か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して８７％以上１００％以下である、［６２］又は［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。 [66] The glycated protein measurement reagent according to [62] or [63], in which the residual measurement sensitivity of glycated proteins when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is used in combination with the Trinder reagent-containing partial composition after storage at 10°C for 6 months is 87% or more and 100% or less compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［６７］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を１０℃で１２か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して７８％以上１００％以下である、［６２］又は［６３］に記載の糖化タンパク質測定試薬。 [67] The glycated protein measurement reagent according to [62] or [63], in which the residual measurement sensitivity of glycated proteins when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is used in combination with the Trinder reagent-containing partial composition after storage at 10°C for 12 months is 78% or more and 100% or less compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［６８］トリンダー試薬含有部分組成物が液状である、［６２］から［６７］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬。 [68] The glycosylated protein measurement reagent according to any one of [62] to [67], wherein the Trinder reagent-containing partial composition is liquid.
［６９］トリンダー試薬含有部分組成物において、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬が予め混合されている、［６２］から［６８］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬。 [69] A glycated protein measurement reagent according to any one of [62] to [68], in which the Trinder reagent-containing partial composition contains a premix of glycated amino acid oxidase, peroxidase, and Trinder reagent.
［７０］トリンダー試薬含有部分組成物が包装されている、［６２］から［６９］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬。 [70] A glycosylated protein measurement reagent according to any one of [62] to [69], in which a partial composition containing Trinder's reagent is packaged.
［７１］トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン２ナトリウムである、［６２］から［７０］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬。 [71] The glycated protein measurement reagent according to any one of [62] to [70], wherein the Trinder reagent is disodium N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline.
［７２］糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［６２］から［７１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬。 [72] The glycosylated protein measurement reagent according to any one of [62] to [71], wherein the glycosylated protein is glycosylated albumin.
［７３］検体にトリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とを接触させることと、
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含み、
４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、（２）プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含む、 糖化タンパク質の測定方法。
[73] Contacting a sample with a Trinder reagent-containing partial composition and a 4-aminoantipyrine-containing partial composition;
detecting color development dependent on glycosylated proteins present in the sample;
Including,
the Trinder reagent-containing portion composition comprises a glycosylated amino acid oxidase, a peroxidase, and a Trinder reagent;
A method for measuring a glycated protein, wherein the 4-aminoantipyrine-containing partial composition (1) contains 4-aminoantipyrine, a ferrocyanide, and a protease, and (2) further contains at least one stabilizer selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid.
［７４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物が液状である、［７３］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [74] The method for measuring a glycated protein according to [73], wherein the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is liquid.
［７５］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃以上１０℃以下で少なくとも１か月間保存した後に実施される、［７３］又は［７４］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [75] The method for measuring a glycated protein according to [73] or [74], which is carried out after storing a liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition at 2°C or higher and 10°C or lower for at least one month.
［７６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物において、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼと、（２）プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤と、が、予め混合されている、［７３］から［７５］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [76] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [75], wherein in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition, (1) 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and protease, and (2) at least one stabilizer selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid are premixed.
［７７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物が包装されている、［７３］から［７６］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [77] A method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [76], in which a 4-aminoantipyrine-containing partial composition is packaged.
［７８］安定化剤がプロピレングリコールである、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [78] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is propylene glycol.
［７９］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [79] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid.
［８０］プロピレングリコールの濃度をａ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、トリメチレングリコールの濃度をｂ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｃ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｄ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度をｅ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度をｆ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アミノフェニルボロン酸の濃度をｇ（ｗｔ／ｖｏｌ％）として、ａからｇが下記（２）式を満たす、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (2)
[80] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein a (wt/vol%) is the concentration of propylene glycol, b (wt/vol%) is the concentration of trimethylene glycol, c (wt/vol%) is the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid, d (wt/vol%) is the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid, e (wt/vol%) is the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid, f (wt/vol%) is the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid, and g (wt/vol%) is the concentration of 3-aminophenylboronic acid, and a to g satisfy the following formula (2):
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (2)
［８１］安定化剤がプロピレングリコールであり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [81] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is propylene glycol and the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［８２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［８１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [82] The method for measuring a glycated protein according to [81], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more.
［８３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［８１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [83] The method for measuring a glycated protein according to [81], wherein the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 35 wt/vol% or more.
［８４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［８１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [84] The method for measuring a glycated protein according to [81], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol% or less.
［８５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［８１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [85] The method for measuring a glycated protein according to [81], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 60 wt/vol% or less.
［８６］安定化剤がトリメチレングリコールであり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [86] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is trimethylene glycol and the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［８７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［８６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [87] The method for measuring a glycated protein according to [86], wherein the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more.
［８８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［８６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [88] The method for measuring a glycated protein according to [86], wherein the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 45 wt/vol% or more.
［８９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［８６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [89] The method for measuring a glycated protein according to [86], wherein the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol% or less.
［９０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［８６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [90] The method for measuring a glycated protein according to [86], wherein the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 70 wt/vol% or less.
［９１］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [91] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［９２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［９１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [92] The method for measuring a glycated protein according to [91], wherein the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［９３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［９１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [93] The method for measuring a glycated protein according to [91], wherein the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［９４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［９１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [94] The method for measuring a glycated protein according to [91], wherein the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［９５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［９１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [95] The method for measuring a glycated protein according to [91], wherein the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［９６］安定化剤が３－カルボキシフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [96] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is 3-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［９７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［９６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [97] The method for measuring a glycated protein according to [96], wherein the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more.
［９８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［９６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [98] The method for measuring a glycated protein according to [96], wherein the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.5 wt/vol% or more.
［９９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［９６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [99] The method for measuring a glycated protein according to [96], wherein the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［１００］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［９６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [100] The method for measuring a glycated protein according to [96], wherein the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［１０１］安定化剤が３－カルバモイルフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [101] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is 3-carbamoylphenylboronic acid, and the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more and 5 wt/vol% or less.
［１０２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１０１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [102] The method for measuring a glycated protein according to [101], wherein the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more.
［１０３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１０１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [103] The method for measuring a glycated protein according to [101], wherein the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［１０４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [104] The method for measuring a glycated protein according to [101], wherein the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［１０５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が２ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [105] The method for measuring a glycated protein according to [101], wherein the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 2 wt/vol% or less.
［１０６］安定化剤が３－アセトアミドフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [106] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is 3-acetamidophenylboronic acid, and the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［１０７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１０６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [107] The method for measuring a glycated protein according to [106], wherein the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［１０８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１０６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [108] The method for measuring a glycated protein according to [106], wherein the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［１０９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [109] The method for measuring a glycated protein according to [106], wherein the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［１１０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１０６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [110] The method for measuring a glycated protein according to [106], wherein the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［１１１］安定化剤が３－アミノフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［７３］から［７７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [111] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [77], wherein the stabilizer is 3-aminophenylboronic acid, and the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［１１２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１１１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [112] The method for measuring a glycated protein according to [111], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［１１３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１１１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [113] The method for measuring a glycated protein according to [111], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［１１４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１１１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [114] The method for measuring a glycated protein according to [111], wherein the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol% or less.
［１１５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１１１］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [115] The method for measuring a glycated protein according to [111], wherein the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［１１６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［７３］から［１１５］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [116] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [115], wherein the 4-aminoantipyrine-containing partial composition further contains a chelating agent.
［１１７］キレート剤が、クエン酸及びその塩、リンゴ酸及びその塩、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）及びその塩、シュウ酸及びその塩、ニトリロ三酢酸及びその塩、並びにＮ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸及びその塩からなる群から選択される少なくとも１種である、［１１６］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [117] The method for measuring glycated proteins according to [116], wherein the chelating agent is at least one selected from the group consisting of citric acid and its salts, malic acid and its salts, nitrilotris(methylphosphonic acid) and its salts, oxalic acid and its salts, nitrilotriacetic acid and its salts, and N-(2-hydroxyethyl)iminodiacetic acid and its salts.
［１１８］キレート剤が、クエン酸又はその塩である、［１１６］又は［１１７］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [118] The method for measuring a glycated protein according to [116] or [117], wherein the chelating agent is citric acid or a salt thereof.
［１１９］キレート剤が、ナトリウム塩である、［１１６］から［１１８］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [119] The method for measuring a glycated protein according to any one of [116] to [118], wherein the chelating agent is a sodium salt.
［１２０］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤がプロピレングリコールである、［１１６］から［１１９］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [120] The method for measuring a glycated protein according to any one of [116] to [119], wherein the chelating agent is sodium citrate and the stabilizer is propylene glycol.
［１２１］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［１１６］から［１１９］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [121] The method for measuring a glycated protein according to any one of [116] to [119], wherein the chelating agent is sodium citrate and the stabilizing agent is 2-carboxyphenylboronic acid.
［１２２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１１６］から［１２１］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [122] The method for measuring a glycated protein according to any one of [116] to [121], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more and 1000 mmol/L or less.
［１２３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１２２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [123] The method for measuring a glycated protein according to [122], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more.
［１２４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１２２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [124] The method for measuring a glycated protein according to [122], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 μmol/L or more.
［１２５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１２２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [125] The method for measuring a glycated protein according to [122], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 1000 mmol/L or less.
［１２６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１２２］に記載の糖化タンパク質の測定方法。 [126] The method for measuring a glycated protein according to [122], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 100 mmol/L or less.
［１２７］フェロシアン化物が、フェロシアン化カリウムである、［７３］から［１２６］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [127] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [126], wherein the ferrocyanide is potassium ferrocyanide.
［１２８］プロテアーゼがエンドペプチダーゼである、［７３］から［１２７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [128] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [127], wherein the protease is an endopeptidase.
［１２９］プロテアーゼがセリンエンドペプチダーゼである、［７３］から［１２７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [129] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [127], wherein the protease is a serine endopeptidase.
［１３０］プロテアーゼがＢａｃｉｌｌｕｓ由来又はＴｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ由来である、［７３］から［１２７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [130] The method for measuring a glycosylated protein according to any one of [73] to [127], wherein the protease is derived from Bacillus or Tritirachium.
［１３１］濃度が０．１ｇ／ｄＬ以上７．５ｇ／ｄＬ以下の糖化タンパク質を検出可能である、［７３］から［１３０］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [131] A method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [130], capable of detecting a glycated protein having a concentration of 0.1 g/dL or more and 7.5 g/dL or less.
［１３２］トリンダー試薬含有部分組成物及び４－アミノアンチピリン含有部分組成物を添加された検体に対して、糖化タンパク質の濃度に依存する吸光度を測定する、［７３］から［１３１］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [132] A method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [131], in which an absorbance dependent on the concentration of a glycated protein is measured for a sample to which a Trinder reagent-containing partial composition and a 4-aminoantipyrine-containing partial composition have been added.
［１３３］４－アミノアンチピリンとトリンダー試薬とが組み合わされることにより、糖化タンパク質が存在する際に発色反応が生じ、発色反応に対応する吸光度から算出される濃度が０．１ｇ／ｄＬ以上７．５ｇ／ｄＬ以下の糖化タンパク質を検出可能である、［７３］から［１３２］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [133] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [132], in which a color reaction occurs in the presence of a glycated protein by combining 4-aminoantipyrine with Trinder's reagent, and a glycated protein having a concentration of 0.1 g/dL or more and 7.5 g/dL or less calculated from the absorbance corresponding to the color reaction can be detected.
［１３４］検体にトリンダー試薬含有部分組成物を接触せしめ、次いで、検体とトリンダー試薬含有部分組成物の混合液に４－アミノアンチピリン含有部分組成物を接触せしめる、［７３］から［１３３］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [134] A method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [133], comprising contacting a sample with a Trinder reagent-containing partial composition, and then contacting a mixture of the sample and the Trinder reagent-containing partial composition with a 4-aminoantipyrine-containing partial composition.
［１３５］トリンダー試薬含有部分組成物において、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬が予め混合されている、［７３］から［１３４］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [135] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [134], in which the glycated amino acid oxidase, peroxidase, and Trinder's reagent are premixed in the Trinder's reagent-containing partial composition.
［１３６］トリンダー試薬含有部分組成物が液状である、［７３］から［１３５］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [136] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [135], wherein the Trinder reagent-containing partial composition is liquid.
［１３７］トリンダー試薬含有部分組成物が包装されている、［７３］から［１３６］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [137] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [136], in which a partial composition containing Trinder's reagent is packaged.
［１３８］トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン２ナトリウムである、［７３］から［１３７］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [138] The method for measuring glycated proteins according to any one of [73] to [137], wherein the Trinder reagent is disodium N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline.
［１３９］糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［７３］から［１３８］のいずれかに記載の糖化タンパク質の測定方法。 [139] The method for measuring a glycated protein according to any one of [73] to [138], wherein the glycated protein is glycated albumin.
［１４０］糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法であって、
糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼと、（２）プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤と、を含有せしめること、
を含む、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。
[140] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, comprising the steps of:
A 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent contains (1) 4-aminoantipyrine, a ferrocyanide, and a protease, and (2) at least one stabilizer selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid;
The present invention relates to a method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a reagent for measuring a glycated protein, the method comprising the steps of:
［１４１］４－アミノアンチピリン含有部分組成物が液状である、［１４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [141] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [140], wherein the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is liquid.
［１４２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物を包装することをさらに含む、［１４０］又は［１４１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [142] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [140] or [141], further comprising packaging the 4-aminoantipyrine-containing partial composition.
［１４３］安定化剤がプロピレングリコールである、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [143] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], in which the stabilizer is propylene glycol.
［１４４］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [144] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], wherein the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid.
［１４５］プロピレングリコールの濃度をａ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、トリメチレングリコールの濃度をｂ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｃ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｄ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度をｅ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度をｆ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アミノフェニルボロン酸の濃度をｇ（ｗｔ／ｖｏｌ％）として、ａからｇが下記（３）式を満たす、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (3)
[145] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a reagent for measuring a glycosylated protein according to any one of [140] to [142], wherein a (wt/vol%) is the concentration of propylene glycol, b (wt/vol%) is the concentration of trimethylene glycol, c (wt/vol%) is the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid, d (wt/vol%) is the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid, e (wt/vol%) is the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid, f (wt/vol%) is the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid, and g (wt/vol%) satisfies the following formula (3):
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (3)
［１４６］安定化剤がプロピレングリコールであり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [146] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], in which the stabilizer is propylene glycol and the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［１４７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１４６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [147] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [146], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more.
［１４８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１４６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [148] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [146], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 35 wt/vol% or more.
［１４９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [149] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [146], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol % or less.
［１５０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [150] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [146], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 60 wt/vol % or less.
［１５１］安定化剤がトリメチレングリコールであり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [151] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], wherein the stabilizer is trimethylene glycol and the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［１５２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１５１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [152] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [151], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more.
［１５３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１５１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [153] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [151], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 45 wt/vol% or more.
［１５４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１５１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [154] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [151], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol % or less.
［１５５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１５１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [155] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [151], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 70 wt/vol % or less.
［１５６］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [156] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], in which the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［１５７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [157] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [156], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［１５８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [158] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [156], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［１５９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [159] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [156], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［１６０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [160] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [156], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol % or less.
［１６１］安定化剤が３－カルボキシフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [161] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], in which the stabilizer is 3-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［１６２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１６１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [162] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [161], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more.
［１６３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１６１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [163] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [161], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.5 wt/vol% or more.
［１６４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１６１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [164] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [161], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［１６５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１６１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [165] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [161], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［１６６］安定化剤が３－カルバモイルフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [166] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], in which the stabilizer is 3-carbamoylphenylboronic acid, and the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more and 5 wt/vol% or less.
［１６７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１６６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [167] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [166], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more.
［１６８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１６６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [168] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [166], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［１６９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１６６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [169] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [166], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol % or less.
［１７０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が２ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１６６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [170] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [166], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 2 wt/vol% or less.
［１７１］安定化剤が３－アセトアミドフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [171] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], in which the stabilizer is 3-acetamidophenylboronic acid, and the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［１７２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１７１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [172] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [171], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［１７３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１７１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [173] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [171], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［１７４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１７１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [174] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [171], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［１７５］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１７１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [175] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [171], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［１７６］安定化剤が３－アミノフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１４０］から［１４２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [176] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [142], in which the stabilizer is 3-aminophenylboronic acid and the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［１７７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１７６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [177] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [176], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［１７８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［１７６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [178] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [176], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［１７９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１７６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [179] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [176], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［１８０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［１７６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [180] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [176], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［１８１］糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物にキレート剤をさらに含有せしめる、［１４０］から［１８０］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [181] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [180], further comprising adding a chelating agent to the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent.
［１８２］キレート剤が、クエン酸及びその塩、リンゴ酸及びその塩、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）及びその塩、シュウ酸及びその塩、ニトリロ三酢酸及びその塩、並びにＮ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸及びその塩からなる群から選択される少なくとも１種である、［１８１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [182] The method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [181], wherein the chelating agent is at least one selected from the group consisting of citric acid and its salts, malic acid and its salts, nitrilotris(methylphosphonic acid) and its salts, oxalic acid and its salts, nitrilotriacetic acid and its salts, and N-(2-hydroxyethyl)iminodiacetic acid and its salts.
［１８３］キレート剤が、クエン酸又はその塩である、［１８１］又は［１８２］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [183] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [181] or [182], wherein the chelating agent is citric acid or a salt thereof.
［１８４］キレート剤が、ナトリウム塩である、［１８１］から［１８３］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [184] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [181] to [183], wherein the chelating agent is a sodium salt.
［１８５］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤がプロピレングリコールである、［１８１］から［１８４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [185] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [181] to [184], in which the chelating agent is sodium citrate and the stabilizer is propylene glycol.
［１８６］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［１８１］から［１８４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [186] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [181] to [184], wherein the chelating agent is sodium citrate and the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid.
［１８７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１８１］から［１８６］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [187] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [181] to [186], in which the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more and 1000 mmol/L or less.
［１８８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１８７］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [188] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [187], in which the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more.
［１８９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［１８７］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [189] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [187], in which the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 μmol/L or more.
［１９０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１８７］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [190] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [187], in which the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 1000 mmol/L or less.
［１９１］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［１８７］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [191] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [187], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 100 mmol/L or less.
［１９２］フェロシアン化物が、フェロシアン化カリウムである、［１４０］から［１９１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [192] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [191], wherein the ferrocyanide is potassium ferrocyanide.
［１９３］プロテアーゼがエンドペプチダーゼである、［１４０］から［１９２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [193] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [192], wherein the protease is an endopeptidase.
［１９４］プロテアーゼがセリンエンドペプチダーゼである、［１４０］から［１９２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [194] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [192], wherein the protease is serine endopeptidase.
［１９５］プロテアーゼがＢａｃｉｌｌｕｓ由来又はＴｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ由来である、［１４０］から［１９２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [195] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [192], wherein the protease is derived from Bacillus or Tritirachium.
［１９６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含有せしめない、［１４０］から［１９５］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [196] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [195], in which the 4-aminoantipyrine-containing partial composition does not contain glycated amino acid oxidase, peroxidase, or Trinder's reagent.
［１９７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で保存される、［１４０］から［１９６］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [197] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [196], in which the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at a temperature of 2°C or higher and 10°C or lower.
［１９８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物が２℃以上１０℃以下で少なくとも１か月間保存可能である、［１４０］から［１９７］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [198] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [197], wherein the 4-aminoantipyrine-containing partial composition can be stored at 2°C or higher and 10°C or lower for at least one month.
［１９９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用可能である、［１４０］から［１９８］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [199] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [198], in which the 4-aminoantipyrine-containing partial composition can be used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition containing glycated amino acid oxidase, peroxidase, and Trinder reagent.
［２００］４－アミノアンチピリンとトリンダー試薬とが組み合わされることにより、糖化タンパク質が存在する際に発色反応が生じ、発色反応に対応する吸光度から算出される濃度が０．１ｇ／ｄＬ以上７．５ｇ／ｄＬ以下の糖化タンパク質の検出に、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物が使用可能である［１９９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [200] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [199], in which a color reaction occurs in the presence of a glycated protein by combining 4-aminoantipyrine with Trinder's reagent, and the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent can be used to detect a glycated protein whose concentration calculated from the absorbance corresponding to the color reaction is 0.1 g/dL or more and 7.5 g/dL or less.
［２０１］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で６か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して９２％以上１００％以下である、［１９９］又は［２００］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。 [201] A method for stabilizing a glycated protein measurement reagent according to [199] or [200], in which the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 6 months, and then when used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition, the remaining measurement sensitivity of glycated proteins is 92% or more and 100% or less, compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２０２］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１２か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して８８％以上１００％以下である、［１９９］又は［２００］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。 [202] A method for stabilizing a glycated protein measurement reagent according to [199] or [200], in which the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 12 months, and then when used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition, the remaining measurement sensitivity of glycated proteins is 88% or more and 100% or less, compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２０３］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を１０℃で６か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して８７％以上１００％以下である、［１９９］又は［２００］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。 [203] A method for stabilizing a glycated protein measurement reagent according to [199] or [200], in which the residual measurement sensitivity of a glycated protein when a liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition after storage at 10°C for 6 months is 87% or more and 100% or less compared to when a liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２０４］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を１０℃で１２か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して７８％以上１００％以下である、［１９９］又は［２００］に記載の糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。 [204] A method for stabilizing a glycated protein measurement reagent according to [199] or [200], in which the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 10°C for 12 months, and then when used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition, the remaining measurement sensitivity of glycated proteins is 78% or more and 100% or less, compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２０５］トリンダー試薬含有部分組成物が液状である、［１９９］から［２０４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [205] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [199] to [204], wherein the Trinder reagent-containing partial composition is liquid.
［２０６］トリンダー試薬含有部分組成物が包装されている、［１９９］から［２０５］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [206] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [199] to [205], in which the Trinder reagent-containing partial composition is packaged.
［２０７］トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン２ナトリウムである、［１９９］から［２０６］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [207] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [199] to [206], wherein the Trinder reagent is disodium N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline.
［２０８］糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［１４０］から［２０７］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法。 [208] A method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [140] to [207], wherein the glycated protein is glycated albumin.
［２０９］糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法であって、
（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、（２）プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含む、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
４－アミノアンチピリン含有部分組成物を保存することと、
を含む、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。
[209] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, comprising the steps of:
(1) preparing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent, the partial composition comprising 4-aminoantipyrine, a ferrocyanide, and a protease, and (2) further comprising at least one stabilizer selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid;
storing the 4-aminoantipyrine-containing partial composition; and
A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a reagent for measuring a glycated protein, comprising the steps of:
［２１０］糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物が液状である、［２０９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [210] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [209], wherein the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent is liquid.
［２１１］糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を包装して保存する、［２０９］又は［２１０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [211] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [209] or [210], which comprises packaging and storing the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent.
［２１２］安定化剤がプロピレングリコールである、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [212] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], in which the stabilizer is propylene glycol.
［２１３］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [213] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid.
［２１４］プロピレングリコールの濃度をａ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、トリメチレングリコールの濃度をｂ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｃ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｄ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度をｅ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度をｆ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アミノフェニルボロン酸の濃度をｇ（ｗｔ／ｖｏｌ％）として、ａからｇが下記（４）式を満たす、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (4)
[214] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein a concentration of propylene glycol is a (wt/vol%), a concentration of trimethylene glycol is b (wt/vol%), a concentration of 2-carboxyphenylboronic acid is c (wt/vol%), a concentration of 3-carboxyphenylboronic acid is d (wt/vol%), a concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid is e (wt/vol%), a concentration of 3-acetamidophenylboronic acid is f (wt/vol%), and a concentration of 3-aminophenylboronic acid is g (wt/vol%), and a to g satisfy the following formula (4):
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (4)
［２１５］安定化剤がプロピレングリコールであり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [215] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], in which the stabilizer is propylene glycol and the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［２１６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [216] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [215], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 30 wt/vol% or more.
［２１７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が３５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [217] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [215], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 35 wt/vol% or more.
［２１８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [218] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [215], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol % or less.
［２１９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度が６０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２１５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [219] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [215], in which the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 60 wt/vol% or less.
［２２０］安定化剤がトリメチレングリコールであり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [220] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein the stabilizer is trimethylene glycol and the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more and 80 wt/vol% or less.
［２２１］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２２０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [221] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [220], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 40 wt/vol% or more.
［２２２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が４５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２２０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [222] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [220], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 45 wt/vol% or more.
［２２３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [223] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [220], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 80 wt/vol % or less.
［２２４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度が７０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [224] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [220], in which the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 70 wt/vol % or less.
［２２５］安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [225] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［２２６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２２５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [226] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [225], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［２２７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２２５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [227] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [225], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［２２８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [228] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [225], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［２２９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２２５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [229] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [225], in which the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［２３０］安定化剤が３－カルボキシフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [230] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein the stabilizer is 3-carboxyphenylboronic acid, and the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［２３１］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [231] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [230], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.3 wt/vol% or more.
［２３２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が０．５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [232] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [230], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.5 wt/vol% or more.
［２３３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [233] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [230], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［２３４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２３０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [234] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [230], in which the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［２３５］安定化剤が３－カルバモイルフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [235] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein the stabilizer is 3-carbamoylphenylboronic acid, and the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more and 5 wt/vol% or less.
［２３６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [236] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [235], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.05 wt/vol% or more.
［２３７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [237] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [235], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［２３８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [238] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [235], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［２３９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度が２ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２３５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [239] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [235], in which the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 2 wt/vol% or less.
［２４０］安定化剤が３－アセトアミドフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [240] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein the stabilizer is 3-acetamidophenylboronic acid, and the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［２４１］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [241] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [240], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.1 wt/vol% or more.
［２４２］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [242] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [240], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［２４３］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [243] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [240], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［２４４］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２４０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [244] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [240], in which the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol % or less.
［２４５］安定化剤が３－アミノフェニルボロン酸であり、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２０９］から［２１１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [245] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [211], wherein the stabilizer is 3-aminophenylboronic acid, and the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more and 10 wt/vol% or less.
［２４６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [246] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [245], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.2 wt/vol% or more.
［２４７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である、［２４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [247] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [245], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 0.4 wt/vol% or more.
［２４８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [248] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [245], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 wt/vol % or less.
［２４９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度が５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である、［２４５］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [249] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [245], in which the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 wt/vol% or less.
［２５０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤をさらに含む、［２０９］から［２４９］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [250] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [249], wherein the 4-aminoantipyrine-containing partial composition further contains a chelating agent.
［２５１］キレート剤が、クエン酸及びその塩、リンゴ酸及びその塩、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）及びその塩、シュウ酸及びその塩、ニトリロ三酢酸及びその塩、並びにＮ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸及びその塩からなる群から選択される少なくとも１種である、［２５０］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [251] The method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [250], wherein the chelating agent is at least one selected from the group consisting of citric acid and its salts, malic acid and its salts, nitrilotris(methylphosphonic acid) and its salts, oxalic acid and its salts, nitrilotriacetic acid and its salts, and N-(2-hydroxyethyl)iminodiacetic acid and its salts.
［２５２］キレート剤が、クエン酸又はその塩である、［２５０］又は［２５１］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [252] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to [250] or [251], wherein the chelating agent is citric acid or a salt thereof.
［２５３］キレート剤が、ナトリウム塩である、［２５０］から［２５２］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [253] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [250] to [252], wherein the chelating agent is a sodium salt.
［２５４］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤がプロピレングリコールである、［２５０］又は［２５１］に記載の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [254] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to [250] or [251], in which the chelating agent is sodium citrate and the stabilizer is propylene glycol.
［２５５］キレート剤がクエン酸ナトリウムであり、安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である、［２５０］又は［２５１］に記載の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [255] A method for preserving a 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to [250] or [251], in which the chelating agent is sodium citrate and the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid.
［２５６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２５０］から［２５５］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法の保存方法。 [256] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [250] to [255], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more and 1000 mmol/L or less.
［２５７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が５μｍｏｌ／Ｌ以上である、［２５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [257] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [256], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 5 μmol/L or more.
［２５８］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０μｍｏｌ／Ｌ以上である、［２５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [258] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [256], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 10 μmol/L or more.
［２５９］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [259] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [256], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 1000 mmol/L or less.
［２６０］４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるキレート剤の濃度が１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下である、［２５６］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [260] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [256], wherein the concentration of the chelating agent in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is 100 mmol/L or less.
［２６１］フェロシアン化物が、フェロシアン化カリウムである、［２０９］から［２６０］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [261] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [260], wherein the ferrocyanide is potassium ferrocyanide.
［２６２］プロテアーゼがエンドペプチダーゼである、［２０９］から［２６１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [262] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [261], wherein the protease is an endopeptidase.
［２６３］プロテアーゼがセリンエンドペプチダーゼである、［２０９］から［２６１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [263] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [261], wherein the protease is serine endopeptidase.
［２６４］プロテアーゼがＢａｃｉｌｌｕｓ由来又はＴｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ由来である、［２０９］から［２６１］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [264] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [261], wherein the protease is derived from Bacillus or Tritirachium.
［２６５］糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含有せしめない、［２０９］から［２６４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [265] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [264], in which the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent does not contain glycated amino acid oxidase, peroxidase, or Trinder's reagent.
［２６６］４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃以上１０℃以下で保存する、［２０９］から［２６５］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [266] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [265], in which the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at a temperature of 2°C or higher and 10°C or lower.
［２６７］４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃以上１０℃以下で少なくとも１か月間保存する、［２０９］から［２６６］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [267] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [266], comprising storing the 4-aminoantipyrine-containing partial composition at a temperature between 2°C and 10°C for at least one month.
［２６８］保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用可能である、［２０９］から［２６７］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [268] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [267], in which the stored 4-aminoantipyrine-containing partial composition can be used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition containing glycated amino acid oxidase, peroxidase, and Trinder reagent.
［２６９］４－アミノアンチピリンとトリンダー試薬とが組み合わされることにより、糖化タンパク質が存在する際に発色反応が生じ、発色反応に対応する吸光度から算出される濃度が０．１ｇ／ｄＬ以上７．５ｇ／ｄＬ以下の糖化タンパク質の検出に、保存された４－アミノアンチピリン含有部分組成物が使用可能である、［２６８］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [269] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [268], in which a color reaction occurs in the presence of glycated proteins by combining 4-aminoantipyrine with Trinder's reagent, and the stored 4-aminoantipyrine-containing partial composition can be used to detect glycated proteins whose concentration calculated from the absorbance corresponding to the color reaction is 0.1 g/dL or more and 7.5 g/dL or less.
［２７０］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で６か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して９２％以上１００％以下である、［２６８］又は［２６９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [270] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [268] or [269], in which the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 6 months, and then when used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition, the remaining measurement sensitivity of glycated proteins is 92% or more and 100% or less, compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２７１］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１２か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して８８％以上１００％以下である、［２６８］又は［２６９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [271] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [268] or [269], in which the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 12 months, and then when used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition, the remaining measurement sensitivity of glycated proteins is 88% or more and 100% or less, compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２７２］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を１０℃で６か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して８７％以上１００％以下である、［２６８］又は［２６９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [272] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [268] or [269], in which the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 10°C for 6 months, and then when used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition, the remaining measurement sensitivity of glycated proteins is 87% or more and 100% or less, compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２７３］液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を１０℃で１２か月間保存した後、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度残存率が、液状の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を２℃で１か月間保存した場合と比較して７８％以上１００％以下である、［２６８］又は［２６９］に記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [273] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to [268] or [269], in which the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 10°C for 12 months, and then when used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition, the remaining measurement sensitivity of glycated proteins is 78% or more and 100% or less, compared to when the liquid 4-aminoantipyrine-containing partial composition is stored at 2°C for 1 month.
［２７４］トリンダー試薬含有部分組成物が液状である、［２６８］から［２７３］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [274] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [268] to [273], wherein the Trinder reagent-containing partial composition is liquid.
［２７５］トリンダー試薬含有部分組成物が包装されている、［２６８］から［２７４］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [275] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for use in a glycated protein measurement reagent according to any one of [268] to [274], in which the Trinder reagent-containing partial composition is packaged.
［２７６］トリンダー試薬がＮ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，２ナトリウムである、［２６８］から［２７５］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [276] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [268] to [275], wherein the Trinder reagent is N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline, disodium.
［２７７］糖化タンパク質が糖化アルブミンである、［２０９］から［２７６］のいずれかに記載の糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法。 [277] A method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to any one of [209] to [276], wherein the glycated protein is glycated albumin.
本発明によれば、４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含みながら安定な糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物、糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の安定化方法、及び糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存方法を提供することが可能である。 According to the present invention, it is possible to provide a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent that is stable while containing 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and protease, a glycosylated protein measurement reagent, a method for measuring glycosylated proteins, a method for stabilizing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent, and a method for storing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycosylated protein measurement reagent.
以下、本発明の好適な実施の形態（以下において、「実施形態」という。）について詳細に説明する。なお以下に示す実施形態は、この発明の技術的思想を具体化するための装置や方法を例示するものであって、この発明の技術的思想は構成部材の組み合わせ等を下記のものに特定するものではない。この発明の技術的思想は、特許請求の範囲において種々の変更を加えることができる。 The following provides a detailed description of preferred embodiments of the present invention (hereinafter referred to as "embodiments"). Note that the embodiments described below are merely examples of devices and methods for embodying the technical ideas of the present invention, and the technical ideas of the present invention are not limited to the combinations of components described below. The technical ideas of the present invention may be modified in various ways within the scope of the claims.
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、（２）プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含む。 The 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to the embodiment contains (1) 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and a protease, and further contains (2) at least one stabilizer selected from the group consisting of propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid.
本開示において、試薬とは、測定対象を測定する試薬であり、例えば部分組成物の集合体である。試薬は、それのみで測定対象を検出可能である。部分組成物とは、試薬の一部を構成する組成物である。部分組成物は、それのみでは測定対象を測定することができない。 In this disclosure, a reagent is a reagent that measures an analyte, and is, for example, an aggregate of partial compositions. A reagent is capable of detecting an analyte by itself. A partial composition is a composition that constitutes a part of a reagent. A partial composition is not capable of measuring an analyte by itself.
糖化タンパク質は、例えば糖化アルブミン（ＧＡ）、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ等）である。 Examples of glycated proteins include glycated albumin (GA) and glycated hemoglobin (HbA1c, etc.).
糖化アルブミン等の糖化タンパク質を測定する際、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、トリンダー試薬含有部分組成物と組み合わせて使用され得る。トリンダー試薬含有部分組成物は、糖化アミノ酸オキシダーゼ、トリンダー試薬、及びペルオキシダーゼを含み得る。実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、糖化アミノ酸オキシダーゼ、トリンダー試薬、及びペルオキシダーゼを含まないことが好ましい。 When measuring glycated proteins such as glycated albumin, the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment may be used in combination with the Trinder's reagent-containing partial composition. The Trinder's reagent-containing partial composition may contain glycated amino acid oxidase, Trinder's reagent, and peroxidase. It is preferable that the 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment does not contain glycated amino acid oxidase, Trinder's reagent, and peroxidase.
実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物は液状であってもよく、トリンダー試薬含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。トリンダー試薬含有部分組成物は液状であってもよく、実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物と混合されるまで保存されてもよい。実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物の含有物は、予め混合されていてもよい。トリンダー試薬含有部分組成物の含有物は、予め混合されていてもよい。実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物とトリンダー試薬含有部分組成物は、それぞれ、包装されてもよい。 The 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment may be in liquid form and may be stored until it is mixed with the Trinder's reagent-containing partial composition according to the embodiment. The Trinder's reagent-containing partial composition may be in liquid form and may be stored until it is mixed with the 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment. The contents of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment may be premixed. The contents of the Trinder's reagent-containing partial composition may be premixed. The 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment and the Trinder's reagent-containing partial composition may each be packaged.
実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、トリンダー試薬含有部分組成物と、測定対象の検体（サンプル検体）に含まれるグルコースが結合したタンパク質（糖化タンパク質）と、を接触させると、糖化タンパク質がプロテアーゼにより糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドに分解される。糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドは、糖化アミノ酸オキシダーゼによりアミノ酸あるいはペプチドとグルコソンに分解される。また、この際、糖化アミノ酸オキシダーゼにより、水と酸素が反応して、過酸化水素が生じる。トリンダー試薬と、４－アミノアンチピリンと、は、過酸化水素及びペルオキシダーゼの存在下、酸化縮合反応し呈色する。例えばトリンダー試薬として、Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン，２ナトリウム（ＴＯＤＢ）を用いた場合、青紫色に呈色する発色反応が生じる。青紫色の呈色は、波長５４６ｎｍにおける吸光度の測定により検出される。波長５４６ｎｍにおける吸光度に基づき、検体に含まれる糖化タンパク質の濃度が定量化される。 When the 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment, the Trinder's reagent-containing partial composition, and a glucose-bound protein (glycated protein) contained in a specimen (sample specimen) to be measured are brought into contact with each other, the glycated protein is decomposed by protease into glycated amino acids or glycated peptides. The glycated amino acids or glycated peptides are decomposed by glycated amino acid oxidase into amino acids or peptides and glucosone. At this time, water and oxygen react with each other due to glycated amino acid oxidase to generate hydrogen peroxide. The Trinder's reagent and 4-aminoantipyrine undergo an oxidative condensation reaction in the presence of hydrogen peroxide and peroxidase, resulting in coloration. For example, when N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline, disodium (TODB) is used as the Trinder's reagent, a color reaction occurs that produces a blue-purple color. The blue-purple coloration is detected by measuring the absorbance at a wavelength of 546 nm. The concentration of glycated proteins in the sample is quantified based on the absorbance at a wavelength of 546 nm.
糖化タンパク質の濃度を測定する際、サンプル検体に最初にトリンダー試薬含有部分組成物を添加すると、サンプル検体に混在する遊離の糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドが消去されるので、好ましいことが知られている。実施形態に係る部分組成物の通常の使用方法においては、サンプル検体に最初にトリンダー試薬含有部分組成物を添加し、数分、例えば５分から１０分程度、サンプル検体とトリンダー試薬含有部分組成物の混合物を放置して、その後、当該混合物に実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物を添加し、発色の程度を測定することによって、糖化タンパク質が測定できる。ただし、場合によっては、サンプル検体に添加する際に、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物とを同時に添加混合してもよいし、トリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有部分組成物を予め添加して直ぐに使用してもよいし、先ず４－アミノアンチピリン含有部分組成物をサンプル検体に添加し、その後、トリンダー試薬含有部分組成物を添加してもよい。 When measuring the concentration of glycated proteins, it is known that it is preferable to first add the Trinder reagent-containing partial composition to a sample specimen, since free glycated amino acids or glycated peptides present in the sample specimen are eliminated. In a normal method of using the partial composition according to the embodiment, the Trinder reagent-containing partial composition is first added to the sample specimen, and the mixture of the sample specimen and the Trinder reagent-containing partial composition is left for several minutes, for example, about 5 to 10 minutes, and then the 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment is added to the mixture and the degree of color development is measured, thereby measuring the glycated protein. However, depending on the case, when adding to the sample specimen, the Trinder reagent-containing partial composition and the 4-aminoantipyrine-containing partial composition may be added and mixed at the same time, or the Trinder reagent-containing partial composition and the 4-aminoantipyrine-containing partial composition may be added in advance and used immediately, or the 4-aminoantipyrine-containing partial composition may be added to the sample specimen first, and then the Trinder reagent-containing partial composition may be added.
糖化タンパク質を定量するためには、通常、糖化タンパク質濃度が既知である１つ以上の検量用物質（キャリブレーター）を測定し、キャリブレーションを行うことが多い。キャリブレーターの作成方法やキャリブレーション方法としては公知情報に基づき当業者は実施することができるが、例えば、国際公開第２００１／０９４６１８号や特開２００５－２６１３８３号公報等の記載を参考に適宜実施することができる。また、測定試薬保存中の感度低下による測定値の変動を補正するために、例えば１か月に１回等定期的にキャリブレーションを行うのが通常である。 To quantify glycated proteins, calibration is often performed by measuring one or more calibration substances (calibrators) with known glycated protein concentrations. Calibrator creation methods and calibration methods can be performed by those skilled in the art based on publicly known information, and can be appropriately performed by referring to the descriptions in, for example, International Publication No. 2001/094618 and JP 2005-261383 A. In addition, calibration is usually performed periodically, for example once a month, to correct fluctuations in the measurement value due to a decrease in sensitivity during storage of the measurement reagent.
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれるプロテアーゼとしては、ヒトタンパク質由来の糖化タンパク質を分解して糖化アミノ酸又は糖化ペプチドを有効に生成するものであればよい。プロテアーゼは、例えば、エンドペプチダーゼである。エンドペプチダーゼの例としては、セリンエンドペプチダーゼが挙げられる。プロテアーゼは、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、トリチラチウム（Ｔｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ）属、及びアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属等の微生物由来プロテアーゼが好ましい。バチルス属由来プロテアーゼの例としては、アルカラーゼ、ニュートラーゼ、エスペラーゼ、サビナーゼ（以上、ノボザイムズ社製）ビオプラーゼ ＯＰ、ビオプラーゼ ＳＰ－２０ＦＧ、ビオプラーゼ ３０Ｌ、ビオプラーゼ ３０Ｇ、ビオプラーゼ ＡＬ－１５ＦＧ、ビオプラーゼ ＡＰＬ－３０、プロテアーゼＣＬ－１５（以上、ナガセケムテックス社製）、プロチン ＳＤ ＰＣ－１０ＣＦ、サモアーゼ ＰＣ－１０Ｆ、プロチン ＳＤ－ＡＹ１０、プロチン ＳＤ－ＮＹ１０（以上、アマノエンザイム社製）、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ ＰＲ６Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｘ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｅ（以上、ダニスコジャパン社製）、オリエンターゼ ２２ＢＦ、ヌクレイシン、オリエンターゼ１０ＮＬ、オリエンターゼ９０Ｎ（以上、エイチビイアイ社製）、アロアーゼ ＡＰ－１０、アロアーゼ ＮＰ－１０、アロアーゼ ＸＡ－１０（以上、ヤクルト薬品工業社製）、サブチリシン、細菌プロテイナーゼ タイプ ＸＸＩＶ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来 タイプ ＶＩＩＩ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ由来 タイプ ＩＸ、サーモリシン Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ由来 タイプ Ｘ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｌｙｍｙｘａ由来 タイプ ＸＶ、細菌プロテイナーゼ タイプ ＸＸＩＶ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．由来 タイプ ＸＸＶＩＩ、プロテアーゼ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来 タイプ ＸＸＸＩ（以上、シグマ社製）、サーモリシン（富士フイルム和光純薬社製）、ディスパーゼＩ、ディスパーゼＩＩ（以上、合同酒精社製）、Ｎｅｕｔｒａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＯＹＯＢＯ ＵＳＡ社製）等が挙げられる。ストレプトマイセス属由来プロテアーゼの例としては、プロナーゼ、プロテアーゼ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ由来 タイプ ＸＩＶ（以上、シグマ社製）、Ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ（ＴＯＹＯＢＯ ＵＳＡ社製）、デナチーム ＰＭＣ ＳＯＦＴＥＲ（ナガセケムテックス社製）等が挙げられる。トリチラチウム属由来プロテアーゼの例としては、プロテイナーゼＫ（シグマ社製）等が挙げられる。アスペルギルス属由来プロテアーゼの例としては、プロテアーゼ Ｐ「アマノ」３ＳＤ、プロテアーゼ Ａ「アマノ」ＳＤ、プロテアーゼ Ｍ「アマノ」ＳＤ（以上、アマノエンザイム社製）、スミチーム ＭＰ、スミチーム ＬＰＬ－Ｇ、スミチーム ＬＰ５０Ｄ、スミチーム ＡＰ（以上、新日本化学工業社製）、オリエンターゼ ＯＰ、オリエンターゼ ＡＹ（以上、エイチビイアイ社製）、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ由来 タイプ ＸＩＩＩ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｏｊａｅ由来 タイプ ＸＩＸ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｍｅｌｌｅｕｓ由来 タイプ ＸＸＩＩＩ、プロテアーゼ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ由来（以上、シグマ社製）、デナチーム ＡＰ、デナプシン ２Ｐ（以上、ナガセケムテックス社製）、パンチダーゼ ＮＰ－２、パンチダーゼ ＭＰ、パンチダーゼ Ｐ（以上、ヤクルト薬品工業社製）等が挙げられる。これらのうち、アルカラーゼ、ビオプラーゼ ＳＰ－２０ＦＧ、プロチン ＳＤ－ＡＹ１０、Ｍｕｌｔｉｆｅｃｔ ＰＲ６Ｌ、Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌ、アロアーゼ ＸＡ－１０、サブチリシン、プロナーゼ、プロテイナーゼＫ、ＰＲ"Ａｍａｎｏ"Ｋが好適である。 The protease contained in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment may be any protease that effectively degrades glycated proteins derived from human proteins to produce glycated amino acids or glycated peptides. The protease is, for example, an endopeptidase. An example of an endopeptidase is serine endopeptidase. The protease is preferably a protease derived from a microorganism such as the genus Bacillus, Streptomyces, Tritirachium, or Aspergillus. Examples of proteases derived from the genus Bacillus include Alcalase, Neutrase, Esperase, and Savinase (all manufactured by Novozymes), Bioprase OP, Bioprase SP-20FG, Bioprase 30L, Bioprase 30G, Bioprase AL-15FG, Bioprase APL-30, and Protease CL-15 (all manufactured by Nagase ChemteX Corporation), Protin SD PC-10CF, Thermoase PC-10F, Protin SD-AY10, and Protin SD-NY10 (all manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.), Multifect PR6L, Optimase PR40L, Optimase PR40X, and Optimase PR40E (all manufactured by Danisco Japan), and Orientase. 22BF, nucleisin, orientase 10NL, orientase 90N (all manufactured by HI Corporation), aroase AP-10, aroase NP-10, aroase XA-10 (all manufactured by Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.), subtilisin, bacterial proteinase type XXIV, protease type VIII derived from Bacillus licheniformis, protease type IX derived from Bacillus polymyxa, thermolysin type X derived from Geobacillus stearothermophilus, protease type XV derived from Bacillus polymyxa, bacterial proteinase type XXIV, protease Examples of proteases derived from the genus Streptomyces include pronase type XXVII derived from Bacillus sp., protease type XXXI derived from Bacillus licheniformis (manufactured by Sigma), thermolysin (manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), dispase I, dispase II (manufactured by Godo Shusei Co., Ltd.), neutral proteinase (manufactured by TOYOBO USA Co., Ltd.), etc. Examples of proteases derived from the genus Streptomyces include pronase, protease type XIV derived from Streptomyces griseus (manufactured by Sigma), alkaline proteinase (manufactured by TOYOBO USA Co., Ltd.), and Denatym PMC SOFTER (manufactured by Nagase Chemtex Corporation). An example of a protease derived from the genus Tritirachium is Proteinase K (Sigma). Examples of proteases derived from the genus Aspergillus include protease P "Amano" 3SD, protease A "Amano" SD, protease M "Amano" SD (all manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.), Sumiteam MP, Sumiteam LPL-G, Sumiteam LP50D, Sumiteam AP (all manufactured by Shin Nippon Chemical Industry Co., Ltd.), Orientase OP, Orientase AY (all manufactured by HIBI Co., Ltd.), protease type XIII derived from Aspergillus saitoi, protease type XIX derived from Aspergillus sojae, protease type XXIII derived from Aspergillus melleus, protease type XXIII derived from Aspergillus oryzae (all manufactured by Sigma), Denatzyme AP, Denapsin 2P (all manufactured by Nagase ChemteX Corporation), Panchidase NP-2, Panchidase MP, Panchidase P (all manufactured by Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.), etc. Among these, Alcalase, Bioprase SP-20FG, Protin SD-AY10, Multifect PR6L, Optimase PR40L, Aroase XA-10, Subtilisin, Pronase, Proteinase K, and PR "Amano" K are preferred.
また別の観点から実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれるプロテアーゼとしては、例えば、酵素番号がＥＣ：３．４、又はＥＣ：３．４．２１のプロテアーゼが好ましい例として挙げられる。またＥＣ：３．４．２１．６２のプロテアーゼもさらに好ましい例として挙げられる。 From another perspective, preferred examples of the protease contained in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment include proteases having enzyme numbers EC: 3.4 and EC: 3.4.21. Furthermore, proteases having enzyme numbers EC: 3.4.21.62 are also preferred examples.
拘束されるものではないが、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸は、プロテアーゼを安定化するものと考えられる。安定化剤は、有効濃度、溶解度、及びコスト等の観点から、好ましくは、プロピレングリコール又は２－カルボキシフェニルボロン酸である。 Although not limited to these, propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid are believed to stabilize proteases. From the viewpoints of effective concentration, solubility, cost, and the like, the stabilizer is preferably propylene glycol or 2-carboxyphenylboronic acid.
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物はジメチルスルホキシドを含まなくてもよい。 The 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment does not need to contain dimethyl sulfoxide.
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれるフェロシアン化物は、検体に含まれるビリルビンが糖化タンパク質の測定に影響を与えることを抑制する。フェロシアン化物の例としては、フェロシアンイオンを含有するいずれの化合物であってもよく、フェロシアン化カリウム（Ｆｅ（ＣＮ）6Ｋ4）及びフェロシアン化ナトリウム（Ｆｅ（ＣＮ）6Ｎａ4）などが挙げられる。 The ferrocyanide contained in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment suppresses the influence of bilirubin contained in the sample on the measurement of glycated proteins. Examples of the ferrocyanide include any compound containing ferrocyanide ions, such as potassium ferrocyanide (Fe(CN) 6 K 4 ) and sodium ferrocyanide (Fe(CN) 6 Na 4 ).
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、キレート剤をさらに含んでいてもよい。キレート剤は、糖化タンパク質測定試薬の感度の低下を抑制する。キレート剤の塩を使用すると、ｐＨ変動が抑制されるため好ましい。キレート剤の例としては、クエン酸及びその塩、リンゴ酸及びその塩、ニトリロトリス（メチルホスホン酸）及びその塩、シュウ酸及びその塩、ニトリロ三酢酸及びその塩、並びにＮ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸及びその塩が挙げられる。好ましいキレート剤は、例えば、クエン酸及びその塩である。 The 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment may further contain a chelating agent. The chelating agent suppresses a decrease in the sensitivity of the glycated protein measurement reagent. The use of a salt of a chelating agent is preferable because it suppresses pH fluctuations. Examples of chelating agents include citric acid and its salts, malic acid and its salts, nitrilotris(methylphosphonic acid) and its salts, oxalic acid and its salts, nitrilotriacetic acid and its salts, and N-(2-hydroxyethyl)iminodiacetic acid and its salts. A preferred chelating agent is, for example, citric acid and its salts.
キレート剤の塩としては、塩を形成するものであればその種類は特に限定されず、酸付加塩又は塩基付加塩のいずれであってもよく、双性イオンの形態をとっていてもよい。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩基付加塩、あるいはメチルアミン、２－アミノエタノール、アルギニン、リジン、若しくはオルニチン等の有機塩基との塩基付加塩などが含まれる。これらのうち無機塩基との塩基付加塩が好適である。なお、代表的な塩基付加塩としては、ナトリウム塩が例示される。 The salt of the chelating agent is not particularly limited as long as it forms a salt, and may be either an acid addition salt or a base addition salt, or may be in the form of a zwitterion. Examples of base addition salts include base addition salts with inorganic bases such as sodium, potassium, magnesium, calcium, and aluminum, and base addition salts with organic bases such as methylamine, 2-aminoethanol, arginine, lysine, and ornithine. Of these, base addition salts with inorganic bases are preferred. A typical example of a base addition salt is the sodium salt.
キレート剤の濃度は、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を安定化するのに十分な濃度であればよく、下限としては、５μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また安定化の効果の程度は飽和する場合もあるので、費用等の観点から上限を決めることもでき、例えば、上限としては、１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。 The concentration of the chelating agent may be sufficient to stabilize the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment, and examples of the lower limit include 5 μmol/L or more, and preferably 10 μmol/L or more. In addition, since the degree of the stabilizing effect may saturate, an upper limit can be determined from the viewpoint of cost, etc., and examples of the upper limit include 1000 mmol/L or less, and preferably 100 mmol/L or less.
有効濃度、溶解度、及びコスト等の観点から、安定化剤とキレート剤の好ましい組み合わせは、プロピレングリコールとクエン酸ナトリウム、あるいは２－カルボキシフェニルボロン酸とクエン酸ナトリウムである。 In terms of effective concentration, solubility, cost, etc., the preferred combination of stabilizer and chelating agent is propylene glycol and sodium citrate, or 2-carboxyphenylboronic acid and sodium citrate.
トリンダー試薬含有部分組成物に含まれる糖化アミノ酸オキシダーゼとしてはヒトタンパク質由来の糖化アミノ酸あるいは糖化ペプチドに有効に作用する糖化アミノ酸オキシダーゼであればよく、その例としては、ギベレラ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、フサリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、アクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属、デバリオマイゼス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）属、及びコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属由来の糖化アミノ酸オキシダーゼ、並びにその遺伝子組み換え型糖化アミノ酸オキシダーゼ変異体等が挙げられる。さらに具体的には、ケトアミンオキシダーゼ（ＫＡＯＤ、旭化成ファーマ社製、Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ、２００２年、３２４、ｐ．６１－７１に記載）、変異型ＫＡＯＤ（ＫＡＯＤ－Ｖ、旭化成ファーマ社製、特許文献１に記載）、及びＦＡＯＤ－Ｅ（キッコーマン社製）等が挙げられる。 The glycated amino acid oxidase contained in the Trinder reagent-containing partial composition may be any glycated amino acid oxidase that acts effectively on glycated amino acids or glycated peptides derived from human proteins, and examples thereof include glycated amino acid oxidases derived from the genera Gibberella, Aspergillus, Candida, Penicillium, Fusarium, Acremonium, Debaryomyces, and Corynebacterium, as well as recombinant glycated amino acid oxidase variants thereof. More specifically, examples include ketoamine oxidase (KAOD, manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, described in Clinica Chimica Acta, 2002, 324, pp. 61-71), mutant KAOD (KAOD-V, manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, described in Patent Document 1), and FAOD-E (manufactured by Kikkoman Corporation).
トリンダー試薬含有部分組成物に含まれるトリンダー試薬の例としては、具体的にはＮ－（３－スルホプロピル）アニリンナトリウム一水和物（ＨＡＬＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メチルアニリンナトリウム一水和物（ＴＯＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム一水和物（ＭＡＯＳ）、Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム一水和物（ＨＤＡＰＳ）、Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム一水和物（ＤＡＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３，５－ジメトキシアニリンナトリウム（ＤＡＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）アニリンナトリウム（ＡＬＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリンナトリウム一水和物（ＡＤＰＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－３－メトキシアニリンナトリウム二水和物（ＡＤＯＳ）、Ｎ－エチル－Ｎ－（２－ヒドロキシ－３－スルホプロピル）－ｍ－トルイジン（ＴＯＯＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン二ナトリウム（ＴＯＤＢ）、及び３－ヒドロキシ－２，４，６－トリヨード安息香酸（ＨＴＩＢ）等が挙げられる。これらのうち、ＴＯＰＳ、ＡＬＰＳ、ＴＯＯＳ、及びＴＯＤＢが好適である。 Specific examples of Trinder reagents contained in the Trinder reagent-containing partial composition include N-(3-sulfopropyl)aniline sodium monohydrate (HALPS), N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methylaniline sodium monohydrate (TOPS), N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline sodium monohydrate (MAOS), N-(3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline sodium monohydrate (HDAPS), N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline sodium (HDAOS), N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline sodium monohydrate (DA PS), N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxyaniline sodium (DAOS), N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)aniline sodium (ALPS), N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline sodium monohydrate (ADPS), N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline sodium dihydrate (ADOS), N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine (TOOS), N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline disodium (TODB), and 3-hydroxy-2,4,6-triiodobenzoic acid (HTIB). Of these, TOPS, ALPS, TOOS, and TODB are preferred.
ＴＯＰＳを用いた場合の発色波長は５５０ｎｍである。ＡＬＰＳを用いた場合の発色波長は５６１ｎｍである。ＴＯＯＳを用いた場合の発色波長は５５５ｎｍである。ＴＯＤＢを用いた場合の発色波長は５５０ｎｍである。ただし、吸光度を測定する装置が測定する波長は、発色波長と厳密に一致している必要はない。例えば、波長５４６ｎｍにおける吸光度を測定する装置で、ＴＯＰＳ、ＡＬＰＳ、ＴＯＯＳ、及びＴＯＤＢのそれぞれを用いた場合の発色反応を測定することが可能である。 The color-developing wavelength when TOPS is used is 550 nm. The color-developing wavelength when ALPS is used is 561 nm. The color-developing wavelength when TOOS is used is 555 nm. The color-developing wavelength when TODB is used is 550 nm. However, the wavelength measured by the device that measures absorbance does not have to strictly match the color-developing wavelength. For example, it is possible to measure the color-developing reaction when TOPS, ALPS, TOOS, and TODB are each used with a device that measures absorbance at a wavelength of 546 nm.
なお、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンとを同一試薬中に含めると、自然に酸化縮合反応して保存中に呈色するため、トリンダー試薬はトリンダー試薬含有部分組成物に含有され、４－アミノアンチピリンは実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含有される。 When Trinder's reagent and 4-aminoantipyrine are contained in the same reagent, they undergo a spontaneous oxidative condensation reaction and develop color during storage, so Trinder's reagent is contained in the Trinder's reagent-containing partial composition, and 4-aminoantipyrine is contained in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to the embodiment.
従来、測定試薬や検体などに由来する過酸化物によって非特異的な発色反応が起こり、この非特異的な発色反応による吸光度が測定精度を低下させることがある。この非特異的な発色を試薬ブランクという。これに対し、トリンダー試薬含有部分組成物に含まれるペルオキシダーゼは、トリンダー試薬と４－アミノアンチピリンの酸化縮合反応を促進するとともに、過酸化物を消去して、試薬ブランクを低減する機能を有する。ペルオキシダーゼはいずれの由来のものも使用でき、その例としては、西洋わさび由来等の植物由来のペルオキシダーゼ、及び細菌由来、カビ由来などの微生物由来のペルオキシダーゼ等が挙げられる。具体的には、Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ（Ｓｉｇｍａ社製）、ペルオキシダーゼ、西洋わさび由来（和光純薬社製）、ＰＯ"ＡＭＡＮＯ"３（天野エンザイム社製）、及びＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ（東洋紡エンザイム社製）等が挙げられる。 Conventionally, non-specific color reactions occur due to peroxides derived from measurement reagents and specimens, and the absorbance due to this non-specific color reaction can reduce measurement accuracy. This non-specific color reaction is called a reagent blank. In contrast, the peroxidase contained in the Trinder reagent-containing partial composition promotes the oxidative condensation reaction between the Trinder reagent and 4-aminoantipyrine, and has the function of eliminating peroxides and reducing the reagent blank. Peroxidases of any origin can be used, and examples include peroxidases derived from plants such as horseradish, and peroxidases derived from microorganisms such as bacteria and mold. Specifically, examples include Peroxidase from horseradish (manufactured by Sigma), peroxidase derived from horseradish (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), PO"AMANO"3 (manufactured by Amano Enzyme Co., Ltd.), and Peroxidase (manufactured by Toyobo Enzyme Co., Ltd.).
実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びトリンダー試薬含有部分組成物のそれぞれは、溶媒として、水及び有機溶媒等をさらに含んでいてもよい。有機溶媒の例としては、アルコール系溶媒（炭素数１～１８のアルコールが挙げられ、具体的には、メタノール、ブタノール、エチレングリコール、及びグリセリン等）、ケトン系溶媒（アセトン、及びメチルエチルケトン等）、並びにエーテル系溶媒等（テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、エチレングリコールモノアルキルエーテル、及び環状エーテル等）が挙げられる。 The 4-aminoantipyrine-containing partial composition and the Trinder's reagent-containing partial composition according to the embodiment may each further contain water and an organic solvent as a solvent. Examples of organic solvents include alcohol-based solvents (alcohols having 1 to 18 carbon atoms, specifically, methanol, butanol, ethylene glycol, glycerin, etc.), ketone-based solvents (acetone, methyl ethyl ketone, etc.), and ether-based solvents (tetrahydrofuran, diethyl ether, ethylene glycol monoalkyl ether, cyclic ether, etc.).
また、実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びトリンダー試薬含有部分組成物のそれぞれは、緩衝剤を含んでいてもよい。緩衝剤の例としては、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２－ヒドロキシ－３－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、Ｎ－（２－アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、ビス（２－ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ）、Ｎ－シクロヘキシル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－ヒドロキシ－３－アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、Ｎ－シクロヘキシル－２－アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、２－モルフォリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３－モルフォリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２－ヒドロキシ－３－モルフォリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－エタンスルホン酸（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン－１，４－ビス（２－ヒドロキシ－３－プロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、２－ハイドロキシ－Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、Ｎ－［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（Ｔｒｉｃｉｎｅ）、及びトリスヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）、等を用いた緩衝剤、又はホウ酸、アンモニア、グリシン、炭酸、酢酸、リン酸、ジエタノールアミン、ｐ－フェノールスルホン酸、２－アミノ－２－メチルプロパン－１，３－ジオール、カコジル酸、マレイン酸、ベロナール及び３，３－ジメチルグルタル酸等が挙げられる。 In addition, each of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition and the Trinder's reagent-containing partial composition according to the embodiment may contain a buffer. Examples of buffers include N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES), 3-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]propanesulfonic acid (EPPS), 2-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid (HEPES), 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]propanesulfonic acid (HEPPSO), N-(2-acetamido)-2-aminoethanesulfonic acid (ACES), N-(2-acetamido)-1-aminoethanesulfonic acid (ACES), and N-(2-acetamido)-1-aminoethanesulfonic acid (N-(2-acetamido)-1-aminoethanesulfonic acid (N-(2-acetamido)-1-aminoethanesulfonic acid). Iminodiacetic acid (ADA), N,N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid (BES), N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine (Bicine), bis(2-hydroxyethyl)iminotris(hydroxymethyl)methane (Bis-Tris), N-cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid (CAPS), N-cyclohexyl-2-hydroxy-3-aminopropanesulfonic acid (CAPSO), N-cyclohexyl-2-aminoethanesulfonic acid (CHES), 3-[N,N-bis (2-hydroxyethyl)amino]-2-hydroxypropanesulfonic acid (DIPSO), 2-morpholinoethanesulfonic acid (MES), 3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPS), 2-hydroxy-3-morpholinopropanesulfonic acid (MOPSO), piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid (PIPES), piperazine-1,4-bis(2-hydroxy-3-propanesulfonic acid) (POPSO), N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid (TAPS), 2 -Hydroxy-N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid (TAPSO), N-[tris(hydroxymethyl)methyl]glycine (Tricine), and trishydroxymethylaminomethane (Tris) are used as buffers, and boric acid, ammonia, glycine, carbonic acid, acetic acid, phosphoric acid, diethanolamine, p-phenolsulfonic acid, 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol, cacodylic acid, maleic acid, veronal, and 3,3-dimethylglutaric acid are also used.
また、実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物及びトリンダー試薬含有部分組成物のそれぞれは、その他の添加物として防腐剤、酵素の安定化剤、界面活性剤、及びその他の酵素等をさらに含んでいてもよい。防腐剤の例としては、アジ化ナトリウム、及びプロクリン（ＰｒｏＣｌｉｎ）等が挙げられる。酵素の安定化剤としては、保存中に酵素を安定化させる安定化剤であればいずれも利用可能であるが、例えば、シクロデキストリン、スクロース、マンノース、フルクトース、ラクトース、ガラクトース及びトレハロース等の糖、ソルビトール、マンニトール等の糖アルコールが挙げられる。界面活性剤としては、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、及び非イオン性界面活性剤の何れを用いてもよく、例えば非イオン性界面活性剤の例としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、及びポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー等が挙げられる。また、両性界面活性剤の例としては、アルキルベタイン、酢酸ベタイン、スルホベタイン、及びアルキルアミンオキサイド等が挙げられる。その他の酵素としては、例えばアスコルビン酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、カタラーゼ等が挙げられ、これは検体中に含まれるアスコルビン酸やビリルビン、また試薬中に含まれる過酸化物が測定値に影響を与えるのを抑制するために用いられる。 In addition, each of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition and the Trinder's reagent-containing partial composition according to the embodiment may further contain preservatives, enzyme stabilizers, surfactants, other enzymes, and the like as other additives. Examples of preservatives include sodium azide and ProClin. As the enzyme stabilizer, any stabilizer that stabilizes the enzyme during storage can be used, and examples of such stabilizers include cyclodextrin, sugars such as sucrose, mannose, fructose, lactose, galactose, and trehalose, and sugar alcohols such as sorbitol and mannitol. As the surfactant, any of cationic surfactants, anionic surfactants, amphoteric surfactants, and nonionic surfactants may be used, and examples of nonionic surfactants include polyoxyethylene alkyl ethers, polyoxyethylene alkylphenyl ethers, polyoxyethylene polyoxypropylene alkyl ethers, sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, glycerin fatty acid esters, and polyoxyethylene polyoxypropylene block polymers. Examples of amphoteric surfactants include alkyl betaines, betaine acetate, sulfobetaine, and alkylamine oxides. Other enzymes include ascorbic acid oxidase, bilirubin oxidase, and catalase, which are used to suppress the effects of ascorbic acid and bilirubin in the sample and peroxides in the reagent on the measured value.
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物に含まれる４－アミノアンチピリンの濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。フェロシアン化物の濃度は、検体に含まれるビリルビンが糖化タンパク質の測定に与える影響を抑制するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．００１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは０．０２ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１ｍｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。 The concentration of 4-aminoantipyrine contained in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment may be sufficient to react with the generated hydrogen peroxide, and examples of the lower limit include 0.01 mmol/L or more, preferably 0.1 mmol/L or more, and more preferably 0.5 mmol/L or more. In addition, examples of the upper limit include 100 mmol/L or less, preferably 50 mmol/L or less, and more preferably 10 mmol/L or less, from the viewpoint of cost. The concentration of ferrocyanide may be sufficient to suppress the influence of bilirubin contained in the sample on the measurement of glycated proteins, and examples of the lower limit include 0.001 mmol/L or more, preferably 0.01 mmol/L or more, and more preferably 0.02 mmol/L or more. In addition, examples of the upper limit include 10 mmol/L or less, preferably 1 mmol/L or less, and more preferably 0.5 mmol/L or less, from the viewpoint of cost.
プロテアーゼの濃度は、適当な時間内に糖化タンパク質を分解できる濃度であればよく、下限としては、１００Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは１ｋＵ／ｍＬ以上、より好ましくは１０ｋＵ／ｍＬ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１０００ｋＵ／ｍＬ以下、好ましくは２００ｋＵ／ｍＬ以下、より好ましくは１００ｋＵ／ｍＬ以下が例示される。 The concentration of the protease may be any concentration that can decompose glycated proteins within a suitable time, and examples of the lower limit include 100 U/mL or more, preferably 1 kU/mL or more, and more preferably 10 kU/mL or more. From the viewpoint of cost, examples of the upper limit include 1000 kU/mL or less, preferably 200 kU/mL or less, and more preferably 100 kU/mL or less.
安定化剤の濃度は、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物を安定化するのに十分な濃度であればよい。また安定化の効果の程度が飽和する場合もあるので、費用等の観点から安定化剤の濃度の上限を決めてもよい。 The concentration of the stabilizer may be sufficient as long as it is sufficient to stabilize the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment. In addition, since the degree of the stabilizing effect may be saturated, an upper limit for the stabilizer concentration may be determined from the viewpoint of cost, etc.
安定化剤がプロピレングリコールである場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度の下限は、例えば、３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上、好ましくは３５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるプロピレングリコールの濃度の上限は、例えば、８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、好ましくは６０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である。 When the stabilizer is propylene glycol, the lower limit of the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 30 wt/vol% or more, preferably 35 wt/vol% or more. The upper limit of the concentration of propylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 80 wt/vol% or less, preferably 60 wt/vol% or less.
安定化剤がトリメチレングリコールである場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度の下限は、例えば、４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上、好ましくは４５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である。また、４－アミノアンチピリン含有部分組成物におけるトリメチレングリコールの濃度の上限は、例えば、８０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、好ましくは７０ｗｔ／ｖｏｌ％以下である。 When the stabilizer is trimethylene glycol, the lower limit of the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 40 wt/vol% or more, preferably 45 wt/vol% or more. The upper limit of the concentration of trimethylene glycol in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 80 wt/vol% or less, preferably 70 wt/vol% or less.
安定化剤が２－カルボキシフェニルボロン酸である場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の下限は、例えば、０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上、好ましくは０．４％ｗｔ／ｖｏｌ以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物における２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の上限は、例えば、１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、好ましくは５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である。 When the stabilizer is 2-carboxyphenylboronic acid, the lower limit of the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 0.2 wt/vol% or more, preferably 0.4% wt/vol or more. The upper limit of the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 10 wt/vol% or less, preferably 5 wt/vol% or less.
安定化剤が３－カルボキシフェニルボロン酸である場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の下限は、例えば、０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上、好ましくは０．５ｗｔ／ｖｏｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度の上限は、例えば、１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、好ましくは５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である。 When the stabilizer is 3-carboxyphenylboronic acid, the lower limit of the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 0.3 wt/vol% or more, preferably 0.5 wt/vol% or more. The upper limit of the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 10 wt/vol% or less, preferably 5 wt/vol% or less.
安定化剤が３－カルバモイルフェニルボロン酸である場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度の下限は、例えば、０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上、好ましくは０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度の上限は、例えば、５ｗｔ／ｖｏｌ％以下、好ましくは２ｗｔ／ｖｏｌ％以下である。 When the stabilizer is 3-carbamoylphenylboronic acid, the lower limit of the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 0.05 wt/vol% or more, preferably 0.1 wt/vol% or more. The upper limit of the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 5 wt/vol% or less, preferably 2 wt/vol% or less.
安定化剤が３－アセトアミドフェニルボロン酸である場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度の下限は、例えば、０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上、好ましくは０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度の上限は、例えば、１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、好ましくは５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である。 When the stabilizer is 3-acetamidophenylboronic acid, the lower limit of the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 0.1 wt/vol% or more, preferably 0.2 wt/vol% or more. The upper limit of the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 10 wt/vol% or less, preferably 5 wt/vol% or less.
安定化剤が３－アミノフェニルボロン酸である場合、４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度の下限は、例えば、０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上、好ましくは０．４ｗｔ／ｖｏｌ％以上である。４－アミノアンチピリン含有部分組成物における３－アミノフェニルボロン酸の濃度の上限は、例えば、１０ｗｔ／ｖｏｌ％以下、好ましくは５ｗｔ／ｖｏｌ％以下である。 When the stabilizer is 3-aminophenylboronic acid, the lower limit of the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 0.2 wt/vol% or more, preferably 0.4 wt/vol% or more. The upper limit of the concentration of 3-aminophenylboronic acid in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition is, for example, 10 wt/vol% or less, preferably 5 wt/vol% or less.
まとめると、安定化剤の濃度の下限の例は、以下のとおりである。
プロピレングリコール：３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上
トリメチレングリコール：４０ｗｔ／ｖｏｌ％以上
２－カルボキシフェニルボロン酸：０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上
３－カルボキシフェニルボロン酸：０．３ｗｔ／ｖｏｌ％以上
３－カルバモイルフェニルボロン酸：０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％以上
３－アセトアミドフェニルボロン酸：０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上
３－アミノフェニルボロン酸：０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上
In summary, examples of lower limits for the concentration of the stabilizer are as follows:
Propylene glycol: 30 wt/vol% or more Trimethylene glycol: 40 wt/vol% or more 2-Carboxyphenylboronic acid: 0.2 wt/vol% or more 3-Carboxyphenylboronic acid: 0.3 wt/vol% or more 3-Carbamoylphenylboronic acid: 0.05 wt/vol% or more 3-Acetamidophenylboronic acid: 0.1 wt/vol% or more 3-Aminophenylboronic acid: 0.2 wt/vol% or more
濃度の下限が最も低い３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度の下限を１に規格化すると、他の安定化剤の濃度の下限は、以下のとおりである。
プロピレングリコール：６００
トリメチレングリコール：８００
２－カルボキシフェニルボロン酸：４
３－カルボキシフェニルボロン酸：６
３－カルバモイルフェニルボロン酸：１
３－アセトアミドフェニルボロン酸：２
３－アミノフェニルボロン酸：４
When the lower limit of the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid, which has the lowest lower limit of the concentration, is normalized to 1, the lower limits of the concentrations of the other stabilizers are as follows.
Propylene glycol: 600
Trimethylene glycol: 800
2-Carboxyphenylboronic acid: 4
3-Carboxyphenylboronic acid: 6
3-Carbamoylphenylboronic acid: 1
3-Acetamidophenylboronic acid: 2
3-Aminophenylboronic acid: 4
例えば、プロピレングリコールは、下限において、３－カルバモイルフェニルボロン酸の６００倍の濃度が必要であるので、プロピレングリコールの安定化剤として効果は、３－カルバモイルフェニルボロン酸の１／６００である。同様に、他の安定化剤の効果を、３－カルバモイルフェニルボロン酸を基準にして計算すると、以下のとおりである。
プロピレングリコール：１／６００
トリメチレングリコール：１／８００
２－カルボキシフェニルボロン酸：１／４
３－カルボキシフェニルボロン酸：１／６
３－カルバモイルフェニルボロン酸：１
３－アセトアミドフェニルボロン酸：１／２
３－アミノフェニルボロン酸：１／４
For example, since propylene glycol requires a concentration 600 times that of 3-carbamoylphenylboronic acid at the lower limit, the effect of propylene glycol as a stabilizer is 1/600 of that of 3-carbamoylphenylboronic acid. Similarly, the effects of other stabilizers, calculated based on 3-carbamoylphenylboronic acid, are as follows:
Propylene glycol: 1/600
Trimethylene glycol: 1/800
2-Carboxyphenylboronic acid: 1/4
3-Carboxyphenylboronic acid: 1/6
3-Carbamoylphenylboronic acid: 1
3-Acetamidophenylboronic acid: 1/2
3-Aminophenylboronic acid: 1/4
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、これらの安定化剤を組み合わせて添加する場合、組み合わされて添加された安定化剤の効果が、０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％の３－カルバモイルフェニルボロン酸と同等以上であればよい。ここで、プロピレングリコールの濃度をａ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、トリメチレングリコールの濃度をｂ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、２－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｃ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルボキシフェニルボロン酸の濃度をｄ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－カルバモイルフェニルボロン酸の濃度をｅ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アセトアミドフェニルボロン酸の濃度をｆ（ｗｔ／ｖｏｌ％）、３－アミノフェニルボロン酸の濃度をｇ（ｗｔ／ｖｏｌ％）として、ａからｇが下記（５）式を満たす場合、組み合わされて添加された安定化剤の効果が、０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％の３－カルバモイルフェニルボロン酸の効果と同等以上になる。ただし、組み合わされる安定化剤によっては、左辺から算出される値が０．０５未満であっても、組み合わされて添加された安定化剤の効果が、０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％の３－カルバモイルフェニルボロン酸の効果と同等以上になる場合もあり得る。
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (5)
When these stabilizers are added in combination to the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to the embodiment, the effect of the stabilizers added in combination may be equal to or greater than that of 0.05 wt/vol % 3-carbamoylphenylboronic acid. Here, assuming that the concentration of propylene glycol is a (wt/vol%), the concentration of trimethylene glycol is b (wt/vol%), the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid is c (wt/vol%), the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid is d (wt/vol%), the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid is e (wt/vol%), the concentration of 3-acetamidophenylboronic acid is f (wt/vol%), and the concentration of 3-aminophenylboronic acid is g (wt/vol%), when a to g satisfy the following formula (5), the effect of the stabilizers added in combination will be equal to or greater than the effect of 0.05 wt/vol% 3-carbamoylphenylboronic acid. However, depending on the stabilizer to be combined, even if the value calculated from the left side is less than 0.05, the effect of the stabilizer added in combination may be equal to or greater than the effect of 0.05 wt/vol % 3-carbamoylphenylboronic acid.
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (5)
例えば、安定化剤どうしの組み合わせとしては、濃度１５ｗｔ／ｖｏｌ％以上のプロピレングリコールと、濃度０．１ｗｔ／ｖｏｌ％以上の２－カルボキシフェニルボロン酸と、の組み合わせが挙げられる。 For example, one combination of stabilizers is propylene glycol at a concentration of 15 wt/vol% or more and 2-carboxyphenylboronic acid at a concentration of 0.1 wt/vol% or more.
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物がキレート剤を含む場合、クエン酸及びその塩の濃度の下限としては、１０μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１００μｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは１ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。リンゴ酸及びその塩の濃度の下限としては、１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは１０ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。ニトリロトリス（メチルホスホン酸）及びその塩の下限としては、５μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。シュウ酸及びその塩の濃度の下限としては、１０μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１００μｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは５００μｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。ニトリロ三酢酸及びその塩の濃度の下限としては、１０μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１００μｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは５００μｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸及びその塩の濃度の下限としては、５μｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは１０μｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは５０μｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。 When the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycated protein measurement reagent according to the embodiment contains a chelating agent, the lower limit of the concentration of citric acid and its salts is 10 μmol/L or more, preferably 100 μmol/L or more, and more preferably 1 mmol/L or more. The lower limit of the concentration of malic acid and its salts is 1 mmol/L or more, preferably 5 mmol/L or more, and more preferably 10 mmol/L or more. The lower limit of the concentration of nitrilotris(methylphosphonic acid) and its salts is 5 μmol/L or more, and preferably 10 μmol/L or more. The lower limit of the concentration of oxalic acid and its salts is 10 μmol/L or more, preferably 100 μmol/L or more, and more preferably 500 μmol/L or more. The lower limit of the concentration of nitrilotriacetic acid and its salts is 10 μmol/L or more, preferably 100 μmol/L or more, and more preferably 500 μmol/L or more. The lower limit of the concentration of N-(2-hydroxyethyl)iminodiacetic acid and its salts is, for example, 5 μmol/L or more, preferably 10 μmol/L or more, and more preferably 50 μmol/L or more.
フェロシアン化物に対するキレート剤の濃度比は、糖化タンパク質測定試薬の安定化作用を得る観点から、下限としては、０．００１以上、好ましくは０．０１以上、より好ましくは０．１以上が例示される。また、溶解性の観点から、上限としては、１００００以下、好ましくは１０００以下、より好ましくは２００以下が例示される。 The concentration ratio of the chelating agent to the ferrocyanide is, from the viewpoint of obtaining a stabilizing effect of the glycosylated protein measurement reagent, for example, a lower limit of 0.001 or more, preferably 0.01 or more, more preferably 0.1 or more. From the viewpoint of solubility, the upper limit is, for example, 10,000 or less, preferably 1,000 or less, more preferably 200 or less.
トリンダー試薬含有部分組成物に含まれる糖化アミノ酸オキシダーゼの濃度は、生じた糖化アミノ酸または糖化ペプチドと反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．１Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは１Ｕ／ｍＬ以上、さらに好ましくは１０Ｕ／ｍＬ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、１０００Ｕ／ｍＬ以下、好ましくは２００Ｕ／ｍＬ以下、さらに好ましくは１００Ｕ／ｍＬ以下が例示される。ペルオキシダーゼの濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１Ｕ／ｍＬ以上、好ましくは０．１Ｕ／ｍＬ以上、さらに好ましくは１Ｕ／ｍＬ以上が例示される。また、コストの観点から、上限としては、５００Ｕ／ｍＬ以下、好ましくは１００Ｕ／ｍＬ以下、さらに好ましくは５０Ｕ／ｍＬ以下が例示される。トリンダー試薬の濃度は、生じた過酸化水素と反応するのに十分な濃度であればよく、下限としては、０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、好ましくは０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．５ｍｍｏｌ／Ｌ以上が例示される。また、上限としては、コストの観点から、１００ｍｍｏｌ／Ｌ以下、好ましくは１０ｍｍｏｌ／Ｌ以下、さらに好ましくは５ｍｍｏｌ／Ｌ以下が例示される。 The concentration of the glycated amino acid oxidase contained in the Trinder reagent-containing partial composition may be sufficient to react with the glycated amino acid or glycated peptide produced, and the lower limit is 0.1 U/mL or more, preferably 1 U/mL or more, and more preferably 10 U/mL or more. From the viewpoint of cost, the upper limit is 1000 U/mL or less, preferably 200 U/mL or less, and more preferably 100 U/mL or less. The concentration of the peroxidase may be sufficient to react with the hydrogen peroxide produced, and the lower limit is 0.01 U/mL or more, preferably 0.1 U/mL or more, and more preferably 1 U/mL or more. From the viewpoint of cost, the upper limit is 500 U/mL or less, preferably 100 U/mL or less, and more preferably 50 U/mL or less. The concentration of the Trinder's reagent may be sufficient to react with the generated hydrogen peroxide, and examples of the lower limit include 0.01 mmol/L or more, preferably 0.1 mmol/L or more, and more preferably 0.5 mmol/L or more. From the viewpoint of cost, examples of the upper limit include 100 mmol/L or less, preferably 10 mmol/L or less, and more preferably 5 mmol/L or less.
安定化剤を含んでいない、糖化タンパク質測定試薬用の部分組成物は、保存安定性に問題が生じ得る。これに対し、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、安定化剤を含んでいるため、長期にわたって保存安定性が良好である。そのため、長期にわたって、糖化タンパク質を正確に測定することが可能である。糖化タンパク質測定時に、例えば、糖化アルブミン等の糖化タンパク質の濃度が７．５ｇ／ｄＬ以下、好ましくは７ｇ／ｄＬ以下、さらに好ましくは６ｇ／ｄＬ以下のように低い場合、安定化剤による保存安定性の効果が顕著に表れる。測定可能な糖化アルブミン等の糖化タンパク質の濃度の下限としては、０．１ｇ／ｄＬ以上、好ましくは０．１５ｇ／ｄＬ以上、さらに好ましくは０．２ｇ／ｄＬ以上が例示される。 A partial composition for a glycated protein measurement reagent that does not contain a stabilizer may have problems with storage stability. In contrast, the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for a glycated protein measurement reagent according to the embodiment contains a stabilizer, and therefore has good storage stability over a long period of time. Therefore, it is possible to accurately measure glycated proteins over a long period of time. When measuring glycated proteins, for example, when the concentration of glycated proteins such as glycated albumin is low, for example, 7.5 g/dL or less, preferably 7 g/dL or less, and more preferably 6 g/dL or less, the effect of the stabilizer on storage stability is remarkable. The lower limit of the concentration of glycated proteins such as glycated albumin that can be measured is, for example, 0.1 g/dL or more, preferably 0.15 g/dL or more, and more preferably 0.2 g/dL or more.
実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、流通に要する実用的な期間の間、安定的に保存することが可能である。例えば、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物は、少なくとも１か月間、保存可能である。実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存期間の下限としては、１日以上、１か月以上、６ヶ月以上、あるいは１年以上が例示される。また、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存期間の上限としては、７日以下、６か月以下、１年３か月以下、１年６か月以下、あるいは２年以下が例示される。実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存温度の下限としては、２℃以上、４℃以上、あるいは５℃以上が例示される。また、実施形態に係る糖化タンパク質測定試薬用の４－アミノアンチピリン含有部分組成物の保存温度の上限としては、１０℃以下、８℃以下、あるいは５℃以下が例示される。 The 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment can be stably stored for a practical period required for distribution. For example, the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment can be stored for at least one month. Examples of the lower limit of the storage period of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment include one day or more, one month or more, six months or more, or one year or more. Examples of the upper limit of the storage period of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment include seven days or less, six months or less, one year and three months or less, one year and six months or less, or two years or less. Examples of the lower limit of the storage temperature of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment include 2°C or more, 4°C or more, or 5°C or more. Examples of the upper limit of the storage temperature of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition for the glycosylated protein measurement reagent according to the embodiment include 10°C or less, 8°C or less, or 5°C or less.
２℃で１か月間保存された実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、５℃で１か月間保存されたトリンダー試薬含有部分組成物とを組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度に対する、所定の温度で所定の期間保存された実施形態に係る４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、５℃で所定の期間保存されたトリンダー試薬含有部分組成物とを組み合わせて使用した場合の糖化タンパク質の測定感度の比を、感度残存率という。 The ratio of the measurement sensitivity of glycated proteins when a 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to an embodiment stored at 2°C for one month is used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition stored at 5°C for one month to the measurement sensitivity of glycated proteins when a 4-aminoantipyrine-containing partial composition according to an embodiment stored at a specified temperature for a specified period is used in combination with a Trinder reagent-containing partial composition stored at 5°C for a specified period is referred to as the sensitivity residual rate.
所定の温度が２℃で所定の期間が６か月間である場合、感度残存率の下限としては、９２％以上、あるいは９３％以上が例示される。上限としては、１００％以下、９９％以下、あるいは９８％以下が例示される。 When the specified temperature is 2°C and the specified period is 6 months, the lower limit of the sensitivity retention rate is, for example, 92% or more, or 93% or more. The upper limit is, for example, 100% or less, 99% or less, or 98% or less.
所定の温度が２℃で所定の期間が１２か月間である場合、感度残存率の下限としては、８８％以上、あるいは８９％以上が例示される。上限としては、１００％以下、９８％以下、あるいは９６％以下が例示される。 When the specified temperature is 2°C and the specified period is 12 months, the lower limit of the sensitivity retention rate is, for example, 88% or more, or 89% or more. The upper limit is, for example, 100% or less, 98% or less, or 96% or less.
所定の温度が１０℃で所定の期間が６か月間である場合、感度残存率の下限としては、８７％以上、８８％以上、あるいは８９％以上が例示される。上限としては、１００％以下、９９％以下、あるいは９８％以下が例示される。 When the specified temperature is 10°C and the specified period is six months, the lower limit of the sensitivity retention rate is, for example, 87% or more, 88% or more, or 89% or more. The upper limit is, for example, 100% or less, 99% or less, or 98% or less.
所定の温度が１０℃で所定の期間が１２か月間である場合、感度残存率の下限としては、７８％以上、８０％以上、あるいは８２％以上が例示される。上限としては、１００％以下、９８％以下、あるいは９６％以下が例示される。 When the specified temperature is 10°C and the specified period is 12 months, the lower limit of the sensitivity retention rate is, for example, 78% or more, 80% or more, or 82% or more. The upper limit is, for example, 100% or less, 98% or less, or 96% or less.
次に、本発明の実施例を説明するが、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではないことはもちろんである。 Next, examples of the present invention will be described, but it goes without saying that the present invention is in no way limited to the following examples.
［４－アミノアンチピリン含有部分組成物における４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定方法］
（濃度測定用試薬の組成）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、塩酸でｐＨ７．５に調整して、濃度測定用試薬を得た。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ トリスヒドロキシメチルアミノメタン（メルク社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン２ナトリウム（同仁化学社製）
５Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（アマノエンザイム社製）
０．０１７５ｖｏｌ／ｖｏｌ％ 過酸化水素（国産化学社製）
[Method for measuring the residual 4-aminoantipyrine concentration in the 4-aminoantipyrine-containing partial composition]
(Composition of concentration measuring reagent)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with hydrochloric acid to obtain a concentration measurement reagent.
100 mmol/L Trishydroxymethylaminomethane (Merck)
2 mmol/L N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline disodium (Dojin Chemical Industries, Ltd.)
5 U/mL peroxidase (Amano Enzyme)
0.0175 vol/vol% hydrogen peroxide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
（４－アミノアンチピリン含有部分組成物の希釈）
後述する各実施例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を精製水で適宜希釈した。
(Dilution of 4-aminoantipyrine-containing partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to each of the Examples described below was appropriately diluted with purified water.
（測定機器）
７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクフィールディング社製）
主波長を５４６ｎｍ、副波長を７００ｎｍと設定し、波長５４６ｎｍにおける吸光度をＡ546、波長７００ｎｍにおける吸光度をＡ700として、４－アミノアンチピリンの濃度の算出に用いる吸光度ＡAを、下記（６）式で定義した。
ＡA＝Ａ546－Ａ700 （６）
(Measuring equipment)
Hitachi automatic analyzer model 7180 (Hitachi High-Tech Fielding Corporation)
The main wavelength was set to 546 nm, the secondary wavelength to 700 nm, the absorbance at a wavelength of 546 nm was defined as A 546 , and the absorbance at a wavelength of 700 nm was defined as A 700 . The absorbance A A used to calculate the concentration of 4-aminoantipyrine was defined by the following formula (6).
A A = A 546 - A 700 (6)
（測定手順）
３７℃にインキュベートされた濃度測定用試薬１８０μＬに適宜希釈した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後、上記（６）式で与えられる吸光度ＡAを測定した。保存初日の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いた際の吸光度を１００％として、保存後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いた際の吸光度の残存率を４－アミノアンチピリン残存率として計算した。
(Measurement Procedure)
4.5 μL of an appropriately diluted 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was added to 180 μL of the concentration measurement reagent incubated at 37° C., and the mixture was reacted at 37° C. for 5 minutes, after which the absorbance A given by the above formula (6) was measured. The absorbance when the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was used on the first day of storage was defined as 100%, and the remaining rate of absorbance when the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after storage was used was calculated as the 4-aminoantipyrine remaining rate.
［プロテアーゼ活性残存率の測定方法］
（活性測定用第１試薬の組成）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、塩酸でｐＨ７．５に調整して、活性測定用第１試薬を得た。
３７．５ｍｍｏｌ／Ｌ トリスヒドロキシメチルアミノメタン（メルク社製）
６２．５ｖｏｌ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
[Method for measuring residual protease activity]
(Composition of the first reagent for measuring activity)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with hydrochloric acid to obtain a first reagent for activity measurement.
37.5 mmol/L Trishydroxymethylaminomethane (Merck)
62.5 vol/vol% dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
（活性測定用第２試薬の組成）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解して調整して、活性測定用第２試薬を得た。
６．６ｍｇ／ｍＬ Ｚ－Ｇｌｙ－ＯＮｐ（国産化学社製）
９０ｖｏｌ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
(Composition of the second reagent for measuring activity)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below to obtain a second reagent for activity measurement.
6.6 mg/mL Z-Gly-ONp (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
90 vol/vol% dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
（４－アミノアンチピリン含有部分組成物の希釈）
後述する各実施例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を１０ｖｏｌ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド水溶液で適宜希釈した。
(Dilution of 4-aminoantipyrine-containing partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to each of the Examples described below was appropriately diluted with a 10 vol/vol % aqueous dimethyl sulfoxide solution.
（測定機器）
７１８０形日立自動分析装置（日立ハイテクフィールディング社製）
主波長を４０５ｎｍ、副波長を６６０ｎｍと設定し、波長４０５ｎｍにおける吸光度をＡ405、波長６６０ｎｍにおける吸光度をＡ660として、プロテアーゼの作用で生じる基質（Ｚ－Ｇｌｙ－ＯＮｐ）の加水分解物の濃度に比例する吸光度ＡSを、下記（７）式で定義した。
ＡS＝Ａ405－Ａ660 （７）
(Measuring Equipment)
Hitachi automatic analyzer model 7180 (Hitachi High-Tech Fielding Corporation)
The main wavelength was set at 405 nm, the secondary wavelength at 660 nm, the absorbance at a wavelength of 405 nm was defined as A 405 , and the absorbance at a wavelength of 660 nm was defined as A 660 . The absorbance A S , which is proportional to the concentration of the hydrolysate of the substrate (Z-Gly-ONp) produced by the action of protease, was defined by the following equation (7).
A S = A 405 - A 660 (7)
（測定手順）
３７℃にインキュベートされた活性測定用第１試薬１８０μＬに希釈された４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物７μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、活性測定用第２試薬２０μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。活性測定用第１試薬と希釈された４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の混合溶液に活性測定用第２試薬を添加して９７秒後の吸光度から４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を添加した１５１秒後の吸光度の変化を測定した。９７秒後の吸光度をＡSt=97、１５１秒後の吸光度をＡSt=151として、下記（８）式より、吸光度変化ＡCを算出した。
ＡC＝ＡSt=151－ＡSt=97 （８）
(Measurement Procedure)
7 μL of the diluted 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was added to 180 μL of the first activity measuring reagent incubated at 37° C., and the mixture was allowed to react at 37° C. for 5 minutes, after which 20 μL of the second activity measuring reagent was added and allowed to react for an additional 5 minutes at 37° C. The second activity measuring reagent was added to a mixed solution of the first activity measuring reagent and the diluted 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition, and the change in absorbance from 97 seconds after the addition of the second activity measuring reagent to 151 seconds after the addition of the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was measured. The absorbance change A C was calculated from the absorbance after 97 seconds as A St = 97 and the absorbance after 151 seconds as A St = 151 according to the following formula (8).
A C =A St=151 -A St=97 (8)
保存初日の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いた際の吸光度変化を１００％として、保存後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いた際の吸光度変化の残存率をプロテアーゼ活性残存率として計算した。なお、吸光度変化を測定する時間は、吸光度が直線的に変化する時間範囲であればよく、適宜決定できる。 The change in absorbance when using the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition on the first day of storage was taken as 100%, and the remaining rate of absorbance change when using the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after storage was calculated as the remaining rate of protease activity. The time for measuring the absorbance change may be within the time range in which the absorbance changes linearly, and can be determined appropriately.
［実施例１：安定化剤のスクリーニング］
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００（スペルコ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
[Example 1: Screening of stabilizers]
(Preparation of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with sodium hydroxide to prepare a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition.
200 mmol/L 3,3-dimethylglutaric acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.05 wt/vol% ProClin 300 (manufactured by Sperco)
5 mmol/L 4-aminoantipyrine (Actec)
0.1 mmol/L potassium ferrocyanide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
40 kU/mL protease for glycated albumin (manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, obtained according to the method described in Patent No. 4565807)
Concentration stabilizer described below
（実施例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（和光純薬社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．８ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．１５ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－カルバモイルフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．３ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－アセトアミドフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－アミノフェニルボロン酸（東京化成社製）
(Stabilizers contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial compositions according to the examples)
30 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
50 wt/vol% trimethylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
0.6 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.8 wt/vol% 3-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.15 wt/vol% 3-carbamoylphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.3 wt/vol% 3-acetamidophenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.6 wt/vol% 3-aminophenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
（比較例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ グリセロール（和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（和光純薬社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ ベンズアミジン塩酸塩（和光純薬社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ ホウ酸（和光純薬社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to the comparative example)
30 wt/vol% dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
50 wt/vol% glycerol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
50 wt/vol% D(-)-sorbitol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
1 wt/vol% Benzamidine hydrochloride (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
1 wt/vol% boric acid (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の保存）
３０℃で２週間、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を保存した。
(Storage of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was stored at 30° C. for 2 weeks.
（４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中の４－アミノアンチピリン濃度残存率を測定した。結果を表１に示す。
(Measurement of residual 4-aminoantipyrine concentration)
Using the above method, the residual concentration of 4-aminoantipyrine in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 1.
（プロテアーゼ活性残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中のプロテアーゼの活性残存率を測定した。結果を表１に示す。
(Measurement of residual protease activity)
Using the above method, the residual activity of the protease in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 1.
３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の４－アミノアンチピリン残存率が好ましくは９０％以上、少なくとも８８％以上であり、かつプロテアーゼ活性残存率が少なくとも７０％以上あれば、冷蔵保存（２℃以上１０℃以下）における４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の長期保存安定性も良好になることが期待される。そのため、当該基準をもって、安定化剤の有効性を判断した。 If the 4-aminoantipyrine remaining rate in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after storage at 30°C for 2 weeks is preferably 90% or more, and at least 88% or more, and the protease activity remaining rate is at least 70% or more, it is expected that the long-term storage stability of the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition when stored in a refrigerator (2°C to 10°C) will also be good. Therefore, the effectiveness of the stabilizer was judged based on this standard.
表１から明らかなように、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、２－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルボキシフェニルボロン酸、３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、又は３－アミノフェニルボロン酸を添加した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物は、４－アミノアンチピリン残存率及びプロテアーゼ活性残存率の両方の基準を満足した。 As is clear from Table 1, the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition to which propylene glycol, trimethylene glycol, 2-carboxyphenylboronic acid, 3-carboxyphenylboronic acid, 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, or 3-aminophenylboronic acid was added met the criteria for both the 4-aminoantipyrine residual rate and the protease activity residual rate.
一方、比較例に記載した安定化剤を添加した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物では、４－アミノアンチピリン残存率及びプロテアーゼ活性残存率の一方あるいは両方が基準を満たさなかった。このことから、実施例に係る安定化剤を用いた場合に、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の長期保存安定性が良好になることが期待された。 On the other hand, in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition to which the stabilizer described in the comparative example was added, either or both of the 4-aminoantipyrine residual rate and the protease activity residual rate did not meet the standards. From this, it was expected that the long-term storage stability of the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition would be improved when the stabilizer according to the example was used.
［実施例２：キレート剤の効果］
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。また、クエン酸三ナトリウムを含有しない以外は、組成が同じ４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物も調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００（スペルコ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（和光純薬）
後述する濃度の安定化剤
[Example 2: Effect of chelating agent]
(Preparation of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
A 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was prepared by dissolving the following reagent components in purified water to the concentrations shown below and adjusting the pH to 7.5 with sodium hydroxide. A 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition with the same composition except that it did not contain trisodium citrate was also prepared.
200 mmol/L 3,3-dimethylglutaric acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.05 wt/vol% ProClin 300 (manufactured by Sperco)
5 mmol/L 4-aminoantipyrine (Actec)
0.1 mmol/L potassium ferrocyanide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
40 kU/mL protease for glycated albumin (manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, obtained according to the method described in Patent No. 4565807)
1 mmol/L trisodium citrate (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
Concentration stabilizer described below
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）
５０ｗｔ／ｖｏｌ％ トリメチレングリコール（和光純薬社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．８ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．１５ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－カルバモイルフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．３ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－アセトアミドフェニルボロン酸（東京化成社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ３－アミノフェニルボロン酸（東京化成社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
30 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
50 wt/vol% trimethylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
0.6 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.8 wt/vol% 3-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.15 wt/vol% 3-carbamoylphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.3 wt/vol% 3-acetamidophenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.6 wt/vol% 3-aminophenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の保存）
３０℃で２週間、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を保存した。
(Storage of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was stored at 30° C. for 2 weeks.
（４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中の４－アミノアンチピリン濃度残存率を測定した。結果を表２に示す。
(Measurement of residual 4-aminoantipyrine concentration)
Using the above method, the residual concentration of 4-aminoantipyrine in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 2.
（プロテアーゼ活性残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中のプロテアーゼ活性残存率を測定した。結果を表２に示す。
(Measurement of residual protease activity)
Using the above method, the residual rate of protease activity in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the rate on the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 2.
表２から明らかなように、実施例１で４－アミノアンチピリン残存率とプロテアーゼ活性残存率の基準を両方とも満足した安定化剤を含有せしめた組成物に、さらにクエン酸三ナトリウムを加えることで、４－アミノアンチピリン残存率又はプロテアーゼ活性残存率が同程度か、それ以上に向上することが示された。このことから、実施例に係る安定化剤にキレート剤を組み合わせても、４－アミノアンチピリン残存率又はプロテアーゼ活性残存率は同程度か、それ以上に向上することが示された。 As is clear from Table 2, it was shown that by further adding trisodium citrate to the composition containing the stabilizer in Example 1 that satisfied both the standards for 4-aminoantipyrine residual rate and protease activity residual rate, the 4-aminoantipyrine residual rate or protease activity residual rate was improved to the same level or more. This shows that even when a chelating agent is combined with the stabilizer of the example, the 4-aminoantipyrine residual rate or protease activity residual rate is improved to the same level or more.
［実施例３：長期安定性の検証］
（トリンダー試薬含有部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるように精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．６に調整して、トリンダー試薬含有部分組成物を調製した。
１００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸（同仁化学社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ アジ化ナトリウム（メルク社製）
１ｍｍｏｌ／Ｌ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（国産化学社製）
６ｗｔ／ｖｏｌ％ Ｄ（－）－ソルビトール（和光純薬社製）
２ｍｍｏｌ／Ｌ Ｎ，Ｎ－ビス（４－スルホブチル）－３－メチルアニリン２ナトリウム（同仁化学社製）
１０Ｕ／ｍＬ ペルオキシダーゼ（アマノエンザイム社製）
３０Ｕ／ｍＬ ケトアミンオキシダーゼ（旭化成ファーマ社製）
[Example 3: Verification of long-term stability]
(Preparation of Trinder Reagent-Containing Partial Composition)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown, and the pH was adjusted to 7.6 with sodium hydroxide to prepare a partial composition containing Trinder's reagent.
100 mmol/L N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid (manufactured by Dojindo Chemical Industries, Ltd.)
0.05 wt/vol% sodium azide (Merck)
1 mmol/L Sodium ethylenediaminetetraacetate (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
6 wt/vol% D(-)-sorbitol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
2 mmol/L N,N-bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline disodium (Dojin Chemical Industries, Ltd.)
10 U/mL peroxidase (Amano Enzyme)
30 U/mL ketoamine oxidase (Asahi Kasei Pharma)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。安定化剤としてプロピレングリコール又は２－カルボキシフェニルボロン酸を含有する４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物において、クエン酸三ナトリウムを含有する部分組成物と、クエン酸三ナトリウムを含有しない部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００（スペルコ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸三ナトリウム（和光純薬）
後述する濃度の安定化剤
(Preparation of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with sodium hydroxide to prepare a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition. A partial composition containing trisodium citrate and a partial composition not containing trisodium citrate were prepared from the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing propylene glycol or 2-carboxyphenylboronic acid as a stabilizer.
200 mmol/L 3,3-dimethylglutaric acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.05 wt/vol% ProClin 300 (manufactured by Sperco)
5 mmol/L 4-aminoantipyrine (Actec)
0.1 mmol/L potassium ferrocyanide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
40 kU/mL protease for glycated albumin (manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, obtained according to the method described in Patent No. 4565807)
1 mmol/L trisodium citrate (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
Concentration stabilizer described below
（実施例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
(Stabilizers contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial compositions according to the examples)
30 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
0.6 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
（比較例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to the comparative example)
30 wt/vol% dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
（サンプル検体）
以下のサンプル検体を用意した。
管理血清Ｌ（旭化成ファーマ社製）
管理血清Ｈ（旭化成ファーマ社製）
健常人血清２検体
(Sample specimen)
The following sample specimens were prepared:
Control serum L (Asahi Kasei Pharma)
Control serum H (Asahi Kasei Pharma)
Serum samples from two healthy individuals
（部分組成物の保存）
調製したトリンダー試薬含有部分組成物を５℃で１か月、６か月及び１２か月間保存した。また、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を２℃及び１０℃で１か月、６か月及び１２か月間保存した。
(Preservation of partial composition)
The prepared partial compositions containing Trinder's reagent were stored at 5° C. for 1 month, 6 months, and 12 months. In addition, the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial compositions were stored at 2° C. and 10° C. for 1 month, 6 months, and 12 months.
（４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、２℃及び１０℃で６か月間及び１２か月間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物における４－アミノアンチピリンの濃度残存率を測定した。結果を表３に示す。
(Measurement of residual 4-aminoantipyrine concentration)
Using the above method, the residual concentration of 4-aminoantipyrine in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after storage for 6 months and 12 months at 2° C. and 10° C. relative to the initial storage day was measured. The results are shown in Table 3.
（プロテアーゼ活性残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、２℃及び１０℃で６か月間及び１２か月間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物におけるプロテアーゼの活性残存率を測定した。結果を表３に示す。
(Measurement of residual protease activity)
Using the above method, the residual activity of protease in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after storage for 6 months and 12 months at 2° C. and 10° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 3.
（糖化アルブミンの測定手順）
３７℃にインキュベートされたトリンダー試薬含有部分組成物１８０μＬにサンプル検体４．５μＬを添加し、３７℃で５分間反応させた後に、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物４５μＬを添加してさらに３７℃で５分間反応させた。トリンダー試薬含有部分組成物にサンプル検体を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ１からトリンダー試薬含有部分組成物とサンプル検体の混合液に４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を添加して５分後の吸光度Ａｂｓ２までの吸光度変化を測定した。吸光度変化ＡCは下記（９）式で与えられる。
ＡC＝（Ａｂｓ２）－（Ａｂｓ１）×１８０／２２５ （９）
ここで１８０とはトリンダー試薬含有部分組成物の液量を、２２５とはトリンダー試薬含有部分組成物と４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の総液量を意味する。
(Procedure for measuring glycated albumin)
4.5 μL of the sample specimen was added to 180 μL of the Trinder reagent-containing partial composition incubated at 37° C., and reacted at 37° C. for 5 minutes, after which 45 μL of the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was added and reacted for an additional 5 minutes at 37° C. The change in absorbance was measured from absorbance Abs1 5 minutes after the sample specimen was added to the Trinder reagent-containing partial composition to absorbance Abs2 5 minutes after the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was added to the mixture of the Trinder reagent-containing partial composition and the sample specimen. The absorbance change A C is given by the following formula (9).
A C = (Abs2) - (Abs1) x 180/225 (9)
Here, 180 means the liquid volume of the Trinder reagent-containing partial composition, and 225 means the total liquid volume of the Trinder reagent-containing partial composition and the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition.
サンプル検体の代わりに精製水を用いた測定時の吸光度を試薬ブランクとし、サンプル検体を用いた測定時に得られた吸光度変化ＡCSから試薬ブランクの変化ＡCBを引いて感度ΔＡｂｓを算出した。感度ΔＡｂｓは、下記（１０）式で与えられる。
ΔＡｂｓ＝ＡCS－ＡCB （１０）
The absorbance measured using purified water instead of the sample specimen was used as the reagent blank, and the sensitivity ΔAbs was calculated by subtracting the change in absorbance A CB of the reagent blank from the change in absorbance A CS obtained when the sample specimen was used. The sensitivity ΔAbs is given by the following formula (10).
ΔAbs=A CS -A CB (10)
５℃で１か月間保存したトリンダー試薬含有部分組成物と２℃で１か月間保存した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いた測定した時に得られた感度ΔＡｂｓを１００％として、５℃で６か月間又は１２か月間保存したトリンダー試薬含有部分組成物と２℃又は１０℃で６か月間又は１２か月間保存した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いて測定した時に得られたΔＡｂｓの残存率（感度残存率）を算出した。結果を表４に示す。なお、感度残存率は、試薬調製直後は感度が上振れするため、感度が定常状態になる１か月間保存した試薬をコントロール群とした。 The sensitivity ΔAbs obtained when measuring using the Trinder reagent-containing partial composition stored at 5°C for one month and the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition stored at 2°C for one month was taken as 100%, and the residual rate (sensitivity residual rate) of ΔAbs obtained when measuring using the Trinder reagent-containing partial composition stored at 5°C for six or twelve months and the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition stored at 2°C or 10°C for six or twelve months was calculated. The results are shown in Table 4. Note that, since the sensitivity fluctuates upward immediately after the preparation of the reagent, the control group was the reagent stored for one month when the sensitivity reaches a steady state.
表３から明らかなように、プロピレングリコール又は２－カルボキシフェニルボロン酸を含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物において、保存中のプロテアーゼ活性の低下は見られず、かつ４－アミノアンチピリン残存率も良好であった。さらにクエン酸三ナトリウムを含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物においても、プロテアーゼ活性残存率の低下は見られず、４－アミノアンチピリン残存率が向上していた。一方、ジメチルスルホキシドを含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物においては、プロテアーゼ活性の低下は見られなかったものの、４－アミノアンチピリン残存率が顕著に低下した。 As is clear from Table 3, in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing propylene glycol or 2-carboxyphenylboronic acid, no decrease in protease activity was observed during storage, and the 4-aminoantipyrine residual rate was also good. Furthermore, in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing trisodium citrate, no decrease in protease residual rate was observed, and the 4-aminoantipyrine residual rate was improved. On the other hand, in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing dimethyl sulfoxide, no decrease in protease activity was observed, but the 4-aminoantipyrine residual rate was significantly reduced.
また、表４から明らかなように、プロピレングリコールと２－カルボキシフェニルボロン酸を含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いると、良好な感度残存率が得られた。さらにクエン酸三ナトリウムを含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物においては、感度残存率は同程度あるいは向上していた。一方、ジメチルスルホキシドを含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を用いると、感度残存率は低下した。したがって、実施例１、２で示した基準を満足する安定化剤を選択することで、長期保存においても十分な４－アミノアンチピリン残存率、及びプロテアーゼ活性残存率を維持でき、さらに測定試薬としての感度安定性を良好に維持できることが示された。 As is clear from Table 4, a good residual sensitivity rate was obtained when a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing propylene glycol and 2-carboxyphenylboronic acid was used. Furthermore, the residual sensitivity rate was the same or improved when a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing trisodium citrate was used. On the other hand, the residual sensitivity rate decreased when a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing dimethyl sulfoxide was used. Therefore, it was shown that by selecting a stabilizer that satisfies the criteria shown in Examples 1 and 2, sufficient residual 4-aminoantipyrine rate and residual protease activity rate can be maintained even during long-term storage, and the sensitivity stability as a measurement reagent can be maintained well.
［実施例４：安定化剤の濃度］
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００（スペルコ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
[Example 4: Concentration of stabilizer]
(Preparation of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with sodium hydroxide to prepare a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition.
200 mmol/L 3,3-dimethylglutaric acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.05 wt/vol% ProClin 300 (manufactured by Sperco)
5 mmol/L 4-aminoantipyrine (Actec)
0.1 mmol/L potassium ferrocyanide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
40 kU/mL protease for glycated albumin (manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, obtained according to the method described in Patent No. 4565807)
Concentration stabilizer described below
（実施例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％～６０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）
０．２ｗｔ／ｖｏｌ％～１ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
(Stabilizers contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial compositions according to the examples)
30 wt/vol% to 60 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
0.2 wt/vol% to 1 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
（比較例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to the comparative example)
30 wt/vol% dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の保存）
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を、３０℃で２週間保存した。
(Storage of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was stored at 30° C. for 2 weeks.
（４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中の４－アミノアンチピリンの濃度残存率を測定した。結果を表５に示す。
(Measurement of residual 4-aminoantipyrine concentration)
Using the above method, the residual concentration of 4-aminoantipyrine in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 5.
（プロテアーゼ活性残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中のプロテアーゼの活性残存率を測定した。結果を表５に示す。
(Measurement of residual protease activity)
Using the above method, the residual activity of the protease in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 5.
表５から明らかなように、３０ｗｔ／ｖｏｌ％以上のプロピレングリコール、及び０．２ｗｔ／ｖｏｌ％以上の２－カルボキシフェニルボロン酸は、４－アミノアンチピリン残存率とプロテアーゼ活性残存率の両方の基準を満足していた。 As is clear from Table 5, propylene glycol at 30 wt/vol% or more and 2-carboxyphenylboronic acid at 0.2 wt/vol% or more met the criteria for both 4-aminoantipyrine residual rate and protease activity residual rate.
［実施例５：添加剤の影響］
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００（スペルコ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
後述する濃度の添加物
[Example 5: Effect of additives]
(Preparation of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with sodium hydroxide to prepare a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition.
200 mmol/L 3,3-dimethylglutaric acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.05 wt/vol% ProClin 300 (manufactured by Sperco)
5 mmol/L 4-aminoantipyrine (Actec)
0.1 mmol/L potassium ferrocyanide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
40 kU/mL protease for glycated albumin (manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, obtained according to the method described in Patent No. 4565807)
Stabilizers (concentrations to be described later) Additives (concentrations to be described later)
（実施例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）
０．６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
(Stabilizers contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial compositions according to the examples)
30 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
0.6 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
（比較例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to the comparative example)
30 wt/vol% dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた添加物）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ α－シクロデキストリン（和光純薬社製）
１ｗｔ／ｖｏｌ％ スクロース（和光純薬社製）
０．１ｗｔ／ｖｏｌ％ ノニオン Ｐ－２１３（日油社製）
０．１ｗｔ／ｖｏｌ％ ノニオン Ｓ－１５．４（日油社製）
０．１ｗｔ／ｖｏｌ％ ニッコール ＰＢＣ－４４（日光ケミカルズ社製）
１００Ｕ／ｍＬ カタラーゼ（ナガセケムテックス社製）
(Additives contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
1 wt/vol% α-cyclodextrin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
1 wt/vol% sucrose (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
0.1wt/vol% Nonion P-213 (NOF Corp.)
0.1wt/vol% Nonionic S-15.4 (NOF Corp.)
0.1 wt/vol% Nikkor PBC-44 (manufactured by Nikko Chemicals Co., Ltd.)
100 U/mL catalase (Nagase Chemtex Corporation)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の保存）
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を３０℃で２週間保存した。
(Storage of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was stored at 30° C. for 2 weeks.
（４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中の４－アミノアンチピリン濃度残存率を測定した。結果を表６に示す。
(Measurement of residual 4-aminoantipyrine concentration)
Using the above method, the residual concentration of 4-aminoantipyrine in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 6.
（プロテアーゼ活性残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中のプロテアーゼ活性残存率を測定した。結果を表６に示す。
(Measurement of residual protease activity)
Using the above method, the residual rate of protease activity in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the rate on the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 6.
表６から明らかなように、安定化剤としてプロピレングリコール又は２－カルボキシフェニルボロン酸を含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物にさらに添加物を加えた場合も、４－アミノアンチピリン残存率とプロテアーゼ活性残存率の両方の基準を満足していた。以上より、通常の測定試薬として含有されうる糖類、界面活性剤、及び酵素等をプロピレングリコール又は２－カルボキシフェニルボロン酸を含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に加えても、４－アミノアンチピリン残存率とプロテアーゼ活性残存率の両方の基準が満たされることが示された。 As is clear from Table 6, even when additives were further added to the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing propylene glycol or 2-carboxyphenylboronic acid as a stabilizer, the criteria for both the 4-aminoantipyrine residual rate and the protease activity residual rate were met. From the above, it was shown that even when sugars, surfactants, enzymes, etc. that can be contained in ordinary measurement reagents are added to the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing propylene glycol or 2-carboxyphenylboronic acid, the criteria for both the 4-aminoantipyrine residual rate and the protease activity residual rate are met.
［実施例６：プロテアーゼの種類の影響］
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００（スペルコ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
後述する濃度のプロテアーゼ
後述する濃度の安定化剤
[Example 6: Effect of type of protease]
(Preparation of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with sodium hydroxide to prepare a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition.
200 mmol/L 3,3-dimethylglutaric acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.05 wt/vol% ProClin 300 (manufactured by Sperco)
5 mmol/L 4-aminoantipyrine (Actec)
0.1 mmol/L potassium ferrocyanide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
Protease at a concentration as described below Stabilizer at a concentration as described below
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させたプロテアーゼ）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
１．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロテイナーゼＫ（ナカライテスク社製）
２０ｖｏｌ／ｖｏｌ％ Ｏｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌ（ダニスコジャパン社製）
(Protease contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
40 kU/mL protease for glycated albumin (manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, obtained according to the method described in Patent No. 4565807)
1.5 wt/vol% Proteinase K (Nacalai Tesque)
20 vol/vol% Optimase PR40L (manufactured by Danisco Japan)
（実施例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％あるいは３５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）
０．０６ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
(Stabilizers contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial compositions according to the examples)
30 wt/vol% or 35 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
0.06 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
（比較例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to the comparative example)
30 wt/vol% dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の保存）
４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を３０℃で２週間保存した。
(Storage of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was stored at 30° C. for 2 weeks.
（４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中の４－アミノアンチピリン濃度残存率を測定した。結果を表７に示す。
(Measurement of residual 4-aminoantipyrine concentration)
Using the above method, the residual concentration of 4-aminoantipyrine in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 7.
（プロテアーゼ活性残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中のプロテアーゼ活性残存率を測定した。結果を表７に示す。
(Measurement of residual protease activity)
Using the above method, the residual rate of protease activity in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the rate on the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 7.
糖化アルブミン用プロテアーゼとＯｐｔｉｍａｓｅ ＰＲ４０Ｌの一般名はサブチリシンである。サブチリシンはＢａｃｉｌｌｕｓ由来である。プロテイナーゼＫはＴｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ由来である。表７から明らかなように、プロピレングリコール又は２－カルボキシフェニルボロン酸を含有せしめた４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物において、プロテアーゼの種類に依らずに、４－アミノアンチピリン残存率とプロテアーゼ活性残存率の両方の基準を満足していた。 The common names for the protease for glycated albumin and Optimase PR40L are subtilisin. Subtilisin is derived from Bacillus. Proteinase K is derived from Tritirachium. As is clear from Table 7, in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition containing propylene glycol or 2-carboxyphenylboronic acid, the criteria for both the 4-aminoantipyrine residual rate and the protease activity residual rate were met regardless of the type of protease.
［実施例７：安定化剤の併用］
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の調製）
下記の試薬成分を記載の濃度になるよう精製水に溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５に調整して、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を調製した。
２００ｍｍｏｌ／Ｌ ３，３－ジメチルグルタル酸（東京化成社製）
０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００（スペルコ社製）
５ｍｍｏｌ／Ｌ ４－アミノアンチピリン（アクテック社製）
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ フェロシアン化カリウム（国産化学社製）
４０ｋＵ／ｍＬ 糖化アルブミン用プロテアーゼ（旭化成ファーマ社製、特許第４５６５８０７号に記載の方法に準じて得た。）
後述する濃度の安定化剤
[Example 7: Combined use of stabilizers]
(Preparation of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The following reagent components were dissolved in purified water to the concentrations shown below, and the pH was adjusted to 7.5 with sodium hydroxide to prepare a 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition.
200 mmol/L 3,3-dimethylglutaric acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
0.05 wt/vol% ProClin 300 (manufactured by Sperco)
5 mmol/L 4-aminoantipyrine (Actec)
0.1 mmol/L potassium ferrocyanide (Kokusan Chemical Co., Ltd.)
40 kU/mL protease for glycated albumin (manufactured by Asahi Kasei Pharma Corporation, obtained according to the method described in Patent No. 4565807)
Concentration stabilizer described below
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）；
０．２ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）；
１５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）と０．１ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）；
７．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）と０．１５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）；
２２．５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）と０．０５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）；
２０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）と０．１５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）；
１５ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）と０．１５ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）；
２０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）と０．１ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）；又は
１０ｗｔ／ｖｏｌ％ プロピレングリコール（和光純薬社製）と０．１ｗｔ／ｖｏｌ％ ２－カルボキシフェニルボロン酸（東京化成社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
30 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.);
0.2 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.);
15 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.1 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.);
7.5 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.15 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.);
22.5 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.05 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.);
20 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.15 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.);
15 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.15 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.);
20 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.1 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.); or 10 wt/vol% propylene glycol (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.1 wt/vol% 2-carboxyphenylboronic acid (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
（比較例に係る４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物に含有させた安定化剤）
３０％ ジメチルスルホキシド（ナカライテスク社製）
(Stabilizer contained in 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition according to the comparative example)
30% Dimethyl sulfoxide (Nacalai Tesque)
（４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物の保存）
３０℃で２週間、４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物を保存した。
(Storage of 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition)
The 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition was stored at 30° C. for 2 weeks.
（４－アミノアンチピリン濃度残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中の４－アミノアンチピリン濃度残存率を測定した。結果を表８に示す。
(Measurement of residual 4-aminoantipyrine concentration)
Using the above method, the residual concentration of 4-aminoantipyrine in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 8.
（プロテアーゼ活性残存率の測定）
上記の方法で、保存初日に対する、３０℃で２週間保存した後の４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物中のプロテアーゼ活性残存率を測定した。結果を表８に示す。
(Measurement of residual protease activity)
Using the above method, the residual rate of protease activity in the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition after two weeks of storage at 30° C. relative to the rate on the initial day of storage was measured. The results are shown in Table 8.
表８から明らかなように、（５）式による計算値で０．０５以上、組み合わせによっては０．０４以上となるようにプロピレングリコールと２－カルボキシフェニルボロン酸を混合して添加した４－アミノアンチピリン含有液状部分組成物は、４－アミノアンチピリン残存率及びプロテアーゼ活性残存率の両方の基準を満足した。 As is clear from Table 8, the 4-aminoantipyrine-containing liquid partial composition to which propylene glycol and 2-carboxyphenylboronic acid were mixed and added so that the calculated value according to formula (5) was 0.05 or more, and in some combinations 0.04 or more, satisfied the criteria for both the 4-aminoantipyrine residual rate and the protease activity residual rate.
Claims (18)
糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物と、
を備える糖化タンパク質測定試薬であって、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、
（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、
（２）３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含む、
糖化タンパク質測定試薬。 a 4-aminoantipyrine-containing moiety composition;
a Trinder reagent-containing partial composition comprising a glycosylated amino acid oxidase, a peroxidase, and a Trinder reagent;
A glycated protein measurement reagent comprising:
The 4-aminoantipyrine-containing partial composition is
(1) A composition comprising 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and a protease;
(2) further comprising at least one stabilizer selected from the group consisting of 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid;
Glycated protein measurement reagent.
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (1) The reagent for measuring a glycated protein according to claim 4, wherein a (wt/vol%) is the concentration of propylene glycol, b (wt/vol%) is the concentration of trimethylene glycol, c (wt/vol%) is the concentration of 2-carboxyphenylboronic acid, d (wt/vol%) is the concentration of 3-carboxyphenylboronic acid, e (wt/vol%) is the concentration of 3-carbamoylphenylboronic acid, f (wt/vol%) is the concentration of 3 -acetamidophenylboronic acid, and g (wt/vol%) is the concentration of 3-aminophenylboronic acid, and a to g satisfy the following formula (1):
a*(1/600)+b*(1/800)+c*(1/4)+d*(1/6)+e*(1)+f*(1/2)+g*(1/4)≧0.05 (1)
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、
を含み、
トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含み、
４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、（２）３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含み、
検体に前記トリンダー試薬含有部分組成物を接触せしめ、次いで、前記検体と前記トリンダー試薬含有部分組成物の混合液に前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を接触せしめる、
糖化タンパク質の測定方法。 contacting a specimen with a Trinder reagent-containing partial composition and a 4-aminoantipyrine-containing partial composition;
detecting color development dependent on glycosylated proteins present in the sample;
Including,
the Trinder reagent-containing portion composition comprises a glycosylated amino acid oxidase, a peroxidase, and a Trinder reagent;
the 4-aminoantipyrine-containing portion composition (1) comprises 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and a protease, and (2) further comprises at least one stabilizer selected from the group consisting of 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid;
contacting a sample with the Trinder's reagent-containing partial composition, and then contacting the mixture of the sample and the Trinder's reagent-containing partial composition with the 4-aminoantipyrine-containing partial composition;
Method for measuring glycated proteins.
検体中に存在する糖化タンパク質に依存する発色を検出することと、detecting color development dependent on glycosylated proteins present in the sample;
を含み、Including,
トリンダー試薬含有部分組成物が、糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含み、the Trinder reagent-containing portion composition comprises a glycosylated amino acid oxidase, a peroxidase, and a Trinder reagent;
４－アミノアンチピリン含有部分組成物が、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、（２）３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含み、the 4-aminoantipyrine-containing portion composition (1) comprises 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and a protease, and (2) further comprises at least one stabilizer selected from the group consisting of 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid;
前記検体に前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を接触させる前に、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物の（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼと、（２）３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤と、が、予め混合され保存されている、Before contacting the 4-aminoantipyrine-containing partial composition with the specimen, (1) 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and protease of the 4-aminoantipyrine-containing partial composition and (2) at least one stabilizer selected from the group consisting of 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid are mixed and stored in advance.
糖化タンパク質の測定方法。Method for measuring glycated proteins.
前記糖化タンパク質測定試薬が、
４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、
糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物と、
を備え、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物に、（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼと、（２）３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤と、を含有せしめること、
を含む、糖化タンパク質測定試薬の安定化方法。 A method for stabilizing a glycated protein measurement reagent, comprising the steps of:
The glycated protein measurement reagent comprises:
a 4-aminoantipyrine-containing moiety composition;
a Trinder reagent-containing partial composition comprising a glycosylated amino acid oxidase, a peroxidase, and a Trinder reagent;
Equipped with
The 4-aminoantipyrine-containing partial composition contains (1) 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and a protease, and (2) at least one stabilizer selected from the group consisting of 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid;
A method for stabilizing a reagent for measuring a glycosylated protein, comprising the steps of:
前記糖化タンパク質測定試薬が、
４－アミノアンチピリン含有部分組成物と、
糖化アミノ酸オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、及びトリンダー試薬を含むトリンダー試薬含有部分組成物と、
を備え、
（１）４－アミノアンチピリン、フェロシアン化物、及びプロテアーゼを含み、かつ、（２）３－カルバモイルフェニルボロン酸、３－アセトアミドフェニルボロン酸、及び３－アミノフェニルボロン酸からなる群から選択される少なくとも一つの安定化剤をさらに含む、前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を調製することと、
前記４－アミノアンチピリン含有部分組成物を保存することと、
を含む、糖化タンパク質測定試薬の保存方法。 A method for storing a glycated protein measurement reagent, comprising the steps of:
The glycated protein measurement reagent comprises:
a 4-aminoantipyrine-containing moiety composition;
a Trinder reagent-containing partial composition comprising a glycosylated amino acid oxidase, a peroxidase, and a Trinder reagent;
Equipped with
(1) preparing a 4-aminoantipyrine-containing partial composition comprising 4-aminoantipyrine, ferrocyanide, and a protease, and ( 2 ) further comprising at least one stabilizer selected from the group consisting of 3-carbamoylphenylboronic acid, 3-acetamidophenylboronic acid, and 3-aminophenylboronic acid;
storing said 4-aminoantipyrine-containing partial composition;
A method for storing a reagent for measuring glycated protein, comprising the steps of:
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