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JP7503056B6 - 抗ｌａｇ３抗体および抗ｐｄ－１抗体の共－製剤 - Google Patents

抗ｌａｇ３抗体および抗ｐｄ－１抗体の共－製剤 Download PDF

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Description

本発明は、概して、治療用抗体の製剤、および種々の障害の治療におけるそれらの使用に関する。
抗体は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列、または可変ドメイン内のそれらのフレームワーク配列においていくらか異なり得るが、典型的には、それらはＣＤＲ配列において最も劇的に異なる。同じタンパク質、同じポリペプチド、または潜在的に同じエピトープに結合する抗体でさえ、全く異なるＣＤＲ配列を含み得る。ヒトにおける使用のための治療抗体はまた、ヒト生殖系列抗体配列から、またはヒト化抗体におけるような非ヒト（例えば、げっ歯類）生殖系列抗体配列から得られ得、可能性のある配列におけるなおさらなる多様性を導く。これらの配列の相違は、溶液における潜在的に異なる安定性および溶液パラメータに対する異なる応答性をもたらし得る。さらに、アミノ酸の配列の小さな変化または１つもしくは少数のアミノ酸残基の変化は、劇的に異なる抗体安定性および配列特異的分解経路に対する感受性をもたらし得る。結果として、現在、抗体安定性を最適化するために必要な溶液条件を予測することは不可能である。各抗体は、最適な溶液製剤を決定するために個別に研究されなければならない。Ｂｈａｍｂｈａｎｉら、（２０１２）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１：１１２０。
抗体はまた、例えば、ホルモンおよびサイトカインのような他の治療用タンパク質と比較して、かなり大きなタンパク質（～１５０，０００Ｄａ）である。抗体薬物は、有効性および一貫した投薬を確実にするために貯蔵中に安定でなければならず、そのため、選択される製剤がどのようなものであっても、高濃度、透明度および許容可能な粘度のような望ましい特性を支え、また、典型的な貯蔵条件下で許容可能な長い貯蔵寿命にわたってこれらの特性および薬物有効性を維持することが重要である。
ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）は、活性化Ｔ細胞（Ｈｕａｒｄら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３９：２１３-２１７、１９９４）、ＮＫ細胞（Ｔｒｉｅｂｅｌら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７１：１３９３-１４０５、１９９０）、Ｂ細胞（Ｋｉｓｉｅｌｏｗら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３５：２０８１-２０８８、２００５）、および形質細胞様樹状細胞（Ｗｏｒｋｍａｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８２：１８８５-１８９１、２００９）上で発現される細胞表面分子であり、これらのリンパ球サブセットの機能において重要な役割を果たす。さらに、ＬＡＧ３とそのメインリガンドであるクラスＩＩ ＭＨＣとの相互作用は、樹状細胞の機能を調節する役割を果たすと考えられている（Ａｎｄｒｅａｅら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６８：３８７４－３８８０，２００２）。最近の前臨床研究により、ＣＤ８Ｔ細胞消耗におけるＬＡＧ－３の役割が立証されている（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０：２９－３７，２００９）。
慢性ウイルス感染と同様に、腫瘍抗原特異的ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、損なわれたエフェクタ機能および炎症誘発性サイトカインの産生の減少および抗原再刺激に対する低応答性を特徴とする疲労した表現型を示す。これは、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のような細胞外因性機序と、消耗した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）上でアップレギュレートされる抑制性分子のような細胞内因性機序によって媒介される。これらの抑制機構は、効果的な抗腫瘍免疫に対する恐ろしい障壁となっている。
ＬＡＧ－は、寛容化したＴＩＬ上に発現し、それらが腫瘍媒介性免疫抑制に寄与することを示唆する。ＬＡＧ３の阻害は、抗原特異的Ｔ細胞の活性化の増強につながり、そこから治療上の利益が得られる可能性がある。
ＰＤ－１は、免疫調節や末梢性免疫寛容の維持において重要な分子として認識されている。ＰＤ－１はナイーブＴ、ＢおよびＮＫＴ細胞上で中等度に発現され、リンパ球、単球および骨髄細胞上のＴ／Ｂ細胞受容体シグナル伝達によってアップレギュレートされる。ＰＤ－１の２つの既知リガンド、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）およびＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）は、様々な組織に生じるヒト癌で発現する。卵巣癌、腎癌、大腸癌、膵癌、肝癌、黒色腫のような大規模な標本セットでは、ＰＤ－Ｌ１の発現がその後の治療に関係なく、予後不良および全生存率の低下と相関することが示された。同様に、腫瘍浸潤リンパ球上のＰＤ－１発現は、乳癌およびメラノーマにおいて機能不全のＴ細胞をマーキングし、腎癌において予後不良と相関することがわかった。このように、ＰＤ－Ｌ１発現腫瘍細胞は、Ｔ細胞を発現するＰＤ－１と相互作用して、Ｔ細胞の活性化および免疫監視機構の回避を減弱させ、それによって腫瘍に対する免疫応答の障害に寄与することが提唱されている。
ＰＤ－１とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２の一方または両方との相互作用を阻害するいくつかのモノクローナル抗体が、ＦＤＡによりがんの治療に承認されている。このような抗体の有効性は、例えば放射線、手術、化学療法剤、標的療法、腫瘍において脱調節される他のシグナル伝達経路を阻害する薬剤、および他の免疫増強剤のような、他の承認されたまたは実験的な癌治療と組み合わせて投与された場合に増強される可能性があることが提案されている。
結果として、抗ＬＡＧ３抗体および抗ＰＤ-１抗体の安定な共製剤に対する必要性が存在する。そのような安定な製剤は、好ましくは自己投与のための薬物の貯蔵のための典型的な条件下で、すなわち、シリンジ中の冷蔵庫温度で、数ヶ月から数年にわたる安定性を示し、対応する薬物製品の長い貯蔵寿命をもたらす。
Ｂｈａｍｂｈａｎｉら、（２０１２）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１：１１２０ Ｈｕａｒｄら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ３９：２１３-２１７、１９９４ Ｔｒｉｅｂｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３-１４０５、１９９０ Ｋｉｓｉｅｌｏｗら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５：２０８１-２０８８、２００５ Ｗｏｒｋｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２：１８８５-１８９１、２００９ Ａｎｄｒｅａｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：３８７４－３８８０、２００２ Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：２９－３７、２００９。
本発明は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントの共－製剤を提供する。一実施形態において、製剤は、約１６～２２ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約３～７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント；約３０～１２０ｍｇ／ｍＬの非還元二糖；約０．０２～２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約４．５～６．５の緩衝液；および約４０～１５０ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；
ここで、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、および配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、および配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含み、そして、
抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２、および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む。一実施形態において、製剤は、約５～１５ｍＭまたは約５～１０ｍＭＬのメチオニンをさらに含む。驚くべきことに、抗ＬＡＧ３／抗ＰＤ-１共－製剤は、個々の抗体製剤よりも良好な安定性を示す。製剤は、再構成のために凍結乾燥することができ、または液体形態であることができる。
本発明の別の態様において、製剤は、約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、および約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントを、モル比４：１～５：１（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメント）で含み、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニン、または薬学的に許容されるその塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２、およびＦｅＣｌ２からなる群より選択される１以上の賦形剤を約１０～１０００ｍＭの総賦形剤濃度で、および、ｐＨ約５～８の緩衝液を含む。
本発明はまた、癌または感染を治療する方法であって、それを必要とする対象に再構成されたまたは液体製剤（溶液製剤）を投与することを含む方法を提供する。さらなる実施形態では、製剤は、慢性感染の治療に使用される。癌または感染症を治療するための医薬の製造における溶液または凍結乾燥製剤の使用も意図される。
Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件でのＨＰ－ＩＥＸ安定性データによるＡｂ６酸性変異体。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件におけるＨＰ－ＩＥＸ安定性データによるＡｂ６のメイン種。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件でのＨＰ－ＩＥＸ安定性データによるＡｂ６塩基性変異体。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件でのＨＰ－ＩＥＸ安定性データによるＭＫ－３４７５酸性変異体。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件でのＨＰ－ＩＥＸ安定性データによるＭＫ－３４７５メイン種。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃および４０℃保存条件におけるＨＰ－ＩＥＸ安定性データによるＭＫ－３４７５塩基性変異体。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件におけるＵＰ－ＳＥＣ安定性データによる高分子量種。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件におけるＵＰ－ＳＥＣ安定性データによるモノマー。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件での非還元ＣＥ－ＳＤＳ安定性データによる無傷ＩｇＧ。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃および４０℃保存条件における非還元ＣＥ－ＳＤＳ安定性データによる総低分子量種。 トリプトファン表面暴露を示す抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の相同性モデル。Ｔｒｐ１０２は、ホモロジーモデルを用いて計算した到達可能な表面積（８５．２５Å２）によって測定した表面露出である。 １０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．６）中の塩（５０ｍＭ ＮａＣｌ）の存在下およびＬ-アルギニン塩酸塩（４０ｍＭ）の存在下での抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の自己相互作用（ＫＤ）の減少およびコロイド安定性（ＯＤ３５０）および相対溶解度（％ＰＥＧｍｉｄ-ｐｏｉｎｔ）の改善。 ｐＨ５．８およびｐＨ ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液中の抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の拡散相互作用パラメータ（ＫＤ）および濁度（５０ｍｇ／ｍＬでのＯＤ３５０）に対するＬ-アルギニン塩酸塩の効果。 抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６ｐＨランキング研究（５．３～６．４）。 Ｌ-アルギニン、Ｌ-ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下での抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８中２５ｍｇ／ｍＬ）の拡散相互作用パラメータ（ｋＤ）。 Ｌ-アルギニン、Ｌ-ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下での抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８中２５ｍｇ／ｍＬ）の相対溶解度。 Ｌ-アルギニン、Ｌ-ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下での抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８中２５ｍｇ／ｍＬ）の荷電種の変化率。 Ｌ-アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物を含む１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン（ｐＨ５．８）緩衝液中の２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤の、第２ビリアル係数（Ｂ２２）計測を用いた最適化。 Ｌ-アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物の存在下、１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン（ｐＨ５．８）緩衝液中の２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤のコロイド安定性（ＯＤ３５０）。 Ｌ-アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物のいずれかの存在下での１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８緩衝液中の抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（６０ｍｇ／ｍＬ）の粘度。 Ｌ-アルギニン、塩化ナトリウムまたはその混合物のいずれかの存在下での１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８緩衝液中の抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（２５ｍｇ／ｍＬ）の浸透圧。 抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（Ｆ１～Ｆ６）の、４０℃および２５℃の貯蔵条件での経時的な濁度分析。 ４０℃の貯蔵条件での経時的な抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（Ｆ１～Ｆ６）の混合モードクロマトグラフィー分析。各ｍＡｂ(抗ＬＡＧ３および抗ＰＤ-１）についてのモノマーパーセンテージの変化を、製剤Ｆ１～Ｆ６について経時的にプロットする。 ２．５％～９％安定剤を含む７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩、または、２．５％～９．０％安定剤を含む７０ｍＭ塩化ナトリウムの存在下での、２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体製剤Ａｂ６（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８緩衝液）の高分子量（ＨＭＷ）種、モノマーおよび低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。 ２．５％～９％安定剤を含む７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩、または、２．５％～９．０％安定剤を含む７０ｍＭ塩化ナトリウムの存在下での、２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８緩衝液）の荷電種の変化率。 ２．５％～９％の安定剤を含む７０ｍＭのＬ-アルギニンまたは、２．５％～９．０％の安定剤を含む、７０ｍＭの塩化ナトリウムの存在下での、２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭのＬ-ヒスチジンｐＨ５．８）のＴｍ１、Ｔｍ２およびＴｏｎｓｅｔ。 撹拌ストレス時の異なる濃度のポリソルベート８０の存在下での、２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）のコロイド安定性（ＯＤ３５０）。 撹拌ストレス時の異なる濃度のポリソルベート８０の存在下での、２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８緩衝液、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩、５％ｗ／ｖスクロース）の高分子量（ＨＭＷ）種、モノマーおよび低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。 撹拌ストレス時の異なる濃度のポリソルベート８０の存在下での、２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）の荷電種の変化率。 ２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）の単独および漸増濃度のＬ-メチオニンの存在下でのコロイド安定性（ＯＤ３５０）。 ２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）の単独および漸増濃度のＬ-メチオニンの存在下での、高分子量（ＨＭＷ）種およびモノマーの変化率。 ２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）の単独および漸増濃度のＬ-メチオニンの存在下での荷電種の変化率。 ２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）の単独および漸増濃度のＬ-メチオニンの存在下での酸化の変化率。 ７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩とともに１０ｍＭ緩衝液（ｐＨ５．８）を単独で含むおよび異なる安定剤の存在下での、２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３ Ａｂ６抗体の濁度（ＯＤ３５０）の変化率。 ７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩を含む１０ｍＭ緩衝液（ｐＨ５．８）を単独および異なる安定剤の存在下での、２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の高分子量（ＨＭＷ）種、モノマーおよび低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。 ７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩を含む１０ｍＭ緩衝液（ｐＨ５．８）単独、および異なる安定剤の存在下での、２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の荷電種の変化率。 ４０～７０ｍＭの塩（塩化ナトリウム）および２０～７０ｍＭのアミノ酸単独およびいくつかの組み合わせの存在下での２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の濁度（ＯＤ３５０）の変化率。 ４０～７０ｍＭの塩（塩化ナトリウム）および２０～７０ｍＭのアミノ酸単独およびいくつかの組み合わせの存在下での、２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の高分子量（ＨＭＷ）種、モノマーおよび低分子量（ＬＭＷ）種の変化率。 ４０～７０ｍＭの塩（塩化ナトリウム）および２０～７０ｍＭのアミノ酸単独およびいくつかの組み合わせの存在下での、２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の荷電種の変化率。 ４０～７０ｍＭの塩（塩化ナトリウム）および２０～７０ｍＭのアミノ酸単独およびいくつかの組み合わせの存在下での、２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の流体力学的直径の変化パーセント。 ５℃、４０℃または５０℃での％高分子量（ＨＭＷ）種に対する抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６および抗ＰＤ－１抗体ＭＫ－３４７５共製剤１０日（１０Ｄ）凝集スクリーニング試験。 ５℃、４０℃または５０℃における％メインピーク（モノマー）に対する抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６および抗ＰＤ－１抗体ＭＫ－３４７５共製剤１０日（１０Ｄ）凝集スクリーニング試験。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件での減少したＣＥ－ＳＤＳ安定性データによる重鎖＋軽鎖。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃、４０℃保存条件での減少したＣＥ－ＳＤＳ安定性データによる総不純物。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃および４０℃保存条件におけるＨＩＣ安定性データによるＭＫ－３４７５の総プレピーク。 Ａｂ６Ａ医薬品の５℃、２５℃および４０℃保存条件における濁度Ａ３５０安定性データ。 Ａｂ６Ａ医薬品のフルスケール（上）および拡大スケール（下）から得られた代表的な電荷プロフィールクロマトグラム。 ＤＯＰＡ産物の酸化および蛍光標識後に得られた蛍光シグナル。単体および共製剤溶液を、ＡＡＰＨ酸化およびＡＢＳタグ化反応に供する前に、７２時間にわたって室温でインキュベートする。 アルギニンおよびＰＳ８０の存在下および非存在下でのＭＫ-３４７５およびＡｂ６の共製剤溶液についてのＦＲＥＴ測定の例。実験データ（丸）。非線形当てはめ（直線）。 同じ製剤マトリックス中、２５℃における熱ストレスでの、Ａｂ６ＡおよびＭＫ-３４７５製剤試料中のＨＩＣ-ＳＥＣアッセイによるＭ１０５酸化レベルの比較。 同じ製剤マトリックス中、４０℃における熱ストレスでの、Ａｂ６ＡおよびＭＫ-３４７５製剤試料中のＨＩＣ-ＳＥＣアッセイによるＭ１０５酸化レベルの比較。
添付の特許請求の範囲を含む本明細書で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」のような単数形の単語は、文脈が別段の明確な指示をしない限り、それらの対応する複数の参照を含む。別途示されない限り、本明細書で言及されるタンパク質および被験体は、別の種というよりヒトタンパク質およびヒト被験体である。
定義
本明細書中で使用される場合、別途示されない限り、「抗原結合フラグメント」は、抗体の抗原結合フラグメント、すなわち、全長抗体によって結合される抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体フラグメント（例えば、１つ以上のＣＤＲ領域を保持するフラグメント）をいう。抗体結合フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメントを含み、これらに限定されない。
「Ｆａｂフラグメント」は、１つの軽鎖と、１つの重鎖のＣＨ１および可変領域からなる。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆａｂフラグメント」は、抗体のパパイン切断の産物であり得る。
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ３およびＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖フラグメントを含む。２つの重鎖フラグメントは、２つ以上のジスルフィド結合によって、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用によって一緒に保持される。
「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの軽鎖と、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインならびにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間の領域を含む１つの重鎖の一部またはフラグメントを含み、その結果、鎖間ジスルフィド結合が２つのＦａｂ’フラグメントの２つの重鎖の間に形成されて、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成し得る。
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間の定常領域の一部を含む２つの軽鎖と２つの重鎖を含み、２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、２つの重鎖の間のジスルフィド結合によって一緒に保持される２つのＦａｂ’フラグメントからなる。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、抗体のペプシン切断の産物でありうる。
「Ｆｖ領域」は、重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠く。
本明細書中で使用される場合、用語「超可変領域」は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４～３４（ＣＤＲＬ１）、５０～５６（ＣＤＲＬ２）および８９～９７（ＣＤＲＬ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基３１～３５（ＣＤＲＨ２）および９５～１０２（ＣＤＲＨ３）（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ）、および／または、「超可変ループ」（即ち、軽鎖可変ドメインの残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、および、重鎖可変ドメイン中の２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）、９６－１０１（Ｈ３）（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７)、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６： ９０１-９１７）からのアミノ酸残基を含む。本明細書中で使用される場合、「フレームワーク」または「ＦＲ」残基という用語は、本明細書中でＣＤＲ残基として定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。上記の残基番号付けは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに関連し、必ずしも添付の配列表の配列番号付けに詳細に対応しない。
「増殖活性」は、例えば、正常な細胞分裂、ならびに癌、腫瘍、異形成、細胞形質転換、転移、および血管新生を、促進する、それに必要で、またはそれに特異的に関連する、活性を包含する。
用語「癌」、「腫瘍」、「癌性」および「悪性」（ｍａｌｉｇｎａｎｔ）は、制御されない細胞増殖によって典型的に特徴付けられる哺乳動物における生理学的状態を指し、または記述する。癌の例としては、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、メラノーマ、肉腫、および白血病を含む癌腫を含み、これらに限定されない。このような癌のより特定の例は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化管癌、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌および肝癌のような肝臓癌、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫（多発性骨髄腫のよう）、唾液腺癌、腎細胞癌およびウィルムス腫瘍のような腎臓癌、基底細胞癌、メラノーマ、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、精巣癌、食道癌、および種々のタイプの頭頸部癌を含む。
癌細胞が増殖・増殖すると、癌組織のかたまり（腫瘍）を形成し、正常な隣接組織に浸潤して破壊する。悪性腫瘍は、がんである。悪性腫瘍は通常切除できるが、再発することもある。悪性腫瘍の細胞は、周辺の組織や臓器に侵入して損傷を与える。また、がん細胞は、悪性腫瘍を離れて血流やリンパ系に入り、原発腫瘍（すなわち、元のがん）からがん細胞が広がり、それは、他の臓器に新たな腫瘍を形成する方法である。身体における癌の広がりは、転移と呼ばれる（Ｗｈａｔ Ｙｏｕ Ｎｅｅｄ ｔｏ Ｋｎｏｗ Ａｂｏｕｔ Ｃａｎｃｅｒａｎ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．００－１５６６；２０００年９月２６日公開、２００２年９月１６日更新（２００２年））。
本明細書中で使用される場合、用語「固形腫瘍」は、通常、嚢胞または液体領域を含まない組織の異常な増殖または塊をいう。固形腫瘍は、良性（がんではない）の場合もあれば、悪性（がん性）の場合もある。異なるタイプの固形腫瘍は、それらを形成する細胞のタイプに命名される。固形腫瘍の例は、肉腫、がん腫、リンパ腫である。白血病（血液がん）は、一般に固形腫瘍を形成しない（米国国立がん研究所、がん用語集）。
本明細書中で使用される場合、用語「癌腫」（ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ）は上皮細胞の癌をいい、これは、身体の表面を覆い、ホルモンを産生し、そして腺を構成する細胞である。癌腫の例は、皮膚、肺、結腸、胃、乳房、前立腺および甲状腺の癌である。
医薬組成物の定義
本明細書中で使用される場合、「水性」医薬組成物は、医薬用途に適した組成物であり、ここで、水性担体は、注射用滅菌水である。医薬用途に適した組成物は、無菌、均質および／または等張であってもよい。特定の実施形態において、本発明の水性医薬組成物は、ヒト被験体への非経口投与に適している。特定の実施形態において、本発明の水性医薬組成物は、静脈内および／または皮下投与に適している。
物質または組成物の量（例えば、ｍＭまたはＭ）、製剤成分のパーセンテージ（ｖ／ｖまたはｗ／ｖ）、溶液／製剤のｐＨ、または方法のステップを特徴付けるパラメータの値などを変更する場合、用語「約」は、例えば、物質または組成物の調製、特徴付けおよび／または使用に関与する典型的な測定、取扱いおよびサンプリング手順を通して；これらの手順における機器誤差を通して；組成物を作製または使用するために、または手順を実施するために使用される成分の製造、供給源、または純度の差異を通して；等によって生じ得る数量の変動を指す。特定の実施形態において、「約」は、±０．１％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％または１０％の変動を意味し得る。
本明細書中で使用される場合、「ｘ％（ｗ／ｖ）」は、ｘ ｇ／１００ｍｌに等しい（例えば、５％ｗ／ｖは、５０ｍｇ／ｍｌに等しい）。
用語「緩衝剤」は、凍結乾燥前および／または再構成後に、溶液のｐＨを液体製剤中で許容可能な範囲に維持する薬剤を包含し、コハク酸塩（ナトリウムまたはカリウム）、ヒスチジン、酢酸塩、リン酸塩（ナトリウムまたはカリウム）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、クエン酸塩（ナトリウム）などを含むことができるが、これらに限定されない。
ここで用いられている「共－製剤化」または「共－製剤」または「共製剤」または「共製剤化」とは、個別に製剤化されて貯留された後、投与前に混合されるかまたは個別に投与されるというより、一緒に製剤化され、１つのバイアルまたは容器（例えば、注射装置）中に組み合わせ製品として貯留される、少なくとも２つの異なる抗体または抗原結合フラグメントを指す。一実施形態では、共製剤は、２つの異なる抗体またはその抗原結合フラグメントを含有する。
「グリコール」は、２つのヒドロキシル基を有するアルキルを指す。
「糖アルコール」とは、糖から導出されたポリオールを指し、一般式ＨＯＣＨ２（ＣＨＯＨ）ｎＣＨ２ＯＨ、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０を有する。例としては、マンニトール、ソルビトール、エリトリトール、キシリトールおよびグリセロールを含み、これらに限定されない。
本明細書で使用される「ポリオール」は、グリコールおよび糖アルコールを含む。
用語「凍結乾燥」、「凍結乾燥された」および「凍結乾燥の」は、乾燥されるべき材料が最初に凍結され、次いで、氷または凍結溶媒が真空環境中での昇華によって除去されるプロセスをいう。保存時の凍結乾燥化製品の安定性を高めるために、予め凍結乾燥された製剤に賦形剤を含めることができる。
「非還元糖」は、遊離アルデヒド基または遊離ケトン基を含有しないかまたは含有するように変換することができないので、還元剤として作用することができない糖である。非還元糖の例としては、スクロースおよびトレハロースのような二糖を含み、これらに限定されない。
用語「医薬製剤」は、活性成分が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して毒性である追加の成分を含まない製剤を指す。
「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、使用される活性成分の有効量を提供するために対象哺乳動物に合理的に投与され得るものである。
「再構成時間」は、凍結乾燥製剤を溶液で再水和して粒子を含まない清澄化溶液にするのに必要な時間である。
「安定な」製剤は、その中のタンパク質が貯蔵時にその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を本質的に保持する製剤である。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７－３０１、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、Ｐｕｂｓ（１９９１）、および、Ｊｏｎｅｓ、Ａ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された温度で選択された時間、測定することができる。例えば、一実施形態では、安定な製剤は、冷蔵温度（２～８℃）で少なくとも１２ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。別の実施形態では、安定な製剤は、冷蔵温度（２～８℃）で少なくとも１８ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。別の実施形態では、安定な製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも３ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。別の実施形態において、安定な製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも６ヶ月間有意な変化が観察されない製剤である。別の実施形態では、安定な製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも１２ヶ月間、有意な変化が観察されない製剤である。別の実施形態では、安定な製剤は、室温（２３～２７℃）で少なくとも１８ヶ月間有意な変化が観察されない製剤である。抗体製剤の安定性の基準は以下の通りである。典型的には、１０％以下、好ましくは５％以下の抗体モノマーが、ＳＥＣ-ＨＰＬＣによる測定によって分解されるものである。典型的には、製剤は、無色であるかまたは視覚分析によって透明からわずかに乳白色である。典型的には製剤の濃度、ｐＨおよび浸透圧は、±１０％以下の変化を有する。効力は、典型的にはコントロールまたは参照の６０～１４０％、好ましくは８０～１２０％内である。典型的には、１０％以下、好ましくは５％以下の抗体のクリッピング、すなわち、例えば、ＨＰ-ＳＥＣによって決定される％低分子量種が観察される。典型的には、または、１０％以下、好ましくは５％以下の抗体の凝集が形成され、すなわち、例えば、ＨＰ-ＳＥＣによって決定されるような％高分子量種が形成される。
「界面活性剤」は、本質的に両親媒性である界面活性剤である。
抗体は、色および／または透明度の目視検査時に、またはＵＶ光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および動的光散乱によって測定した場合に、凝集、沈殿および／または変性の有意な増加を示さない場合、医薬製剤中で「その物理的安定性を保持する」。タンパク質立体配座の変化は、タンパク質の三次構造を決定する蛍光分光法、およびタンパク質の二次構造を決定するＦＴＩＲ分光法によって評価することができる。
抗体は、それが有意な化学的変化を示さない場合、医薬製剤において「その化学的安定性を保持する」。化学的安定性は、タンパク質の化学的に変化した形態を検出および定量することによって評価することができる。タンパク質の化学構造をしばしば変化させる分解プロセスには、加水分解またはクリッピング（サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ-ＰＡＧＥのような方法によって評価される）、酸化（質量分析法またはＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組み合わせたペプチドマッピングのような方法によって評価される）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸測定のような方法によって評価される）、および異性化（イソアスパラギン酸含量、ペプチドマッピングなどを測定することによって評価される）が含まれる。
抗体は、所与の時間枠における抗体の生物学的活性が製剤が調製された時点で示される所定の範囲の生物学的活性を有する場合、医薬製剤において「その生物学的活性を保持する」。抗体の生物学的活性は例えば、抗原結合アッセイによって決定され得る。１つの実施形態において、１２ヶ月以内の安定な抗体製剤の生物学的活性は、参照の６０～１４０％以内である。
「等張」という語は、目的の製剤がヒトの血圧と本質的に同じ浸透圧を有することを意図する。等張製剤は、一般に約２７０～３２８ｍＯｓｍの浸透圧を有する。わずかに低張の圧力は２５０～２６９であり、わずかに高張の圧力は３２８～３５０ｍＯｓｍである。浸透圧は、例えば、蒸気圧または氷冷タイプの浸透圧計を用いて測定することができる。
「再構成された」製剤は、タンパク質が再構成された製剤中に分散されるように、凍結乾燥されたタンパク質製剤を希釈剤中に溶解することによって調製されたものである。再構成された製剤は、投与（例えば、非経口投与）に適しており、任意に皮下投与に適していてもよい。
「総賦形剤濃度」は、参照されるイオン化可能な賦形剤（例えば、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２）のモル濃度の合計を指し、緩衝種として参照される賦形剤の濃度を考慮しない。
「ｐＨ５．０～６．０の間のｐＨ」のようなｐＨ値の範囲が記載されている場合、その範囲は記載された値を含むことを意図しており、ｐＨは典型的には標準的なガラス球ｐＨ計を使用して２５℃で測定される。本明細書で使用されるように、「ｐＨ Ｘのヒスチジン緩衝液」を含む溶液は、ｐＨ Ｘの溶液を指し、ヒスチジン緩衝液を含み、すなわちｐＨは、溶液のｐＨを指すことを意図している。
分析方法
生成物の安定性を評価するのに適した分析方法には、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、動的光散乱試験（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、等吸光定量、効力、３５０ｎｍでのＵＶ、ＵＶ分光法、およびＦＴＩＲが含まれる。ＳＥＣ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．８３：１６４５－１６５０、（１９９４）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１：４８５（１９９４）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．１５：１９２８（１９９７）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．１４：１１３３-１１４０（１９８６））は、生成物中のモノマーパーセントを測定し、可溶性凝集体の量の情報を与える。ＤＳＣ（Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１５：２００（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．９：１０９（１９８２））は、タンパク質変性温度およびガラス転移温度の情報を与える。ＤＬＳ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｌａｂ、Ｎｏｖｅｍｂｅｒ（１９９１））は、平均拡散係数を測定し、可溶性および不溶性凝集体の量の情報を与える。３４０ｎｍでのＵＶは、３４０ｎｍでの散乱光強度を測定し、可溶性および不溶性凝集体の量に関する情報を与える。ＵＶ分光法は２７８ｎｍでの吸光度を測定し、タンパク質濃度の情報を与える。ＦＴＩＲ（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．４５：２３１（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：１２５０（１９９５）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．８５：１２９０（１９９６）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．８７：１０６９（１９９８））は、アミド１領域におけるＩＲスペクトルを測定し、そしてタンパク質二次構造の情報を与える。
サンプル中のｉｓｏ-ａｓｐ含量は、Ｉｓｏｑｕａｎｔ Ｉｓｏａｓｐａｒｔａｔｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定する。キットは、酵素タンパク質イソアスパラギン酸メチルトランスフェラーゼ（ＰＩＭＴ）を使用して、標的タンパク質中のイソアスパラギン酸残基の存在を特異的に検出する。ＰＩＭＴは、Ｓ－アデノシル－Ｌ－メチオニンからα－カルボキシル位のイソアスパラギン酸へのメチル基の転移を触媒し、その過程でＳ－アデノシル-Ｌ-ホモシステイン（ＳＡＨ）を生成する。これは比較的小さな分子であり、通常、キットに提供されるＳＡＨ ＨＰＬＣ標準を使用する逆相ＨＰＬＣによって単離および定量することができる。
抗体の効力またはバイオアイデンティティは、その抗原に結合するその能力によって測定することができる。抗体のその抗原に対する特異的結合は、当業者に公知の任意の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ(酵素結合免疫吸着アッセイ）のようなイムノアッセイによって定量することができる。
抗ＬＡＧ３抗体
ＣＤＲアミノ酸残基は、異なる抗体間で非常に可変性であり、ヒト生殖系列配列（完全ヒト抗体の場合）、または非ヒト（例えばげっ歯類）生殖系列配列に由来し得る。フレームワーク領域はまた、抗体ごとに有意に異なり得る。定常領域は、選択された抗体がラムダ（λ）またはカッパ（κ）軽鎖を有するかどうか、および抗体のクラス（またはアイソタイプ）（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭ）およびサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に依存して異なる。
以下に例示されるＬＡＧ３抗体は、非ヒト（この場合マウス）生殖系列配列、またはヒト生殖系列配列に由来するＣＤＲ配列を有する。生殖系列の配列は、体細胞高頻度突然変異由来の変化を除いて抗体のＣＤＲ配列が由来する配列レパートリーを含み、その結果、マウス生殖系列から開始するＣＤＲは、ヒト生殖系列から開始するＣＤＲとは系統的に異なるのであろうと予想される。ヒト生殖系列配列の使用は、ヒト生殖系列由来のＣＤＲ配列が他の種に由来するものよりもヒトにおいて免疫原性が低いことに基づいて正当化されることが多く、これは、ＣＤＲがそれらの起源の種に依存して系統的に異なるという根底にある信念を反映する。ＣＤＲ多様性の増加は、所望の特性（例えば、高い親和性）を有する抗体を見出す可能性を増加させるが、得られる抗体の安定な溶液製剤を開発する際の困難性をさらに増大させる。
同じ抗原に結合する抗体でさえも、配列が劇的に異なり得、そして完全に分離した抗原に対する抗体よりも配列がより密接に関連している必要はない。低い配列類似性に基づいて、抗体の化学的性質、従ってそれらの分解に対する感受性は、それらの共有された標的にもかかわらず、類似していると推定することはできない。
上記のように、抗体は、溶液中で種々の形態の分解および不安定性を受ける、大きく高度に複雑なポリペプチド複合体である。抗体の配列、従って構造の多様性は、広範囲の化学的特性を生じる。抗原結合特異性における明らかな配列特異的差異は別として、抗体は、種々の分解経路、凝集、および沈殿に対する様々な感受性を示す。アミノ酸側鎖は、反応基、例えばカルボキシ（Ｄ，Ｅ）、アミノ（Ｋ）、アミド（Ｎ，Ｑ）、ヒドロキシル（Ｓ，Ｔ，Ｙ）、スルフヒドリル（Ｃ）、チオエーテル（Ｍ）基、ならびに、ヒスチジン、フェニルアラニンおよびプロリン残基上の潜在的に化学的に反応性の部位の存在または非存在において異なる。抗原結合相互作用に直接関与するアミノ酸側鎖は、側鎖修飾による不活性化のための明らかな候補であるが、他の位置での分解もまた、ＣＤＲの立体配向（例えば、フレームワーク残基の変化）、エフェクタ機能（例えば、Ｆｃ領域の変化（例えば、Ｌｉｕら、（２００８)、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４７：５０８８を参照のこと）、または自己会合／凝集のような因子に影響し得る。
抗体は、任意の数の潜在的な分解経路に供される。抗体、特にＣＤＲにおけるメチオニオン残基の酸化は、それが抗原結合を破壊する場合、問題となり得る。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１；Ｌａｍら、（１９９７）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６：１２５０。他の潜在的な分解経路としては、アスパラギン脱アミド化（Ｈａｒｒｉｓら（２００１）、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ７５２：２３３；Ｖｌａｓａｋら（２００９）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９２：１４５）、トリプトファン酸化（Ｗｅｉら、（２００７）、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７９：２７９７）、システイニル化（Ｂａｎｋｓら、（２００８）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７：７７５），糖化（Ｂｒａｄｙら、（２００７）、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７９：９４０３）、ピログルタメート形成（Ｙｕら、（２００６）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．４２：４５５）、ジスルフィドシャッフリング（Ｌｉｕら（２００８）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：２９２６６、および、加水分解（Ｄａｖａｇｎｉｎｏら（１９９５）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｍｅｔｈｏｄｓ、１８５：１７７）を含む。Ｉｏｎｅｓｃｕ＆Ｖｌａｓａｋ（２０１０）、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８２：３１９８で議論されている。Ｌｉｕら（２００８）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７：２４２６も参照のこと。いくつかの潜在的な分解経路は、特定のアミノ酸残基の存在のみならず、周囲の配列にも依存する。脱アミド化およびイソアスパラギン酸形成は、（Ｃ末端から）ＮまたはＤ残基に続くペプチド結合の自発的な分子内転位から生じ得、Ｎ-ＧおよびＤ-Ｇ配列は特に感受性である。Ｒｅｉｓｓｎｅｒ＆Ａｓｗａｄ（２００３）、ＣＭＬＳ Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．６０：１２８１。
抗体はまた、保存の間、配列依存性の非酵素的断片化に供される。Ｖｌａｓａｋ＆Ｉｏｎｅｓｃｕ（２０１１）、ｍＡｂｓ３：２５３。Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、ＣまたはＮのような反応性側鎖の存在は、ポリペプチド骨格を切断する分子内切断反応をもたらすことができる。このような配列特異的加水分解反応は、典型的にはｐＨに依存する。同。抗体はまた、例えば、ＣＤＲが多数の疎水性残基を含む場合、配列依存性凝集を受け得る。Ｐｅｒｃｈｉａｃｃａら、（２０１２）、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ２５：５９１。凝集は皮下投与のために高濃度で処方される必要がある抗体にとって特に問題であり、いくつかは、溶解度を増加させるために荷電残基を添加することによって抗体配列を改変することさえも導いた。同。
抗体による潜在的な配列特異的安定性の問題の多様性を反映して、潜在的な抗体製剤も多様である。抗体の配列変動性は、得られる抗体の化学的不均一性をもたらし、広範囲の潜在的分解経路をもたらす。製剤は、例えば、抗体濃度、緩衝液、ｐＨ、界面活性剤の存在または非存在、等張化剤（イオン性または非イオン性）の存在または非存在、分子密集剤の存在または非存在において変化し得る。市販の治療用抗体は、リン酸緩衝液（例えば、アダリムマブ）、リン酸／グリシン緩衝液（例えば、バシリクスマブ）、トリス緩衝液（例えば、イピリムマブ）、ヒスチジン（例えば、ウステキヌマブ）、クエン酸ナトリウム（例えば、リツキシマブ）；およびｐＨ４．７（例えば、セルトリズマブ）およびｐＨ５．２（例えば、アダリムマブ）からｐＨ７．０～７．４（例えばセツキシマブ）の広範囲の溶液製剤で市販されている。更に、場合により、エデト酸２ナトリウム（例えばアレムツズマブ）、マンニトール（例えばイピリムマブ）、ソルビトール（例えばゴリムマブ）、スクロース（例えばウステキヌマブ）、塩化ナトリウム（例えばリツキシマブ）、塩化カリウム（例えばアレムツズマブ）、トレハロース（例えばラニビズマブ）を含む製剤も利用可能であり、ポリソルベート－８０の有無に関わらず、０．００１％（例えばアブシクマブ）から０．１％（例えばアダリムマブ）の範囲である。
ヒト化抗ＬＡＧ３抗体および抗ＰＤ－１抗体の生物活性
本発明の製剤は、再構成された場合または液体製剤中で生物学的に活性な、抗ＬＡＧ３抗体およびそのフラグメント、ならびに抗ＰＤ-１抗体およびそのフラグメントを含む。
例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、以下に提供される（ＷＯ２０１６／０２８６７２に開示され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）：
・ Ａｂ１：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）;および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNNGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（配列番号：３６）； または
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNNGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：３８（ＣＤＲに下線を引く））；または、
以下のＣＤＲを含む：
ＣＤＲ－Ｌ１： ＫＡＳＱＳＬＤＹＥＧＤＳＤＭＮ（配列番号：３９）；
ＣＤＲ－Ｌ２： ＧＡＳＮＬＥＳ（配列番号：４０）；
ＣＤＲ－Ｌ３： ＱＱＳＴＥＤＰＲＴ（配列番号：４１）；
ＣＤＲ－Ｈ１： ＤＹＮＶＤ（配列番号：４２）；
ＣＤＲ－Ｈ２： ＤＩＮＰＮＮＧＧＴＩＹＡＱＫＦＱＥ（配列番号：４３）；および
ＣＤＲ－Ｈ３： ＮＹＲＷＦＧＡＭＤＨ（配列番号：４４）
・ Ａｂ２：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNSGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（配列番号：４５）； または
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNSGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：４６（ＣＤＲに下線を引く））；または、
以下のＣＤＲを含む：
ＣＤＲ－Ｌ１： ＫＡＳＱＳＬＤＹＥＧＤＳＤＭＮ（配列番号：３９）；
ＣＤＲ－Ｌ２： ＧＡＳＮＬＥＳ（配列番号：４０）；
ＣＤＲ－Ｌ３： ＱＱＳＴＥＤＰＲＴ（配列番号：４１）；
ＣＤＲ－Ｈ１： ＤＹＮＶＤ（配列番号：４２）；
ＣＤＲ－Ｈ２： ＤＩＮＰＮＳＧＧＴＩＹＡＱＫＦＱＥ（配列番号：４７）；および
ＣＤＲ－Ｈ３： ＮＹＲＷＦＧＡＭＤＨ（配列番号：４４）
・Ａｂ３：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNDGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（配列番号：４８）;または、
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNDGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：４９（ＣＤＲに下線を引く））、または
以下のＣＤＲを含む：
ＣＤＲ－Ｌ１: KASQSLDYEGDSDMN(配列番号：３９）；
ＣＤＲ－Ｌ２: GASNLES(配列番号：４０）；
ＣＤＲ－Ｌ３: QQSTEDPRT(配列番号：４１）；
ＣＤＲ－Ｈ１: DYNVD(配列番号：４２）；
ＣＤＲ－Ｈ２: DINPNDGGTIYAQKFQE(配列番号：５０）；および
ＣＤＲ－Ｈ３: NYRWFGAMDH(配列番号：４４）
・Ａｂ４：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）：および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNQGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
（配列番号：５１）、または、
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNQGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：５２（ＣＤＲに下線を引く））; または
以下のＣＤＲを含む：
CDR-L1:KASQSLDYEGDSDMN（配列番号：３９）；
CDR-L2:GASNLES（配列番号：４０）；
CDR-L3:QQSTEDPRT（配列番号：４１）；
CDR-H1:DYNVD（配列番号：４２）；
CDR-H2:DINPNQGGTIYAQKFQE（配列番号：５３）；および
CDR-H3:NYRWFGAMDH（配列番号：４４）
・Ａｂ５：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）;および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNNGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号：５４）; または
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNNGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：５５（ＣＤＲに下線を引く））; または、
以下のＣＤＲを含む：
CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN（配列番号：３９）;
CDR-L2: GASNLES （配列番号：４０）;
CDR-L3: QQSTEDPRT （配列番号：４１）;
CDR-H1: DYNVD （配列番号：４２）;
CDR-H2: DINPNNGGTIYAQKFQE （配列番号：５６）;および
CDR-H3: NYRWFGAMDH （配列番号：４４）
・ Ａｂ６：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）;および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNDGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号：５７）；または
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNDGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：５８（ＣＤＲに下線を引く））；または
以下のＣＤＲを含む：
CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN（配列番号：３９）;
CDR-L2: GASNLES （配列番号：４０）;
CDR-L3: QQSTEDPRT （配列番号：４１）;
CDR-H1: DYNVD （配列番号：４２）;
CDR-H2: DINPNDGGTIYAQKFQE（配列番号：５９）; および
CDR-H3: NYRWFGAMDH （配列番号：４４）
・ Ａｂ７：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）;および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNSGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号：６０）;または
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNSGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：６１（ＣＤＲに下線を引く））；または
以下のＣＤＲを含む：
CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN（配列番号：３９）;
CDR-L2: GASNLES （配列番号：４０）;
CDR-L3: QQSTEDPRT （配列番号：４１）;
CDR-H1: DYNVD （配列番号：４２）;
CDR-H2: DINPNSGGTIYAQKFQE（配列番号：６２）; および
CDR-H3: NYRWFGAMDH （配列番号：４４）
・ Ａｂ８：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）;および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNQGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号：６３）;または
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNQGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：６４（ＣＤＲに下線を引く））；または
以下のＣＤＲを含む：
CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN（配列番号：３９）;
CDR-L2: GASNLES （配列番号：４０）;
CDR-L3: QQSTEDPRT （配列番号：４１）;
CDR-H1: DYNVD （配列番号：４２）;
CDR-H2: DINPNQGGTIYAQKFQE（配列番号：６５）; および
CDR-H3: NYRWFGAMDH （配列番号：４４）
・ Ａｂ９：以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号：３５）;および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNGGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号：６６）;または
以下のアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン：
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKASQSLDYEGDSDMNWYLQKPGQPPQLLIYGASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQSTEDPRTFGGGTKVEIK
（配列番号：３７（ＣＤＲに下線を引く））；および
以下のアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン：
QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYNVDWVRQARGQRLEWIGDINPNGGGTIYAQKFQERVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNYRWFGAMDHWGQGTTVTVSS
（配列番号：６７（ＣＤＲに下線を引く））；または
以下のＣＤＲを含む：
CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN（配列番号：３９）;
CDR-L2: GASNLES（配列番号：４０）;
CDR-L3: QQSTEDPRT（配列番号：４１）;
CDR-H1: DYNVD（配列番号：４２）;
CDR-H2: DINPNGGGTIYAQKFQE（配列番号：６８）; および
CDR-H3: NYRWFGAMDH（配列番号：４４）
本明細書で使用される「Ａｂ６変異体」は、軽鎖ＣＤＲの外側に位置する位置に３個、２個または１個の保存アミノ酸置換を有し、重鎖ＣＤＲの外側に位置する位置に６個、５個、４個、３個、３個、２個または１個の保存アミノ酸置換を有し、例えば、変異位置がＦＲ領域または定常領域に位置し、任意に重鎖のＣ末端リジン残基の欠失を有することを除いて、Ａｂ６（後述するように、およびその全体が参照により組み込まれたＷＯ２０１６０２８６７２に記載されるように）におけるものと実質的に同一である重鎖および軽鎖配列を含むモノクローナルタンパク質を意図する。言い換えれば、Ａｂ６およびＡｂ６変異体は、同一のＣＤＲ配列を含むが、それらの全長軽鎖および重鎖配列において、それぞれ３つまたは６つ以下の他の位置に保存的アミノ酸置換を有するために、互いに異なる。Ａｂ６変異体は、以下の特性：ヒトＬＡＧ３への結合親和性およびヒトＭＨＣクラスＩＩへのヒトＬＡＧ３の結合をブロックする能力に関して、Ａｂ６と実質的に同じである。
本発明は、配列番号３５の配列を有する２つの同一の軽鎖と、配列番号３６、４５、４８、５１、５４、５７、６０、６３または６６の配列を有する２つの同一の重鎖とを含む抗ＬＡＧ３抗体の製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３５の配列を有する２つの同一の軽鎖、および配列番号５７の配列を有する２つの同一の重鎖を含む、抗ＬＡＧ３抗体の製剤を提供する。
本発明は、配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号３８、４６、４９、５２、５５、５８、６１、６４または６７の重鎖可変領域配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３９の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号４０のＣＤＲＬ２配列、および配列番号４１のＣＤＲＬ３配列、ならびに配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号４３、４７、５０、５３、５６、５９、６２、６５または６８のＣＤＲＨ２配列、および配列番号４４のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号３９の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号４０のＣＤＲＬ２配列、および配列番号４１のＣＤＲＬ３配列、ならびに配列番号４２の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号５９のＣＤＲＨ２配列、および配列番号４４のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントの製剤を提供する。
製剤に含まれ得る他の抗ＬＡＧ３抗体は、ＷＯ２０１４００８２１８に開示されるＢＭＳ-９８６０１６；ＩＭＰ７３１、およびＩＭＰ７０１を含む。したがって、本発明は、配列番号６９の軽鎖可変領域配列および配列番号７０の重鎖可変領域配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントの製剤を提供する。本発明はまた、配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号７２のＣＤＲＬ２配列、および配列番号７３のＣＤＲＬ３配列、ならびに配列番号７４の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号７５のＣＤＲＨ２配列、および配列番号７６のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントの製剤を提供する。
製剤は、以下に例示される抗ＰＤ-１抗体または抗原結合フラグメントをさらに含む。
Figure 0007503056000001

Figure 0007503056000002

Figure 0007503056000003
本明細書中で使用される「ペンブロリズマブ変異体」は、軽鎖ＣＤＲの外側に位置する位置に３個、２個または１個の保存的アミノ酸置換を有し、重鎖ＣＤＲの外側に位置する位置に６個、５個、４個、３個、２個または１個の保存的アミノ酸置換を有し、例えば、変異体位置がＦＲ領域または定常領域に位置し、任意に重鎖のＣ末端リジン残基の欠失を有する以外は、ペンブロリズマブ中と実質的に同一である重鎖および軽鎖配列を含むモノクローナル抗体を意図する。言い換えれば、ペンブロリズマブおよびペンブロリズマブ変異体は、同一のＣＤＲ配列を含むが、それらの全長軽鎖および重鎖配列において、それぞれ３つまたは６つの他の位置に保存的アミノ酸置換を有するため、互いに異なる。ペンブロリズマブ変異体は、ＰＤ－１への結合親和性およびＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２のそれぞれのＰＤ－１への結合をブロックする能力に関して、ペンブロリズマブと実質的に同じである。
本発明の別の態様では、製剤は、配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメント；ならびに、配列番号４の軽鎖可変領域配列および配列番号９の重鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ-１抗体または抗原結合フラグメントを含む。別の実施形態では、製剤は、配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む抗ＬＡＧ３抗体；ならびに、配列番号５の軽鎖配列および配列番号１０の重鎖配列を含む抗ＰＤ-１抗体を含む。本発明はまた、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲＬ１配列、配列番号４０のＣＤＲＬ２配列および配列番号４１のＣＤＲＬ３配列、ならびに配列番号４２の重鎖ＣＤＲＨ１配列、配列番号５９のＣＤＲＨ２配列、および配列番号４４のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；ならびに、配列番号１の軽鎖ＣＤＲＬ１配列、配列番号２のＣＤＲＬ２配列、および配列番号３のＣＤＲＬ３配列、ならびに配列番号６の重鎖ＣＤＲＨ１配列、配列番号７のＣＤＲＨ２配列、および配列番号８のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＰＤ-１抗体の製剤を提供する。本発明のいくつかの製剤において、抗ＬＡＧ３抗体は、Ａｂ６またはＡｂ６変異体である。
本発明のさらなる局面において、製剤は、配列番号６９の軽鎖可変領域配列および配列番号７０の重鎖可変領域配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメント、ならびに、配列番号１４の軽鎖可変領域配列および配列番号１９の重鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ-１抗体または抗原結合フラグメントを含む。本発明はまた、配列番号７１の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号７２のＣＤＲＬ２配列、および配列番号７３のＣＤＲＬ３配列、ならびに配列番号７４の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号７５のＣＤＲＨ２配列、および配列番号７６のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメント、ならびに、配列番号１１の軽鎖可変領域ＣＤＲＬ１配列、配列番号１２のＣＤＲＬ２配列、および配列番号１３のＣＤＲＬ３配列、ならびに配列番号１６の重鎖可変領域ＣＤＲＨ１配列、配列番号１７のＣＤＲＨ２配列、および配列番号１８のＣＤＲＨ３配列を含む抗ＰＤ-１抗体または抗原結合フラグメントの製剤を提供する。
製剤の抗体または抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号４または配列番号４の変異体を含み、重鎖可変領域は、配列番号９または配列番号９の変異体を含む。さらなる実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１４または配列番号１４の変異体を含み、重鎖可変領域は、配列番号１９または配列番号１９の変異体を含む。さらなる実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２７または配列番号２７の変異体を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２８または配列番号２８の変異体、配列番号２９または配列番号２９の変異体、または配列番号３０または配列番号３０の変異体を含む。このような実施形態では、変異軽鎖または重鎖可変領域配列は、１、２、３、４または５個のアミノ酸置換を有することを除いて、参照配列と同一である。いくつかの実施形態では、置換はフレームワーク領域（すなわち、ＣＤＲの外側）にある。いくつかの実施形態において、アミノ酸置換のうちの１つ、２つ、３つ、４つまたは５つは、保存的置換である。
別の実施形態では、本発明の製剤は、上記のＶＬドメインまたはＶＨドメインの１つに対して少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％または５０％の配列相同性を有するＶＬドメインおよび／またはＶＨドメインを有する抗体または抗原結合フラグメントを含み、ＰＤ-１またはＬＡＧ３に対する特異的結合を示す。別の実施形態では、本発明の製剤の抗体または抗原結合フラグメントは、最大１、２、３、４または５個またはそれ以上のアミノ酸置換を有するＶＬおよびＶＨドメインを含み、ＰＤ-１またはＬＡＧ３に特異的結合を示す。
本発明の実施形態では、抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる軽鎖と、配列番号１０に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ-１抗体である。代替の実施形態では、抗体は、配列番号１５に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる軽鎖と、配列番号２０に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ-１抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号３２に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる軽鎖と、配列番号３１に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ-１抗体である。さらなる実施形態では、抗体は、配列番号３３に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる軽鎖と、配列番号３１に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ-１抗体である。さらに追加の実施形態では、抗体は、配列番号３４に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる軽鎖と、配列番号３１に示されるアミノ酸残基の配列を含むかまたはそれからなる重鎖とを含む抗ＰＤ-１抗体である。本発明のいくつかの製剤において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブまたはペムブロリズマブ変異体である。
通常、本発明の抗ＰＤ-１または抗ＬＡＧ３抗体および抗原結合フラグメントのアミノ酸配列変異体は、基準抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨ、ＶＬ、骨格またはヒト化配列）と少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。本明細書では、配列に関する同一性または相同性は、必要であれば配列を整列させ、そしてギャップを導入した後、最大パーセント配列同一性を達成するために、そして、配列同一性の一部として保存的置換を考慮しないで、抗ＰＤ-１または抗ＬＡＧ３残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。抗体配列へのＮ末端、Ｃ末端、または内部伸長、欠失または挿入のいずれも、配列同一性または相同性に影響を及ぼすと解釈されないものとする。
一実施形態では、製剤中の抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体の比は、１：１、１：２または１：３である。別の実施形態では、製剤中の抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体のモル比は、１：１、２：１、３：１、３．５：１、４：１、５：１または６：１である。一実施形態では、製剤中の抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体のモル比は、４：１である。別の実施形態では、製剤中の抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体のモル比は、５：１である。
製剤
本発明のいくつかの局面において、本発明の製剤は、抗体凝集体（高分子量種）および微粒子の形成を最小限にし、コロイド安定性を改善し、断片化を最小限にし（低分子量種）、または抗体がその生物学的活性を経時的に維持することを確実にする。一態様では、製剤は、約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、および約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントを、モル比４：１～５：１（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメント）で、ヒスチジン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニン、または薬学的に許容されるその塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される１以上の賦形剤を約１０～１０００ｍＭの総賦形剤濃度で、および、約５～８のｐＨの緩衝液を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、４：１のモル比を有する（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメント）。別の実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、５：１のモル比を有する（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメント）。別の態様では、製剤は、約４～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、および約４～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一実施形態では、ヒスチジン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニン、または薬学的に許容されるその塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される１以上の賦形剤は、約２５～２５０ｍＭの総賦形剤濃度である。別の実施形態では、ヒスチジン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される１以上の賦形剤は、約４０～２５０ｍＭの総賦形剤濃度である。
一態様では、賦形剤は、約１５～２５０ｍＭの濃度のアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。一態様では、賦形剤は、約２５～２５０ｍＭの濃度のアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。別の実施形態では、賦形剤は、約４０～１５０ｍＭの濃度のアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。別の実施形態では、賦形剤は、約４０～１００ｍＭの濃度のアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。別の実施形態では、賦形剤は、約７０ｍＭの濃度のＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。別の実施形態では、賦形剤は、約７０～１５０ｍＭの濃度のアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。アルギニン（ＬまたはＤ型）の薬学的に許容される塩の例としては、Ｌ-アルギニン-塩酸塩およびＬ-アルギニンコハク酸塩を含むが、これらに限定されない。前述の実施形態の他の態様では、製剤は、非イオン性界面活性剤、糖またはポリオール、またはグルタミン、グリシン、プロリンまたはメチオニンをさらに含む。
別の態様では、賦形剤は、約２５～２５０ｍＭの総賦形剤濃度を有するＮａＣｌおよびアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。さらなる実施形態において、賦形剤は、約７０～１００ｍＭの総賦形剤濃度を有するＮａＣｌおよびアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である。一実施形態では、ＮａＣｌ対アルギニンの濃度比は、１：１である。別の実施形態では、ＮａＣｌ濃度は、約３５ｍＭであり、アルギニン濃度は、約３５ｍＭである。別の実施形態では、ＮａＣｌ濃度は、約５０ｍＭであり、アルギニン濃度は、約５０ｍＭである。
さらなる態様において、賦形剤は、約４０～１５０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。さらなる実施形態において、賦形剤は、約４０～１００ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。さらなる実施形態において、賦形剤は、約７０～１３０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。さらなる実施形態において、賦形剤は、約７０～１００ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌまたはＬｉＣｌである。さらなる実施形態において、賦形剤は、約７０ｍＭのＮａＣｌである。前述の実施形態の他の局面において、製剤は、非イオン性界面活性剤をさらに含む。
さらなる態様において、賦形剤は、約２５～２００ｍＭのＬ-ヒスチジンである。さらなる実施形態において、Ｌ-ヒスチジンは、約５０～２００ｍＭである。なおさらなる実施形態において、Ｌ-ヒスチジンは、約４０～１００ｍＭである。
さらなる局面において、賦形剤は、約２５～２００ｍＭのＬ-グルタミン、Ｌ-グリシン、Ｌ-プロリンまたはＬ-メチオニンまたはそれらの組み合わせである。さらなる実施形態において、賦形剤は、約５０～２００ｍＭである。なおさらなる実施形態において、賦形剤は、約４０～１００ｍＭである。なおさらなる実施形態において、賦形剤は、約７０ｍＭである。
一実施形態では、賦形剤は、約２５～２００ｍＭのＬ-グルタミン、Ｌ-グリシン、Ｌ-アスパラギン酸塩、またはそれらの組み合わせである。別の実施形態では、賦形剤は、約２０～５０ｍＭである。さらなる実施形態では、賦形剤は、約２０ｍＭである。なおさらなる実施形態において、賦形剤は、約４０～１００ｍＭである。なおさらなる実施形態において、賦形剤は、約７０ｍＭである。別の実施形態において、賦形剤は、約２０ｍＭのＬ-アスパラギン酸塩および約５０ｍＭのＬ-グリシンである。別の実施形態では、賦形剤は、約２０ｍＭのＬ－グルタミンおよび約５０ｍＭのＬ－グリシンである。
一実施形態では、共－製剤化組成物は、中性またはわずかに酸性のｐＨ(ｐＨ ４．５～８）を有する緩衝液、およびアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を有する。一実施形態では、ｐＨ約５．５～６．５の緩衝液が組成物に使用される。一実施形態では、約４．５～６．５のｐＨの緩衝液が組成物に使用される。別の実施形態では、ｐＨ約５．５～６．０の緩衝液が組成物中で使用される。さらなる実施形態では、約５．０～６．０のｐＨの緩衝液が組成物中で使用される。緩衝液は、約５～１０００ｍＭの濃度を有することができる。別の実施形態において、緩衝液は、約５～１５０ｍＭの濃度を有し得る。さらなる実施形態において、緩衝液は、約５～３００ｍＭの濃度を有することができる。さらなる実施形態において、緩衝液は、約１～３００ｍＭの濃度を有する。別の実施形態において、緩衝液は、約１～３０ｍＭの濃度を有し得る。なおさらなる実施形態において、緩衝液は、５～３０ｍＭの濃度を有し得る。なおさらなる実施形態において、緩衝液は、約５～２０ｍＭの濃度を有し得る。なおさらなる実施形態において、緩衝液は、約８～１２ｍＭの濃度を有し得る。一実施形態では、緩衝液は、ヒスチジン、酢酸塩またはクエン酸塩である。好ましい緩衝液は、約１０ｍＭのヒスチジン、酢酸塩またはクエン酸塩を含有する。
一実施形態では、製剤は、約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントを、４：１～５：１のモル比で（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント）、糖またはポリオール；非イオン性界面活性剤、ｐＨ約４．５～８のヒスチジン緩衝液または酢酸緩衝液、約１０～１０００ｍＭアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩、および任意にメチオニン（ＬまたはＤ型）、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファン（ＬまたはＤ型）またはピリドキシンを含む。別の実施形態では、製剤は、約４～２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、および約４～２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントを、４：１～５：１のモル比（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント）で、糖またはポリオール；非イオン性界面活性剤、ｐＨ約５～８の約５０～５００ｍＭヒスチジン緩衝液、約１０～１０００ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌおよびＬｉＣｌから選択される一価カチオンの塩若しくはＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２、ＦｅＣｌ２およびＦｅＣｌ３から選択される多価カチオンの塩、任意に約１０～１０００ｍＭアルギニンまたは薬学的に許容されるその塩、ならびに任意にメチオニン（ＤまたはＬ形態）、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、トリプトファンおよびピリドキシンを含む。別の態様では、製剤は、約４～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、および約４～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、４：１のモル比を有する（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメント）。別の実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、５：１のモル比を有する（抗ＬＡＧ３抗体対抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメント）。
製剤は、約１～１００ｕＭ、約１～３０ｕＭ、約１～２０ｕＭ、約１０ｕＭ～３０ｕＭのＤＴＰＡまたはＥＤＴＡを含み得る。製剤はまた、約１～３０ｍＭのＬ－メチオニンを含み得る。一実施形態では、製剤はまた、約１～２０ｍＭのＬ－メチオニンを含み得る。製剤はまた、約５～１５ｍＭのＬ－メチオニンを含み得る。製剤はまた、約５～１５ｍＭのＬ－メチオニンを含み得る。製剤はまた、約５～２０ｍＭのＬ－メチオニンを含み得る。製剤はまた、約１０ｍＭ、または少なくとも約１０ｍＭのＬ－メチオニンを含み得る。時には、窒素オーバーレイ（例えば、窒素オーバーレイ上のわずか５％または１０％の残留Ｏ２）が酸化に対して抗体を安定化するために、製造工程の間および／またはバイアルに封をする前に使用される。
本発明の別の局面において、製剤は、糖、ポリオールまたは非イオン性界面活性剤、またはそれらの組み合わせをさらに含む。一実施形態では、糖は、グルコース、スクロース、トレハロースおよびラクトース、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、糖は、スクロース、トレハロースおよびマルトースのような二糖である。一実施形態では、糖は非還元糖である。別の実施形態では、糖は、スクロースもしくはトレハロースのような非還元二糖、またはそれらの組み合わせである。一実施形態において、糖は、約１０～２００ｍｇ／ｍｌの濃度である。別の実施形態において、糖は、約３０～１２０ｍｇ／ｍｌの濃度である。別の実施形態において、糖は、約３０～８０ｍｇ／ｍｌの濃度である。さらなる態様において、糖は、約５０～９０ｍｇ／ｍｌの濃度である。
一実施形態では、ポリオールは、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の実施形態では、ポリオールは、糖アルコールである。一実施形態では、糖およびポリオールは、スクロース、トレハロース、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。さらなる実施形態では、ポリオールは、グリコールである。一実施形態では、グリコールは、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される。一実施形態では、ポリオールは、約１０～２００ｍｇ／ｍｌの濃度である。別の実施形態では、ポリオールは、約１０～５０ｍｇ／ｍｌの濃度である。さらなる態様において、ポリオールは、約５～３０ｍｇ／ｍｌの濃度である。
一実施形態では、製剤は、約１０～２５０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。別の実施形態では、製剤は、約２０～２００ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。さらなる態様において、製剤は、約５０～８０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。さらなる態様において、製剤は、約３０～８０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。別の実施形態では、製剤は、約５０～９０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。なおさらなる実施形態において、製剤は、約７０～８０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。さらにさらなる態様において、製剤は、少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌのスクロースまたはトレハロースを含む。別の実施形態では、製剤は、約２０～２００ｍｇ／ｍｌのソルビトール、ＰＥＧ４００またはグリセロールを含む。さらなる態様において、製剤は、約２０～５０ｍｇ／ｍｌのソルビトール、ＰＥＧ４００またはグリセロールを含む。
一実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベートおよびポロキサマーからなる群から選択される。さらに別の実施形態では、界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）（ポリソルベート８０）、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）（ポリソルベート２０）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ８８（登録商標）、Ｐｌｕｏｒｏｎｉｃ Ｆ-１２７（登録商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（登録商標）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ-１００（登録商標）からなる群より選択される。好ましい実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０であり、糖は、スクロースまたはトレハロースである。ポリソルベート８０またはポリソルベート２０界面活性剤は、約０．００５～約１ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在し得る。ポリソルベート８０またはポリソルベート２０界面活性剤は、約０．０２～約２ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在し得る。ポリソルベート８０またはポリソルベート２０界面活性剤は、約０．０５～約１ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在し得る。ポリソルベート８０またはポリソルベート２０界面活性剤は、約０．１～約０．５ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在し得る。別の実施形態において、ポリソルベート８０またはポリソルベート２０界面活性剤は、約少なくとも約０．００５ｍｇ／ｍｌからの量で製剤中に存在し得る。ポリソルベート８０またはポリソルベート２０界面活性剤はまた、約少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌからの量で製剤中に存在し得る。ポリソルベート８０界面活性剤は、約０．２ｍｇ／ｍｌの量で製剤中に存在し得る。
上記製剤の他の局面において、５０℃で、％高分子量（ＨＭＷ）は、１０日後の共－製剤化抗ＬＡＧ３抗体および抗ＰＤ-１抗体製剤中、サイズ排除クロマトグラフィーによって測定して５％未満である。
本発明は、以下の実施形態を提供する：
１． 以下を含む製剤：
約１６～２２ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約３～７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント；約３０～１２０ｍｇ／ｍＬの非還元二糖；約０．０２～２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約４．５～６．５の緩衝液；および約４０～１５０ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む製剤であって；
ここで、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、および配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、および配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含み、そして、
抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２、および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む。
２． 約１８～２２ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約４～７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体；約５０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約３～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約４０～１００ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、実施形態１の製剤。
３． 約１８～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約４～７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体；約５０～６０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約８～１２ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約４０～７０ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、実施形態１に記載の製剤。
４． 約５～１５ｍＭ Ｌ－メチオニンをさらに含む、実施形態１～３のいずれかに記載の製剤。
５． 約５～１０ｍＭ Ｌ－メチオニンをさらに含む、実施形態１～３のいずれかに記載の製剤。
６． 約１８．７５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約６．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体；約５５ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約５２．５ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約７．５ｍＭのＬ-メチオニンを含む、実施形態１に記載の製剤。
７． 約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体；約５４ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約５６ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約８ｍＭのＬ-メチオニンを含む、実施形態１に記載の製剤。
８． 約２０．８３ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約４．１７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体；約５３ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約５８．３ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約８．３ｍＭのＬ-メチオニンを含む、実施形態１に記載の製剤。
９． 約１８．０２ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約４．５０５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体；約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約７０ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約１０ｍＭのＬ-メチオニンを含む、実施形態１に記載の製剤。
以下の実施形態も、本発明の態様である：
１． 以下を含む製剤；約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、および、約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体を、４：１～５：１のモル比で（抗ＬＡＧ３抗体の抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントに対する）；ヒスチジン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される１以上の賦形剤を約１０～１０００ｍＭの総賦形剤濃度で、および、ｐＨ約４．５～８の緩衝液。
２． 配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、および配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、および配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む、約１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、並びに、
配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２、および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む約４～２００ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント、
ヒスチジン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グリシン、プロリン、メチオニン、アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＺｎＣｌ２およびＦｅＣｌ２からなる群から選択される１以上の賦形剤を約２５～２５０ｍＭの総賦形剤濃度で、および、ｐＨ約５～８の緩衝液、を含む実施形態１に記載の製剤。
３． 賦形剤が、約２５～２５０ｍＭの濃度のＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である、実施形態１または２に記載の製剤。
４． 賦形剤が、約４０～１００ｍＭの濃度のＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩である、実施形態１または２に記載の製剤。
５． 賦形剤が、約２５～２５０ｍＭの総賦形剤濃度を有する、ＮａＣｌおよびＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩の組み合わせである、実施形態１または２に記載の製剤。
６． ＮａＣｌ対Ｌ-アルギニン濃度比が１：１である、実施形態５に記載の製剤。
７． ＮａＣｌ濃度が約３５ｍＭであり、Ｌ-アルギニン濃度が約３５ｍＭである、実施形態６に記載の製剤。
８． ＮａＣｌ濃度が約５０ｍＭであり、Ｌ-アルギニン濃度が約５０ｍＭである、実施形態６に記載の製剤。
９． 賦形剤が、約４０～１５０ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌおよび／またはＬｉＣｌである、実施形態１または２に記載の製剤。
１０． 賦形剤が、約２５～２００ｍＭのＬ－ヒスチジンである、実施形態１または２に記載の製剤。
１１． Ｌ-ヒスチジンが、約４０～１００ｍＭである、実施形態１０に記載の製剤。
１２． 緩衝剤が、Ｌ－ヒスチジン、酢酸塩またはクエン酸塩である、実施形態１～１１の製剤。
１３． 緩衝剤が、約１～３００ｍＭの濃度を有する、実施形態１２の製剤。
１４． 更に、糖、ポリオール若しくは非イオン性界面活性剤またはその組み合わせを含む、実施形態１～１３の製剤。
１５． 糖が、非還元二糖である、実施形態１４の製剤。
１６． 糖が、トレハロース若しくはスクロース、またはそれらの組み合わせである、実施形態１５の製剤。
１７． 糖が、約１０～２００ｍｇ／ｍｌの濃度である、実施形態１５または１６の製剤。
１８． ポリオールが、糖アルコールである、実施形態１４の製剤。
１９． ポリオールが、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールからなる群から選択される、実施形態１４の製剤。
２０． ポリオールが、約１０～２００ｍｇ／ｍｌの濃度である、実施形態１８または１９の製剤。
２１． 非イオン性界面活性剤が、ポリソルベートおよびポロキサマーからなる群から選択される、実施形態１４の製剤。
２２． 非イオン性界面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ８８（登録商標）、Ｐｌｕｏｒｏｎｉｃ Ｆ-１２７（登録商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（登録商標）およびＴｒｉｔｏｎ Ｘ-１００（登録商標）からなる群より選択される、実施形態１４の製剤。
２３． 非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート８０またはポリソルベート２０である、実施形態１４の製剤。
２４． 更に、界面活性剤ポリソルベート２０またはポリソルベート８０、および、糖スクロースまたはトレハロース、またはその組み合わせを含む、実施形態１～１３の製剤。
２５． 更に、約１０～２５０ｍｇ／ｍＬのスクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコールまたはグリセロール；約０．００５～２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；および、ｐＨ約５．０～６．５の約３～３００ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液を含む、実施形態１～１１の製剤。
２６． 更に、約３０～１２０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；約０．０５～１．５ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；および、ｐＨ約５．０～６．５の約３～１５０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液を含む、実施形態１～１１の製剤。
２７． 更に、約５０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；および、ｐＨ約５．０～６．５の約５～３０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液を含む、実施形態１～１１の製剤。
２８． 約２０～２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約５０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約５～２０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液；および、約４０～１５０ｍＭのＬ－アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、実施形態１または２に記載の製剤。
２９． 約２０～２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約２０～２００ｍｇ／ｍＬのグリセロール、ソルビトール、またはＰＥＧ４００；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約３～１５０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液；および、約４０～１５０ｍＭのＬ－アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、実施形態１または２に記載の製剤。
３０． 約２０～２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約４０～１５０ｍＭのＬ－グルタミン、Ｌ－グリシン、Ｌ－プロリンまたはＬ－メチオニン；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約３～１５０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液；および、約４０～１５０ｍＭのＬ－アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、実施形態１または２に記載の製剤。
３１． 約２０～２２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約３～１５０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液；および、約４０～１５０ｍＭのＮａＣｌまたは薬学的に許容されるその塩を含む、実施形態１または２に記載の製剤。
３２． 約３～１５０ｍＭのＬ－メチオニンをさらに含む、実施形態１～３１のいずれかに記載の製剤。
３３． 約５～７０ｍＭのＬ－メチオニンをさらに含む、実施形態１～３１のいずれかに記載の製剤。
３４． 約２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液；および、約７０ｍＭのＬ－アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩、および、約１０ｍＭのＬ－メチオニンを含む、実施形態１または２の製剤。
３５． 約３～２５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント、糖、ポリオール、非イオン界面活性剤、ｐＨ約５～８のヒスチジンまたは酢酸緩衝液、および、１０～１０００ｍＭのＬ－アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、実施形態１または２に記載の製剤。
３６． 約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８～６．０の約１０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液；および、約７０ｍＭＬ－アルギニンまたはＬ－アルギニンＨＣｌを含む、実施形態１または２の製剤。
３７． 約１０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント；約１０ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント；約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液；および、約７０ｍＭのＬ－アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩；および約１０ｍＭのＬ－メチオニンを含み、
ここで、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９のＣＤＲＬ１、配列番号４０のＣＤＲＬ２、および配列番号４１のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号４２のＣＤＲＨ１、配列番号５９のＣＤＲＨ２、および配列番号４４のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含み、そして、
抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１のＣＤＲＬ１、配列番号２のＣＤＲＬ２および配列番号３のＣＤＲＬ３を含む可変軽鎖領域、ならびに、配列番号６のＣＤＲＨ１、配列番号７のＣＤＲＨ２、および配列番号８のＣＤＲＨ３を含む可変重鎖領域を含む、製剤。
３８． 液体製剤である、実施形態１～３７のいずれかの製剤。
３９． 少なくとも－７０℃未満に凍結される、実施形態１～３７のいずれかの製剤。
４０． 凍結乾燥製剤から再構成された溶液である、実施形態１～３７のいずれかの製剤。
４１． ％高分子量（ＨＭＷ）が、５０℃において、１０日後にサイズ排除クロマトグラフィーによって測定して５％未満である、実施形態１～４０のいずれかの製剤。
４２． サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントのパーセント（％）モノマーは、５℃において、３か月後に９９．５％以上である、実施形態１～４１のいずれかの製剤。
４３． サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントのパーセント（％）モノマーは、４０℃において、３か月後に９８％以上である、実施形態１～４１のいずれかの製剤。
４４． 製剤が、５℃において、イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントの％酸性変異体は３か月後に１５％未満であり、イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントの％酸性変異体は３か月後に２０％未満である、実施形態１～４３のいずれかの製剤。
４５． ２５℃／６０％の相対湿度（ＲＨ）反転において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントの％酸性変異体は、イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、３か月後に２０％未満であり、
抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントの％酸性変異体は、イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、３か月後に２５％未満である、実施形態１～４３のいずれかの製剤。
４６． ４０℃／７５％のＲＨ反転において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントの％酸性変異体は、イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、３か月後に５０％未満であり、
抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントの％酸性変異体は、イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、３か月後に５３％未満である、実施形態１～４３のいずれかの製剤。
４７． 抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号３７の軽鎖可変領域配列および配列番号５８の重鎖可変領域配列を含む、実施形態１～４６のいずれかの製剤。
４８． 抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメントが、配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含む、実施形態１～４６のいずれかの製剤。
４９． 抗ＬＡＧ３抗体が、Ａｂ６またはＡｂ６変異体である、実施形態１～４６のいずれかの製剤。
５０． 抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号９の重鎖可変領域および配列番号４の軽鎖可変領域を含む、実施形態４７の製剤。
５１． 抗ＰＤ－１抗体が、配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、実施形態４８に記載の製剤。
５２． 抗ＰＤ－１抗体が、ペンブロリズマブまたはペンブロリズマブ変異体である、実施形態４９に記載の製剤。
凍結乾燥製剤
治療用タンパク質の凍結乾燥製剤は、いくつかの利点を提供する。凍結乾燥製剤は、一般に溶液製剤よりも良好な化学的安定性を提供し、したがって、貯蔵寿命を延ばす。凍結乾燥製剤はまた、投与経路または投薬のような臨床因子に依存して、異なる濃度で再構成され得る。例えば、凍結乾燥製剤は皮下投与に必要であれば高濃度（すなわち、少量）で、または静脈内投与であれば低濃度で再構成することができる。特定の被験者に高用量が必要な場合、特に注射容量を最小限にしなければならない皮下に投与される場合には、高濃度も必要であり得る。抗体医薬の皮下投与は、自己投与を可能にする。自己投与は、例えば静脈内投与のための医療施設への訪問に関連する時間および費用を回避する。皮下送達は、一般に約１～１．５ｍＬで１回の注射で注射部位に実際に送達することができる溶液の体積によって制限される。このような制限はしばしば、所望の量の薬物を送達するために、比較的高い濃度の溶液を必要とする。皮下自己投与は、典型的には患者が注射前に薬物を再懸濁する必要性を回避するために、凍結乾燥形態ではなく、薬物の液体溶液製剤で満たされた事前充填シリンジまたは自己注射器を使用して達成される。
典型的には、凍結乾燥製剤は、高濃度の医薬品（ＤＰ）での再構成を予想して、すなわち、低容量の液体での再構成を予想して調製される。次いで、水または等張緩衝液でのその後の希釈は、ＤＰをより低い濃度に希釈するために容易に使用することができる。典型的には、賦形剤は、例えば、皮下投与のために、高ＤＰ濃度で再構成された場合におおよそ等張性の製剤を生じるレベルで、本発明の凍結乾燥製剤に含まれる。より低いＤＰ濃度を生成するためのより多量の水中での再構成は再構成された溶液の張性を必然的に減少させるが、このような減少は、非皮下（例えば、等張溶液（０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰまたは５％デキストロース溶液、ＵＳＰ）との混合物としての静脈内投与）の間、ほとんど有意ではないかもしれない。より低いＤＰ濃度で等張性が所望される場合、凍結乾燥粉末は、標準的な低容量の水中で再構成され得、次いで、０．９％塩化ナトリウムのような等張性希釈剤でさらに希釈され得る。
本発明の凍結乾燥製剤は、予備凍結乾燥溶液の凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ）によって形成される。凍結乾燥は、製剤を凍結させ、その後、一次乾燥に適した温度で水を昇華させることによって達成される。この条件下では、生成物温度は、製剤の共晶点または崩壊温度未満である。典型的には、一次乾燥のための棚温度は、典型的には約５０～２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力で、約－３０～－２５℃の範囲である（一次乾燥中に生成物が凍結したままであるならば）。製剤、サンプルを保持する容器（例えば、ガラスバイアル）のサイズおよびタイプ、ならびに凍結乾燥される製剤の体積は、乾燥に必要とされる時間を決定し、これは、数時間～数日（例えば、４０～６０時間）の範囲であり得る。二次乾燥は、主として容器のタイプおよびサイズならびに使用されるタンパク質のタイプに応じて、約０～４０℃で実施することができる。二次乾燥時間は、製品中の所望の残留水分レベルによって決定され、典型的には少なくとも約５時間を要する。典型的には、凍結乾燥製剤の水分含量は約５％未満、好ましくは約３％未満である。圧力は、一次乾燥工程中に使用される圧力と同じであってもよい。凍結乾燥条件は、製剤およびバイアルサイズに応じて変えることができる。
いくつかの例では、輸送工程を回避するために、タンパク質の再構成が行われる容器中でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましい場合がある。この場合の容器は、例えば３、５、１０、２０、５０または１００ｃｃバイアルであってもよい。
本発明の凍結乾燥製剤は、投与前に再構成される。タンパク質は、約３、４、５、６、７、８、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、８０、９０または約１００ｍｇ／ｍＬの濃度、または約１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬまたは３００ｍｇ／ｍＬから約５００ｍｇ／ｍＬまでのようなより高い濃度で再構成され得る。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約４～７ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約３～７ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約４ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約５ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約６ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約１８～２２ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約２０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約１６～２２ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１または抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメント濃度は、約３～３００ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＬＡＧ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント濃度は、約４～２５０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＬＡＧ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント濃度は、約１５０～２５０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＬＡＧ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント濃度は、約１８０～２２０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＬＡＧ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント濃度は、約５０～１５０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＬＡＧ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント濃度は、約５０ｍｇ／ｍｌである。一実施形態では、再構成後の抗ＰＤ-１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは抗ＬＡＧ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント濃度は、約２５ｍｇ／ｍｌである。高タンパク質濃度は、再構成製剤の皮下送達が意図される場合に特に有用である。しかし、静脈内投与のような他の投与経路については、より低い濃度のタンパク質が所望され得る（例えば、約５～２５ｍｇ／ｍＬ）。
再構成は、一般に完全な水和を確実にするために約２５℃の温度で行われるが、他の温度を必要に応じて使用することもできる。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤の種類、賦形剤の量およびタンパク質に依存する。例示的な希釈剤には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液またはデキストロース溶液が含まれる。
本発明の１つの実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体（またはその抗原結合フラグメント）および抗ＰＤ-１抗体（またはその抗原結合フラグメント）は、静脈内投与のための凍結乾燥粉末として共製剤化される。本発明の別の実施形態では、共製剤化製品は、皮下投与のための凍結乾燥粉末である。特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合フラグメント）は、約１００～１２００ｍｇ／バイアルで提供され、使用前に注射用の滅菌水で再構成される。他の実施形態において、抗体（またはその抗原結合フラグメント）は、約２００ｍｇ／バイアルで提供され、使用前に注射のために滅菌水で再構成される。一実施形態では、再構成製剤の目標ｐＨは約６．０である。様々な実施形態では、本発明の凍結乾燥製剤は、抗ＬＡＧ３抗体または抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメントを、約５、１０、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、１００、１５０、２００、２５０ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上のような濃度に再構成することを可能にする。他の実施形態では、再構成後の抗ＬＡＧ３抗体もしくは抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメントの濃度は、約３～３００、１０～３００、２０～２５０、１５０～２５０、１８０～２２０、２０～２００、４０～１００または５０～１５０ｍｇ／ｍｌである。他の実施形態では、凍結乾燥前の抗ＬＡＧ３抗体もしくは抗ＰＤ-１抗体、またはその抗原結合フラグメントの濃度は、約３～３００、１０～３００、１５０～２５０、１８０～２２０、１０～１００、１０～５０または２５～５０ｍｇ／ｍｌである。
他の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合フラグメント、および抗ＰＤ-１抗体または抗原結合フラグメントの凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤から生成される再構成溶液に関して定義される。再構成溶液は、約４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｍＬ、または、それ以上の濃度、例えば、１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬまでの濃度で、抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。一実施形態では、再構成製剤は、約３～３００ｍｇ／ｍＬの抗体、またはその抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態において、再構成された製剤は、約１０～２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態において、再構成された製剤は、約１０～１００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態では、再構成製剤は、約１０～６０または約１５～５０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態において、再構成された製剤は、約１０～２５ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。好ましい実施形態において、再構成された製剤は、約２０～３０または２５ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合フラグメントを含み得る。
液体製剤
液体抗体製剤は、例えば、水性医薬製剤中にある薬物物質をとり、それを精製プロセスの最後の工程において所望の緩衝液に緩衝液交換することによって作製することができる。この実施形態では、凍結乾燥ステップはない。最終緩衝液中の薬物物質を所望の濃度に濃縮する。安定剤および界面活性剤のような賦形剤を薬物物質に添加し、適切な緩衝液を用いて希釈して最終タンパク質濃度にする。最終製剤化薬物物質を、０．２２μｍフィルタを用いて濾過し、最終容器（例えばガラスバイアル）に充填する。製剤は、バイアル中に保存され、注射デバイスまたは容器を通して送達され得る。
本発明の別の局面において、抗ＰＤ-１抗体および抗ＬＡＧ３抗体（またはその抗原結合フラグメント）を含む液体共－製剤について、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約３～３００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。別の実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４～２５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。別の実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４０～１００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。さらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０～６０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。さらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２０～３０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。さらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０～３０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する。さらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１５～５０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。別の実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０～１００ｍｇ／ｍＬの濃度である。なおさらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２０～３０または２５ｍｇ／ｍＬの濃度である。なおさらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１６～２２ｍｇ／ｍＬの濃度である。なおさらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１８～２２ｍｇ／ｍＬの濃度である。なおさらなる実施形態において、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度である。
本発明の別の局面において、液体製剤中の抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約３～３００ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。一実施形態では、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４～２５０ｍｇ／ｍｌの濃度である。別の実施形態において、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４０～１００ｍｇ／ｍｌの濃度である。さらなる実施形態において、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０～６０ｍｇ／ｍｌの濃度である。さらなる実施形態において、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２０～３０ｍｇ／ｍｌの濃度である。さらなる実施形態において、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０～３０ｍｇ／ｍＬの濃度である。さらなる実施形態において、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１５～５０ｍｇ／ｍｌの濃度である。別の実施形態において、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０～１００ｍｇ／ｍＬの濃度である。別の実施形態において、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２０～３０または２５ｍｇ／ｍＬの濃度である。一実施形態では、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約３～７ｍｇ／ｍｌの濃度である。一実施形態では、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４～７ｍｇ／ｍｌの濃度である。一実施形態では、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約４ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。一実施形態では、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約５ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。一実施形態では、抗ＰＤ-１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約６ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。
一実施形態では、液体製剤は、ｐＨ約４．５～８、５．０～６．５、５．５～６．５、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１または６．２の緩衝液、およびアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む。一実施形態では、液体製剤は、ｐＨ約５～８の緩衝液を含む。一実施形態では、液体製剤は、ｐＨ約５．０～６．５の緩衝液を含む。一実施形態では、液体製剤は、ｐＨ約５．０～６．０の緩衝液を含む。他の実施形態では、緩衝液は、ヒスチジンである。別の実施形態では、緩衝液はクエン酸塩または酢酸塩である。さらなる実施形態では、液体製剤は、ｐＨ約５～８、５．０～６．５、５．５～６．５、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１または６．２の酢酸緩衝液、およびアルギニンまたはその薬学的に許容される塩を含む。
本発明の液体抗体製剤は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下注射のような非経口投与に適しており、特に皮下注射に適している。
投与量および投与経路
毒性は、ヒト化抗ＬＡＧ３または抗ＰＤ-１抗体（またはその抗原結合フラグメント）のような治療剤の適切な投薬量を選択する際の考慮事項である。単独でまたは免疫抑制剤と組み合わせて投与される抗体組成物の毒性および治療効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療的に有効な用量）を決定するために、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０対ＥＤ５０の比として表すことができる。高い治療指数を示す抗体が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための用量の範囲を処方する際に使用され得る。このような化合物の用量は、好ましくは毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、使用される投薬形態および利用される投与経路に依存して、この範囲内で変化し得る。
適切な投与経路としては、例えば、非経口送達（筋肉内、皮内、皮下、髄内注射、ならびに髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内を含む）を含む。薬物は、腹腔内、非経口、動脈内または静脈内注射のような様々の従来の方法で投与することができる。溶液の体積を制限しなければならない投与様式（例えば、皮下投与）は、凍結乾燥製剤が高濃度での再構成を可能にすることを必要とする。
あるいは、例えば、免疫病理学によって特徴付けられる病原体誘発性病変への直接的な抗体の注射を介して、しばしばデポー剤または徐放性製剤において、全身的な様式ではなく局所的な様式で抗体を投与し得る。さらに、標的薬物送達系、例えば、組織特異的抗体でコーティングされたリポソーム中に抗体を投与して、例えば、免疫病理学によって特徴付けられる病原体誘発病変を標的とすることができる。リポソームは、罹患組織に標的化され、そして罹患組織によって選択的に取り込まれる。
治療剤のために投与レジメンの選択は、数種の因子に依存し、血清または組織の実体の代謝回転速度、症候のレベル、実体の免疫原性、および生物学的マトリックス中の標的細胞の到達性を含む。好ましくは、投与レジメンは、副作用の受容可能なレベルと一致して、その患者に送達される治療剤の量を最大化する。したがって、この生物学的に送達される量は、特定の実体および処置される症状の重症度に一部依存する。抗体、サイトカイン、および低分子の適切な用量の選択における指針が利用可能である。例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら、（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら、（１９９９） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎら、（２００１） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら、（２０００） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈら、（２００３） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙら、（２０００） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ Ｅｄ）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００２）を参照のこと。
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすか、または治療に影響を及ぼすと予測される、当該分野で公知であるかまたは疑われるパラメータまたは因子を使用して臨床医によってなされる。タンパク質の適切な投薬量（「治療有効量」）は、例えば、処置される症状、症状の重篤度および経過、タンパク質が予防目的または治療目的のために投与されるかどうか、以前の治療、患者の臨床履歴およびタンパク質に対する応答、使用されるタンパク質の型、ならびに主治医の判断に依存する。一般的に、この用量は、至適用量より若干少ない量を用いて開始し、その後、それは望まれる効果または最適な効果が任意の負の副作用に対して達成されるまで、少ない増量によって増加される。重要な診断手段には、例えば、炎症の症状のもの、または産生された炎症性サイトカインのレベルが含まれる。タンパク質は、一度にまたは繰り返し患者に適切に投与される。タンパク質は、単独で、または他の薬物もしくは治療法と組み合わせて投与され得る。
抗体または抗体フラグメントは、連続注入によって、または、例えば１日、１週間に１～７回、１週間、２週間、３週間、月１回、２ヶ月毎などの間隔での用量によって提供され得る。好ましい投薬プロトコールは、顕著な望ましくない副作用を回避する最大限の用量または用量の頻度を含むものである。
特定の実施形態において、本発明の医薬製剤は、静脈内（ＩＶ）注入または注射によって投与される。
他の実施形態において、本発明の医薬製剤は、皮下投与によって投与される。皮下投与は、シリンジを使用して、または他の注射デバイス（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ-ｅａｓｅ（登録商標）デバイス）；注射ペン；または無針デバイス（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒおよびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（登録商標））を使用して、注射によって実施され得る。
皮下投与は、シリンジ、自動注射器、注射器ペン、または無針注射デバイスを使用する注射によって実施され得る。静脈内注射は、生理食塩水または水中５％デキストロースのような適切な市販の希釈剤で製剤を希釈した後に行うことができる。
本発明の高濃度溶液製剤は、高濃度の抗体を必要とする使用に特に有利であるが、高濃度が必要とされないかまたは望まれない状況において、より低い濃度で製剤を使用することができない理由はない。より低い濃度の抗体は、低用量の皮下投与、または送達され得る容量が実質的に１ｍｌを超える他の投与様式（例えば、静脈内投与）において有用であり得る。このようなより低い濃度は、約１５、１０、５、２、１ｍｇ／ｍｌまたはそれ未満を含み得る。
使用
本発明は、癌および感染の治療に使用するための、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合フラグメントおよび抗ＰＤ-１抗体または抗原結合フラグメントの凍結乾燥製剤または液体製剤を提供する。
当業者は、用語「癌」が身体の細胞が異常になり、制御されずに分裂する疾患の名称であることを理解するのであろう。本発明の化合物、組成物および方法によって処置され得る癌には以下が含まれるが、これらに限定されない：
心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫;
肺：気管支原性癌（扁平上皮癌、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、
肺胞（細気管支）がん、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨腫性過誤腫、中皮腫;
胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、癌様腫瘍、ビポマ（ｖｉｐｏｍａ））、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）結腸直腸;
泌尿生殖器：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍[腎芽腫]、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮がん、移行上皮がん、腺がん）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（セミノーマ、奇形腫、胚性癌腫、奇形腫、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）;
肝臓：肝細胞癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫;
骨：骨形成性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（網状細胞肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨大細胞腫瘍脊索腫、骨肉腫（骨肉腫性外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液性線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫瘍;
神経系：頭蓋骨（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜腫（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚芽腫[松果体腫瘍]、多形性神経膠芽腫、乏突起膠腫先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）;
婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸部（子宮頸癌、腫瘍前子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌[漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類癌]、顆粒膜細胞腫、セルトリ-レイディグ細胞腫瘍、アラインメント異常）、外陰部（扁平上皮がん、上皮内がん、腺がん、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ボトリオイド肉腫（胚性横紋筋肉腫）、卵管（癌腫）、乳房;
血液学：血液（骨髄性白血病[急性および慢性]、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫[悪性リンパ腫];
皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、ほくろ異形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬;および
副腎：神経芽細胞腫。
１つの実施形態において、癌は、結腸直腸癌、胃癌および頭頸部癌から選択される。
実施例１：抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の自己会合を減少させる条件の研究
拡散相互作用パラメータ（ｋＤ）測定
１０ｍＭヒスチジンｐＨ５．６のＢ２２は、負であることがわかり、自己会合する分子の固有の特性を負に示すことが見出された。１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ５．６）中の５０ｍＭ塩化ナトリウムの存在は、図１２に見られるように拡散相互作用パラメーター（ＫＤ）を増加させるかまたは自己相互作用を減少させ、抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（配列番号３５および５７、軽鎖および重鎖）の相対溶解度（ＯＤ３５０）を改善し、減少させることが見出された。１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ５．６）中の抗ＬＡＧ３抗体の安定性は、拡散相互作用パラメータ（ＫＤ）、濁度（ＯＤ３５０）および相対溶解度（％ＰＥＧmid-point）アッセイを用いて、４０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩の存在下で調べられた。図１３に見られるように、自己相互作用および濁度は劇的に減少することが見出されたが、抗ＬＡＧ３抗体の相対溶解度は１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．６）中の４０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩の添加時に有意に改善されることが見出された。５０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体を用いたＬ-アルギニン塩酸塩範囲研究（４０ｍＭ～１００ｍＭ）を、ｐＨ５．８およびｐＨ６．０で実施し、ここで、７０ｍＭのＬ-アルギニン塩酸塩濃度（１４．７ｍｇ／ｍＬ）が、自己相互作用の低減およびコロイド安定性の改善に有効であることが見出された（図１３）。
抗ＬＡＧ３抗体は、より低いイオン強度（１０ｍＭ）で緩衝液中で相分離することが見出されている。異なる濃度レベル（ｍＭ）での３つの異なる荷電種［Ｌ-アルギニン、Ｌ-ヒスチジンおよび塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）］の存在下での抗ＬＡＧ３抗体のコロイド性、物理的、化学的および熱安定性、並びに、自己会合特性を評価するために、以下の表３に列挙するように９つの異なる製剤を調製した。１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン ７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩（ｐＨ５．８）中の未製剤化抗ＬＡＧ３（～３７ｍｇ／ｍＬ）を、３つの１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ ５．８）緩衝溶液（各緩衝溶液は、１００ｍＭ Ｌ-アルギニン、１００ｍＭ塩化ナトリウムまたは１００ｍＭ Ｌ-ヒスチジンを含む）に対して透析した。抗ＬＡＧ３抗体を、それぞれの製剤の透析液を用いて２５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。４０ｍＭ～１３０ｍＭのＬ-アルギニンまたは塩化ナトリウムを含有する製剤を、それぞれの抗ＬＡＧ３抗体原液をｐＨ５．８のＬ-ヒスチジン緩衝液で希釈し、抗ＬＡＧ３抗体を２５ｍｇ／ｍＬに濃縮することによって調製した。
Figure 0007503056000004
９つの製剤の拡散相互作用パラメータ（ｋＤ）を、５回の獲得のために２０℃でのダイナミック光散乱（ＤＬＳ）を用いて評価した。相互作用パラメータ（ｋＤ）は、それぞれの製剤の一連の希釈濃度（ｍｇ／ｍＬ）に対する記録された拡散係数値（ｃｍ２／ｓ）のグラフの傾きおよびｙ遮断から計算した。正拡散相互作用パラメータ（ｋＤ）は、反発的相互作用を示唆する。Ｌ－アルギニン、Ｌ－ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの濃度増加（＞４０ｍＭ）に伴い、抗ＬＡＧ３抗体はｋＤの増加を示し、分子自己会合の減少（より少ない分子密集）を示唆した。この効果は、Ｌ-アルギニン、続いて塩化ナトリウムおよびＬ-ヒスチジンについて、相対的順序で比較的顕著である（図１５を参照のこと）。
相対溶解度試験
９つの製剤の自動相対溶解度スクリーニングを、１０ｍｇ／ｍＬタンパク質濃度を必要とするポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導沈殿を用いて評価した。４０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ ６０００を各緩衝液中で調製し、その後、ＪＡＮＵＳ Ｇ３自動液体処理システムを使用して、様々な増分でＰＥＧ-６０００、２％～３６％（ｗ／ｖ）の溶液を調製した。１０ｍｇ／ｍＬタンパク質溶液を、９６ウェルコスター透明プレート中ＰＥＧ溶液に添加して、１ｍｇ／ｍＬの最終アッセイ濃度を得た。プレートを室温で一晩平衡化し、Ａｂｇｅｎｅ ＰＣＲプレートに移し、各ウェルの底にタンパク質を強制的に沈殿させるために４６００ｒｐｍで３０分間回転させた。上清を各ウェルから新鮮な９６ウェルコスター透明プレートに移した。プレートを、２８０および３２０ｎｍでＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５プレートリーダーで読み取り、一晩のインキュベーション間の沈殿によるタンパク質損失を決定した。吸光度（２８０～３２０）対ＰＥＧ濃度データを分析して％ＰＥＧｍｉｄｐｔを決定した。
抗ＬＡＧ３抗体は、Ｌ-アルギニン、Ｌ-ヒスチジンまたは塩化ナトリウム（４０ｍＭ～１００ｍＭ）のような荷電種の増加する濃度の存在下で改善された相対溶解度を示し、これらの濃度での抗ＬＡＧ３抗体の分子密集の減少を示唆する。図１６を参照のこと。相対溶解度の改善の大きさは、３つの荷電種の間で同様であった。
荷電種試験の変更
Ｌ－アルギニン、Ｌ－ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下での抗ＬＡＧ３抗体の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）システムを用いて評価した。試料を、キャピラリーに注入する前にキャリア両性電解質と混合した。キャピラリーに電場を印加することによって、キャピラリー中のキャリア両性電解質によってｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、キャピラリー中の局所ｐＨ値が等電点ｐＨ(ｐＩ)値に等しい位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥシステム（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅからのｉＣＥ３）を用いてキャピラリー全体を完全にスキャンすることによって達成された。装置によって撮影された最後の画像は、データ定量化のために使用された。分離されたピークの面積パーセンテージは、タンパク質の総面積で割った個々の種の面積をとることによって推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を囲む２つのｐＩマーカー間の距離を直線的に較正することによって推定される。操作パラメータは、１０℃でのオートサンプラー温度；フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、検出波長２８０ｎｍ、１５００Ｖで１分間の集束期間を含んだ。９つの製剤を９６ウェルプレートに移し、ｃＩＥＦを使用して、初期時点での荷電種（％酸性変異体、％メインピークおよび％塩基性変異体）の変化について評価した。９つの製剤の残りの試料を別の９６ウェルプレートに移し、しっかりと密封し、５０℃で１０日間熱ストレスをかけた。ストレス下に、荷電種の変化を再評価した。図１７のデータは、酸性変異体％の変化（差）、ウェルとしてのメインピークの変化％を、初期と比較した熱ストレスに対する塩基性変異体の変化％として報告する。
塩化ナトリウムは、Ｌ-アルギニンおよびＬ-ヒスチジンに続いて、抗ＬＡＧ３抗体製剤について、％酸性変異体および％メインピークにおいて最小の変化を示した。塩化ナトリウムは、４０～１００ｍＭの濃度範囲、特に７０ｍＭ以上の濃度で化学的安定性の改善を示した。Ｌ－アルギニンは７０ｍＭ濃度で良好な化学的安定性を示したが、Ｌ－ヒスチジンは１００ｍＭ濃度まで良好な化学的安定性を示した。
Ｌ-アルギニンまたは塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の存在下での抗ＬＡＧ３抗体の自己会合特性ならびにコロイド安定性を評価するために、１２の異なる製剤を、表４に列挙するように調製した。１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン ７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩（ｐＨ ５．８）中の未製剤化抗ＬＡＧ３抗体（～３７ｍｇ／ｍＬ）を、４つの１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ５．８）緩衝溶液（各緩衝溶液は、１５０ｍＭ Ｌ-アルギニン、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、または３５ｍＭ Ｌ-アルギニンおよび３５ｍＭ塩化ナトリウムの混合物、または５０ｍＭ Ｌ-アルギニンおよび５０ｍＭ塩化ナトリウムの混合物のいずれかを含む）に対して透析した。抗ＬＡＧ３抗体を、それぞれの製剤の透析液を用いて２５ｍｇ／ｍＬで製剤化した。４０ｍＭ～１３０ｍＭのＬ-アルギニンまたは塩化ナトリウムを含有する製剤を、それぞれの抗ＬＡＧ３抗体原液をｐＨ５．８のＬ-ヒスチジン緩衝液で希釈し、抗ＬＡＧ３抗体を２５ｍｇ／ｍＬに濃縮することによって調製した。
Figure 0007503056000005
１２の製剤の各々についての第２のビリアル係数（Ｂ２２）測定を、ダイナミック光散乱（ＤＬＳ）を用いて５ｍｇ／ｍＬで行った。１７３°の後方散乱を用いて２０℃で自動測定した。
正の第２ビリアル係数（Ｂ２２）は、製剤マトリックス中のタンパク質分子間の反発相互作用（より低い密集）を示唆する。４０ｍＭを超える濃度のＬ-アルギニンおよび塩化ナトリウムの両方が、分子の密集を減少させるのに好ましいようにみえた。図１８を参照されたい。
濁度（ＯＤ３５０）計測
製剤マトリクス中の抗ＬＡＧ３抗体のコロイド安定性を評価するために、１２の製剤の濁度（ＯＤ３５０）を、紫外（ＵＶ）吸光分光光度計を用いて評価した。サンプルのＵＶ吸光度を、プレート吸光度について補正したパスチェックを用いて、波長３５０ｎｍで９６ウェルコスター透明プレート中で測定した。
抗ＬＡＧ３抗体は、Ｌ-アルギニンまたは塩化ナトリウムのいずれかの濃度が増加することにつれて改善されたコロイド安定性（ＯＤ３５０）を示し、この２つの間の値は同等である。図１９を参照。抗ＬＡＧ３抗体製剤マトリックス中のＬ-アルギニンと塩化ナトリウムの当量比（３５：３５または５０：５０）は、同様に同等のコロイド安定性を示す。
粘度測定
異なる製剤マトリックス中の抗ＬＡＧ３の濃縮性を評価するために、表４に列挙した１２の抗ＬＡＧ３抗体製剤を、１５℃で３０００ｒｐｍでエッペンドルフ遠心分離機を使用して６０ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。１２の製剤の粘度を、９６ウェルプレート上のＲｈｅｏＳｅｎｓｅ ＶＲＯＣ（登録商標）Ｉｎｉｔｉｕｍ粘度計を使用して２０℃で測定した。
Ｌ-アルギニンまたは塩化ナトリウム混合物の存在下での６０ｍｇ／ｍＬでの抗ＬＡＧ３抗体の粘度は、４０～１５０ｍＭ濃度の範囲で同等であった。Ｌ-アルギニンおよび塩化ナトリウムの当量比（３５：３５または５０：５０）の存在下での６０ｍｇ／ｍＬでの粘度は、同様の粘度値を示した。図２０参照。
浸透圧測定
抗ＬＡＧ３抗体の浸透圧は、Ｖａｐｒｏ Ｖａｐｏｒ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ５５２０ Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒを用いて測定した。単位は、測定前に１００ｍｍｏｌ／ｋｇ、２９０ｍｍｏｌ／ｋｇおよび１０００ｍｍｏｌ／ｋｇ較正標準で較正した。
表４に列挙した１２種の抗ＬＡＧ３抗体製剤の浸透圧は、Ｌ-アルギニンまたは塩化ナトリウムのいずれかの存在下で同等であることが見出された。当量比のＬ-アルギニンおよび塩化ナトリウム（５０：５０）の存在下での浸透圧は同様の粘度値を示したが、３５：３５の当量比はより低い浸透圧値を示した。図２１を参照されたい。
実施例２：抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤の荷電種（塩およびアミノ酸）を用いた製剤前スクリーニング
荷電種（塩およびアミノ酸）の存在下での抗ＬＡＧ３抗体の安定性を評価するために、表５に列挙される１０の製剤を調製し、ハイスループット分析によって抗ＬＡＧ３抗体の物理化学的特性の変化についてスクリーニングした。製剤を９６ウェルプレート中に適切に密封し、乾燥加熱オーブン中５０℃で１０日間ストレスを加えた。また、熱ストレスを受けたサンプルを、抗ＬＡＧ３抗体の物理化学的特性の変化について評価した。２０ｍＭ濃度のＬ-アスパラギン酸またはＬ-グルタミン酸を、それらの溶解限界に基づいて選択した。
Figure 0007503056000006
濁度プロトコール（ＯＤ３５０）
９つの製剤の濁度（ＯＤ３５０）を、紫外（ＵＶ）吸光分光光度計を用いて評価した。サンプルのＵＶ吸光度を、プレート吸光度について補正したパスチェックを用いて、波長３５０ｎｍで９６ウェルコスター透明プレート中で測定した。
図３７に見られるように、熱ストレスの際に、抗ＬＡＧ３抗体のコロイド安定性（ＯＤ３５０）の変化は、４０ｍＭの塩化ナトリウムまたはＬ-アルギニンと２０ｍＭのＬ-アスパラギン酸またはＬ-グルタミン酸との間で同等であった。同様に、７０ｍＭの塩化ナトリウムまたはＬ-アルギニンの間の抗ＬＡＧ３のコロイド安定性（ＯＤ３５０）の変化は、２０ｍＭのＬ-アスパラギン酸またはＬ-グルタミン酸と５０ｍＭのグリシン（７０ｍＭの総強度）との組合せと同等であった。４０ｍＭまたは７０ｍＭのＬ－ヒスチジンの存在下での抗ＬＡＧ３抗体のコロイド安定性（ＯＤ３５０）の変化は、比較的高かった。
ＵＰ－ＳＥＣ
サンプルの純度は、モノマーのパーセンテージ、ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）のパーセンテージを決定したＵＰ-ＳＥＣによって評価した。移動相（１００ｍＭリン酸塩、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中でサンプルを１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することによって、Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス（ＤＳ）上でＵＰ-ＳＥＣを行った。カラム温度を２５±３℃に維持し、定組成溶出を用いて流速を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈したサンプルを、Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ２００カラムおよびＵＶ検出器を備えたＵＰＬＣに注入した（１μＬ）。サンプル中のタンパク質をサイズによって分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸光によって検出した。
図３８に見られるように、熱ストレスの際に、抗ＬＡＧ３抗体についての可溶性凝集体レベル（％高分子量種、ＨＭＷ）の変化および％モノマーの変化は、４０～７０ｍＭ塩化ナトリウムと２０～７０ｍＭアミノ酸の単独およびいくつかの組み合わせの間で同等であった。低分子量種の変化は、２０ｍＭのＬ－アスパラギン酸またはＬ－グルタミン酸、４０ｍＭのＬ－ヒスチジン、７０ｍＭの塩化ナトリウム、および２０ｍＭのＬ－アスパラギン酸と５０ｍＭのグリシンの組み合わせで比較的低かった。
ｃＩＥＦ
Ｌ－アルギニン、Ｌ－ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下での抗ＬＡＧ３の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）システムを用いて評価した。試料を、キャピラリーに注入する前にキャリア両性電解質と混合した。キャピラリーに電場を印加することによって、キャピラリー中のキャリア両性電解質によってｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、キャピラリー中の局所ｐＨ値が等電点ｐＨ（ｐＩ）値に等しい位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥシステム（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅからのｉＣＥ３）を用いてキャピラリー全体を完全にスキャンすることによって達成された。装置によって撮影された最後の画像は、データ定量化のために使用された。分離されたピークの面積パーセンテージは、タンパク質の総面積で割った個々の種の面積によって推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を囲む２つのｐＩマーカー間の距離を直線的に較正することによって推定される。操作パラメータは、１０℃でのオートサンプラー温度；フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、検出波長２８０ｎｍ、１５００ Ｖで１分間の集束期間を含んだ。
図３９のデータは、初期と比較した熱ストレスに対する酸性変異体％の変化（差）、メインピークの変化％、ならびに塩基性変異体の変化％を報告する。
図３９に見られるように、抗ＬＡＧ３抗体の％酸性変異体およびメインピークの変化は、２０ｍＭ Ｌ-アスパラギン酸またはＬ-グルタミン酸、４０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンおよび４０ｍＭ Ｌ-アルギニンの間で同等であった。変化は、４０ｍＭ塩化ナトリウムについて最も低かった。同様に、７０ｍＭにおける％酸性変異体およびメインピークの変化は、Ｌ-ヒスチジンと、２０ｍＭ Ｌ-アスパラギン酸またはＬ-グルタミン酸と５０ｍＭグリシンとの組合せとの間で同等であった。変化は、７０ｍＭ塩化ナトリウムおよび７０ｍＭ Ｌ-アルギニンについて最も低かった。塩基性変異体％の変化は、表５に列挙した１０種の製剤全てについて最小であった。
ＤＬＳ
流体力学的直径の測定は、９６ウェルガラス底板上のＷｙａｔｔの動的光散乱（ＤＬＳ）装置を用いて行った。試料を５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度に希釈し、２０℃で１５８℃の散乱検出を用いて自動モードで運転し、５回の測定のために５秒間運転した。
図４０に見られるように、抗ＬＡＧ３抗体の直径のパーセント変化は、２０ｍＭ Ｌ-アスパラギン酸またはＬ-グルタミン酸、および、５０ｍＭグリシンとのその組み合わせについて最小であった。直径の変化は塩化ナトリウム（４０～７０ｍＭ）、Ｌ-アルギニン（４０～７０ｍＭ）およびＬ-ヒスチジン（４０～７０ｍＭ）について６～１１％であり、アッセイの変動内であった。
実施例３：抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤の安定剤スクリーニング
糖およびポリオールのような異なる安定剤の存在下で抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（１０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン７０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩中またはｐＨ５．８の７０ｍＭ塩化ナトリウム中での２５ｍｇ／ｍＬ）の安定性を評価するために、表６に記載したように１１の製剤を調製した。
Figure 0007503056000007
超性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＵＰ-ＳＥＣ）
試料の純度を、モノマーのパーセンテージ、ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）のパーセンテージを決定したＵＰ-ＳＥＣによって評価した。ＵＰ-ＳＥＣは、試料を移動相（１００ｍＭリン酸塩、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中で１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することによって、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣシステムＨ-ｃｌａｓｓ Ｂｉｏで行った。カラム温度を２５±３℃に維持し、定組成溶出を用いて流速を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈したサンプルを、Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ２００カラムおよびＵＶ検出器を備えたＵＰＬＣに注入した（５μＬ）。サンプル中のタンパク質をサイズによって分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸光によって検出した。
図２４に見られるように、抗ＬＡＧ３抗体の高分子量種のパーセント変化および％モノマー（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン中２５ｍｇ／ｍＬ）は、スクロース、トレハロース、ＰＥＧ４００およびグリセロールのような安定剤の存在下でより低いことが見出された。この効果は、抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩中で２５ｍｇ／ｍＬ）単独と比較して、より高いスクロースおよびトレハロース濃度（９％ｗ／ｖ）で顕著であった。同様に、抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ５．８、７０ｍＭ塩化ナトリウム中の２５ｍｇ／ｍＬ）単独と比較して、抗ＬＡＧ３抗体の高分子量種および％モノマー（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジンｐＨ ５．８、７０ｍＭ塩化ナトリウム中の２５ｍｇ／ｍＬ）のパーセント変化は、より高いスクロースおよびトレハロース濃度（９％ ｗ／ｖ）で顕著な効果を有するスクロースの存在下、より低いことが見出された。
荷電種の変化（ｃＩＥＦ）
Ｌ－アルギニン、Ｌ－ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下での抗ＬＡＧ３抗体の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）システムを用いて評価した。試料を、キャピラリーに注入する前にキャリア両性電解質と混合した。キャピラリーに電場を印加することによって、キャピラリー中のキャリア両性電解質によってｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、局所ｐＨ値が等電点ｐＨ(ｐＩ)値に等しいキャピラリー中の位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥシステム（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅからのｉＣＥ３）を用いてキャピラリー全体を完全にスキャンすることによって達成された。装置によって撮影された最後の画像は、データ定量化のために使用された。分離されたピークの面積パーセンテージは、タンパク質の総面積で割った個々の種の面積によって推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を囲む２つのｐＩマーカー間の距離を直線的に較正することによって推定される。操作パラメータは、１０℃でのオートサンプラー温度；フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、検出波長２８０ｎｍ、１５００Ｖで１分間の集束期間を含んだ。
１１の製剤を２ｍＬの無菌バイアル（２．０ｍＬ充填）に充填し、密封し、蓋をし、視覚的に検査した。１１の製剤の初期時点を２～８℃（光から保護）で保存し、熱ストレスを目的とする試料を、光から保護された容器中、乾燥加熱オーブン中、５０℃で１０日間反転させて置いた。図２５のデータは、初期と比較した熱ストレスに対する酸性変異体％の変化（差）、メインピークの変化％、ならびに塩基性変異体の変化％を報告する。
図２５に示すように、抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン、ｐＨ５．８中の２５ｍｇ／ｍＬ）は、５％スクロースの存在下で減少した化学的安定性を示す。トレハロース（５％ｗ／ｖおよび１０％ｗ／ｖ）、ソルビトール、ＰＥＧ ４００およびグリセロールの安定化効果は、同等であった。抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン中２５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍＭ塩化ナトリウムｐＨ５．８）は、スクロースの非存在下でより良好な化学的安定性を示した。
ＤＳＣ
表６に列挙した抗ＬＡＧ３抗体の１１の製剤の熱容量（ｃｐ）（ｋｃａｌ／℃）を、示差走査マイクロ熱量測定（ＤＳＣ）を１ｍｇ／ｍＬで用いて測定した。１１の製剤のＴｍ１、Ｔｍ２およびＴｏｎｓｅｔは、ｃｐ（ｃａｌ／ｍｏｌ／°Ｃ）と温度（°Ｃ）のプロットから決定した。
図２６に見られるように、Ｔｍ１、Ｔｍ２およびＴｏｎｓｅｔの数値に基づけば、スクロースおよびトレハロース（それぞれ５％ｗ／ｖ～９％ｗ／ｖ）は、抗ＬＡＧ３（１０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩 ｐＨ５．８中に２５ｍｇ／ｍｌ）だけでなく、抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ－ヒスチジン、７０ｍＭ 塩化ナトリウム ｐＨ５．８中に２５ｍｇ／ｍｌ）に対しても安定化効果があった。ソルビトール、ＰＥＧ ４００およびグリセロールの安定化効果は同等であった。
実施例４：抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤のポリソルベート濃度範囲研究
製剤マトリックス（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８中の２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体）中のポリソルベート８０の最適濃度を決定するために、８つの異なる製剤を調製し、それぞれは、表７に示すように、０ｍｇ／ｍＬ～１．０ｍｇ／ｍＬの範囲のポリソルベートを含有した。製剤を、３００ｒｐｍで７日まで撹拌振盪に暴露した。２つの製剤は、プラセボ（抗ＬＡＧ３抗体を含まない同じ製剤マトリックス中の０．１ｍｇ／ｍＬまたは１．０ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０、すなわち表７の製剤＃１）からなった。
Figure 0007503056000008
濁度
種々の濃度のポリソルベート８０を含む製剤マトリクス中の抗ＬＡＧ３抗体のコロイド安定性を評価するために、８つの製剤の濁度（ＯＤ350）を、紫外（ＵＶ）吸光分光光度計を用いて評価した。サンプルのＵＶ吸光度を、プレート吸光度について補正したパスチェックを用いて、波長３５０ｎｍで９６ウェルコスター透明プレート中で測定した。
図２７に見られるように、ポリソルベート８０の非存在下で、製剤マトリックス中の抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８中の２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３）は、撹拌時に濁度の増加を示した。製剤マトリックス（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８中の２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体）中の０．１ｍｇ／ｍＬ～１．０ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０濃度の存在下で、抗ＬＡＧ３抗体は安定であることが見出された。０．１ｍｇ／ｍＬ～１．０ｍｇ／ｍＬのプラセボのコロイド安定性に影響はなかった。
ＵＰ－ＳＥＣ
サンプルの純度は、モノマーのパーセンテージ、ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）のパーセンテージを決定したＵＰ-ＳＥＣによって評価した。ＵＰ-ＳＥＣを、サンプルを移動相（０．１Ｍリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、０．１Ｍリン酸ナトリウム二塩基性二水和物、０．１Ｍ Ｌ-アルギニン、ｐＨ７．０）中で１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することによって、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙシステムで行った。希釈したサンプルを、Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣカラムおよびＵＶ検出器を備えた液体クロマトグラフィーに注入した（５μＬ）。サンプル中のタンパク質をサイズによって分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸光によって検出した。
図２８に見られるように、ポリソルベート８０（０．１～１．０ｍｇ／ｍＬ濃度）の存在下では、可溶性凝集体レベル（％高分子量種）または断片化（％低分子量種）に変化はなく、％モノマーにも変化はなかった。抗ＬＡＧ３抗体は、製剤マトリックス中のポリソルベート８０の存在下でコロイド的に安定であることが見出された。
ＨＰ－ＩＥＸ
抗ＬＡＧ３抗体製剤中の電荷変異体を決定するために、高速イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ-ＩＥＸ）を使用した。分析は、Ｄｉｏｎｅｘ ＭａｂＰａｃ（登録商標）ＳＣＸ－１０，１０μｍ ４×２５０ｍｍカラムおよび２５ｍＭ ＭＥＳ、１４ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ ６．２５～２５ｍＭ ＭＥＳ、２２ｍＭ Ｔｒｉｓ、１００ｍＭ ＬｉＣｌ ｐＨ６．８５からの移動相勾配を使用して実施される。ＵＶ検出を２８０ｎｍで行う。この方法はまた、アッセイの信頼性および持続性を改善するために、任意のストリッピング緩衝液（１５ｍＭ ＥＤＴＡ ４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ ＣＨＥＳ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．１）を含む。サンプルは、１０μＬの注入容量で５ｍｇ／ｍＬで調製した。
図２９に見られるように、ポリソルベート８０（０．１～１．０ｍｇ／ｍＬ濃度）の存在下で、荷電種レベル（％酸性変異体、％メインピーク、％塩基性変異体）に変化はなかった。抗ＬＡＧ３抗体は、製剤マトリックス中のポリソルベート８０の存在下でコロイド的に安定であることが見出された。
実施例５：抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６のｐＨ範囲の研究
抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤Ａ：２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体；５０ｍｇ／ｍＬスクロース；０．２ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０；１０ｍＭヒスチジン緩衝液； ７０ｍＭ Ｌ-アルギニン-ＨＣｌを、５．８の標的製剤ｐＨを考慮して５．３～６．４のｐＨ範囲でスクリーニングした。図１４に見られるように、ｐＨ ５．３～ｐＨ６．４の間で、濃度、濁度、％高分子量種、％低分子量種または％モノマーに有意な変化はなかった。％酸性変異体（例えば、ｐＨ５．５で１７．２８％からｐＨ６．０で１４．１０％）の減少は％メインピーク（例えば、ｐＨ５．５で６４．０％からｐＨ６．０で６６．９％）の増加の中で、ｐＨ５．３からｐＨ６．４まで見られた。Ｚ-ａｖｅ流体力学的直径の変化は、ｐＨ５．３からｐＨ６．４まで最小（１ｎｍ未満）であった。約６．３の等電点に近いｐＨ（すなわち、ｐＨ６．０およびｐＨ６．４）で、１ミリリットル当たりの亜可視微粒子のわずかな増加（≧５μｍ、≧１０μｍ、および≧２５μｍサイズ範囲）が認められた。全体として、抗ＬＡＧ３抗体は、ｐＨ５．３とｐＨ６．４との間で安定であることが見出され、標的製剤ｐＨとしてのｐＨ５．８の選択を確認した。
実施例６：抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６製剤の抗酸化剤スクリーニング
製剤中の抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン、７０ｍＭ Ｌ-アルギニン塩酸塩、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８中の２５ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体）に対する抗酸化剤の効果を決定するために、製剤中の３つの異なるレベルのＬ-メチオニンを評価した。４つの異なる製剤を、表８に列挙されるように調製し、２ｍＬのタイプ１ガラスバイアルに充填し（２．２ｍＬ）、適切に密封した。４つの製剤を、０．２ＩＣＨ、０．５ＩＣＨ、および１ＩＣＨ光ストレス（紫外線および冷白色光または可視光）に暴露した。４つの製剤（コントロール）の各々についての暗対照（箔で覆われている）もまた、１ ＩＣＨ光ストレスに曝露した。
Figure 0007503056000009

Figure 0007503056000010

濁度
４つの製剤の濁度（ＯＤ３５０）を、紫外（ＵＶ）吸光分光光度計を用いて評価した。サンプルのＵＶ吸光度を、プレート吸光度について補正したパスチェックを用いて、波長３５０ｎｍで９６ウェルコスター透明プレート中で測定した。
図３０に見られるように、Ｌ-メチオニン（５ｍＭ～１０ｍＭ）は、抗ＬＡＧ３抗体（２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、１０ｍＭのＬ-ヒスチジン、７０ｍＭのＬ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）を、表８に列挙されるコントロールと比較して、最適量として１０ｍＭのＬ-メチオニンを用いてコロイド的に安定化することが見出された。１ ＩＣＨ露光で暗対照サンプルのコロイド不安定性に影響はなかった。
ＵＰ－ＳＥＣ
サンプルの純度は、モノマーのパーセンテージ、ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）のパーセンテージを決定したＵＰ-ＳＥＣによって評価した。ＵＰ-ＳＥＣは、試料を移動相（１００ｍＭリン酸塩および１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０）中で１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することによって、ＵＰＬＣ ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス系で行った。希釈したサンプルを、プロテインＢＥＨ ＳＥＣカラムおよびＵＶ検出器を備えた液体クロマトグラフィーに注入し（５μＬ）、流速は０．５ｍＬ／分であった。試料中のタンパク質をサイズ別に分離し、２１４ｎｍおよび２８０ｎｍでのＵＶ吸光によって検出した。
図３１に見られるように、Ｌ-メチオニン（５ｍＭ～１０ｍＭ）は、表８に列挙されるコントロールと比較して、抗ＬＡＧ３抗体製剤（２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、１０ｍＭのＬ-ヒスチジン、７０ｍＭのＬ-アルギニン、５％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ５．８）中の可溶性凝集体形成（％ＨＭＷ）を減少させることが見出され、１０ｍＭのＬ-メチオニンが最適量である。１ ＩＣＨ光暴露の際に、暗対照サンプルについて可溶性凝集体の形成は見られなかった。
ＨＰ－ＩＥＸ
抗ＬＡＧ３抗体製剤中の電荷変異体を決定するために、高速イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ-ＩＥＸ）を使用した。分析は、Ｄｉｏｎｅｘ ＭａｂＰａｃ（登録商標）ＳＣＸ－１０，１０μｍ ４×２５０ｍｍカラムおよび２５ｍＭ ＭＥＳ、１４ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ６．２５～２５ｍＭ ＭＥＳ、２２ｍＭ Ｔｒｉｓ、１００ｍＭ ＬｉＣｌ ｐＨ６．８５からの移動相勾配を使用して実施される。ＵＶ検出を２８０ｎｍで行う。この方法はまた、アッセイの信頼性および持続性を改善するために、任意のストリッピング緩衝液（１５ｍＭ ＥＤＴＡ ４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ ＣＨＥＳ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．１）を含む。サンプルは、１０μＬの注入容量および０．５～１．０ｍＬ／分の流速で、５ｍｇ／ｍＬで調製した。
図３２に見られるように、５ｍＭ～１０ｍＭのＬ-メチオニンは、コントロールと比較して、抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭのＬ-ヒスチジン中の２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３、７０ｍＭのＬ-アルギニン塩酸塩、５％ｗ／ｖスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０）に対する１ ＩＣＨ光曝露まで、荷電種（％酸性変異体および％塩基性変異体）の増加を減少させるのに有効であることが見出された。１ ＩＣＨ暗対照サンプルについては、荷電種に影響はなかった。
還元ペプチドマッピング
抗ＬＡＧ３抗体の酸化的翻訳後修飾の酸化レベルの変化を、還元ペプチドマッピングを用いて評価した。還元ペプチドマッピングを、移動相Ａ（ＬＣ／ＭＳグレード水中０．１％トリフルオロ酢酸）、移動相Ｂ（ＬＣ／ＭＳグレードアセトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸）を有するＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈ Ｂｉｏ Ｃｌａｓｓシステムで行った。注入容量は、０．２ｍＬ／分の流速および２１４ｎｍの検出吸光度を有するＨＡＬＯペプチドＥＳ-Ｃ１８カラムを装備した５０μＬである。質量分析は、キャピラリー３．０、サンプルコーン３０、ソース温度１２０℃、コーンガス３０、脱溶媒和ガス、ｍ／ｚ範囲１００～２００、ＭＳ収集２～１１０分からなった。試料を還元し、カラム操作の前に適切な試薬でアルキル化した。ブランク（非サンプル）消化を行って、目的の領域に溶出する非サンプル関連ピークを同定した。
図３３に見られるように、５ｍＭ～１０ｍＭのＬ-メチオニンは、コントロールと比較して、１ ＩＣＨ光暴露時の抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭのＬ-ヒスチジン中の２５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体、７０ｍＭのＬ-アルギニン塩酸塩、５％ｗ／ｖスクロース、０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０）の翻訳後修飾の酸化を減少させるのに有効であることが見出された。
実施例７：抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６の高濃度試験
ｐＨ５．８の３つの異なる緩衝液（ヒスチジン、酢酸塩、およびクエン酸塩；それぞれ７０ｍＭのＬ-アルギニン塩酸塩を含有する）およびＬ-ヒスチジン、７０ｍＭのＬ-アルギニン塩酸塩、ｐＨ５．８を含有する製剤中の抗ＬＡＧ３抗体の高濃度（２００ｍｇ／ｍＬ）実現可能性を評価するために、異なる安定剤の存在下で９つの製剤を表９に列挙するように調製した。９つの製剤の各々を９６ウェルプレートに充填し、適切に密封した。製剤を５０℃で１０日間、乾燥加熱オーブン中でストレスをかけた。分析は、最初のサンプルおよびストレスを受けたサンプルについて行った。
Figure 0007503056000011
濁度
９つの製剤の濁度（ＯＤ３５０）を、紫外（ＵＶ）吸光分光光度計を用いて評価した。サンプルのＵＶ吸光度を、プレート吸光度について補正したパスチェックを用いて、波長３５０ｎｍで９６ウェルコスター透明プレート中で測定した。
図３４に見られるように、抗ＬＡＧ３抗体（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン ７０ｍＭ Ｌ-アルギニン中の２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体、ｐＨ５．８）のコロイド安定性（ＯＤ３５０）は、安定剤としての７０ｍＭ Ｌ-メチオニンの存在下で、コントロール（１０ｍＭ Ｌ-ヒスチジン７０ｍＭ Ｌ-アルギニン中の２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体、ｐＨ５．８）と比較して低い。２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体製剤中の７０ｍＭ Ｌ-グルタミンおよび７０ｍＭプロリンの安定化効果（コロイド）は同等である。同様に、２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体製剤中の５％ｗ／ｖグリセロールおよび７０ｍＭ Ｌ-グリシンの安定化効果（コロイド）は、同等である。２００ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体のコロイド安定性は、５％ｗ／ｖスクロースの存在下で比較的高かった。
ＵＰ－ＳＥＣ
サンプルの純度は、モノマーのパーセンテージ、ならびに高分子量種（ＨＭＷ）および後期溶出ピーク（ＬＭＷ種）のパーセンテージを決定したＵＰ-ＳＥＣによって評価した。移動相（１００ｍＭリン酸塩、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ ７．０）中でサンプルを１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することによって、Ａｃｑｕｉｔｙ Ｈクラス（ＤＳ）上でＵＰ-ＳＥＣを行った。カラム温度を２５±３℃に維持し、定組成溶出を用いて流速を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈したサンプルを、Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ２００カラムおよびＵＶ検出器を備えたＵＰＬＣに注入した（５μＬ）。サンプル中のタンパク質をサイズによって分離し、２１４ｎｍでのＵＶ吸光によって検出した。
図３５に見られるように、７０ｍＭのＬ-アルギニン塩酸塩の存在下での１０ｍＭのＬ-ヒスチジン緩衝液は、高濃度の抗ＬＡＧ３抗体製剤（２００ｍｇ／ｍＬ）について、１０ｍＭのＬ-酢酸または１０ｍＭのクエン酸緩衝液と比較して、可溶性凝集物レベルを減少させるのに有効である。５％（ｗ／ｖ）スクロースは、可溶性凝集体レベルを低下させる安定剤として有効であり、５％（ｗ／ｖ）グリセロールが続く。アミノ酸、すなわち、７０ｍＭ Ｌ-グルタミン、７０ｍＭ Ｌ-グリシン、７０ｍＭプロリンおよび７０ｍＭ Ｌ-メチオニンの安定化効果は同等である。
荷電種（ｃＩＥＦ）の変化
Ｌ－アルギニン、Ｌ－ヒスチジンまたは塩化ナトリウムの存在下での抗ＬＡＧ３抗体の荷電不均一性および等電点（ｐＩ）の変化を、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）システムを用いて評価した。試料を、キャピラリーに注入する前にキャリア両性電解質と混合した。キャピラリーに電場を印加することによって、キャピラリー中のキャリア両性電解質によってｐＨ勾配が生成され、タンパク質分子は、局所ｐＨ値が等電点ｐＨ（ｐＩ）値に等しいキャピラリー中の位置に移動した。分離されたタンパク質の検出は、ｉＣＥシステム（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅからのｉＣＥ３）を用いてキャピラリー全体を完全にスキャンすることによって達成された。装置によって撮影された最後の画像は、データ定量化のために使用された。分離されたピークの面積パーセンテージは、タンパク質の総面積で割った個々の種の面積によって推定される。タンパク質のｐＩ値は、タンパク質を囲む２つのｐＩマーカー間の距離を直線的に較正することによって推定される。試料を５ｍｇ／ｍＬで調製し、操作パラメータには、１０℃でのオートサンプラー温度；フルオロカーボン（ＦＣ）被覆カートリッジ、検出波長２８０ｎｍ、１５００Ｖで１分間の集束時間を含めた。
２００ｍｇ／ｍＬ抗ＬＡＧ３抗体の化学的安定性は、１０ｍＭ Ｌ－ヒスチジンならびに１０ｍＭクエン酸緩衝液中で、ｐＨ５．８の７０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩の存在下での１０ｍＭ酢酸緩衝液と比較して同等であった。５％（ｗ／ｖ）グリセロールは、荷電種（％酸性および塩基性変異体）の変化を減少させるのに有効であり、５％（ｗ／ｖ）スクロース（％塩基性変異体）が続く。アミノ酸、すなわち、７０ｍＭ Ｌ－グルタミン、７０ｍＭ Ｌ－グリシン、７０ｍＭプロリンおよび７０ｍＭ Ｌ－メチオニンの安定化効果は同等であった。
例８：抗ＰＤ－１および抗ＬＡＧ３抗体の共－製剤の安定性試験
抗ＰＤ-１抗体（ＭＫ-３４７５、ペンブロリズマブ、重鎖配列番号：１０、および軽鎖配列番号：５）および抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６（重鎖配列番号：５７、および軽鎖配列番号：３７）の共製剤を表１０のように調製した。
Figure 0007503056000012
熱安定性研究
熱安定性試験は、５℃（周囲湿度）、２５℃（６０％湿度）、および４０℃（７５％相対湿度）貯蔵条件で、１２週間まで１３ｍｍ血清栓を有する２ｍＬバイアル中のＦ１～Ｆ６の１．０ｍＬ液体製剤を使用して行った。安定性サンプルを濁度および混合モードクロマトグラフィー（ＭＭＣ）によって評価した。
混合モードクロマトグラフィー
混合モードクロマトグラフィーは、共製剤中の個々の抗体（抗ＬＡＧ３抗体および抗ＰＤ－１抗体）の分離を可能にし、また、共製剤中の抗ＬＡＧ３抗体凝集体および抗ＰＤ－１凝集体ならびに酸化のモニタリングを可能にした。ＭＭＣでは、各ｍＡｂについてのモノマーのパーセンテージを、各ｍＡｂのメインピーク面積によって決定した。抗ＬＡＧ３抗体について、高分子量（凝集体）および低分子量種（フラグメント）のパーセンテージを計算した。抗ＰＤ-１抗体について、高分子量（凝集体）および低分子量種（フラグメント）ならびに酸化種（Ｏｘ１およびＯｘ２）のパーセンテージを、各種に対応する個々のピーク面積に基づいて計算した。混合モードクロマトグラフィーは、サンプルを移動相（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で１．０ｍｇ／ｍＬに希釈することによって行った。カラム温度を２５℃に維持し、定組成溶出を用いて流速を０．５ｍＬ／分に維持した。希釈したサンプルを、カスタマイズしたＳｅｐａｘ Ｚｅｎｉｘ ＳＥＣ-３００カラムを備えたＨＰＬＣに注入した（１５μＬ）。試料中の異なる成分をサイズおよび疎水性の両方によって分離し、２８０ｎｍでのＵＶ吸光によって検出した。
濁度測定
濁度分析は、ＳｐｅｃｔｒＭａｘ Ｍ５プレートリーダー上のＵＶ-可視分光法を用いて安定性サンプルについて行った。吸光度を３５０ｎｍおよび５００ｎｍで測定した。濁度は、３５０ｎｍでの吸光度から５００ｎｍでの吸光度を差し引くことによって計算した。
結論
共製剤（Ｆ３、Ｆ５およびＦ６）は、個々の製剤と同様またはより良好な安定性を示した（図２２および２３）。製剤Ｆ２は４０℃の貯蔵で、製剤Ｆ４よりも比較的低い濁度およびモノマー損失を経時的に示し、抗ＰＤ-１抗体は、アルギニンを含む製剤においてより良好な安定性を示した（図２２および２３）。Ｆ５およびＦ６共製剤は、個々の製剤と比較して、４０℃で１２週間貯蔵した後の経時的なモノマーの変化が最小であった。Ｌ-メチオニンは、共製剤（Ｆ５、Ｆ６）におけるモノマー損失を最小限にするのに役立った（図２３）。
抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６およびペンブロリズマブ（ＭＫ-３４７５）薬物物質（ＤＳ）を、以下の比、１：１（１２Ｄ）、３：１（１２Ｅ）、４：１（１２Ｆ）および５：１（１２Ｇ）で混合した。製剤１２Ａおよび１２Ｃは、それぞれ、元の組成におけるＡｂ６単体（ＳＥ）およびＭＫ-３４７５単体（ＳＥ）コントロールである。製剤１２Ｂは、１２Ａの賦形剤組成物中のコントロールＭＫ-３４７５ＳＥである。１２Ｆ－１２Ｈは、Ａｂ６とＭＫ－３４７５の比が４：１であり、希釈剤がある（１２Ｈ）及び希釈剤がない（１２Ｆ）共製剤である。希釈剤を製剤組成物に添加して、Ａｂ６組成物（７０ｍＭアルギニン濃度を有する）を回復させた。
Figure 0007503056000013
製剤を、０．２２μｍ酢酸セルロース膜フィルタで濾過した。各製剤の濾液を、２．２ｍＬ充填／バイアルで２Ｒバイアルに充填した。製剤を、５℃、２５℃および４０℃で１０日間安定性について段階分けした。製剤の安定性を、濁度、亜可視微粒子総タンパク質濃度、凝集、ＭＫ-３４７５の酸化、純度および電荷プロフィールを含む品質属性をチェックすることによって分析した。製剤１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｆおよび１２Ｈの安定性を主に評価した。
濁度および総タンパク質濃度
濁度は、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ ＵＶ Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（ＭＲＫ０４０６６６１）を用いて測定した。２００μＬサンプルを９６ウェルコスター透明プレートに充填し、吸光度を３５０ｎｍおよび５００ｎｍで測定し、パスチェックをプレート吸光度０．０２５および０．０２０でそれぞれ補正した。
濃度は、Ｑｕｉｃｋ Ｓｌｏｐｅを用いてＳｏｌｏＶＰＥ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｐａｔｈｌｅｎｇｔｈ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ（ＭＲＫ０４１６０８３）を用いて測定した。全タンパク質濃度を測定するために、（ＭＫ-３４７５については１．４２、Ａｂ６については１．４５）の加重比固有平均吸光係数および２８０ｎｍの波長を使用した。
Figure 0007503056000014

Figure 0007503056000015

全ての試料は透明で、無色であり、目に見える粒子は全くなかった。濁度に対するＡｂ６：ＭＫ-３４７５比の影響はなかった。共製剤中の２００～１０００ｍｇのＡｂ６用量範囲を有する全てのプロトタイプは、全ての安定性条件で同様の濁度を示した。マトリックスの組成は濁度に影響しない。
ＵＰ－ＳＥＣによる集計分析
ＵＰサイズ排除クロマトグラフィー（ＵＰ-ＳＥＣ）を用いて、総タンパク質凝集および高分子量（ＨＭＷ）、低分子量（ＬＭＷ）および総モノマー含量の同定を評価した。試料および参照物質の両方を５ｍｇ／ｍＬに希釈し、２００μＬの希釈試料を使用した。移動相は、５０ｍＭリン酸ナトリウム、４５０ｍＭアルギニン塩酸塩、ｐＨ７．０であった。０．５ｍＬ／分の定組成流速、２８０ｎｍの検出波長、６μＬの注入容量および３０℃のカラム温度を使用した。各試験サンプルについて、モノマー（Ｍｏｎ）、ＨＭＷ種およびＬＭＷ種（以前は後期溶出として知られていた）ピークの面積パーセントを計算した。
％モノマー＝ＰＭｏｎ×１００÷ΣＰ（すべてのピーク）
％ＨＭＷ種＝ＰＨＭＷ×１００÷ΣＰ（全てのピーク）
％ＬＭＷ種＝ＰＬＭＷ×１００÷ΣＰ（すべてのピーク）
ＰＭｏｎ、ＰＨＭＷ、ＰＬＭＷは、個々のピークの面積であり、ΣＰは、全てのピーク面積の合計である（アーチファクトピーク、空隙体積に現れるピーク、および緩衝液関連ピークを除く）。
ＭＫ-３４７５単独を含む製剤＃１２Ｂは、高分子量（ＨＭＷ）種の最高量を示す（図４１および４２を参照のこと）。７０ｍＭアルギニンの存在は、ＭＫ-３４７５ ＨＭＷ種のレベルの上昇をもたらした。共製剤中のＡｂ６：ＭＫ-３４７５の比が（１：１）から（５：１）に増加することにつれて、ＨＭＷ種のレベルは減少する。Ａｂ６の増加した濃度は、凝集（ＨＭＷ形成）に対してＭＫ-３４７５を安定化するようである。１２Ｃ製剤中のＭＫ-３４７５は、１２Ａ製剤中のＡｂ６と比較して、より高い凝集傾向を有する。８００：２００の共製剤プロトタイプ希釈剤あり（１２Ｈ）または希釈剤なし（１２Ｆ）では、測定可能な差は観察されなかった。
マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）による粒子径解析
１ミクロン超、＞２ミクロン、＞５ミクロン、＞１０ミクロン、＞２５ミクロン、＞５０ミクロンの範囲の亜可視微粒子を、Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ Ｍｉｃｒｏ－Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍを用いて最低３反復を分析するのに十分なサンプルをプールすることにより、ＭＦＩを用いて分析した。
Figure 0007503056000016
粒子数は、低濃度製剤（１２Ｄおよび１２Ｅ）と比較して、高濃度製剤（単体および共製剤）でより高かった。全ての粒径についての計数の有意な増大が、１０日間にわたる５０℃でＡｂ６単体（１２Ａ）について観察された。同様に、より高いタンパク質含量（１２Ｆ、１２Ｇおよび１２Ｈ）を有する共製剤は、製剤１２Ｄおよび１２Ｅと比較して、すべての貯蔵条件ですべての粒子サイズについてより高いカウントを示した。しかし、≧１０μｍおよび≧２５μｍの粒子数は、５０℃時のＡｂ６単体（１２Ａ）で観察されたものよりも有意に低かった。
共製剤中のＭＫ－３４７５酸化の定量のための疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）
ＨＩＣを用いて、共製剤中のＭＫ-３４７５の全ての酸化生成物の同定および定量を評価した。使用したカラムはＴｏｓｏｈ Ｐｈｅｎｙｌ-５ＰＷ １０μｍ ７．５×７５ｍｍであり、カラム温度は３０℃を使用した。サンプルを希釈して、５ｍｇ／ｍＬの総タンパク質濃度を得、総サンプル容量は少なくとも２００μＬであった。移動相Ａ：５ｍＭ Ｎａ３（ＰＯ４）中の２％ＡＣＮ、ｐＨ７．０、および移動相Ｂ：４００ｍＭ硫酸アンモニウム中の２％ＡＣＮ、５ｍＭ Ｎａ３（ＰＯ４）、ｐＨ６．９、および注入容量１０μＬの組合せを使用する勾配法である。２８０および２１４ｎｍの検出波長を使用し、結果を２８０ｎｍでのみ報告した。結果を報告するために、プレピーク３の相対％面積は、プレピーク３の％に等しい。プレピーク１および２は、プレピーク１＋２の％に等しくなるように合計される。
Figure 0007503056000017

Ａｂ６／ＭＫ-３４７５共製剤（１２Ｈ）は、ＭＫ-３４７５におけるＦａｂ(Ｍｅｔ１０５）の酸化の最高の程度を示す。（１２Ｆ）組成物は、より低い程度の酸化を示す。
共製剤中の個々のｍＡｂの電荷分布を評価するためのイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）を用いて、共製剤の各ｍＡｂ中の全ての荷電種およびメイン種の同定および定量を評価した。サンプルの各々を希釈して、１２５μＬの最大注入体積で５０μｇの総タンパク質量を得る。３５℃のカラム温度を使用するＤｉｏｎｎｅｘ ＭａｂＰａｃ ＳＣＸ-１０ １０ｕｍ、４×２５０ｍｍカラムを使用した。使用した移動相は、（Ａ）：５ｍＭ ＭＥＳ、１４ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ６．２５（Ｂ）：２０ｍＭ Ｎａ３（ＰＯ４）、９５ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．０、４％アセトニトリル（ＡＣＮ）および（Ｃ）：１５ｍＭ ＥＤＴＡ、４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ ＣＨＥＳ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．１の組合せであった。全実行時間７０分の勾配法を２８０ｎｍの検出波長で使用した。共製剤中の各ｍＡｂの酸性、塩基性およびメイン種を同定し、この方法を用いて定量した。全体として、温度が上昇することにつれて、電荷プロファイルは変化し、５０℃で最高の変化が観察される（表１５参照）。５℃、４０℃、５０℃で１０日後、８００：２００の共製剤プロトタイプでは、希釈剤有り（１２Ｈ）、無（１２Ｆ）にかかわらず、メインピークまたは酸性および塩基性変異体に測定可能な差は観察されなかった。
Figure 0007503056000018
キャピラリー電気泳動－ＳＤＳ（ＣＥ－ＳＤＳ）による純度分析
ｍＡｂ純度分析は、非還元ＣＥ-ＳＤＳを用いて行った。内部方法プロトコールに従って試料を調製し、ヒートブロック上で７０℃で１０分間インキュベートした。次いで、試料を周囲温度で平衡化し、１０，０００ｇで遠心分離し、９５ｕＬの試料を分析に使用した。
Figure 0007503056000019
例９：共製剤Ａｂ６Ａの長期保存試験（抗ＬＡＧ３抗体及び抗ＰＤ－１抗体の比４：１）
Ａｂ６Ａ注射液は、静脈内注入のために希釈を必要とする、無菌の防腐剤を含まない溶液である。Ａｂ６Ａは、抗ＬＡＧ３抗体Ａｂ６および抗ＰＤ-１抗体ＭＫ-３４７５（ペンブロリズマブ、重鎖配列番号１０、および軽鎖配列番号５）の固定用量組合せであり、各単回使用バイアルは、２．０ｍＬ充填物中に４０ｍｇのＡｂ６および１０ｍｇのＭＫ-３４７５を含有する。製剤組成は、０．５６ｍｇ／ｍＬ Ｌ－ヒスチジン、１．３５ｍｇ／ｍＬ－ヒスチジン一塩酸塩一水和物、１１．８０ｍｇ／ｍＬ－Ｌ－アルギニン塩酸塩、１．１９ｍｇ／ｍＬ－メチオニン、５４．０ｍｇ／ｍＬスクロース、０．２０ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０、ｐＨ５．８中の、２０．０ｍｇ／ｍＬ Ａｂ６、５．０ｍｇ／ｍＬ ＭＫ－３４７５である（実施例８の製剤１２Ｆ）。推奨保管条件は、５℃±３℃（２～８℃）で、遮光する。
ガラスバイアル中のＡｂ６Ａ医薬品の３ヵ月間の安定性データは、推奨される５℃（５℃±３℃）の保存条件で保存した場合、本質的に変化しないままである。２５℃（２５℃、６０％ＲＨ（相対湿度））の加速条件で保存した場合、３ヶ月まで、いくつかの属性にわずかな変化が観察された。４０℃(４０℃、７５％ＲＨ）のストレス条件での変化は、２５℃での変化よりも実質的である。以下のアッセイは、全ての温度条件（４０℃、７５％ＲＨのストレス条件を含む）で３ヶ月の時点を通して本質的に変化しないままである：外観および可視粒子、透明度および乳白色度、色、効力、タンパク質濃度、ｐＨ、ならびに微粒子物質。利用可能な安定性データは、５℃±３℃で１２ヶ月の保存期間で保存した場合の本製品の使用を支持する。
以下に、ＩＣＨガイドラインに従い、保存条件５℃±３℃（反転）、加速条件２５℃（２５℃±２℃、相対湿度６０％、反転）、ストレス条件４０℃（４０℃±２℃、相対湿度７５％、反転）におけるＡｂ６Ａ医薬品の３ヵ月間の安定性データを要約する。
外観と可視粒子
外観および可視粒子は、透明なバイアル中の試料用の白色光源を備えたライトボックスを用いて行った。今日までに評価されたすべての条件下での製剤Ａｂ６Ａの外観および可視粒子の試験結果は、「可視粒子を本質的に含まない液体」である。観察は、ストレージ条件または時間の関数として変化しない。
透明度と乳白色度
ＨＡＣＨ（商標）２１００ＡＮ濁度計を使用して、透明度および乳白色度を測定した。ＨＡＣＨ（商標）ＳｔａｂｌＣａｌ参照溶液（＜０．１、１．０、３．０、６．０、１０．０、１８．０、および３０．０ＮＴＵ）および精製水（ブランクとして）を、サンプル分析の前にシステム適合性試験（ＳＳＴ）に使用した。製剤Ａｂ６Ａの透明度および乳白色度は、全ての条件において、最初の時点から３ヶ月の時点まで変化しなかった。
ＨＰ－ＩＥＸによる荷電バリアント
高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ-ＩＥＸ）を、Ｄｉｏｎｅｘ ＭａｂＰａｃ（登録商標）ＳＣＸ-１０，１０ｕｍ ４×２５０ｍｍ、部品番号０７４６２５を使用して、２４８９ ＵＶ Ｖｉｓ検出器を有するＷａｔｅｒｓ ｅ２６９５分離モジュールで行った。移動相Ａは、２０ｍＭ ＭＥＳ、１４ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．２５）を含む。移動相Ｂは２０ｍＭ ＮａＰＯ４、９６ｍＭ ＮａＣｌ、４％アセトニトリル（ｐＨ８．０）を含み、移動相Ｃは、１５ｍＭ ＥＤＴＡ、４０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ ＣＨＥＳ、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ ８．１を含む。カラム温度およびサンプル温度は、それぞれ３５℃および４℃に設定した。２８０ｎｍでのＵＶ検出を用いて０．５ｍＬ／分の流速で設定した勾配で７０分の全運転を行った。各分子クロマトグラム（Ａｂ６およびＭＫ-３４７５）について、相対面積パーセントを５つのピーク（酸性２、酸性１、メイン、塩基性１および塩基性）について計算し、各抗体について３つのカテゴリー（酸性変異体、メインおよび塩基性変異体）のみを有するように組み合わせた。さらに、各抗体についての各群の％が計算されるように、全ピーク％が各抗体について１００％に等しくなるように標準化される。ＭＫ-３４７５およびＡｂ６の酸性および塩基性ピークは、イオン交換カラムによって分離され、メインピークに対してより早い（酸性変異体）またはより遅い（塩基性変異体）のいずれかで溶出する。図４７は、代表的なクロマトグラムを示す。
ＨＰ－ＩＥＸ法は、Ａｂ６とＭＫ－３４７５の両方の電荷変異体を分離する組合せ法である。Ａｂ６（図１）およびＭＫ-３４７５（図４）酸性変異体の両方について、安定性データの３ヶ月にわたる５℃条件への変化はない。２５℃条件ではＡｂ６およびＭＫ-３４７５酸性変異体の両方についてわずかな増加があり、４０℃条件では両方について劇的な増加がある。
５℃でのＡｂ６およびＭＫ－３４７５の両方のメイン種は、３ヶ月にわたって変化を示さない（図２および図５）。２５℃でのメイン種のわずかな減少があり、これは酸性変異体の増加と相関し、Ａｂ６とＭＫ－３４７５の両方で４０℃でのメイン種の劇的な減少がある。
Ａｂ６についての塩基性変異体は、５℃および２５℃の両方の条件で３ヶ月まで変化を示さない（図３）。Ａｂ６塩基性変異体の４０℃では、３ヶ月まで塩基性種のわずかな増加がある。ＭＫ-３４７５についての塩基性変異体はまた、３ヶ月までの５℃条件の両方で変化を示さない（図６）。２５℃でのＭＫ-３４７５についての塩基性変異体はわずかな減少を示し、４０℃は、安定性について３ヶ月にわたってより大きな減少を示す（表１７、表１８、および表１９）。
Figure 0007503056000020
Figure 0007503056000021

Figure 0007503056000022

Figure 0007503056000023

Figure 0007503056000024

ＵＰ－ＳＥＣによる純度
サイズ排除クロマトグラフィーは、サイズに基づく分離技術である。Ａｂ６およびＭＫ-３４７５モノマーはサイズが類似しており、したがってモノマーは共溶出する。共溶出モノマーからのＨＭＷ種の十分な分離が達成され、したがって、この方法は、Ａｂ６Ａ医薬品（ＤＰ）の純度を決定するために適切である。Ａｂ６Ａ ＤＰは、ＵＰ-ＳＥＣによって分離された低レベルの高分子量（ＨＭＷ）種を含有する。低分子量（ＬＭＷ）は通常検出されるが、低レベルである。逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ-ＨＰＬＣ）を、ＨＡＬＯ Ｃ４ ＵＨＰＬＣ ＣＯＬＵＭＮ、２．１×７５ｍｍを有するＷａｔｅｒｓ Ｈ-Ｃｌａｓｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣを用いて行った。移動相は、０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸を含む水（移動相Ａ）および０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル（移動相Ｂ）であった。ＭＫ-３４７５およびＡｂ６の参照標準を、水で４ｍｇ／ｍＬに調製し、そして標準曲線を生成するために使用し、そして全てのサンプルを、４ｍｇ／ｍＬに希釈し、そして測定のために５ｕＬを注入した。カラムおよびオートサンプラーをそれぞれ７５℃および４℃に維持した。ＵＶ検出を２８０ｎｍで行い、データ分析のためにＷａｔｅｒ Ｅｍｐｏｗｅｒソフトウェアを使用した。一般に、ＭＫ-３４７５およびＡｂ６の濃度は、測定において確立された標準曲線に基づくことができる。
Ａｂ６ＡについてのＵＰ-ＳＥＣは、高分子量種については５℃条件で変化を示さず、２５℃ではわずかな増加しか示さず、これに対応して、安定性について３ヶ月にわたるモノマーのわずかな減少を示した（図７および図８）。４０℃の条件では、高分子量種の増加があり、それに対応して％モノマーが３ヶ月まで減少する。
非還元(ＮＲ)ＣＥ-ＳＤＳおよび還元（Ｒ）ＣＥ-ＳＤＳ分析
非還元（ＮＲ）ＣＥ-ＳＤＳおよび還元（Ｒ）ＣＥ-ＳＤＳ分析は、Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡ８００ Ｐｌｕｓ ＣＥ機器および１００×２００μｍの開口を有する素の溶融シリカキャピラリー（全長３０．２ｃｍおよび内径５０μｍ）を利用する。ＩｇＧ純度／異質性アッセイキットを使用して試料を調製し、そして遠近法プロトコールに従って機器で分析する前に処理し、ここで、還元条件下で、ｍＡｂ試料を１．０％ ＳＤＳの存在下で変性させ、そして５％β-メルカプトエタノールを使用して還元し、そして非還元条件下で、ｍＡｂ試料を１．０％ ＳＤＳの存在下で変性させ、そしてＮ-エチルマレイミド（ＮＥＭ）で処理し、続いて７０℃で１０分間加熱した。分離は１５ｋＶで４０分間行い、ＵＶ検出は２２０ｎｍで行い、Ｗａｔｅｒ Ｅｍｐｏｗｅｒソフトウェアをデータ分析に使用した。ＮＲ-ＣＥ-ＳＤＳについては、完全なＩｇＧ（純度）および総低分子量不純物をパーセンテージとして報告した。Ｒ-ＣＥ-ＳＤＳについては、総純度（重鎖＋軽鎖）および総不純物をパーセンテージとして報告した。
Ａｂ６Ａ医薬品については、非還元ＣＥ－ＳＤＳを、安定性について３ヶ月まで実施した。５℃の条件では変化は観察されなかった（図９および図１０）。２５℃の条件では、総低分子量種がわずかに増加し、それに対応して無傷ＩｇＧが減少した。４０℃での総低分子量種のより劇的な増加があり、安定性について３ヶ月までの無傷ＩｇＧの劇的な減少があった。
Ａｂ６Ａ医薬品については、還元ＣＥ－ＳＤＳを、安定性について３ヵ月まで実施した。５℃の条件では変化は観察されなかった（図４３および図４４）。２５℃の条件では、総不純物がわずかに増加し、それに対応して重鎖＋軽鎖が減少した。４０℃での総不純物のより劇的な増加があり、重鎖＋軽鎖の安定性について３ヶ月までの劇的な減少があった。
微粒子物質
Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ Ｍｉｃｒｏ－Ｆｌｏｗ Ｉｍａｇｉｎｇシステムを用いて、亜可視微粒子同定を行った。各サンプルを、穏やかに注ぎ、試験前に３０分間、周囲条件下でチューブを乱さずに置くことによって、複数の容器（最低３つ）から５０ｍＬのポリプロピレンチューブにプールした。＞１ミクロン、＞２ミクロン、＞５ミクロン、＞１０ミクロン、＞２５ミクロン、＞５０ミクロンの範囲の亜可視微粒子を、機器ソフトウェアＭＶＳＳ（バージョン２-Ｒ５．０．０．４３．５８６４）に標準フィルタを適用することによって分析した。
ＨＩＡＣによる微粒子物質データを、Ａｂ６Ａ医薬品について計算した。５℃、２５℃、および４０℃の条件では、結果が初期から３ヵ月まで、容器当たり≦６０００粒子／容器≧１０μｍおよび≦６００粒子／容器≧２５μｍの合格基準をはるかに下回った。報告結果である≧２μｍおよび≧５μｍの粒子サイズでは、３ヶ月までのすべての条件にわたって、データに大きな傾向は観察されなかった。
ＨＰ－ＨＩＣ ＭＫ－３４７５酸化
疎水性相互作用クロマトグラフィーＨＰＬＣ(ＨＰ-ＨＩＣ）をＡｇｉｌｅｎｔで行った。１２６０システムは、ＴｏｓｏｈカラムＰｈｅｎｙｌ-５ＰＷ １０μｍ、７．５×７５ｍｍ(ＰＮ ０５７５３）を使用する。移動相は、ｐＨ７．０の５ｍＭリン酸ナトリウム中の２．０％アセトニトリル（移動相Ａ）およびｐＨ ６．９の４００ｍＭ硫酸アンモニウムおよび５ｍＭリン酸ナトリウム中の２．０％アセトニトリル（移動相Ｂ）であった。流速は０．５ｍＬ／分であった。カラムおよびオートサンプラーをそれぞれ３０℃および４℃に維持した。試料をＭｉｌｌｉ-Ｑ水で５ｍｇ／ｍＬに希釈し、１０μＬをカラムにロードした（総注入量５０μｇ）。分析のために検出波長を２８０ｎｍに設定した。プレピーク３の相対％面積を報告する。プレピーク１および２は、プレピーク１＋２の％に等しくなるように合計される。また、後ピーク１および２の相対％面積は、等しい％疎水性変異体に合計される。
Ａｂ６Ａ医薬品中のＭＫ－３４７５の酸化を評価するために、ＨＰ－ＨＩＣアッセイを行った。５℃での総プレピークに変化はなかった（図４５）。２５℃の条件では全プレピークのわずかな増加があり、４０℃では安定性について３ヶ月までの全プレピークのより大きな増加がある。
濁度Ａ３５０
濁度は、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ ＵＶ Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いて測定した。２００μＬサンプルを９６ウェルコスター透明プレートに充填し、吸光度を３５０ｎｍおよび５００ｎｍで測定し、パスチェックをプレート吸光度０．０２５および０．０２０でそれぞれ補正した。
Ａｂ６Ａ医薬品について濁度Ａ３５０を評価した。５℃の条件では、安定性について３ヶ月まで顕著な変化は測定されなかった（図４６）。しかしながら、２５℃の条件ではわずかな増加があり、４０℃では３ヶ月までさらに顕著な増加があった。
実施例１０：チロシンアッセイおよびタンパク質-タンパク質相互作用の検出のためのＦＲＥＴアッセイ
チロシンアッセイ
Ａｂ６およびＭＫ-３４７５を、１０ｍＭヒスチジン、５６ｍＭアルギニン、５４．０ｍｇ／ｍＬスクロース、０．２０ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０の存在下、ｐＨ５．８で混合した。３つの溶液を、ＭＫ-３４７５：Ａｂ６ ０：１、１：０、１：１のタンパク質比で調製し、ここで、Ａｂ６、ＭＫ-３４７５濃度およびＡｂ６／ＭＫ-３４７５濃度は、それぞれ２０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬである。単一のタンパク質製剤および共製剤について得られた蛍光結果は、全タンパク質濃度がサンプルにわたって同じである場合にのみ同等である。溶液を室温で７２時間インキュベートし、一定間隔でアリコートを採取し、酸化、続いて蛍光標識反応に供する。
所定の時点で採取したサンプルを２，２’-アゾビス（２-アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）と混合し、暗所で３７℃で３時間インキュベートしてタンパク質を酸化する。この反応をメチオニンの添加によりクエンチする。以下の蛍光発生反応は、酸化タンパク質試料と（２－アミノメチル）－ベンゼン－スルホン酸（ＡＢＳ）とを、弱い酸化剤（Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６）の存在下で混合することにより行った。
ＡＡＰＨ酸化反応は、チロシン残基で３，４-ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）の形成を生じる。蛍光標識反応は、ＤＯＰＡ産物の特異的タグ化を可能にする。最終的なフルオロフォアは、ＡＢＳ分子のベンゼン部分と共鳴するベンゾオキサゾール基からなる。このようなフルオロフォアは、λｅｘ＝３６０ｎｍでの最終サンプルの励起後、λｅｍ＝４９０ｎｍでの蛍光によるＤＯＰＡの生成をモニターすることを可能にする。
タンパク質凝集が７２時間までサンプル貯蔵中に起こる場合、アリコートを異なるタンパク質製剤から採取したとき、時間の関数として蛍光シグナルの減衰が予想される（図４８、バー）。蛍光の減少は、特定のチロシン残基の酸化および／または蛍光性標識反応への接近可能性を制限するタンパク質コンホメーションの変化として解釈され得る。Ａｂ６＋ＭＫ-３４７５の共製剤から得られた蛍光シグナルは、７２時間のインキュベーションにわたって安定である（図４８、点）。後者は、溶液中のタンパク質安定性に影響を及ぼす１：１共製剤においてＭＫ-３４７５とＡｂ６との間の相互作用が起こっていないという結論を導く。
ＦＲＥＴアッセイ
二分子相互作用を研究するために広く使用されている蛍光技術は、ＦＲＥＴ(フェルスター共鳴エネルギー転移）であり、これは蛍光ドナーからアクセプターへの非放射（双極子-双極子）エネルギー転移を利用し、これは２つのフルオロフォアが１０ｎｍ未満の距離に位置する場合にのみ起こり得る。ドナータグおよびアクセプタータグで標識された２つのタンパク質の場合、これは、２つのタンパク質が互いに相互作用する場合およびその場合にのみＦＲＥＴが生じることを意味する。
精製Ａｂ６およびＭＫ－３４７５タンパク質を、蛍光色素、それぞれＤｙｌｉｇｈｔ-４８８およびＤｙｌｉｇｈｔ－５９６（登録商標）で誘導体化する。Ｄｙｌｉｇｈｔ－４８８（登録商標）およびＤｙｌｉｇｈｔ－５９６（登録商標）は、リジン残基の第一級アミンと優先的に反応するアミン反応性染料である。蛍光的にラベル化したＡｂ６とＭＫ－３４７５は、Ａｂ６－４８８およびＭＫ－３４７５－５９６と命名されており、ここで、ラベル４８８および５９６は、それぞれＦｌｕｅｓｔ Ｄｙｌｉｇｈｔ－４８８（登録商標）およびＤｙｌｉｇｈｔ－５９６（登録商標）を指す。
Ａｂ６-４８８およびＭＫ-３４７５-５９６を、１０ｍＭヒスチジン、５４．０ｍｇ／ｍＬスクロースの存在下、ｐＨ５．８で、ｉ）アルギニン（５６ｍＭ）および／またはｉｉ）ポリソルベート８０（０．２０ｍｇ／ｍＬ）の、非存在下または存在下で混合した。ＭＫ－３４７５－５９６／Ａｂ６－４８８比は、１：４、１：１、および４：１である。アッセイの感度に起因して、蛍光原性タグ化タンパク質のモル濃度は、タンパク質比に依存して３．２ｕＭまたは８００ｎＭのいずれかである。ＦＲＥＴ蛍光シグナルを、λem＝６２０ｎｍ（λex＝４８８ｎｍ）で７２時間記録する（図４９）。
タンパク質相互作用が生じる場合、発明者は、時間の関数としての蛍光シグナルの増殖を見ることを期待する（図４９）。相互作用は、蛍光の増殖速度および蛍光シグナルの最大値によって評価される。相互作用の欠如（または相互作用の減少）は、ｉ）蛍光シグナルの成長速度が低いこと、およびｉｉ）プラトー最大値が低いことを特徴とする。１０ｍＭヒスチジン、５６ｍＭアルギニン、５４．０ｍｇ／ｍＬスクロース、０．２０ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０の存在下、ｐＨ５．８でのＭＫ-３４７５／Ａｂ６ １／４比を有する製剤の蛍光シグナルは、蛍光ベースラインの範囲内である（図４９）。蛍光ベースラインを、標識タンパク質の非存在下で測定する。アルギニンとＰＳ８０の組み合わせは、混合物の比が４：１である場合、Ａｂ６とＭＫ-３４７５との間のタンパク質相互作用を排除する。
チロシンアッセイおよびＦＲＥＴアッセイからのデータを考慮して、ＭＫ-３４７５およびＡｂ６の共製剤を、１０ｍＭヒスチジン、５４．０ｍｇ／ｍＬスクロース、５６ｍＭアルギニン、および０．２０ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０の存在下、ｐＨ ５．８で調製する場合、共製剤の安定性は、賦形剤の同じマトリックスについての単一抗体製剤と比較して改善される。チロシンアッセイおよびＦＲＥＴアッセイにそれぞれ基づいて、１：１および１：４の共製剤について、共製剤がタンパク質-タンパク質相互作用を引き起こす可能性は低く、したがって、タンパク質凝集体の増加はない。
実施例１１：共製剤および単体製剤の酸化試験
Figure 0007503056000025
同じ製剤マトリックス中で２５℃および４０℃で熱ストレスをかけたＡｂ６ＡおよびＭＫ-３４７５製剤サンプルの比較は、Ａｂ６Ａ組成物中のＭＫ-３４７５のＭ１０５酸化レベルがＭＫ-３４７５単独と比較して低いことを示す（図５０および５１を参照のこと）。したがって、Ａｂ６Ａ組成物中のＡｂ６の存在は、ＭＫ-３４７５のＭ１０５酸化の減少をもたらす。Ａｂ６：ＭＫ-３４７５ ４：１共製剤は、同じ製剤マトリックス中のＭＫ-３４７５単体と比較して、酸化安定性が増大している。Ｍ１０５酸化レベルは、実施例９に記載のＨＩＣおよびＳＥＣアッセイを用いて測定した。

Claims (24)

  1. １６～２２ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；３～７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；約３０～１２０ｍｇ／ｍＬの非還元二糖；約０．０２～２．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約４．５～６．５の緩衝液；および約４０～１５０ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む製剤であって；
    ここで、抗ＬＡＧ３抗体は、配列番号３５の軽鎖配列および配列番号５７の重鎖配列を含み、そして
    抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１０の重鎖配列および配列番号５の軽鎖配列を含む、
    製剤。
  2. １８～２２ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；４～７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；約５０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約３～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約４０～１００ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、請求項１に記載の製剤。
  3. １８～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；４～７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；約５０～６０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０またはポリソルベート２０；ｐＨ約５．０～６．５の約８～１２ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約４０～７０ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含む、請求項１に記載の製剤。
  4. 約５～１５ｍＭのメチオニンをさらに含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の製剤。
  5. 約５～１０ｍＭのＬ－メチオニンをさらに含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の製剤。
  6. 約１８．７５ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約６．２５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；
    約５５ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約５２．５ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約７．５ｍＭのＬ-メチオニンを含む、請求項１に記載の製剤。
  7. 約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；約５４ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約５６ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約８ｍＭのＬ-メチオニンを含む、請求項１に記載の製剤。
  8. 約２０．８３ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約４．１７ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；
    約５３ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約５８．３ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約８．３ｍＭのＬ-メチオニンを含む、請求項１に記載の製剤。
  9. 約１８．０２ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約４．５０５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８の約１０ｍＭのヒスチジン緩衝液；および約７０ｍＭのＬ-アルギニンまたは薬学的に許容されるその塩を含み；さらに約１０ｍＭのＬ-メチオニンを含む、請求項１に記載の製剤。
  10. 非還元二糖である糖をさらに含む、請求項１、４および５のいずれか一項に記載の製剤。
  11. 糖が、トレハロースまたはスクロース、またはそれらの組み合わせである、請求項１０に記載の製剤。
  12. 糖が約１０～２００ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項１１に記載の製剤。
  13. ポリソルベート８０またはポリソルベート２０が、約０．０５～１．５ｍｇ／ｍＬ；および、緩衝液が、ｐＨ約５．０～６．５の約３～１５０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液である、請求項１、４および５のいずれか一項に記載の製剤。
  14. 非還元二糖が、約５０～９０ｍｇ／ｍＬのスクロースまたはトレハロース；ポリソルベート８０またはポリソルベート２０が、約０．０５～１．０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；および、緩衝液が、ｐＨ約５．０～６．５の約５～３０ｍＭのＬ－ヒスチジン、酢酸またはクエン酸緩衝液である、請求項１、４および５のいずれか一項に記載の製剤。
  15. 約３～１５０ｍＭのＬ－メチオニンをさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の製剤。
  16. 約５～７０ｍＭのＬ-メチオニンをさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の製剤。
  17. 約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体を含む、請求項１、４、５および１０～１４のいずれか一項に記載の製剤。
  18. 抗ＬＡＧ３抗体および抗ＰＤ－１抗体が、抗ＬＡＧ３抗体の抗ＰＤ－１抗体に対する４：１モル比である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の製剤。
  19. 約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＧ３抗体；約５ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤ－１抗体；約５０ｍｇ／ｍＬのスクロース；約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０；ｐＨ約５．８～６．０の約１０ｍＭのＬ－ヒスチジン緩衝液；および、約７０ｍＭＬ－アルギニンまたはＬ－アルギニン－ＨＣｌを含む、請求項１に記載の製剤。
  20. 液体製剤である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の製剤。
  21. 少なくとも－７０℃未満に凍結される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の製剤。
  22. 凍結乾燥製剤から再構成された溶液である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の製剤。
  23. サイズ排除クロマトグラフィーで測定した場合、４０℃における抗ＬＡＧ３抗体および抗ＰＤ－１抗体のパーセント（％）モノマーは、３か月後に９８％以上である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の製剤。
  24. ５℃において、
    イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、抗ＬＡＧ３抗体の％酸性変異体は、３か月後に１５％未満であり、
    イオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、抗ＰＤ－１抗体の％酸性変異体は、３か月後に２０％未満である、
    請求項１～２０のいずれか一項に記載の製剤。
JP2021523361A 2018-11-07 2019-11-06 抗ｌａｇ３抗体および抗ｐｄ－１抗体の共－製剤 Active JP7503056B6 (ja)

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